一種牛蒡子苷在治療痛風藥物中的應用的製作方法
2023-11-11 00:33:52
一種牛蒡子苷在治療痛風藥物中的應用的製作方法
【專利摘要】本發明涉及牛蒡子苷在製備治療痛風藥物中的應用，有效解決牛蒡子苷在製備治療痛風藥物中的應用問題，牛蒡子苷在製備治療痛風藥物中的應用，該牛蒡子苷是，將牛蒡子粉碎成粗粉，用乙醇浸泡，回流提取，濾液減壓回收乙醇至無醇味，並濃縮成濃縮液，濃縮液加蒸餾水分散成分散液；分散液上大孔吸附樹脂，先用蒸餾水洗脫，棄去水液；繼用體積濃度為10%的乙醇洗脫，棄去體積濃度為10%的乙醇洗脫液；最後用體積濃度為75%的乙醇洗脫，收集體積濃度為75%的乙醇洗脫液，減壓回收乙醇，60℃乾燥粉碎，得牛蒡子苷，本發明具有降低尿酸作用，有效用於製備痛風藥物，實現牛蒡子苷在製備治療痛風藥物中的應用。
【專利說明】一種牛蒡子苷在治療痛風藥物中的應用
【技術領域】
[0001] 本發明涉及醫藥，特別是一種牛蒡子苷在治療痛風藥物中的應用。
【背景技術】
[0002] 痛風是嘌呤代謝異常致使尿酸合成增加而導致的代謝性疾病。腎功能異常時由於 腎臟的尿酸清除率下降也會引起尿酸水平上升。血漿中的尿酸達到飽和，導致尿酸單鈉結 晶沉積在遠端關節周圍相對缺乏血管的組織中。這種結晶的出現可導致單關節或者多關節 的急性炎性滑膜炎。痛風在男性中較為多見，拇趾是最常見的受累區域，50%?70%初次 發病發生於此。90%的痛風患者在其一生中的某個時期會發生第一蹠趾關節受累。其他可 能受累的足部區域有足背部、足跟以及踝部。除了累及關節之外，尿酸結晶還可以沉積在皮 下，被稱作痛風結節。
[0003] 牛蒡子為菊科二年生草本植物牛蒡（學名：Arctium lappa L.)的乾燥成熟果實。 呈長倒卵形，略扁，微彎曲，長5?7_，寬2?3_。表面灰褐色，帶紫黑色斑點，有數條縱 稜，通常中間1?2條較明顯。頂端鈍圓，稍寬，頂面有圓環，中間具點狀花柱殘跡；基部略 窄，著生面色較淡。果皮較硬，子葉2,淡黃白色，富油性。無臭，味苦後微辛而稍麻舌。秋季 果實成熟時採收果序，曬乾，打下果實，除去雜質，再曬乾。生用或炒用，用時搗碎。具有疏 散風熱，宣肺透疹，利咽散結，解毒消腫之功效。屬於解表藥中發散風熱藥。現代研究，牛蒡 子還可用於防治糖尿病腎病；牛蒡果實含牛蒡甙經水解生成的牛蒡甙元具有抗癌活性。
[0004] 隨著牛蒡子藥用價值的提高，越來越多的有識之士對牛蒡子進行了多方面的研 究，但至今未見有從牛蒡子中提取的牛蒡子苷在製備治療痛風藥物中的應用。
【發明內容】
[0005] 針對上述情況，為克服現有技術之缺陷，本發明之目的就是提供一種牛蒡子苷在 治療痛風藥物中的應用，可有效解決牛蒡子苷在製備治療痛風藥物中的應用問題。
[0006] 本發明解決的技術方案是，牛蒡子苷在製備治療痛風藥物中的應用，該牛蒡子苷 是，將牛蒡子粉碎成粗粉，用乙醇浸泡，回流提取，濾液減壓回收乙醇至無醇味，並濃縮成濃 縮液，濃縮液加蒸餾水分散成含生藥量〇. 5g/ml，得分散液；分散液上AB-8型大孔吸附樹 月旨，先用蒸餾水洗脫，棄去水液；繼用體積濃度為10%的乙醇洗脫，棄去體積濃度為10%的 乙醇洗脫液；最後用體積濃度為75 %的乙醇洗脫，收集體積濃度為75 %的乙醇洗脫液，減 壓回收乙醇，60°C乾燥粉碎，得牛蒡子苷。
[0007] 本發明製備方法簡單，原材料豐富，所製備的牛蒡子苷具有降低尿酸作用，可有效 用於製備痛風藥物，實現牛蒡子苷在製備治療痛風藥物中的應用，開拓了牛蒡子的藥用價 值和新用途。
【具體實施方式】
[0008] 以下結合具體情況，對本發明的【具體實施方式】作詳細說明。
[0009] 本發明在具體實施中，牛蒡子苷在製備治療痛風藥物中的應用，該牛蒡子苷是，將 牛蒡子粉碎成過20-30目篩的粗粉，用10倍牛蒡子重量的、體積濃度為80%的乙醇浸泡 2h，回流提取2次，每次1. 5h，過濾，合併濾液，減壓回收乙醇至無醇味，並濃縮到60°C相對 密度為1. 20?1. 30的濃縮液，濃縮液加蒸餾水分散成含生藥量0. 5g/ml，得分散液；分散 液上AB-8型大孔吸附樹脂，上樣量與樹脂體積的比例為1 : 10,樹脂柱徑高比為1 : 10， 先用4倍柱體積蒸餾水洗脫，棄去水液；繼用4倍柱體積的體積濃度為10%的乙醇洗脫，棄 去體積濃度為10 %的乙醇洗脫液；最後用10倍柱體積的體積濃度為75 %的乙醇洗脫，收集 體積濃度為75%的乙醇洗脫液，減壓回收乙醇，60°C乾燥粉碎，得牛蒡子苷。
[0010] 本發明牛蒡子苷具有降低尿酸作用，可有效用於製備治療痛風藥物，實現牛蒡子 苷在製備治療痛風藥物中的應用，並經試驗得到了有效證明，有關試驗資料如下。
[0011] 牛蒡子苷對酵母膏合併氧嗪酸鉀鹽致小鼠高尿酸血症模型的影響
[0012] 1實驗材料
[0013] 1. 1實驗動物
[0014] 清潔級小鼠，昆明種，雄性，23_27g，由山東魯抗醫藥股份有限公司提供。合格證編 號：0017219 ;實驗室合格證號SYXK (豫）2010-001。
[0015] 1.2實驗藥物
[0016] 本發明牛蒡子苷；痛風舒片，市售；別嘌醇片，市售。
[0017] 1.3實驗試劑
[0018] 羧甲基纖維素鈉，天津市恆興化學試劑製造有限公司；氧嗪酸鉀鹽，美國Sigma公 司；酵母膏，北京奧博星生物技術有限責任公司；0.9%氯化鈉注射液，鄭州永和製藥公司； 甲醛溶液（分析純），煙臺市雙雙化工有限公司；小鼠 UC檢測試劑盒，R&D公司；小鼠 X0D檢 測試劑盒，R&D公司；小鼠 CR檢測試劑盒，R&D公司；小鼠 BUN檢測試劑盒，R&D公司；小鼠 ADA檢測試劑盒，R&D公司。
[0019] 1.4實驗儀器
[0020] 電子稱，上海民橋醫療器械有限公司，型號JY601 ;電子分析天平，奧豪斯（上海） 公司，型號AR1140/C ;高速臺式離心機，上海安亭科學儀器廠，型號TGL-168 ;電熱恆溫水浴 鍋，上海一恆科學儀器有限公司，型號HWS12 ;可調式移液器，上海雷勃分析儀器有限公司； 酶標儀，美國BI0-RAD公司，型號680 ;
[0021] 2實驗方法
[0022] 2. 1造模與給藥
[0023] 取昆明種小鼠23-27g，84隻隨機分為7組，分別為：空白組，模型組，別嘌醇組，痛 風舒片組，牛蒡子苷大、中、小劑量組。造模方法：小鼠酵母膏30gAkg*d)灌胃給藥，每天 1次，連續13d，14d給藥後再腹腔注射氧嗪酸鉀鹽300mg/kg 1次。
[0024] 給藥方法：造模後第8d開始各用藥組每天下午灌胃給藥一次，直至14d，共給藥7 天。小、中、大劑量牛蒡子苷組給藥劑量分別為0. 01g/kg、0. 02g/kg、0. 04g/kg(給藥體積 0. lml/10g);別嘌醇片給藥劑量為0. 05g/kg(給藥體積0. lml/10g);痛風舒片給藥劑量為 0· 8g/kg (給藥體積 0· lml/10g)。
[0025] 配藥方法：0.5% CMC配製方法：稱取羧甲基纖維素鈉4g，用蒸餾水配成800ml。 小、中、大劑量牛蒡子苷組給藥劑量分別為0. 01g/kg、0. 02g/kg、0. 04g/kg (給藥體積 0. lml/10g)。配置方法：分別稱取牛蒡子苷0. 03g、0. 06g、0. 12g，先用少量的0. 5% CMC溶 解，然後再定容到30ml，混勻，即可。別嘌醇片（50mg/kg，用0· 5% CMC配成5mg/ml):取別 嘌醇片2片，研成粉末狀，先用少量的0. 5% CMC溶解，然後再定容到40ml，混勻，即可。痛風 舒片（0.88/1^，用0.5%01?：配成0.088/1111，相當於臨床用量的15倍） ：取痛風舒片8片， 研成粉末狀，先用少量的〇. 5% CMC溶解，然後再定容到30ml，混勻，即可。儲存方法：冷藏， 用時隔水溫熱。
[0026] 2. 2觀察項目及檢測方法
[0027] 檢測指標：每周稱小鼠體質量一次。14d給藥後lh後，空白組腹腔注射生理鹽水， 其餘各組腹腔注射氧嗪酸鉀鹽，劑量為300mg/kg。注射1小時後摘眼球取血，分離血清，取 上清用於血UA、XOD、ADA、Cr和BUN活性的測定。同時快速取其肝臟迅速與生理鹽水1 :9 混合，勻漿。勻漿液取上清測定小鼠肝臟X0D和ADA活性的測定。取小鼠腎臟組織，用10% 甲醛溶液固定，HE染色，做病理觀察。
[0028] 2. 2. 1試劑盒檢測原理
[0029] 小鼠尿酸（UC) ELISA檢測試劑盒檢測原理：試劑盒採用雙抗體一步夾心法酶聯免 疫吸附試驗。往預先包被尿酸（uric acid)抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP 標記的檢測抗體，經過溫育並徹底洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化 成藍色，並在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的尿酸（uric acid)呈 正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（0D值），計算樣品濃度。
[0030] 小鼠黃嘌呤氧化酶（XOD) ELISA檢測試劑盒檢測原理：試劑盒採用雙抗體一步夾 心法酶聯免疫吸附試驗。往預先包被黃嘌呤氧化酶（X0D)抗體的包被微孔中，依次加入標 本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經過溫育並徹底洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物 酶的催化下轉化成藍色，並在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的黃嘌 呤氧化酶（X0D)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（0D值），計算樣品濃度。
[0031] 小鼠腺苷脫氨酶（ADA) ELISA檢測試劑盒檢測原理：試劑盒採用雙抗體一步夾心 法酶聯免疫吸附試驗。往預先包被腺苷脫氨酶（ADA)抗體的包被微孔中，依次加入標本、標 準品、HRP標記的檢測抗體，經過溫育並徹底洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催 化下轉化成藍色，並在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的腺苷脫氨酶 (ADA)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（0D值），計算樣品濃度。
[0032] 小鼠肌酐（CR) ELISA檢測試劑盒檢測原理：試劑盒採用雙抗體一步夾心法酶聯免 疫吸附試驗。往預先包被肌酐（CR)抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的 檢測抗體，經過溫育並徹底洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色， 並在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的肌酐（CR)呈正相關。用酶標 儀在450nm波長下測定吸光度（0D值），計算樣品濃度。
[0033] 小鼠尿素氮（BUN) ELISA檢測試劑盒檢測原理：試劑盒採用雙抗體一步夾心法酶 聯免疫吸附試驗。往預先包被尿素氮（BUN)抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP 標記的檢測抗體，經過溫育並徹底洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化 成藍色，並在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的尿素氮（BUN)呈正相 關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（0D值），計算樣品濃度。
[0034] 2. 2. 2試劑盒測定方法
[0035] 小鼠尿酸（UC)ELISA檢測試劑盒測定方法：從室溫平衡20min後的鋁箔袋中取出 所需板條，剩餘板條用自封發袋密封放回4°C。設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加入不 同濃度的標準品50 μ L。樣本孔中先加入待測樣本10 μ L，再加樣本稀釋液40 μ L (即樣本稀 釋5倍）；空白孔不加。除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶標記的 檢測抗體100 μ L，用封板膜封住反應孔。37°C水浴鍋或恆溫箱溫育60min。棄去液體，吸水 紙上拍幹，每孔加滿洗滌液，靜置lmin。甩去洗滌液，吸水紙上拍幹，如此重複洗板5次（也 可用洗板機按說明書操作洗板）。每孔先加入底物A、B各50yL，37°C避光孵育15min。取 出酶標板，每孔加終止液50 μ L，15min內，在450nm波長測量各孔的吸光值（0D值）。根據 標準品的濃度及對應的0D值，繪製出標準品回歸曲線，按曲線方程計算各樣本濃度值。最 終濃度為實際測定濃度乘以稀釋倍數。其中，標準品（S0-S5)濃度依次為：0、30、60、120、 240、480ymol/L。
[0036] 小鼠黃嘌呤氧化酶（XOD) ELISA檢測試劑盒測定方法同尿酸，其中，標準品 (S0-S5)濃度依次為：0、0· 3、0· 6、L 2、2. 4、3. 6U/L。
[0037] 小鼠腺苷脫氨酶（ADA)ELISA檢測試劑盒測定方法同尿酸，其中，標準品（S0-S5) 濃度依次為：〇、2.5、5、10、20、40U/ml。
[0038] 小鼠肌酐（CR)ELISA檢測試劑盒測定方法同尿酸，其中，標準品（S0-S5)濃度依次 為：0、15、30、60、120、240ymol/L。
[0039] 小鼠尿素氮（BUN)ELISA檢測試劑盒測定方法同尿酸，其中，標準品（S0-S5)濃度 依次為：〇、1· 5、3· 0、6· 0、12· 0、24· Ommol/L。
[0040] 2. 3統計學處理方法
[0041] 數據分析用SPSS17. 0醫用統計包進行數據資料的統計學處理，計量資料用平均 數土標準差(X土s)表示，各組間比較採用單因素方差分析，方差檢驗齊者用LSD法，方差不 齊者用Games-Howell法檢驗，等級資料採用Ridit檢驗。
[0042] 結果
[0043] 1對酵母膏合併氧嗪酸鉀鹽致高尿酸血症模型小鼠血清生化指標的影響
[0044] 實驗各組小鼠血清尿酸、黃嘌呤氧化酶、腺苷脫氨酶、肌酐、尿素氮活性水平測試 結果，見表1、表2、表3。
[0045] 表1牛蒡子苷對酵母膏合併氧嗪酸鉀鹽高尿酸血症模型小鼠尿酸水平的影響 (X土S)
[0046]
【權利要求】
1. 一種牛蒡子苷在製備治療痛風藥物中的應用，該牛蒡子苷是，將牛蒡子粉碎成過 20-30目篩的粗粉，用10倍牛蒡子重量的、體積濃度為80%的乙醇浸泡2h，回流提取2次， 每次1. 5h，過濾，合併濾液，減壓回收乙醇至無醇味，並濃縮到60°C相對密度為1. 20?1. 30 的濃縮液，濃縮液加蒸餾水分散成含生藥量〇. 5g/ml，得分散液；分散液上AB-8型大孔吸附 樹脂，上樣量與樹脂體積的比例為1 :1〇,樹脂柱徑高比為1 :1〇,先用4倍柱體積蒸餾水洗 脫，棄去水液；繼用4倍柱體積的體積濃度為10%的乙醇洗脫，棄去體積濃度為10%的乙醇 洗脫液；最後用10倍柱體積的體積濃度為75%的乙醇洗脫，收集體積濃度為75%的乙醇洗 脫液，減壓回收乙醇，60°C乾燥粉碎，得牛蒡子苷。
【文檔編號】A61K31/7048GK104138387SQ201410356214
【公開日】2014年11月12日 申請日期:2014年7月24日 優先權日:2014年7月24日
【發明者】苗明三, 白明, 苗豔豔 申請人:河南中醫學院