貓咪血常規能查出胰腺炎嗎（患胰腺炎的犬貓中性粒細胞與淋巴細胞比值和血小板與淋巴細胞比值）
2023-11-09 12:14:07
摘 要
研究背景
雖然中性粒細胞與淋巴細胞比值（NLR）和血小板與淋巴細胞比值（PLR）一直作為癌症和炎症疾病的預後標誌物，但是把其作為患有急性胰腺炎貓狗的衡量標準的研究目前比較匱乏。
研究目的
在貓狗身上，評估NLR和PLR作為急性胰腺炎嚴重程度和臨床過程的生物標誌物的有用性。
研究方法
在這項前瞻的性研究中，研究對象為67隻患有急性胰腺炎的狗和41隻患有急性胰腺炎的貓，17隻健康的狗和貓作為參照對象。同時把患有急性胰腺炎的貓狗的NLR和PLR同對照組進行了比對。研究過程中，疾病的嚴重程度採用改良的人類「急性胰腺炎嚴重程度床邊指數（BISAP）」評分進行劃分，病程按照臨床恢復時間來判定。
研究結果
經過研究發現，患有胰腺炎的貓狗的NLR和PLR顯著高於健康對照組。然而，經過改良的BISAP評分的評估，未發現 NLR或PLR與疾病嚴重程度之有顯著關係。研究還發現患有胰腺炎且恢復期延長的貓狗的PLR顯著增加，患有胰腺炎且恢復期延長的貓NLR也顯著增加。
研究結論
通過研究我們得出結論：NLR和PLR的增加可以提供有關貓狗胰腺炎病程的信息。
一、引言
預後標誌物就像一個可以用於估計疾病病程和結果的臨床症狀或者可測量的患者參數一樣是特有的。在文獻中，中性粒細胞與淋巴細胞比值（NLR）和血小板與淋巴細胞比值（PLR）一直被描述為預後標誌物。在人類有關癌症和炎症過程的病例中，可以發現有關這兩種比值的研究。
在炎症反應病例中，有好幾項測量這些比值的研究證明了這些參數的預後價值。這些比值與疾病結果或預後之間的相關性是以這些不同的炎症細胞在產生和分泌各種細胞因子和生長因子的重要性為基礎的,而細胞因子和生長因子影響炎症過程，從而影響臨床結果。由於急性胰腺炎是一種嚴重的炎症過程，在這個過程當中預後標誌物是很重要的，因此，研究人員對人類胰腺炎患者的NLR和PLR進行了研究，並將這兩種比值同疾病的嚴重程度和臨床結果進行了比較。研究結果表明，相對於PLR而言，NLR更能提供人類急性胰腺炎患者的預後信息。
在獸醫學方面，一些對患有膿毒性腹膜炎或全身炎症反應綜合症（SIRS）的狗進行的研究就是圍繞NLR進行的。他們比較了患有敗血症、非過敏性系統炎症性疾病和對照組的狗的NLR。關於使用NLR作為狗的嚴重炎症過程的預後標誌物的結論是不同的。一項研究得出結論，對於SIRS而言，NLR是一個有的標誌物，而有一項研究得出結論，NLR在診斷和預測全身炎症過程方面的應用有限。因此，尤其是在獸醫學方面，有必要對這兩種比值進行更多的研究。又因為急性胰腺炎是貓狗常患的一種嚴重的炎症性疾病，而預測臨床結果是臨床護理的重要組成部分，所以，我們決定研究患有急性胰腺炎的貓狗的NLR和PLR。本研究的目的是測量患有急性胰腺炎的貓狗的NLR和PLR，並確定這些比值是否提供了有關疾病嚴重程度和病程的相關信息。
二、研究材料和研究方法
2.1 動物
本研究共涉及84隻狗和58隻貓。所有動物都是德國歌廷根大學獸醫醫學研究所小動物診所的病人，並且這些動物被分成兩組。
第一組（n=67隻狗和n=41隻貓）的小動物都患有急性胰腺炎。急性胰腺炎的診斷是基於食欲不振、腹痛、嘔吐和經酶聯免疫吸附測定（ELISA）（SNAP）的犬科動物和貓科動物c/fPL的升高以及1,2-0-二氟甲醯基-rac-甘油-戊二酸-（6』-甲基間苯二酚）（DGGR）脂肪酸濃度升高這樣的臨床症狀。此外，由一名經驗豐富的內科專家對所有動物進行超聲波檢查。胰腺炎的主要症狀包括胰腺增大或形狀不規則、實質回聲減弱、周圍脂肪回聲增強。根據臨床結果第一組分為兩個子小組：恢復期延長組和短暫恢復期組。截止日期設定為十天。所有經證實患有急性胰腺炎的動物均採用相同的治療方案，主要是以輸液、鎮痛藥（嗎啡和／或安乃近）以及抗生素（阿莫西林）為基礎進行治療的。治療期間，定期檢查臨床體徵和實驗室參數。在參考間隔內無典型臨床症狀、c/fPL以及DGGR脂肪酶水平正常被認定為恢復良好。所有調查和治療均證實符合《德國動物福利法》。
第二組（n=17隻狗和17隻貓）的動物為對照組，是由一些沒有表現出臨床症狀或實驗室參數表明沒有患急性胰腺炎或其他炎症或腫瘤疾病的動物組成。所有第二組的貓和狗都來診所進行過常規疫苗接種。且對這些動物進行了臨床和血液（血液學、臨床生物化學、c/fPL以及DGGR脂肪酶）檢查和腹部超聲波檢查。
2.2 樣本
在任何治療前和治療期間，患者在入院時從頭靜脈採集血樣。為了獲得血液學參數，採集血樣時使用 EDTA管（德國公司Numbercht. Sarstedt AG&Co生產），並使用ProCyte血液分析儀（美國緬因州韋斯特布魯克IDEXX實驗室有限公司設計研發）進行分析。
用血清管收集臨床化學所需的血清樣本，並使用Eppendorf離心機（德國漢堡Eppendorf AG研發）以3200g離心5分鐘。使用臨床化學分析儀（Konelab 20i；產於德國公司Thermo Fischer Scientific Inc, Dreieich）以及商用套件對DGGR脂肪酶以及其它的臨床生物化學參數進行分析。按照製造商的說明，使用酶聯免疫吸附試驗（ELISA）（SNAP實驗；美國緬因州韋斯特布魯克IDEXX實驗室有限公司設計研發）測定c/fPL。NLR和PLR比值分別定義為中性粒細胞絕對計數與淋巴細胞絕對計數的比值和血小板絕對計數與淋巴細胞絕對計數的比值。
在這項研究中，疾病的嚴重程度採用改良的 「急性胰腺炎嚴重程度床邊指數（BISAP）」評分進行測量。該指數用於人類醫學，包括尿素濃度、精神狀態、SIRS症狀、年齡和腹腔積液的出現。因為這種症狀在患有胰腺炎的貓狗身上很少見，所以我們通過排除腹腔積液來修改這個指數。尿素濃度超過50ml/dL參照上線的狗和貓得1分。受幹擾的一般行為也得1分。出現以下三種或三種以上症狀:呼吸急促(狗>20/分鐘；貓>40/分鐘)，心跳過速（狗>120/分鐘，貓>225/分鐘）、白細胞增多或白細胞減少、增加的帶中性粒細胞分數（狗>3%；貓 >5%）和發熱（狗>39.2°c；貓>39.7°c）或者體溫過低（狗<38.1°c;貓<37.8°c）都高度提示SIRS，並且也得1分。對於這兩種物種而言，年齡大於十歲得1分。對所有分數進行累加，3-4分表示死亡風險增加，小於3分表示死亡風險降低。對於每隻動物進行至少為期30天的病程觀察。那些在10天內可以恢復的動物可以認定為恢復良好。在觀察期內死亡或被安樂死或者恢復期超過10天的動物被認定為恢復不良。
2.3統計數據
使用商用統計程序Prism8(GraphPad 軟體)進行統計分析。將群體分布與Kolmogorov-Smirnov檢驗進行比較。非正態分布結果與Mann-Whitney U檢驗進行比較。同時計算了NLR或PLR的比值與胰腺炎的存在、疾病嚴重程度和病程之間的相關性。在P<.05時，差異被認為是顯著的。
三、研究結果
患急性胰腺炎這一組的狗是由31隻雌性和36隻雄性組成的，平均年齡為十一歲（年齡範圍為5-18歲）。其中39隻純種犬，28隻混合犬。所有第一組的狗都呈現出與急性胰腺炎一致的臨床症狀，並且在進行超聲波檢查時，大多數（58/67）也表現出典型的胰腺炎症狀。在所有病歷裡，cPL結果與胰腺炎一致，並且所有病例的DGGR脂肪酶水平都超過了參照上線（108U/L）（DGGR脂肪酶水平從144U/L到2447 U/L範圍變化，中值[MV]為420U/L；見圖1）。
圖1 顯示患有胰腺炎和健康對照組狗的1,2-0-二氟甲醯基-rac-甘油-戊二酸-（6』-甲基間苯二酚）（DGGR）脂肪酸濃度。兩組之間差異顯著（P0.05）。
除PLR以外，恢復時間短的狗（小於10天）（n=41）和恢復時間延長的狗(大於10天)(n=26)在任何可以測量或可以計算的參數上均無顯著差異。恢復時間短的這一組的白細胞(最小 3.870/ul; 最大15.002/ul; 中值10.058/ul) 與恢復時間延長的這一組的白細胞(最小 5.880/ul; 最大34.900/ul; 中值12.076/ul) 無顯著差異（P=0.69）。恢復時間短的這一組的中性粒細胞(最小 2.800/ul; 最大13.090/ul; 中值7.332/ul) 與恢復時間延長的這一組的中性粒細胞(最小 3.660/ul; 最大22.3 00/ul; 中值8.956/ul) 無顯著差異（P=0.56）。恢復時間短的這一組的淋巴細胞(最小 680/ul; 最大4.420/ul; 中值1.867/ul) 與恢復時間延長的這一組的淋巴細胞(最小600/ul; 最大2.910/ul; 中值1.448/ul) 無顯著差異（P=0.08）。恢復時間短的這一組的血小板 (最小59.000/ul; 最大746.000/ul; 中值378.195/ul) 與恢復時間延長的這一組的血小板 (最小196.000/ul; 最大993.000/ul; 中值422.577/ul) 無顯著差異（P=0.31）。恢復時間短的這一組的NLR(最小1; 最大14; 中值4) 與恢復時間延長的這一組的NLR (最小1; 最大34; 中值7) 無顯著差異（P=0.07）。最後，恢復時間短的這一組的PLR (最小81; 最大546; 中值238) 與恢復時間延長的這一組的PLR (最小116; 最大648; 中值333) 差異顯著（P=0.01）（見圖4和圖5）。
圖4 顯示恢復期短的（小於10天）以及恢復期長（大於10天）的患有胰腺炎的狗的中性粒細胞與淋巴細胞的比值（NLR）。兩組之間的NLR比值無顯著差異（P=0.07）。一個顯示最小值、最大值和中間值的箱線圖。
圖5 顯示恢復期短的（小於10天）以及恢復期長（大於10天）的患有胰腺炎的狗的血小板與淋巴細胞的比值（PLR）。兩組之間的PLR比值存在顯著差異（兩者的P=0.01）。一個顯示最小值、最大值和中間值的箱線圖。
41隻患胰腺炎的貓包括16隻雌性和25隻雄性，平均年齡為13歲（年齡範圍為10-19歲）。雖然有7隻屬於純種貓，但是幾乎所有的都屬於家養的短毛貓（n=34）。所有患病的貓都出現了厭食、腹痛和嘔吐這樣的臨床症狀，並且幾乎所有的病例（36/41），都經超聲波檢查證實患有胰腺炎。
所有病例的fPL結果都與胰腺炎一致，並且所有病例的DGGR脂肪酶水平都超過了參照上線（26U/L），DGGR脂肪酶水平從28U/L到350U/L範圍變化，中值[MV]為50U/L（見圖6）。
圖6 顯示患有胰腺炎和健康對照組貓的1,2-0-二氟甲醯基-rac-甘油-戊二酸-（6』-甲基間苯二酚）（DGGR）脂肪酸濃度。兩組之間的差異顯著（P<0.001）。一個顯示最小值、最大值和中間值的箱線圖。
本次研究對身患急性胰腺炎的貓（n=41）和健康對照組貓（n=17）的白細胞、中性粒細胞、淋巴細胞以及血小板數量進行了比對。身患急性胰腺炎的貓的白細胞計數(最小 2.570/ul; 最大34.170/ul; 中值10.717/ul)與健康對照組貓的白細胞計數(最小 3.970/ul; 最大13.600/ul; 中值8.770/ul)並沒有顯著差異（P=0.25）。身患胰腺炎的貓的中性粒細胞計數(最小300/ul; 最大29.010/ul; 中值8.086/ul)與健康對照組貓的中性粒細胞計數(最小1.500/ul; 最大14.560/ul; 中值5.607/ul)也沒有顯著差異（P=.65），最後一點，身患胰腺炎的貓的血小板水平 (最小20.000/ul; 最大451.000/ul; 中值288.829/ul)與健康對照組貓的血小板水平 (最小156.000/ul; 最大504.000/ul; 中值323.294/ul)沒有顯示顯著性差異（P=0.31）。然而，健康對照組貓的淋巴細胞水平 (最小620/ul; 最大4.300/ul; 中值2.818/ul) 與身患急性胰腺炎的貓的淋巴細胞水平 (最小320/ul; 最大12.550/ul; 中值2.398/ul)差異明顯（P=0.028）。第一組的NLR比值(最小1; 最大36; 中值5)同第二組的NLR比值(最小1; 最大8; 中值1.5)差異明顯（P=.001）（見圖7）。第一組的PLR比值(最小22; 最大665; 中值198)同第二組的PLR比值(最小29; 最大256; 中值113)也表現出很大的差異（P=0.03）（見圖8）。
圖7 顯示患有胰腺炎和健康對照組貓的中性粒細胞與淋巴細胞的比值（NLR）。兩組之間NLR差異顯著（P=0.001）。一個顯示最小值、最大值和中間值的箱線圖。
圖8 顯示患有胰腺炎和健康對照組貓的血小板與淋巴細胞的比值（PLR）。兩組之間差異顯著（P=0.03）。一個顯示最小值、最大值和中間值的箱線圖。
研究還發現，身患重症胰腺炎的貓(BISAP 3-4)與身患輕度胰腺炎的貓(BISAP 0.05）。
就白細胞(P=0.25)、中性粒細胞(P=0.65)和血小板(P=0.31)而言，恢復期短的貓(小於10天)（n=9）同恢復期延長的貓(大於10天)（n=32）沒有顯著差異。相比之下，這兩組貓的淋巴細胞(P=0.008)、NLR(P=0.001)和 PLR(P=0.03)比值卻存在顯著差異(見圖9和圖10)。
圖9 顯示恢復期短的（小於10天）以及恢復期長（大於10天）的患有胰腺炎的貓的中性粒細胞與淋巴細胞的比值（NLR）。兩組之間無顯著差異（P=0.001）。一個顯示最小值、最大值和中間值的箱線圖。
圖10 顯示恢復期短的（小於10天）以及恢復期長（大於10天）的患有胰腺炎的貓的血小板與淋巴細胞的比值（PLR）。兩組之間存在顯著性差異（P=0.03）。一個顯示最小值、最大值和中間值的箱線圖。
具體來說，恢復期短的這一組的白細胞數(最小 6.120/ul; 最大18.420/ul; 中值10.520/ul)與恢復期延長的這一組的白細胞數(最小 2.570/ul; 最大13.600/ul; 中值8.770/ul)無顯著差異(P=0.25)。恢復期短的這一組的中性粒細胞數(最小4.430/ul; 最大11.400/ul; 中值7.423/ul)與恢復期延長的這一組的中性粒細胞數 (最小300/ul; 最大12550/ul; 中值3.885/ul)無顯著差異(P=.65)。恢復期短的這一組的血小板計數 (最小20.000/ul; 最大393.000/ul; 中值257.888/ul)與恢復期延長的這一組的中性粒細胞數 (最小113.000/ul; 最大451.000/ul; 中值297.531/ul)無顯著差異(P=0.31)。而恢復期短的這一組的淋巴細胞計數 (最小900/ul; 最大12.550/ul; 中值3.885/ul)與恢復期延長的這一組的淋巴細胞計數(最小320/ul; 最大7.560/ul; 中值1.980/ul) 差異顯著 (P=0.008)。恢復期短的這一組的NLR比值(最小1; 最大5；中值2)與恢復期延長的這一組的NLR比值 (最小1; 最大36; 中值6) 差異顯著 (P=0.001)。最後，恢復期短的這一組的PLR比值(最小22; 最大172；中值94)與恢復期延長的這一組的PLR比值 (最小33; 最大665; 中值28) 差異顯著 (P=0.03)。
四、討論
急性胰腺炎是貓狗常患的一種常見的炎症性疾病。關於這種疾病的不同形式已有很多描述，其中急性型和致死型具有特別的臨床意義，這是因為強化治療和護理對於成功治療這些動物至關重要。貓狗急性胰腺炎的臨床症狀包括食欲不振或者厭食、嘔吐以及腹痛。相關的多器官功能障礙可能是胰腺壞死的後果，很多案例中，這一情況可能導致更嚴重的臨床症狀，例如SIRS，甚至死亡。為了研究NLR或者PLR比值是否可以作為疾病嚴重程度或病程的標誌從而作為預測的基礎，我們把患有胰腺炎的貓和狗作為研究對象進行了觀察研究。
在人類醫學中，急性胰腺炎最常見於六十歲以上的人群。在這項研究中，我們證實了老年貓狗患胰腺炎的頻率更高；並且患胰腺炎的狗的平均年齡為十一歲，患胰腺炎的貓的平均年齡為十三歲。
在許多病例中，犬科動物和貓科動物急性胰腺炎的典型臨床症狀有食欲不振、嘔吐和腹瀉。在研究中，所有第一組的動物都表現出了這些急性胰腺炎的臨床症狀。但是，由於臨床症狀不很明確，診斷通過IDDEXX SNAP對於c/fPL的測定以及升高的DGGR脂肪酶水平才得以證實。SNAP cPL的敏感性和特異性分別為82%和59%。在身患胰腺炎的狗身上，犬DGGR脂肪酶也出現了93%的敏感性和53%的特異性。在貓身上，SNAP fPLI和DGGR脂肪酶這兩項測試都用於診斷貓胰腺炎。在身患胰腺炎的貓身上，DGGR脂肪酶的敏感性和特定性分別為48%和63%。對於身患胰腺炎的貓而言，SNAP fPL測定同IDEXX Spec fPL測定的一致性為90%-97.5%，反過來，IDEXX Spec fPL測定的敏感性和特異性分別為79%和80%。
由於兩種診斷實驗都具有高度的敏感性和中等程度的特異性，因此，我們在研究中將腹部超聲波檢查作為一種附加的診斷工具。雖然並非所有疑似胰腺炎病例都顯示典型的超聲改變，但大多數具有典型臨床症狀、升高的SNAP c/fPL和DGGR脂肪酶的病例都可以通過超聲波檢查得到確診。在犬科動物和貓科動物急性胰腺炎的的病例中，先前已經對超聲波檢查的診斷價值作了研究，並且發現犬和貓的敏感性分別為68%和67%。
因為在一些病例中，嚴重器官功能障礙患者的急性胰腺炎預後較差，而一些患有急性非致命性胰腺炎的案例治療成功，所以能提供疾病嚴重程度以及潛在後果的生物標誌物就具有臨床意義。
在這項研究中，我們評估了NLR和PLR的預後價值，並研究了它們與急性胰腺炎嚴重程度和病程的關係。雖然已有研究專門針對患有腫瘤性疾病的小動物的NLR和PLR做過相關調查，但只有幾個出版物討論了它們與炎症性疾病的關係。最近有兩項針對患有SIRS和膿毒性腹膜炎的狗的NLR進行的研究。並且兩項研究均發現炎症過程中NLR升高，但未發現其與疾病嚴重程度或病程相關。我們的研究結果證實，與健康對照組進行比較，患有胰腺炎的貓狗的NLR增加。
在人類醫學方面，胰腺炎的嚴重程度可以使用不同的評分系統進行評估。在獸醫學中，有關於貓狗急性胰腺炎的評分系統的相關描述。我們將NLR比值與改良的BISAP評分系統進行了比較，該評分系統以血尿素氮、精神狀態受損，年齡和全身炎症反應（SIRS）這些體徵為基礎。而之所以選擇BISAP評分系統，就是因為所有參數都是常規檢查的一部分。相比之下，其他針對狗和貓的評估評分系統卻包括乳酸、血氧飽和度或者離子鈣這些需要特殊設備和程序的參數。在評分時，我們沒有包含腹腔積液這一參數是因為該參數在患有胰腺炎的狗和貓身上沒有常規描述。在一項涉及21隻患有胰腺炎的狗的研究中，14%的狗在檢查時發現腹腔積液。我們的研究結果表明，在貓狗身上， NLR和BISAP之間沒有顯著的相關性，並且NLR和使用BISAP評定的疾病嚴重程度之間也沒有顯著的相關性。
研究還發現，恢復期短的患有急性胰腺炎的狗NLR同恢復期延長的患有急性胰腺炎的狗NLR沒有差異。相比之下，恢復期延長的患有急性胰腺炎的貓的NLR卻大幅增加，所以支持使用NLR作為貓的預後標誌物。
在一項專門針對患有不同疾病，包括炎症的狗進行的PLR的研究中，未發現PLR與疾病嚴重程度和病程之間的關係。在我們的研究中，同健康的貓狗比起來，患有急性胰腺炎的貓狗的PLR顯著增加。不幸的是，在這兩個物種中，都沒有發現PLR和BISAP評分之間的顯著相關性。由於PLR受血小板升高的影響，我們主要將失配歸因於BISAP測量的參數，而這些參數不受血小板的影響，如白細胞計數、條帶數或者臨床參數，如溫度。未來的研究適合將PLR和NLR與其他評分系統進行比較。
對於患有急性胰腺炎和恢復期延長的貓狗， PLR顯著升高。患病期間PLR的升高主要是血小板增多，而非淋巴細胞減少的結果。血小板在炎症和感染中的作用是眾所周知的，它們執行吞噬功能並調節白細胞，這就解釋了急性胰腺炎病例中PRL升高的原因。然而，僅血小板計數提供的信息較少。
當然，該研究還有一些局限性。雖然組織病理學檢查可能增加胰腺炎診斷的可能性，但在研究中，胰腺炎的診斷僅基於臨床和臨床病理參數。最近一項研究比較了72隻狗的組織病理學結果和胰腺脂肪酶免疫反應性，並且計算出胰腺脂肪酶免疫反應性的敏感性為90%，特異性為92%。
第二個局限性是安乃近的使用，安乃近在研究中用於疼痛治療,可能由於其抗炎作用而對骨髓產生影響。雖然在文獻中，未發現安乃近對犬科動物和貓科動物骨髓影響的研究。但在人類醫學中，安乃近過量可以造成白細胞減少和淋巴細胞減少的症狀。為了排除抗炎藥的影響，進一步的研究建議使用阿片類藥物作為鎮痛劑。
最後，一些胰腺外疾病，特別是腸道疾病，可能與c/fPL濃度升高有關。例如，在患有炎症性腸道疾病的狗身上，就出現了cPL升高的現象。為了減少這一局限性，除了c/fPL，我們還研究了DGGR脂肪酶，並進行了腹部超聲波檢查。然而，在進一步的研究中，最好進行腸道活組織檢查。
總之，這項研究的結果表明，與健康對照組對比起來，患有急性胰腺炎的貓狗NLR和PLR升高。通過BISAP評分評估的疾病嚴重程度無法通過貓狗升高的NLR和PLR比值來確認；然而，在貓和狗身上，同NLR的升高相比，PLR的升高與胰腺炎病程延長相關。
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