一種同時測定卡培立肽中的dmf、nmp和dmso雜質的方法
2023-12-01 06:51:16
一種同時測定卡培立肽中的dmf、nmp和dmso雜質的方法
【專利摘要】本發明涉及一種同時測定多肽藥物卡培立肽中N,N-二甲基甲醯胺(DMF)、N-甲基吡咯烷酮(NMP)和二甲基亞碸(DMSO)雜質殘留量的液相色譜方法。所述方法包括將待測樣品製成溶液，然後以外標法通過HPLC方法精確定量其中N,N-二甲基甲醯胺(DMF)、N-甲基吡咯烷酮(NMP)和二甲基亞碸(DMSO)雜質殘留量的步驟。
【專利說明】-種同時測定卡培立肽中的DMF、NMP和DMSO雜質的方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及一種同時測定多肽藥物卡培立肽中N，N-二甲基甲醯胺（DMF)、N-甲基 吡咯烷酮（NMP)和二甲基亞碸（DMS0)雜質殘留量的液相色譜方法。
【背景技術】
[0002]卡培立肽，別名基因重組心房肽、卡哌利丁、人腦利鈉肽，本品為28個胺基酸組成 的一種循環調節激素，起血管擴張和利尿作用，主要用於急性心功能衰竭（包括慢性心衰 急性加重）。
[0003] N，N-二甲基甲醯胺（DMF)，英文名稱：N，N-Dimethylformamide，分子式：C3H7N0。 分子量為73.0, CAS號：68-12-2,為無色高沸點液體。主要作為有機溶劑用於製造清腈綸和 氯綸，亦用於有機合成、染料、製藥、樹脂、皮革等工業生產。對皮膚、黏膜有刺激性，進入人 體後可損傷中樞神經系統和肝、腎、胃等重要臟器。對環境可能也有危害。
[0004] N-甲基批略燒酮（NMP)，英文名稱：N-Methyl pyrrolidone，分子式：：C5H9N0。， CAS號：S72-50-4,為無色透明油狀液體，微有胺的氣味。本品是重要的化工原料，是一種選 擇性強和穩定性好的極性溶劑。對皮膚有輕度刺激作用，但慢性作用可致中樞神經系統機 能障礙，引起呼吸器官、腎臟、血管系統的病變。
[0005] -甲基亞碸（DMS0)，英文名：Dimethyl sulfoxide，分子式：C2H60S，分子量： 78. 12, CAS號：67-68-5,為無色黏稠透明油狀液體，幾乎無臭，稍帶苦味，二甲基亞碸廣泛 用作溶劑和反應試劑，對人體皮膚有滲透性，對眼有刺激作用。
[0006] 在藥物的合成工藝中，N，N-二甲基甲醯胺、N-甲基吡咯烷酮和二甲基亞碸主要被 當作溶劑使用，所以在終產物中可能會殘留這三種溶劑。能夠準確、可靠的分析出多肽藥物 卡培立肽中殘留溶劑N，N-二甲基甲醯胺、N-甲基吡咯烷酮和二甲基亞碸的含量，對於藥物 的生產控制和產品質量控制具有重要的實用價值。
[0007] 對於殘留溶劑的測定一般首選氣相色譜法進行測定，但是，N，N-二甲基甲醯胺的 沸點為152°C，N-甲基吡咯烷酮的沸點為203°C，二甲基亞碸的沸點為189?，可見三種溶劑 均為高沸點物質。若使用氣相色譜頂空進樣的方法，各溶劑的檢出靈敏較低，頂空方法不適 用。只能使用直接進樣的方式，但由於直接進樣對襯管及毛細管均有嚴重的汙染，幹擾豐常 嚴重，所以方法的耐用性很差。
[0008] 在卡培立肽的工業化生產中，上述DMS0、NMP、DMF都是必不可少的溶劑體系，因 此，一種適用於檢測卡培立肽中的DMS0、NMP、DMF雜質的方法，在工業上有很大的需求。
【發明內容】
[0009] 針對上述問題，發明人經過試驗研究，得出一種能夠同時測定多肽藥物卡培立肽 中N，N-二甲基甲醯胺、N-甲基吡咯烷酮和二甲基亞碸的液相色譜分析方法。
[0010] 本發明首先涉及一種能夠同時測定多肽藥物卡培立肽中濃度範圍分別為〇. 2? 5000ppm的N，N-二甲基甲醯胺、N-甲基吡咯烷酮和二甲基亞碸雜質的液相色譜分析方法， 其步驟包括：
[0011] ⑴準確稱取一定量的樣品，經流動相B溶解，製成每1ml中含樣品約5mg的溶液；
[0012] (2)直接將樣品進行液相色譜分析，計算得出樣品中N，N-二甲基甲醯胺、N-甲基 吡咯烷酮和二甲基亞碸的含量。
[0013] 其中，步驟（1)中的流動相B包括純水、乙腈、甲醇、甲醇水溶液等，優選為磷酸水 溶液和乙腈按比例為0?100:1混合的混合液，其中磷酸水溶液中的磷酸含量為〇?5% (v/v)，優選為 0·05% (v/v)。
[0014] 流動相A包括純水、乙腈、甲醇、甲醇水溶液等，優選為磷酸水溶液和乙腈按比 例為1:0?100混合的混合液，其中磷酸水溶液中的磷酸含量為〇?5% (v/v)，優選為 0· 05%。
[0015]步驟⑵中樣品的進樣濃度為0· 5?100mg/ml，優選為5mg/ml。
[0016] 步驟（2)所述的液相色譜條件為：
[0017] 1)色譜柱是C8、C18色譜柱，色譜柱長為5?25cm，內徑：2. 1?4. 6mm，例如Welch Ultimate Si02(4.6X250mm，5um)、Merck ZIC-HILIC(250mmX2. lmm，3_5um);粒徑：2·1 ? 5 μ m ;優選為 Agi lent Zorbax RX-SIL (4. 6 X 250mm，5 μ m)或其等效柱；
[0018] 2)進樣量為1?200微升，柱溫為20?60度；
[0019] 3)檢測器為紫外檢測器，檢測波長為190?210nm，流速為〇. 2?2mL/min ;
[0020] 4)洗脫方法為：以流動相A和流動相B進行梯度洗脫，梯度為：流動B的含量： 0%?100% ;所述的流動相A包括純水、乙臆、甲醇、甲醇水溶液等，優選為憐酸水溶液和乙 腈按比例為1:0?100混合的混合液，其中磷酸水溶液中的磷酸含量為〇?5% (v/v)，優 選為0.05%，洗脫梯度：B%:0%?100%;最優選的，所述流動相A按照0.05% (v/v)的磷 酸水溶液：乙腈的比例為10:90配置，所述流動相B按照0.05% (v/v)的磷酸溶液：乙腈的 比例為50:50配置。
[0021] 所述的液相色譜條件中梯度洗脫的步驟為：
[0022] (a) 0?8min時，流動相B為0,流動相A為100% ;
[0023] (b)隨後增加流動相B的比例，至10?25min時，流動相B的比例為1〇〇%，流動 相A為0 ;
[0024] (c)隨後降低流動相B的比例，至26?35min時，流動相B為0,流動相a為]_〇〇%， 至35min時洗脫結束。 '
[0025] 本發明所述的檢測方法中，待測樣品中目標成分的定量方法為外標法。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0026] 圖1、本發明所述色譜方法檢測混合對照品（溶液B)溶液的譜圖。
[0027] 圖2、本發明所述色譜方法檢測純樣品溶液（溶液C)的譜圖。
[0028]圖3、本發明所述色譜方法檢測純樣品加標準混合對照品溶液（溶液D)的譜圖。
[0029] 圖4、本發明所述色譜方法檢測陽性對照品溶液的譜圖。 H °
[0030] 圖5、本發明所述色譜方法檢測供試樣品溶液的譜圖。
【具體實施方式】
[0031]結合以下實施例對本發明作進一步說明：
[0032]實施例1 :檢測條件測試 艦分析方細麗性，細對該分析施縣_雕、專難、線性及準 確度進仃了驗證。
[0034] 1、各種溶液的配製：
[0035] N-甲基吡咯烷酮母液：取N_甲基吡咯烷酮139_ 16mg，用流動相B溶 lOOmL，搖勻，即得。
[0036] n，n-二甲基甲醯胺母液：取N，N_二甲基甲醯胺22〇.67mg，用流動相 B溶解並稀釋 至100mL，搖勻，即得。
[0037] -甲基亞碸母液：取二甲基亞碸630· 96mg,用流動相β溶解並稀釋至5〇mL,搖勻， 即得。
[0038]混合對照品儲備液（溶液A):精密量取N-甲基吡略燒酮母液、N，N-二甲基甲醜胺 母液、二甲基亞碸母液各lmL，用流動相b稀釋至5〇mL，搖勻，即得。
[0039]混合對照品溶液（溶液B):精密量取混合對照儲備液2mL，用流動相B稀釋至 20mL，搖勻，即得。
[0040]純品溶液（溶液C):取卡培立肽純品25. 37mg，用流動相B溶解並稀釋至5mL，搖 勻，即得。
[0041]純品加混合對照溶液（溶液D):取卡培立肽純樣品25. 13mg,用混合對照品溶液 (溶液B)溶解並稀釋至5mL，搖勻，即得。
[0042] 2、色譜條件
[0043]用八8116拉2〇1^?1?-311(4.6\25〇麵，5 0 111)色譜柱；以〇.〇5%的磷酸溶液：乙 腈（10:90)為流動相A，以0. 05%的磷酸溶液：乙腈（50:50)為流動相B，按下表進行梯度 洗脫；流速為1· Oml/min ;檢測波長為200nm ;柱溫為30Γ。
[0044]
【權利要求】
1. 一種能夠同時測定多肽藥物卡培立肽中濃度範圍分別為0. 2?5000ppm的N，N-二 甲基甲醯胺、N-甲基吡咯烷酮和二甲基亞碸雜質的液相色譜分析方法，其步驟包括： (1) 準確稱取一定量的樣品，經流動相B溶解，製成每lml中含樣品約5mg的溶液； (2) 直接將樣品進行液相色譜分析，計算得出樣品中N，N-二甲基甲醯胺、N-甲基吡咯 烷酮和二甲基亞碸的含量。
2. 根據權利要求1所述的方法，其特徵在於，步驟（1)中的流動相B包括純水、乙腈、甲 醇、甲醇水溶液等，優選為磷酸水溶液和乙腈按比例為0?100:1混合的混合液，其中磷酸 水溶液中的磷酸含量為〇?5% (v/v)，優選為0. 05% (v/v)。
3. 根據權利要求1-2任一所述的方法，其特徵在於，步驟（2)中樣品的進樣濃度為 0· 5 ?100mg/ml，優選為 5mg/ml。
4. 根據權利要求1-2任一所述的方法，其特徵在於，步驟（2)所述的液相色譜分析條件 為： 1) 色譜柱是C8、C18色譜柱，色譜柱長為5?25cm，內徑：2. 1?4. 6mm，粒 徑：2.1 ?5ym;色譜柱優選為 Welch Ultimate Si02 (4.6 X 250mm，5ym)、Merck ZIC-HILIC(250mmX2.1mm，3.5um);最優選為 Agilent Zorbax RX-SIL(4.6X250mm，5ym) 或其等效柱； 2) 進樣量為1?200微升，柱溫為20?60度，優選為30?35度； 3) 檢測器為紫外檢測器，檢測波長為190?210nm，流速為0. 2?2mL/min，優選為lmL/ min ； 4) 洗脫方法為：以流動相A和流動相B進行梯度洗脫，梯度為：流動B的含量：0 %? 100% ;所述的流動相A包括純水、乙腈、甲醇、甲醇水溶液等，優選為磷酸水溶液和乙腈按 比例為1:0?100混合的混合液，其中磷酸水溶液中的磷酸含量為0?5% (v/v)，優選為 0.05%;最優選的，所述流動相A按照0.05% (v/v)的磷酸水溶液：乙腈的比例為10:90配 置，所述流動相B按照0.05% (v/v)的磷酸溶液：乙腈的比例為50:50配置。
5. 根據權利要求4所述的方法，其特徵在於，步驟4)所述的洗脫方法的步驟為： (a) 0?8min時，流動相B為0,流動相A為100% ; (b) 隨後增加流動相B的比例，至10?25min時，流動相B的比例為100 %，流動相A 為〇 ; (c) 隨後降低流動相B的比例，至26?35min時，流動相B為0,流動相A為100%，至 35min時洗脫結束。
6. 根據權利要求4所述的方法，其特徵在於，待測樣品中目標成分的定量方法為外標 法。
【文檔編號】G01N30/02GK104297368SQ201410504834
【公開日】2015年1月21日 申請日期:2014年9月26日 優先權日:2014年9月26日
【發明者】單林娟, 王宏飛, 鄧興建, 唐洋明, 馬亞平, 袁建成 申請人:深圳翰宇藥業股份有限公司