胰腺神經內分泌腫瘤易感基因位點及檢測方法和試劑盒的製作方法

2023-12-09 06:24:36 1

胰腺神經內分泌腫瘤易感基因位點及檢測方法和試劑盒的製作方法
【專利摘要】本發明涉及胰腺神經內分泌腫瘤易感基因位點及檢測方法和試劑盒。具體地，本發明公開了基於全基因測序研究而發現的胰腺神經內分泌腫瘤易感基因位點，該位點是YY1(YinYangl)基因的高頻T372R體細胞突變。本發明還提供了一種檢測胰腺神經內分泌腫瘤易感性和胰腺神經內分泌腫瘤亞型分類的方法，它包括檢測個體的YY1基因體細胞突變、轉錄本和/或蛋白與正常相比是否存在變異，存在變異就表明該個體胰腺神經內分泌腫瘤的亞型，為疾病的診斷、預後判斷和治療選擇提供重要依據。本發明還公開了相應的檢測試劑盒。
【專利說明】胰腺神經內分泌腫瘤易感基因位點及檢測方法和試劑盒

【技術領域】
[0001] 本發明涉及分子生物學和醫學領域。更具體地涉及YYl基因及其突變位點與胰腺 神經內分泌腫瘤的相關性，它們可在胰腺神經內分泌腫瘤中用於分型診斷和作為藥物靶標 的致病基因位點。本發明還涉及檢測這些突變位點的方法和試劑盒。

【背景技術】
[0002] 功能性胰腺神經內分泌腫瘤的主要類型為胰島細胞瘤。胰島細胞瘤不依賴葡萄糖 刺激持續過量分泌胰島素，可引起嚴重低血糖等臨床症狀。
[0003] 雖然已開展了一些胰腺神經內分泌腫瘤相關基因的遺傳學研究，過去幾年對胰腺 神經內分泌腫瘤的相關風險位點已經有了一些研究發現，但是對於導致散發功能性胰腺神 經內分泌腫瘤的遺傳背景尚缺乏了解。
[0004] 近年來，全基因組測序和全外顯子測序技術在多基因疾病研究中的廣泛運用，為 在分子水平上研究胰腺神經內分泌腫瘤的發生和發展的機制開闢了全新的途徑。同時，高 通量、低成本的突變測序檢測技術的不斷出現和成熟也為快速對重要疾病相關基因的序列 和位點分析提供了可能。
[0005] 重要疾病易感基因突變位點的存在與否以及在疾病人群中的發生及地域的差異 對多基因疾病的診斷、分型、預後半段和治療方案選擇具有重大意義。這些技術和方法是未 來實現疾病個體化治療的基礎。
[0006] 雖然已有一些基因突變和多態性位點與胰腺神經內分泌腫瘤相關性的研究，但沒 有證實YYl基因與功能性胰腺神經內分泌腫瘤相關性的報導，更沒有證實本發明所述的 YYl基因突變位點與胰腺神經內分泌腫瘤相關性的報導。
[0007] 綜上所述，為了儘早診斷、分型和治療胰腺神經內分泌腫瘤，本領域迫切需要尋找 胰腺神經內分泌腫瘤易感基因，並開發檢測胰腺神經內分泌腫瘤易感基因的方法、試劑盒， 或相關的治療藥物和方案。


【發明內容】

[0008] 本發明的目的就是提供一種輔助診斷（尤其是早期輔助診斷）胰腺神經內分泌腫 瘤的方法及檢測試劑盒。
[0009] 本發明的另一目的是提供一種新的治療胰腺神經內分泌腫瘤的方法。
[0010] 在本發明的第一方面，提供了一種體外非診斷性檢測樣品是否存在YYl基因的體 細胞位點突變的方法，包括步驟：
[0011] (a)用特異性引物擴增樣品的YYl基因，得到擴增產物；和
[0012] (b)檢測擴增產物中是否存在以下突變位點：
[0013] YYl基因的核苷酸序列即SEQ ID NO. :1中第1115位C - G。
[0014] 在另一優選例中，所述的YYl基因的核苷酸序列對應於人第14號染色體的第 100, 743, 807 位（NCBI36/hgl8)。
[0015] 在另一優選例中，所述的基因特異性引物具有SEQ ID N0:3和4所示序列。
[0016] 在另一優選例中，所述的擴增產物的長度為80-2000bp且含有SEQ ID NO: 1中第 1115 位。
[0017] 在另一優選例中，所述的檢測是對胰腺神經內分泌腫瘤細胞進行檢測。
[0018] 在本發明的第二方面，提供了一種檢測胰腺神經內分泌腫瘤的試劑盒，它包括特 異性擴增YYl基因或轉錄本的引物，所述的引物擴增出長度為80-2000bp且含有SEQ ID NO: 1中第1115位的擴增產物。
[0019] 在另一優選例中，所述試劑盒還含有選自下組的試劑：
[0020] (a)與SEQ ID NO: 1中第1115位的突變結合的探針；
[0021] (b)識別SEQ ID NO: 1中第1115位的突變限制性內切酶。
[0022] 在另一優選例中，所述的突變是以下單核苷酸突變（SNV):
[0023] YYl基因的核苷酸序列：即SEQ ID NO. : 1中第1115位C - G。
[0024] 在另一優選例中，所述的引物具有SEQ ID N0:3和4所示序列。
[0025] 在本發明的第三方面，提供了一種YYl基因的用途，用於製備對胰腺神經內分泌 腫瘤進行診斷分型的試劑或試劑盒。
[0026] 在另一優選例中，所述的試劑或試劑盒用於檢測以下單核苷酸突變（SNV):
[0027] YYl基因的核苷酸序列即SEQ ID NO. : 1中第1115位C - G。
[0028] 在另一優選例中，所述的試劑包括特異性擴增YYl基因或轉錄本的引物、含有所 述突變位點的擴增產物、與所述突變位點特異性結合的探針、特異性檢測所述突變位點的 核酸晶片。
[0029] 在另一優選例中，所述的試劑盒包括使用說明書以及一種或多種以下試劑：
[0030] 容器（a)以及位於所述容器內的特異性擴增YYl基因或轉錄本的引物；
[0031] 容器（b)以及位於所述容器內的與所述突變位點特異性結合的探針；
[0032] 容器（C)以及位於所述容器內的特異性檢測所述突變位點的核酸晶片。
[0033] 在另一優選例中，所述的核酸晶片還包括用於檢測額外的胰腺神經內分泌腫瘤易 感位點的檢測點。
[0034] 在另一優選例中，所述的額外的胰島細胞瘤體細胞突變位點選自下組：
[0035] MLL3基因的錯義突變：第7號染色體，第151，874, 400位A - G ;
[0036] H3F3A基因的錯義突變：第1號染色體，第226, 252, 135位A - G ;
[0037] LM02基因的移碼突變：第11號染色體，第33, 886, 330位插入C (*/+〇
[0038] 在本發明的第四方面，提供了一種多核苷酸分子的用途，所述的分子包括特異性 擴增含突變位點的擴增產物的引物和/或與所述SNV位點特異性結合的探針，其特徵在於， 所述的核苷酸分子用於製備對胰腺神經內分泌腫瘤進行診斷分型的試劑盒，並且所述的突 變位點選自下組：
[0039] YYl基因的核苷酸序列即SEQ ID NO. : 1中第1115位C - G。
[0040] 在另一優選例中，所述的突變位點是YYl基因的核苷酸序列，並且所述的試劑盒 用於判斷胰腺神經內分泌腫瘤病人是否適合採用依維莫司治療。
[0041] 在另一優選例中，當胰腺神經內分泌腫瘤病人具有該突變位點，則提示該病人適 合依維莫司（Everolimus)治療。
[0042] 在另一優選例中，所述試劑盒用於檢測東亞人群（尤其是中國人群）的胰腺神經 內分泌腫瘤分型。
[0043] 在本發明的第五方面，提供了一種對個體的胰腺神經內分泌腫瘤進行診斷分型 的方法，其特徵在於，它包括步驟：
[0044] 檢測該個體的YYl基因、轉錄本和/或蛋白，並與正常的YYl基因、轉錄本和/或 蛋白相比較，
[0045] 其中，存在差異就表明該個體患胰腺神經內分泌腫瘤屬於YYl突變亞型，具有特 定臨床特徵，預後判斷和治療手段。
[0046] 在另一優選例中，檢測的是YYl基因或轉錄本，並與正常細胞DNA核苷酸序列比較 差異。
[0047] 在另一優選例中，所述的YYl突變基因會造成下遊基因的表達量上調。
[0048] 在另一優選例中，所述的下遊基因包括IDH3A、UCP2、C0L1A1、C0X5A、PGC-I a、或 PGC-I P，優選地，所述的下遊基因包括IDH3A、UCP2、或C0L1A1。
[0049] 在另一優選例中，所述的差異是以下突變位點：
[0050] YYl基因的核苷酸序列即SEQ ID NO. : 1中第1115位C - G。
[0051] 在本發明的第六方面，提供了一種YYl基因的用途，它被用於製備判斷胰腺神經 內分泌腫瘤病人是否適合採用依維莫司治療的試劑或試劑盒。
[0052] 在本發明第七方面，提供了一種多核苷酸分子的用途，所述的分子包括特異性突 變位點的擴增產物的引物和/或與所述突變位點特異性結合的探針，所述的核苷酸分子用 於製備判斷胰腺神經內分泌腫瘤病人是否適合採用依維莫司治療的試劑盒，並且所述的突 變位點選自下組：
[0053] YYl基因的核苷酸序列即SEQ ID NO. : 1中第1115位C - G。
[0054] 在另一優選例中，當胰腺神經內分泌腫瘤病人具有該突變位點，則提示該病人適 合依維莫司（Everolimus)治療。
[0055] 應理解，在本發明範圍內中，本發明的上述各技術特徵和在下文（如實施例）中具 體描述的各技術特徵可以互相組合，從而構成新的或優選的技術方案。限於篇幅，在此不再 累述。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0056] 圖1顯示了散發功能性胰腺神經內分泌腫瘤中的YYl基因 T372R熱點突變。
[0057] (a)人類YYl蛋白功能域和外顯子示意圖。T372R突變位於YYl基因編碼蛋白的 第三個鋅指結構功能域中。
[0058] (b) Sanger測序和焦磷酸測序驗證T372R體細胞突變。
[0059] (c) T372位點及其所在的鋅指結構功能域在各物種之間非常保守。
[0060] (d)基於YYl蛋白鋅指結構功能域的蛋白晶體結構所進行的T372R突變位置分析。 T372R突變位於第三個鋅指結構功能域中，並處於和DNA結合的表面，提示其與轉錄調控和 DNA修飾有關。
[0061] 圖2顯示了散發胰島細胞瘤中的YYl基因T372R熱點突變的檢測結果。通過 Sanger測序（a)和焦磷酸測序（b)技術檢測和確定了胰島細胞瘤細胞中YYl基因的T372R 熱點突變。
[0062] 圖3顯示了散發胰島細胞瘤中的YYl基因表達的定量檢測結果。突變型和野生型 YYl基因在胰島細胞瘤細胞中均有較高水平的表達。
[0063] 圖4顯示了散發胰島細胞瘤中的YYl基因發生T372R突變後，對下遊基因表達的 影響。
[0064] 圖5顯示了轉基因小鼠模型構建策略。
[0065] 圖6的細胞增殖檢測顯示野生型和突變型YYl基因過表達均能誘導胰島細胞瘤細 胞顯著增殖，T372R突變型YYl基因促進胰島細胞瘤細胞增殖的作用更強。
[0066] 圖7顯示了 YYl轉基因小鼠胰島細胞增殖標誌物Ki67表達顯著增高，而給予mTOR 抑制劑後Ki67的升高受到可被顯著抑制。

【具體實施方式】
[0067] 本發明人經過廣泛而深入的研究，對大量候選基因進行了測定和分析。首次發現 和證明了 YYl基因組序列與胰腺神經內分泌腫瘤（即胰島細胞瘤）的發生密切相關。關聯 研究結果顯示，在SEQ ID NO: 1中第1115位（第14號染色體第100, 743, 807位C - G)的 突變位點（命名為T372R突變）在對照組和病例組中的分布存在顯著性差異（P〈0. 05)，因 此可作為輔助性診斷檢測的特異性基因位點（SNV)。在此基礎上完成了本發明。
[0068] 具體地，通過對10對散發的功能性胰腺神經內分泌腫瘤進行全外顯子測序，本發 明人發現了在YYl (Yin Yangl)基因中高頻率的T372R突變，並在113例的功能性胰腺神經 內分泌腫瘤中通過測序發現此位點在所有的腫瘤中突變頻率非常高，為30% (34/113)。該 基因的熱點突變首次揭示了 YYl基因的T372R位點對於胰腺神經內分泌腫瘤發生的重要作 用，並可用於胰腺神經內分泌腫瘤的分型診斷標誌物和藥物靶點，即具有該位點的YYl基 因突變更適合採用mTOR(例如依維莫司）進行治療。
[0069] YYl 基因
[0070] YYl基因的序列是已知，其詳細序列和一些相關信息可參見網址http: //Ww. ncbi.nlm.nih.gov/Genebank/。為了方便起見，在SEQ ID NO: 1給出YYl基因與本發明相 關的核苷酸序列。
[0071] YYl基因位於14號染色體，編碼YYl蛋白，YYl蛋白為廣泛表達且保守的轉錄因 子，在代謝調控，多種腫瘤發生以及表觀遺傳調控等過程中起重要作用。
[0072] 胰腺神經內分泌腫瘤相關突變
[0073] 本發明人通過全基因組關聯和驗證研究，研究結果表明，SEQ ID NO: 1中第1115位 的突變是與胰腺神經內分泌腫瘤發生關聯性非常高的位點。該高頻率的T372R突變在所有 的散發胰島細胞瘤中突變頻率非常高，為約30% (34/113)。
[0074] 具體而言，本發明揭示了 YYl基因的T372R位點突變與胰腺神經內分泌腫瘤發生 的相關性。
[0075] 如本文所用，術語"本發明的基因突變位點"或"本發明SNV"指YYl基因的核苷酸 序列（如SEQ ID NO. : 1所示）中第1115位C/G突變，等位基因型G在胰腺神經內分泌腫 瘤中的發生頻率，要顯著高於在正常對照人群中的頻率。在正常對照DNA序列中無該突變 位點存在。
[0076] 基於本發明的新發現，YYl基因或相應的核酸分子或多肽分子有多方面的新用途。 這些用途包括（但不限於）：
[0077] 用於輔助性診斷胰腺神經內分泌腫瘤；
[0078] 用於輔助性判斷胰腺神經內分泌腫瘤治療方案（如是否適合依維莫司治療方 案）；
[0079] 用於製備用於輔助性診斷胰腺神經內分泌腫瘤的試劑或試劑盒；
[0080] 用於製備判斷胰腺神經內分泌腫瘤病人是否適合採用依維莫司治療的試劑盒。
[0081] 檢測方法、檢測試劑及試劑盒
[0082] 與YYl基因相關的突變位點可用於胰腺神經內分泌腫瘤的輔助診斷分型，尤其是 早期輔助性診斷。另一方面，本發明的檢測方法可用於評估胰腺神經內分泌腫瘤患者個體 的疾病預後和治療方案。
[0083] 本領域的技術人員知道，有大量的分析技術可用於檢測基因中所述位點是否存在 突變。這些技術包括（但並不限於）=DNA測序、雜交測序；酶促錯配切割、異源雙鏈分析、點 雜交、寡核苷酸陣列（晶片）、焦磷酸測序、Taqman探針檢測技術、分子信標等。
[0084] 用於本發明的測試樣品沒有特別限制，對於檢測突變位點而言，可以是從細胞或 組織等樣品中抽提出的DNA或mRNA。由於本發明的T372R突變是體細胞突變，因此該在突 變存在於胰島細胞或胰島腫瘤細胞中，通常而不存在於外周血細胞中。因此，優選的測試樣 品是胰島組織或胰島腫瘤細胞。
[0085] 本發明的基因序列檢測的一部分或全部可作為探針固定在微陣列（microarray) 或DNA晶片（又稱為"基因晶片"或"核酸晶片"）上，用於分析組織中基因的序列和差異表 達分析，以及基因診斷。用YYl基因特異的引物進行RNA-聚合酶鏈反應（RT-PCR)體外擴 增也可檢測相應的轉錄產物。
[0086] 檢測可以針對cDNA，也可針對基因組DNA。YYl基因的突變的形式包括與正常 野生型DNA序列相比的點突變、易位、缺失、重組和其它任何異常等。可用已有的技術如 Southern印跡法、DNA序列分析、PCR和原位雜交檢測突變。另外，突變有可能影響相關蛋 白的表達，因此用Northern印跡法、Western印跡法可間接判斷基因有無突變。
[0087] 最方便的檢測本發明突變位點的方法，是通過用YYl基因特異性引物擴增樣品的 YYl基因，得到擴增產物；然後檢測擴增產物中是否存本發明的單核苷酸突變（SNV)。
[0088] 應理解，在本發明首次揭示了 YYl基因的突變位點與胰腺神經內分泌腫瘤的相關 性之後，本領域技術人員可以方便地設計出可特異性擴增出含該突變位點位置的擴增產 物，然後通過測序等方法確定是否存在本發明的突變。通常，引物的長度為15-50bp，較佳地 為20-30bp。雖然引物與模板序列完全互補是優選的，但是本領域技術人員知道，在引物與 模板存在一定的不互補（尤其是引物的5'端）的情況下，也能夠特異性地擴增（即僅擴增 出所需的片段）。含有這些引物的試劑盒和使用這些引物的方法都在本發明範圍之內，只 要該引物擴增出的擴增產物含有本發明基因突變位點的對應位置。一種優選的引物對具有 SEQ ID NO: 1中第1115位的序列。
[0089] 雖然擴增產物的長度沒有特別限制，但是通常擴增產物的長度為100_2000bp，較 佳地為150-1500bp，更佳地為200-1000bp。這些擴增產物都應含有SEQ ID N0:1中第1115 位。
[0090] 本發明的主要優點包括：
[0091] 首次用實驗證實了 1種新體細胞突變與胰腺神經內分泌腫瘤的密切相關性，進而 提供了輔助性診斷分型胰腺神經內分泌腫瘤的方法和試劑盒。本發明可以為臨床診斷（尤 其是早期診斷）胰腺神經內分泌腫瘤提供極為有價值的輔助性參考指標，從而有利於實現 胰腺神經內分泌腫瘤的早診斷、分型診斷和早期預防。
[0092] 由於本發明的突變位點與胰腺神經內分泌腫瘤具有非常高的關聯性，因此不僅可 用於早期輔助性診斷胰腺神經內分泌腫瘤，而且可以未雨綢繆地使一些攜帶者在未發病前 就採取合理的預防措施，從而提高攜帶者的生存期和生存質量，因此具有極其重大的應用 價值和社會效益。當然，最終診斷還應當用常規檢測方法進行確診。
[0093] 下面結合具體實施例，進一步闡述本發明。應理解，這些實施例僅用於說明本發明 而不用於限制本發明的範圍。下列實施例中未註明具體條件的實驗方法，通常按照常規條 件如 Sambrook 等人，分子克隆：實驗室手冊（New York:Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989)中所述的條件，或按照製造廠商所建議的條件。
[0094] 在本發明中，關於各基因的序列，蛋白質結構及其他一些有用信息，可在如下電子 資料庫信息中找到：
[0095] Cancer Gene Census (http://www. sanger. ac. uk/genetics/CGP/Census/)
[0096] Picard(http://picard. sourceforge. net/)
[0097] PyMOL (http: //www. pymol. org)
[0098] 實施例I
[0099] I. I臨床標本
[0100] 功能性胰腺神經內分泌腫瘤診斷的標準：出現低血糖等相關臨床症狀，評估血胰 島素和血糖水平（延長口服葡萄糖耐量試驗），CT/PET-CT影響診斷，手術切除腫瘤的病理 診斷。基因組DNA抽提自液氮保存的胰島細胞腫瘤和匹配的外周血液樣本，以及福馬林 固定的石蠟包埋（FFPE)的胰島素瘤組織樣本。DNA的製備使用QIAGEN公司的DNeasy試劑 盒以及QIAamp DNA FFPE組織試劑盒。
[0101] 對FFPE組織使用標準技術進行脫蠟。對樣本進行免疫螢光染色，根據標準的實驗 步驟。使用了以下的主要抗體：多克隆兔抗YYl抗體（1:100 ;0riGene，克隆EPR4651)和多 克隆豚鼠抗胰島素（l:400，Dako公司）。用於免疫突光染色的二抗購自Invitrogen和Dako 公司。使用奧林巴斯顯微鏡系統拍攝圖像。
[0102] 1. 2外顯子組捕獲，文庫製備和測序
[0103] 使用Covaris技術，構建片段200至300bp的基因組文庫。基因組DNA來源於胰島 細胞瘤腫瘤組織及其匹配的外周血。然後使用適配器連接的片段的兩端。然後，對提取的 0嫩通過？0?〇11-?0〇擴增並純化，在附1111316661^24411人外顯子組測序晶片上進行雜交，然 後洗滌去掉非雜交的片段。非捕獲和捕獲的LM-PCR產物通過進行定量PCR來評估富集程 度。捕獲的每個文庫在Hi Seq2000平臺進行高通量測序，並確保每個樣品滿足所需要的平 均測序覆蓋深度。測序的圖像文件通過Illumina的軟體（默認參數）進行讀取。
[0104] 1. 3測序序列比對和變異檢測
[0105] 使用默認參數的BWA軟體（vO. 5. 9)，參照NCBI人類參考基因組（hgl9)對高質量 的測序結果序列進行比對。使用Picard軟體（vl. 54)和基因組分析工具（vl. 0. 6076, GATK IndelRealigner)，提高分析準確度。體細胞的點突變檢測使用VarScan2. 2. 5軟體，程序參 數如下：samtools (vO. L 18) 3mpileup - Q0&&VarScan2. 2. 5somatic -min-coveragelO-mi n-coverage-normal 10-min-coverage-tumorlO-min-var-freqO. I -min_avg-qualO〇 使用 默認參數GATK SomaticIndelDetector軟體對InDel進行了分析。高可置信突變位點，全 部進行人工檢查，然後使用ANNOVAR進行注釋。
[0106] I. 4PCR 和 Sanger 測序
[0107] 使用雙 96 孔的 GeneAmp PCR 系統 9700 (Applied Biosystems 公司）進行 PCR， 每個樣品中每個反應使用20ng模板DNA。使用3730x1 DNA分析儀（Applied Biosystems 公司）進行測序。所有序列由序列分析軟體（Applied Biosystems公司，版本5. 2) 進行分析。使用以下引物：5'-CACCCAGGGCAGGAATG-3' 人 YYl-Fl (SEQ ID NO. :3); 5'-CCTGTCTCCGGTATGGA-3' 人 YY1-R1(SEQ ID NO. :4)。
[0108] 1. 5突變的焦磷酸測序驗證
[0109] 使用 QIAGEN PyroMark Q96ID 系統，與 PyroMark Q96 真空工作站和 PyroMark 黃 金Q96試劑，按照用戶手冊中的說明進行焦磷酸測序。
[0110] 使用以下引物：

【權利要求】
1. 一種體外非診斷性檢測樣品是否存在YYl基因的體細胞位點突變的方法，其特徵在 於，包括步驟： (a) 用特異性引物擴增樣品的YYl基因，得到擴增產物；和 (b) 檢測擴增產物中是否存在以下突變位點： YYl基因的核苷酸序列即SEQ ID NO. : 1中第1115位C - G。
2. 如權利要求1所述的方法，其特徵在於，所述的基因特異性引物具有SEQ ID N0:3和 4所示序列。
3. 如權利要求1所述的方法，其特徵在於，所述的擴增產物的長度為100_2000bp且含 有 SEQ ID NO: 1 中第 1115 位。
4. 一種檢測胰腺神經內分泌腫瘤的試劑盒，其特徵在於，它包括特異性擴增YYl基因 或轉錄本的引物，所述的引物用於擴增出長度為80-2000bp且含有SEQ ID NO: 1中第1115 位的擴增產物。
5. 如權利要求4所述的試劑盒，其特徵在於，它還含有選自下組的試劑： (a) 與SEQ ID NO: 1中第1115位的突變結合的探針； (b) 識別SEQ ID NO: 1中第1115位的突變限制性內切酶。
6. 如權利要求5所述的試劑盒，其特徵在於，所述的突變是以下單核苷酸突變（SNV): YYl基因的核苷酸序列：即SEQ ID NO. : 1中第1115位C - G。
7. -種YYl基因的用途，其特徵在於，用於製備對胰腺神經內分泌腫瘤亞型進行診斷 (或判斷）的試劑或試劑盒。
8. 如權利要求7所述的用途，其特徵在於，所述的試劑或試劑盒用於檢測以下單核苷 酸突變（SNV): YYl基因的核苷酸序列：即SEQ ID NO. : 1中第1115位C - G。
9. 一種多核苷酸分子的用途，所述的分子包括特異性擴增含單核苷酸突變位點（SNV 位點）的擴增產物的引物和/或與所述SNV位點特異性結合的探針，其特徵在於，所述的核 苷酸分子用於製備對胰腺神經內分泌腫瘤亞型進行診斷的試劑盒，並且所述的突變位點選 自下組： YYl基因的核苷酸序列：即SEQ ID NO. : 1中第1115位C - G。
10. -種YYl基因的用途，其特徵在於，用於製備判斷胰腺神經內分泌腫瘤病人是否適 合採用依維莫司治療的試劑或試劑盒。
11. 一種多核苷酸分子的用途，所述的分子包括特異性擴增含突變位點的擴增產物的 引物和/或與所述突變位點特異性結合的探針，其特徵在於，所述的多核苷酸分子用於制 備判斷胰腺神經內分泌腫瘤病人是否適合採用依維莫司治療的試劑盒，並且所述的突變位 點選自下組： YYl基因的核苷酸序列：即SEQ ID NO. : 1中第1115位C - G。
【文檔編號】C12Q1/68GK104212884SQ201410235719
【公開日】2014年12月17日 申請日期:2014年5月29日 優先權日:2013年5月29日
【發明者】寧光, 曹亞南, 王衛慶, 王俊, 高志博, 李林 申請人:中國科學院上海生命科學研究院, 上海交通大學醫學院附屬瑞金醫院, 深圳華大基因研究院