抗分泌因子(af)的用於優化細胞吸收的用途的製作方法

2023-12-03 04:18:21

專利名稱：抗分泌因子(af)的用於優化細胞吸收的用途的製作方法
技術領域：
本發明涉及抗分泌因子(AF)蛋白、具有等同功能活性的肽、其衍生物、其同系物、 和/或其片段、和/或其藥學活性的鹽在優化藥物和/或製劑的遞送和細胞吸收，或者基因遞送中的應用。典型地，所述藥物和/或製劑包括抗癌藥物、輻射治療、抗細菌藥物、抗病毒藥物、或者針對靶向外傷後引起的腦損傷、神經退化、寄生蟲或者炎症的後遺症的藥物。總之，本發明涉及驚奇的發現抗分泌因子(AF)能有效影響大量功能蛋白的磷酸化狀態和去磷酸化狀態之間的平衡，以及通過與CAP/ponsin(c-Cbl相關蛋白)和 FAK(粘著斑激酶)之間相互作用，它特別能干預跨膜蛋白(例如Na+-K+-2Cr協同轉運蛋白 (NKCCl))的生物活性。因此，AF能夠在紊亂和/或病理細胞中，有效調節和/或糾正所述離子通道的異常活性，從而有效糾正病理細胞的細胞內壓，進而潛在使藥物(例如，在如癌症、炎症、或外傷治療中所使用的藥物，或者在基因遞送中所使用的核酸序列藥物)的細胞吸收得到改善。本發明當然進一步也涉及上述驚奇發現的應用，即抗分泌因子(AF)蛋白及其包含AF的必要共有序列(consensus sequence)的衍生肽，通過CAP/ponsinh和FAK能夠幹預跨膜蛋白和/或特別是協同轉運蛋白，例如NKCCl的生物活性，其可以在廣泛的大量方法中用於改進藥物設計、用於篩選和/或評估潛在的AF抑制劑和/或增強劑，以及用於具有等同功能活性的、新穎或已知抗分泌因子(AF)蛋白、肽、衍生物、同系物和/或其片段、和/ 或其藥學活性鹽的效力評估和/或功能活性驗證。另一方面，AF生物學細胞功能的新發現，將進一步使設計新的可靠的診斷和/或預防工具成為可能，所述工具可以監測和/或驗證和/或增強在患有例如癌症的個體中的癌症和/或異常的組織生長或活性的治療調控。
背景技術：
細胞分泌的缺陷性調節，是從囊腫性纖維化至分泌性腹瀉和腦水腫的範圍的許多重要人類疾病的臨床表現基礎。多細胞動物細胞的尺寸和內環境調節，對其正常的功能、增殖和存活極其重要。由相對靜態的微管和中間纖維形成的細胞骨架，與動態的肌動蛋白微絲網絡，是細胞形狀、尺寸、三維形態和機械負載的傳感元件。水和離子的過量流入，將增加細胞的尺寸，例如，如果將細胞暴露於低滲的細胞外環境就會發生。相反地，高滲的細胞外環境，將會使細胞變小。 細胞的偏離正常狀態的任何偏離將會立即受到強有力地抵制，因為細胞為了生存和獲得最佳功能，其最優先做的是維持「正常」狀態。由此，肌動蛋白微絲和相關肌球蛋白1形成感測系統，對偏離正常狀態的任何偏離進行警報。肌動蛋白微絲附著於脂筏和細胞膜穴樣內陷，以及附著於聯絡複合體和細胞橋粒/細胞半橋粒、以及細胞骨架、微管和中間纖維的其他成分，從而能夠感知細胞當前的狀態。肌動蛋白微絲系統在脂筏和細胞膜穴樣內陷的胞質面與蛋白複合物連接，這樣的安排可以使肌動蛋白微絲監測到細胞的效應器部分。由此， 肌動蛋白微絲髮出的信號將誘導出反作用，使細胞維持其正常狀態。這些肌動蛋白相關蛋白為例如半乳糖結合蛋白、細絲蛋白和閥蛋白(flotillin)，它們經常形成寡聚體。閥蛋白-1和閥蛋白-2形成寡聚體，其大多數是四聚體，其將脂筏固定到肌動蛋白微絲網絡。閥蛋白-1與AF蛋白和AF-衍生肽AF-16高親和力結合，而閥蛋白-2則與肌動蛋白微絲牢固地連接。閥蛋白-1的水平可以通過游離閥蛋白-1的降解而迅速調整，以使體系保持動態。 已知閥蛋白監控某些激酶和磷酸酶，由此轉而調節跨膜蛋白的活性，例如離子泵和G-蛋白相關體系，例如NKCCs，它們的活性進一步與CAP/ponsin和FAK的含量和活性相關。藥物和基因遞送的優化，是相當感興趣的主題。通過位點特異性和靶向的遞送，藥物的控制釋放，以及尋找途徑以遞送更高濃度藥物至感興趣組織，可以實現優化，儘管有各種障礙存在。靶向遞送能夠用於降低低所需要的藥物劑量並使其毒性副作用最小化，例如這在通過免疫治療、化學治療和/或輻射的成功癌症治療中顯得相當重要。藥物的控制釋放在慢性疾病(例如外傷相關的疾病、神經退化性疾病、糖尿病、和高血壓)的處理中具有優勢。化學治療和免疫治療對於治療局部和轉移腫瘤，都是相當重要的治療方法。因為抗癌藥物既不是特異性，也不靶向癌細胞，因此，抗癌藥物至人體腫瘤組織的遞送的改善， 將是合理、有益、值得完成的挑戰。科學家通過以下技術手段增加腫瘤吸收的藥物利用度 1)持續長期作用的延遲釋放製劑；幻利用脂質體包埋藥物以延長作用效果或降低毒性；3) 在腫瘤位點給予惰性、非毒性的前藥以特異性激活；4)遞送抗體介導的藥物；或者幻結合位點特異性載體以將藥物靶向目標腫瘤。後者很大程度上取決於藥物動力學研究。在增強作用效果和降低藥物毒性方面，已經取得了一些成功。更重要的是，本領域通常已知，腫瘤對各種抗癌藥物的應答，在許多方面是依賴於腫瘤大小的。一般而言，問題部分基於以下事實整個腫瘤細胞群對於某種治療並不具有等同性應答。作為癌症生物學最新進展的結果，顯示，腫瘤的細胞異質性，是化學治療原發性和轉移性腫瘤的困難之基礎。而且，當腫瘤生長時，顯著的多樣性也在組織水平上逐步顯現。較低生長分數和較差藥物遞送的面積的增加的不均勻分布，在較大腫瘤中比較顯著。腫瘤血流的低水平和異質性分布，據認為與腫瘤組織的不均勻性在因果上相關。鑑於缺少腫瘤內淋巴系統證據，增加的間隙流體壓力可能是自然結果，其進一步阻礙腫瘤內的血流。新穎的例如為單克隆抗體、細胞因子和效應細胞的治療劑在癌症治療中的作用已經受限於它們相當數量地不能到達體內的靶體。僅僅瘤細胞的分子和細胞生物學，不能解釋這些藥劑吸收的不均一性。這並不驚奇，因為體內的實體瘤並不僅僅是癌細胞的集合體。 事實上，它包括兩種細胞外成分血管和間隙。因為不經過這些部件，血液運載的分子或細胞將不能到達癌細胞，因此，腫瘤的血管和間隙生理學，在最近幾年受到相當地關注。已鑑定出大分子在腫瘤中定位較差的三種生理學因素(i)不均勻的血液供應，(ii)增加的間隙壓力，以及(iii)較長的運輸距離。第一種因素限制了血液所載試劑至腫瘤的良好灌注區的遞送；第二種因素降低了在高間隙壓力區的流體、營養物、氧份和大分子的外滲，並還導致了在腫瘤外圍中的在實驗上可驗證的放射狀向外溢流，這與向內擴散相反。第三種因素增加了緩慢移動大分子、營養物、或氧份到達腫瘤遠端區域所需的時間。任何分子與例如抗原的結合，通過降低游離分子的濃度，可進一步降低有效擴散速率。雖然效應細胞能夠活性遷移，但是腫瘤血管系統和間隙系統的特性也可能是淋巴活性殺傷細胞和腫瘤浸潤免疫活性細胞在實體腫瘤內遞送較差的原因。基於腫瘤微觀和宏觀的異質性，相當數量的這些生理學障礙每種，都會基於同一腫瘤的不同位置和不同日期、以及不同的腫瘤變化而變化。 如果遺傳工程的大分子和效應細胞，以及低分子量的細胞毒性試劑，要達到它們的臨床期望，那麼，必須發展出策略以克服或利用這些障礙。被囊膜包裹並且有時被隔膜分隔的實體瘤經常由於增加了的流體滲漏、損傷了的血液循環和淋巴導流、以及在細胞外基質的組成和彈性方面的改變而產生出高的間隙流體壓(IFP)。這意味著在許多情形下的小動脈血壓，將導致IFP達到高水平。腫瘤細胞的膨脹也可引起IFP升高。升高的間隙流體壓力，形成了藥物遞送的障礙，因此對治療具有妨礙。在細胞轉變為惡性細胞期間，它將經歷遺傳的和後生的變化。惡性轉化也伴隨著組織動態平衡的進行性喪失和組織結構的紊亂，在腫瘤細胞侵入軟組織和轉移擴散至遠端組織和器官位點時，這最後達到頂點。癌症生物學家愈加開始認識到，該轉化過程的關鍵要素涉及到細胞的機理表現和其周圍微環境的顯著變化。這些包括細胞和組織結構的變化、 環境中的適應性壓力誘導改變、細胞外基質(ECM)中編碼的微機制線路的過程改變、以及細胞外基質的細胞定向改造。實體瘤通常比正常組織更硬，而且腫瘤具有改變的整合素。越來越多的證據顯示，癌症發展(例如細胞粘附、遷移和細胞周期進程)的關鍵步驟部分地由微環境的組成和構造所調節。癌細胞至微環境成分的粘附，和經由肌動蛋白網絡傳遞至細胞的張力，以及在病灶粘附、脂筏和細胞膜穴樣內陷處形成的信號複合物，將使癌細胞對細胞外基質的局部解剖敏感，並對生長和遷移促進機制產生出有效響應。細胞骨架，包括其肌動蛋白網絡，已知對正常、炎症和腫瘤細胞的結構與功能非常重要。例如在腦損傷中，細胞骨架局部非常紊亂而且在某種程度上隨著施加力變化而變化。 肌動蛋白微絲也在腦炎(Jennische等，2008)和霍亂毒素誘導的腹瀉(Hansson等，1984) 中分解。因此，可以確信細胞骨架對維持正常細胞尺寸和功能異常事件突發，都具有重要作用。有許多關注聚焦於膜氯離子(Cl—)通道在維持正常細胞功能中的作用，其中出現證據顯示Na+-K+-2C1_協同轉運蛋白(NKCC)作為非依賴性調節位點的重要性，它可能決定了細胞的整體分泌率。協同轉運蛋白NKCCl在基本所有的哺乳動物細胞中表達，其中，它在細胞體積的體內平衡、細胞離子的組成、以及可能細胞生長的控制中，具有比較普遍性的作用。呈現的分子證據顯示，NKCCl的功能在蛋白磷酸化、膜靶向和基因表達水平上，被短期和長期調控(Mathews，200 。因此，對細胞骨架、閥蛋白寡聚體、脂筏和效應分子例如NKCCl 之間相互作用的深入理解，促使本發明人產生癌症和神經退化性疾病的新的治療方法，以及對細胞尺寸和離子成分紊亂的一系列臨床症狀進行治療。Na-K-Cl協同轉運蛋白是轉運Na+、K+和Cl—進出多種上皮和非上皮細胞的一類膜蛋白。Na-K-Cl協同轉運蛋白介導的轉運過程，以電中性(幾乎總是以INa IK 2C1的化學計量)並且被「環」利尿劑所抑制(例如丁苯氧酸，苯甲苯氧酸，和呋喃苯胺酸)為特徵。目前，兩種不同的Na-K-Cl協同轉運蛋白異構體已被cDNA克隆和表達所鑑定；這兩種異構體所編碼基因位於不同的染色體上，其基因產物共有大約60%的胺基酸序列同一性。NKCCl (CCC 1,BSC2)異構體在多種組織中存在。含有NKCCl的最普遍上皮細胞是， 具有定位於基底外側膜的Na-K-Cl協同轉運蛋白的分泌性上皮細胞。與之相對照的是， NKCC2 (CCC2,BSC1)僅發現於腎臟，其定位於亨利氏環(Henle' s loop)和緻密斑(macula densa)升支粗段的上皮細胞的頂膜。NKCC2基因突變將導致Bartter『 s綜合症，其為以低鉀代謝鹼毒症、高鈣尿、鹽耗和體積損耗為特徵的遺傳疾病。兩種Na-K-Cl協同轉運蛋白異構體也是陽離子-氯離子協同轉運蛋白超家族的一部分，該超家族包括電中性的K-Cl和 Na-Cl協同轉運蛋白。癌細胞，其大多是非極性的，其表達高水平的NKCC，導致腫瘤細胞實際上是膨脹的，例如具有增加的尺寸。腫瘤細胞具有不太精確調節的離子泵和水通道系統， 但其仍然顯示出維持內在體內平衡的強烈傾向性。這意味著囊膜包裹的腫瘤細胞的尺寸增加，歸因於通常在實體瘤內的IFP的升高。Na-K-Cl協同轉運蛋白活性也受許多種激素刺激以及細胞體積變化的影響。在許多組織中，該調節(特別是NKCCl異構體)受調節系統磷酸化與去磷酸化之間的平衡所調控，以通過特異性的蛋白激酶或磷酸酶控制脂筏中所普遍存在的離子泵(Haas，1998)。NKCC活性誘導的細胞收縮，涉及細胞骨架與蛋白磷酸化事件之間、經由PKC和肌動蛋白輕鏈激酶(MLCK)的相互作用。Cl-分泌透過上皮細胞的滲透調節包括(i)經由 PKC, MLCK，p38，OSRl和SPAK的NKCCl的高滲透性收縮激活；(ii)低滲細胞膨脹和蛋白磷酸酶的NKCC去激活；和(iii)蛋白酪氨酸激酶作用於粘著斑激酶(FAK)，以設定NKCC的活性水平。CAP成分也被提出在某種程度上參與了 NKCC磷酸化的逐步調控，這確定了其在脂筏中的功能(Hoffmann 2007)。在電子顯微水平上，整合素β 1、FAK在酪氨酸407的磷酸化形式(ρΥ407)、以及 Na(+)、KM、2CI(_)協同轉運蛋白(NKCCl)的獨特組合，僅僅在正常細胞的基底外側膜被共同定位。這三種蛋白在等滲條件下也互相共免疫沉澱，顯示包含這三種蛋白的滲透傳感複合物。僅僅FAK pY407對低滲作用敏感而去磷酸化，而頂膜(頂膜)中的FAK pY576和細胞-細胞粘附中的ΡΥ861對低滲不敏感。已經報導，氯化細胞利用整合素β 1作為與FAK ΡΥ407去磷酸化相關聯的滲透傳感器而對低滲作用產生響應，這將導致這些上皮細胞的基底外側膜中NKCCl的去激活和NaCl分泌的抑制(Marshall，2008)。再次，腫瘤細胞通常是非極性的，由此脂筏中的離子泵總是沿著細胞表面定位，而頂端和基底外側區域不是普遍情形。因此，與癌細胞和類似警示的其他情形一樣，同樣類型的離子泵普遍存在於正常細胞中，儘管它們的定位存在不同。整合素是細胞表面受體，其部分介導細胞與細胞外基質的粘附。除了提供對組織的機體和生存所必要的分子「粘附」以外，整合素也用作動力學的信號分子。整合素允許正常的非轉化細胞去感受，它們粘附於細胞外的基質，由此提供了細胞的存活信號。該信號允許細胞在生長因子存在情形下增殖，在某些情形下阻止凋亡。整合素也在正常進程中介導細胞遷移，例如血管生成、傷口癒合、損傷修復、監測免疫系統功能、以及生長。整合素的表達和功能異常，可歸因於多種疾病和病症，包括癌症。粘著斑激酶(FAK)是非受體的酪氨酸激酶，其在多種癌症中過量表達，其在細胞粘附、遷移和錨點依賴性生長中具有重要作用(Tilgham，2007)。粘著斑激酶(FAK)在實際上的所有正常細胞中普遍存在，它在侵襲性和轉移性的結腸癌、乳房癌、甲狀腺癌、和前列腺癌中過量表達。增強的FAK免疫染色在少部分侵襲前 (原位癌)口腔癌和大部分侵襲性口腔癌細胞中可以檢測到。據推測FAK可能不是傳統的癌基因，但是可能涉及癌的侵襲和轉移進程。進一步推測FAK在腫瘤細胞亞群中的過量表達，可能導致細胞群具有侵襲和轉移的高傾向性(Kornberg，1998)。粘著斑激酶(FAK)定位於細胞外基質內的細胞粘著斑或細胞觸點。FAK被各種細胞表面受體激活，並傳輸信號至各種靶分子。FAK參與生長因子受體介導的信號途徑，它在細胞存活、增殖、遷移和侵襲中扮演重要作用。FAK的過量表達在多種腫瘤類型中被廣泛觀測到，其可用作侵襲和轉移的標記物。 FAK能夠在不同水平被治療性靶向，例如在FAK基因轉錄水平利用siRNA調節其轉錄因子， 在FAK mRNA水平利用FAK siRNA，或者在蛋白水平。在蛋白水平，FAK在粘著斑處定位於脂筏，可能受結構域陰性的FAK相關非激酶或其粘著斑向結構域的表達所幹預，FAK的激酶活性可能被FIP200、FAK激酶結構域相互作用蛋白、以及激酶活性抑制劑所抑制。最近幾年，研究集中在發展針對FAK轉錄和激活的小分子抑制劑，以提供潛在腫瘤治療的另外方法(Lis.2008)。另一分子涉及到細胞內分子的磷酸化，調節信號的傳導與控制，以及決定離子泵的活性水平，它是CAP，其是CbI原癌基因產物的修飾蛋白。CAP在閥蛋白和FAK之間，在脂筏的胞質小葉處，作為信號路徑的聯接。CAP也以名稱ponsin而知曉。該名稱反映，該因子原先是在過表達腫瘤中所分離和鑑定，因此命名為原癌基因產物，然而接著發現其在正常細胞中也普遍存在。抗分泌因子是41kDa蛋白，其原先描述為對腹瀉疾病和腸道炎症提供保護(for a review, see Lange and Lonnroth，2001)。抗分泌因子(AF)蛋白已被測序，其cDNA已被克隆。抗分泌活性據認為是由位於抗分泌因子(AF)蛋白序列的胺基酸位置35至50之間的肽所主要賦予，該肽包括至少4-16個，例如4，6，8或16個保守序列的胺基酸。免疫化學和免疫組織化學研究顯示，抗分泌因子(AF)蛋白存在並且可能也被身體的大部分組織和器官所合成。合成肽，包括抗腹瀉序列，在先前已明確(W0 97/08202 ；WO 05/030246)。抗分泌因子(AF)蛋白和肽先前被公開用於調理病流體傳遞和/或炎症反應，例如在霍亂毒素激發後的腸道和中樞神經系統脈絡叢(W0 97/08202)。能誘導AF內源性合成或服用額外 AF的食物和飼料，因此在WO 97/08202中被認為在治療水腫，腹瀉，脫水和炎症中有用。WO 98/21978公開了具有酶活性的產品，在製備誘導抗分泌因子(AF)蛋白形成的食物中應用。 WO 00/038535進一步公開了富含抗分泌因子(AF)蛋白及類似的食品。抗分泌因子(AF)蛋白及其片段也顯示，在與細胞減少和/或增多相關的治療條件下，可以改善神經組織的修復，幹細胞、祖細胞及其衍生細胞的增殖、凋亡、分化、和/或遷移(W0 05/030246)，對於治療和/或預防幽閉症(W0 07/126363)，它也在治療和/或預防眼內高壓中同樣有效(W0 07/126364) 0更重要的是，本發明人最近發現，抗分泌因子能夠監控和/或有利影響膜內脂筏、 受體和/或細胞膜穴樣內陷的結構、分布和其多種功能，因此，它可以用於治療和/或預防細胞膜內脂筏和/或細胞膜穴樣內陷的結構紊亂和功能異常(wo 07/U6365)。令人驚奇地是，本發明人現在可以證明，同樣的抗分泌因子能夠幹預上述跨膜蛋白的生物活性，例如經由FAK和CAP的NKCCl，因此，可以在病理和/或紊亂細胞中直接調節離子通道的病理學活性，有效調節所述細胞的細胞內壓和跨膜蛋白功能，由此，允許改進用於例如癌症的治療中的藥物的吸收。

發明內容
本發明涉及包含抗分泌因子(AF)蛋白、抗分泌因子(AF)蛋白的具有抗分泌和/或等同功能和/或類似活性的同系物、衍生物、肽、和/或片段的藥物組合物在製備用於優化第二或者另外的藥物和/或製劑的遞送和/或細胞吸收的藥物組合物的用途，抗分泌因子(AF)蛋白優選選自由下列式的序列所組成的抗分泌因子(AF)蛋白、或者其不改變多肽的功能的修飾物、或者其藥學活性的鹽X1-V-C-X2-X3-K-X4-R-X5,其中Xl為I、SEQ ID NO 6的胺基酸1_35、或者缺失，X2為H、R或K，X3為S或L， X4 為 T 或 A，X5 為 SEQ ID NO 6 的胺基酸 43-46、43-51、43-80 或 43-163、或者缺失。典型地，所述第二或另外的藥物和/或製劑包括抗癌藥物、輻射治療藥物、抗細菌藥物、抗病毒藥物、和/或針對外傷後所引起損傷、神經退化、寄生蟲、或炎症症狀的藥物。本發明在另一同樣優選的方面還涉及抗分泌因子(AF)蛋白、其具有等同功能活性的肽、衍生物、同系物和/或片段、和/或其藥學活性的鹽在優化遞送和基因遞送的細胞吸收中的用途。總之，本發明涉及令人驚奇地發現抗分泌因子(AF)特別地能干預跨膜蛋白的生物活性，例如其通過與CAP/ponsin (c-Cbl相關蛋白)和/或FAK (粘著斑激酶)相互作用而幹預NKCCl。AF先前已知與閥蛋白1和2共存，閥蛋白1和2是固定在細胞膜脂筏中的的一種蛋白並與肌動蛋白和CAP結合，CAP轉而以其非磷酸化形式與FAK的SHP-2/PTPD1結構域和SH3結合。本發明首次表明AF能夠有效地調節CAP和FAK與NKCCl的相互作用，可引起非耦聯磷酸化FAK的發生。通過NKCCl複合物中的非耦聯FAK，離子通道被有效關閉。本發明的發明人首次顯示充分證據，AF能夠調節CAP與閥蛋白1和2的結合，以及CAP與FAK 的SHP-2/PTPD1結構域的結合，因此能夠有效幹預閥蛋白1和2的寡聚體及其與細胞膜中脂筏的結合。本發明的發明人進一步首次顯示，AF可以有效地幹預蛋白磷酸酶。通過上述記載的生物活性，AF能夠有效監控跨膜蛋白(例如細胞膜中NKCCl離子通道)的異常功能和/或使跨膜蛋白的異常功能正常化。在健康細胞中，NKCC1/FAK/CAP複合物在磷酸化與非磷酸化狀態之間顯示出自然平衡，由此，多種細胞內和細胞外的效應器(例如受體和滲透壓)能夠進行以及有助於離子通道狀態的精細調控。在病理和/或紊亂細胞中，離子通道NKCC1/FAK/CAP複合物的精細調控狀態被擾亂，由此離子通道持續活化。由此，例如轉化細胞的細胞內壓通常要高於健康細胞。在病理細胞中，FAK持續被去磷酸化，並且與NKCCl複合物結合。基於AF可獨特地能夠監控NKCCl 複合物中的FAK，由此FAK被磷酸化，由此AF能夠有效地使病理細胞的細胞內壓正常化，由此而潛在地使得改善藥物(例如在癌症治療中所使用藥物)的細胞吸收。結果，使病理細胞的細胞內壓正常化進而也能有助於使病理組織中的間隙壓正常化。應該強調，異常的細胞內離子水平，將會導致發生通過例如水孔蛋白(水通道)進行的水轉移。在各種疾病的藥理學治療中，眾所周知的缺點是，必須增加給予患者藥物在最適宜劑量之上的劑量，因為藥物不能被病理細胞有效的吸收。本發明使得能夠利用已證實無毒、可生物降解、內源性的小分子來使病理細胞的細胞內壓正常化，由此潛在地允許改善任一藥物的細胞吸收，從而使由於所述活性的另外的組分的過量給藥而導致嚴重副作用的風險最小化。
而且，抗分泌因子(AF)已經證實對健康的正常細胞沒有不利效應，但是它僅僅只對病理細胞具有使其正常化的作用。相反地，抗分泌因子(AF)蛋白、其具有抗分泌和/或等同功能和/或類似活性的同系物、衍生物和/或片段、或者其藥學活性的鹽的給藥反而可能甚至幫助在病理和/或紊亂細胞鄰近的健康細胞獲得NKCC1/FAK/CAP複合物磷酸化與非磷酸化狀態之間的最佳平衡。而且，許多年來一直已知，包括某些數量麥芽穀物的特異性食物，可以誘導患者血液抗分泌因子的身體自身內源性生產和/或激活。因此，在治療前、治療期間和/或治療後，通過簡單餵服待用某種物質治療或將進行某種治療的患者例如為在WO 1998/21978或 WO 05/030246中所記載的食物，則可有效引致病理細胞的細胞內壓和/或病理組織的間隙壓力的類似的正常化。由此可有效和廉價地地改善藥物(例如抗癌藥物，輻射治療藥物，抗細菌藥物，抗病毒藥物，或者靶向外傷後所引起損傷、神經退化、寄生蟲、或炎症的藥物)的細胞吸收。本發明當然還進一步涉及上述驚奇發現的用途，即抗分泌因子(AF)能夠在大量的方法中幹預跨膜蛋白(例如離子通道，尤其是經由FAK的NKCC1)的生物活性，用於改進藥物設計、用於篩選和/或評估潛在的AF抑制劑和/或增強劑、以及用於效力評估和/或功能活性驗證新穎或已知的抗分泌因子(AF)蛋白、其具有等同功能活性的肽、衍生物、同系物和/或片段、和/或其藥學上活性的鹽。例如，磷酸化FAK與非磷酸化FAK可以通過特異性的商業可獲得的抗體而輕易區分。如本發明人清楚地所示培養物中的未處理MATB細胞(AtCC N. :CRL-1666，名稱13762 MATB 111)可顯示出磷酸化FAK的清晰標記。當將其置於可激活細胞NKCCl通道的高滲溶液，磷酸化FAK的水平被顯著降低，即NKCCl被激活、細胞膨脹。在本文的澱粉對照中，用AF 處理不僅恢復了而且清楚地誘導了培養細胞中磷酸化FAK的顯著的高水平，即NKCCl被關閉、細胞尺寸歸為正常。用於改進藥物設計、用於篩選和/或評估潛在的AF抑制劑和/或增強劑、以及用於效力評估和/或功能活性驗證新穎或已知的抗分泌因子(AF)蛋白、其具有等同功能活性的肽、衍生物、同系物和/或片段、和/或其藥學上活性的鹽的標準方法在本領域中是眾所周知的，而且它們中的一部分被進一步記載在本申請的具體實施方式
部分。在另一方面，本發明還涉及包含抗分泌因子(AF)蛋白、其具有等同功能活性的同系物、衍生物和/或片段、或者其藥學上活性的鹽的藥物組合物的用途，它們用於製備治療和/或預防選自下列組的各種醫學病況的藥物組合物癌症相關醫學病況、腫瘤或腫瘤相關病況、感染、炎症、外傷後的腦損傷、神經退化和寄生蟲。再一方面，本發明涉及新發現的AF生物細胞功能的用途，其用於設計新的可靠的診斷和/或預後工具，用於在患有腫瘤疾病(例如癌症)的個體中，監控和/或驗證和/或加強惡性腫瘤的治療性調控。在優選的實施方式中，本發明所應用的所述抗分泌因子(AF)蛋白，由下列式的序列或者其不改變多肽或肽的功能的修飾物所組成X1-V-C-X2-X3-K-X4-R-X5,其中Xl為I、SEQ ID NO 6的胺基酸1-35、或者缺失，X2為H、R或K，X3為S或L， Χ4 為 T 或 Α，Χ5 為 SEQ ID NO 6 的胺基酸 43-46、43-51、43-80 或 43-163、或者缺失。
本發明還涉及適合於期望治療目的、以及患者年齡、性別、症狀等的各種給藥劑量和給藥途徑。


圖1 經受壓力和AD處理的游離MAT B III腫瘤的細胞計數分析。對10000個細胞進行FACS分析顯示FSC-水平中值，瓶1為620(對照)，瓶2 為450 (高滲NaCl 5分鐘)，瓶3為514(高滲NaCl+AF-16，60分鐘)，瓶4為576 (高滲 NaCl+PBS,60 分鐘)。圖2 利用針對磷酸化FAK的抗體進行的免疫組織化學分析，可在對照細胞中顯示出強烈的紅色染色(瓶1)，而瓶4中的細胞(PBS-處理)具有顯著較低的強度。用AF-16 處理的細胞(瓶3)，顯示出與對照細胞相似的染色強度。A.處理前。B.用高滲NaCl處理， 之後接著PBS處理。C.用高滲NaCl處理，之後接著AF-16處理。將細胞處理，以顯示磷酸化的FAK (pFAK)，紅色螢光。細胞核被染成藍色(DAPI)。強染色=高水平的pFAK，即NKCCl通道被關閉。弱染色=低水平的pFAK，即NKCCl通道被開啟。圖3 在一系列實驗中將GMK培養於固體表面，以藉助鬼筆環肽-FITC以免疫組織化學闡明肌動蛋白微絲的存在和分布。A =未處理的正常的GMK細胞，其粘附於表面培養(對照)，並且其被處理以利用鬼筆環肽-FITC複合物，以顯示出肌動蛋白微絲。細胞核被染成藍色。B=用細胞鬆弛素B處理，可以使肌動蛋白網絡解體，並且僅有一些群簇可以保持在細胞質中C =用細胞鬆弛素B和AF-16共同處理，可產生肌動蛋白網絡的部分恢復。因此， AF-16可以部分使細胞的肌動蛋白細胞骨架正常化。圖 4 A = L 1 對照B =瓶4高滲NaCl+賦形劑，60分鐘C =瓶 3 高滲 NaCl+AF-16，60 分鐘圖5 將大鼠MAT B III腫瘤細胞的外廓低溫切片預處理60分鐘，用賦形劑(上排，A-B)或者用AF-16(下排，C-D)，在靜脈內注射阿黴素之前進行所述預處理。在注射阿黴素之後15分鐘，將大鼠處死。阿黴素與DNA的結合，將在與藥物接觸的細胞核中，產生出紅色螢光。在用賦形劑(A和B)預處理的大鼠腫瘤中，僅有分散的細胞核被染色。在用AF-16 預處理的大鼠腫瘤細胞中，大多數細胞核被染色。這顯示用AF-16預處理可以有效增加細胞生長抑制藥物對腫瘤細胞核的進入滲透。比例尺=100 μ m定義與縮寫縮寫IFP:間隙流體壓力；
PBS 磷酸緩衝鹽水；AF 抗分泌因子，AF-16 由胺基酸 VCHSKTRSNPENNVGL ；八肽 IVCHSKTR ；七肽 VCHSKTR ；六肽 CHSKTR ； 五肽HSKTR所組成的肽；FSC:前向散射計數SSC:側向散射計數SPC 特別地加工過的穀類食物定義蛋白是指由肽鍵連接在一起、由胺基酸殘基所構成的生物學大分子。蛋白，當作為胺基酸的線性多聚體時，也被稱為多肽。典型地，蛋白具有50-800個胺基酸殘基，因此具有約6，000至約幾十萬道爾頓或更大範圍的分子量。較小的蛋白稱為肽、多肽或寡肽。術語 「蛋白」、「多肽」、「寡肽」、和「肽」，可以在本文內容中交換使用。「藥物組合物」，在本文中是指包含治療活性量的抗分泌因子(AF)蛋白的組合物， 可選地與藥學活性的賦形劑，例如載體或賦形劑進行組合。所述藥物組合物被製成用於適合的給藥途徑，其可以根據患者的症狀和諸如年齡或喜好等的其他因素而進行變化。包含抗分泌因子(AF)蛋白的藥物組合物，可以用於藥物遞送系統。該給予的藥物組合物，給人體或動物體可提供活性成分。所述藥物組合物可以是，例如片劑、丸劑、錠劑、膠囊、大丸劑、 凝膠、溶液等等，但不限於此。術語「藥學活性的鹽」，是指抗分泌因子(AF)蛋白的鹽，其可以基於所稱 Hofmeiser' s系列的任何衍生出的鹽。藥學活性的鹽的其他實例，包括三氟乙酸鹽、乙酸鹽、和賴氨酸氯化鹽，本發明不限於此。術語「抗分泌」在本文中是指，抑制或降低分泌、特別是腸道的分泌。因此，術語「抗分泌因子(AF)蛋白」是指，能夠抑制或降低身體分泌的蛋白。在本文中，「等同功能和/或類似活性」涉及到抗分泌因子(AF)蛋白、肽、或多肽、 或者其同系物、衍生物或其片段的生物效應，即其能夠優化藥物和/或製劑的遞送和細胞吸收。驗證和/或測量這種能力的標準實例，是本領域眾所周知的。本申請的實驗部分給出了實施例，例如實施例1-6。在本文中，「抗分泌因子(AF)蛋白」或其同系物、衍生物或其片段，可以與WO 97/08202中定義的術語「抗分泌因子」或「抗分泌因子蛋白」交換使用，它們指的是具有抗分泌和/或等同功能和/或類似活性的抗分泌因子(AF)蛋白、或肽、或同系物、或衍生物、 和/或其片段，或者指其不改變多肽功能的修飾物。因此，應當理解，「抗分泌因子"，「 抗分泌因子蛋白"，「抗分泌肽"，「抗分泌片段"，或者本文中的"抗分泌因子(AF)蛋白"，也可以指其衍生物、同系物或片段。這些術語都可以在本發明的內容中交換使用。而且，在本文中，術語"抗分泌因子"可以縮寫為"AF"。本文中的抗分泌因子(AF)蛋白也指先前定義在W097/08202和WO 00/38535中的具有抗分泌特性的蛋白。抗分泌因子也已經公開在例如WO 05/030246中。術語抗分泌因子也期望為富含抗分泌因子的卵黃物，其公開於SE 900(^8-2和WO 00/38535，下文中將進一步描述。「醫療食品」，在本文中是指，食品或者特定食用的食物，其用含有抗分泌因子(AF) 蛋白的組合物製備，或者可選地其能夠誘導內源性AF的合成或激活。所述食品可以是任何合適的液態或固態食品，例如液體或粉末，或者任何其他合適的食物。該物質的實例可以在 WO 0038535或WO 91/09536中找到。所述成分也可以引導抗分泌因子(AF)蛋白的吸收、形成和釋放。「噴霧劑」，在本文中，是指以薄霧經由呼吸道，遞送液體藥物的醫療裝置。「噴霧劑」的壓縮裝置，使空氣經由管道進入充滿液體藥物的藥杯。空氣張力將液體碎分成微小的霧狀顆粒，以被深吸入至呼吸道。術語「氣溶膠」，在本文中是指精細固體或液體顆粒的氣體懸液。在本文中，所用的術語「細胞抑制劑」以及「細胞抑制藥物」、「細胞抑制試劑」或 「細胞抑制化合物」，這些術語可以交換使用，它們涉及在癌症治療中使用的藥物，典型地在經過化療後給予患者。細胞抑制試劑為不僅控制病理細胞而且控制正常細胞生長的物質。 因此，這樣的物質不僅可以用於化學治療腫瘤，而且可以用於腫瘤去除後的術後治療。細胞抑制劑可以為液體、粉末、或顆粒形式，可選地也可被深度冷凍。本領域的技術人員可從多種商業可獲得的細胞抑制劑中，調整細胞抑制劑的選擇和用量。發明詳述本發明涉及監控與細胞中的調控所述細胞的尺寸和其內在環境的系統相關的細胞功能的新方法。抗分泌因子(AF)蛋白、其具有等同功能活性的肽、衍生物、同系物、和/ 或片段、或者其不改變多肽功能的修飾物、和/或其藥學活性的鹽，在本文可用於優化藥物和/或製劑的遞送和細胞吸收。所述藥物和/或製劑在本文中選自下列的組抗癌藥物，抗腫瘤藥物，輻射治療藥物，抗細菌藥物，抗病毒藥物，靶向外傷後所引起損傷的藥物，靶向神經退化的藥物，靶向寄生蟲的藥物，以及抗炎症的藥物。總之，本發明涉及令人驚奇的發現，AF可以用於糾正具有損傷尺寸和內在細胞環境的細胞的結構和功能。例如，抗分泌因子(AF)先前已經顯示能夠幹預細胞骨架及其與脂筏和細胞膜穴樣內陷、細絲蛋白、半乳糖結合蛋白和閥蛋白複合物的結合，它現在進一步描述為有效用於通過與CAP/ponsin (c-Cbl相關蛋白)和FAK(粘著斑激酶)相互作用而監控例如為NKCCl的離子泵的活性。不希望受限於單一科學的假設，本文可以預想AF通過其先前文獻記載中的對cAMP細胞水平的影響，而至少施加了對NKCCl的部分調節作用，進而在多種功能蛋白(例如CAP/ponsin(c-Cbl相關蛋白)和/或FAK(粘著斑激酶))的磷酸化與去磷酸化狀態之間產生平衡效應。這些蛋白的功能因此被AF的水平所影響。例如，AF對在FAK磷酸化與去磷酸化狀態之間的平衡的作用，已被本發明人所證明，其記載在實驗部分。而且，本發明人進一步能證明，AF與磷酸酶之間的關聯。如實驗部分所示，AF-16顯示可以阻止細胞偏離正常狀態，其高度優先於使細胞正常化。由此，本發明人預料不到地證明了 AF-16使紊亂細胞轉變正常的能力的重要性，例如已揭示的對於一系列細胞系統組織和器官的重要性。AF在紊亂和病理細胞中有效調節所述離子通道的異常活性和/或使所述粒子通道的異常活性正常化，由此有效使細胞的尺寸和細胞內壓正常化，進而還能夠使紊亂組織的間隙壓力正常化，由此潛在地使得藥物具有改善的細胞吸收，該藥物例如為在癌症、炎症和外傷治療中使用的那些藥物。本發明當然還進一步涉及上述記載的令人驚奇地發現的用途，抗分泌因子(AF) 經由與CAP/ponsin (c-Cbl相關蛋白)和FAK (粘著斑激酶)相互作用，通過調節NKCCl，可以幹預調節紊亂的細胞尺寸和內在細胞環境的細胞系統的生物活性，其可以在廣泛的方法中用於改進藥物設計、用於篩選和/或評估潛在的AF抑制劑和/或增強劑、以及用於效力評估和/或功能活性驗證新穎或已知的抗分泌因子(AF)蛋白、其具有等同功能活性的肽、 衍生物、同系物和/或片段、和/或其藥學上活性的鹽。本發明涉及包括抗分泌因子(AF)蛋白、其具有等同功能活性的肽、衍生物、同系物、和/或片段、或者其不改變多肽功能的修飾物，和/或其藥學活性的鹽的藥物組合物的用途，該用途為用於製備用於優化第二或另外的藥物和/或製劑的遞送和/或細胞吸收的藥物組合物。典型地，所述第二或另外的藥物和/或製劑，包括抗癌藥物，輻射治療藥物，抗微生物藥物，抗細菌藥物，抗病毒藥物，靶向外傷後所引起損傷的藥物，靶向神經退化的藥物，靶向寄生蟲的藥物，以及靶向炎症的藥物。再一方面，本發明涉及包括與第二或另外的藥物和/或製劑聯用的抗分泌因子 (AF)蛋白、具有等同功能活性的肽、衍生物、同系物、和/或片段、或者其不改變多肽功能的修飾物、和/或其藥學活性的鹽的藥物組合物，以及它們在醫藥中的應用，特別是本申請中記載的在治療各種醫學適應症中的應用，其中所述第二或另外的藥物和/或製劑選自下列的組抗癌藥物，輻射治療藥物，抗細菌藥物，抗病毒藥物，靶向外傷後所引起損傷的藥物， 靶向神經退化的藥物，靶向寄生蟲的藥物，或靶向炎症的藥物，等等。進一步地，所述藥物組合物當然可以包括兩種或多種抗分泌因子(AF)蛋白、片段或衍生物、或它們的組合，以及可進一步包括藥學上可接受的賦形劑。在本發明的優選實施方式中，抗分泌因子(AF)蛋白、其具有等同功能活性的肽、 衍生物、同系物、和/或片段、和/或其藥學活性的鹽顯示能夠在惡性和/或病理細胞中克服細胞屏障，由此可以用於降低需要的藥物劑量，可選地可以用於使所述藥物和/或製劑的劑量效果最大化。因此，所述上述記載的AF能夠用於使所述藥物和/或製劑的毒性或不期望的副作用最小化。本發明涉及包括抗分泌因子(AF)蛋白、其具有抗分泌和/或等同功能和/或類似活性的同系物、衍生物、和/或片段、或者其藥學活性的鹽的藥物組合物的用途，該用途為用於製備優化第二或另外的藥物和/或製劑的遞送和/或細胞吸收的藥物組合物。AF與第二或另外的藥物和/或製劑，可以同時或者依次給藥。它們可以製成單一製劑或者以單獨的製劑給藥。如實驗1所記載的，AF-16在腫瘤細胞中在幾小時內暫時降低IFP，此後IFP在24h 內恢復至原始高位。初步地認為，該受到時間限制的對IFP的抑制作用可能與改善了的腫瘤的血液循環和代謝相關，其可能增強輻射治療的功效。因此，在輻射治療期間血流的增加，將會產生更多的游離基，這在消除惡性細胞中將會更加有效。因此，本發明目前優選的實施方式是，包含根據本發明的抗分泌因子(AF)蛋白、 其同系物、衍生物、肽、和/或片段的藥物組合物在用於製備用於優化輻射治療的藥物組合物。而且，基於細胞IFP降低的暫時性和可逆性，臨床醫師可以容易地設想給藥途徑， 其中AF以最佳時間間隔被給藥，該時間間隔被調整成使得恰好當給予第二或另外的藥物和/或製劑時，靶細胞中的IFP被降低。因此，另一同樣優選的實施方式涉及優化第二或另外的藥物和/或製劑的遞送和/或細胞吸收的方法或者給藥劑量方案，其中所述第二或另外的藥物和/或製劑包括抗癌藥物，輻射治療藥物，抗細菌藥物，抗病毒藥物，和/或靶向外傷後所引起損傷、神經退化、 寄生蟲、或炎症的藥物。AF與第二或另外的藥物和/或製劑，可以同時或者依次給藥。它們可以製成單一製劑或者在單獨的製劑的形式給藥。另一方面，本發明涉及包括抗分泌因子(AF)蛋白、其具有等同功能活性的同系物、衍生物、和/或片段、或者其藥學活性的鹽的藥物組合物的應用，該應用為用於製備優化第二或另外的藥物和/或製劑的遞送和/或細胞吸收的藥物組合物，該第二或另外的藥物和/或製劑用於治療和/或預防選自下列組的各種醫學病況癌症、腫瘤或腫瘤相關病況、輻射治療、感染、外傷後引起的損傷、神經退化、寄生蟲傳染、以及炎症。本發明還涉及適於期望目的的治療、以及患者的年齡、性別、症狀等等的各種給藥劑量和途徑。藥物組合物在本文可以製成眼內、鼻內、口腔、局部、皮下和/或系統給藥，例如能夠製成以噴霧劑、氣霧劑、和吸入劑、或者通過霧化器給藥。當製成系統給藥至血液時，所述組合物優選製成以0. 1 μ g-10mg/次/kg體重/天的劑量，例如以0. 1 μ g-lmg/次/kg體重 /天，再優選以1-500 μ g/次/kg體重/天，例如以1-50 μ g/次/kg體重/天或1-100 μ g/ 次/kg體重/天。這樣的給藥可以單劑量或者每天多次施用。使用的極為寬範的有效劑量方案顯示，副作用和不期望的併發症風險極微。因此， 本發明使得能夠對細胞和組織進行過度負載治療，以及能夠用寬範的與個體的應答以及疾病和/或不適的嚴重程度相配的劑量治療患者。本發明的藥物組合物，一方面，能夠通過局部、原位局部、口服、鼻內、皮下、和/或經由血管或經由呼吸道的全身系統地施加而給藥。本發明當然還進一步涉及上述記載的令人驚奇的發現用在用於改進藥物設計、用於篩選和/或評估潛在的AF抑制劑和/或增強劑、以及用於效力評估和/或功能活性驗證新穎或已知的抗分泌因子(AF)蛋白、其具有等同功能活性的肽、衍生物、同系物和/或片段、和/或其藥學上活性的鹽的大量方法中的應用，該發現為抗分泌因子(AF)能夠通過FAK 幹預NKCCl和其他跨膜蛋白的生物活性。例如，通過特異性和商業可獲得的抗體，可以將磷酸化的FAK與非磷酸化的FAK， 進行容易地區分。如本發明人清楚地所證實，培養物中的未處理MATB細胞(已建立的乳房癌細胞系)，可顯示出磷酸化FAK的清晰標記。當將其置於可激活細胞NKCCl通道的高滲溶液中，則磷酸化FAK的水平顯著降低，即NKCCl被激活、細胞膨脹。在本文的澱粉對照中，用 AF處理不僅恢復了而且清楚地誘導了培養細胞中磷酸化FAK的顯著的高水平，即NKCCl被關閉、細胞尺寸歸為正常。因此，在一當前優選的實施方式中，本發明涉及改進藥物設計的方法，其特徵在於，針對本申請所涉及物質或者藥物製劑的治療、對細胞或組織的應答進行測試，然後通過例如測量磷酸化FAK的量而評估AF、抗分泌因子(AF)蛋白、片段或衍生物、或者其組合對所述物質或製劑細胞吸收的影響。在另一同等優選的實施方式中，本發明涉及篩選和/或評估潛在的AF抑制劑和/ 或增強劑的方法，其特徵在於，選擇化學或生物學物質，將抗分泌因子(AF)蛋白、具有等同功能活性的肽、衍生物、同系物和/或其片段、和/或其藥學活性的鹽暴露於所述選擇的物質，然後通過測量磷酸化FAK的數量情形，來確定所述暴露的AF可在NKCCl複合物中阻斷 FAK去磷酸化的可能性。在該特定的優選實施方式中，所述檢測方法以高通量的篩選進行。本文還涉及用於效力評估和/或功能活性驗證新穎或已知的抗分泌因子(AF)蛋白、具有等同功能活性的肽、衍生物、同系物和/或其片段、和/或其藥學上活性的鹽的另外的方法，其特徵在於，通過檢測和定量磷酸化FAK的出現率，來確定所述新穎或已知的AF的在NKCCl複合物中阻斷FAK去磷酸化的可能性。上述記載的任一方法，典型可選地，可以在細胞系統或者實驗生物中進行。該方法也可以等同地應用於體內、原位、和矽系統。標準方法-用於改進藥物設計，-用於篩選和/或評估潛在的AF抑制劑和/或增強劑，-用於效力評估和/或功能活性驗證新穎或已知的抗分泌因子(AF)蛋白、具有等同功能活性的肽、衍生物、同系物和/或其片段、和/或其藥學上活性的鹽，它們都是本領域眾所周知的。再一方面，本發明涉及新發現的AF生物細胞功能的應用，該應用為用於設計新的可靠的診斷和/或預後工具，以在患有癌症的個體中，監控和/或驗證和/或加強惡性腫瘤的治療性調控。在本發明的一個實施方式中，抗分泌因子(AF)蛋白、具有等同功能活性的肽、衍生物、同系物和/或其片段被用作各個腫瘤類型和/或癌症形式侵襲和/或轉移的標記。抗分泌因子(AF)蛋白、具有等同功能活性的肽、衍生物、同系物和/或其片段、和 /或其藥學活性的鹽特別對FAK磷酸化狀態的直接調節效應，使得所述AF本身將為癌症和 /或腫瘤治療的潛在候選藥物。抗分泌因子是體內自然形成的一類蛋白。人類的抗分泌因子蛋白為41kDa蛋白， 從垂體腺分離時，包括382-288個胺基酸。根據本發明的與對使NKCCl正常化的有益作用相關的活性位點位於鄰近該蛋白的N-末端的區域，特別是定位於SEQ ID NO 6的胺基酸 1-163，更特別地是抗分泌因子(AF)蛋白序列的胺基酸位置35-50。包括所述共有序列的至少4-6個胺基酸的任一肽或者多肽或者其不改變多肽和/或肽的功能的修飾物可以施加該生物學作用。本發明人顯示抗分泌因子與蛋白Sfe和RpnlO在某些程度上同源，所述蛋白構成在所有細胞中普遍存在的成分26S蛋白體的亞基，更特別地是在19S/PA700帽中。在本發明中，抗分泌因子(AF)蛋白定義為具有相同功能特性的一類同源性蛋白。蛋白體具有多種功能，其涉及多餘的蛋白、以及短期不期望的、變性的、錯誤摺疊的、以及其他異常的蛋白的降解。而且，抗分泌因子/Sfe/Rpn 10涉及細胞成分、更確切地涉及蛋白的分布和運輸。抗分泌因子也與angiocidin高度相似，其是已知結合血小板反應蛋白_1並且與癌症進展相關的另一蛋白異構體。本發明的抗分泌因子(AF)蛋白和/或肽的同系物、衍生物和片段，都具有能夠用於製備用於優化另外的藥物和/或製劑的遞送和/或細胞吸收的食用藥物、以及用在治療例如為腫瘤和腫瘤相關病況、感染、炎症、和/或寄生蟲引起的病況的疾病的方法中的類似生物活性。本文中的同系物、衍生物和片段，包括天然形成的抗分泌因子(AF)蛋白的至少4 個胺基酸，其可以在不改變多肽和/或肽的必要功能的情形下通過改變一個或多個胺基酸進一步修飾，以優化抗分泌因子的生物活性，用於優化本發明涉及的第二藥物和/或製劑的遞送和/或細胞吸收。抗分泌因子(AF)蛋白的片段通常包括製備物中的肽/胺基酸序列或其片段，其中，製備物中多於90% (例如95^^96%,97^^98%或99%)的蛋白，為本發明的蛋白、肽、 和/或其片段。而且，與本發明抗分泌因子(AF)蛋白、肽、同系物、衍生物和/或片段的胺基酸序列至少70 %同一性的任何胺基酸序列(例如至少72 %，75 %，77 %，80 %，82 %，85 %，87 %， 90%，91%，92%，93%，94%，95%，96%，97%，98%，或 99% 同一性的序列)也認為在本發明的範圍內。在本文中，術語同源性與同一性可以交換使用，也就是，與另一胺基酸序列具有特定程度同一性的胺基酸序列將與該特定胺基酸序列具有相同程度的同源性。本文中的衍生物指，具有與本文所定義抗分泌因子等同活性和/或功能等同活性的蛋白，其或者直接或者修飾或者部分取代而衍生於另一物質，其中一個或多個胺基酸被另一的胺基酸所取代，該另一的胺基酸可以是修飾或非天然的胺基酸。例如，本發明的抗分泌因子衍生物，可以包括N末端和/或C末端保護基團。N末端保護基團的一個實例包括乙醯基。C末端保護基團的一個實例包括醯胺基。具有與參考胺基酸序列至少例如95%同一性的胺基酸序列的蛋白、同系物、衍生物、肽和/或其片段被用於指除了所述胺基酸序列可以包括參考胺基酸序列每100個胺基酸有多達5個的位點突變以外，例如為所述肽的胺基酸序列與參考序列完全相同。換句話說，要獲得具有胺基酸序列與參考胺基酸序列至少95%同一性的多肽，那麼，參考序列中多達5%的胺基酸可以被刪除或者被另一胺基酸所取代，或者參考序列中全部胺基酸的多達 5 %的胺基酸的數量可以插入至該參考序列。參考序列的這些突變，可以發生在參考胺基酸序列的氨基或羧基末端位置，或者在那些末端位置之間的任何位置，或者在參考序列的胺基酸中分別散布，或者在參考序列內以一個或多個毗連基團散布。在本發明中，局部運算程序(local algorithm program)最適於確定同一性。局部運算程序(例如Smith Waterman)將一個序列的子序列與另一序列的子序列進行比較， 然後尋找子序列的組合和那些子序列的隊列，由此產生最高的總相似度得分。如果允許，存在內部空隙將被罰分。局部運算能有效的用於比較兩個多結構域的蛋白，所述蛋白具有單一的結構域或者僅共有結合位點。確定同一性和相似性的方法，已被編寫為公眾可獲得的程序。確定兩個序列間同一性和相似性的優選的電腦程式方法，包括但不限於GCG程序包(Devereux，J等(1994)) BLASTP，BLASTN，和 FASTA(Altschul，S. F.等(1990))。BLASTX 程序從 NCBI 和其他資源 (BLAST Manual, Altschul, S. F.等，Altschul，S. F. et al (1990))中公開地獲得。每一序列的分析程序，具有默認的得分模型和默認的空隙罰分。總之，分子生物學者可以期望使用所用軟體程序所建立的默認設置。本文所定義的抗分泌因子(AF)蛋白或肽、或其具有等同活性的同系物、衍生物和 /或片段，能夠包括4個胺基酸或更多，例如5-16個胺基酸，例如5,6,7,8,9,10，11，12，13， 14，15，16，17，18，19或20個胺基酸，或者更多。在另一優選的實施方式中，抗分泌因子由42，43，45，46，51，80，128，129或163個胺基酸組成。在優選的實施方式中，抗分泌因子(AF) 由5，6，7，8或16個胺基酸組成。在另一優選的實施方式中，本發明抗分泌因子(AF)蛋白或肽、或具有等同活性的同系物、衍生物或其片段，由下列式的序列組成X1-V-C-X2-X3-K-X4-R-X5,其中Xl為I、SEQ ID NO 6的胺基酸1_35或者缺失，X2為H、R或K，X3為S或L， X4 為 T 或 A，X5 為 SEQ ID NO 6 的胺基酸 43-46、43-51、43-80 或 43-163、或者缺失。本發明的抗分泌因子可以體內或體外生產(例如重組合成、合成和/或化學合成) 和/或分離自抗分泌因子的天然生成資源，例如分離自豬垂體腺或者禽卵。在生產之後， 抗分泌因子可以被進一步加工，例如被化學或酶學裂解至較小的抗分泌活性片段，或者被胺基酸修飾。目前不可能通過純化，獲得純化形式的抗分泌因子(AF)蛋白。但是可以重組或合成生產出生物活性的抗分泌因子蛋白，這先前已公開在WO 97/08202和WO 05/030246 中。WO 97/08202也公開了 7-80個胺基酸的該蛋白的生物活性片段的生產。本發明的抗分泌因子可以進一步包括N末端和/或C末端保護基團。N末端保護基團的一個實例包括乙醯基。C末端保護基團的一個實例包括醯胺基。在本發明的優選實施方式中，抗分泌因子選自SEQ ID NO 1_6，即使用胺基酸的通常單字母縮寫表示的VCHSKTRSNPENNVGL(SEQ ID NO 1，在本文中也稱為AF-16)、 IVCHSKTR(SEQ ID NO 2)、VCHSKTR(SEQ ID NO 3)XHSKTR(SEQ ID NO 4),HSKTR(SEQ ID NO 5)、或者SEQ ID NO 6的抗分泌因子(AF)蛋白的胺基酸序列。SEQ ID NO 1、2和3先前已公開在例如WO 05/030246中。如所附的序列表所示的，上述所示序列的某些胺基酸，可以被其他胺基酸所取代。在本段下文中，特定胺基酸序列的特定胺基酸位置是從左開始計算的，這意味著在該特定的序列中最N-末端的胺基酸作為位置1。下文列出的任何胺基酸的取代可以獨立於在該序列中的任何其他胺基酸的取代而進行。在SEQ ID NO 1中，位置2 的C可以被S取代，位置3的H可以被R或K取代，位置4的S可以被L取代，和/或位置6 的T可以被A取代。在SEQ ID NO 2中，位置3的C可以被S取代，位置4的H可以被R或 K取代，位置5的S可以被L取代，和/或位置7的T可以被A取代。在SEQ ID NO 3中，位置2的C可以被S取代，位置3的H可以被R或K取代，位置4的S可以被L取代，和/或位置6的T可以被A取代。在SEQ ID NO 4中，位置1的C可以被S取代，位置2的H可以被R或K取代，位置3的S可以被L取代，和/或位置5的T可以被A取代。在SEQ ID NO 5中，位置1的H可以被R或K取代，位置2的S可以被L取代，和/或位置4的T可以被A 取代。本發明還SEQ ID NO 1_6任一片段的兩個或多個的組合。在本發明的實施方式中，本發明的藥物組合物進一步包括藥學上可接受的賦形劑。本發明藥學上可接受的賦形劑及其最佳使用濃度的選擇，可以通過實驗由技術人員容易地確定。本發明使用的藥學上可接受的賦形劑，包括溶劑、緩衝劑、防腐劑、螯合劑、抗氧化劑、以及穩定劑、乳化劑、懸浮劑、和/或稀釋劑。本發明的藥物組合物可以根據常用藥物手冊製成，例如根據"Remington :The science and practice of pharmacy「,第 21 版， ISBN 0-7817-4673-6Encyclopedia of pharmaceutical technology 「 ，H 2 片反， ed. Swarbrick J.，ISBN :0-擬47-2152_7。藥學上可接受的賦形劑，是對給予該組合物的個體基本上無害的物質。這樣的賦形劑通常滿足國家健康機構的既定要求。官方藥典，例如英國藥典、美利堅合眾國藥典、以及歐洲藥典，對藥學上可接受的賦形劑設定有標準。下文是可選擇性地用在本發明藥物組合物中的相關組合物的綜述。該綜述是基於特定的給藥途徑。然而，應當理解，在藥學上可接受的賦形劑可以用於不同的劑型或者組合物的情形中，該特定的藥學上可接受的賦形劑的應用並不限於特定的劑型或者所述賦形劑的特定功能。應當強調，本發明並不限於下列所提及的組合物的應用。腸胃外組合物對於系統性應用而言，本發明的組合物可以包括常規、非毒性的藥學上可接受的載體和賦形劑，其包括微球和脂質體。本發明所用的組合物，可以包括任何種類的固體、半固體、和液體的組合物。藥學上可接受的賦形劑可以包括溶劑、緩衝劑、防腐劑、螯合劑、抗氧化劑、以及穩定劑、乳化劑、懸浮劑、和/或稀釋劑。下文給出不同試劑的實例。各種試劑的實例溶劑的實例包括但不限於水、醇、血液、血漿、脊髓液、腹水、和淋巴液。緩衝劑的實例包括但不限於檸檬酸、乙酸、酒石酸、乳酸、磷酸氫鹽、碳酸氫鹽、磷
酸鹽、二乙基醯胺鹽，等等。螯合劑的實例包括但不限於EDTA和檸檬酸。抗氧化劑的實例包括但不限於丁基羥基茴香醚(BHA)，抗壞血酸及其衍生物，生育酚及其衍生物，半胱氨酸，以及它們的混合物。稀釋劑和崩解劑的實例包括但不限於乳糖、蔗糖、澱粉-糖類複合物、磷酸鈣、碳酸鈣、硫酸鈣、甘露糖、澱粉、和微結晶纖維素。結合劑的實例包括但不限於蔗糖，山梨醇，阿拉伯樹膠，藻酸鈉，明膠，殼聚糖，澱粉，纖維素，羧甲基纖維素，甲基纖維素，羥丙基纖維素，聚乙烯吡咯烷聚乙二醇。本發明的藥物組合物，在一方面，能夠以局部、或者經由靜脈內外周輸注、或者經由肌內或皮下注射給藥至患者，或者經由面頰、肺、鼻、皮膚或口服途徑給藥。而且，也可以通過外科插入至患者腦室的導流管給予該組合物。在一個實施方式中，本發明所用的藥物組合物，被製成眼內、局部、鼻內、口服、皮下、和/或系統給藥。在優選的實施方式中，本發明的組合物以懸浮液，或者甚至更優選地， 以噴射吸入的粉末劑、氣霧劑、吸入劑、或者鼻內和/或至呼吸道的霧化劑施用給藥。包含抗分泌因子的粉末給藥，在穩定性和劑量方面有額外的優點。本發明的藥物組合物也可以局部施用，眼內、鼻內、口服、皮下、和/或經由血管系統給藥。在優選的實施方式中，藥物組合物被製成靜脈內、肌肉內、局部、口服、或鼻部給藥。典型地，當用於局部施用於眼部時，本發明組合物的施用濃度為以每天單劑量或以每天重複幾次(多劑量)給藥計1 μ g-lmg/次，優選50-250 μ g，但不限於此。系統給藥至血液，以每天單劑量或以每天重複幾次給藥，其劑量在0. 1 μ g-10mg/ 次/kg體重範圍內，例如0. 1 μ g-lmg/次/kg體重，優選1-500 μ g/kg體重，更優選 l-100yg/kg體重。當富含抗分泌因子的卵黃用於本發明時，該製劑優選口服給予。因此，本發明涉及抗分泌因子(AF)蛋白、或具有等同活性的衍生物、同系物和/或其片段，和/或其藥學活性的鹽的應用，該應用為用於優化第二藥物和/或製劑的遞送和/或細胞吸收。在一個實施方式中，所述抗分泌因子(AF)蛋白由下列式的序列組成X1-V-C-X2-X3-K-X4-R-X5,其中Xl為I、SEQ ID NO 6的胺基酸1-35、或者缺失，X2為H、R或K，X3為S或L， Χ4為T或Α，Χ5為SEQ ID NO 6的胺基酸43-46、43-51、43-80或43-163、或者缺失。在另一實施方式中，本發明涉及包括SEQ ID NO :1所示胺基酸序列的抗分泌因子(AF)蛋白的應用。在另一實施方式中，本發明涉及包括SEQ ID NO :2所示胺基酸序列的抗分泌因子(AF) 蛋白的應用。在又一實施方式中，本發明涉及包括SEQ ID NO :3所示胺基酸序列的抗分泌因子(AF)蛋白的應用。在又一實施方式中，本發明涉及包括SEQ ID NO :4所示胺基酸序列的抗分泌因子(AF)蛋白的應用。在又一實施方式中，本發明涉及包括SEQ ID Ν0:5所示胺基酸序列的抗分泌因子(AF)蛋白的應用。進一步地，在又一實施方式中，本發明涉及抗分泌因子(AF)蛋白的應用，所述蛋白為SEQ ID NO 6所示胺基酸序列的蛋白、或其包含SEQ ID NO 6胺基酸38-42的同系物、 衍生物、和/或片段。在又一實施方式中，本發明涉及本文所公開的藥物組合物的應用，其包括選自下列的兩種或多種抗分泌因子(AF)蛋白SEQ ID NO :1-6所公開的蛋白，以及SEQ ID NO 6 或者包含SEQ ID NO 6胺基酸38-42的同系物、衍生物、和/或其片段，或者本文所記載通式所公開的序列。所述的序列都同等優選地用於本發明。在本發明的一個實施方式中，所述藥物組合物進一步包括藥學上可接受的賦形劑。這樣的賦形劑可以是選擇適於特定目的的任何優選的賦形劑。賦形劑的實例已在本文中公開。在本發明的另一實施方式中，所述藥物組合物被製成眼內、鼻內、口服、局部、皮下、和/或系統給藥。選擇的給藥途徑可以根據患者的治療症狀，以及患者的年齡和性別等等而變化。在另一實施方式中，藥物組合物被製成以噴霧劑、氣霧劑、或經由霧化器或吸入器給藥。在又一實施方式中，本發明涉及藥物組合物和/或醫療食品，它們被製成以 0. 1 μ g-10mg/次/kg體重/天的劑量經由血液的系統給藥，例如0. 1 μ g-lmg/次/kg體重 /天，優選1-500 μ g/次/kg體重/天，更優選1-50 μ g/次/kg體重/天。在另一實施方式中，所述劑量為1-1000 μ g/次/kg體重/天，例如1-100 μ g/次/kg體重/天。分發給所需患者的藥物組合物的量，當然會根據待治療患者的變化而變化，其可以由技術人員例如執業醫生根據每一情形決定。所述給藥可以單劑量施用或以每天多次施用。實驗部分實施例1腸道上皮細胞中的肌動蛋白微絲降解本實驗的目標是闡明腸道上皮細胞(腸細胞)中的肌動蛋白微絲降解是否會影響在成年鼠的小腸中流體的分泌。材料和方法將霍亂毒素(Sigma)，3 μ g，灌注至15cm長的空腸所形成的結紮環。該處理導致了證內的流體積聚，其測量可達到340mg/釐米腸道長度。上皮細胞中通常清楚並秩序排列的肌動蛋白網絡非常紊亂。腸道上皮細胞內腔表面上的微絨毛變短、結團、且輪廓不規則，而且它們的核心微絨毛幾乎完全缺失。結果當腸道環用霍亂毒素激發，然後10分鐘內用AF-16，IOOyg系統性灌注，可以消除預期的高分泌。，環的重量大致等於在用緩衝平衡鹽溶液激發後的組織的重量，沒有觀察到流體積聚或炎症反應。因此，AF-16可以完全抑制期望的流體高分泌。在另一方面，如果相同量的AF-16在霍亂毒素激發之後30分鐘被遞送，環中的液體積聚為320-350mg/釐米環長度的數量級。腸細胞以及微絨毛中的肌動蛋白網絡極為紊亂。我們得出結論，霍亂毒素激發後，關於AF-16的高分泌預防效應，有一個時間窗。這些結果明確顯示，AF-16僅僅在給予之後的第一個10分鐘到最長至15分鐘之間，可以預防腸道流體的高分泌。腸道流體的高分泌，與普遍存在的紊亂的肌動蛋白網絡以及某些膨脹的腸細胞相關聯。用霍亂毒素和甲基-β-環糊精(MiiCD)對大鼠的結紮小腸環進行聯合激發，導致了 480-500mg流體/釐米長度環的積聚，以及有顯著的組織炎症。肌動蛋白微絲極為紊亂。 Μβ⑶已知可以損耗膽固醇的脂筏，其可導致脂筏成分的分散和聚集，以及這些結構中普遍存在的離子泵和其他傳導信號受體的功能異常。肌動蛋白細胞骨架也顯示紊亂。用霍亂毒素和甲基-β-環糊精(MiiCD)對大鼠的結紮小腸環進行聯合激發，10分鐘之內接著用IOOyg AF-16給藥，導致少於IOOmg流體/釐米環長度的積聚，以及沒有顯著的組織炎症。肌動蛋白微絲在腸細胞的頂端部分和大多數正常顯現的微絨毛中，都清楚地有組織地排列。我們得出結論，肌動蛋白網絡和脂筏的紊亂，導致了強烈的流體高分泌， 如果10-15分鐘之內給予足夠單劑量的AF-16，可以完全將之預防。實施例2AF-16對腫瘤細胞的阿黴素分布的影響通過利用可以發出清晰紅色螢光並且可以結合DNA的阿黴素對AF-16對腫瘤中的細胞毒性的低分子量藥物的血管和細胞供應的影響進行了研究。利用紅色標記的細胞核頻率作檢測阿黴素到達和進入個體的腫瘤細胞的量度。在單一 i.v.注射阿黴素(9mg/kg b.w)之前60分鐘，用鼻內劑量的IOOyg AF-16 (n = 3)或者賦形劑PBS (η = 3)，預處理具有Mat B III腫瘤的動物。15分鐘之後將動物處死，將腫瘤切離並用液氮速凍。製備出低溫切片，將其貼附於玻片，並固定在4%的緩衝甲醛中。在用Hoechst 33342 (Sigma)對核進行染色之後，將切片用 VectashieldTM(Vector Laboratories Inc, USA)固定，並用 Zeiss Axio 10螢光顯微鏡檢測。材料和方法動物和腫瘤。Fisher 344和Sprague-Dawley品種的雌性大鼠，購自B&K，斯德哥爾摩(MocWiolm)，瑞典(Sweden)。將動物圈養，以1 晝夜循環，以標準溼度和溫度，以及可以隨意接近飼料和水。MAT B IIKATCC ；CRL-1666 ；#13762)同系腫瘤。在肩胛之間單次皮下注射溶解於0. 2ml培養基的106MAT B III細胞之後，在雌性Fisher大鼠中建立該系腫瘤(160克 b.w.)。在10-12天產生了一個或多個實體瘤，在2-5天達到了 10x8x5mm大小，進行壓力記錄。倫理。按照地區動物實驗倫理委員會授權許可進行實驗，並且遵從地方和聯邦行為指南(EU 86/609/EEC)。化學。合成肽AF-16，並用 Ross Pedersen A/S，哥本哈根(Copenhagen)，丹麥 (Denmark)檢測。DMBA (9，10 二甲基-1，2-苯並蒽，Hoechst 33342)和阿黴素購自 Sigma。 添加L-穀氨酸鹽的細胞培養基RPMI 1640購自Flow Lab。組織病理學和免疫組織化學。在實驗結束，將腫瘤切割、分離，並且在液氮中速凍或者固定在4%緩衝甲醛中。固定的腫瘤用石蠟包埋，切片，用蘇木紫和曙紅染色。統計。結果以平均值士SE給出。使用成對的設計實驗，ρ < 0.05被認為是顯著的。結果AF-16對阿黴素分布的影響。與DNA結合的阿黴素，能夠由細胞核的明亮紅色螢光識別。用AF-16預處理大鼠的2/3的MAT B III腫瘤中，其紅色細胞核的陽性頻率要高於賦形劑預處理大鼠的腫瘤(圖幻。藍色染料Hoechst 33342可以染色所有細胞核，其能夠得以顯微觀察腫瘤以選擇同等細胞密度的區域。圖5A/B和C/D，分別具有相同的腫瘤細胞密度，但是用AF-16預處理動物的樣本，顯示紅色細胞核的出現率強烈增加。因此，本實驗顯示，AF-16能使阿黴素以足夠的濃度接近每一細胞。我們進一步得出結論，這些結果顯示，添加AF-16有利於優化低分子量藥物至腫瘤組織個體細胞的遞送和/或細胞吸收。實施例3本實驗的目標是闡明細胞表面積的改變，即細胞體積的改變，其與流體介質的滲透壓相關，MATB細胞懸浮於該流體介質中。與正常細胞一樣，腫瘤細胞也以精確調節，優先保持它們的細胞體積。所用的MATB細胞株已知很大程度依賴於流體和離子轉移泵NKCC-I 的使用，用於監測其尺寸和內在的間隙。材料和方法腫瘤細胞系MATB細胞(ATCC Nr :CRL_1666，命名為13762MATB 111)，其是眾所周知並且常用的細胞系，將其在懸浮液培養，並用在利用FACS設備的細胞流式實驗中。因此， 接近球形的腫瘤細胞能夠迅速改變其表面積和細胞體積，以應對細胞外流體的激發。在缺乏能夠幹擾的任何血清或其他外部蛋白和肽成分的等滲介質中，FACS設備測量的MATB細胞表面為620個單位。將10%氯化鈉(NaCl)添加至懸浮介質中，可以在5分鐘內導致MATB細胞表面縮小至僅500單位以下。當細胞感覺到其尺寸減少時，這可激活 NKCC-I離子泵系統。FAK和CAP系統與閥蛋白相連，連接至MATB細胞的肌動蛋白微絲。該系統的激活導致NKCC-1/FAK/CAP複合物的磷酸化，由此MATB細胞攝取水和離子以膨脹。細胞急劇努力，以爭取所有機會再次獲得正常的細胞體積。因此，相當明顯地，Na+和水能使細胞增加其細胞表面至576個單位，即接近於實驗之初的測量。然而，如果AF-16，100 μ g/ml 在30分鐘後添加，脂筏中的NKCC-I泵活性被迅速降低，因為NKCC-I去磷酸化而由此失活， 這反映在MATB細胞的細胞表面，其達到514個單位。基於每循環多於1000個細胞，這些改變是顯著的。結果MATB細胞離心、沉積於玻片的免疫組織過程證實了，CAP-FAK-NKCC-1系統之間相互作用的動力學。在添加鹽水激發而將懸浮介質變成高滲之前，GMK細胞在等滲溶液中具有通常較高的磷酸化FAK。在用高滲溶液處理之後磷酸化FAK的表達幾乎完全去除，這反映在使用AF-16的NKCC-I離子泵恢復了磷酸化FAK的高表達，顯示所述NKCC-I泵系統被關閉。我們得出結論，將懸浮的MATB細胞暴露於高滲溶液，可以激活能夠監控NKCC-I離子泵系統活性的CAP-FAK系統。因此，我們顯示，通過監控CAP/ponsin和FAK系統，AF-16 能夠通過調節NKCC-I離子泵的活性而幹預該系統。實施例5在一系列實驗中將腫瘤細胞系GMK培養於固體表面，以用鬼筆環肽-FITC在免疫組織化學上闡明肌動蛋白微絲的存在和分布。材料和方法在培養至接近鋪滿之後，收穫GMK細胞。然後，將細胞培養物一式三份，根據下列表1說明進行處理。在處理30分鐘之後將細胞培養物用福馬林緩衝液固定，然後進行肌動蛋白圖案的免疫組織化學顯示，其可用標記的鬼筆環肽進行觀察。鬼筆環肽與肌動蛋白微絲以高親和力連接，但是不與解聚的肌動蛋白微絲或G-肌動蛋白連接。在螢光顯微鏡輔助下，對所得結果進行評估和存照(圖3)。結果我們得出結論，細胞鬆弛素B使培養的粘附GMK細胞中其正常的肌動蛋白微絲圖案紊亂，而且，用AF-16處理很大程度上可以恢復正常圖案。因此，AF-16可以使紊亂的肌動蛋白細胞骨架正常化。表 權利要求
1.抗分泌因子(AF)蛋白、具有等同活性的其衍生物、其同系物、和/或其片段、和/或其藥學活性的鹽在製備用於優化另外的藥物和/或製劑的遞送和/或細胞吸收的藥物組合物和/或醫療食品中的用途。
2.根據權利要求1所述的用途，其中所述第二或另外的藥物和/或製劑選自於抗癌藥物，細胞抑制生長藥物，輻射治療藥物，抗微生物藥物，抗細菌藥物，抗病毒藥物，以及靶向外傷後所引起損傷、神經退化、寄生蟲、或者炎症的藥物。
3.根據權利要求1-2中任一項所述的用途，所述用途用於治療和/或預防腫瘤及其併發症。
4.根據前述權利要求中任一項所述的用途，其中所述抗分泌因子(AF)蛋白、具有等同活性的其衍生物、其同系物、和/或其片段由下列式的序列或者不改變多肽的功能的該序列的修飾物所組成X1-V-C-X2-X3-K-X4-R-X5，其中Xl為I、SEQ ID NO 6的胺基酸1_35、或者缺失，X2為H、R或K，X3為S或L，X4 為 T 或 A，X5 為 SEQ ID NO 6 的胺基酸 43_46、43-51、43_80 或 43-163、或者缺失。
5.根據前述權利要求中任一項所述的用途，其中所述藥物組合物包括兩種或多於兩種的抗分泌因子(AF)蛋白。
6.根據前述權利要求中任一項所述的用途，其中所述藥物組合物還包括藥學上可接受的賦形劑。
7.根據前述權利要求中任一項所述的用途，其中所述藥物組合物被製成用於眼內、鼻內、口服、局部、皮下和/或系統給藥。
8.根據前述權利要求中任一項所述的用途，其中所述藥物組合物被製成用於以噴霧劑、氣霧劑、吸入劑和/或通過霧化器給藥。
9.根據權利要求1-8中任一項所述的用途，其中所述藥物組合物和/或醫療食品被製成用於以0. 1 μ g-10mg/次/kg體重/天的劑量、優選為以1-1000 μ g/次/kg體重/天的劑量系統給藥至血液。
10.根據前述權利要求中任一項所述的用途，其中所述給藥是以單次劑量或者以每天多次進行的。
11.根據前述權利要求中任一項所述的用途，其中所述抗分泌因子(AF)蛋白、具有等同活性的其衍生物、其同系物、和/或其片段是以富集抗分泌因子的卵黃提供的。
12.根據前述權利要求中任一項所述的用途，其中所述抗分泌因子(AF)蛋白、具有等同活性的其衍生物、其同系物、和/或其片段是通過服用食物和/或特定食譜之後由患者內源性產生的，其中所述食物和/或特定食譜誘導抗分泌因子(AF)蛋白的吸收、形成、和/或釋放。
13.一種治療需要治療的哺乳動物的方法，所述方法包括餵服富含抗分泌因子的SPC 或卵黃，由此誘導AF的內源性產生，以促進和優化另外的藥物的藥物吸收和遞送。
14.一種治療需要治療的哺乳動物的方法，所述方法包括給予抗分泌因子(AF)蛋白、 其具有等同功能活性的肽、衍生物、同系物、和/或片段、或者其不改變多肽功能的修飾物、 和/或其藥學活性的鹽，以促進另外的藥物的優化藥物吸收和遞送。
15.一種藥物組合物，所述藥物組合物包括與第二或另外的藥物和/或製劑組合的抗分泌因子(AF)蛋白、其具有等同功能活性的肽、衍生物、同系物、和/或片段、或者其不改變多肽功能的修飾物、和/或其藥學活性的鹽，其中所述第二或另外的藥物和/或製劑選自於抗癌藥物，輻射治療藥物，抗細菌藥物，抗病毒藥物，以及靶向外傷後所引起損傷、神經退化、寄生蟲或者炎症的藥物。
16.用於在醫藥中使用的根據權利要求15所述的藥物組合物。
17.用於優化另外的藥物和/或製劑的遞送和/或細胞吸收的抗分泌因子(AF)蛋白、 具有等同活性的其衍生物、其同系物和/或其片段、或者其不改變多肽功能的修飾物、和/ 或其藥學活性的鹽。
18.一種設計診斷和/或預後工具的方法，所述工具用於監控和/或驗證和/或加強癌症患者中的惡性腫瘤的治療性控制，所述方法的特徵在於a.檢測分離自所述癌症患者的腫瘤組織的樣品或分離自所述癌症患者的細胞中的磷酸化FAK的量化的出現率。
19.一種改進藥物設計的方法，其特徵在於a.檢測經受物質或藥物的處理的細胞或組織的應答，以及通過測量磷酸化FAK的量化的出現率來評估AF對所述藥物應答的影響。
20.一種用於篩選和/或評估潛在的抗分泌因子(AF)蛋白抑制劑和/或增強劑的方法，其特徵在於a.將抗分泌因子(AF)蛋白、其具有等同功能活性的肽、衍生物、同系物、和/或片段、和 /或其藥學活性的鹽與選擇的物質進行暴露接觸，b.通過測量磷酸化FAK的量化的出現率來測定暴露接觸的AF調節NKCCl複合物中FAK 的可能性。
21.根據權利要求20所述的方法，所述方法有利於高通量篩選。
22.—種對新穎或已知的抗分泌因子(AF)蛋白、其肽、衍生物、同系物和/或片段、和/ 或其藥學上活性的鹽進行功效評估和/或功能活性驗證的方法，其特徵在於a.通過測量磷酸化FAK的量化的出現率來測定所述新穎或已知的AF調節NKCCl複合物中FAK的可能性。
23.一種用於篩選和/或評估潛在的新穎的AF的方法，其特徵在於a.通過測量磷酸化FAK的量化的出現率來測定所述潛在的新穎的AF調節NKCCl複合物中FAK的可能性。
全文摘要
本發明涉及抗分泌因子(AF)蛋白、具有等同功能活性的肽、其衍生物、其同系物、和/或其片段、和/或其藥學活性的鹽在優化藥物和/或製劑的遞送和細胞吸收或者基因遞送中的應用。典型地，所述藥物和/或製劑包括抗癌藥物、輻射治療藥物、抗細菌藥物、抗病毒藥物、或者靶向外傷後引起的損傷、神經退化、寄生蟲或者炎症的藥物。
文檔編號A61K38/17GK102387811SQ201080016356
公開日2012年3月21日 申請日期2010年2月11日 優先權日2009年2月11日
發明者埃娃·延尼斯歇, 斯特凡·朗厄, 漢斯-阿爾內·漢松 申請人:蘭特門內阿斯-法克託爾公司