一種分子印跡法測定蘇木中蘇木精含量的方法

2023-04-23 07:35:06 1

專利名稱：一種分子印跡法測定蘇木中蘇木精含量的方法
技術領域：
本發明涉及一種分子印跡法測定蘇木中蘇木精含量的方法。
背景技術：
蘇木藥理作用的研究始於20世紀70年代，國內外研究較多，近十年間已有幾十篇報導顯示出蘇木具有較多的臨床藥理作用，其中包括免疫抑制作用、抗腫瘤作用、抗菌消炎作用、鎮靜鎮痛作用、降糖作用等。由於蘇木精是蘇木呈現療效的主要成分，對蘇木精的定量分析及研究有極其重要的意義。蘇木精屬於植物多酚。由於植物多酚與黃酮類、蒽醌類、簡單酚和木質素等在植物體內共存並且相似。其本身更是一類結構和性質都極為相似的混合物，並且多酚性質較活潑，很易發生縮合或者降解，因此對其進行精確定量比較困難。目前雖然有數十種多酚定量方法，但這些方法都是相對的，幾乎沒有一種可以適用所有測定，必須根據實際情況選擇測定方法及相關測試條件。植物多酚的定量法主要有化學分析法、紫外可見分光光度法(UV) 和高效色譜法(HPLC)等。電化學傳感器具有設計製造簡單、靈敏度高、價格低廉、容易微型化等優點，但現有的電化學方法測量蘇木精含量，電流強度信號低，靈敏度較差。分子印跡聚合物以其具有模擬天然受體的分子識別能力，越來越成為一類重要的人工合成材料。印跡聚合物是可以提供高選擇性和穩定性的人工合成受體，儘管分子印跡技術的主要應用目前仍然是在分離領域，但將分子印跡聚合物用作識別元件構建新一代的電化學傳感器已經有了初步的研究，並具有可觀的應用前景。目前分子印跡法主要應用在小分子的檢測上，蘇木精分子量較大，有關其分子印跡分析法還未見報導。

發明內容
本發明的目的是尋找一種能定量檢測蘇木中蘇木精含量的分析方法。本發明用對蘇木精有分子識別作用的聚吡咯膜製備了電化學傳感器，用於檢測蘇木中蘇木精的含量。本發明的實現系通過一下步驟實現1.樣品預處理將蘇木加以粉碎，以保證固體樣品有足夠表面積與提取液(含乙醇5-50%質量分數的水溶液)相接觸。取樣品粉末精密稱定後加提取液適量，經5-30分鐘的超聲波處理提取，在超聲波的作用下，樣品粉末中的蘇木精可廣泛地與溶液接觸並不斷地溶解進溶液中；超聲波發生器的頻率為20-80kHz，功率為5-500W，由於蘇木精在高溫會發生縮合等化學反應，幹擾後續測定，因此提取溫度應在40°C以下。將殘渣提取3-8次。 合併提取液，該提取液經過濾和定容後即可供電化學測定。2.電化學傳感器的製備石墨電極經0. 3 μ m的Al2O3粉末拋光成鏡面後依次用乙醇和水超聲清洗。然後， 將三電極體系置於含0. 01 0. 20mol/L的吡咯、0. 01 0. 20mol/L的蘇木精和0. 10 0. 50mol/L KCl的磷酸緩衝溶液(pH = 6. 9)中。在-0. 2 0. 8V電位範圍內進行循環伏安掃描10圈進行電聚合，掃描速度為0. 05V/S。電聚合過程中維持氮氣氣氛。聚合完畢，將所得修飾電極置於0. 1 0. 5mo VLNa2HPO4溶液中，在1. OV電位下電解100 600s，對吡咯膜進行過氧化處理。之後將電極在乙醇中(溫度20 60°C)浸泡1 5小時，取出即製成蘇木精-吡咯/石墨分子印跡電極。取出電極、置於攪拌器上用超純水洗滌，N2氣吹乾後待用。3.電化學測量蘇木精-吡咯/石墨印跡電極作工作電極的三電極體系，測試不同濃度的蘇木精溶液中的CV曲線，以獲得線性響應關係和檢測下限等。取不同質量的蘇木精標準品，溶解在pH值=3 11的緩衝溶液中，用蘇木精-吡咯/石墨印跡電極作工作電極，鉬電極做對電極，甘汞電極做參比電極，在掃描速度為 (30 200mV/s)下，測其循環伏安曲線，以蘇木精濃度為橫坐標，氧化峰的最高點電流為縱坐標，做氧化峰標準曲線。以蘇木精濃度為橫坐標，還原峰的最低點電流為縱坐標，做還原峰標準曲線。本發明可簡便、可靠地完成蘇木中蘇木精含量的定量測定，抗幹擾能力強。本發明與現有的電化學測量方法相比，測得的電流強度增強了 2個數量級，試驗誤差減小，靈敏度提尚。


圖1為本發明的分子印跡修飾電極檢測蘇木精的循環伏安圖。
具體實施例方式下面結合實施例對本發明做進一步描述。實施例1 將蘇木加以粉碎成60目一下顆粒，取樣品IOg加提取液(含乙醇5%質量分數的水溶液)至50mL，經5分鐘的超聲波處理提取，超聲波發生器的頻率為20kHz，功率為100W， 提取溫度為20°C。將殘渣再提取3次，提取液分別為50mL、30mL、20mL。合併提取液，該提取液經過濾後用緩衝溶液定容至200mL(pH = 3)，即可供測電化學測定。取不同質量的蘇木精標準品，溶解在pH = 3的緩衝溶液中，用蘇木精-吡咯/石墨印跡電極做工作電極，鉬電極做對電極，甘汞電極做參比電極，在掃描速度為30mV/s下， 測其循環伏安曲線，氧化峰最高峰位置在0. 43V，還原峰最高峰位置在0. 26V0以蘇木精濃度為橫坐標，還原峰的最低點電流為縱坐標，做還原峰標準曲線。將待測樣品在相同掃速下測其循環伏安曲線(結果如圖1)，其還原峰電流強度-1.50E-4，信號比同樣條件下非分子印跡法增強了 2個數量級，測得蘇木中蘇木精含量為5. 6% (wt/wt)。加標回收法表明，回收率在97%。實施例2:將蘇木加以粉碎成60目一下顆粒，取樣品IOg加提取液(含乙醇30%質量分數的水溶液)至50mL，經30分鐘的超聲波處理提取，超聲波發生器的頻率為80kHz，功率為 400W，提取溫度為300C。將殘渣再提取3次，提取液分別為50mL、30mL、20mL。合併提取液， 該提取液經過濾後用緩衝溶液定容至200mL(pH = 9)，即可供測電化學測定。取不同質量的蘇木精標準品，溶解在pH = 7的緩衝溶液中，用蘇木精-吡咯/石墨做工作電極，鉬電極做對電極，甘汞電極做參比電極，在掃描速度為90mV/s下，測其循環伏安曲線，氧化峰最高峰位置在0. 19V，還原峰最高峰位置在0. IOV0以蘇木精濃度為橫坐標，還原峰的最低點電流為縱坐標，做還原峰標準曲線。 取蘇木精待測樣品(pH = 9)，用蘇木精-吡咯/石墨電極做工作電極，鉬電極做對電極，甘汞電極做參比電極，在相同掃速下測其循環伏安曲線，其還原峰電流強度-1. 62E-4，信號比同樣條件下非分子印跡法增強了 2個數量級，測得蘇木中蘇木精含量為5.7% (wt/wt)。加標回收法表明，回收率在101%。
權利要求
1.一種蘇木中蘇木精的定量測定方法，其特徵在於取不同質量的蘇木精標準品，溶解在pH值=3 11的緩衝溶液中，用蘇木精-吡咯/石墨印跡電極作工作電極，鉬電極做對電極，甘汞電極做參比電極，在掃描速度為(30 200mV/s)下，測其循環伏安曲線，以蘇木精濃度為橫坐標，還原峰的最低點電流為縱坐標，做還原峰標準曲線。取待測蘇木精待測樣品溶解在相同PH的緩衝溶液中，測定其電流強度值，與標準曲線相比，得到其定量數據。
2.根據權利要求1所述的蘇木精-吡咯/石墨印跡電極的製備方法如下石墨電極經Al2O3粉末拋光成鏡面後依次用乙醇和水超聲清洗。然後，將三電極體系置於含0.01 0. 20mol/L的吡咯、0. 01 0. 20mol/L的蘇木精和0. 10 0. 50mol/L KCl的磷酸緩衝溶液 (pH = 6. 9)中。在-0. 2 0. 8V電位範圍內進行循環伏安掃描10圈進行電聚合，掃描速度為0.05V/S。電聚合過程中維持氮氣氣氛。聚合完畢，將所得修飾電極置於0.1 0.5mol/ L Na2HPO4溶液中，在1. OV電位下電解100 600s，對吡咯膜進行過氧化處理。之後將電極在乙醇中(溫度20 60°C )浸泡1 5小時，取出即製成蘇木精-吡咯/石墨分子印跡電極。取出電極、置於攪拌器上用超純水洗滌，N2氣吹乾後待用。
全文摘要
一種採用分子印跡法對蘇木中蘇木精含量進行定量測定的方法。其特點為用蘇木精-吡咯/石墨印跡電極作工作電極的三電極體系，在pH＝3-11的緩衝溶液中，溫度為20-80℃，掃描速度為30-600mv/s，測量不同濃度的蘇木精溶液中的CV曲線，以獲得線性響應關係和檢測下限等。該法與其他電極相比，電流強度提高2個數量級，測量靈敏度大大提高。
文檔編號G01N27/48GK102156162SQ20101057968
公開日2011年8月17日 申請日期2010年12月9日 優先權日2010年12月9日
發明者仇小飛, 侯秀良, 劉瑛, 汪茹, 許芳萍, 陳新, 高海燕 申請人:江南大學