艾蒿黃酮的提取、純化方法

2023-09-16 03:43:45 4

專利名稱：：艾蒿黃酮的提取、純化方法艾蒿黃酮的提取、純化方法
技術領域：
：本發明涉及植物的提取工藝，確切地說是一種艾蒿黃酮的提取、純化方法。
背景技術：
：艾蒿為菊科蒿屬多年生草本植物，整株都有芳香氣味，揉之，香氣更濃。分布於東北、華北、華東、西南各省區。在青海省主要分布於西寧及東部各縣，林緣、山坡、荒地、田邊均有生長。艾蒿中主要含有揮髮油、黃酮類、桉葉烷類、三萜類等化學成分，每100g嫩莖葉含胡蘿蔔素5.14mg、維生素1.07mg、維生素C52mg，其風乾葉含蛋白質25.85%，脂肪2.59%，礦物質10.13%及維生素等成分，每100g幹品中含鉀38.4mg，鈣9.9mg，鎂2.14mg，鐵158ug，錳63ug，鋅33ug，銅15ug。利用艾蒿提取的揮髮油主要化學成分為桉葉油素、樟腦、龍腦、胡椒腦、a-畢澄茄烯、蛇麻烯、桉樹腦、4-松油醇等。試驗證明，艾蒿的乙醇提取物可以預防和治療心腦血管疾病；增強人體糖類代謝能力，預防和治療糖尿病；艾蒿還有抗癌功能，能增強人體網狀內皮細胞的吞噬作用，提高人體免疫力。適用於胃癌、乳腺癌，有緩解症狀、控制病情惡化的作用。亦可用於甲狀腺癌、腸癌、惡性淋巴瘤等、近年來，艾蒿提取物尤其是艾蒿黃酮類物質作為藥物的研究開發越來越多。用艾蒿提取的黃酮為多物質複合物，約含17種黃酮類化合物，活性較高的物質多存在於50%-80%乙醇提取物中，其體外抗氧化性、去超氧離子能力、抗腫瘤生長等生物學特徵已被試驗證實。在10%的乙醇提取物中，大多含有艾蒿多糖、糖蛋白以及少量蛋白質。中國發明專利申請"艾蒿黃酮的提取工藝及其應用"，(專利申請號200810018036.7)，公開的艾蒿黃酮提取工藝步驟為以艾蒿為原料，加水提取、減壓或常壓濃縮、噴霧乾燥，再經石油醚萃取、乙醇或乙酸乙酯或乙酸丁酯萃取，最後經濃縮、乾燥，得到艾蒿黃酮成品。中國發明專利申請"一種艾葉總黃酮的製備方法"(專利申請號200710164447.2)，公開了一種艾葉總黃酮的製備方法，艾葉在25_35°C的溫度條件下，通過濃度為75-100%的C「C4低分子醇溶劑兩次攪拌浸提，對浸提液用三級濾膜過濾器中分級過濾，濾液在40-45t:條件下減壓濃縮至相對密度為1.01-1.04，濃縮液以流量為40-601/h的速率通過高速離心萃取機，用流量為40-601/h己烷萃取分離，對被萃取過的濃縮液在40-45t:條件下濃縮至相對密度為1.06-1.08，這樣能在純淨艾葉中提取到重量不低於5%艾葉重量的精製艾葉總黃酮，其中5，7二羥基6，3'，4'三甲氧基黃酮的含量不低於1.0%。另外，吳娜等(華中農業大學食品科技學院)在《大孔樹脂分離純化艾蒿黃酮的研究》(刊登於《食品科技》2008年01期)一文中，對艾蒿黃酮(FA)的提取工藝進行了初步探討，通過單因素實驗，在中心組合實驗基礎上，運用響應面分析法得出了提取FA的最佳工藝組合時間149min，乙醇濃度56%，溫度72。C，料液比1:20，提取2次。在此最佳工藝組合下FA的平均提取率可達91.2%。採用AB-8大孔樹脂純化艾蒿黃酮的最佳條件(樹脂柱柱長度48cm;柱內直徑5.2cm;初始上樣液黃酮含量為37.56mg/mL)上樣量為16mL，淋洗劑為pH4的蒸餾水，沈脫劑為pH4的50%乙醇，沈脫劑用量為5倍柱體積，樹脂可以重複使用3次，產品真空乾燥後黃酮純度達69.37%。乙酸乙酯相(FA2)純度達78.28%，得率為2.64%;FA2經過葡聚糖凝膠純化後(FAS)，黃酮含量達到99.16%，得率為1.89%。研究發現，艾蒿中油脂類物質含量豐富，種類繁多，而黃酮類物質多處於脂類包裹中，即若要提取黃酮類物質必須儘量將油脂類物質去除，給工業生產帶來諸多不便。從以上現有技術文獻看，沒有對去脂作出要求，去脂不完全，直接會影響到收率；另外，艾蒿中的葉綠素會影響到黃酮類物質的提取，對於如何去除葉綠素，上述文獻也未提及。
發明內容本發明目的是發明一種適合工業化生產的艾蒿黃酮提取、純化方法，該方法工藝簡單，可操作性強，要求設備簡單，可有效去除艾蒿中油脂類物質和葉綠素。本發明技術方案是艾蒿黃酮的提取、純化方法，其特徵在於採取以下步驟a.粉碎將新鮮艾蒿根部以上部分晾乾，粉碎後用20目篩子過篩，得到艾蒿原粉和艾絨；b.脫脂脫色將所述艾蒿原粉在40-59t:溫度條件下加入配比為8:2的石油醚與乙酸乙酯的混合液，所述石油醚的規格為60-90，用滲漉法進行脫脂脫色，得到去脂艾蒿粉和含有艾精油的提取液l;c.提取將所述去脂艾蒿粉在60-8(TC溫度條件下加入70%的乙醇，用滲漉法得到提取液2;d.濃縮將所述提取液2濃縮至原體積的五分之一，加酸調節pH值直至有沉澱物出現，離心乾燥後得到艾蒿黃酮粗品；e.純化將所述艾蒿黃酮粗品用70%乙醇溶解後，加5%三氯乙酸，經板框過濾，加酸調節PH值直至有沉澱物出現，離心乾燥後得到艾蒿黃酮精品。本發明的原理在於韓國首爾光雲大學校的文福姬、俞慶善、閹民燮在《艾葉精油化學成分研究》一文，提到艾葉精油(即艾蒿中油脂類物質)最少由是32種不同物質組成的混合物，本人在脫脂實驗中使用了多種溶劑，實驗結果如下表tableseeoriginaldocumentpage4tableseeoriginaldocumentpage5考慮到成本和後處理，優選方案是選用石油醚-乙酸乙酯(8:2)混合溶劑。此外，該混合試劑去除葉綠素的效果在多種溶劑中也是最好的。另外，已知艾蒿黃酮中黃酮類物質的種類超過17種，不同的黃酮在不同乙醇濃度下溶解度不同，從通過試驗得到黃酮溶解度曲線圖中可發現70%乙醇提取效果最好(參見附圖2)綜上所述，本方法得到的艾蒿黃酮粗品收率可達12%以上，遠高於現有技術，粗品純度在90%以上；由於在提取前做了脫脂脫色處理，得到的艾蒿黃酮品色好，提取率高，純度也高。在提取液中主要含黃酮類物質和醇溶性蛋白，通過三氯乙酸處理後，使精品黃酮的純度高達95%以上，也高於現有技術。另外，本發明涉及的方法與現有技術相比，設備簡單，操作方便，易於產業化，生產過程中附加產品多，增加了產業收益。本發明的有益效果是本方法工藝簡單，可操作性強，要求設備簡單，不僅可以生產黃酮類物質，還可以附加生產艾絨、艾精油、艾蒿多糖等物質，提高了總體經濟效益。下面結合附圖和具體實施方式對本發明作進一步說明圖1是本發明的工藝流程圖，圖2是艾蒿黃酮在不同濃度乙醇裡的溶解度曲線圖，圖3是本發明的滲漉法脫脂流程圖。具體實施方式參見附圖1、圖3，將25公斤幹艾蒿(根部以上)，粉碎過20目篩，得到艾蒿原粉和艾絨，艾絨另行收集加工。將艾蒿原粉用石油醚(規格為60-90)和乙酸乙酯的混合液(配比為8:2)潤溼、裝入滲漉器、排氣，再用50升前述的石油醚和乙酸乙酯的混合液滲漉，溫度為5(TC，流速為每分鐘20毫升，浸出液直接接到蒸餾器內，溶劑在85t:蒸發上升經冷凝管重新回滴入滲漉器內，最後將含有艾精油的浸出液(提取液l)分流出去用於提煉艾精油。將滲漉器裡的脫脂艾蒿粉取出，攤開並不斷翻動，使其自然風乾。用70%乙醇對脫脂艾蒿粉進行潤溼、裝入滲漉器、排氣，用70%的乙醇溶劑滲漉，溫度為7(TC，流速為每分鐘15毫升。48小時後，將艾蒿粉壓榨，得到壓榨液和提取液(提取液2)合併共90升，真空濃縮至18升，加濃硫酸調pH值為2，靜置30分鐘，離心、沉澱經乾燥後稱重，得艾蒿黃酮粗品為3.075公斤，提取率為12.3%，純度為90.1%。取100克艾蒿黃酮粗品，加500毫升70%乙醇溶解，再加5%三氯乙酸100毫升，邊加邊攪拌，靜置30分鐘，過濾，濾液用濃硫酸調pH值為2，靜置30分鐘，離心、沉澱經乾燥得艾蒿黃酮精品，稱重為88克，純度為98%。相對於艾蒿原粉，艾蒿黃酮精品的提取率為10.8%。權利要求艾蒿黃酮的提取、純化方法，其特徵在於採取以下步驟a.粉碎將新鮮艾蒿根部以上部分晾乾，粉碎後用20目篩子過篩，得到艾蒿原粉和艾絨；b.脫脂脫色將所述艾蒿原粉在40-59℃溫度條件下加入配比為8∶2的石油醚與乙酸乙酯的混合液，所述石油醚的規格為60-90，用滲漉法進行脫脂脫色，得到去脂艾蒿粉和含有艾精油的提取液1；c.提取將所述去脂艾蒿粉在60-80℃溫度條件下加入70％的乙醇，用滲漉法得到提取液2；d.濃縮將所述提取液2濃縮至原體積的五分之一，加酸調節pH值直至有沉澱物出現，離心乾燥後得到艾蒿黃酮粗品；e.純化將所述艾蒿黃酮粗品用70％乙醇溶解後，加5％三氯乙酸，經板框過濾，加酸調節pH值直至有沉澱物出現，離心乾燥後得到艾蒿黃酮精品。2.根據權利要求1所述艾蒿黃酮的提取、純化方法，其特徵在於在步驟b中，所述艾蒿原粉在5(TC溫度條件下加入所述石油醚與乙酸乙酯的混合液。3.根據權利要求1所述艾蒿黃酮的提取、純化方法，其特徵在於在步驟C中，所述去脂艾蒿粉在7(TC溫度條件下加入70%的乙醇。全文摘要本發明涉及植物的提取工藝，確切地說是一種艾蒿黃酮的提取、純化方法，其主要步驟是將艾蒿原粉在40-59℃溫度條件下加入配比為8∶2的規格為60-90的石油醚和乙酸乙酯混合液，用滲漉法進行脫脂脫色，得到去脂艾蒿粉，將去脂艾蒿粉在60-80℃溫度條件下加入70％的乙醇，用滲漉法得到的提取液2濃縮至原體積的五分之一，加酸調節pH值直至有沉澱物出現，離心得艾蒿黃酮粗品；將艾蒿黃酮粗品用70％乙醇溶解後，加5％三氯乙酸，經過濾、加酸、離心後得到艾蒿黃酮精品。本方法工藝簡單，可操作性強，要求設備簡單，還可以附加生產艾絨、艾精油、艾蒿多糖等物質，提高了總體經濟效益。文檔編號C11B1/10GK101791326SQ20091014488公開日2010年8月4日申請日期2009年9月9日優先權日2009年9月9日發明者唐超,孫鋒,陳子海,陳成緒申請人:安徽海鑫中藥飲片有限公司