一種人工培育松茸子實體的方法

2023-10-31 19:17:22

專利名稱：一種人工培育松茸子實體的方法
技術領域：
本發明涉及真菌人工培育方法，具體涉及一種人工培育松茸子實體的方法。

背景技術：
松茸[Tricholoma matsutake(Ito et Imai)Sing.]又名鬆口蘑、松蕈等，是世界珍稀名貴的野生食用菌，是中華人民共和國國家二級保護植物。主要分布在我國黑龍江(雞西完達山、牡丹江地區)、遼寧、吉林、安徽、臺灣、四川、甘肅、山西、貴州、雲南、廣西、西藏、福建、臺灣等省區，主產區為東北地區和雲南。國外分布於日本、朝鮮半島、俄羅斯等國家。
松茸具有很高的食用價值和藥用價值，價格極其昂貴，歷來被視為食用菌的珍寶，素有「菌中之王」、「山中鑽石」、「綠色黃金」等美稱。日本人尤其酷愛松茸，是日本國宴不可缺少的名菜。近二十年來價格飛漲，日本人嗜食松茸，本國的野生資源遠不能滿足需要，每年從中國、朝鮮、美國、加拿大等國進口約2000噸(其中含松茸的近緣種類)。如日本人把中國進口的松茸切成小薄片，改為小型精裝，僅一個精裝的松茸，售價高達數百日元，每千克達1870美元。
松茸含有蛋白質、胺基酸、多種維生素、碳水化合物和礦物質等有效成分，有多種生理功能它可以強身、益腸胃、增強人體免疫力，生精益氣，理氣化痰，延緩衰老。現代醫學臨床實驗表明，松茸具有治療糖尿病和抑制癌細胞增殖作用的特殊功能。松茸子實體的熱水提取物即松茸多糖類物質對小鼠肉瘤S-180的抑制率高達91.8％，對艾氏腹水癌的抑制率為70％，是抗癌藥物篩選源之一。
由於無節制地大量採集野生子實體已造成松茸瀕臨滅絕。因此，人工馴化栽培松茸成為人們保護利用這種珍稀「蘑菇之王」的迫切願望。日本人對松茸的人工純培養進行了多年研究，儘管在固體培養基上出現了松茸原基，但迄今為止還沒有發現人工純培養出菇的確切報導。所謂松茸的半人工栽培是日本人經過百年研究才摸索出來的一種就地增產或就地保護途徑，具體說就是以天然松茸的菌絲體、子實體和孢子為材料，進行自然接種或移植；赤松林地清理，營造良好的土壤環境；採取塑料蔭棚創造松茸發生的溫、溼條件等措施，達到出菇增產的目的。
探索松茸發育的遺傳機理，人為控制或調節松茸子實體基因的即時表達，將會把松茸人工馴化栽培研究引向深入。揭開蘑菇之王——松茸人工栽培之謎是人們近百年來的願望。它無論對促進樹木生長，還是對促進社會經濟的發展都具有十分重要的意義。


發明內容
本發明的目的在於提供一種人工培育松茸子實體的方法，選用松茸0288JiangZhonghai-China菌株，採用該方法人工培育松茸菌子實體，為松茸人工栽培開發創造新前景。
本發明的技術解決方案是首先，選用松茸0288JiangZhonghai-China菌株在蔣氏培養液進行母種培養，溫度25℃約20-25d松茸菌絲長滿試管；然後，母種轉接入蔣氏培養基進行原種培養，溫度25℃約45d松茸菌絲長滿瓶；其次，原種轉接入蔣氏培養基進行生產種培養，溫度25℃約60d松茸菌絲長滿袋或瓶；最後，驚菌與促蕾15-25d生長得松茸子實體。
本發明的松茸0288JiangZhonghai-China菌株，其在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏，保藏編號是CGMCCNO.1719。
松茸0288JiangZhonghai-China菌株，是經分離松茸孢子誘變菌株而得。子實體產生擔子，擔子中的兩個核進行核配，經過減數分裂產生單核的擔孢子，單核擔孢子萌發成單核菌絲，由兩個可親和的單核菌絲結合形成雙核菌絲，或者單核擔孢子自己分裂形成雙核擔孢子，由雙核擔孢子萌發生成雙核菌絲，兩種方式形成的雙核菌絲後產生新的子實體。2002年8月8日於黑龍江鳳凰山採得後實驗室分離孢子，採用紫外線、γ射線誘變松茸孢子得松茸0288JiangZhonghai-China菌株，經多年紫外線、γ射線誘變，松茸0288JiangZhonghai-China菌株是松茸子實體基因得以表達的菌株。
其中，蔣氏培養液由以下成份組成葡萄糖10g、煙酸0.5mg、瓊脂16g、馬鈴薯100g、磷酸二氫鉀(KH2PO4)0.5g、磷酸氫二鈉(NaH2PO4)0.5g、硫酸鎂(MgSO4)0.25g、蛋白腖1.5g、酒石酸0.75g、水1000mL。
其中，蔣氏培養液的配製如下馬鈴薯100g切薄片放容器中加水1000ml煮沸8分鐘，用4目沙布過濾得濾液，濾液中加入葡萄糖10g、煙酸0.5g、磷酸二氫鉀(KH2PO4)0.5g、磷酸氫二鈉(NaH2PO4)0.5g、硫酸鎂(MgSO4)0.25g、蛋白腖1.5g、酒石酸0.75g，瓊脂條16g切成小塊加入濾液中熱煮沸並用玻璃棒不停的攪拌，瓊脂完全溶解即溶液成透明狀再加水得1000ml蔣氏培養液，PH4.5-6.0。
其中，固體培養料滲透營養液得含水量65％的蔣氏培養基；固體培養料由以下成份組成蒙古櫟(Q.mongolica)鋸末屑50％、白樺(B.platyphylla)鋸末屑28％、黃豆汁液1％、玉米粉1％、麩皮20％；營養液由以下組份組成葡萄糖10g、煙酸0.5mg、馬鈴薯100g、磷酸二氫鉀(KH2PO4)0.5g、磷酸氫二鈉(NaH2PO4)0.5g、硫酸鎂(MgSO4)0.25g、蛋白腖1.5g、酒石酸0.75g、水1000mL；其中營養液的配製如下馬鈴薯100g切薄片放容器中加水1000ml煮沸8分鐘，用4目沙布過濾得濾液，濾液中加入葡萄糖10g、煙酸0.5g、磷酸二氫鉀(KH2PO4)0.5g、磷酸氫二鈉(NaH2PO4)0.5g、硫酸鎂(MgSO4)0.25g、蛋白腖1.5g、酒石酸0.75g，再加水得1000ml營養液。
本發明的目的還可以通過以下措施來達到松茸0288JiangZhonghai-China菌株發酵培養，蔣氏培養液1000mi加入發酵罐，再加入30ml菌球，發酵92h，罐壓0.5-0.8Kpa，攪拌速率210rpm/min，pH4.5-6.0，通氣量1∶0.5v/v.m，發酵液中松茸0288JiangZhonghai-China菌株菌絲乾重為2.9％；其中，菌球培養50ml蔣氏培養液接入0288JiangZhonghai-China菌株試管菌，每支試管接種5瓶，150r/min振蕩培養。
本發明首創了人工培育松茸子實體的方法，利用該方法可以大規模地栽培松茸，解決野生資源的匱乏，為松茸資源的綜合開發，工廠化生產，藥用、食用開闢廣闊前景。



圖1為本發明組培瓶培養成蕾10d的松茸子實體照片。
圖2為本發明組培瓶培養成蕾15d的松茸子實體照片。
圖3為本發明組培瓶培養成蕾18d的松茸子實體照片。
圖4為本發明組培瓶培養成蕾20d的松茸子實體照片。
實施例 A、選用松茸0288JiangZhonghai-China菌株，該松茸菌株保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號CGMCCNO.1719。
B、松茸母種培養首先，將馬鈴薯100g切成薄片，放在容器裡加入1000ml水煮沸8分鐘，用4目紗布過濾得濾液，濾液中加入葡萄糖10g、煙酸0.5mg、磷酸二氫鉀(KH2PO4)0.5g、磷酸氫二鈉(NaH2PO4)0.5g、硫酸鎂(MgSO4)0.25g、蛋白腖1.5g、酒石酸0.75g，瓊脂條16g切成小塊加入濾液煮沸並用玻璃棒不停的攪拌，使瓊脂完全溶解即溶液成透明狀，加水得1000ml蔣氏培養液；然後，母種按常規接種，分裝試管時儘量避免培養液附在試管口，這樣會更容易感菌，試管的裝液量為10ml，試管數量為10支扎捆滅菌，冷卻後接種松茸0288JiangZhonghai-China菌株，溫度25℃約20-25d松茸菌絲長滿試管。
C、松茸原種培養首先，將馬鈴薯100g切成薄片，放在容器裡加入1000ml水煮沸8分鐘，用4目紗布過濾得濾液，濾液中加入葡萄糖10g、煙酸0.5mg、磷酸二氫鉀(KH2PO4)0.5g、磷酸氫二鈉(NaH2PO4)0.5g、硫酸鎂(MgSO4)0.25g、蛋白腖1.5g、酒石酸0.75g，加水得1000ml蔣氏營養液；然後，營養液加入固體培養料得含水65％的蔣氏培養基，固體培養料由以下成份組成蒙古櫟(Q.mongolica)鋸末屑50％、白樺(B.platyphylla)鋸末屑28％、黃豆汁液1％、玉米粉1％、麩皮20％；其次，蔣氏培養基按無菌操作規程接種母種，每隻母種試管接原種5瓶組培瓶，25℃約45d松茸菌絲長滿瓶。
D、松茸生產種培養首先，蔣氏培養基的配製同上，然後，蔣氏培養基按無菌操作規程接種原種，每瓶原種接生產種5袋或20瓶，25℃約60d松茸菌絲長滿瓶或袋。每年7-8月製作松茸生產種較合適。
E、驚菌與促蕾當生產種菌絲長滿袋後須用竹板拍打地面造成聲響，搬動松茸菌袋進行驚菌移入到栽培室；其中，出菇管理條件早、午、晚溫差變化在18℃-10℃之間；空氣相對溼度85％～90％；光暗差以三分陰、七分陽即200-500Lx光照；足夠的通風保證氧氣供給。
通過本方法誘導菌蕾，其叢狀黃色，基生有時有二叉如鹿角狀，此時要小心把小的菌蕾用鑷子去掉一些，保證營養集中，15-25d菌蕾逐漸長大成子實體，如圖1、2、3、4所示。
權利要求
1.一種人工培育松茸子實體的方法，首先，選用松茸0288JiangZhonghai-China菌株在蔣氏培養液進行母種培養，溫度25℃約20-25d松茸菌絲長滿試管；然後，母種轉接入蔣氏培養基進行原種培養，溫度25℃約45d松茸菌絲長滿瓶；其次，原種轉接入蔣氏培養基進行生產種培養，溫度25℃約60d松茸菌絲長滿袋或瓶；最後，驚菌與促蕾15-25d生長得松茸子實體。
2.根據權利要求1所述的一種人工培育松茸子實體的方法，其特徵在於松茸0288JiangZhonghai-China菌株，其在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏，保藏編號是CGMCCNO.1719。
3.根據權利要求1所述的一種人工培育松茸子實體的方法，其特徵在於其中，蔣氏培養液由以下成份組成葡萄糖10g、煙酸0.5mg、瓊脂16g、馬鈴薯100g、磷酸二氫鉀(KH2PO4)0.5g、磷酸氫二鈉(NaH2PO4)0.5g、硫酸鎂(MgSO4)0.25g、蛋白腖1.5g、酒石酸0.75g、水1000mL。
4.根據權利要求3所述的一種人工培育松茸子實體的方法，其特徵在於其中，蔣氏培養液的配製如下馬鈴薯100g切薄片放容器中加水1000ml煮沸8分鐘，用4目沙布過濾得濾液，濾液中加入葡萄糖10g、煙酸0.5g、磷酸二氫鉀(KH2PO4)0.5g、磷酸氫二鈉(NaH2PO4)0.5g、硫酸鎂(MgSO4)0.25g、蛋白腖1.5g、酒石酸0.75g，瓊脂條16g切成小塊加入濾液中熱煮沸並用玻璃棒不停的攪拌，瓊脂完全溶解即溶液成透明狀再加水得1000ml蔣氏培養液，PH4.5-6.0。
5.根據權利要求1所述的一種人工培育松茸子實體的方法，其特徵在於其中，固體培養料滲透營養液得含水量65％的蔣氏培養基。
6.根據權利要求5所述的一種人工培育松茸子實體的方法，其特徵在於固體培養料由以下成份組成蒙古櫟(Q.mongolica)鋸末屑50％、白樺(B.platyphylla)鋸末屑28％、黃豆汁液1％、玉米粉1％、麩皮20％。
7.根據權利要求5所述的一種人工培育松茸子實體的方法，其特徵在於營養液由以下組份組成葡萄糖10g、煙酸0.5mg、馬鈴薯100g、磷酸二氫鉀(KH2PO4)0.5g、磷酸氫二鈉(NaH2PO4)0.5g、硫酸鎂(MgSO4)0.25g、蛋白腖1.5g、酒石酸0.75g、水1000mL。
8.根據權利要求5所述的一種人工培育松茸子實體的方法，其特徵在於其中營養液的配製如下馬鈴薯100g切薄片放容器中加水1000ml煮沸8分鐘，用4目沙布過濾得濾液，濾液中加入葡萄糖10g、煙酸0.5g、磷酸二氫鉀(KH2PO4)0.5g、磷酸氫二鈉(NaH2PO4)0.5g、硫酸鎂(MgSO4)0.25g、蛋白腖1.5g、酒石酸0.75g，再加水得1000ml培養液。
9.根據權利要求1所述的一種人工培育松茸子實體的方法，其特徵在於松茸0288JiangZhonghai-China菌株發酵培養，蔣氏培養液1000ml加入發酵罐，再加入30ml菌球，發酵92h，罐壓0.5-0.8Kpa，攪拌速率210rpm/min，pH4.5-6.0，通氣量1∶0.5v/v.m，發酵液中松茸0288JiangZhonghai-China菌株菌絲乾重為2.9％。
10.根據權利要求9所述的一種人工培育松茸子實體的方法，其特徵在於其中，菌球培養50ml蔣氏培養液接入0288JiangZhonghai-China菌株試管菌，每支試管接種5瓶，150r/min振蕩培養。
全文摘要
本發明公開了一種人工培育松茸子實體的方法，首先，選用松茸0288JiangZhonghai－China菌株在蔣氏培養液進行母種培養，溫度25℃約20－25d松茸菌絲長滿試管；然後，母種轉接入蔣氏培養基進行原種培養，溫度25℃約45d松茸菌絲長滿瓶；其次，原種轉接入蔣氏培養基進行生產種培養，溫度25℃約60d松茸菌絲長滿袋或瓶；最後，驚菌與促蕾15－25d生長得松茸子實體。本發明的松茸0288JiangZhonghai－China菌株保藏編號CGMCCNO.1719。本發明首創了人工培育松茸子實體的方法，利用該方法可以大規模地栽培松茸，解決野生資源的匱乏，為松茸資源的綜合開發，工廠化生產，藥用、食用開闢廣闊前景。
文檔編號C12N1/14GK1910988SQ20061008581
公開日2007年2月14日 申請日期2006年6月5日 優先權日2006年6月5日
發明者蔣中海, 蔣奇珊, 強冬梅 申請人:蔣中海