用作腺苷受體配體的三唑並喹啉衍生物的製作方法
2023-11-05 02:22:22 2
專利名稱：用作腺苷受體配體的三唑並喹啉衍生物的製作方法
技術領域：
本發明涉及通式(I)的腺苷A3受體的配體，那些之中優選拮抗劑，以及它們的鹽、溶劑化物和異構體，含有它們的藥物組合物，通式(I)化合物以及它們的鹽、溶劑化物和異構體的用途，通式(I)化合物以及它們的鹽、溶劑化物和異構體的製備，還涉及新的通式(II)的中間體及其製備。
腺苷是眾所周知的一些內源性分子(ATP、NAD+、核酸)的成分。此外，它還在很多生理過程中起重要的調節作用。腺苷對心臟功能的作用早已於1929年發現。(Drury和Szentgyrgyi，J Physiol 68213，1929)。對腺苷介導的生理功能數增加的證實和新的腺苷受體亞型的發現為特定配體的治療性應用提供了可能性(Poulse，S.A.和Quinn，R.J.Bioorganic and Medicinal Chemistry 6619，1998)。
迄今為止，腺苷受體分為3個主要的種類A1、A2和A3。A1亞型通過與Gi膜蛋白偶聯部分負責抑制腺苷酸環化酶，部分影響其它第二信使系統。A2受體亞型可再分為兩個亞型-A2a和A2b-，該受體可刺激腺苷酸環化酶的活性。近來，已經從大鼠睪丸cDNA庫中鑑定了腺苷A3受體的序列。隨後，證實了它與新的、功能性腺苷受體相對應。A3受體的激活還與若干第二信使系統有關例如抑制腺苷酸環化酶，並刺激磷脂酶C和D。
腺苷受體可在很多器官中找到，並調節它們的功能。A1和A2a受體在中樞神經系統和心血管系統中起著重要的作用。在CNS中，腺苷可抑制突觸遞質的釋放，其作用是由A1受體介導的。在心臟中，A1受體還可介導腺苷的減弱肌收縮力效應、變時效應和變傳導效應。腺苷A2a受體以相對較高的含量位於紋狀體中，在調節突觸傳導方面，顯示與多巴胺受體的功能性相互作用。內皮和平滑肌細胞上的A2a腺苷受體負責腺苷誘導的血管舒張。
以mRNA鑑定為基礎，A2b腺苷受體廣泛分布於不同的組織中。它們幾乎已經在所有細胞類型中被鑑定，但它在腸和膀胱中的表達水平最高。這種亞型還很可能在血管緊張的調節方面具有重要的調節功能，並在肥大細胞的功能方面起作用。
與在蛋白水平檢測組織分布的A1和A2a受體相反，A2b和A3受體存在的檢測是以它們的mRNA水平為基礎的。與其它亞型相比，A3腺苷受體的表達水平較低，而且是高度物種依賴性的。A3腺苷受體主要在中樞神經系統、睪丸、免疫系統中表達，而且似乎涉及從肥大細胞釋放的介質在即髮型超敏反應中的調節。
迄今為止在文獻中公開的A3拮抗劑為類黃酮、1，4-二氫吡啶衍生物、三唑並喹唑啉、噻唑並萘啶和噻唑並嘧啶。本發明涉及一種新的有效的A3拮抗劑類型，它具有三唑並喹啉結構。
就治療用途而言，它基本確保該分子不結合，或僅僅在非常高的濃度下結合腺苷受體的A1、A2a和A2b亞型。我們的發明涉及通式(I)的化合物和它們的鹽、溶劑化物和異構體，它對腺苷受體的A3亞型具有較高選擇性。
我們的目的首先是製備具有三唑並喹啉結構的A3配體，且那些之內優選拮抗劑，它具有較強的拮抗作用，並對A3受體顯示較高的選擇性，即它們以明顯低於抑制A1、A2a和A2b受體的濃度抑制A3受體。另一目的是了解穩定性、生物可利用率、治療指數和毒性數據，從而將所述新化合物開發成藥物，且由於它們良好的腸吸收，該化合物可用於口服。
我們已經發現了通式(I)的化合物和它們的鹽、溶劑化物、及其旋光異構體和鹽、溶劑化物滿足上述標準—其中R1代表氫原子或直鏈或支鏈C1-4烷基；R2代表氫原子或直鏈或支鏈C1-4烷基；R3代表氫原子或直鏈或支鏈C1-4烷基，或苯基、噻吩基、或呋喃基，任選被一個或多個直鏈或支鏈C1-4烷基、直鏈或支鏈C1-4烷氧基、或滷素原子取代，或代表含有1個、2個或3個氮原子的5-或6-元雜芳環、或含有1個氮原子和1個氧原子或1個氮原子和1個硫原子的5元雜芳環，任選被一個或多個直鏈或支鏈C1-4烷基、直鏈或支鏈C1-4烷氧基、或滷素原子取代；R4和R5彼此獨立地代表氫原子，或共同形成1，3-丁二烯基，任選用亞甲二氧基或一個或多個直鏈或支鏈C1-4烷基、直鏈或支鏈C1-4烷氧基、羥基或滷素原子取代；R6代表氫原子或氰基，氨羰基、C1-4烷氧羰基、或羧基；R7代表氫原子或直鏈或支鏈C1-4烷基，或C1-4亞烷基，任選被苯基取代，或代表苯基、苄基、噻吩基或呋喃基，任選被亞甲二氧基、或一個或多個直鏈或支鏈C1-4烷基、直鏈或支鏈C1-4烷氧基、羥基、三氟甲基、氰基或滷素原子取代，氨基，一或二烷氨基，或代表含有1個、2個或3個氮原子的5或6元雜芳環，或含有1個氮原子和1個氧原子或1個氮原子和1個硫原子的5元雜芳環，任選被一個或多個直鏈或支鏈C1-4烷基、直鏈或支鏈C1-4烷氧基、或滷素原子取代；X代表-CH2-、-NH-、-NR12-、或硫原子或氧原子或磺基或亞硫醯基—其中R12代表直鏈或支鏈C1-4烷基或C3-6環烷基；n代表0、1或2。
上面所列取代基的詳細含義如下直鏈或支鏈C1-4烷基是指甲基-、乙基-、丙基-、異丙基-、丁基-、異丁基-、仲丁基-、叔丁基-，優選乙基-或甲基。
直鏈或支鏈C1-4烷氧基是指甲氧基-、乙氧基-、丙氧基-、異丙氧基-、丁氧基-、異丁氧基-、仲丁氧基-、叔丁氧基-，優選乙氧基-或甲氧基。
含有1個或2個或3個氮原子的雜芳環是指吡咯、咪唑、吡唑、1，2，3-三唑、1，2，4-三唑、吡啶、嘧啶、噠嗪、吡嗪和1，3，4-三嗪環。該環可任選被C1-4烷基取代。
含有1個氮原子和1個氧原子或硫原子的雜芳環是指噁唑、異噁唑、噻唑、異噻唑環。該環可任選被C1-4烷基取代。
通式(I)化合物的鹽是指用無機和有機酸和鹼得到的鹽。優選的鹽是用藥學上可接受的酸，如鹽酸、硫酸、乙磺酸、酒石酸、琥珀酸、富馬酸、蘋果酸、檸檬酸得到的那些。
溶劑化物是指用各種溶劑，如用水或乙醇得到的溶劑化物。
通式(I)的化合物表現出立體異構和旋光異構現象，因此本發明還涉及立體異構體的混合物、涉及外消旋或旋光立體異構體，並涉及它們的鹽和溶劑化物。
通式(I)化合物的優選組是由通式(Ia)的化合物和它們的鹽、溶劑化物、及其旋光異構體和鹽、溶劑化物形成的，其中R1代表氫原子、或甲基；R2代表氫原子、或甲基；R3代表苯基、噻吩基或呋喃基；R8、R9、R10和R11彼此獨立地代表氫原子、直鏈或支鏈C1-4烷基、直鏈或支鏈C1-4烷氧基、羥基或滷素原子，或R8和R11代表氫原子且R9和R10共同形成亞甲二氧基；R6代表氫原子、或氰基；R7代表4-甲氧苯基、3-甲基苯基、3-甲氧苯基、3-噻吩基、3-吡啶基、3-羥苯基或3-呋喃基；X代表-NH-或氧原子；且n代表1。
特別優選的是符合上述條件的下列化合物和它們的鹽、溶劑化物、及其旋光異構體和鹽、溶劑化物2-(4-甲氧苯基)-9-苄氨基-10-氰基-s-三唑並[1，5-a]喹啉，2-(2-呋喃基)-9-(2-呋喃基甲氨基)-10-氰基-s-三唑並[1，5-a]喹啉，2-(3，4-亞甲二氧基苯基)-9-(2-呋喃基甲氨基)-10-氰基-s-三唑並[1，5-a]喹啉，2-(3-吡啶基)-9-(2-噻吩基甲氨基)-10-氰基-s-三唑並[1，5-a]喹啉，2-(3-羥苯基)-9-(2-噻吩基甲氨基)-10-氰基-s-三唑並[1，5-a]喹啉。
另一方面，本發明還涉及含有作為活性成分的通式(I)化合物或它們的異構體、鹽和溶劑化物的藥物組合物，優選口服的組合物，但可吸入的、腸胃外及透皮製劑也是本發明的主題。上述藥物組合物可以是固體或液體，如片劑、顆粒劑、膠囊劑、貼劑、溶液、混懸液或乳狀液。固體組合物，片劑和膠囊劑是首先優選的藥物形式。
上述藥物組合物是利用標準方法通過使用常規的藥物賦形劑製備的。
通式(I)的化合物可用於治療A3受體在其發展中起作用的病變。
本發明的化合物對A3受體具有選擇活性，可用於治療和/或預防性治療心臟、腎、呼吸系統、中樞神經系統的官能障礙。它們可抑制腺苷對生長癌細胞的保護作用、防止肥大細胞脫粒、抑制細胞因子產生、降低眼內壓、抑制TNFα釋放、抑制嗜酸細胞、中性白細胞和其它免疫細胞遷移、抑制支氣管收縮和血漿外滲。
以這些作用為基礎，本發明的腺苷A3受體拮抗劑可治療性用作抗炎、止喘、抗局部缺血、抗抑鬱、抗心律失常、腎臟保護、抗腫瘤、抗帕金森氏病和提高認知的藥物。它們還可用於治療或預防心肌再灌注損傷、慢性梗阻性肺病(COPD)和成人呼吸窘迫症候群(ARDS)包括慢性支氣管炎、肺氣腫或呼吸困難、變態反應(例如，鼻炎、毒葉藤誘導的反應、蕁麻疹、硬皮病、關節炎)、其它自身免疫疾病、炎性腸疾病、阿狄森氏病、克羅恩氏病、牛皮癬、風溼病、高血壓、神經官能症、青光眼和糖尿病(K.N.Klotz，Naunyn-Schmiedberg′s Arch.Pharmacol.362382，2000；P.G.Baraldi és P.A.Borea，TiPS 21456，2000)。
本發明的化合物優選用於治療疾病，如哮喘、COPD和ARDS、青光眼、腫瘤、變應性和炎性疾病、局部缺血、低氧症、心律失常和腎病。
另一方面，本發明涉及通式(I)的化合物在治療上述病變中的用途。根據疾病的性質和嚴重程度以及患者的性別、體重等，建議每日劑量為0.1-1000mg活性成分。
本發明的其它主題是通式(I)的化合物和通式(II)、(III)和(IV)的中間體的製備。
本發明製備過程中所用的通式(II)的中間體是新的。通式(II)、(III)和(IV)的取代基具有上面所限定的含義。
在本發明的方法中，使通式(II)的1，2-二氨基-azinium鹽與通式(VII)的化合物反應，其中R7如上面所定義，且Y代表氫原子、滷素原子或C1-4烷氧基，優選與適宜的醯基滷或酯反應(D.W.Robertson，J.Med.Chem.，28，717，(1985))，因此獲得通式(I)的化合物，如果需要，還可轉化成它的鹽、溶劑化物，或從其鹽、溶劑化物中釋放出來，並分離成它的立體異構或旋光異構體。
閉環可在二甲基甲醯胺中，在有三乙胺或作為相似類型閉環催化劑已知的其它化合物存在的條件下進行。
閉環可在較寬的溫度範圍，優選20℃-150℃間進行。
利用已知方法可將通式(I)化合物的取代基相互轉換。
通式(II)的化合物—其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、X和n的含義是如上面所定義的—可通過若干已知方法獲得，這些方法的其中1個在流程1中表示，即利用有機化學已知的N-胺化方法對通式(III)的化合物進行N-胺化(E.E.Glover，R.T.Rowbotton，J.Chem.Soc.Perkin.Trans I.，376(1976)，G.Timári，Gy.Hajós，S.Bátori és A.Messmer，Chem.Ber.，125，929(1992))。就N-胺化劑而言，優選使用O-甲苯磺醯基-羥基胺，但也可使用已知進行N-胺化的其它試劑。
通式(III)的化合物—其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、X和n的含義是如上面所定義的—可通過本來已知的方法從通式(IV)的化合物製備(Nan Zhang，Bioorg.和Med.Chem.Lett.，10，2825(2000))。
通式(IV)的化合物—其中R4、R5、R6如上面所定義的—可通過本來已知的方法從通式(V)的化合物製備(D.L.Leysen，J.HeterocyclicChem.，24，1611，(1987))。
通式(V)的化合物—其中R4、R5、R6如上面所定義的—可通過本來已知的方法製備(Pfizer(Inc)USP 4,175,193)。
本發明通式(I)、(II)、(III)和(IV)的化合物，它們的製備和生物活性在下列實施例中給出，這些實施例不是對要求保護範圍的限制。
圖1表示式(I)的化合物，圖2表示式(Ia)的化合物，圖3表示式(II)的化合物，圖4表示式(III)的化合物，圖5表示式(IV)的化合物，圖6表示式(V)的化合物，圖7表示式(VI)的化合物，圖8表示式(VII)的化合物。
實施例實施例12-(4-甲氧苯基)-9-苄氨基-10-氰基-s-三唑並[1，5-a]喹啉在通式(I)中，R1和R2代表氫原子，R3代表苯基，R4和R5共同形成1，3-丁二烯基，R6代表氰基，R7代表4-甲氧苯基，X的含義是-NH，n是1。
a.)2-氨基-3-氰基-4-氯喹啉攪拌下，110℃加熱10g 2-氨基-3-氰基-4-羥喹啉和15ml磷醯氯的混合物。將反應混合物冷卻，傾注在100ml冰水上，並用60ml 10％氫氧化鈉溶液中和。濾出所得黃色沉澱物，用50ml水洗滌。乾燥後，獲得7.5g標題化合物，mp.210℃。
NMR，δH(400MHz，DMSO-d6)7.21ppm，(s，2H，NH2)，7.35-7.40ppm，(dd，1H，6-H)，7.53-7.57ppm，(d，1H，5-H)，7.70-7.75ppm，(dd，1H，7-H)，7.93-7.98ppm，(d，1H，8-H)b.)2-氨基-3-氰基-4-苄氨基喹啉攪拌下，130℃加熱5g 2-氨基-3-氰基-4-氯喹啉和11ml苄胺的混合物。將反應混合物傾注在50ml水上，濾出所得沉澱物，用50ml水洗滌。將淺黃色沉澱物自二甲基甲醯胺中重結晶出來，獲得5.2g的標題化合物。Mp.206℃。
NMR，δH(400MHz，DMSO-d6)5.02-5.03ppm(d，2H，N-CH2)，6.22ppm(s，2H，NH2)，7.14-7.16ppm(dd，1H，6-H)，7.24-7.26ppm(dd，1H，5-H)，7.30ppm(s，5H，Ph)，7.50-7.52ppm(dd，1H，7-H)，8.16-8.19ppm(d，1H，8-H)，8.30-8.33ppm(t，1H，NH)c.)1，2-二氨基-3-氰基-4-苄氨基-喹啉鎓-甲苯磺酸鹽20℃下，在15分鐘內，向2.0g 2-氨基-3-氰基-4-苄氨基喹啉溶於30ml二甲基甲醯胺的溶液滴加1.78g O-甲苯磺醯基-羥胺溶於20ml二氯甲烷的溶液。攪拌反應混合物5小時，然後濾出沉澱物。將所得白色晶體物質自乙腈中重結晶出來，得到3.1g標題化合物，mp.207℃。
d.)2-(4-甲氧苯基)-9-苄氨基-10-氰基-s-三唑並[1，5-a]喹啉向2.0g 1，2-二氨基-3-氰基-4-苄氨基-喹啉鎓-甲苯磺酸鹽和15ml吡啶的混合物中加入2g aniseacid-氯化物。100℃下攪拌反應混合物8小時。將混合物傾注在50ml水上，濾出沉澱的晶體，並自乙腈重結晶，得到1.1g標題化合物，Mp.237℃。
NMR，δH(400MHz，DMSO-d6)8.78ppm(t，1H)，8.58(d，1H)，8.38(d，1H)，8.10(d，2H)，7.98(t，1H)，7.39(m，5H)，7.07(d，2H)，5.14(d，2H)，3.82(s，3H)實施例22-(2-呋喃基)-9-(2-呋喃基甲氨基)-10-氰基-s-三唑並[1，5-a]喹啉在通式(I)中，R1和R2是氫原子，R3是2-呋喃基，R4和R5共同形成1，3-丁二烯基，R6代表氰基，R7代表2-呋喃基，X是-NH-，n是1。
a.)2-氨基-3-氰基-4-(2-呋喃基甲氨基)-喹啉130℃攪拌下，加熱5g 2-氨基-3-氰基-4-氯喹啉和1ml呋喃基甲胺(糠胺)。將反應混合物傾注在50ml水上，濾出所得沉澱物，用50m水洗滌。將淺黃色沉澱物自20ml乙醇中重結晶出來，獲得4.8g標題化合物，Mp.208℃。
b.)1，2-二氨基-3-氰基-4-(2-呋喃基甲氨基)-喹啉鎓-甲苯磺酸鹽20℃下，在15分鐘內，向2.0g 2-氨基-3-氰基-4-(2-呋喃基甲氨基)-喹啉溶於30ml二甲基甲醯胺的溶液中滴加1.78g O-甲苯磺醯基-羥胺溶於20ml二氯甲烷的溶液。攪拌反應混合物5小時，濾出沉澱的白色晶體物質，並自乙腈重結晶，得到2.1g標題化合物，mp.211℃。
c.)2-(2-呋喃基)-9-(2-呋喃基甲氨基)-10-氰基-s-三唑並[1，5-a]喹啉向2.0g 1，2-二氨基-3-氰基-4-(2-呋喃基甲氨基)-喹啉鎓-甲苯磺酸鹽和15ml吡啶的混合物中加入2g呋喃-2-羧酸氯化物。100℃下攪拌反應混合物8小時。將混合物傾注在50ml水上，濾出沉澱的晶體，並自乙腈重結晶，得到1.1g標題化合物，Mp.203℃。
NMR，δH(400MHz，DMSO-d6)8.74ppm(t，1H)，8.52(d，1H)，8.32(d，1H)，7.90(m，3H)，7.63(m，2H)，7.14(m，1H)，6.68(m，1H)，6.44(m，2H)，5.11(d，2H)實施例32-(3，4-亞甲二氧基苯基)-9-(2-呋喃基甲氨基)-10-氰基-s-三唑並[1，5-a]喹啉在通式(I)中，R1和R2是氫原子，R3是呋喃基，R4和R5共同形成1，3-丁二烯基，R6代表氰基，R7代表3，4-亞甲二氧基苯基，X是-NH-，n是1。
a.)2-(3，4-亞甲二氧基苯基)-9-(2-呋喃基甲氨基)-10-氰基-s-三唑並[1，5-a]喹啉向2.0g 1，2-二氨基-3-氰基-4-(2-呋喃基甲氨基)-喹啉鎓-甲苯磺酸鹽和15ml吡啶的混合物中加入2g 3，4-亞甲二氧基-苯甲酸氯化物。100℃下攪拌反應混合物8小時。將混合物傾注在50ml水上，濾出沉澱的晶體，並自乙腈重結晶，獲得1.4g標題化合物，Mp.185℃。
NMR，δH(400MHz，DMSO-d6)8.55ppm(m，1H)，8.51(d，1H)，8.31(d，1H)，7.93(t，1H)，7.57-7.70(m，3H)，7.05(d，1H)，6.44(m，2H)，6.11(s，2H)，5.08(d，2H)實施例42-(3-吡啶基)-9-(2-噻吩基甲氨基)-10-氰基-s-三唑並[1，5-a]喹啉在通式(I)中，R1和R2是氫原子，R3是2-噻吩基，R4和R5共同形成1，3-丁二烯基，R6代表氰基，R7代表3-吡啶基，X是-NH-，n是1。
a)2-氨基-3-氰基-4-(2-噻吩基甲氨基)喹啉130℃攪拌下，加熱5g 2-氨基-3-氰基-4-氯喹啉和11ml噻吩基甲胺。將反應混合物傾注在50ml水上，濾出所得沉澱物，用50ml水洗滌。將淺黃色沉澱物自25ml乙醇中重結晶出來，獲得5.2g標題化合物，Mp.208℃。
b.)1，2-二氨基-3-氰基-4-(2-噻吩基甲氨基)-喹啉鎓-甲苯磺酸鹽20℃下，在15分鐘內，向2.0g 2-氨基-3-氰基-4-(2-噻吩基甲氨基)-喹啉溶於30ml二甲基甲醯胺的溶液中滴加1.78g O-甲苯磺醯基-羥胺溶於20ml二氯甲烷的溶液。攪拌反應混合物5小時，濾出沉澱的白色晶體物質，並自乙腈重結晶，得到2.1g標題化合物，mp.198℃。
c.)2-(3-吡啶基)-9-(2-噻吩基甲氨基)-10-氰基-s-三唑並[1，5-a]喹啉向2.0g 1，2-二氨基-3-氰基-4-(2-噻吩基甲氨基)-喹啉鎓-甲苯磺酸鹽和20ml二甲基甲醯胺的混合物中加入4ml三乙胺和4g吡啶-3-carboxaldehyde。100℃下攪拌反應混合物8小時。將混合物傾注在50ml水上，濾出沉澱的晶體，並自乙腈重結晶，獲得0.8g標題化合物，Mp.249℃。
NMR，δH(400MHz，DMSO-d6)9.25ppm(s，1H)，8.71(m，2H)，8.35(m，3H)，7.86(m，1H)，7.51(m，3H)，7.17(m，1H)，6.98(m，1H)，5.25(d，2H)實施例52-(3-羥苯基)-9-(2-噻吩基甲氨基)-10-氰基-s-三唑並[1，5-a]喹啉在通式(I)中，R1和R2是氫原子，R3是2-噻吩基，R4和R5共同形成1，3-丁二烯基，R6代表氰基，R7代表3-羥苯基，X是-NH-，n是1。
a.)2-(3-羥苯基)-9-(2-噻吩基甲氨基)-10-氰基-s-三唑並[1，5-a]喹啉向2.0g 1，2-二氨基-3-氰基-4-(2-噻吩基甲氨基)-喹啉鎓-甲苯磺酸鹽和20ml二甲基甲醯胺的混合物中加入4ml三乙胺和4g 3-羥基-苯甲醛。100℃下攪拌反應混合物8小時。將混合物傾注在50ml水上，濾出沉澱的晶體，並自乙腈重結晶，獲得0.9g標題化合物，Mp.248℃。
NMR，δH(400MHz，DMSO-d6)9.66ppm(s，1H)，8.81(m，1H)，8.52(m，1H)，8.35(m，1H)，7.96(m，1H)，7.62(m，3H)，7.44(m，1H)，7.32(m，1H)，7.18(m，1H)，7.01(m，1H)，6.88(m，1H)，5.29(d，2H)利用實施例1中描述的方法製備的通式(I)其它化合物的結構和物理性質在表I中給出。
表I.
利用實施例1中描述的方法製備的通式(III)中間體的結構和物理性質在表(II)中給出。
表II
利用實施例1中描述的方法製備的通式(IV)中間體的結構和物理性質在表(III)中給出。
表III
實施例74下列組成的片劑是通過製藥工業所用的已知方法製備的。
活性成分25mg乳糖50mg微晶纖維素21mg聚乙烯吡咯烷酮3mg硬脂酸鎂1mg生物學方法人腺苷A3受體的結合製備膜混懸液通過用冰冷的PBS洗滌3次而收集表達hA3受體的CHO細胞，1000xg離心10分鐘，在緩衝液(50mM Tris、10mM MgCl2、1mM EDTA，pH8.0)中勻化15秒，43,000xg離心10分鐘(Sigma 3K30)，將膜製品懸浮於上述緩衝液中，-80℃貯存等分試樣。
結合方案在有0.5nM[125I]AB-MECA(對-氨基-苯甲基-甲基醯氨基-腺苷)(100.000cpm)和100μM R-PIA(N6-[L-2-苯基異丙基]腺苷)存在的條件下，室溫下在培養緩衝液(50mM Tris、10mM MgCl2、1mM EDTA、3U/mL腺苷脫氨酶，pH8.0)中培養CHO-hA3膜製品(2μg蛋白內容物)1小時，從而測定非-特異性結合或供試化合物，總體積50μL。在WhatmanGF/B玻璃纖維濾膜(在0.5％聚氮丙啶中預浸泡3小時)上過濾，在96-孔Brandel細胞收集器上用1mL冰冷的50mM Tris、10mM MgCl2、1mMEDTA(pH 8.0)洗滌4次。活性檢測在γ-計數器中(1470 Wizard，Wallac)。抑制[％]＝100-((有供試化合物存在下的活性-非特異性活性)/(總活性-非特異性活性))*100人腺苷A1受體的結合製備膜混懸液通過用冰冷的PBS洗滌3次而收集表達hA1受體的CHO細胞，1000xg離心10分鐘，在緩衝液(50mM Tris，pH7.4)中勻化15秒，43,000xg離心10分鐘(Sigma 3K30)，將膜製品懸浮於上述緩衝液中，-80℃貯存等分試樣。
結合方案室溫下，在培養緩衝液(50mM Tris、3U/mL腺苷脫氨酶，pH7.4)、10nM[3H]CCPA(2-氯-N6-環戊基-腺苷)(80.000dpm)和10μMR-PIA(N6-[L-2-苯基異丙基]腺苷)中，培養CHO-hA1膜製品(50μg蛋白內容物)3小時，從而測定非-特異性結合或供試化合物，總體積100μL。在Whatman GF/B玻璃纖維濾膜(在0.5％聚氮丙啶中預浸泡3小時)上過濾，在96-孔Brandel細胞收集器上用1mL冰冷的50mM Tris(pH7.4)洗滌4次。活性檢測在β-計數器(1450 Microbeta，Wallac)中、有HiSafe-3 coctail存在的條件下、在96孔平板中。抑制[％]＝100-((有供試化合物存在下的活性-非特異性活性)/(總活性-非特異性活性))*100人腺苷A2a受體的結合結合方案室溫下，培養7μg膜(轉染到HEK-293細胞中的人A2a腺苷受體，來源Receptor Biology，Inc.)、緩衝液(50mM Tris-HCl，10mMMgCl2，1mM EDTA，2U/mL腺苷脫氨酶，pH7.4)、20nM[3H]CGS-21680(2-[對(2-羰乙基)苯基乙氨基]-5』-N-乙醯氨基-腺苷)(200.000dpm)和50μM NECA(5』-N-乙醯氨基-腺苷)中90分鐘，從而測定非-特異性結合或供試化合物，總體積100μl。在Whatman GF/B玻璃纖維濾膜(在0.5％聚氮丙啶中預浸泡)上過濾，在96-孔Brandel細胞收集器上用1mL冰冷的50mM Tris、10mM MgCl2、1mM EDTA、0.9％NaCl，pH7.4)洗滌4次。活性檢測在β-計數器(1450 Microbeta，Wallac)中、有HiSafe-3coctail存在的條件下、在96孔平板中。抑制[％]＝100-((有供試化合物存在下的活性-非特異性活性)/(總活性-非特異性活性))*100人腺苷A2b受體的結合結合方案室溫下，培養20.8μg膜(轉染到HEK-293細胞中的人A2b腺苷受體，來源Receptor Biology，Inc.)、緩衝液(50mM Tris-HCl、10mM MgCl2、1mM EDTA、0.1mM苄脒、2U/mL腺苷脫氨酶，pH6.5)、32.4nM[3H]DPCPX(8-環戊基-1，3-二丙基黃嘌呤)(800.000dpm)和100μM NECA(5』-N-乙醯氨基-腺苷)中30分鐘，從而測定非-特異性結合或供試化合物，總體積100μl。在Whatman GF/C玻璃纖維濾膜(在0.5％聚氮丙啶中預浸泡)上過濾，在96-孔Brandel細胞收集器上用1mL冰冷的50mM Tris-HCl(pH6.5)洗滌4次。活性檢測在β-計數器(1450Microbeta，Wallac)中、有HiSafe-3 coctail存在的條件下、在96孔平板中。抑制[％]＝100-((有供試化合物存在下的活性-非特異性活性)/(總活性-非特異性活性))*100結果在我們的實驗條件和1μM濃度下，如果化合物能夠以高於80％的活性抑制放射性配體在人腺苷A3受體上的結合，則我們認為該化合物是生物活性的化合物。
CHO-hA3膜製品上[125I]AB-MECA的解離常數(Kd)是在Scatchard分析的幫助下，利用同位素飽和研究測定的(G.Scatchard，Ann.N.Y.Acad.Sci.51660，1949)。通過使用Cheng-Prusoff方程可將IC50值轉化成親和性常數(Ki)(Y.J.Cheng和W.H.Prusoff，Biochem.Pharmacol.223099，1973)。
通式(I)、(I1)、(III)和(IV)的若干化合物顯示出顯著的生物作用。權利要求2中限定的通式(IA)化合物作為權利要求1中限定的通式(I)副組，發揮了最重要的活性。除9種化合物外，它們的Ki值均不高於20nM。實施例給出的化合物是特別優選的。它們在人腺苷A3受體結合研究中的Ki值為3.5-0.78nM。最優選化合物的Ki值為0.82和0.78nM。
這些化合物具有適當的生物活力，並對人腺苷A1、A2a和A2b受體亞型具有至少1,000倍的選擇性。
此外，在靜脈內和口服給藥時，它們作用的持續時間足夠長，它們的ED50值較低，它們的毒理學和副作用分布十分有利。
上述數據說明通式(I)的化合物可用於治療用途。
權利要求
1.通式(I)的化合物和它們的鹽、溶劑化物，及其旋光異構體和鹽、溶劑化物-其中R1代表氫原子或直鏈或支鏈C1-4烷基；R2代表氫原子或直鏈或支鏈C1-4烷基；R3代表氫原子或直鏈或支鏈C1-4烷基，或苯基、噻吩基、或呋喃基，任選被一個或多個直鏈或支鏈C1-4烷基、直鏈或支鏈C1-4烷氧基、或滷素原子取代，或代表含有1個、2個或3個氮原子的5-或6-元雜芳環、或含有1個氮原子和1個氧原子或1個氮原子和1個硫原子的5元雜芳環，任選被一個或多個直鏈或支鏈C1-4烷基、直鏈或支鏈C1-4烷氧基、或滷素原子取代；R4和R5彼此獨立地代表氫原子，或共同形成1，3-丁二烯基，任選用亞甲二氧基或一個或多個直鏈或支鏈C1-4烷基、直鏈或支鏈C1-4烷氧基、羥基或滷素原子取代；R6代表氫原子或氰基，氨羰基、C1-4烷氧羰基、或羧基；R7代表氫原子或直鏈或支鏈C1-4烷基，或C1-4亞烷基，任選被苯基取代，或代表苯基、苄基、噻吩基或呋喃基，任選被亞甲二氧基、或一個或多個直鏈或支鏈C1-4烷基、直鏈或支鏈C1-4烷氧基、羥基、三氟甲基、氰基或滷素原子取代，氨基，一或二烷氨基，或代表含有1個、2個或3個氮原子的5或6元雜芳環，或含有1個氮原子和1個氧原子或1個氮原子和1個硫原子的5元雜芳環，任選被一個或多個直鏈或支鏈C1-4烷基、直鏈或支鏈C1-4烷氧基、或滷素原子取代；X代表-CH2-、-NH-、-NR12-、或硫原子或氧原子或磺基或亞硫醯基-其中R12代表直鏈或支鏈C1-4烷基或C3-6環烷基；n代表0、1或2。
2.根據權利要求1所述的通式(Ia)化合物和它們的鹽、溶劑化物，及其旋光異構體和鹽、溶劑化物-其中R1代表氫原子或直鏈或支鏈C1-4烷基；R2代表氫原子或直鏈或支鏈C1-4烷基；R3代表氫原子或直鏈或支鏈C1-4烷基，或苯基、噻吩基、或呋喃基，任選被一個或多個直鏈或支鏈C1-4烷基、直鏈或支鏈C1-4烷氧基、或滷素原子取代，或代表含有1個、2個或3個氮原子的5-或6-元雜芳環，或含有1個氮原子和1個氧原子或1個氮原子和1個硫原子的5元雜芳環，任選被一個或多個直鏈或支鏈C1-4烷基、直鏈或支鏈C1-4烷氧基、或滷素原子取代；R8、R9、R10和R11彼此獨立地代表氫原子、直鏈或支鏈C1-4烷基、直鏈或支鏈C1-4烷氧基、羥基或滷素原子；或R8和R11代表氫原子且R9和R10共同形成亞甲二氧基；R6代表氫原子或氰基、氨羰基、C1-4烷氧羰基、或羧基；R7代表氫原子或直鏈或支鏈C1-4烷基，或C1-4亞烷基，任選被苯基取代，或代表苯基、苄基、噻吩基或呋喃基，任選被亞甲二氧基、或一個或多個直鏈或支鏈C1-4烷基、直鏈或支鏈C1-4烷氧基、羥基、三氟甲基、氰基或滷素原子取代，氨基，一或二烷氨基，或代表含有1個、2個或3個氮原子的5或6元雜芳環，或含有1個氮原子和1個氧原子或1個氮原子和1個硫原子的5元雜芳環，任選被一個或多個直鏈或支鏈C1-4烷基、直鏈或支鏈C1-4烷氧基、或滷素原子取代；X代表-CH2-、-NH-、-NR12-、或硫原子或氧原子或磺基或亞硫醯基-其中R12代表直鏈或支鏈C1-4烷基或C3-6環烷基；n代表0、1或2。
3.根據權利要求2所述的通式(IA)化合物和它們的鹽、溶劑化物，及其旋光異構體和鹽、溶劑化物-其中R1代表氫原子、或甲基；R2代表氫原子、或甲基；R3代表苯基或噻吩基或呋喃基；R8、R9、R10和R11彼此獨立地代表氫原子、直鏈或支鏈C1-4烷基、直鏈或支鏈C1-4烷氧基、羥基或滷素原子，或R8和R11代表氫原子且R9和R10共同形成亞甲二氧基；R6代表氫原子、或氰基；R7代表4-甲氧苯基、3-甲基苯基、3-甲氧苯基、3-噻吩基、3-吡啶基、3-羥苯基或3-呋喃基；X代表-NH-或氧原子；且n代表1。
4.根據權利要求1-3所述的如下化合物和它們的鹽、溶劑化物，及其旋光異構體和鹽、溶劑化物2-(4-甲氧苯基)-9-苄氨基-10-氰基-s-三唑並[1，5-a]喹啉，2-(2-呋喃基)-9-(2-呋喃基甲氨基)-10-氰基-s-三唑並[1，5-a]喹啉，2-(3，4-亞甲二氧基苯基)-9-(2-呋喃基甲氨基)-10-氰基-s-三唑並[1，5-a]喹啉，2-(3-吡啶基)-9-(2-噻吩基甲氨基)-10-氰基-s-三唑並[1，5-a]喹啉，2-(3-羥苯基)-9-(2-噻吩基甲氨基)-10-氰基-s-三唑並[1，5-a]喹啉。
5.用於製備通式(I)的化合物和它的鹽、溶劑化物，及其旋光異構體和鹽、溶劑化物的方法-其中通式中的R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、X和n具有與權利要求1相同的含義，其特徵在於使通式(VII)的化合物-其中R7具有與權利要求1相同的含義-與通式(II)的1，2-二氨基-吡啶鎓鹽閉環-其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7具有與權利要求1相同的含義，且如果需要，通過本來已知的方法相互轉換如此獲得的通式(I)化合物的取代基，和/或將如此獲得的通式(I)化合物轉換成其鹽、或溶劑化物，或將它從其鹽或溶劑化物中釋放出來和/或將它與其旋光異構體形式分離開或將旋光形式轉化成外消旋形式。
6.根據權利要求5所述的方法，其特徵在於在有三乙胺存在的條件下，在二甲基甲醯胺中進行通式(VII)化合物的閉環，其中Y代表氫原子。
7.根據權利要求5所述的方法，其特徵在於在吡啶中進行通式(VII)化合物的閉環，其中Y代表滷素原子。
8.含有作為活性成分的一種或多種通式(I)化合物-其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、X和n具有與權利要求1相同的含義-或它們的鹽、溶劑化物、或其旋光異構體和鹽、溶劑化物，以及一種或多種製藥工業所用賦形劑的藥物組合物。
9.根據權利要求8所述的藥物組合物，它含有作為活性成分的一種或多種通式(Ia)化合物-其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、X和n具有與權利要求2相同的含義-或它們的鹽、溶劑化物、或其旋光異構體和鹽、溶劑化物，以及一種或多種製藥工業所用賦形劑。
10.根據權利要求9所述的藥物組合物，它含有作為活性成分的一種或多種權利要求4的化合物。
11.通式(I)的化合物-其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、X和n具有與權利要求1相同的含義-用於治療受體A3在其發展中起作用的疾病的用途。
12.根據權利要求11所述的通式(I)化合物-其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、X和n具有與權利要求1相同的含義-作為A3配體在心臟、腎、呼吸器官和中樞神經系統疾病的情況下，用於抑制腺苷對生長腫瘤細胞的保護，防止肥大細胞脫粒，抑制細胞因子產生，降低眼內壓，抑制TNFα釋放，抑制嗜酸性細胞、中性白細胞和其它免疫細胞遷移，抑制支氣管收縮和血漿外滲的用途。
13.根據權利要求11和12所述、作為活性成分的通式(I)化合物-其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、X和n具有與權利要求1相同的含義-作為A3受體拮抗劑，在抗炎、止喘、抗局部缺血、抗抑鬱、抗心律失常、腎臟保護、抗腫瘤、抗帕金森氏病和提高認知的藥物組合物和用於治療或預防心肌再灌注損傷、慢性梗阻性肺病(COPD)和成人呼吸窘迫症候群(ARDS)包括慢性支氣管炎、肺氣腫或呼吸困難、變態反應(例如，鼻炎、毒葉藤誘導的反應、蕁麻疹、硬皮病、關節炎)、其它自身免疫疾病、炎性腸疾病、阿狄森氏病、克羅恩氏病、牛皮癬、風溼病、高血壓、神經官能症、青光眼和糖尿病的組合物中的用途。
14.根據權利要求11、12和13所述、作為活性成分的通式(I)化合物-其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、X和n具有與權利要求1相同的含義-作為A3受體拮抗劑用於治療疾病如哮喘、COPD和ARDS、青光眼、腫瘤、變應性和炎性疾病、局部缺血、低氧症、心律失常和腎病的用途。
15.通式(II)的化合物-其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、X和n具有與權利要求1相同的含義。
全文摘要
本發明涉及通式(I)的腺苷A
文檔編號C07D471/04GK1606556SQ02825646
公開日2005年4月13日 申請日期2002年12月17日 優先權日2001年12月21日
發明者P·阿蘭伊, L·巴拉茲, S·巴託裡, J·本斯, K·博爾, F·哈傑都, Z·卡普, E·米庫斯, T·薩伯, L·特納吉, G·蒂馬裡, K·厄班－薩伯, E·瓦爾茨 申請人:薩諾費合成實驗室