胞內分枝桿菌檢測用引物和探針、以及使用該引物和探針的胞內分枝桿菌的檢測方法

2023-12-04 03:10:46 1

專利名稱：：胞內分枝桿菌檢測用引物和探針、以及使用該引物和探針的胞內分枝桿菌的檢測方法
技術領域：
：本發明涉及使用核酸的擴增及其檢測系統的胞內分枝桿菌(Mycobacteriumintracellulare,以下有時簡稱為"M.intracellulare"。)的檢測和/或鑑定方法。
背景技術：
：非結核性抗酸菌(nontuberculousmycobacterium)是革蘭氏陽性桿菌，被分類於分枝桿菌屬，具有抗酸性的性質，是結核菌群和麻風分枝桿菌(Mycobacteriumleprae)之外的一種抗酸菌。15~20%的在痰的抗酸菌直接塗片檢查中為陽性的病例在之後的菌種鑑定檢查中被診斷為非結核性抗酸菌。在非結核性抗酸菌中，作為成為臨床上問題的菌種，人們知道胞內分枝桿菌、堪薩斯分枝桿菌(Mycobacteriumkansasii)、海分枝桿菌(Mycobacteriummarinum)、戈登分枝桿菌(Mycobacteriumgordonae)、蘇爾力口分4支桿菌(Mycobacteriumszulgai)、鳥分才支才幹菌(Mycobacteriumavium)、簷分枝桿菌(Mycobacteriumxenopi)、偶發分枝桿菌(Mycobacteriumfortuitum)、龜分枝軒菌(Mycobacteriumchelonei)、腺月中分枝桿菌(Mycobacteriumabscessus)等。其中常見的是胞內分枝桿菌和鳥分枝桿菌。因為胞內分枝桿菌和鳥分枝桿菌非常近似、難以區別，所以將胞內分枝桿菌和鳥分枝桿菌合併稱為鳥-胞內分枝桿菌複合體(Mycobacteriumaviumcomplex,MAC)。大約70y。的非結核性抗酸菌病患者是MAC感染症，其次多的是堪薩斯分枝桿菌7病，佔20%。而剩餘10%是由其它菌種引起的感染症。據說非結核性抗酸菌一般毒性低，對健常人無害。但是偶爾對人顯示感染性。人們知道其中MAC會引發結核後遺症(肺感染症)、還會對AIDS等易感染患者引發機會性感染。所以，迅速且正確地檢測非結核性抗酸菌在治療上特別重要。另外，因為非結核性抗酸菌病近年有增加傾向，所以迫切期望開發在短時間內鑑別結核菌與非結核性抗酸菌的方法。進一步地，以核酸擴增檢測法檢測、診斷胞內分枝桿菌和鳥分枝桿菌的方法已經應用於健康保險，即使從這方面出發，其診斷上的意義也較大。另外，非結核性抗酸菌多數對抗結核藥顯示抵抗性。所以，在懷疑患者是抗酸菌感染症的情況下，為了確定治療方針，鑑別診斷是結核病還是非結核性抗酸菌病是重要的。進而，因為非結核性抗酸菌引發的疾病根據其菌的種類而治療方法各異，所以確定其菌種也非常重要。但是，非結核性抗酸菌病沒有特異性的臨床症狀。因此，從臨床觀察、病理組織學觀察來鑑別結核病和非結核性抗酸菌病，進而具體指定非結核性抗酸菌的種類極為困難。所以，診斷是結核病還是非結核性抗酸菌病的診斷必須根據菌的鑑定來進行。為了診斷非結核性抗酸菌病而進行的一般的菌鑑定方法是痰塗片檢查。但是，在該檢查中，僅能判斷該病原菌是否是"抗酸菌陽性"，不能鑑別該病原菌是結核菌還是非結核性抗酸菌。所以，通常在痰塗片檢查中為陽性之後，通過在小川培養基等培養基上分離培養菌來進行菌的培養檢查，來鑑別是結核菌還是非結核性抗酸菌。而且進一步進行生物化學試驗，從而進行菌種鑑定。但是，一般來說分枝桿菌屬生長緩慢，例如僅菌的分離培養就需要3~4周。而且，到得到用於鑑定菌種的各種生物化學試驗的結果之前，還需要23周。所以，作為歷來的基本方法，進行如上的塗片檢查、培養檢查來得到是否是結核病的診斷結果這樣的方法是相當耗費時間的方法。另一方面，近年來人們開發了在基因水平上檢測菌的技術。例如，作為用於檢測菌的有用方法，研究出使用了聚合酶鏈反應(PolymerareChainReaction,PCR)等核酸擴增技術的診斷技術。因為該方法敏感度高，所以只要樣品中有幾個菌就可以檢測菌。另外，具有可以在短時間(最長4天)內檢測(可以鑑定菌種)這樣的優點。但是，在通常的PCR法中判斷不出菌數。另外，無論檢測活菌還是死菌都沒有區別。進而，只要樣品中有菌，那麼無論菌數多少都判斷為陽性。所以，在PCR法中感染性的診斷不確實。進而PCR法還有因為敏感度過高，所以容易出現判定假陽性等問題。作為使用PCR法的胞內分枝桿菌的檢測方法，有對例如MacS叫uevar基因區域、鳥分枝桿菌19kDa蛋白質(MAV19k)基因區域、和胞內分枝桿菌核糖體蛋白質sl基因區域中的兩個以上使用特異性寡核苷酸引物的多重引物對，來檢測是否存在MAC核酸的方法(專利文獻1)。但是，在該檢測方法中不能判別胞內分枝桿菌與鳥分枝桿菌。另外，在使用所使用的rps1引物(從胞內分枝桿菌核糖體蛋白質sl基因區域設計出的引物)的PCR中，即使在樣品是鳥分枝桿菌分離林的情況下也可以檢測到擴增產物，在對胞內分枝桿菌的特異性上存在問題。另外，人們還知道使用擴增嵌入有基因插入序列IS901的插入部位的DNA鹼基序列的引物來進行PCR,根據得到的擴增產物的鏈長，來判定是鳥結核菌(鳥分枝桿菌)還是胞內分枝桿菌的方法(專利文獻2)。但是，因為在使用該引物的PCR中，無論在樣品是鳥結核菌(鳥分枝桿菌)的情況下還是在樣品是胞內分枝桿菌的情況下都能得到引物延伸產物，所以該判別方法不能說是對胞內分枝桿菌特異性的方法。另外，根據引物延伸產物的鏈長來判別兩者這樣的方法複雜，且有時根據判定者其判定結果也會不同，所以不能說是確實的判定方法。除了PCR法之外，還有利用鏈置換擴增法(SDA法，StrandDisplacementAmplificationMethod)的檢測方法。例如，在特開平10-4984號(專利文獻3)中，^Hf了以編碼一部分分枝桿菌a抗原的BCG85-B基因的63個核苷酸的片段為目標的方法。該方法是使用擴增胞內分枝桿菌和鳥分枝桿菌兩種菌所具有的BCG85-B基因的目標序列的引物，以SDA法進行核酸擴增反應，並且以其結果為基礎檢測MAC的方法。即，在該方法中使用的引物是擴增胞內分枝桿菌和鳥分枝桿菌兩者的引物。但是，在該方法中，當然在樣品中有胞內分枝桿菌和樣品中有鳥分枝桿菌的兩種情況下都可以得到引物延伸產物。所以用該方法可以檢測MAC，但不能特異性地檢測胞內分枝桿菌。另外，即使在檢測MAC時也有時出現假陽性。在特開2001-103986號公報(專利文獻4)中，公開了作為用於檢測MAC的引物、捕獲探針、和檢測用探針而使用的寡核苷酸。但是，該引物擴增來自胞內分枝桿菌和鳥型結核菌(鳥分枝桿菌)兩種菌所具有的dnaJ基因的48bp目標序列。即，無論在樣品中存在胞內分枝桿菌的情況下，還是在樣品中存在鳥分枝桿菌的情況下，都發生擴增反應。所以，使用該引物進行SDA法，使用補充探針和檢測用探針檢測引物延伸產物，基於該結果可以進行MAC的檢測。但是，不能在不檢測鳥分枝桿菌的狀態下特異性地檢測胞內分枝桿菌。此夕卜，還有使用LAMP(環介導的等溫擴增，Loop-MediatedIsothermalAmplification)法，擴增胞內分枝桿菌的核酸的方法(專利文獻5)。但是，在LAMP法中，存在不能確定所擴增的DNA的鹼基序列、能效率良好地擴增的DNA長度有限、出現假陽性等問題。綜上所述，目前期望確立特異性且迅速地檢測胞內分枝桿菌的方法。專利文獻1:特開平11-69999號公報專利文獻2:日本專利第3111213號公報專利文獻3:特開平10-4984號7>才艮專利文獻4:特開2001-103986號公報專利文獻5:特開2005-204582號^^才艮非專利文獻l:F.Poly等，J.Bacteriology,2004年,186巻(14)，第4781-4795頁
發明內容發明欲解決的課題本發明鑑於如上所述的狀況，目的是提供排除了診斷上的假陽性的新型胞內分枝桿菌檢測用引物，以及使用該引物的簡便、迅速且高精度的胞內分枝桿菌的檢測方法。用於解決i果題的手段本發明的目的是解決上述課題，含有以下構成。(1)寡核苷酸，其含有一部分或全部用序列編號1、序列編號2、序列編號3、序列編號4、序列編號5、序列編號6、序列編號7、或序列編號8表示的鹼基序列(其中A表示腺嘌呤，C表示胞嘧啶，G表示鳥嘌呤，T表示胸腺嗜啶。另外，任意位置的T可以與尿嘧啶(U)置換。下同。)，或者一部分或全部用序列編號1、序列編號2、序列編號3、序列編號4、序列編號5、序列編號6、序列編號7、或序列編號8表示的鹼基序列的互補序列，且與胞內分枝桿菌基因的鹼基序列雜交。(2)胞內分枝桿菌檢測用引物，其含有下述寡核苷酸，所述寡核苷酸含有一部分或全部用序列編號1、序列編號2、序列編號3、序列編號4、序列編號5、序列編號6、序列編號7、或序列編號8表示的鹼基序列，或者一部分或全部用序列編號1、序列編號2、序列編號3、序列編號4、序列編號5、序列編號6、序列編號7、或序列編號8表示的鹼基序列的互補序列，且與胞內分枝桿菌基因的鹼基序列雜交。(3)胞內分枝桿菌檢測用探針，其含有下述寡核苷酸，所述寡核苷酸含有一部分或全部用序列編號1、序列編號2、序列編號3、序列編號4、序列編號5、序列編號6、序列編號7、或序列編號8表示的鹼基序列，或者一部分或全部用序列編號1、序列編號2、序列編號3、序列編號4、序列編號5、序列編號6、序列編號7、或序列編號8表示的鹼基序列的互補序列，且與胞內分枝桿菌基因的鹼基序列雜交。(4)胞內分枝桿菌的檢測方法，其特徵在於，使用下述寡核苷酸作為引物和/或#:針，所述寡核苷酸含有一部分或全部用序列編號1、序列編號2、序列編號3、序列編號4、序列編號5、序列編號6、序列編號7、或序列編號8表示的鹼基序列，或者一部分或全部用序列編號1、序列編號2、序列編號3、序列編號4、序列編號5、序列編號6、序列編號7、或序列編號8表示的鹼基序列的互補序列，且與胞內分枝桿菌基因的鹼基序列雜交。(5)胞內分枝桿菌檢測用試劑盒，其含有下述寡核苷酸作為引物和/或探針，所述寡核苷酸含有一部分或全部用序列編號1、序列編號2、序列編號3、序列編號4、序列編號5、序列編號6、序列編號7、或序列編號8表示的鹼基序列，或者一部分或全部用序列編號1、序列編號2、序列編號3、序列編號4、序列編號5、序列編號6、序列編號7、或序列編號8表示的鹼基序列的互補序列，且與胞內分枝桿菌基因的鹼基序列雜交。本發明者對到目前為止所確定的胞內分枝桿菌和其它生物的各種基結果發現，在通過使用微陣列法的方法所得到的來自胞內分枝桿菌的鹼基序列的片段中，存在與胞內分枝桿菌的基因序列的特定區域特異性地雜交、對胞內分枝桿菌的檢測有用的鹼基序列。於是，以這些認識為基礎進行更深入的研究，結果得到了對胞內分枝桿菌特異性的寡核苷酸(用序列編號1、序列編號2、序列編號3、序列編號4、序列編號5、序列編號6、序列編號7、或序列編號8表示的鹼基序列)，並發現了這些鹼基序列對胞內分枝桿菌的檢測有用。而且，進一步以這些序列為基礎開發了胞內分枝桿菌檢測用引物和探針，最終確立了使用這些引物和探針的胞內分枝桿菌的檢測方法。根據使用本發明的引物或/和探針的胞內分枝桿菌的檢測方法，可以遠比歷來的通過菌的培養檢查等來鑑定菌種的方法迅速且高精度地進行胞內分枝桿菌的檢測。另外，通過以本發明的檢測方法進行胞內分枝桿菌的檢測，與通過使用歷來的引物或/和探針的PCR法的診斷方法比較，可以排除診斷上的假陽性，能夠更高精度且正確、並特異性地進行胞內分枝桿菌的檢測和診斷。進一步地，通過使用本發明的檢測方法，還可以進行胞內分枝桿菌菌體的定量。圖l是候選克隆l的鹼基序列，以及用箭頭顯示作為引物而設計出的鹼基序列的存在位置。圖2是候選克隆2的鹼基序列，以及用箭頭顯示作為引物而設計出的鹼基序列的存在位置。圖3是候選克隆3的鹼基序列，以及用箭頭顯示作為引物而設計出的鹼基序列的存在位置。圖4是候選克隆4的鹼基序列，以及用箭頭顯示作為引物而設計出的鹼基序列的存在位置。圖5是候選克隆5的鹼基序列，以及用箭頭顯示作為引物而設計出的鹼基序列的存在位置。圖6是候選克隆6的鹼基序列，以及用箭頭顯示作為引物而設計出的鹼基序列的存在位置。圖7是候選克隆7的鹼基序列，以及用箭頭顯示作為引物而設計出的鹼基序列的存在位置。圖8是候選克隆8的鹼基序列，以及用箭頭顯示作為引物而設計出的鹼基序列的存在位置。圖9是實施例1得到的、使用引物02—Fwl和引物02—Rvl，使用來自胞內分枝桿菌的DNA樣品作為模板，通過嵌入劑法進行實時PCR，以該實時PCR的結果為基礎而得到的熔解曲線分析的結果。圖10是顯示在實施例2中進行的實時PCR檢測結果，繪製有相對於各PCR用DNA樣品的基因組的拷貝數(x軸，對數值)的Ct值(y軸)的標準曲線。具體實施例方式在本發明中，所謂胞內分枝桿菌基因，是指在胞內分枝桿菌所具有的全基因組序列中的任意鹼基序列單位(區域)。胞內分枝桿菌的全基因組序列尚未解析。作為本發明的寡核苷酸，可以列舉下述寡核苷酸，所述寡核苷酸含有一部分或全部用序列編號1、序列編號2、序列編號3、序列編號4、序列編號5、序列編號6、序列編號7、或序列編號8表示的鹼基序列(其中A表示腺嘌呤，C表示胞嘧啶，G表示鳥嘌呤，T表示胸腺嘧啶。另外，任意位置的T可以與尿嘧啶(U)置換。下同。)，或者一部分或全部用序列編號l、序列編號2、序列編號3、序列編號4、序列編號5、序列編號6、序列編號7、或序列編號8表示的鹼基序列的互補序列，且與胞內分枝桿菌基因的鹼基序列雜交(以下，有時簡稱為"本發明的寡核苷酸"。)。本發明所涉及的由序列編號1表示的鹼基序列組成的寡核苷酸大小為666鹼基，由序列編號2表示的鹼基序列組成的寡核苷酸大小為1128鹼基，由序列編號3表示的鹼基序列組成的寡核苷酸大小為1002鹼基，由序列編號4表示的鹼基序列組成的寡核苷酸大小為747鹼基，由序列編號5表示的鹼基序列組成的寡核苷酸大小為618鹼基，由序列編號6表示的鹼基序列組成的寡核苷酸大小為510鹼基，由序列編號7表示的鹼基序列組成的寡核苷酸大小為1005鹼基，由序列編號8表示的鹼基序列組成的寡核苷酸大小為700鹼基。作為本發明所涉及的含有一部分或全部用序列編號1、序列編號2、序列編號3、序列編號4、序列編號5、序列編號6、序列編號7、或序列編號8表示的鹼基序列的寡核苷酸，可以列舉例如，(l)含有下述鹼基序列的寡核苷酸，所述鹼基序列與用序列編號1、序列編號2、序列編號3、序列編號4、序列編號5、序列編號6、序列編號7、或序列編號8表示的鹼基序列具有約70%以上的同源性，優選具有約80%以上的同源性，更優選具有約卯％以上的同源性，進而優選具有約95%以上的同源性；或者(2)寡核苷酸，其特徵在於，含有用序列編號l、序列編號2、序列編號3、序列編號4、序列編號5、序列編號6、序列編號7、或序列編號8表示的鹼基序列中的連續IO個鹼基以上，優選含有連續15個鹼基以上，更優選含有連續20個鹼基以上。作為本發明所涉及的含有全部用序列編號1、序列編號2、序列編號3、序列編號4、序列編號5、序列編號6、序列編號7、或序列編號8表示的鹼基序列的寡核苷酸的具體例子，可以列舉例如，由用序列編號1、序列編號2、序列編號3、序列編號4、序列編號5、序列編號6、序列編號7、或序列編號8表示的鹼基序列組成的寡核苷酸，或者含有用序列編號1、序列編號2、序列編號3、序列編號4、序列編號5、序列編號6、序列編號7、或序列編號8表示的鹼基序列的寡核苷酸。作為含有一部分用序列編號1、序列編號2、序列編號3、序列編號4、序列編號5、序列編號6、序列編號7、或序列編號8表示的鹼基序列的寡核苷酸的具體例子，可以列舉例如，含有一部分或全部的選自用序列編號9~203表示的鹼基序列的序列的寡核苷酸。優選列舉下述寡核普酸，所述寡核苷酸含有選自用序列編號9~203表示的鹼基序列的序列中的連續10個鹼基以上，優選含有連續15個鹼基以上，更優選含有連續20個鹼基以上。作為含有全部選自用序列編號9~203表示的鹼基序列的序列的寡核苷酸的具體例子，可以列舉由選自用序列編號9~203表示的鹼基序列的序列組成的寡核苷酸，或者含有選自用序列編號9~203表示的鹼基序列的序列的寡核苷酸。作為含有一部分用序列編號1表示的鹼基序列的寡核苷酸的具體例子，可以列舉例如，含有選自用序列編號9~22或序列編號139~145表示的鹼基序列的序列的寡核苷酸。作為含有一部分用序列編號2表示的鹼基序列的寡核苷酸的具體例子，可以列舉例如，含有選自用序列編號23~40或序列編號146~154表示的鹼基序列的序列的寡核苷酸。作為含有一部分用序列編號3表示的鹼基序列的寡核苷酸的具體例子，可以列舉例如，含有選自用序列編號4158或序列編號155~163表示的鹼基序列的序列的寡核苷酸。作為含有一部分用序列編號4表示的鹼基序列的寡核苷酸的具體例子，可以列舉例如，含有選自用序列編號59~78或序列編號164~173表示的鹼基序列的序列的寡核苷酸。作為含有一部分用序列編號5表示的鹼基序列的寡核苷酸的具體例子，可以列舉例如，含有選自用序列編號79~92或序列編號174~180表示的鹼基序列的序列的寡核苷酸。作為含有一部分用序列編號6表示的鹼基序列的寡核苷酸的具體例子，可以列舉例如，含有選自用序列編號93~104或序列編號181~186表示的鹼基序列的序列的寡核苷酸。作為含有一部分用序列編號7表示的鹼基序列的寡核苷酸的具體例子，可以列舉例如，含有選自用序列編號105126或序列編號187~197表示的鹼基序列的序列的寡核苷酸。作為含有一部分用序列編號8表示的鹼基序列的寡核苷酸的具體例子，可以列舉例如，含有選自用序列編號127~138或序列編號198~203表示的鹼基序列的序列的寡核苷酸。作為本發明所涉及的含有一部分或全部用序列編號1、序列編號2、序列編號3、序列編號4、序列編號5、序列編號6、序列編號7、或序列編號8表示的鹼基序列的互補序列的寡核苷酸，可以列舉例如，含有一部分或全部與由用序列編號l、序列編號2、序列編號3、序列編號4、序列編號5、序列編號6、序列編號7、或序列編號8表示的鹼基序列組成的寡核苷酸雜交的鹼基序列的寡核苷酸等。作為上述的本發明的含有一部分或全部與由用序列編號1、序列編號2、序列編號3、序列編號4、序列編號5、序列編號6、序列編號7、或序列編號8表示的鹼基序列組成的寡核苷酸雜交的鹼基序列的寡核苷酸，具體地說，可以列舉具有一部分或全部下述鹼基序列的寡核苷酸等，所述鹼基序列在高嚴格條件或嚴格條件下，與本發明的由用序列編號1、序列編號2、序列編號3、序列編號4、序列編號5、序列編號6、序列編號7、或序列編號8表示的鹼基序列組成的寡核苷酸雜交。此外，這裡所說的所謂"高嚴格條件"，具體地說，是指例如"在50%甲醯胺中，在4270。C,優選在6070。C雜交，然後在0.2~2xSSC、0.1。/。十二烷基硫酸鈉(SDS)中，在2570。C洗滌"這樣的條件。另外，所謂"嚴格條件"，具體地說，是指例如"在6xSSC或鹽濃度與它等同的雜交緩沖液中，在5070。C的溫度條件下，進行雜交16小時，根據需要用6xSSC或鹽濃度與它等同的溶液等進行預洗滌，然後用1xSSC或鹽濃度與它等同的溶液等洗滌"這樣的條件。作為本發明所涉及的含有一部分或全部用序列編號1、序列編號2、序列編號3、序列編號4、序列編號5、序列編號6、序列編號7、或序列編號8表示的鹼基序列的互補序列的寡核苷酸的例子，可以列舉例如，(l)含有下述鹼基序列的寡核普酸，所述鹼基序列與用序列編號1、序列編號2、序列編號3、序列編號4、序列編號5、序列編號6、序列編號7、或序列編號8表示的鹼基序列的互補序列具有約70%以上的同源性，優選具有約80%以上的同源性，更優選具有約90%以上的同源性，進一步優選具有約95%以上的同源性；或者(2)寡核普酸，其特徵在於，含有用序列編號1、序列編號2、序列編號3、序列編號4、序列編號5、序列編號6、序列編號7、或序列編號8表示的鹼基序列的互補序列中的連續IO個鹼基以上，優選含有連續15個鹼基以上，更優選含有連續20個鹼基以上；等等。作為本發明所涉及的含有全部用序列編號1、序列編號2、序列編號3、序列編號4、序列編號5、序列編號6、序列編號7、或序列編號8表示的鹼基序列的互補序列的寡核苷酸的具體例子，可以列舉例如，由用序列編號l、序列編號2、序列編號3、序列編號4、序列編號5、序列編號6、序列編號7、或序列編號8表示的鹼基序列的互補序列組成的寡核苷酸，或者含有用序列編號l、序列編號2、序列編號3、序列編號4、序列編號5、序列編號6、序列編號7、或序列編號8表示的鹼基序列的互補序列的寡核苷酸。作為含有一部分用序列編號1、序列編號2、序列編號3、序列編號4、序列編號5、序列編號6、序列編號7、或序列編號8表示的鹼基序列的互補序列的寡核苷酸的具體例子，可以列舉例如，含有一部分或全部選自用序列編號9~203表示的鹼基序列的序列的互補序列的寡核苷酸。優選列舉下述寡核苷酸，所述寡核苷酸含有選自用序列編號9~203表示的鹼基序列的序列的互補序列中的連續IO個鹼基以上，優選含有連續15個鹼基以上，更優選含有連續20個鹼基以上。作為含有全部選自用序列編號9~203表示的鹼基序列的序列的互補序列的寡核苷酸的具體例子，可以列舉例如，由選自用序列編號9~203表示的鹼基序列的序列的互補序列組成的寡核苷酸，或者含有選自用序列編號9~203表示的鹼基序列的序列的互補序列的寡核苷酸。作為本發明所涉及的與胞內分枝桿菌基因的鹼基序列雜交的寡核苷酸，可以列舉所述的具有在高嚴格條件或嚴格條件下與胞內分枝桿菌基因的鹼基序列雜交的鹼基序列的寡核苷酸等。該高嚴格條件和嚴格條件如上所述。此外，本發明的寡核苷酸既可以是脫氧核糖核酸(DNA)又可以是核糖核酸(RNA)。不言而喻在核糖核酸的情況下將胸腺嘧啶殘基(T)改讀成尿嘧啶殘基(U)。另外本發明的寡核苷酸也可以是在合成時將任意位置的T變成U而進行合成，從而得到的含有尿嘧啶殘基的DNA。同樣可以是將任意位置的U變成T的、含有胸腺嘧啶殘基的RNA。另外，也可以缺失、插入或置換一個或多個核苷酸。一個或多個核苷酸也可以是像次黃嘌呤(I)那樣的修飾核苷酸。作為獲得本發明的寡核苷酸的方法，沒有特別限制，可以列舉例如通過它本身公知的化學合成法來調製的方法。利用該方法，與通過使用載體等的基因操作法得到寡核苷酸或多核苷酸的方法(克隆法)相比，可以容易、大量且廉價地得到一定品質的寡核苷酸。例如在DNA合成中通常進行的，只要使用DNA合成儀，用通常的亞磷醯胺法合成寡核苷酸，通過使用陰離子交換柱層析的常規方法進行純化，就可以得到作為目標的本發明的寡核苷酸。另外，可以將寡核苷酸的合成委託商家，從商家購買。作為尋找(篩選)能完成本發明的目標的寡核苷酸的方法，有在FEMSMicrobiologyLetters166:63-70,1998或者SystematicandAppliedMicrobiology24:109-112，2001等中所顯示的扣除法，即從作為目標的基因組DNA來源的片段群中，消減去與來自想要區別的生物種的基因組DNA的片段群反應的片段群，濃縮候選序列的方法，等等。另外，人們還考慮了製成從作為目標的基因組DNA和來自想要區別的生物種的基因組DNA擴增的產物的差異顯示這樣的方法，即利用隨機引物聚合酶鏈反應(AP-PCR)的方法，等等(特開平11-155589號公報)。進而，通過使用被稱為所謂微陣列法的方法，也可以尋找能完成本發明的目標的寡核苷酸，並可以得到本發明的寡核苷酸。該方法的概略如下。即，例如製成來自胞內分枝桿菌基因組的DNA的鳥槍法克隆，從得到的鳥槍法克隆中純化DNA。接著，用PCR等擴增這些來自鳥槍法克隆的純化DNA，然後配置在載玻片上而製成微陣列。另夕卜，從作為目標的胞內分枝桿菌的基因組DNA製成螢光標記(標記l)的DNA片段群。另一方面，也從來自想要區別的生物種的基因組DNA另外製成螢光標記(標記2)的DNA片段群，進行對照實驗。即，通過將標記1和標記2分別在同一反應體系內使用的竟爭雜交法，來檢驗標記1和標記2的反應性(結合性)。因為通過該檢查，可以選定與作為目標的胞內分枝桿菌的基因組DNA來源的片段(標記l)更特異性地反應的序列候選群(例如非專利文獻1等)，所以由此可以挑選目標的寡核苷酸。以下，對於使用微陣列法的本發明的寡核苷酸的挑選方法的一例進行詳細說明。(1)來自胞內分枝桿菌的純化基因組DNA的調製首先，將胞內分枝桿菌菌林用常規方法(例如使用高壓釜處理和玻璃珠等的菌體破碎處理)進行破碎處理，然後可以按照常規方法進行DNA的提取、純化。(2)全基因組鳥槍法文庫(WholeGenomeShotgunlibrary)的製作作為胞內分枝桿菌的全基因組鳥槍法文庫的製作方法的一例，以下說明將Venter等，Science,2001年2月16日，291(5507):第1304-1351頁所記載的全基因組鳥槍法進行了改變的方法。首先，將在所述(l)中獲得的來自胞內分枝桿菌的純化基因組DNA用適當的緩沖液等稀釋，然後例如在終濃度20%的甘油存在下，在5kPa9kPa的壓力下，使用霧化器處理約1~5分鐘，進行DNA的片段化處理。通過該處理方法，可以效率良好地回收作為目的的大小為500~1000鹼基對的組分。使用市售的提取柱純化得到的組分。然後，將獲得的組分(DNA片段。含有目的DNA片段)按照常規方法通過連接重組到載體DNA中，得到重組DNA(胞內分枝桿菌的全基因組鳥槍法文庫)。作為用於該重組的載體DNA，在之後的轉化宿主細胞是大腸桿菌的情況下，可以列舉例如，pBS[例如pBSlIsk+載體(Stratagene^>司)、pQE-TRI質粒(Qiagen公司製造)、pBluescript、pET、pGEM-3Z、pGEX等載體。根據使用的栽體的種類，在連接之前，可以預先將DNA片段用DNA聚合酶處理，將DNA片段的末端進行平端化處理。接著，使用得到的重組DNA轉化適當的宿主細胞，得到轉化體。作為用於該轉化的宿主細胞，可以列舉例如大腸桿菌(E.coli),優選列舉JM109、DH5a、TOP10等。此外，可以使用質粒、噬菌體DNA的導入效率更高的感受態細胞(CompetentCell)。可以列舉例如大腸桿菌JM109感受態細胞(TakaraBio公司製造)等。專爭4匕可以通過例長口D.M.Morrison的方法(MethodinEnzymology,68巻，第326-331頁，1979年)等來進行。另外，在使用市售的感受態細胞的情況下，可以根據該製品說明書進行轉化。為了選擇導入了重組有目的DNA片段的重組DNA的轉化體，可以通過利用用於轉化的載體的性質的方法來進行。例如在使用帶有氨苄青黴素抗性基因的載體的情況下，在含有氨千青黴素的培養基上培養轉化體，通過選擇所得到的克隆，可以容易地得到導入了重組有目的DNA片段的重組DNA的轉化體(胞內分枝桿菌的基因組來源的全基因組鳥槍法克隆文庫)。(3)微陣列製作接著，用下述的方法製作微陣列。即，按照常規方法從在上述(2)中獲得的轉化體(胞內分枝桿菌的基因組來源的全基因組鳥槍法克隆文庫)中純化DNA。使用純化的DNA作為模板，使用適當的引物[可以是市售的引物。例如M13PrimerMl(TakaraBio公司製造)和M13PrimerRV(TakaraBio公司製造)等]，按照常規方法進行PCR，然後純化得到的PCR擴增產物。接著按照常規方法，將純化的PCR擴增產物在微陣列用載玻片上點樣。通過對此進行UV照射(60mJ/cm2300mJ/cm2，通常150mJ/cm2),將PCR擴增產物(含有目標的來自胞內分枝桿菌的DNA)固定在載玻片上，從而製作微陣列。此外，根據需要也製作對照的微陣列。使用例如rpsl(專利文獻l)等對胞內分枝桿菌特異性的序列的DNA片段、來自想要區別的生物種的基因組DNA片段[結核菌特有的插入序列IS6110的部分序列(IS6110元件)、KATS2序列(特開平11-155589號公報)等對堪薩斯分枝桿菌特異性的鹼基序列的DNA片段，MAV19K(專利文獻l)等對鳥分枝桿菌特異性的鹼基序列的DNA片段等，以及例如大腸桿菌DNA等來自分枝桿菌屬之外的菌的DNA等]，分別同樣地進行從DNA片段化到製成全基因組鳥槍法克隆文庫的一系列處理，同樣地進行PCR，將得到的PCR產物固定在載玻片上，也製作各自的微陣列。此外，對於對照的微陣列，在設定了某個微陣列作為陽性對照的情況下，作為在之後進行的微陣列雜交中使用的Cy3標記對照用基因組DNA，使用將來自與該陽性對照的來源菌體相同的菌體的基因組DNA進行了Cy3標記的基因組DNA。例如，在使用堪薩斯分枝桿菌特異性的鹼基序列的DNA片段製作微陣列，並將它設定為陽性對照的情況下，作為一種在微陣列雜交中使用的Cy3標記對照用基因組DNA，使用將從堪薩斯分枝桿菌中分離、純化的基因組DNA用Cy3標記的標記產物。另外，在設定了某個微陣列作為陰性對照的情況下，在之後進行的微陣列雜交中，既不使用與該陰性對照的來源菌體相同來源的菌體基因組DNA的Cy3標記產物，也不使用該基因組DNA的Cy5標記產物。(4)目標基因組DNA的螢光色素標記i)目標基因組DNA的螢光色素標記通過使用己基氨基-UTP的間接標記法，將利用常規方法從胞內分枝桿菌菌林中提取、純化的基因組DNA用Cy5標記。另外，將從所述微陣列的陽性對照的來源菌體提取、純化的對照用基因組DNA用Cy3標記。例如以將DeRisi研究室(www.microarrays.com)所發表的方案進行了改變的間接標記法為例進行說明。該方法是使用具有氨基的aUTP，通過酶延伸反應製成分子內摻入有該aUTP的DNA鏈。而且，通過使其氨基上化學結合螢光色素(琥珀醯亞胺體)從而將DNA標記。首先，按照常規方法將初始材料(胞內分枝桿菌的基因組DNA、和對照用基因組DNA)進行熱變性處理。接著，在熱變性處理物中添加2nL的DTT、dATP/dCTP/dGTP的混合液、dTTP、Ha-dUTP、克列諾酶，在37。C進行3小時左右的延伸反應。將得到的反應產物上超濾柱，以14000轉/分鐘離心4分鐘左右，然後將濃縮液回收到微型管中，使用真空乾燥離心機等使之完全乾燥。接下來，在乾燥了的上述反應產物中加入NaHC03混合，常溫靜置23分鐘。另外，調製將Cy3(或Cy5)溶解到DMSO中的溶液(Cy-dyeSolutionCy3、Cy-dyeSolutionCy5)。在使用對照用基因組DNA而得到的上述反應產物中加入該Cy-dyeSolutionCy3，另外在使用胞內分枝桿菌而得到的上述反應產物中加入Cy-dyeSolutionCy5，分別在40。C避光孵育60分鐘左右。進而，向各個反應產物中加入4MNH2OH，攪拌後避光孵育15分鐘左右，得到各個基因組來源DNA的標記產物。然後，將得到的標記產物上超濾柱，以14000轉/分鐘離心4分鐘左右，然後將濃縮液回收到微型管中，用真空乾燥離心枳W吏之完全乾燥。ii)標記產物的片段化工序對在所述(4)i)中得到的乾燥狀態的各基因組來源的DNA片段的標記產物，調製其組成為終濃度為0.04MTris-乙酸(pH8.1)、0.1M乙酸鉀、0.03M四水合乙酸鎂的溶液，在該溶液中懸浮混合乾燥狀態的基因組來源的DNA片段的標記產物。在94。C加熱處理15分鐘，得到100鹼基~300鹼基的基因組來源DNA片段的標記產物(Cy3標記產物、Cy5標記產物)。將得到的Cy3標記產物與Cy5標記產物混合後，上超濾柱，以14000轉/分鐘離心4分鐘左右，然後將濃縮液回收到微型管中，用真空乾燥離心機使之完全乾燥。接著，在該微型管中，加入含有0.5jiL的鮭魚精DNA(10mg/mL)、5pL的曱醯胺，並用ArrayHybHybridizationBuffer(SIGMA公司製造)將總量調整為40~50jiL的試劑溶液(是當後面使用的微陣列的蓋玻片大小為24x55mm時的組成)，將上述得到的乾燥物在相同溶液中懸浮混合後，在95。C孵育5分鐘左右，調製Cy3Cy5標記產物混合溶液。(5)微陣列雜交(在陣列上的DNA-DNA雜交)在所述(3)的工序中得到的微陣列(DNA晶片)上，將在上述(4)ii)中調製的Cy3Cy5標記產物混合溶液上樣，蓋上蓋玻片。將此放入雜交箱後，在65。C避光反應8小時以上，來進行雜交。雜交後，在室溫下將微陣列連同蓋玻片浸泡在2xSSC-0.1。/。SDS溶液中，將蓋玻片脫離。依次用lxSSC、0.03%SDS溶液(60。C)洗滌10分鐘，用0.2xSSC溶液(42。C)洗滌10分鐘，用0.05xSSC溶液(室溫)洗滌10分鐘，然後以800轉/分鐘進行離心約5分鐘而使之乾燥。(6)螢光強度的測定從信號檢測到量化使用螢光讀取掃描儀，測定在上述(5)中得到的經微陣列雜交處理的微陣列上的焚光強度。這時，測定在Cy3和Cy5的2信道的螢光強度。得到焚光檢測數據。對螢光信號的量化可以使用市售的DNA晶片表達圖像解析軟體等，按照軟體的操作程序，進行斑點自動識別、背景計算、螢光強度比的標準化。在雜交中所使用的Cy5標記產物是將來自胞內分枝桿菌的基因組DNA作為材料進行了標記的DNA片段群，Cy3標記產物是將對照用基因組DNA作為材料進行了標記的DNA片段群。因此，測定了微陣列上的某個斑點的Cy3與Cy5的各自螢光強度，其結果是，在檢測到Cy5的螢光較強的情況下，意味著該斑點的DNA片段(PCR產物)與Cy5標記產物，即來自胞內分枝桿菌的基因組DNA的特定序列更強地進行了雜交，可以判斷DNA片段(PCR產物)對胞內分枝桿菌的特異性高。另一方面，在對於某個斑點檢測到Cy3的螢光比Cy5強的情況下，意味著該斑點的DNA片段(PCR產物)與Cy3標記產物，即對照用基因組DNA進行了雜交，可以判斷DNA判斷(PCR產物)對胞內分枝桿菌的特異性低。另夕卜，在Cy3和Cy5的螢光強度程度相同的情況，和檢測不到Cy3和Cy5的任何一種的螢光的情況下，可以判斷該斑點的DNA片段(PCR產物)對胞內分枝桿菌的特異性低。於是，以例如在微陣列上檢測到的Cy3/Cy5的螢光強度比(Ratio)為基礎，進行例如製成散點圖(Scatterplot)等，並分析結果，從而進行用於胞內分枝桿菌特異性序列的檢測的篩選。在分析中，使用的陽性對照序列中對胞內分枝桿菌特異性的DNA的Cy3/Cy5螢光強度比的數值成為用於特異性評價有用的基準值。此外，在微陣列上點樣有陽性對照和陰性對照的情況下，只要測定分別的Cy3Cy5焚光強度，觀察其螢光強度的傾向，就可以作為螢光掃描測定中的1個數據評價基準來使用。從進行了篩選的候選中，選擇得到Cy3/Cy5螢光強度比的數值分析的結果顯著地為胞內分枝桿菌特異性信號(Cy5的螢光強度較強的情況)，並且與上述的對胞內分枝桿菌特異性的陽性對照的斑點相比螢光強度比數值較大(Cy5的螢光強度較強)的克隆。接著，可以使用通常在該領域中使用的測序儀，例如ABIPRISM310毛細管測序儀(AppliedBio公司)等儀器，按照常規方法，進行得到的候選克隆的鹼基序列確定。此外，為了從所選擇的克隆中，進而篩選用於胞內分枝桿菌特異性檢測的候選序列，可以例如通過實時PCR法進行二次篩選。即，對於按上述的Cy3/Cy5螢光強度比的數值分析的結果所選擇的候選克隆，進行鹼基序列確定。對於各個候選克隆，以得到的鹼基序列為基礎，使用例如一般用於引物設計的軟體、例如引物設計用Web工具Primer3(WhiteheadInstituteforBiomedicalResearch.)等，分別設計PCR用的適當引物。從所設計的引物中選擇適當的組合，使用該組合的引物，以來自胞內分枝桿菌的基因組DNA為模板，按照常規方法進行實時PCR。另外，以來自分枝桿菌屬的適當菌體的基因組DNA、如果需要進而以來自大腸桿菌等的分枝桿菌屬之外的菌體的基因組DNA等(對照)為模板，同樣地進行實時PCR。其結果是，選擇在使用來自胞內分枝桿菌的基因組DNA作為模板的實時PCR中得到擴增產物、在使用來自其它菌體的基因組DNA(對照)作為模板的實時PCR中得不到擴增產物的引物組合。而且，可以選#^殳計出了該引物組合的候選克隆作為最終的對胞內分枝桿菌特異性的候選克隆。作為本發明的胞內分枝桿菌檢測用引物，可以列舉含有下述寡核苷酸的引物(以下，有時記為本發明的引物)，所述寡核苷酸含有一部分或全部用序列編號1、序列編號2、序列編號3、序列編號4、序列編號5、序列編號6、序列編號7、或序列編號8表示的鹼基序列，或者一部分或全部用序列編號1、序列編號2、序列編號3、序列編號4、序列編號5、序列編號6、序列編號7、或序列編號8表示的鹼基序列的互補序列，且與胞內分枝桿菌基因的鹼基序列雜交。另夕卜，本發明的引物適合PCR(包括實時PCR)等核酸擴增反應、核酸雜交等的條件，可以考慮解鏈溫度(Tm值)等，從含有一部分或全部用序列編號l、序列編號2、序列編號3、序列編號4、序列編號5、序列編號6、序列編號7、或序列編號8表示的鹼基序列的寡核苷酸，或者含有一部分或全部用序列編號l、序列編號2、序列編號3、序列編號4、序列編號5、序列編號6、序列編號7、或序列編號8表示的鹼基序列的互補序列的寡核苷酸中，選擇適當區域的適當長度來使用。優選地，具有10~50鹼基的長度的寡核苷酸，該長度被認為是為了維持作為引物序列的特異性而必需的鹼基數，更優選具有10~35鹼基長度的核苷酸，進一步優選具有18~25鹼基的長度的核苷酸。引物的設計方法可以使用一般用於$1物設計的軟體、例如《1物設計用Web工具Primer3(WhiteheadInstituteforBiomedicalResearch.)等來設計。在本發明的引物中使用的，含有一部分或全部用序列編號1、序列編號2、序列編號3、序列編號4、序列編號5、序列編號6、序列編號7、或序列編號8表示的鹼基序列，或者一部分或全部用序列編號1、序列編號2、序列編號3、序列編號4、序列編號5、序列編號6、序列編號7、或序列編號8表示的鹼基序列的互補序列，且與胞內分枝桿菌基因的鹼基序列雜交的寡核苷酸(本發明的寡核苷酸)的具體例子，與所述的本發明的寡核苷酸的說明中所記載的寡核苷酸相同。作為本發明的引物的具體例子，可以列舉例如，含有一部分或全部選自用序列編號9~138表示的鹼基序列的序列、且與胞內分枝桿菌基因的鹼基序列雜交的寡核苷酸，或者含有一部分或全部選自用序列編號9~138表示的鹼基序列的序列的互補序列、且與胞內分枝桿菌基因的鹼基序列雜交的寡核苷酸。作為本發明的引物的優選的具體例子，可以列舉，含有選自用序列編號9138表示的鹼基序列的序列、且與胞內分枝桿菌基因的鹼基序列雜交的寡核苷酸，或者含有選自用序列編號9~138表示的鹼基序列的序列的互補序列、且與胞內分枝桿菌基因的鹼基序列雜交的寡核苷酸。作為更優選的引物，可以列舉例如，含有選自用序列編號9、10、23、24、41、42、59、60、79、80、93、94、105、106、127、128表示的鹼基序列的序列的寡核苷酸，或者含有選自用序列編號9、10、23、24、41、42、59、60、79、80、93、94、105、106、127、128表示的鹼基序列的序列的互補序列的寡核苷酸。此外，含有用序列編號922表示的鹼基序列的引物，是以用序列編號1表示的鹼基序列為基礎而設計的。含有用序列編號23~40表示的鹼基序列的引物，是以用序列編號2表示的鹼基序列為基礎而設計的。含有用序列編號41~58表示的鹼基序列的引物，是以用序列編號3表示的鹼基序列為基礎而設計的。含有用序列編號59~78表示的鹼基序列的引物，是以用序列編號4表示的鹼基序列為基礎而設計的。含有用序列編號79~92表示的鹼基序列的引物，是以用序列編號5表示的鹼基序列為基礎而設計的。含有用序列編號93~104表示的鹼基序列的引物，是以用序列編號6表示的鹼基序列為基礎而設計的。含有用序列編號105126表示的鹼基序列的引物，是以用序列編號7表示的鹼基序列為基礎而設計的。含有用序列編號127~138表示的鹼基序列的引物，是以用序列編號8表示的鹼基序列為基礎而設計的。在圖1中，將作為引物而設計出的用序列編號9和序列編號10表示的鹼基序列在用序列編號1表示的鹼基序列上的存在位置，作為02—Fwl和02一Rvl，分別用箭頭表示。在圖2中，將作為引物而設計出的用序列編號23和序列編號24表示的鹼基序列在用序列編號2表示的鹼基序列上的存在位置，作為03—Fwl和03一Rvl，分別用箭頭表示。在圖3中，將作為引物而設計出的用序列編號41和序列編號42表示的鹼基序列在用序列編號3表示的鹼基序列上的存在位置，作為04—Fw2和04一Rv2，分別用箭頭表示。在圖4中，將作為引物而設計出的用序列編號59和序列編號60表示的鹼基序列在用序列編號4表示的鹼基序列上的存在位置，作為06—Fwl和06一Rvl,分別用箭頭表示。在圖5中，將作為引物而設計出的用序列編號79和序列編號80表示的鹼基序列在用序列編號5表示的鹼基序列上的存在位置，作為10—Fwl和10—Rvl，分別用箭頭表示。在圖6中，將作為引物而設計出的用序列編號93和序列編號94表示的鹼基序列在用序列編號6表示的鹼基序列上的存在位置，作為13_Fw2和L^Rv2,分別用箭頭表示。在圖7中，將作為引物而設計出的用序列編號105和序列編號106表示的鹼基序列在用序列編號7表示的鹼基序列上的存在位置，作為14一Fwl和14一Rvl，分別用箭頭表示。在圖8中，將作為引物而設計出的用序列編號127和序列編號128表示的鹼基序列在用序列編號8表示的鹼基序列上的存在位置，作為15_Fw2和15_1^2，分別用箭頭表示。另夕卜，作為引物而設計出的用序列編號11~22表示的鹼基序列在用序列編號l表示的鹼基序列上的存在位置，分別如下。序列編號11(02—Fw2):415位~434位，序列編號12(02_Fw3):91位~110位，序列編號13(02—Fw4):272位~290位，序列編號14(02—Fw5):245位~264位，序列編號15(02—Fw6):41位~61位，序列編號16(02—Fw7):423位~442位，序列編號17(02—Rv2):563位~582位，序列編號18(02—Rv3):294位~313位，序列編號19(02—Rv4):447位~466位，序列編號20(02—Rv5):373位~392位，序列編號21(02—Rv6):175位~194位，序列編號22(02—Rv7):641位~659位。作為引物而設計出的用序列編號25~40表示的鹼基序列在用序列編號2表示的鹼基序列上的存在位置，分別如下。序列編號25(03—Fw2):18位~35位，序列編號26(03—Fw3):111位~128位，序列編號27(03_Fw4):229位~248位，序列編號28(03—Fw5):412位~430位，序列編號29(03—Fw6).580位~599位，序列編號30(03一Fw7).776位~796位，序列編號31(03—Fw8):873位~8卯位，序列編號32(03_Fw9):911位~930位，序列編號33(03—Rv2):158位~175位，序列編號34(03—Rv3):288位~306位，序列編號35(03—Rv4):362位~381位，序列編號36(03—Rv5):542位~561位，序列編號37(03—Rv6)700位~719位，序列編號38(03—Rv7)955位~972位，序列編號39(03—Rv8)1040位~1059位，序列編號40(03—Rv9)1075位~1093位。作為引物而"i殳計出的用序列編號43~58表示的鹼基序列在用序列編號3表示的鹼基序列上的存在位置，分別如下。序列編號43(04—Fw3):4位~21位，序列編號44(04—Fw4):217位~235位，序列編號45(04—Fw5):423位~440位，序列編號46(04Fw6):476位~494位，序列編號47(04_Fw7):658位~675位，序列編號48(04—Fw8):709位~728位，序列編號49(04—Fw9):772位~789位，序列編號50(04_FwlO):803位~822位，序列編號51(04—Rv3):134位~152位，序列編號52(04—Rv4):367位~384位，序列編號53(04—Rv5):560位~579位，序列編號54(04—Rv6):605位~622位，序列編號55(04_Rv7):801位~820位，序列編號56(04—Rv8):845位~862位，序列編號57(04—Rv9):899位~916位，序列編號58(04—RvlO):955位~972位。作為引物而設計出的用序列編號61~78表示的鹼基序列在用序列編號4表示的鹼基序列上的存在位置，分別如下。序列編號61(06—Fw2):153位~172位，序列編號62(06—Fw3):1位19位，序列編號63(06—Fw4):32位~49位，序列編號64(06—Fw5):268位~285位，序列編號65(06—Fw6):376位~395位，序列編號66(06—Fw7):445位~462位，序列編號67(06一Fw8):492位~509位，序列編號68(06—Fw9):556位~574位，序列編號69(06—FwlO):581位~600位，序列編號70(06—Rv2):282位~301位，序列編號71(06—Rv3):100位~119位，序列編號72(06—Rv4):184位~203位，序列編號73(06—Rv5):386位~405位，序列編號74(06—Rv6):516位~534位，序列編號75(06—Rv7):575位~594位，序列編號76(06—Rv8):656位~675位，序列編號77(06—Rv9):686位~705位，序列編號78(06—RvlO):703位~720位。作為引物而設計出的用序列編號81~92表示的鹼基序列在用序列編號5表示的鹼基序列上的存在位置，分別如下。序列編號81(10—Fw2):388位~407位，序列編號82(10—Fw3):2位~19位，序列編號83(10—Fw4):122位~141位，序列編號84(10—Fw5):207位~226位，序列編號85(10—Fw6):298位~318位，序列編號86(10—Fw7):459位~478位，序列編號87(10—Rv2):541位~560位，序列編號88(10—Rv3):150位169位，序列編號89(10—Rv4):276位~294位，序列編號90(10—Rv5):370位~389位，序列編號91(10—Rv6):453位~472位，序列編號92(10—Rv7):593位~610位。作為引物而設計出的用序列編號95~104表示的鹼基序列在用序列編號6表示的鹼基序列上的存在位置，分別如下。序列編號95(13—Fw3):56位~75位，序列編號96(13—Fw4):129位~148位，序列編號97(13—Fw5):200位~219位，序列編號98(13—Fw6):333位~352位，序列編號99(13—Fw7):286位~305位，序列編號100(13—Rv3):225位~244位，序列編號101(13—Rv4):242位~261位，序列編號102(13—Rv5):325位~343位，序列編號103(13—Rv6):481位~500位，序列編號104(13Rv7):416位~435位。作為引物而i殳計出的用序列編號107~126表示的鹼基序列在用序列編號7表示的鹼基序列上的存在位置，分別如下。序列編號107(14—Fw3):11位~29位，序列編號108(14—Fw4):73位~92位，序列編號109(14—Fw5):201位~220位，序列編號110(14—Fw6):413位~431位，序列編號111(14—Fw7):519位~538位，序列編號112(14—Fw8):657位~674位，序列編號113(14—Fw9):596位~613位，序列編號114(14_FwlO):618位~635位，序列編號115(14_Fwll):864位~883位，序列編號116(14_Fwl2):806位~824位，序列編號117(14—Rv3):158位177位，序列編號118(14—Rv4):208位~227位，序列編號119(14—Rv5):337位~356位，序列編號120(14—Rv6):548位~565位，序列編號121(14—Rv7):669位~688位，序列編號122(14—Rv8):782位~800位，序列編號123(14—Rv9):721位~740位，序列編號124(14_RvlO):755位~773位，序列編號125(14—Rvll):978位~997位，序列編號126(14_Rvl2):967位~986位。作為引物而設計出的用序列編號129~138表示的鹼基序列在用序列編號8表示的鹼基序列上的存在位置，分別如下。序列編號129(15—Fw3):28位~45位，序列編號130(15—Fw4):64位~82位，序列編號131(15_Fw5):m位~148位，序列編號132(15_Fw6):348位~366位，序列編號133(15—Fw7):462位~481位，序列編號134(15_Rv3):182位'~200位，序列編號135(15—Rv4):197位'~215位，序列編號136(15_Rv5):270位~287位，序列編號137(15一Rv6):451位~470位，序列編號138(15—Rv7):619位~636位。此外，在上述中，各序列編號之後的內表示在本發明中所命名的引物的名稱。得到本發明的引物的方法，如在所述的得到本發明的核苷酸的方法中所記載。此外，本發明的引物可以用標記物質標記。作為標記本發明的引物的方法，可以列舉在該領域內通常進行的寡核苷酸的標記方法，可以根據每種標記物質選擇適當方法。作為用於以標記物質標記本發明的引物的標記物質，只要是放射性同位素、酶、螢光物質、發光物質、生物素等公知的標記物質，可以使用任一種。例如，作為放射性同位素可以列舉"P、33P、"s等，作為酶可以列舉鹼性磷酸酶、辣根過氧化物酶等，作為螢光物質可以列舉花菁染料(CyanineDye)系的Cy3和Cy5(AmershamBiosciences乂/^司)、焚光素等，作為發光物質可以列舉含有吖啶酯(AcridiniumEster)的化學發光試劑等。作為用放射性同位素標記本發明的引物的方法，可以列舉通過在合成《1物時摻入用放射性同位素標記了的核普酸來標記引物的方法、及在合成了引物之後用放射性同位素標記的方法等。具體地說，可以列舉，一般經常使用的隨機引物法、缺口平移法、通過T4多核苷酸激酶的5，-末端標記法、使用末端脫氧核苷酸轉移酶的3，-末端標記法、RNA標記法等。作為用酶標記本發明的引物的方法，可以列舉，使鹼性磷酸酶、辣根法的直接標記法。作為用螢光物質標記本發明的引物的方法，例如可以用該領域常規方法的標記方法使經螢光素標記的核苷酸摻入引物。另外，利用將具有連接臂(linkerarm)的核苷酸作為序列的寡核苷酸的一員進行置換的方法(例如，參考MucleicAcidsRes.，1986年，第14巻，第6115頁)，也可以用焚光物質標記核苷酸。這種情況下，還有利用特開昭60-500717號公報所公開的合成方法，從脫氧尿嘧啶化學合成第5位具有連接臂的尿嘧啶，然後將焚光物質導入上述寡核苷酸鏈的方法。為了用發光物質或生物素標記本發明的引物，可以按照在該領域內通常進行的將寡核苷酸發光標記或螢光標記的常規方法來進行。作為本發明的胞內分枝桿菌檢測用探針，可以列舉含有下述寡核苷酸的探針(以下，有時記為本發明的探針)，所述寡核苷酸含有一部分或全部用序列編號l、序列編號2、序列編號3、序列編號4、序列編號5、序列編號6、序列編號7、或序列編號8表示的鹼基序列，或者含有一部分或全部用序列編號l、序列編號2、序列編號3、序列編號4、序列編號5、序列編號6、序列編號7、或序列編號8表示的鹼基序列的互補序列，且與胞內分枝桿菌基因的鹼基序列雜交。本發明的探針適合PCR(包括實時PCR)等核酸擴增反應、核酸雜交等的條件，可以考慮解鏈溫度(Tm值)等，從含有一部分或全部用序列編號1、序列編號2、序列編號3、序列編號4、序列編號5、序列編號6、序列編號7、或序列編號8表示的鹼基序列的寡核苷酸，或者含有一部分或全部用序列編號1、序列編號2、序列編號3、序列編號4、序列編號5、序列編號6、序列編號7、或序列編號8表示的鹼基序列的互補序列的寡核苷酸中，選擇適當區域的適當長度來使用。但是，如果希望探針具有充分的特計。，、；、、、土'例如，作為在核酸雜交法(例如DNA雜交)等中使用的探針，可以列舉具有10~700鹼基長度的探針，優選具有100~600鹼基長度的探針，更優選具有100~500鹼基長度的探針，進一步優選具有200~500鹼基長度的探針。例如，作為在實時PCR擴增體系(例如TaqManTM法、分子信標法等)等中使用的探針，可以列舉具有10~50鹼基長度的探針，優選具有15~40鹼基長度的探針，更優選具有20~30鹼基長度的探針。在本發明的探針中使用的，含有一部分或全部用序列編號1、序列編號2、序列編號3、序列編號4、序列編號5、序列編號6、序列編號7、或序列編號8表示的鹼基序列，或者一部分或全部用序列編號1、序列編號2、序列編號3、序列編號4、序列編號5、序列編號6、序列編號7、或序列編號8表示的鹼基序列的互補序列，且與胞內分枝桿菌基因的鹼基序列雜交的寡核苷酸(本發明的寡核苷酸)的具體例子，與前述的本發明的寡核苷酸的說明中所記栽的寡核苷酸相同。作為本發明的探針的具體例子，可以列舉例如下述探針，所述探針選自含有下述寡核苷酸的探針，所述寡核苷酸含有一部分或全部選自用序列編號9~203表示的鹼基序列的序列，或者一部分或全部選自用序列編號9~203表示的鹼基序列的序列的互#卜序列，且與胞內分枝桿菌基因的鹼基序列雜交。作為本發明的探針的優選的具體例子，可以列舉，含有選自用序列編號9~203表示的鹼基序列的序列的探針，或者含有選自用序列編號9~203表示的鹼基序列的序列的互補序列的探針。其中可以列舉，含有選自用序列編號139~203表示的鹼基序列的序列的探針，或者含有選自用序列編號139~203表示的鹼基序列的序列的互補序列的探針。作為特別優選的探針，可以列舉，含有選自用序列編號139、146、155、164、174、181、187、198表示的鹼基序列的序列的探針，或者含有選自用序列編號139、146、155、164、174、181、187、198表示的鹼基序列的序列的互補序列的探針。此外，用序列編號139~203表示的鹼基序列或用序列編號139~203表示的鹼基序列的互補序列，是通過使用本發明引物的PCR所擴增的寡核苷酸的鹼基序列。將正向引物與反向引物的組合，以及通過使用該組合的PCR所擴增的鹼基序列的序列編號在表1中合併顯示。例如顯示，用序列編號139表示的鹼基序列，是被使用了用序列編號9表示的鹼基序列的寡核苷酸作為正向引物、用序列編號10表示的鹼基序列的寡核苷酸作為反向引物的PCR所擴增的寡核苷酸的鹼基序列。表1tableseeoriginaldocumentpage36得到本發明的探針的方法，如在前述的得到本發明的核苷酸的方法中戶斤"i己栽。本發明的探針可以用標記物質標記。作為用於以標記物質標記本發明的探針的標記物質，只要是放射性同位素、酶、螢光物質、發光物質、生物素等公知的標記物質，可以使用任一種。用於標記本發明的探針的標記物質的具體例子和標記方法，如在本發明的引物的標記方法的說明中所記載。另夕卜，作為在後述的通過實時PCR的檢測法中使用的標記探針，可以列舉用在實時PCR法中通常使用的標記物質標記本發明的探針的標記探針。可以列舉例如，5'末端用報告螢光物質[羧基螢光素(FAM)、六氯螢光素(HEX)、四氯螢光素(TET)等標記了的，3'末端用猝滅色素[例如羧基四甲基羅丹明(TAMRA)等螢光物質，BlackHoleQuencher色素(BHQ)、4-((4-(二甲基氨基)苯基)偶氮)苯甲酸(DABCYL)等非螢光物質]標記了的本發明的探針。在後述的通過TaqManTM實時PCR的檢測法中，也可以使用上述的標記t笨針。作為本發明所涉及的在胞內分枝桿菌的檢測中使用的樣品(被檢樣品)，可以列舉痰、血液、咽部粘液、胃液、支氣管灌洗液、經支氣管採集物、胸水等的穿刺液、尿、膿等各種臨床材料。另外，還可以是從檢測體被分離、培養的培養菌體，以及從這些培養菌體中被分離、純化出的核酸，或者用核酸擴增檢測體系等所擴增的核酸。為了從上述樣品提取、純化DNA，可以按照在來自檢測體的抗酸菌(結核菌)的DNA提取中使用的常規方法來進行。首先，需要石皮壞樣品中的菌體的細胞壁。作為其方法，例如在以菌體為樣品的情形時，可以使用例如，用SDS等表面活性劑、硫氰酸胍(GTC)等蛋白變性劑處理菌體從而破壞結核菌等抗酸菌的膜結構的方法，及用玻璃珠等物理性地石皮壞菌體的方法，等等。在以痰為檢測體的情況下，優選地首先作為前處理，通過美國疾病管理預防控制中心(CentersforDiseaseControlandPrevention,簡稱CDC)所推薦的NALC(N-乙醯-L-半胱氨酸)-NaOH法(KentPT，KubicaGP，PubricHealthMycobacteriology,AGuidefortheLevelIIILaboratory,U.S.DepartmentofHealthandHumanServices,PublicHealthService,CenterforDiseaseControl,Atlanta,U.S.A.，1985年，第31-55頁)來進行檢測體的均勻化。在破壞了菌體的細胞壁之後，可以通過該領域一般的DNA調製法(酚/氯仿提取、乙醇沉澱法等，Rapidandsimplemethodforpurificationofnucleicacids,J.Clin.Microbiol"1990年3月，第28巻(3)，第495-503頁，BoomR,SolCJ，SalimansMM,JansenCL，Wertheim畫vanDillenPM，vanderNoordaaJ)、使用異丙醇使DNA沉澱的方法等，來進行DNA的提取和純化。以使用從檢測體被分離、培養的培養菌體作為檢測胞內分枝桿菌的樣品的情況為例來顯示時，如下所述。例如，挑取小川培養基上的菌落，懸浮在滅菌蒸餾水中，離心分離而收集菌體，然後再次懸浮在蒸餾水中，在高壓釜處理之後，經過菌體的粉碎處理(通過玻璃珠的物理性破碎等)，再離心分離回收上清。可以從所得到的上清中提取、純化DNA。因為對於DNA的提取、純化，市售有用於此的各種試劑盒，所以既可以使用這些試劑盒，也可以按照該領域中的常規方法(例如，酚/氯仿提取法、使用乙醇或異丙醇等使DNA沉澱的方法等)來進行。例如，可以使用Qiagen公司製造的離子交換樹脂型DNA提取純化試劑盒Genomic-tip等來進行DNA的提取、純化。作為本發明所涉及的胞內分枝桿菌的檢測方法，可以列舉使用下述寡述寡核苦酸含有一部分或全部用序列編號1、序列編號2、序列編號3、序列編號4、序列編號5、序列編號6、序列編號7、或序列編號8表示的鹼基序列，或者一部分或全部用序列編號1、序列編號2、序列編號3、序列編號4、序列編號5、序列編號6、序列編號7、或序列編號8表示的鹼基序列的互補序列，且與胞內分枝桿菌基因的鹼基序列雜交。可以列舉例3。，(A)使用下述寡核苷酸(本發明的寡核苷酸)作為引物進行核酸擴增反應，檢測所得到的引物延伸產物的方法，所述寡核苷酸含有一部分或全部用序列編號l、序列編號2、序列編號3、序列編號4、序列編號5、序列編號6、序列編號7、或序列編號8表示的鹼基序列，或者一部分或全部用序列編號l、序列編號2、序列編號3、序列編號4、序列編號5、序列編號6、序列編號7、或序列編號8表示的鹼基序列的互補序列，且與胞內分枝桿菌基因的鹼基序列雜交。(B)使用以標記物質將本發明的寡核苷酸進行了標記的寡核苷酸作為標記探針的方法，等等。以下，對於各個方法進行說明。(A)使用本發明的寡核苷酸作為引物來進行核酸擴增反應，檢測得到的引物延伸產物的方法作為該方法中(A)的使用本發明的寡核苷酸作為引物來進行核酸擴增反應的方法，可以列舉例如，使用本發明的引物，使用樣品中的核酸作為模板，通過DNA聚合酶等來進行核酸擴增反應[例如，聚合酶鏈反應(PCR)法(特開昭60-281號公報)、LAMP(環介導的等溫擴增(Loop-MediatedIsothermalAmplification))法(TsugunoriNotomi等,NucleicAcidRes"第28巻，e63，2000年)、ICAN，(嵌合引物引發的核酸等溫擴增(IsothermalandChimericprimer-initiatedAmplificationofNucleicacids))法(臨床病理，51巻(ll)，第1061-1067頁，20(B年11月)、LCR(連接酶鏈反應)法(特開平4-211399號)、SDA(鏈置換擴增)法(特開平8-19394號)，從而使引物延伸的方法。因為由此可以擴增胞內分枝桿菌的鹼基序列的特定區域的序列，所以通過測定得到的引物延伸產物，可以檢測胞內分枝桿菌。即使在上述的進行核酸擴增反應的方法中，也可以列舉PCR法作為最一般的方法，作為PCR法的例子，可以使用例如實時擴增檢測體系(參考例如美國專利第5210015號、美國專利第5538848號的記栽)。此外，作為通過實時擴增檢測體系的檢測體系的例子，可以列舉例如實時PCR檢測法。作為實時PCR檢測法的例子，可以列舉TaqMan實時PCR法(參考例如美國專利第5538848號的記栽)、MGB遮蔽探針系統(MGBEclipseProbeSystem)法(參考例如美國專利笫5,801,155號的記載)、分子信標探針衝支術(MolecularBeaconsProbeTechnology)法(參考例如美國專利第5925517號的記載)、LUX螢光引物(LUXFluorogenicPrimer)法(Invitrogen公司)、袢滅探針-PCR(Quenchingprobe-PCR,QP)法(參考例如美國專利第6,492,121號的記載)等。在PCR等核酸擴增反應中使用的本發明的引物的具體例子如上所述。另外，作為在核酸擴增反應中使用的優選的正向引物與反向引物的組合，可以列舉在上述表l中顯示的組合。其中作為優選的正向引物與反向引物的組合，可以列舉例如下述的組合。(1)正向引物是含有用序列編號9表示的鹼基序列的寡核苷酸、反向引物是含有用序列編號10表示的鹼基序列的寡核苷酸的組合。(2)正向引物是含有用序列編號23表示的鹼基序列的寡核苷酸、反向引物是含有用序列編號24表示的鹼基序列的寡核苷酸的組合。(3)正向引物是含有用序列編號41表示的鹼基序列的寡核苷酸、反向《1物是含有用序列編號42表示的鹼基序列的寡核苷酸的組合。(4)正向引物是含有用序列編號59表示的鹼基序列的寡核普酸、反向《1物是含有用序列編號60表示的鹼基序列的寡核苷酸的組合。(5)正向引物是含有用序列編號79表示的鹼基序列的寡核苷酸、反向《1物是含有用序列編號80表示的鹼基序列的寡核苷酸的組合。(6)正向引物是含有用序列編號93表示的鹼基序列的寡核苷酸、反向可1物是含有用序列編號94表示的鹼基序列的寡核苷酸的組合。(7)正向引物是含有用序列編號105表示的鹼基序列的寡核苷酸、反向引物是含有用序列編號106表示的鹼基序列的寡核苷酸的組合。(8)正向引物是含有用序列編號127表示的鹼基序列的寡核苦酸、反向引物是含有用序列編號128表示的鹼基序列的寡核苷酸的組合。在使用上述引物的實時PCR等核酸擴增反應中使用的其它脫氧核糖核苷三磷酸(dATP、dCTP、dGTP、dTTP)、DNA聚合酶等試劑可以使用通常在該領域使用的試劑，其條件、方法等除了使用本發明的引物和探針之外，可以按照PCR的一般方案進行。檢測在核酸擴增反應中所得到的引物延伸產物的方法可以是在通常在該領域進行的常^L方法，沒有限制。可以列舉如下的各種檢測方法，例如，嵌入劑法、T叫ManTM實時PCR法(參考例如美國專利第5538848號的記載)、MGB遮蔽探針系統(MGBEclipseProbeSystem)法(參考例如美國專利第5,801,155號的記載)、分子信標探針技術(MolecularBeaconsProbeTechnology)法(參考例如美國專利第5925517號的記載)、LUX螢光引物(LUXFluorogenicPrimer)法(Invitrogen公司)、幹滅探針-PCR(Quenchingprobe-PCR，QP)法(參考例如美國專利第6，492，121號的記載)，以及在進行核酸擴增反應之後，對得到的引物延伸產物進行電泳，基於其結果而進行的方法，和進行使用標記引物的核酸擴增反應而測定所得到的引物延伸產物的標記的方法，等等。其中，作為一般經常使用的方法，可以列舉例如以下的方法。(A-l)嵌入劑法(A-2)TaqManTM實時PCR法(A-3)在進行核酸擴增反應之後，對得到的引物延伸產物進行電泳，基於其結果而進行的方法(A-4)進行使用標記引物的核酸擴增反應而測定所得到的引物延伸產物的才示"i己的方法以下，對於各個方法進行說明。(A-l)嵌入劑法可以利用使用公知的嵌入劑來進行實時PCR的通常的嵌入劑法。可以列舉例如，使用本發明的引物與嵌入劑，並利用通常的嵌入劑法來進行實時PCR的方法。即，嵌入劑是與雙鏈DNA特異性地結合而發出焚光的試劑，一照射激發光就發出螢光。因為用PCR來重複擴增，DNA—增加，嵌入劑就插入該DNA中，所以嵌入劑以與引物延伸產物的生成量成比例地摻入DNA，因此通過檢測來自嵌入劑的焚光強度，可以知道引物延伸產物的量。但是，因為嵌入劑與所有的雙鏈DNA結合，所以以得到的螢光強度的測定結果為基礎，根據需要進行熔解曲線分析。即，在PCR之後緩緩提高PCR反應液的溫度，同時測定來自嵌入劑的螢光強度。最開始因為PCR擴增產物形成雙鏈，所示發出螢光，但因為一旦PCR反應液的溫度達到某固定溫度PCR擴增產物就解離成單鏈，所以來自嵌入劑的螢光急劇下降。這時的溫度為熔解溫度(Tm值)，是引物延伸產物的序列固有的值。對於其峰是作為目標的特異性產物的峰還是非特異性產物的峰，可以從該Tm值判定。因為該嵌入劑法不需要在實時PCR之後進行電泳，所以在臨床檢查領域等中需要迅速進行判定的情況下是有效的方法。作為在本發明中使用的嵌入劑，只要是通常在該領域中使用的嵌入劑，可以任意使用，例如有SYBRTMGreenI(MolecularProbe公司商品名)、溴化乙錠、藥等。說明本發明所涉及的"使用嵌入劑法的胞內分枝桿菌的檢測方法"的例子:i口下。使用本發明的引物和嵌入劑(例如SYBRTMGreen1)，使用從檢測胞內分枝桿菌的樣品(被檢樣品)中純化出的純化DNA樣品作為模板，使用TaqDNA聚合酶等聚合酶來進行實時PCR。而且用提高所述的溫度的方法，測定來自嵌入引物延伸產物的嵌入劑(SYBRTMGreenI)的螢光量。接著，橫軸取引物延伸產物(雙鏈DNA)的解鏈溫度，縱軸取螢光量的1次微分(變化量)，通過進行引物延伸產物的熔解曲線分析來進行峰的檢測，在得到單個峰的情況下，判斷被檢樣品為胞內分枝桿菌陽性(即，存在胞內分枝桿菌或其基因。下同。)。另外，調製純化DNA樣品溶液的稀釋系列，對每個各稀釋系列與上述同樣地進行實時PCR。接著，橫軸取引物延伸產物(雙鏈DNA)的解鏈溫度，縱軸取螢光量的1次微分(變化量)，製成熔解曲線，進行擴增產物的熔解曲線分析，從而進行峰的檢測。作為這種情況下的胞內分枝桿菌的檢測方法，對於對各稀釋系列的各引物延伸產物，在熔解曲線分析中檢測到相同的Tm值的峰的情況下，可以判斷被檢樣品為胞內分枝桿菌陽性。另外，因為以在使用嵌入劑的方法中得到的測定值為基礎，根據在實時PCR中進行的信息，也可以製成標準曲線，所以使用該標準曲線可以得到樣品中的胞內分枝桿菌的基因組DNA量(拷貝數)。標準曲線的製作方法以及使用該標準曲線的胞內分枝桿菌的定量方法在後面敘述。作為本發明所涉及的通過使用嵌入劑的實時PCR檢測法的胞內分枝桿菌檢測方法的一例，以使用所述的"引物02—Fwl"和"引物02一Rvl",檢測胞內分枝桿菌的情況為例，進行說明如下。首先，通過^^知的方法，從檢測胞內分枝桿菌的樣品(被檢樣品)中得到純化DNA樣品。另外，使用DNA合成儀，用亞磷醯胺法合成由用序列編號9表示的鹼基序列組成的寡核苷酸(02—Fwl)，和由用序列編號IO表示的鹼基序列組成的寡核苷酸(02_1^1)。使用在上述中合成的02—Fwl作為正向引物，02—Rvl作為反向引物，進行例如如下所述的實時PCR。即，調製含有各502000nM的引物02—Fwl和引物02—Rvl，原液的約5000~100000倍稀釋的嵌入劑[例如SYBRTMGreenI(MolecularProbe乂>司商品名)]，1.0~4,0mM的MgCl2，KC1，BSA，膽酸鈉，0.005~0.2%的TritonX-lOO，各0.2mM左右的dATP、dCTP、dGTP、dTTP,10~80單位/mL的聚合酶(例如TaqDNA聚合酶)的10mMTris-HCl緩衝液(pH8.9)，製成PCR用反應液。向該PCR用反應液中加入從檢測胞內分枝桿菌的樣品(被檢樣品)中純化出的純化DNA樣品，製成PCR用樣品。將該PCR用樣品加入到96孔反應板的孔中，使用實時PCR檢測裝置等進行實時PCR。反應重複30~50次，對每1循環測定來自嵌入到引物延伸產物中的嵌入劑(例如SYBRTMGreenI)的螢光量。接著，橫軸取引物延伸產物(雙鏈DNA)的解鏈溫度，縱軸取螢光量的1次微分(變化量)，進行引物延伸產物的熔解曲線分析，從而進行峰的檢測，在得到單個峰的情況下，判斷被檢樣品為胞內分枝桿菌陽性。另外，調製純化DNA樣品溶液的稀釋系列，對每個各稀釋系列與上述同樣地進行實時PCR。接著，橫軸取引物延伸產物(雙鏈DNA)的解鏈溫度，縱軸取螢光量的1次微分(變化量)，製成熔解曲線，進行擴增產物的熔解曲線分析，從而進行峰的檢測。作為這種情況下的胞內分枝桿菌的檢測方法，對於對各稀釋系列的各引物延伸產物，在熔解曲線分析中檢測到相同的Tm值的峰的情況下，可以判斷^皮檢樣品為胞內分枝桿菌陽性。另外，作為對照，可以用常規方法提取、純化來自胞內分枝桿菌之外的分枝桿菌屬菌的DNA，除了使用該DNA作為模板之外，以與上述同樣的方法來進行實時PCR，同樣地測定SYBRTMGreenI的焚光量，從而進行熔解曲線分析。在這種情況下，因為樣品中沒有來自胞內分枝桿菌的序列，所以在熔解曲線分析中應該不出現峰。為了使有無胞內分枝桿菌的判定更確實，優選同時進行上述的對照實驗。進而通過製成標準曲線，可以得到樣品中的胞內分枝桿菌的基因組DNA的數量(拷貝數)。此外，因為該數量與胞內分枝桿菌的數量成比例，所以也可以知道樣品(被檢樣品)中的胞內分枝桿菌的數量。(A-2)TaqManTM實時PCR法(TaqManTM探針法)TaqMan實時PCR法是使用了將5，末端用例如FAM等螢光色素(報告分子)標記、將3，末端用例如TAMRA等猝滅色素標記得到的標記探針的實時PCR法，是能夠高敏感度且定量地檢測目標的微量DNA的方法(參考例如美國專利第5，538，848號的記載)。具體地說，T叫ManTM實時PCR法是如下的方法使用含有一部分或全部用序列編號1、序列編號2、序列編號3、序列編號4、序列編號5、序列編號6、序列編號7、或序列編號8表示的鹼基序列，或者一部分或全部用序列編號1、序列編號2、序列編號3、序列編號4、序列編號5、序列編號6、序列編號7、或序列編號8表示的鹼基序列的互補序列，且與胞內分枝桿菌基因的鹼基序列雜交的寡核苷酸作為引物(本發明的引物)，使用下述標記的寡核苦酸作為標記探針，所述標記的寡核苷酸如下得到，將含有一部分或全部用序列編號1、序列編號2、序列編號3、序列編號4、序列編號5、序列編號6、序列編號7、或序列編號8表示的鹼基序列，或者一部分或全部用序列編號1、序列編號2、序列編號3、序列編號4、序列編號5、序列編號6、序列編號7、或序列編號8表示的鹼基序列的互補序列，且與胞內分枝桿菌基因的鹼基序列雜交的寡核苷酸(本發明的寡核苷酸)的5'末端用報告螢光色素標記，3，末端用猝滅色素標記，使用樣品中的核酸作為模板來進行PCR，從而檢測從該標記探針游離出的標記物質的標記。TaqMan實時PCR法的原理如下。該方法使用5，末端用螢光色素(報告分子)、3'末端用猝滅色素標記的、與目標基因的特定區域雜交的寡核苷酸探針。該探針在通常狀態下報告的螢光為猝滅色素所抑制。在使該螢光標記探針與目標基因完全雜交的狀態下，使用DNA聚合酶自其外側起進行PCR。通過DNA聚合酶的延伸反應一旦進行，由於DNA聚合酶的核酸外切酶活性，焚光標記探針就被從5，端水解，報告色素游離，從而發出螢光。實時PCR法是實時地監測該螢光強度的方法，由此可以正確地定量才莫板DNA的初始量。在本發明所涉及的TaqMai/M實時PCR檢測體系中使用的正向引物和反向引物可以使用本發明的引物。作為優選的引物，可以列舉在所述的PCR法等核酸擴增反應的中使用的引物，其優選的具體例子和優選的組合也如上所述。作為在本發明所涉及的T叫Man1^1實時PCR檢測體系中使用的、5，末端用螢光色素(報告分子)標記、3，末端用猝滅色素標記的探針中使用的探針，可以是所述的本發明的探針。實際上，使用含有預測在用所選擇的正向引物和反向引物的組合進行實時PCR的情況下可以得到的引物延伸產物的鹼基序列的探針，或者進而使用含有從其序列設計的鹼基序列的探針。例如，在使用02—Fwl(具有用序列編號9表示的鹼基序歹'j)與02—Rvl(具有用的探針，可以列舉含有預測在該實時PCR中可以被擴增的、序列編號139的鹼基序列的寡核苷酸，或者含有從序列編號139的鹼基序列設計的序列(例如用序列編號204表示的序列)的寡核苷酸。作為將標記探針的5，端進行標記的報告螢光物質，可以列舉羧基螢光素(FAM)、六氯螢光素(HEX)、四氯螢光素(TET)、Cy5、VIC等，其中經常使用FAM。作為標記3，末端的摔滅色素，可以列#基四甲基羅丹明(TAMRA)等螢光物質，BlackHoleQuencher色素(如BHQ2)、4-((4-(二曱基氨基)苯基)偶氮)苯曱酸(DABCYL)等非螢光物質，其中經常使用TAMRA。在實時PCR檢測體系中使用的其它脫氧核苷三磷酸(dATP、dCTP、dGTP、dTTP)、DNA聚合酶等試劑，可以使用在通常的實時PCR中使用的試劑，實時PCR的方法除了使用本方法的引物和探針之外，可以按照實時PCR的一般程序進行。將通過本發明所涉及的TaqManTM實時PCR檢測體系的胞內分枝桿菌的檢測方法的一例進行說明如下。首先，按照公知的方法(例如上述的方法)，從檢測胞內分枝桿菌的樣品0皮檢樣品)中得到純化DNA樣品。另外，使用DNA合成儀，以亞磷醯胺法合成含有用序列編號9表示的鹼基序列的寡核苷酸(02一Fwl)、和含有用序列編號10表示的鹼基序列的寡核苷酸(02—Rvl)。另夕卜，從預測可以在使用02—Fwl和02—Rvl作為引物的PCR中被擴增的序列編號138的鹼基序列，設計用於作為探針使用的序列(例如用序列編號204表示的序列)，合成該鹼基序列的寡核苷酸。用常規方法在該寡核苦酸的5，末端結合報告色素FAM，在3，末端結合報告消光體TAMRA，從而得到螢光標記探針。使用在上述所調製的02_Fwl作為正向引物，02一Rvl作為反向引物，按照例如下述來進行實時PCR。即，調製含有各(U2nM、優選為各lnM的引物02—Fwl和引物02—Rvl，100~1000nM的螢光標記探針，1.0~4.0mM的MgCl2,KC1，BSA，膽酸鈉，0.005~0.2%的TritonX-lOO，各0,2mM左右的dATP、dCTP、dGTP、dTTP,10~80單位/mL的TaqDNA聚合酶等的聚合酶的10mMTris-HCl緩沖液(pH8.9),製成PCR用反應液。向20^L該PCR用反應液中加入lng純化DNA樣品，得到PCR用樣品。將該PCR用樣品加入到96孔反應板的孔中，使用適當的實時PCR檢測裝置等來進行實時PCR。反應重複30~50次，對每l循環測定報告色素的發光量。作為這種情況下的胞內分枝桿菌檢測方法，在測定出了報告色素的發光量的情況下，判定被檢樣品為胞內分枝桿菌陽性。另外，因為在實時PCR法中，可以製成標準曲線，所以可以得到樣品中的胞內分枝桿菌的基因組DNA的數量(拷貝數)。另外，因為該數量與胞內分枝桿菌的數量成比例，所以也可以知道樣品(被檢樣品)中的胞內分枝桿菌的數量。標準曲線的製作方法可以按照在實時PCR法中通常進行的常規方法。例如，使用拷貝數已知的胞內分枝桿菌的基因組DNA樣品作為標準，調製稀釋系列的濃度(拷貝數)的PCR用DNA樣品。接著使用各稀釋系列的PCR用DNA樣品按照上述方法進行實時PCR，從而測定報告色素的發光量。對於每個各稀釋系列的PCR用DNA樣品，製成繪製有相對於PCR的各循環數(x軸)測定的發光量的測定值(Rn、y軸)的擴增曲線。接著，選擇發光量以指數函數擴增的Rn部分，劃出閾值線(Thresholdline，Th)。將Th與各PCR用DNA樣品的擴增曲線交叉的點作為循環閾值(Ct)。接著繪製相對於所使用的各PCR用DNA樣品的拷貝數的對數值(x軸)的Ct值(y軸)，可以以對各Ct所得到的近似曲線作為標準曲線。通過嵌入劑法來進行實時PCR,以所得到的測定值為基礎可以同樣地製成標準曲線。例如，製成繪製有相對於PCR的各循環數(x軸)的來自嵌入劑的螢光量的測定值(Rn,y軸)的擴增曲線。接著，用與上述相同的方法得到Ct值，繪製相對於在實時PCR中使用的各PCR用DNA樣品的拷貝數的對數值(x軸)的Ct值(y軸)，可以以對各Ct得到的近似曲線作為標準曲線。為了定量樣品中的胞內分枝桿菌的基因組DNA的數量(拷貝數)，首先從檢測胞內分枝桿菌的樣品中分離純化DNA，然後對於所得到的DNA樣品進行實時PCR,同樣地製成擴增曲線。得到製成標準曲線時的Th與得到的擴增曲線交叉的Ct值。通過將該Ct值適用於標準曲線，可以得到樣品中的胞內分枝桿菌的基因組DNA量(拷貝數)。(A-3)在進行核酸擴增反應之後，對得到的引物延伸產物進行電泳，基於其結果而進行的方法作為該方法，可以列舉例如，"胞內分枝桿菌的檢測方法，其特徵在於，包含下述工序，(i)使用下述寡核苷酸作為引物(本發明的引物)，以樣品中的核酸作為^^莫板進行核酸擴增反應，所述寡核苷酸含有一部分或全部用序列編號1、序列編號2、序列編號3、序列編號4、序列編號5、序列編號6、序列編號7、或序列編號8表示的鹼基序列，或者一部分或全部用序列編號1、序列編號2、序列編號3、序列編號4、序列編號5、序列編號6、序列編號7、或序列編號8表示的鹼基序列的互補序列，且與胞內分枝桿菌基因的鹼基序列雜交，(ii)對在上述(i)中得到的引物延伸產物進行電泳，基於該結果來判定有無胞內分枝桿菌。作為進行電泳，基於其結果來判定有無胞內分枝桿菌的方法，可以列舉例如，(A-3-l)通過確認目標大小(鹼基對數)的引物延伸產物組分來判斷的方法，(A-3-2)通過使用標記探針的雜交來判定的方法，等等。核酸擴增反應的具體例子如上所述。電泳法的條件、操作方法等，可以按照在該領域通常進行的常規方法。以下，對(A-3-l)和(A-3-2)的方法進行說明。(A-3-l)通過確認目標大小(鹼基對數)的引物延伸產物組分來判斷的方法例如，首先從本發明的引物中，選擇正向引物與反向引物的適當組合，使用該組合進行PCR等核酸擴增反應。接著，對得到的引物延伸產物進行電泳。預先預測可以從在核酸擴增反應中使用的正向引物與反向引物的組合擴增的引物延伸產物的大小(鹼基對數)，然後可以用常規方法確認所得到的電泳組分是否相當於所預測的大小的引物延伸產物。可以列舉例如，使用將得到的電泳組分用溴化乙錠等染色來將核酸可視化的方法，從而通過該《1物延伸產物的特徵性大小(鹼基對數)來進行確認等方法。作為通過(A-3-l)的方法的具體判定方法，可以列舉下迷方法，所述方法例如，使用所述的表1所記載的正向引物與反向引物的組合來進行PCR，然後對得到的$1物延伸產物進行電泳，在確認了預測用該引物組合可以擴增的、用表l所記載的序列編號表示的鹼基序列的寡核苷酸，或者確認了該鹼基對數的大小的組分的情況下，判定被檢樣品是胞內分枝桿菌陽性。作為在這些方法中更優選的方法，可以列舉例如下述的方法。(1)使用含有用序列編號9表示的鹼基序列的寡核苷酸引物與含有用序列編號10表示的鹼基序列的寡核苷酸引物的組合來進行PCR，然後對得到的引物延伸產物進行電泳，將確認了155鹼基對的寡核苷酸組分或含有用序列編號139表示的鹼基序列的寡核苷酸組分的被檢樣品判定為陽性的方法，(2)使用含有用序列編號23表示的鹼基序列的寡核苷酸引物與含有用序列編號24表示的鹼基序列的寡核苷酸引物的組合來進行PCR，然後對得到的引物延伸產物進行電泳，將確認了159鹼基對的寡核苷酸組分或含有用序列編號146表示的鹼基序列的寡核苷酸組分的被檢樣品判定為陽性的方法，(3)使用含有用序列編號41表示的鹼基序列的寡核苷酸引物與含有用序列編號42表示的鹼基序列的寡核苷酸引物的組合來進行PCR，然後對得到的引物延伸產物進行電泳，將確認了179鹼基對的寡核苷酸組分或含有用序列編號155表示的鹼基序列的寡核苷酸組分的被檢樣品判定為陽性的方法，(4)使用含有用序列編號59表示的鹼基序列的寡核苷酸引物與含有用序列編號60表示的鹼基序列的寡核苷酸引物的組合來進行PCR，然後對得到的引物延伸產物進行電泳，將確認了157鹼基對的寡核苷酸組分或含有用序列編號164表示的鹼基序列的寡核苷酸組分的被檢樣品判定為陽性的方法，(5)使用含有用序列編號79表示的鹼基序列的寡核苷酸引物與含有用序列編號80表示的鹼基序列的寡核苷酸引物的組合來進行PCR，然後對得到的引物延伸產物進行電泳，將確認了160鹼基對的寡核苷酸組分或含有用序列編號174表示的鹼基序列的寡核苷酸組分的被檢樣品判定為陽性的方法，(6)使用含有用序列編號93表示的鹼基序列的寡核苷酸引物與含有用序列編號94表示的鹼基序列的寡核苷酸引物的組合來進行PCR，然後對得到的引物延伸產物進行電泳，將確認了172鹼基對的寡核苷酸組分或含有用序列編號181表示的鹼基序列的寡核苷酸組分的被檢樣品判定為陽性的方法，(7)使用含有用序列編號105表示的鹼基序列的寡核苷酸引物與含有用序列編號106表示的鹼基序列的寡核苷酸引物的組合來進行PCR，然後對得到的引物延伸產物進行電泳，將確認了181鹼基對的寡核苷酸組分或含有用序列編號187表示的鹼基序列的寡核苷酸組分的被檢樣品判定為陽性的方法，(8)使用含有用序列編號127表示的鹼基序列的寡核苷酸引物與含有用序列編號128表示的鹼基序列的寡核苷酸引物的組合來進行PCR，然後對得到的引物延伸產物進行電泳，將確認了152鹼基對的寡核苷酸組分或含有用序列編號198表示的鹼基序列的寡核苷酸組分的被檢樣品判定為陽性的方法。(A-3-2)通過使用標記探針的雜交來判定的方法可以列舉例如，對進行核酸擴增反應而得到的引物延伸產物進行電泳。對於得到的電泳組分，對將本發明的探針用標記物質進行了標記的標記探針進行雜交。在通過檢測該標記探針的標記而確i人了存在與該標記探針雜交的組分的情況下，判定該被檢樣品是胞內分枝桿菌陽性的方法。使用的探針和將探針進行標記的標記物質的具體例子、以及探針的標^己方法:^上所述。顯示其一例如下。即可以列舉，使用所述的表l所記載的正向引物與反向引物的組合來進行PCR，然後對得到的引物延伸產物進行電泳。預先調製將下述鹼基序列的寡核苷酸用標記物質進行了標記的標記探針，所述並含有一部分或全部的表l所記載的序列編號的鹼基序列。進行電泳組分對該標記產物的雜交，在通過檢測該標記產物的標記而確認了存在與該標記產物雜交的組分的情況下，判定被檢樣品是胞內分枝桿菌陽性的方法。作為這些方法的優選的具體例子，可以列舉例如下述的方法。(1)使用具有用序列編號9表示的鹼基序列的寡核苷酸引物與具有用序列編號10表示的鹼基序列的寡核苷酸引物的組合來進行PCR,然後對得到的引物延伸產物進行電泳。接著，對於得到的組分，對用標記物質將含有下述鹼基序列的寡核苷酸進行了標記的標記探針進行雜交，所述鹼基序列含有一部分或全部用序列編號139表示的鹼基序列，將通過檢測該標記探針的標記而確認了與該標記探針雜交的組分的被檢樣品判定為陽性的方法，(2)使用具有用序列編號23表示的鹼基序列的寡核苷酸引物與具有用序列編號24表示的鹼基序列的寡核苷酸引物的組合來進行PCR，然後對得到的引物延伸產物進行電泳。接著，對於得到的組分，對用標記物質將含有下述鹼基序列的寡核苷酸進行了標記的標記探針進行雜交，所述鹼基序列含有一部分或全部用序列編號146表示的鹼基序列，將通過檢測該標記探針的標記而確認了與該標記探針雜交的組分的被檢樣品判定為陽性的方法，(3)使用具有用序列編號41表示的鹼基序列的寡核苷酸引物與具有用序列編號42表示的鹼基序列的寡核苷酸引物的組合來進行PCR，然後對得到的引物延伸產物進行電泳。接著，對於得到的組分，對用標記物質將含有下述鹼基序列的寡核苷酸進行了標記的標記探針進行雜交，所述鹼基序列含有一部分或全部用序列編號155表示的鹼基序列，將通過檢測該標記探針的標記而確認了與該標記探針雜交的組分的被檢樣品判定為陽性的方法，(4)使用具有用序列編號59表示的鹼基序列的寡核苷酸引物與具有用序列編號60表示的鹼基序列的寡核苷酸引物的組合來進行PCR，然後對得到的引物延伸產物進行電泳。接著，對於得到的組分，對用標記物質將含有下述鹼基序列的寡核苷酸進行了標記的標記探針進行雜交，所述鹼基序列含有一部分或全部用序列編號164表示的鹼基序列，將通過檢測該標記探針的標記而確認了與該標記探針雜交的組分的被檢樣品判定為陽性的方法，(5)使用具有用序列編號79表示的鹼基序列的寡核苷酸引物與具有用序列編號80表示的鹼基序列的寡核苷酸引物的組合來進行PCR,然後對得到的引物延伸產物進行電泳。接著，對於得到的組分，對用標記物質將含有下述鹼基序列的寡核苷酸進行了標記的標記探針進行雜交，所述鹼基序列含有一部分或全部用序列編號174表示的鹼基序列，將通過檢測該標記探針的標記而確認了與該標記探針雜交的組分的被檢樣品判定為陽性的方法，(6)使用具有用序列編號93表示的鹼基序列的寡核苷酸引物與具有用序列編號94表示的鹼基序列的寡核苷酸引物的組合來進行PCR，然後對得到的引物延伸產物進行電泳。接著，對於得到的組分，對用標記物質將含有下述鹼基序列的寡核苷酸進行了標記的標記探針進行雜交，所述鹼基序列含有一部分或全部用序列編號181表示的鹼基序列，將通過檢測該標記探針的標記而確認了與該標記探針雜交的組分的被檢樣品判定為陽性的方法，(7)使用具有用序列編號105表示的鹼基序列的寡核苷酸引物與具有用序列編號106表示的鹼基序列的寡核苷酸引物的組合來進行PCR，然後對得到的引物延伸產物進行電泳。接著，對於得到的組分，對用標記物質將含有下述鹼基序列的寡核苷酸進行了標記的標記探針進行雜交，所述鹼基序列含有一部分或全部用序列編號187表示的鹼基序列，將通過檢測該標記探針的標記而確認了與該標記探針雜交的組分的被檢樣品判定為陽性的方法，(8)使用具有用序列編號127表示的鹼基序列的寡核苷酸引物與具有用序列編號128表示的鹼基序列的寡核苷酸引物的組合來進行PCR,然後對得到的引物延伸產物進行電泳。接著，對於得到的組分，對用標記物質將含有下述鹼基序列的寡核苷酸進行了標記的標記探針進行雜交，所述鹼基序列含有一部分或全部用序列編號198表示的鹼基序列，將通過檢測該標記探針的標記而確認了與該標記探針雜交的組分的被檢樣品判定為陽性的方法。細檢測方法，所述情況例如，通過使用02—Fwl作為正向引物，使用02—Rvl作為反向引物來進行PCR，並進行電泳，然後通過確認作為目標的鹼基對數的引物延伸組分的方法來進行檢測的情況(上述的(A-3-l)的(l)的方法)，進4亍i兌明長口下。首先，按照7>知的方法(例如所述的方法)，從欲檢測有無胞內分枝桿菌的樣品(被檢樣品)中得到純化DNA樣品。另外，用上述的方法，使用DNA合成儀以亞磷醯胺法從本發明所涉及的核苷酸合成02—Fw1(具有用序列編號9表示的序列的寡核苷酸)和02—Fwl(具有用序列編號10表示的鹼基序列的寡核苷酸)。調製含有各0.1~2fiM、優選為各lnM的引物02—Fwl和引物02_Rvl，1.0~4.0mM的MgCl2,KC1,BSA,膽酸鈉，0.005~0.2%的聚氧乙烯辛基苯基醚，各0.10.6mM左右的dATP、dCTP、dGTP、dTTP，和10~80單位/mL的TaqDNA聚合酶的10mMTris-HCl緩衝液(pH8.9)，製成PCR用反應、液。使用向該PCR用反應液中添加了純化DNA樣品的溶液作為PCR用樣品，用DNA熱循環^義進行20~40次PCR。將得到的PCR後的反應液進行1.5%的瓊脂糖凝膠電泳。接著進行溴化乙錠染色，然後檢測在紫外線下的螢光。另外，分子量標記(Marker)也與反應液同時電泳，通過比較相對遷移率，來計算出所檢測的DNA片段的長度。在使用了02Fwl作為正向引物、和02一Rvl作為反向引物的PCR中，預測胞內分枝桿菌的鹼基序列中的155鹼基對的DNA片段(具有用序列編號139表示的鹼基序列。)被複製。於是，在確認了大小為155鹼基對的螢光帶的情況下，可以判斷被檢樣品為胞內分枝桿菌陽性。另外，本發明在核酸擴增工序中，還可以應用使用RNA轉錄產物的檢測方法。可以列舉例如，NASBA(基於核酸序列的擴增(nucleicacids叫uencebasedamplification))法(日本專利第2650159號)、3SR(自主序歹'J複製(self-sustainedsequencereplication))法(特^^平7-114718號)、TAS(基於轉錄的擴增系統(transcriptionbasedamplificationsystem))法(特表平2-500565號國際^^開WO88/10315號)、TMA(轉錄介導的擴增(transcriptionmediatedamplification))法(特開平11-46778號)等，其中使用逆轉錄酶與RNA聚合酶的協同作用(在逆轉錄酶與RNA聚合酶協同作用那樣的條件下進行反應)的一定溫度核酸擴增法適合於測定體系的自動化。(A-4)進行使用了標記引物的核酸擴增反應從而測定得到的引物延伸產物的才示^己的方法使用被檢樣品中的核酸作為模板來進行PCR等核酸擴增反應，檢測、測定得到的引物延伸產物的標記，在能夠檢測出標記的情況下，判定該被檢樣品為胞內分枝桿菌陽性的方法。作為在該方法中使用的正向引物和反向引物，可以列舉在上述的PCR法中使用的組合，其優選的具體例子和優選的組合也如上所述。在上述方法的情況下，在進行了核酸擴增反應之後，除去游離的標記引物，測定引物延伸產物的標記，在能夠檢測出標記的情況下，可以判斷被檢樣品為胞內分枝桿菌陽性。作為除去游離的標記引物的方法，可以列舉用使核酸沉澱的常規方法(乙醇沉澱法、使用了異丙醇的沉澱法等)使進行核酸擴增反應而得到的反應物中的引物延伸產物沉澱，然後除去含有沒有沉澱的游離標記引物的上清的方法等。另外，還可以列舉，將進行核酸擴增反應而得到的反應物在適當的條件下用凝膠層析進行處理，從而分離引物延伸產物與游離的標記引物的方法，以及利用電泳法分離的方法等。(B)使用以標記物質將本發明的寡核苷酸進行了標記的寡核苷酸作為標記探針的方法進而，作為本發明的胞內分枝桿菌的檢測方法，可以列舉使用以標記物質將下述寡核苷酸(本發明的寡核苷酸)進行了標記的寡核苷酸作為標記探針，使該標記探針與樣品中的核酸雜交，除去游離的標記探針，然後檢測雜交的複合體的標記的方法，所述寡核苷酸含有一部分或全部用序列編號l、序列編號2、序列編號3、序列編號4、序列編號5、序列編號6、序列編號7、或序列編號8表示的鹼基序列，或者一部分或全部用序列編號1、序列編號2、序列編號3、序列編號4、序列編號5、序列編號6、序列編號7、或序列編號8表示的鹼基序列的互補序列，且與胞內分枝桿菌基因的鹼基序列雜交。具體地說，可以列舉例如如下所述的方法。(B-i)使本發明的寡核苷酸與固相載體結合，使用該結合體作為捕獲揮:針，與被檢樣品中的核酸雜交，從而使樣品中的來自胞內分枝桿菌的核酸在固相上固定化的檢測方法(參考例如特開昭62-265999號的記載)。這種情況下，本發明的寡核苷酸或者固相載體可以用標記物質標記。(B-2)將沒有標記的(B-1)的捕獲探針和將本發明的探針進行了標記的標記探針，與被檢樣品中的核酸雜交，使固相載體上形成捕獲探針、來自胞內分枝桿菌的核酸、和標記探針的複合體，進行測定標記探針的標記的夾心法的方法(參考例如特開昭58-40099號的記載)。(B-3)使用以生物素標記的本發明的探針，與被檢樣品中的核酸雜交，然後用親和素結合載體來捕獲樣品中來自胞內分枝桿菌的核酸的方法。此外，在本發明的胞內分枝桿菌的檢測方法中使用的試劑中，可以使用通常在該領域使用的試劑類，例如緩衝劑、穩定劑、防腐劑等不抑制共存試劑等的穩定性、且不抑制PCR等核酸擴增反應及雜交反應的試劑。另外，其濃度也可以從通常在該領域使用的濃度範圍適當選擇。如果列舉緩沖液的具體例子，那麼可以列舉例如，Tris緩沖液、磷酸緩沖液、巴比妥緩沖液、硼酸緩沖液、Good's緩沖液等在實施通常的PCR等核酸擴增反應及雜交反應的情況下使用的全部緩沖液，對其pH值也沒有特別限制，通常優選59的範圍。另外，根據需要可以使用核酸合成酶(DNA聚合酶、RNA聚合酶、逆轉錄酶等)、與酶相對應的底物(dNTP、rNTP等)、還有雙鏈嵌入劑(溴化乙錠、SYBRTMGreen等)、或FAM及TAMRA等的標記檢測物質等。作為本發明所涉及的胞內分枝桿菌檢測用試劑盒，可以列舉"含有下桿菌檢測用試劑盒，所述寡核苷酸含有一部分或全部用序列編號1、序列編號2、序列編號3、序列編號4、序列編號5、序列編號6、序列編號7、或序列編號8表示的鹼基序列，或者一部分或全部用序列編號1、序列編號2、序列編號3、序列編號4、序列編號5、序列編號6、序列編號7、或序列編號8表示的鹼基序列的互補序列，且與胞內分枝桿菌基因的鹼基序列雜交，，。引物可以是用標記物質標記了的引物。該標記物質的具體例子如上所述。對"本發明的引物"、"本發明的探針"的說明所記載。本發明的引物可以是用標記物質進行了標記的引物。該標記物質的具體例子如上所述。一組引物的組成。作為該優選的實施方式，可以列舉包括所述表l所記載的引物的組合的組成。可以列舉例々口下述的組成。(l)含有(a)含有一部分或全部用序列編號9表示的鹼基序列、或者一部分或全部用序列編號9表示的鹼基序列的互補序列、且與胞內分枝桿菌基因的鹼基序列雜交的寡核苷酸引物，和(b)含有一部分或全部用序列編號10表示的鹼基序列、或者一部分或全部用序列編號10表示的鹼基序列的互補序列、且與胞內分枝桿菌基因的鹼基序列雜交的寡核苷酸引物，作為構成試劑的組成。(2)含有(a)含有一部分或全部用序列編號23表示的鹼基序列、或者一部分或全部用序列編號23表示的鹼基序列的互補序列、且與胞內分枝桿菌基因的鹼基序列雜交的寡核苷酸引物，和(b)含有一部分或全部用序列編號24表示的鹼基序列、或者一部分或全部用序列編號24表示的鹼基序列的互補序列、且與胞內分枝桿菌基因的鹼基序列雜交的寡核苷酸引物，作為構成試劑的組成。(3)含有(a)含有一部分或全部用序列編號41表示的鹼基序列、或者一部分或全部用序列編號41表示的鹼基序列的互補序列、且與胞內分枝桿菌基因的鹼基序列雜交的寡核苷酸引物，和(b)含有一部分或全部用序列編號42表示的鹼基序列、或者一部分或全部用序列編號42表示的鹼基序列的互補序列、且與胞內分枝桿菌基因的鹼基序列雜交的寡核苷酸引物，作為構成試劑的組成。(4)含有(a)含有一部分或全部用序列編號59表示的鹼基序列、或者一部分或全部用序列編號59表示的鹼基序列的互補序列、且與胞內分枝桿菌基因的鹼基序列雜交的寡核苷酸引物，和(b)含有一部分或全部用序列編號60表示的鹼基序列、或者一部分或全部用序列編號60表示的鹼基序列的互補序列、且與胞內分枝桿菌基因的鹼基序列雜交的寡核香酸引物，作為構成試劑的組成。(5)含有(a)含有一部分或全部用序列編號79表示的鹼基序列、或者一部分或全部用序列編號79表示的鹼基序列的互補序列、且與胞內分枝桿菌基因的鹼基序列雜交的寡核苷酸引物，和(b)含有一部分或全部用序列編號80表示的鹼基序列、或者一部分或全部用序列編號80表示的鹼基序列的互補序列、且與胞內分枝桿菌基因的鹼基序列雜交的寡核苷酸引物，作為構成試劑的組成。(6)含有(a)含有一部分或全部用序列編號93表示的鹼基序列、或者一部分或全部用序列編號93表示的鹼基序列的互補序列、且與胞內分枝桿菌基因的鹼基序列雜交的寡核苷酸引物，和(b)含有一部分或全部用序列編號94表示的鹼基序列、或者一部分或全部用序列編號94表示的鹼基序列的互補序列、且與胞內分枝桿菌基因的鹼基序列雜交的寡核苷酸引物，作為構成試劑的組成。(7)含有(a)含有一部分或全部用序列編號105表示的鹼基序列、或者一部分或全部用序列編號105表示的鹼基序列的互補序列、且與胞內分枝桿菌基因的鹼基序列雜交的寡核苷酸引物，和(b)含有一部分或全部用序列編號106表示的鹼基序列、或者一部分或全部用序列編號106表示的鹼基序列的互補序列、且與胞內分枝桿菌基因的鹼基序列雜交的寡核苷酸引物，作為構成試劑的組成。(8)含有(a)含有一部分或全部用序列編號127表示的鹼基序列、或者一部分或全部用序列編號127表示的鹼基序列的互補序列、且與胞內分枝桿菌基因的鹼基序列雜交的寡核苷酸引物，和(b)含有一部分或全部用序列編號128表示的鹼基序列、或者一部分或全部用序列編號128表示的鹼基序列的互補序列、且與胞內分枝桿菌基因的鹼基序列雜交的寡核苷酸引物，作為構成試劑的組成。上述試劑盒還可以含有以標記物質將本發明的寡核苷酸進行了標記的寡核苷酸作為標記探針。還可以列舉"含有本發明的寡核苷酸作為探針的胞內分枝桿菌檢測用試劑盒"。該探針也可以是用標記物質進行了標記的探針。構成這些試劑盒的構成試劑的優選方式和具體例子如上所述。此外，本發明的胞內分枝桿菌檢測用試劑盒中也可以含有例如緩沖劑、穩定劑、防腐劑等不抑制共存試劑等的穩定性、且不抑制PCR等核酸擴增反應及雜交反應的試劑。另外，其濃度也可以從通常在該領域使用的濃度範圍適當選擇。如果列舉緩沖液的具體例子，那麼可以列舉例如，Tris緩衝液、磷酸緩衝液、巴比妥緩衝液、硼酸緩沖液、Good's緩衝液等在實施通常的PCR等核酸擴增反應及雜交反應的情況下使用的全部緩衝液，對其pH值也沒有特別限制，通常優選5~9的範圍。另外，根據需要也可以含有核酸合成酶(DNA聚合酶、RNA聚合酶、逆轉錄酶等)、與酶相對應的底物(dNTP、rNTP等)、還有雙鏈嵌入劑(溴化乙錠、SYBRTMGreen等)、或FAM及TAMRA等標記檢測物質等。以下列舉實施例，更加具體地說明本發明，但本發明並不受這些實施例的任何限制。此外，在實施例中使用的任一種細菌都是臨床分離菌林，在培養之後，全部可以根據菌落的形狀、現有的各種生物化學試驗等來鑑別菌種。實施例實驗例l來自胞內分枝桿菌基因組的克隆的選擇(l)DNA才羊品的調製首先，將在小川培養基上培養的胞內分枝桿菌(ATCC13950)的菌落懸浮在純化水中，在高壓釜處理(120。C、2大氣壓、20分鐘)之後，經過菌體的粉碎處理(通過直徑2mm玻璃珠來物理石皮碎)，離心分離，從而得到上清。使用Qiagen公司製造的離子交換樹脂型DNA提取純化試劑盒Genomic-tip，從得到的上清中進行DNA的提取、純化。將得到的純化基因組DNA片段調製成最終400ng/nL(10mMTris-HCl緩沖液，pH8.9)，作為來自胞內分枝桿菌的DNA樣品來使用。另外，在陽性對照用途中，使用rpsl(用序列編號205表示的序列的DNA片段，胞內分枝桿菌特異性的序列，在專利文獻1中記載)、IS6110元件(用序列編號206表示的序列的DNA片段，牛分枝桿菌(Mycobacteriumbovis，牛型結核菌)所具有的序列)、堪薩斯分枝桿菌的KATS2序列(用序列編號207表示的序列的DNA片段，堪薩斯分枝桿菌特異性的序列，特開平11-155589號公報)，作為陰性對照，使用鳥分枝桿菌的MAV19K(用序列編號208表示的序列的DNA片段，鳥分枝桿菌特異性的序列，在特開平11-06999號公報中記載)、以及按照大腸桿菌DNA的提取方法的常規方法來提取、純化DNA所得到的來自大腸桿菌的DNA，分別同樣地調製DNA樣品，同樣地進行以下的處理。(2)全基因組鳥槍法文庫(WholeGenomeShotgunlibrary)的製作使用24jiig在上述(l)中得到的來自胞內分枝桿菌的DNA樣品作為材料，利用以下的方法(將Science，2001年2月16日，291(5507):第1304-1351頁，Venter等中所記栽的全基因組鳥槍法進行了改變)，進行全基因組鳥槍法文庫的製作。首先，在終濃度20%的甘油存在下，在5kPa9kPa的壓力下，使用霧化器(Invitrogen公司製造)處理約10分鐘，將來自胞內分枝桿菌的DNA樣品片段化。通過該處理方法，可以效率良好地回收作為目標的大小為500~1000鹼基對的組分。使用Qiagen公司製造的提取柱來純化得到的組分。其次，使用TakaraBio公司製造的DNABluntingKit,利用T4DNA聚合酶的5，—3'聚合酶活性和3，—5'外切酶活性，將得到的DNA片段的末端平端化。用該DNA片段與經平端化處理的pBSlIsk+栽體(Stratagene公司)進行連接反應，製作出在pBSlIsk+載體(ampr)中重組有DNA片段的重組DNA。使用TakaraBio公司製造的大腸桿菌JM109感受態細胞，按照其製品說明書，使用在上述中得到的重組DNA進行大腸桿菌JM109感受態細胞的轉化。將得到的轉化體在含有100jig/mL的氨節青黴素、0.2mM的IPTG、40jig/mLX-Gal的LB-瓊脂培養基上進行平板培養。挑取白色菌落，從而得到了導入了重組有目的DNA片段的重組DNA的轉化體文庫(來自胞內分枝桿菌的基因組的全基因組鳥槍法文庫)。(3)微陣列製作使用在上述(2)中獲得的轉化體的文庫(來自胞內分枝桿菌基因組的全基因組鳥槍法克隆文庫)，用下述的方法進行PCR，調製固定在載玻片上的探針材料。首先，調製含有各lpM的引物M13PrimerMl(TakaraBio公司製造)和引物M13PrimerRV(TakaraBio公司製造)，1.5mM的MgCl2，80mM的KC1，500ng/mL的BSA，0.1%的膽酸鈉，0.1%的TritonX-lOO(TritonX-lOO，聚氧乙烯辛基苯基醚，口一厶7*》K"乂、—^社商品名)，各0.2mM的dATP、dCTP、dGTP、dTTP，和40單位/mL的TaqDNA聚合酶((林)-^求》'-一7製造)的10mMTris-HCl緩沖液(pH8.9)，製成PCR用反應液。按照常規方法，分別從在上述(2)中得到的轉化體(來自胞內分枝桿菌的基因組的全基因組鳥槍法克隆文庫)純化DNA。調製在20nL的PCR用反應液中懸浮添加了該純化DNA(作為模板)的反應液，製成PCR用樣品。使用該PCR用樣品，使用MJResearch公司的DNA熱循環儀(DNAEnginePTC200)，在下述反應條件下進行30個循環的PCR。PCR反應條件熱變性94°C，0.5分4中退火55°C,l分鐘聚合反應75°C，0.5分鐘在純化得到的PCR擴增產物之後，與固定化緩衝液(終濃度3xSSC)混合。調整使得點樣的PCR產物的終濃度為300ng/nL,使用將裝置內的溼度設定為55M的點樣用裝置(GTMASStampII;日本k一if電子社製造)，在載玻片(CMTGAPS-II，Corning公司製造)上將以上述得到的PCR產物進行了點樣(點直徑150~25(Him)。將點樣結束後的載玻片移入紫外交聯4義(UVStratalinker1800，Stratagene公司製造)，進行150mJ/cm2的UV照射，將PCR擴增產物(目標DNA)固定化在載玻片上，從而製作了微陣列(以來自胞內分枝桿菌基因組DNA的全基因組鳥槍法克隆文庫為材料的微陣列，合計1100個克隆)。即使對於在所述(l)中得到的陽性對照用DNA樣品(rpsl、IS6110元件、KATS2序列)、和陰性對照用DNA樣品(MAV19K、來自大腸桿菌的DNA)，製作，在載玻片上製作了各自的微陣列。(4)目標基因組DNA的螢光色素標記和微陣列雜交i)目標基因組DNA的螢光色素標記司製造),進4亍了目標基因組DNA片段的螢光色素標記。首先，在2fig的用常規方法從胞內分枝桿菌(ATCC16950)中提取、純化的基因組DNA中，混合20nL的製品中的隨機引物溶液(randomprimersolution),然後進行熱變性(95。C，5分鐘)處理，得到了樣品溶液。另外，用常規方法分別從牛分枝桿菌(牛型結核菌，由日本細菌學會提供)、和堪薩斯分枝桿菌(ATCC12478)中提取、純化基因組DNA(對照用基因組DNA)，分別進行同樣處理，得到了樣品溶液。接著，向得到的樣品溶液中分別添加2pL的0.1MDTT、2pL的dATP/dCTP/dGTP(各5mM)的混合液、0.8jiL的2.5mMdTTP、1.6jiL的5mMHa-dUTP、lpL的克列諾酶(40U/nL)，加入去離子化滅菌水使得總體積二50^L，在37。C進行3小時的延伸反應。將MicroeonYM-30(、；！i水7社製造)的超濾柱放置在附帶的1.5mL管上，將以上述得到的反應產物上柱，以14000轉/分鐘離心4分鐘，然後將濃縮液回收到微型管中，使用真空乾燥離心機(CentriVapconcentrator,LABCONCO公司製造)使之完全乾燥。在乾燥了的上述反應產物中加入10nL的50mMNaHC03混合，常溫靜置2~3分鐘(以下稱為"反應產物溶液")。另夕卜，調製出將lmg的Cy3(AmershamBiosciencesz〉司)或Cy5(AmershamBiosciences公司)溶解到105fiL的DMSO中的溶液(Cy畫dyeSolutionCy3、Cy-dyeSolutionCy5)。將10jiL的該Cy-dyeSolutionCy3分別加入到使用對照用基因組DNA片段(來自牛分枝桿菌、來自堪薩斯分枝桿菌)而得到的樣品溶液中，在4(TC孵育(避光)60分鐘。將lOpL的該Cy-dyeSolutionCy5分別加入到使用來自胞內分枝桿菌的基因組DNA而得到的上述樣品溶液中，在40"C孵育(避光)60分鐘。進而，向孵育後的各個上述反應產物溶液中加入10jiL的4MNH20H(臨使用之前調製)，攪拌後，孵育(避光)15分鐘，得到了各自的標記產物，即用Cy3將來自牛分枝桿菌的對照用基因組DNA進行了標記的標記產物、用Cy3將來自堪薩斯分枝桿菌的對照用基因組DNA進行了標記的標記產物、和用Cy5將來自胞內分枝桿菌的基因組DNA進行了標記的標記產物。將MicroconYM-30"卩；K7社製造)的超濾柱放置在附帶的1.5mL管上，將在上述中得到的反應產物上柱，以14000轉/分鐘離心4分鐘，然後將濃縮液回收到微型管中，使用真空乾燥離心機(CentriVapconcentrator,LABCONCO公司製造)使之完全乾燥。ii)標記產物的片段化工序對在上述(4)i)中得到的乾燥狀態的基因組DNA的標記產物，加入調製的其組成是終濃度為0.04MTris-乙酸(pH8.1)、0.1M乙酸鉀、0.03M四水合乙酸鎂的溶液40nL，使之懸浮混合。接著在94。C加熱處理15分鐘，得到了將基因組DNA的標記產物片段化而形成的、100鹼基~300鹼基的生成物。此外，使用BcaBESTDNA聚合酶(TakaraBio公司製造)和rBstDNA聚合酶(EPICENTRE公司製造)研究標記效率(鹼基/染料)，結果，在Cy3標記的實驗結果中確認了，來自牛分枝桿菌的對照用基因組DNA、來自堪薩斯分枝桿菌的對照用基因組DNA中都是約20鹼基摻入有1分子染料。另夕卜，在Cy5標記的實驗結果中，胞內分枝桿菌基因組DNA的約10鹼基摻入有1分子染料。將得到的Cy3標記產物溶液與Cy5標記產物溶液混合，上MicroconYM-30(糹'J水7社製造)的超濾柱，以14000轉/分鐘離心4分鐘，然後將濃縮液回收到-f敖型管中，用真空千燥離心機(CentriVapconcentrator,LABCONCO公司製造)使之完全乾燥。接著，在微型管中加入以下的試劑，懸浮混合以使標記產物溶解，從而得到了來自牛分枝桿菌的對照用基因組DNA的Cy3標記產物與來自胞內分枝桿菌基因組的DNA的Cy5標記產物的Cy3Cy5標記產物混合溶液，和來自堪薩斯分枝桿菌的對照用基因組DNA的Cy3標記產物與來自胞內分枝桿菌基因組的DNA的Cy5標記產物的Cy3Cy5標記產物混合溶液。ArrayHybHybridizationBuffer(SIGMA公司製造)40jiL鮭魚精DNA(10mg/mL):0.5fiL曱醯胺5jiL將得到的Cy3Cy5標記產物混合溶液在95。C孵育5分鐘，然後保持在7(TC直到雜交。iii)微陣列雜交通過所述(3)的工序，將作為胞內分枝桿菌的全基因組鳥槍法克隆、陽性對照、和陰性對照使用的DNA片段的各個點集積在相同的載玻片上，從而製作微陣列(DNA晶片)。將在上述(4)ii)中得到的Cy3Cy5標記產物混合溶液上樣到微陣列上，覆蓋蓋玻片使得其不出現氣泡。將此放入雜交箱，在塑料盒中放置用蒸餾水潤溼的無塵式抹布，在這之上放置DNA晶片並密閉，在65。C避光反應8小時以上而進行雜交。在雜交之後，在室溫下將DNA晶片連同蓋玻片浸泡在2xSSC-0.1%SDS溶液中，在溶液中緩慢搖晃DNA晶片從而將蓋玻片脫離。接著依次用lxSSC、0.03。/。SDS溶液(60。C)洗滌10分鐘，用0.2xSSC溶液(42。C)洗滌10分鐘，用0.05xSSC溶液(室溫)洗滌10分鐘，然後迅速將DNA晶片移至乾燥的新支架上，立即以800轉/分鐘進行離心5分鐘，使之乾燥。(5)螢光強度的測定從信號檢測到量化使用螢光讀取掃描儀(ProteinArrayScanner，曰本k~~f電子社製造)為解析使用Cy3標記產物和Cy5標記產物的竟爭雜交的結果，所以得到了2信道，即2ch(Cy3、Cy5)中的焚光檢測數據。螢光信號的量化使用日立乂7卜社製造的DNASISTM-Array(DNA晶片表達圖像解析軟體)，按照軟體的操作程序，進行斑點自動識別、背景計算、螢光強度比的標準化。另外，制定可靠性臨界線，通過不處理其以下的區域的數據來進行標準化，從而取得有可靠性的螢光強度比。在微陣列晶片上點樣有來自胞內分枝桿菌菌體的DNA、陽性對照(rpsl:胞內分枝桿菌特異性序列的DNA片段；IS6110元件牛分枝桿菌特異性序列的DNA片段；KATS2序列堪薩斯分枝桿菌特異性序列的DNA片段)、和陰性對照(MAV19K:鳥分枝桿菌特異性序列的DNA片段；來自大腸桿菌的DNA片段)。首先，使用來自牛分枝桿菌的對照用基因組DNA的Cy3標記產物與來自胞內分枝桿菌的基因組DNA的Cy5標記產物的混合物進行微陣列雜交，測定螢光強度，求得Cy3/Cy5的螢光強度比(Ratio)。即，在某個微陣列上的點相對於Cy3的Cy5的螢光強度比較高的情況下，顯示該點的DNA片段(PCR擴增產物)與Cy5標記產物，即來自胞內分枝桿菌的基因組DNA更強地進行了雜交。另一方面，在某個微陣列上的點相對於Cy3的Cy5的螢光強度比較低的情況下，顯示該點的DNA片段對來自胞內分枝桿菌的基因組DNA特異性弱，與Cy3標記產物，即來自牛分枝桿菌的對照用基因組DNA更強地進行了雜交。在該方法中，計算出微陣列的所有點的螢光強度比，選擇出螢光強度高、且相對於Cy3的Cy5的螢光強度比高的點中的上位50點。對相同的微陣列，使用來自堪薩斯分枝桿菌的對照用基因組DNA的Cy3標記產物與來自胞內分枝桿菌的基因組DNA的Cy5標記產物的混合物，同樣地進行;f款陣列雜交，從而測定了焚光強度和螢光強度比。這時，在某點相對於Cy3的Cy5的螢光強度比較高的情況下，顯示該點的DNA片段(PCR擴增產物)與Cy5標記產物，即來自胞內分枝桿菌的基因組DNA更強地進行了雜交。另一方面，在某個微陣列上的點相對於Cy3的Cy5的螢光強度比較低的情況下，顯示該點的DNA片段對來自胞內分枝桿菌的基因組DNA特異性弱，與Cy3標記產物，即來自堪薩斯分枝桿菌的對照用基因組DNA更強地進行了雜交。計算出微陣列的所有點的螢光強度比，選擇出螢光強度高、且相對於Cy3的Cy5的螢光強度比高的點中的上位50點。將使用來自牛分枝桿菌的對照用基因組DNA的Cy3標記產物的情況下選擇出的上位50點，與使用來自堪薩斯分枝桿菌的對照用基因組DNA的Cy3標記產物的情況下選擇出的上位50點進行比較，在兩種情況下共通的點中，選擇了檢測出比rpsl(胞內分枝桿菌特異性序列)的點更強的Cy5螢光的16個點。判斷出這些點對胞內分枝桿菌的特異性比牛分枝桿菌、堪薩斯分枝桿菌、甚至rpsl都高。於是，首先選定了這16個克隆作為一次候選克隆。(6)—次候選克隆的鹼基序列確定其次，對選擇出的一次候選的16個克隆用下述的方法進行鹼基序列確定。即，4吏用BigDyeTerminator試劑盒(AppliedBiosystems7>司製造)，按照製品說明書用以下的程序進行序列解析。一次4美選DNA(—次候選克隆)2jiL(100ng)M13PrimerMl:lnL(5pmo1)premix:8pL在上迷的混合物中加入去離子化滅菌水使得總體積-20nL，使用MJResearch公司的DNA熱循環儀(DNAEnginePTC200),在下述的反應條件下進行30個循環的測序反應。96°C2分鐘—(96。C10秒鐘—50。C5秒鐘—60°C4分鐘)x25—4°C將得到的測序反應產物用QIAGEN公司製造的凝膠過濾柱純化後，然後使用MJResearch公司製造的測序儀(BaseStation)，按照儀器附帶的程序書來完成所有的候選序列的序列(鹼基序列)解讀。將得到的結果用資料庫(NCBIBLAST和CHEMICALABSTRACT)進行檢索，其結果是，也可能由於胞內分枝桿菌是基因組序列未解讀的生物種，所以在資料庫上，一次候選的所有16個克隆都是未登錄的新型序列。(7)二次候選克隆的選擇1)PCR引物的合成首先，基於確定了的一次候選16個克隆的序列的解析結果，對於各個一次候選克隆，4吏用引物設計用Web工具Primer3(WhiteheadInstituteforBiomedicalResearch.),設計用於PCR擴增檢測的引物序列，進而以該結果為基礎，設計了推測可以在PCR中使用的正向引物與反向引物的組合。使用ABI公司DNA合成儀392型，用亞磷醯胺法合成了設計出的寡核苷酸。合成方法按照ABI公司手冊，通過將寡核苷酸的氨水溶液在55。C加熱過夜來實施各種寡核苷酸的脫保護。接著通過使用Pharmacia公司製造的FPLC的陰離子交換柱層析，將合成寡核苷酸進行了純化。2)探針的製作從預測可以通過使用根據每一個各一次候選克隆分別設計的正向引物與反向引物的組合的PCR來擴增的鹼基序列中，設計用於作為探針來使用的序列，併合成了該序列的寡核苷酸。在該寡核苷酸的5'末端結合報告色素FAM，在3'末端結合報告消光體TAMRA，得到了標記寡核普酸探針(TaqManTM螢光素探針，AppliedBiosystems公司製造)。3)PCR用DNA才羊品的調製另外，按照常規方法從胞內分枝桿菌中調製了基因組DNA樣品。另外，作為對照，按照常規方法從大腸桿菌和18個菌種的分枝桿菌屬細菌(結核分枝桿菌(M.tuberculosis)、堪薩斯分枝桿菌(M.kansasii)、海分枝桿菌(M.marinum)、猿分枝桿菌(M.simiae)、瘰癧分支桿菌(M.scrofulaceum)、戈登分枝桿菌(M.gordonae)、蘇爾加分枝桿菌(M.szulgai)、鳥分枝桿菌(M.avium)、胃分枝桿菌(M.gastri)、蟾分枝桿菌(M.xenopi)、不產色分枝桿菌(M.nonchromogenicum)、土地分枝桿菌(M.terrae)、通俗分枝桿菌(M.triviale)、偶發分枝桿菌(M.fortuitum)、龜分枝桿菌(M.chdonei)、膿腫分枝桿菌(M.abscessus)、外來分枝桿菌(M.peregrinum))中調製了DNA樣品(對照用)。對得到的DNA樣品，測定吸光度從而測定了樣品中的DNA量。通過將得到的DNA量與已知的各菌體的基因組DNA量比較，確定了樣品中的基因組DNA量(基因組拷貝數)。得到了18個拷貝/nL的基因組DNA。接著，使用pH8.9的10mMTris-HCl緩沖液，調製將DNA樣品稀釋成105、104、103、102、10、5、2個拷貝/^iL的稀釋系列的溶液，製成了PCR用DNA樣品。4)實時PCR使用在上述l)中調製的正向引物和反向引物，如下來進行實時PCR。即，調製含有各ljiM的從一個一次候選克隆設計出的正向引物和反向引物，195nM的在上述(2)中調製出的螢光標記揮:針，1.5mM的MgCl2，80mM的KCl，500jig/mL的BSA，0.1%膽酸鈉，0.1%的TritonX-lOO,各0.2mM的dATP、dCTP、dGTP、dTTP,和40單位/mL的TaqDNA聚合酶((林)-少水^'-一7製造)的10mMTris畫HCl緩沖液(pH8.9)，製成了反應液。向20fiL的反應液中加入1jiL的各稀釋系列的DNA樣品作為PCR用樣品，將該樣品加入96孔反應板(MicroAmpOptical96-WelIReactionPlate,AppliedBiosystemsJapan公司製造)的孔中，使用TaqManTMPCR專用熱循環儀'檢測器(ABI7500，AppliedBiosystemsJapan公司製造),而進行實時PCR。反應在95。C保溫10分鐘，然後將在95°C15秒鐘、60°C1分鐘的反應重複50個循環，在每1個循環測定了報告色素的發光量。此外，強度比數值化的功能，使用該功能，求得了發光量。此外，使用對於每一個一次候選克隆分別以其鹼基序列為基礎而設計出的正向引物和反向引物，分別以來自胞內分枝桿菌的DNA樣品、18種來自分枝桿菌屬菌體的DNA樣品、和來自大腸桿菌DNA的樣品作為模板，使用96孔反應板，將各個實時PCR—次進行。5)二次篩選從在上述4)中得到的實時PCR的結果中，選擇了在使用來自胞內分枝桿菌的基因組的DNA作為模板的實時PCR中得到擴增產物、而在使用來自其它菌體的基因組DNA(對照)作為模板的實時PCR中得不到擴增產物的引物組合。而且，選擇了設計出該引物組合的候選克隆作為最終的胞內分枝桿菌特異性的候選克隆。所選擇的候選克隆是以下8個克隆。此外，只要沒有特別記載，以下將在一次篩選中選擇出的候選克隆稱為"一次候選克隆"，將在二次篩選中最終選擇出的候選克隆僅稱為"候選克隆"。.候選克隆l:具有用序列編號l表示的寡核苷酸序列的667鹼基的寡核香酸.候選克隆2:具有用序列編號2表示的寡核苷酸序列的1129鹼基的寡核苷酸.候選克隆3:具有用序列編號3表示的寡核苷酸序列的1003鹼基的寡核苷酸.候選克隆4:具有用序列編號4表示的寡核苷酸序列的748鹼基的寡核苷酸'候選克隆5:具有用序列編號5表示的寡核苷酸序列的619鹼基的寡核苷酸'候選克隆6:具有用序列編號6表示的寡核苷酸序列的511鹼基的寡核普酸.候選克隆7:具有用序列編號7表示的寡核苷酸序列的1006鹼基的寡核苷酸'候選克隆8:具有用序列編號8表示的寡核苷酸序列的702鹼基的寡核苷酸實施例l候選克隆的胞內分枝桿菌特異性評價對以實驗例1得到的8個候選克隆使用PCR擴增體系而實施了評價實驗，研究這些候選克隆能否在使用基因擴增檢測體系的胞內分枝桿菌的特異性檢測體系中使用。(l)PCR引物的合成首先，基於確定了的候選克隆1的序列(鹼基序列)的解析結果，使用引物i殳計用的Web工具Primer3(WhiteheadInstituteforBiomedicalResearch.)，設計了用於PCR擴增檢測的引物序歹'J，即"5，-GTTCAGCAGATCGTCGTAGG國3，"(序列編號9)和"5，-CTCTTGACGAGGCAAAACAT-3，"(序列編號IO)的寡核苷酸。以下，將用序列編號9表示的鹼基序列的引物叫做"02一Fwl",將用序列編號IO表示的鹼基序列的引物叫做"02—Rvl"。接著，使用ABI公司DNA合成儀392型，用亞磷醯胺法合成了設計出的寡核苷酸。合成方法按照ABI公司手冊，通過將寡核苷酸的氨水溶液在55。C加熱過夜來實施各種寡核苷酸的脫保護。接著通過使用了Pharmacia公司製造的FPLC的陰離子交換柱層析，將合成寡核苷酸進行了純化。(2)樣品的調製使用大腸桿菌(Escherichiacoli,E.coli)(ATCC11775)，和18種分枝桿菌屬細菌，即結核分枝桿菌(Mycobacteriumtuberculosis,人型結核菌)(TMC102[H37Rvj)、胞內分枝桿菌(ATCC13950)、堪薩斯分枝桿菌(Mycobacteriumkansasii)(ATCC12478)、海分枝桿菌(Mycobacteriummarinum)(ATCC927)、猿分枝桿菌(Mycobacteriumsimiae)(ATCC25275)、瘰癧分支桿菌(Mycobacteriumscrofulaceum)(ATCC19981)、戈登分枝桿菌(Mycobacteriumgordonae)(ATCC14470)、蘇爾加分枝桿菌(Mycobacteriumszulgai)(ATCC35799)、鳥分枝桿菌(Mycobacteriumavium)(ATCC25291)、胃分枝桿菌(Mycobacteriumgastri(ATCC15754)、蟾分枝桿菌(Mycobacteriumxenopi)(ATCC19250)、不產色分鬥支桿菌(Mycobacteriumnonchromogenicum)(ATCC19530)、土地分枝桿菌(Mycobacteriumterrae)(ATCC15755)、通俗分枝桿菌(Mycobacteriumtriviale)(ATCC23292)、偶發分枝桿菌(Mycobacteriumfortuitum)(ATCC6841)、龜分枝桿菌(Mycobacteriumchdonei)(ATCC35752)、膿腫分枝桿菌(Mycobacteriumabscessus)(ATCC19977)、外來分枝桿菌(Mycobacteriumperegrinum)(ATCC14467)，以下述的方法提取、純化DNA，從而得到了DNA樣品。首先，對結核分枝桿菌，從MycosResearch,LLC獲得純化基因組DNA，使用它作為純化DNA。對除此以外的細菌，從美國典型培養物保藏中心(AmericanTypeCultureCollection;ATCC)獲得菌林，以下述的方法提取、純化DNA。任何一種細菌都是臨床分離菌林，在培養之後，全部可以根據菌落的形狀、現有的各種生物化學試驗等來鑑別菌種。即，對於分枝桿菌(Mycobacterium)屬細菌，首先將小川培養基上的菌落懸浮在純化水中，進行高壓釜處理(120。C.2大氣壓、20分鐘)。接著將菌體的進行粉碎處理(通過直徑2mm的玻璃珠的物理性破碎)，然後離心分離而得到上清。使用Qiagen公司製造的離子交換樹脂型DNA提取純化試劑盒Genomic-tip，從得到的上清中進行了DNA的提取、純化。另外，對於大腸桿菌，按照大腸桿菌的DNA提取方法的常規方法，提取、純化了DNA。將得到的各個純化DNA調製成最終lng/fiL(10mMTris-HCl緩衝液，pH8.9),製成DNA才羊品。將得到的純化DNA調製成最終lng/fiL(10mMTris-HCl緩沖液，pH8.9)，製成DNA樣品。(3)PCR以候選克隆的鹼基序列(序列編號l)為基礎，使用在上述(l)中設計、合成的引物02—Fwl和02—Rvl，如下進行了PCR。此外，各引物02—Fwl和引物02—Rvl所具有的鹼基序列在候選克隆1的鹼基序列上的存在位置如圖1所示。l)PCR用反應液的調製即，調製含有各300nM的引物02—Fwl和引物02—Rvl，稀釋到原液的30倍的SYBRTMGreenI(MolecularProbe公司商品名)作為發色試劑，1.5mM的MgCl2,80mM的KCl，500jtg/mL的BSA，0.1%膽酸鈉，0.1%的TritonX國lOO,各0.2mM的dATP、dCTP、dGTP、dTTP，和40單位/mL的TaqDNA聚合酶(-少求7^—^製造)的10mMTris-HCl緩衝液(pH8.9)，製成了反應液。2)實時PCR使用在上述(2)中調製的來自分枝桿菌屬細菌或來自大腸桿菌的DNA樣品作為在PCR中成為擴增目標的模板DNA，用以下的方法，通過以嵌入法的定量監測而進行了研究評價。首先，向20pL的在上述(3)1)中所調製的PCR用反應液中，添加lfiL(lng)的在所述(2)中所調製的DNA樣品從而製成了PCR用樣品。將該PCR用樣品加入96孔反應板(MicroAmpOptical96-WellReactionPlate,AppliedBiosystemsJapan公司製造)的孔中，使用TaqManPCR專用熱循環儀'檢測器(ABI7500，AppliedBiosystemsJapan公司製造)，來進行實時PCR。反應在95。C保溫10分鐘，然後將在95。C15秒鐘、60°C1分鐘的反應重複40個循環，從而對擴增產物測定了嵌入的SYBRTMGreenI的螢光量。(4)熔解曲線分析對於對各DNA樣品分別擴增出的產物，橫軸取引物延伸產物(雙鏈DNA)的解鏈溫度，縱軸取螢光量的1次微分(變化量)，從而製成熔解曲線，進行了峰的檢測。(5)結果將對於各DNA樣品得到的熔解曲線分析的結果歸納到1個曲線圖中，在圖9中顯示。正如從圖9的結果可以明確的那樣，使用本發明的引物02—Fwl、和引物02—Rvl,進行了在SYBRGreenI存在下擴增出的核酸的熔解曲線分析，結果是，僅在使用了來自胞內分枝桿菌的DNA樣品作為模板的情況下，能確認核酸擴增的結果所產生的螢光信號(圖1:胞內分枝桿菌)，可以判斷為陽性。相反，正如從圖9可以明確的那樣，在使用來自胞內分枝桿菌之外的分枝桿菌屬細菌、及作為其它屬的細菌的大腸桿菌的DNA作為模板，使用同樣的引物組合同樣地進行實時PCR的情況下，不能確認相應的螢光強度(圖9:其它種)，可以判斷全部為陰性。進而，正如從圖9可以明確的那樣，因為在使用了來自胞內分枝桿菌的DNA樣品作為模板的情況下的熔解曲線分析的結果能得到單一的、清晰的峰，所以明確了，所進行的檢測體系是對胞內分枝桿菌特異性極高的檢測方法。由以上判斷，通過在PCR中使用本發明的寡核苷酸作為引物，可以特異性地檢測胞內分枝桿菌。另外，因為通過PCR等核酸擴增的檢測可以期待高敏感度，所以可以不必分離菌體，將臨床材料直接在檢測中使用，因此可以使在現有的培養細菌然後檢測的方法中培養要花費數周的胞內分枝桿菌的檢測在最長1天以內完成。實施例2候選克隆的胞內分枝桿菌檢測敏感度的檢驗(1)胞內分枝桿菌檢測用PCR引物的合成使用與實施例l(l)同樣的儀器，以同樣的操作合成了引物02—Fwl、和引物02一Rvl。(2)胞內分枝桿菌檢測用探針的製作從預測可以在使用02一Fwl和02JRvl作為引物的PCR中淨皮擴增的序列編號139的鹼基序列(155鹼基)中，設計用於作為探針使用的序列"5，-ATACGTGCCCAGAAGCTCTACCGAGAT-3，"，合成了該序列的寡核苷酸(序列編號204。以下將具有該序列的寡核苷酸探針記為INT02—F1R1—FAMTAM。)。在該寡核苷酸的5'末端結合報告色素FAM，在3，末端結合報告消光體TAMRA，得到了標記寡核苷酸探針(TaqManTM焚光素^笨4十，AppliedBiosystemsJapan7>司製造)。(3)PCR用DNA樣品的調製對在實驗例1(1)中所調製的從胞內分枝桿菌得到的來自胞內分枝桿菌的DNA樣品，測定吸光度從而測定了樣品中的DNA量。通過將得到的DNA量與已知的胞內分枝桿菌的基因組DNA量比較，確定了樣品中的基因組DNA量(基因組拷貝數)。得到了10S個拷貝/jiL的基因組DNA。接著，使用pH8.9的10mMTris-HCl緩沖液，調製將DNA樣品稀釋成105、104、103、102、10、5、2個拷貝/^L的稀釋系列的溶液，製成了PCR用DNA樣品。(4)實時PCR使用在上述(1)中調製的02—Fwl作為正向引物，02—Rvl作為反向引物，如下進行了實時PCR。即，調製含有各lnM的引物02—Fwl、和引物02—Rvl，195nM的在上述(2)中所調製的焚光標記探針INT02—F1R1—FAMTAM，1.5mM的MgCh,80mM的KCI,500ng/mL的BSA，0.1%膽酸鈉，0.1%的TritonX-lOO各0.2mM的dATP、dCTP、dGTP、dTTP，和40單位/mL的TaqDNA聚合酶((林)-少水》^一7製造)的lOmMTris-HCl緩沖液(pH8.9),製成了反應液。向20pL的反應液中加入ljiL的各稀釋系列的DNA樣品作為PCR用樣品，將該樣品加入96孔反應板(MicroAmpOptical96-WellReactionPlate,AppliedBiosystemsJapan公司製造)的孔中，使用TaqManTMPCR專用熱循環儀'檢測器(ABF7500,AppliedBiosystemsJapan公司製造)，來進行實時PCR。反應在95。C保溫10分鐘，然後將在95°C15秒鐘、60°C1分鐘的反應重複50個循環，在每1個循環測定了報告色素的發光量。此外，強度比數值化的功能，使用該功能，求得了發光量。(5)結果按照在實時PCR法中進行的常規方法，從得到的實驗數據製成了標準曲線。即，對每一個各PCR用DNA樣品，製成了繪製有相對於PCR的循環數(x軸)的報告色素髮光量(Rn、y軸)的擴增曲線。接著，選擇發光量以指數函數擴增的Rn部分，劃出閾值線(Thresholdline,Th)。將Th與各PCR用DNA樣品的發光量交叉的點作為循環閾值(Ct)。接著繪製相對於所使用的各PCR用DNA樣品的基因組的拷貝數(x軸，對數值)的Ct值(y軸)，可以以對各ct得到的近似曲線作為標準曲線。得到的標準曲線在圖10中顯示。y=-3.825x+38.78R2=0.996因為可以通過以上步驟，用實時PCR檢測發光，所以判斷出，通過4吏用本發明的寡核苷酸作為引物，從作為其擴增區域的序列設計標記探針，從而進行實時PCR,可以檢測胞內分枝桿菌。另外，根據可以製成標準曲線，判斷出通過使用本發明的引物和探針的實時PCR法，可能進行胞內分枝桿菌的定量。進而，根據圖IO明確了，在使用本發明的引物和探針的實時PCR法中，即使在胞內分枝桿菌的基因組DNA作為初始量存在2個拷貝的條件下，也可能檢測胞內分枝桿菌。進而，因為在使用實時PCR法的情況下，實時地監測其焚光強度，所以可以正確地定量模板DNA的初始量，對胞內分枝桿菌的檢測有效。工業可利用性通過使用本發明的引物或/和探針的胞內分枝桿菌的檢測方法，可以遠遠比現有的通過菌的培養檢查等來鑑定菌種的方法迅速且高精確度地進行胞內分枝桿菌的檢測。另外，通過用本發明的檢測方法進行胞內分枝桿菌的檢測，與現有的通過使用引物或/和探針的PCR法的診斷方法比較，可以排除診斷上的假陽性，能更高精確度地進行胞內分枝桿菌的檢測和診斷。進而，通過使用本發明的檢測方法，發揮也能夠進行胞內分枝桿菌菌體的定量這樣的效果。權利要求1.寡核苷酸，其含有一部分或全部用序列編號1、序列編號2、序列編號3、序列編號4、序列編號5、序列編號6、序列編號7、或序列編號8表示的鹼基序列(其中A表示腺嘌呤，C表示胞嘧啶，G表示鳥嘌呤，T表示胸腺嘧啶；另外，任意位置的T可以與尿嘧啶(U)置換；下同)，或者一部分或全部用序列編號1、序列編號2、序列編號3、序列編號4、序列編號5、序列編號6、序列編號7、或序列編號8表示的鹼基序列的互補序列，且與胞內分枝桿菌(Mycobacteriumintracellulare)基因的鹼基序列雜交。2.根椐權利要求1所述的寡核苷酸，其中含有一部分用序列編號1、序列編號2、序列編號3、序列編號4、序列編號5、序列編號6、序列編號7、或序列編號8表示的鹼基序列的寡核苷酸，是含有一部分或全部用序列編號9~序列編號203表示的鹼基序列的寡核苷酸，其中含有一部分用序列編號1、序列編號2、序列編號3、序列編號4、序列編號5、序列編號6、序列編號7、或序列編號8表示的鹼基序列的互補序列的寡核苷酸，是含有一部分或全部用序列編號9~序列編號203表示的鹼基序列的互4卜序列的寡核苷酸。3.根據權利要求l所述的寡核苷酸，其中含有一部分用序列編號l表示的鹼基序列的寡核苷酸含有選自用序列編號9~22或序列編號139~145表示的鹼基序列的序列，含有一部分用序列編號2表示的鹼基序列的寡核苷酸含有選自用序列編號23~40或序列編號146~154表示的鹼基序列的序列，含有一部分用序列編號3表示的鹼基序列的寡核苷酸含有選自用序列編號41~58或序列編號155~163表示的鹼基序列的序列，含有一部分用序列編號4表示的鹼基序列的寡核苷酸含有選自用序列編號59~78或序列編號164~173表示的鹼基序列的序列，含有一部分用序列編號5表示的鹼基序列的寡核苷酸含有選自用序列編號79~92或序列編號174~180表示的鹼基序列的序列，含有一部分用序列編號6表示的鹼基序列的寡核苷酸含有選自用序列編號93~104或序列編號181~186表示的鹼基序列的序列，含有一部分用序列編號7表示的鹼基序列的寡核苷酸含有選自用序列編號105~126或序列編號187~197表示的鹼基序列的序列，含有一部分用序列編號8表示的鹼基序列的寡核苷酸含有選自用序列編號127~138或序列編號198~203表示的鹼基序列的序列，含有一部分用序列編號l、序列編號2、序列編號3、序列編號4、序列編號5、序列編號6、序列編號7、或序列編號8表示的鹼基序列的互補序列的寡核苷酸含有選自用序列編號9~203表示的鹼基序列的序列的互補序列。4.胞內分枝桿菌檢測用引物，其含有下述寡核苷酸，所述寡核苷酸含有一部分或全部用序列編號1、序列編號2、序列編號3、序列編號4、序列編號5、序列編號6、序列編號7、或序列編號8表示的鹼基序列，或者一部分或全部用序列編號1、序列編號2、序列編號3、序列編號4、序列編號5、序列編號6、序列編號7、或序列編號8表示的鹼基序列的互補序列，且與胞內分枝桿菌基因的鹼基序列雜交。5.根據權利要求4所述的引物，其中含有一部分用序列編號l表示的鹼基序列的寡核苷酸含有選自用序列編號9~22表示的鹼基序列的序列，含有一部分用序列編號2表示的鹼基序列的寡核苷酸含有選自用序列編號23~40表示的鹼基序列的序列，含有一部分用序列編號3表示的鹼基序列的寡核苷酸含有選自用序列編號41~58表示的鹼基序列的序列，含有一部分用序列編號4表示的鹼基序列的寡核苷酸含有選自用序列編號59~78表示的鹼基序列的序列，含有一部分用序列編號5表示的鹼基序列的寡核苷酸含有選自用序列編號79~92表示的鹼基序列的序列，含有一部分用序列編號6表示的鹼基序列的寡核苷酸含有選自用序列編號93~104表示的鹼基序列的序列，含有一部分用序列編號7表示的鹼基序列的寡核苷酸含有選自用序列編號105~126表示的鹼基序列的序列，含有一部分用序列編號8表示的鹼基序列的寡核苷酸含有選自用序列編號127~138表示的鹼基序列的序列；含有一部分用序列編號l、序列編號2、序列編號3、序列編號4、序列編號5、序列編號6、序列編號7、或序列編號8表示的鹼基序列的互補序列的寡核苷酸含有用序列編號9~138d表示的鹼基序列的互補序列。6.根據權利要求4所述的引物，其中構成引物的核苷酸的數量為10~50個。7.根據權利要求4所述的引物，其用標記物質進行了標記。8.根據權利要求7所述的引物，其中標記物質選自放射性同位素、酶、螢光物質、發光物質、或生物素。9.胞內分枝桿菌檢測用探針，其含有下述寡核苷酸，所述寡核苷酸含有一部分或全部用序列編號1、序列編號2、序列編號3、序列編號4、序列編號5、序列編號6、序列編號7、或序列編號8表示的鹼基序列，或者一部分或全部用序列編號1、序列編號2、序列編號3、序列編號4、序列編號5、序列編號6、序列編號7、或序列編號8表示的鹼基序列的互補序列，且與胞內分枝桿菌基因的鹼基序列雜交。10.根據權利要求9所述的探針，其用標記物質進行了標記。11.根據權利要求10所述的探針，其中標記物質選自放射性同位素、酶、螢光物質、發光物質、或生物素。12.根據權利要求9所述的探針，其5'末端用報告萸光色素標記，3，末端用猝滅色素標記。13.胞內分枝桿菌的檢測方法，其特徵在於，使用下述寡核苷酸作為引物和/或探針，所述寡核苷酸含有一部分或全部用序列編號1、序列編號2、序列編號3、序列編號4、序列編號5、序列編號6、序列編號7、或序列編號8表示的鹼基序列，或者一部分或全部用序列編號1、序列編號2、序列編號3、序列編號4、序列編號5、序列編號6、序列編號7、或序列編號8表示的鹼基序列的互補序列，且與胞內分枝桿菌基因的鹼基序列雜交。14.根據權利要求13所述的檢測方法，其特徵在於，使用下述寡核苷酸作為引物，以樣品中的核酸作為模板來進行核酸擴增反應，以及檢測得到的引物延伸產物，所述寡核苷酸含有一部分或全部用序列編號1、序列編號2、序列編號3、序列編號4、序列編號5、序列編號6、序列編號7、或序列編號8表示的鹼基序列，或者一部分或全部用序列編號1、序列編號2、序列編號3、序列編號4、序列編號5、序列編號6、序列編號7、或序列編號8表示的鹼基序列的互補序列，且與胞內分枝桿菌基因的鹼基序列雜交。15.根據權利要求14所述的檢測方法，所述方法還使用了以標記物質標記的標記糹笨針。16,根據權利要求13所述的檢測方法，其特徵在於，包括下述工序，(1)使用下述寡核苷酸作為引物，以樣品中的核酸作為模板來進行核酸擴增反應，所述寡核苷酸含有一部分或全部用序列編號1、序列編號2、序列編號3、序列編號4、序列編號5、序列編號6、序列編號7、或序列編號8表示的鹼基序列，或者一部分或全部用序列編號1、序列編號2、序列編號3、序列編號4、序列編號5、序列編號6、序列編號7、或序列編號8表示的鹼基序列的互補序列，且與胞內分枝桿菌基因的鹼基序列雜交；(2)對在(1)中得到的引物延伸產物進行電泳，基於其結果判斷有無胞內分枝桿菌。17.根據權利要求16所述的檢測方法，在下述的任一種情況下，判斷被檢樣品為胞內分枝桿菌陽性，(1)在進行電泳之後，對於得到的電泳組分，確認目的鹼基對數的引物延伸產物的組分，確認了目的鹼基對數的引物延伸產物的情況，(2)在進行電泳之後，對於得到的電泳組分，使用將下述寡核苷酸用標記物質進行了標記的標記探針進行雜交，通過檢測該標記探針的標記而確認了與該標記探針雜交的組分的情況，所述寡核苷酸含有一部分或全部用序列編號1、序列編號2、序列編號3、序列編號4、序列編號5、序列編號6、序列編號7、或序列編號8表示的鹼基序列，或者一部分或全部用序列編號1、序列編號2、序列編號3、序列編號4、序列編號5、序列編號6、序列編號7、或序列編號8表示的鹼基序列的互補序列，且與胞內分枝桿菌基因的鹼基序列雜交。18.根據權利要求13所述的胞內分枝桿菌的檢測方法，其中引物用標記物質進行了標記，使用該引物以樣品中的核酸作為模板來進行聚合酶鏈反應，然後測定得到的引物延伸產物的標記。19.根據權利要求18所述的檢測方法，在進行核酸擴增鏈式反應之後，除去游離的標記引物，然後測定引物延伸產物的標記。20.根據權利要求13所述的胞內分枝桿菌的檢測方法，其特徵在於，使用將下述寡核苷酸用標記物質進行了標記的寡核苷酸作為標記探針，使該標記探針與樣品中的核酸雜交，除去游離的標記探針，然後檢測雜交了的複合體的標記，所述寡核苷酸含有一部分或全部用序列編號1、序列編號2、序列編號3、序列編號4、序列編號5、序列編號6、序列編號7、或序列編號8表示的鹼基序列，或者一部分或全部用序列編號1、序列編號2、序列編號3、序列編號4、序列編號5、序列編號6、序列編號7、或序列編號8表示的鹼基序列的互補序列，且與胞內分枝桿菌基因的鹼基序列雜交。21.胞內分枝桿菌檢測用試劑盒，其含有下述寡核苷酸作為引物和/或探針，所述寡核苷酸含有一部分或全部用序列編號1、序列編號2、序列編號3、序列編號4、序列編號5、序列編號6、序列編號7、或序列編號8表示的鹼基序列，或者一部分或全部用序列編號1、序列編號2、序列編號3、序列編號4、序列編號5、序列編號6、序列編號7、或序列編號8表示的鹼基序列的互補序列，且與胞內分枝桿菌基因的鹼基序列雜交。全文摘要本發明公開了這樣的寡核苷酸，所述寡核苷酸含有一部分或全部用序列編號1、序列編號2、序列編號3、序列編號4、序列編號5、序列編號6、序列編號7、或序列編號8表示的鹼基序列，或者一部分或全部它們的互補序列，並且與胞內分枝桿菌(Mycobacteriumintracellulare)基因的鹼基序列雜交，還公開了含有所述寡核苷酸的胞內分枝桿菌檢測用引物和探針，以及使用所述引物和/或探針的胞內分枝桿菌的檢測方法。根據本發明的檢測方法，與現有的依據菌的培養檢查法或PCR法的診斷方法比較，可以排除診斷上的假陽性，能夠更高精度且準確、並特異性地進行胞內分枝桿菌的檢測和診斷。進一步地，還能夠進行菌體的定量。文檔編號C12Q1/68GK101432426SQ20078001579公開日2009年5月13日申請日期2007年4月27日優先權日2006年5月2日發明者石川友一申請人:和光純藥工業株式會社