餐後高血糖指標、其測定方法及其用途的製作方法

2023-12-06 13:28:51

專利名稱：：餐後高血糖指標、其測定方法及其用途的製作方法
技術領域：
：本發明涉及餐後高血糖指標、其檢測方法、及其用途。
背景技術：
：作為指示生物體狀態的指標，通常對各種蛋白質的糖化物進行糖化率的測定。其中，血細胞中血紅蛋白(Hb)的糖化物(以下也稱"Hb糖化物")被視為糖尿病的診斷與治療等中重要的指標。Hb糖化物包括Hb的p鏈N末端胺基酸(纈氨酸)殘基的a-氨基上結合有葡萄糖的物質(以下也稱"HbAlc")、Hb的賴氨酸殘基的側鏈氨基上結合有葡萄糖的物質(以下也稱"GHbLys")、Hb的精氨酸殘基的側鏈氨基上結合有葡萄糖的物質等。尤其是已知HbAlc反映著生物體內血糖值的過去(約l~2個月)的履歷，具體來說，反映著過去平時的血糖值的平均值。HbAlc的值(HbAlc%)通常用總Hb量(或總HbA量)中的HbAlc量的比例(％)來表示，也稱為例如Hb的p鏈N末端胺基酸殘基的糖化率或(3鏈N末端氨基的糖化率。近年來，檢測作為糖尿病的初期階段的餐後高血糖受到矚目。餐後高血糖，即空腹時的血糖值在正常範圍內(110mg/dL以下)但餐後約l~2小時的血糖值變高的症狀，一般來說，2小時後變為140mg/dL以上。若對該餐後高血糖不採取措施，有發展為真正的糖尿病的危險及併發症、腦梗塞、心肌梗塞等的危險性增加的問題。因此為預防糖尿病等，；險測餐後高血糖很重要。然而，作為餐後高血糖的檢測方法所採用的糖耐量試驗，對患者會造成例如如下的負擔。首先，進行糖耐量試驗時，患者檢查前必須禁食8小時以上(例如，14小時以上)，在空腹的8狀態下服用75g試驗用的澱粉水解物(葡萄糖)。此外，因餐後血糖的變化快，還必須至少在服用前、服用後30分鐘後、60分鐘後、120分鐘後進行採血，測定血糖值。另外，因採集的血液試樣中會發生血球細胞引起的葡萄糖消化，必須在能迅速進行測定的設施內進行該試驗。由於這種原因，為了檢測餐後高血糖而直接測定血糖，對患者時間上、身體上都造成了負擔。因此，期待一種不通過上述的直接方法就能間接判斷餐後血糖的方法。然而，上述的HbAlc雖在糖尿病診斷中是非常有效的指標，但由於反映的是過去l~2個月的平均血糖值，因此以HbAlc為指標無法檢測餐後高血糖。這被認為是由於如下的原因。即短時間的血糖上升雖然快速生成作為HbAlc前體的不穩定型HbAlc，但由不穩定型HbAlc難以生成穩定型HbAlc。因此認為雖然通過穩定型HbAlc的測定可判斷慢性高血糖，但無法判斷僅在餐後顯示高血糖的餐後高血糖(非專利文獻l)。即，穩定型HbAlc為指示患者過去平時的平均血糖值的指標，無法反映受飲食影響的一天內的血糖值變動，因此不能作為掌握餐後高血糖的指標。另外，因不穩定型HbAlc自身測定困難，依據不穩定型HbAlc的測定來判斷餐後高血糖並不實用。非專利文獻1:JournalofLaboratoryandClinicalMedicine,Vol147，1，1-2006，p21-2
發明內容因此，為了通過指標間接檢測餐後高血糖，本發明的目的在於提供新的餐後高血糖指標以及其4企測方法。本發明為用於診斷餐後高血糖的餐後高血糖指標，該指標包含賴氨酸殘基被糖化的血紅蛋白(以下也稱"GHbLys")。9本發明的餐後高血糖指標的測定方法中，所述指標為本發明的餐後高血糖指標(GHbLys)，所述餐後高血糖指標的測定為血紅蛋白(以下也稱"Hb")的賴氨酸殘基的糖化率的測定。本發明的危險度確定方法為確定受試體患糖尿病的危險度的方法，包括下述(a)步驟。(a)對於採自受試體的血液試樣，通過本發明的測定方法測定Hb的賴氨酸殘基的糖化率，由此來測定本發明的餐後高血糖指標GHbLys的步驟本發明的診斷方法為診斷受試體的餐後高血糖的方法，包括下述(c)步驟。(c)對於採自受試體的血液試樣，通過本發明的測定方法測定Hb的賴氨酸殘基的糖化率，由此來測定本發明的餐後高血糖指標GHbLys的步驟本發明的平均血糖值的測定方法，其特徵在於，其為一種反映餐後血糖值的平均血糖值的測定方法，含下述(x)~(y)。(x)測定平均血糖值指標的步驟，所述平均血糖值指標為本發明的餐後高血糖指標，對於採自受試體的血液試樣，通過本發明的餐後高血糖指標的測定方法，測定Hb的賴氨酸殘基的糖化率的步驟(y)在Hb的賴氨酸殘基的糖化率與反映餐後血糖值的平均血糖值的關係式中，代入所述(x)步驟中測定的Hb的賴氨酸殘基的糖化率，計算反映餐後血糖值的平均血糖值的步驟本發明的指標測定用試劑盒為本發明的餐後高血糖指標的測定方法中使用的試劑盒，包含蛋白酶、果糖基胺基酸氧化酶(fructosylaminoacidoxidase)、過氧化物酶以及通過氧化而顯色的底物。另外，本發明的指標測定用試劑盒也可以用在本發明的平均血糖值的測定方法中。10本發明的危險度確定用試劑盒為本發明的確定患糖尿病的危險度的方法中使用的試劑盒，包含蛋白酶、果糖基胺基酸氧化酶、過氧化物酶以及通過氧化而顯色的底物。本發明的餐後高血糖診斷用試劑盒為本發明的餐後高血糖的診斷方法中使用的試劑盒，包含蛋白酶、果糖基胺基酸氧化酶、過氧化物酶以及通過氧化而顯色的底物。本發明人等深入研究的結果，首次發現賴氨酸殘基的側鏈氨基被糖化的血紅蛋白(GHbLys)的糖化率與餐後高血糖顯示相關性。作為糖化Hb的一種的HbAlc例如對血糖值的變動緩慢響應而生成。因此，如果高血糖不持續數小時左右(例如，5小時至12小時)，則難以生成如上所述的穩定型HbAlc,無法確認HbAlc值(HbAlc%)的上升。因此，HbAlc的測定被限制於間接地檢測過去約l~2個月的血糖值的履歷，無法檢測餐後高血糖。與此相對，GHbLys例如即便在餐後數十分鐘~2小時左右的短時間，也能對高血糖狀態敏感地反應而生成，另外，其量的增加與血糖上升相關是由本發明人等揭示的。依據該新發現，通過將GHbLys作為餐後高血糖指標，測定其糖化率，能間接地檢測餐後高血糖。餐後高血糖為所謂的臨界性糖尿病(BorderlineDiabetes),通過在該階段進行充分的預防，能延遲及防止糖尿病的發展，抑制併發症等。因此，通過本發明來檢測作為餐後高血糖指標的GHbLys,例如可判斷是否為餐後高血糖。進而，通過本發明的餐後高血糖指標GHbLys的測定，例如可確定糖尿病的發病危險度，即可確定由初期階^殳向後期階段發展的可能性。因而本發明對於餐後高血糖的診斷及防止糖尿病的發展可謂極為有用。ii圖1為示意在本發明的實施例1中，添加葡萄糖的血的孵育時間與血漿葡萄糖濃度的關係的圖。圖2為示意在本發明的上述實施例1中，添加葡萄糖的血的孵育時間與血細胞HbAlc。/。的關係的圖。圖3為示意在本發明的上述實施例1中，添加葡萄糖的血的孵育時間與血細胞不穩定型HbAlc。/。的關係的圖。圖4為示意在本發明的上述實施例1中，添加葡萄糖的血的孵育時間與血細胞GHbLys%的關係的圖。圖5為示意在本發明的實施例2中，HbAlc。/。和與葡萄糖共孵育時間的關係的圖。圖6為示意本發明的上述實施例2中，GHbLys。/。和與葡萄糖共孵育時間的關係的圖。圖7為示意本發明的實施例3中，全血的保存時間與GHbLys。/。的關係的圖。具體實施例方式<餐後高血糖指標〉本發明的餐後高血糖指標如上所述，為賴氨酸殘基^皮糖化的血紅蛋白(GHbLys)。具體來說，為賴氨酸殘基的側鏈氨基(s-氨基)被糖化的Hb。如上所述，試樣中的GHbLys是餐後高血糖的指標，這是由本發明人等首先發現的事實。通過將該GHbLys作為餐後高血糖指標，如下所述，可判斷是否為餐後高血糖或其程度，進而可判斷糖尿病(發展為中期或後期)的危險性。另外，本發明中GHbLys亦為反映餐後血糖值的平均血糖值的指標。如上所述，HbAlc雖為指示過去的血糖值的履歷的指標，但只與平時的血糖值的平均值相關，不能反映一天內的變動。因此，即便是餐後血糖值上升的情況下(餐後高血糖的情12況下)，以HbAlc作為指標的平均血糖值中也無法反映出該情況。與此相對，本發明人等已揭示GHbLys為反映餐後血糖值的平均血糖值的指標。因此，如下所述，通過測定本發明的指標GHbLys並計算反映餐後血糖值的平均血糖值，例如能夠判斷是否為餐後高血糖。本發明的餐後高血糖指標的測定方法中，如上所述，所述指標為本發明的餐後高血糖指標，所述餐後高血糖指標的測定為Hb的賴氨酸殘基的糖化率的測定。本發明中，Hb的賴氨酸殘基的糖化率通常指總Hb中的賴氨酸殘基被糖化的Hb的比例，具體來說，指Hb的總量(或濃度)中的賴氨酸被糖化的Hb的量(或濃度)的比例。賴氨酸殘基被糖化的Hb量(或濃度)例如為賴氨酸殘基的糖化量(或糖化濃度)。並且如上所述，GHbLys為賴氨酸殘基^^皮糖化的Hb,因此，本發明中，Hb的賴氨酸殘基的糖化率可稱為GHbLys的值。本發明中，以下也將GHbLys值即上述糖化率稱為GHbLys%。本發明中，"總Hb，，例如可指包含HbA、HbA2以及HbF等所有Hb的意思，也可指總HbA。另外，總Hb包含例如未被糖化的Hb與被糖化的Hb雙方。另外，本發明中，總Hb例如可為Hb中的所有賴氨酸殘基，也可為Hb中的特定的賴氨酸殘基。該情況下，總Hb包括未被糖化的賴氨酸殘基與被糖化的賴氨酸殘基雙方。本發明中，"賴氨酸殘基被糖化的Hb"例如指賴氨酸殘基被糖化的HbA。另外，"賴氨酸殘基被糖化的Hb"也可為Hb中的被糖化的賴氨酸殘基或Hb中的被糖化的特定的賴氨酸殘基。即上述糖化率例如也可指Hb中總賴氨酸殘基中的被糖化的賴氨酸殘基的比例，或Hb中特定的賴氨酸殘基中的、被糖化的特定的13賴氨酸殘基的比例。GHbLys。/。例如可通過下述式計算。GHbLys%=(GHbLys/總Hb)x畫上述式中，GHbLys可列舉出例如GHbLys量(例如Hb的賴氨酸殘基的糖化量)或GHbLys濃度(例如Hb的賴氨酸殘基的糖化濃度)。另外，總Hb可列舉出例如Hb的總量或Hb濃度，或者是HbA的總量或HbA濃度。基於上述式，例如通過計算Hb的賴氨酸殘基的糖化量(Hb的賴氨酸殘基的糖化濃度)與試樣中的總Hb量(Hb濃度)或總HbA量(HbA濃度)之比(百分率)，可求得GHbLysM。如上所述，餐後高血糖一般指餐後約l~2小時血糖值升高的症狀，通常分類為200mg/dL以上為糖尿病、140mg/dL以上為臨界型。若採用本發明的測定方法，通過測定本發明的餐後高血糖指標GHbLys來代替餐後約l~2小時的血糖值(葡萄糖濃度)的測定，例如可判斷餐後高血糖。另外，通過餐後高血糖指標GHbLys的測定，進而，如上所述可換算為反映餐後血糖值的平均血糖值。本發明的特徵在於揭示了GHbLys%與餐後高血糖顯示相關性，即揭示了通過GHbLys。/o的測定能檢測餐後高血糖這一點。因此，GHbLys。/。的測定方法本身無任何限制，可採用目前公知的測定方法。GHbLys。/。的測定方法可列舉出例如高效液相色譜(HPLC)法、免疫法、酶法、電泳法、質譜法等。以下作為一個例子示意出通過酶法進4亍的GHbLys。/。的測定方法。本發明不受限於此。通過酶法進行的GHbLys。/。測定方法例如包括下述(A)~(C)步驟。另外，蛋白酶的切斷對象為"Hb",其含義也包括被糖化的Hb。另外，作為片段得到的賴氨酸與含賴氨酸殘基的肽，其含義也包括被糖化的賴氨酸、含被糖化的賴氨酸殘基的肽。(A)用蛋白酶切斷Hb的步驟(B)使果糖基胺基酸氧化酶(以下稱"FAOD")作用於所得到的Hb片段中賴氨酸殘基的糖化部分的步驟(C)通過測定所述糖化部分與FAOD的氧化還原反應來確定Hb的賴氨酸殘基的糖化率的步驟(A)蛋白酶處理通過蛋白酶從Hb切出的片段中，通常包括賴氨酸、被糖化的賴氨酸(糖化賴氨酸)、含賴氨酸殘基的肽(賴氨酸肽)或含被糖化的賴氨酸殘基的肽(糖化賴氨酸肽)。Hb中，已報告的確認糖化的賴氨酸殘基有例如a鏈的61位、40位、7位、16位、139位、127位，p鏈的66位、17位、8位、61位、65位、132位、144位等。其中，糖化率的測定中尤其有用的為例如a鏈的61位、40位、127位，p鏈的66位、17位等(X.Zhangetal.，J.Chromatogr.B759(2001)1-15、R.Shapiroetal"J.Biol.Chem.255(1980)3120)。上述通過蛋白酶處理Hb的降解才莫式(digestionpattern)沒有限制，例如可根據使用的蛋白酶適當確定。切出的肽的長度沒有限制，可根據蛋白酶適當設定。作為具體例子，胺基酸殘基數例如為26個，更優選為24個。切出的肽的序列例如因蛋白酶的種類等有差異，例如含a鏈的第127位賴氨酸的肽的情況下，可考慮Leu—Asp-Lys-Phe、Leu—Asp-Lys等。上述蛋白酶可使用例如金屬蛋白酶、絲氨酸蛋白酶、絲氨酸羧肽酶、蛋白酶K、菠蘿蛋白酶、木瓜蛋白酶、豬胰腺來源的胰蛋白酶、枯草芽孢桿菌(Sac,7/w^Zm7")來源的蛋白酶、米麴黴(」w^^7/wc^jz"e)來源的蛋白酶等，優選內切蛋白15酶。市售品例如可舉出金屬蛋白酶(愛科來公司生產)、蛋白酶A"AMANO"G(天野酶製品林式會社生產)、蛋白酶M"AMANO，，G(天野酶製品株式會社生產)、蛋白酶S"AMANO"G(天野酶製品抹式會社生產)、肽酶R(天野酶製品抹式會社生產)、木瓜蛋白酶M-40(天野酶製品林式會社生產)、商品名蛋白酶N(7乂L力公司生產)、商品名蛋白酶N"AMANO"(天野製藥公司生產)、Bacillus屬來源的金屬蛋白酶(東洋紡公司生產商品名卜3f—厶)等。其中，切出賴氨酸或糖化賴氨酸或者是賴氨酸肽或糖化賴氨酸肽的情況下，例如優選使用國際公開第2002/006519號小冊子中記載的蛋白酶等。這些蛋白酶例如若在下述的切斷促進化合物的存在下使用，可極為迅速而且特異地進行Hb的切斷。Hb的切斷例如可通過向含Hb的試樣中添加蛋白酶來進行。蛋白酶處理的反應液中蛋白酶的添加比例例如在0.001~300000KU/L的範圍內，優選為O.Ol~30000KU/L,特別優選為0.1~10000KU/L。所述反應液中的Hb濃度為0.005mM的情況下，蛋白酶的添加比例例如在O.Ol~300000KU/L的範圍內，優選為0.05~30000KU/L,特別優選為0.1~10000KU/L。這裡蛋白酶的活性單位"U，，定義為以l分鐘內能增加相當於l微摩爾酪氨酸在275nm的吸光度的酶量為1U。上述蛋白酶處理例如優選在緩衝液中進行。上述緩沖液例如可使用Tris-鹽酸緩衝液、EPPS緩衝液、PIPES緩衝液、磷酸緩衝液、ADA緩衝液，檸檬酸緩衝液、醋酸緩衝液、MES緩衝液、MOPS緩衝液、HEPES緩衝液、蘋果酸緩衝液等。上述反應液的pH例如在4IO的範圍內，優選為6~9。上述pH例如也可根據如上所述的緩衝液進行調整。蛋白酶處理的條件沒有限制。作為具體例子，處理溫度例如在10~40。C的範圍內，優選為2537。C。處理時間例如為1~IOO分鐘左右，優選為110分鐘。上述試樣只需為含Hb的試樣即可，沒有特別限制。具體例子例如可舉出全血試樣、血細胞試樣、它們的溶血試樣等。全血試樣與血細胞試樣的溶血方法沒有限制，例如可使用利用滲透壓差的方法、利用超聲波的方法等。利用滲透壓差時，對於全血(或血細l包)例如可添加2~10(H咅體積量的純^ft水進4亍溶血。另外，也可在試樣中添加表面活性劑進4亍溶血。上述蛋白酶處理例如也可在如以下所示的促進化合物的存在下進行。在所述促進化合物的存在下對Hb進行蛋白酶處理，例如可在短時間內切出賴氨酸或賴氨酸肽。因此，例如可實現蛋白酶處理的高效率、短縮時間。另外因可實現高效率的蛋白酶處理，例如也不需要增加處理中使用的蛋白酶的量。另外，通過上述促進化合物，可高效率地從Hb切出賴氨酸或賴氨酸肽的機制尚且不明，推測通過上述促進化合物的共存，Hb變為易被蛋白酶處理的構造。上述促進化合物可舉出例如下述式(I)中所表示的化合物。R-X(I)上述式(I)中，R為碳原子數9以上的烷基、取代烷基、醯基或取代醯基。作為具體例子，可舉出碳原子數9-16的直鏈烷基或直鏈醯基、碳原子數為10~40且主鏈碳原子數為9~16的支鏈烷基或支鏈醯基、或被環烷基取代的直鏈烷基等。環烷基的碳原子數例如為3~8,上述直鏈烷基優選除環烷基外的直鏈的碳原子數為4~13。上述環烷基可舉出例如環己基、環戊基、環丁基等。上述式(I)中，X為糖殘基。上述糖殘基例如優選為單糖或二糖的殘基。上述單糖可舉出例如甘露糖苷、葡萄糖苷、硫17代葡萄糖苷等；二糖可舉出麥芽糖苷、吡喃果糖-吡喃葡萄糖苷、硫代麥芽糖苷等。上述糖的構象例如可為a、P、D、L中的任意一種。另外，鍵合在糖的環結構上的氫以及OH基的氫可被例如Na、K、卣素等取代。另外，本發明中，將介於R與糖殘基的環結構的鍵間的原子(例如，-0-、-S-等)看作糖殘基的組成部分。上述式(I)的促進化合物的具體例子可舉出例如以下的物質。例如為正十二烷基-(3-D-麥芽糖苷(正十二烷基-|3_D-麥芽吡喃糖苷)、6-環己基己基-卩-D-麥芽糖苷、蔗糖單月桂酸酯((3-D-吡喃果糖基-a-D-吡喃葡萄糖苷單十二酸酯)、正癸基-p-D-麥芽糖苷(正癸基-|3-D-麥芽吡喃糖苷)、正壬基-p-D-硫代麥芽糖苷(正壬基-|3-D-硫代麥芽糖苷)、5-環己基戊基-(3-D-麥芽糖苷、十一烷基-(3-D-麥芽糖苷、正十二烷基-a(3-D-麥芽糖苷、十六烷基-|3-D-麥芽糖苷、以及3-氧十三烷基-a-D-甘露糖苷等。以下示出這些化合物的化學式。這些化合物可^f吏用任意一種，也可兩種以上同時使用。其中，優選上述式(I)中R(烷基鏈)的碳原子數為12以上的正十二烷基-(3-D-麥芽糖苷、蔗糖單月桂酸酯、十六烷基-卩-D-麥芽糖苷等。另外，R的碳原子數相同的情況下，例如碳原子數相同的烷基與醯基的情況下，更優選為醯基如優選正十二烷基-(3-D-麥芽糖苷(正十二烷基-(3-D-麥芽吡喃糖苷)。18HO.、HO、HOOHOH6-環己基己基-卩-D-麥芽糖苷-10CH3-o、蔗糖單月桂酸酯'O、0(CH2)BCH3OHOH正癸基-P-D-麥芽糖香0(CH2)"CHaOH正十二ttOHP-D-麥芽糖苷O、S(CH2)8CH3OHD-疏代麥芽糖香OHOH正十六烷基-卩-D-麥芽糖苷19[化學式2]5-環己基戊基-P-D-麥芽糖苷OH、廠OOHOH十一烷基-卩-D-麥芽糖苷OH^Z0(CH2)20(CH2)BCH33-氧十三烷基-a-D-甘露糖苷蛋白酶處理的上述反應液中，上述促進化合物的添加比例例如在0.01~200mM的範圍，4尤選為0.4~100mM。上述反應液中的Hb濃度為0.005mM的情況下，上述促進化合物的添加比例例如在0.4~100mM的範圍，優選為l100mM。另夕卜，上述促進化合物與蛋白酶的添加順序沒有限制，可同時添加，也可以依次添力口。上述促進化合物共存的情況下，蛋白酶處理的條件，如上所述沒有限制。處理時間沒有限制，尤其是上限沒有限制。例如可進行O.l~60分鐘左右的蛋白酶處理。處理時間的具體例子20例如優選為O.l~45分鐘，更優選為0.2~20分鐘，特別優選為0.2~5分鐘。若在上述促進化合物存在下進行蛋白酶處理，能更迅速地切出胺基酸或肽，因此，即便如上所述的處理時間也可充分進行切斷處理。另外，上述促進化合物除上述式(I)的化合物外，例如還可舉出硝基化合物。所述硝基化合物可使用任意一種，也可兩種以上同時使用。另外，也可與上述式(I)的化合物同時使用。所述硝基化合物例如可舉出亞硝酸及其鹽。亞硝酸鹽沒有特別限制，例如可舉出亞硝酸鉀、亞硝酸戊酯、亞硝酸丁酯、硝化甘油、亞硝酸鈉、對硝基氯苯、三硝基甲苯、硝基苯等。蛋白酶處理的上述反應液中，上述硝基化合物的添加比例沒有限制。作為具體例子，例如，上述反應液中的Hb濃度為0.005mM的情況下，上述硝基化合物的添加比例例如優選為0.005mM以上，更優選為0.05~2mM。另外，上述促進化合物例如也可如WO02/27012中所示使用四唑化合物。另外，例如為了減輕樣品中的抗壞血酸及蛋白質等的還原物質造成的影響，優選在進行下一步驟的FAOD處理之前，向試樣中添加四唑化合物(例如參照日本特開2000-210100號/>報)。四唑化合物的添加例如在蛋白酶處理的前後均可。上述四唑化合物無特別限制，例如，可舉出以下的物質。例如為2-(4-硤苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2，4-二磺苯基)_二氬-四唑鹽、2-(4-碘苯基)-3-(2,4-二硝基苯基)-5-(2,4-二磺苯基)-二氫-四唑鹽、2-(2-曱氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5_(2,4-二磺苯基)-二氫-四唑鹽、2-(4-碘苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-苯基-二氫-四唑鹽、3，3，-(1,1，-聯苯基-4,4，-二基)-雙(2，5-二苯基)-二氫-四唑鹽、3,3，-[3，3，-二甲氧基-(l，l，-聯苯基)-4，4，-二基]-雙[2-(4-硝基苯基)-5-苯基-二氫-四唑鹽]、2,3-二苯基-5-(4-氯苯基)四唑鹽、2，5-二苯基-3-(對二苯基)四唑鹽、2，3-二苯基-5-(對二苯基)四唑鹽、2,5-二苯基-3-(4-苯乙烯基苯基)四唑鹽、2，5-二苯基-3-(間曱苯基)四唑鹽、2,5-二苯基-3-(對甲苯基)四唑鹽、2,3-二苯基-5-(2-瘞吩基)四唑鹽、2-苯並噻唑基-3-(4-羧基-2-曱氧基苯基)-5-[4-(2-磺乙基氨曱醯基)苯基]-二氫-四唑鹽、2，2，-二苯並噻唑基-5，5，-雙[4-二(2-磺乙基)氨甲醯基苯基]-3，3，-(3，3，-二曱氧基-4，4，-亞聯苯基)雙四唑鹽、3-(4,5-二曱基-2-噻唑基)-2,5-二苯基-二氫-四唑鹽、2,3-二苯基-5-氰四唑鹽、2,3-二苯基-5-羧基四唑鹽、2，3-二苯基-5-甲基四唑鹽、2,3-二苯基-5-乙基四唑鹽等。其中特別優選為2-(4-碘苯基)-3-(2，4-二硝基苯基)-5-(2，4-二磺苯基)-二氫-四唑鹽。上述四唑化合物的添加量沒有特別限制。例如優選每1^L試樣中添力口0.001~lOOpmol,更優選在0.005~30jimol的範圍內，特別優選在0.01~10[xmol的範圍內。(B)FAOD處理隨後，用FAOD處理上述通過蛋白酶處理得到的Hb片段，使FAOD作用於賴氨酸的側鏈氨基(s-氨基)的糖化部分。通過該FAOD處理，結合於賴氨酸的s-氨基上的糖游離出來，生成過氧化氫。GHbLys%的測定方法中使用的FAOD,例如至少作用於胺基酸側鏈氨基(例如，s-氨基)被糖化的胺基酸或肽，優選催化下述式(1，)中所示反應的酶(FAOD-S)。R1-CO_CH2-NH-R2+H20+02—R1—CO—CHO+22NH2—R2+H202…(r)上述式(1，)中，R4旨羥基或來源於糖化反應前的糖的殘基(糖殘基)。反應前的糖為醛糖的情況下，上述糖殘基(R1)為醛糖殘基，反應前的糖為酮糖的情況下，上述糖殘基(R1)為酮糖殘基。例如，反應前的糖為葡萄糖的情況下，雖可通過阿馬道裡重4非(Amadorirearrangement)4吏反應後的結構4i4匕為果糖結構，但這種情況下糖殘基(R1)為葡萄糖殘基(醛糖殘基)。此糖殘基(R1)例如可表示為-[CH(OH)]n-CH2OH其中n為06的整數。上述式(1，)中，R可用下述式(4，)表示。下述式(4，)中，[-(CH2)4-]表示賴氨酸的側鏈基團中除被糖化的氨基以外的部分。-(CH2)4-CH(NH-R6)-CO-R7…(4，)另外，上述式(4，)中，W為氫、胺基酸殘基或肽殘基，例如可用下述式(5，)表示。另外，下述式(5，)中，n為0以上的整數，R"表示胺基酸側鏈基團，胺基酸側鏈基團可全部相同，也可不同。-(CO-CR3H-NH)n-H…(5，)另外，上述式(4，)中，W為羥基、胺基酸殘基或肽殘基，例如可用下述式(6，)表示。另外，下述式(6，)中，n為0以上的整數，113與上述同樣表示胺基酸側鏈基團，胺基酸側鏈基團可全部相同，也可不同。-(NH-CHR3-CO)n-OH…(6，)特異地作用於上述被糖化的胺基酸側鏈的FAOD-S例如可舉出鐮刀菌屬來源的FAOD(日本生物工學會大會平成12年度"Fw"n'wmoxj^porwm由來7$乂酸才年、乂夕、、一ifO基質特異23性(D変換；藤原真紀等")。另外，FAOD還可有上述式(1，)以外的底物特異性。這類FAOD可舉出與被糖化的a-氨基、被糖化的胺基酸側鏈基團雙方作用的FAOD(以下稱"FAOD—aS")。作為具體例子，例如可舉出市售的商品名為FOD(旭化成公司生產)、赤黴(Gibberella)屬來源的FAOD(日本特開平8-154672號公報)、鐮刀菌(Fusarium)屬來源的FAOD(日本特開平7-289253號公報)、麴黴菌(Aspergillus)屬來源的FAOD(WO99/20039)等。使用這種FAOD的情況下，上述蛋白酶例如優選組合國際公開第2002/006519號小冊子等中記載的蛋白酶。上述蛋白酶為不容易生成(游離)N末端的a位氨基被糖化的胺基酸的蛋白酶。即為特異性地切斷賴氨酸、含賴氨酸的肽的蛋白酶。通過將這種蛋白酶與上述FAOD-aS進行組合，例如能抑制FAOD作用於其他的糖化部位(例如a位氨基的糖化部位)。另外，作用於被糖化的a-氨基的FAOD的催化反應例如為作用於a-氨基被糖化的胺基酸或肽，產生a-酮醛和過氧化氫的反應。這是在上述式(1，)的反應中，R"為下述式(2)的胺基酸殘基或肽殘基所表示的反應。以下，將催化這種反應的酶稱為"FAOD-a"。-CHR3-CO-R4...(2)上述式(2)中，113表示胺基酸側鏈基團，W表示羥基、胺基酸殘基或肽殘基。R"列如可用下述式(3)表示。下述式(3)中，n為0以上的整數，R"與上述同樣表示胺基酸側鏈基團，胺基酸側鏈基團可全部相同，也可不同。-(NH-CHR3-CO)n-OH…(3)FAOD處理優選與上述蛋白酶處理同樣在緩衝液中進行。上述緩衝液沒有特別限制，可使用與上述蛋白酶處理同樣的緩24衝液。FAOD處理的條件沒有限制。反應液的pH例如為69，處理溫度例如在IO~38。C的範圍內，優選為2537。C。處理時間也無特別限制，例如為0.160分鐘，優選為0.15分鐘。FAOD處理的反應液中FAOD的添力。比例例如在0.01~50KU/L的範圍內，優選為0.5~10KU/L。FAOD的活性"U"定義為以果糖基纈氨酸或果糖基賴氨酸作為底物，l分鐘內生成l微摩爾過氧化氫的酶量為1U。(C)氧化還原反應的測定下面，對上述糖化部分與FAOD的氧化還原反應進行測定。該測定例如可舉出由上述反應生成的過氧化氫量的測定、或上述反應中被消耗的氧量的測定。過氧化氫的測定及氧的測定可通過公知的技術進行。舉一例進行說明，上述過氧化氫量例如可使用過氧化物酶(POD)與通過氧化而顯色的底物(以下稱"顯色底物")進行測定。即可通過以POD為催化劑的顯色底物與過氧化氫的反應使上述底物顯色，通過測定該顯色程度來進行。另外，過氧化氫量例如可通過使用POD等的酶法測定，此外也可通過電學方法等進行測定。上述顯色底物沒有限制，例如可舉出N-(羧甲基氨羰基)-4，4，-雙(二甲氨基)二苯胺鈉(商品名D4-64、和光純藥工業公司生產)、N，N,N，，N，，N"，N，，-六(3-磺丙基)-4,4，，4"-三氨基三苯基甲烷六鈉鹽(例如，商品名TPM-PS,同仁化學公司生產)、10-(羧曱基氨羰基)-3，7-雙(二曱氨基)吩噻。秦或其鹽(例如，商品名DA-67,和光純藥7>司生產)、N-(羧甲基氨羰基)_4,4，-雙(二甲氨基)二苯胺鈉、鄰苯二胺(OPD)、Trinder，s試劑與4-氨基安替比林共同組成的底物等。Trinder，s試劑可舉出例如苯酚、苯酚衍生物、苯胺衍生物、萘酚、萘酚衍生物、萘胺、萘胺衍生物等。另外，除4-氨25基安替比林外，也可使用氨基安替比林衍生物、香蘭素二胺磺酸、甲基苯並噻唑啉酮腙(MBTH)、磺化曱基苯並噻唑啉酮腙(SMBTH)等。POD反應優選與上述蛋白酶處理同樣在ll沖液中進行。上述緩沖液例如可使用如上所述的緩衝液。POD處理的條件沒有特別限制。POD反應的反應液的pH例如為5~9，處理溫度例如在10~40。C的範圍內，優選為2537。C。處理時間也沒有特別限制，例如為O.l~5分鐘。上述反應液中POD的添加比例例如在O.Ol~300KU/L的範圍內，優選為0.5~40KU/L。另外，上述反應液中顯色底物的添加比例例如在O.OOl~10mM的範圍內，優選為0.005~2mM。POD的活性"U"定義為以l分鐘內能氧化l孩i摩爾的愈創木酚的酶量為1U。使用上述顯色底物的情況下，例如用分光光度計等測定其顯色(例如，反應液的吸光度)即可。具體來說可舉出反應液的吸光度測定與透過率測定等。另外，測定波長沒有限制，例如可根據使用的顯色底物的種類適當決定。過氧化氫量(或過氧化氫濃度)例如對應於Hb中賴氨酸的糖化量(或糖化濃度)。因此，可由測定的吸光度計算Hb的賴氨酸的糖化量。隨後如下述式所示，通過計算該Hb的賴氨酸的糖化量(或糖化濃度)與試樣中的總Hb量(Hb濃度)之比(百分比)，可求得GHbLys0/0。另外，總Hb量可通過7>知的方法與市售的試劑盒測定。GHbLys%-(Hb的賴氨酸的糖化量/總Hb量)xlOO由吸光度計算Hb的賴氨酸的糖化量例如可通過使用標準曲線進行。上述標準曲線例如為將Hb的賴氨酸的已知糖化量與吸光度的關係作圖而得到的標準曲線。例如對於賴氨酸的糖化量為已知的Hb標準物，與上述同樣進行吸光度測定，預先作成顯示該標準物的吸光度測定值與已知糖化量的關係的標準曲線。隨後，通過將如上所述測定的吸光度代入該標準曲線，可計算Hb的Lys的糖化量。另外，在如上所述的促進化合物等的存在下進行試樣處理的情況下，通過4吏用同樣的試樣，可更準確地測定Hb量。乂人而隨之能更準確地求得GHbLys。/。。即首先在通過蛋白酶進行Hb的切斷之前，在上述含Hb的試樣中添加上述促進化合物，測定添加了上述促進化合物的試樣的光學變化量。隨後根據該光學變化量計算上述試樣中的Hb量。另一方面，用蛋白酶切斷添加了上述促進化合物的上述試樣中的Hb後，通過測定上述糖化部分與FAOD的氧化還原反應來測定Hb的賴氨酸鬥唐化量。並且優選由上述Hb量與上述賴氨酸糖化量求得GHbLys值(GHbLys%)。另夕卜，Hb量的測定可如上所述在蛋白酶處理前進行，也可在蛋白酶處理後進行。本例中在蛋白酶添加之前，向含Hb的試樣中添加上述促進化合物，例如進行上述試樣的吸光度測定。隨後由測定的吸光度與預先準備好的標準曲線求得Hb量即可。象這樣用上述促進化合物預先處理Hb,能容易並且準確地求得Hb的量。其^/L制雖不明，但推測是由於通過上述促進化合物，Hb的結構發生變化，不穩定的Hb的形狀被穩定化。上述標準曲線例如通過上述方法測定已知Hb量(已知Hb濃度)的多個含Hb試樣，由其測定值與已知Hb量(已知Hb濃度)作成。另外，吸光度的測定波長沒有特別限制，但例如在400~660nm的範圍內，通過上述化合物進行試樣處理的時間例如在0.2~30分鐘的範圍內。通過這種方法進行Hb測定的情況下，除在向試樣中添加上述化合物後、添加蛋白酶前進行吸光度測定以外，可與上述同樣繼續進行蛋白酶處理等，求得Hb的賴氨酸的糖化量(濃度)。因此是更為簡1更的測定方法。GHbLysW的測定中，各處理步驟如上所述可分別進行，但例如也可以如下所示的組合同時進^亍各處理。另外，蛋白酶、FAOD、POD、顯色底物的添加順序也沒有特別限制。1:溶血處理+蛋白酶處理2:蛋白酶處理+FAOD處理3:FAOD處理+POD處理4:蛋白酶處理+FAOD處理+POD處理另外，GHbLys穩定存在於生物體內以及採集的血液中等。因此，例如採血的時間及採血後進行測定的時間沒有任何限制。在Hb的壽命以內(一般4個月左右)，GHbLys是穩定的。因此，例如也不必-像以往那^",在以用餐為標準所確定的少見定時間內採血及進行多次測定，可隨意進行採血及測定。對於採血後的試樣，例如可立即進行GHbLysW的測定，也可在保存後進行GHbLys%的測定。GHbLys%的測定方法不限於這種酶法，如上所述例如也可為HPLC法、免疫法、電泳法、質譜法等。例如首先從Hb中切出賴氨酸或含賴氨酸的肽，通過HPLC分離純化出賴氨酸的側鏈氨基被糖化的糖化物(糖化賴氨酸或糖化賴氨酸肽)與未被糖化的非糖化物(賴氨酸或賴氨酸肽)。然後將該純化物供於毛細管電泳、LC-MS進行定量。另外，這些方法中，例如也可如上所述^f吏用特異地切出賴氨酸、賴氨酸肽的蛋白酶，在上述促進化合物的存在下進行蛋白酶處理。通過這些方法，例如可高效地切出賴氨酸或糖化賴氨酸、賴氨酸肽或糖化賴氨酸肽。因此，例如也可用以切出的糖化賴氨酸或糖化賴氨酸肽為抗原的免疫法。並且，還能提高HPLC法及電泳法的分離效果。另外，本發明其特徵在於，測定28做為餐後高血糖指標的、Hb的賴氨酸殘基的糖化率(GHbLys%),GHbLys%的測定方法本身沒有任何限制。<餐後高血糖指標的檢測〉在本發明的餐後高血糖指標的檢測方法中，上述指標為本發明的餐後高血糖指標，上述餐後高血糖指標的檢測為Hb的賴氨酸殘基的糖化的糹全測。Hb的賴氨酸的糖化的4全測可通過上述餐後高血糖指標的測定來進行。本發明為確定受試體患糖尿病的危險度的方法，含下述(a)步驟。(a)對於採自受試體的血液試樣，通過本發明的測定方法測定Hb的賴氨酸殘基的糖化率，由此來測定本發明的餐後高血糖指標的步驟如上所述GHbLys。/。與餐後高血糖顯示相關性是由本發明人等所揭示的。且如前所述，已知餐後高血糖為糖尿病的初期階段。因此，通過任意時間的患者血液中GHbLys。/。的測定，例如可確定患糖尿病的危險度的有無，危險度的程度(發展為糖尿病中期以及後期等)。上述受試體沒有限制，例如可舉出人、除人以外的哺乳類、其他的動物。本發明的危險度確定方法中，優選還含有下述(b)步驟。另外，下述的(bl)~(b5)為危險度的判斷方法的具體例子，本發明不受限於此。(b)採用上述(a)步驟中測定的Hb的賴氨酸殘基的糖化率，通過選自下述(bl)~(b5)所組成的組中的至少一種方法來確定上述受試體患糖尿病的危險度的步驟(bl)為如下的方法將採自健康者的血液中Hb的賴氨酸殘基的糖化率與採自餐後高血糖患者的血液中Hb的賴氨酸殘29基的糖化率的邊界值設定為評價基準，與所述評價基準相比，所述(a)步驟中測定的受試體的賴氨酸殘基的糖化率相對高的情況下，確定為危險度相對高。下面示意該方法的具體例子。預先對做為評價基準的邊界值進行設定。首先，對於健康者與餐後高血糖患者，在任意時間採集血液試樣，測定GHbLys。/。。隨後由這些結果確定健康者的測定值GHbLys%與餐後高血糖患者的測定值GHbLys%的邊界值，將上述邊界值作為評價基準。這裡設定的評價基準可作為一般評價基準值使用。因此，例如不需要每次對受試體進行危險度確定時設定評價基準(邊界值)。另一方面，對於需進行危險度的確定的受試體，在任意時間採集血液試樣，測定GHbLys%。隨後，比較該測定值與上述評價基準。該測定值與上述評價基準相比顯示高的值的情況下(測定值>邊界值)，判斷為糖尿病的危險性相對高，與上述評價基準相比顯示低的值的情況下(測定值知的方法通過血糖值的測定來分類。上述方法例如可舉出空腹時服用75g試驗用的澱粉水解物(例如商品名卜k一，7G75;味之素公司生產)，測定服用後30分鐘至2小時的血糖值的方法(日本糖尿病學會"糖負荷試験〖二招"3糖尿病診斷基準委員會O指針")。(b2)為如下的方法在採自健康者的血液中Hb的賴氨酸殘基的糖化率與採自空腹時的健康者的血液的血糖值的關係式中，代入採自空腹時的受試體的血液的血糖值，將由此求得的Hb的賴氨酸殘基的糖化率的計算值設定為評價基準，與所述評價基準相比，所述(a)步驟中測定的受試體的賴氨酸殘基的糖化率(GHbLys%)相對高的情況下，確定為危險度相對高。30下面示意該方法的具體例子。預先進行評價基準的設定。首先，對於健康者，在任意時間採集血液試樣，測定GHbLys0/。。另外，對於上述健康者，採集空腹時的血液，測定空腹時血糖值。隨後，預先求出健康者的GHbLys。/。與健康者的空腹時的血糖值的關係式。上述關係式例如可使用"GHbLys。/。=(ax空腹時血糖值)+b，，這樣的一次方程等。在此求得的關係式可作為一般評價的標準式使用。因此，例如不需要每次對受試體進行危險度確定時求算關係式。隨後，對於需進行危險度確定的受試體，測定空腹時血糖值。採用事先求得的關係式，由上述受試體空腹時血糖值(測定值)求得GHbLys。/。計算值。將該GHbLys。/。計算值作為評價基準。另一方面，對於上述受試體，在任意時間採集血液試樣，測定GHbLys。/。。隨後將該測定值與上述評價基準(GHbLys。/。計算值)進行比較。該GHbLys。/。測定值與評價基準相比顯示高的值的情況下(測定值〉GHbLys。/o計算值)，判斷為糖尿病的危險性相對高，與上述評價基準相比顯示低的值的情況下(測定值測定的空腹時血糖值)，判斷為糖尿病的危險性相對高，與上述評價基準相比顯示低的值的情況下(計算值HbAlc%計算值)，判斷為糖尿病的危險性相對低。另外，GHbLys。/。測定中使用的血液試樣如上所述沒有限34制，可在任意時間採集。另外，HbAlc%測定中使用的血液試樣也沒有限制，可在任意時間採集。測定HbAlc。/。與GHbLys%的情況下，可採用同一血液試樣對二者進行測定。除此以外，例如也可測定受試體的HbAlc。/。與GHbLys0/。，單獨計算兩者之差(GHbLys%-HbAlc。/。)及比率(GHbLys%/HbAlc%)進行診斷。此外，在這些診斷中，例如，差相對越大表示糖尿病的危險性越高。具體來說，例如空腹時血糖值的計算值與空腹時血糖值的測定值之差、GHbLys。/。計算值與GHbLys%測定值之差、HbAlc%計算值與HbAlc。/。測定值之差、GHbLys%與HbAlc0/。的比率等，這些差或比率相對越大，可判斷為糖尿病的危險性越高。另外，本發明中，例如優選不僅進行GHbLys的測定，同時也進行HbAlc的測定。通過測定HbAlc,例如，才艮據GHbLys測定不僅能判斷受試體的糖尿病的危險度，還可判斷是否已經患有糖尿病。本發明為一種診斷方法，其為診斷受試體的餐後高血糖的方法，包括下述(c)步驟。(c)對於採自受試體的血液試樣，通過本發明的測定方法測定Hb的賴氨酸殘基的糖化率，由此測定本發明的餐後高血糖指標的步驟如上所述，本發明人等已經揭示出GHbLys%與餐後高血糖顯示相關性。因此，可通過測定任意時間的患者血液中的GHbLysQ/。來確定是否為餐後高血糖。本發明的餐後高血糖診斷方法中，優選還含有下述(d)步驟。另外，下述(dl)~(d5)為餐後高血糖的判斷方法的具35體例子，但本發明不受限於此。(d)採用上述(c)步驟中測定的Hb的賴氨酸殘基的糖化率，通過選自下述(dl)~(d5)所組成的組中的至少一種方法來判斷上述受試體的餐後高血糖的步驟(dl)為如下的方法將採自健康者的血液中Hb的賴氨酸殘基的糖化率與採自餐後高血糖患者的血液中Hb的賴氨酸殘基的糖化率的邊界值設定為評價基準，與所述評價基準相比，所述(c)步驟中測定的受試體的賴氨酸殘基的糖化率相對高的情況下，判斷受試體為餐後高血糖。上述(dl)可與前述的(M)同樣進行。具體來說，受試體的GHbLys。/。測定值與上述評價基準相比顯示高的值的情況下(測定值>邊界值)，判斷為餐後高血糖的可能性相對高，與上述評價基準相比顯示低的值的情況下(測定值<邊界值)，判斷為餐後高血糖的可能性相對低。(d2)為如下的方法在採自健康者的血液中Hb的賴氨酸殘基的糖化率與採自空腹時的健康者的血液的血糖值的關係式中，代入採自空腹時的受試體的血液的血糖值，將由此求得的Hb的賴氨酸殘基的糖化率的計算值設定為評價基準，與所述評價基準相比，所述(c)步驟中測定的受試體的賴氨酸殘基的糖化率相對高的情況下，判斷所述受試體為餐後高血糖。上述(d2)可與上述的(b2)同樣進行。具體來說，受試體的GHbLys。/o測定值與上述評價基準相比顯示高的值的情況下(測定值〉GHbLys。/。計算值)，判斷為餐後高血糖的可能性相對高，與上述評價基準相比顯示低的值的情況下(測定值測定糖值)，判斷為餐後高血糖的可能性相對高，與上述評價基準(空腹時血糖值的測定值)相比顯示低的值的情況下(計算值計算值)，判斷為餐後高血糖的可能性相對高，與上述評價基準(GHbLys%計算值)相比顯示低的值的情況下(測定值<計算值)，判斷為餐後高血糖的可能性相對低。(d5)為如下的方法將採自受試體的血液中Hb的(3鏈N末端胺基酸殘基的糖化率設定為評價基準，另一方面，在採自健康者的血液中Hb的賴氨酸殘基的糖化率與上述Hb的(3鏈N末端胺基酸殘基的糖化率的關係式中，代入所述(a)步驟中測定的受試體的賴氨酸殘基的糖化率，求得受試體的Hb的(3鏈N末端胺基酸殘基的糖化率的計算值，與所述評價基準相比，受試體37的血紅蛋白的p鏈N末端胺基酸的糖化率的計算值相對高的情況下，判斷為餐後高血糖。上述(d5)可與上述的(b5)同樣進行。具體來說，受試體的HbAlcM計算值與上述評價基準(HbAlc%測定值)相比顯示高的值的情況下(計算值〉測定值)，判斷為餐後高血糖的可能性相對高，與上述評價基準(HbAlc。/。測定值)相比顯示低的值的情況下(計算值知的方法(例如酶法、HPLC法、免疫法、電泳法、質譜法等)。以下舉一例示意利用酶法的測定方法。利用酶法進行HbAlc%測定的方法，例如用蛋白酶處理Hb,切出p鏈N末端纈氨酸或含(3鏈N末端纈氨酸的肽(末端肽)，使FAOD作用於纈氨酸的a-氨基的糖化部分，除此以外與上述的GHbLys。/。的測定方法相同。上述蛋白酶無特別限制，可使用如上所述的蛋白酶。其中優選特異作用於(3鏈N末端、催化N末端肽斷裂的蛋白酶，例如可舉出曰本淨爭開2000—300294號/>才艮、曰本4爭開2004—344052號公報等中公開的蛋白酶。另外，作為催化p鏈N末端纈氨酸斷裂的蛋白酶，例如可舉出國際公開第2000/50579號小冊子(日本特許3668801)、國際7>開第2000/61732號小冊子、日本特開2002-315600號公報等中^〉開的蛋白酶。HbAlc的測定方法中使用的FAOD沒有特別限制，但優選作用於a-氨基被糖化的胺基酸或肽，催化生成a-酮醛以及過氧化氫的反應的酶(上述FAOD-a)。這些FAOD-a的具體例子例如可司生產)、商品名FPOX-EE(衩^-—t>公司生產)、國際公開第2004/029251號小冊子記載的果糖胺氧^匕酵、曰本淨寺開2004—275013號乂>才艮及曰本#爭開2004-275063號公報記載的果糖胺氧化酶、青黴菌(Penicillium)屬來源的FAOD(日本特開平8-336386號公報)等。通過蛋白酶處理，例如，從Hb(3鏈N末端切出果糖基Val-His的情況下，通過該FAOD處理，Val的a-氨基上結合的糖游離出來，生成a-酮醛(糖殘基)、Val-His以及過氧化氬。隨後，例如可由下述式計算HbAlc值。HbAlc值例如為Hb的I3鏈N末端纈氨酸的糖化率，也稱HbAlc。/。。HbAlc%=(HbAlc/總Hb)x剛上述式中，HbAlc例如可舉出Hb的(3鏈N末端纈氨酸的糖化量(或糖化濃度)。另外，總Hb例如可舉出Hb的總量(或Hb濃度)或HbA的總量(或HbA濃度)，又或Hb的(3鏈N末端纈氨酸的總量(包括被糖化的纈氨酸)。如上述式中所示，例如通過計算Hb的(3鏈N末端纈氨酸的糖化量(HbAlc濃度)與試樣中的總Hb量(Hb濃度)之比(百分比)，可求得HbAlc0/。。上述糖化量的計算與Hb的Lys的糖化量同樣，例如可通過測定顯色底物的顯色程度進行。具體來說，例如通過使用按Hb的P鏈N末端的已知糖化量與吸光度的關係繪製的標準曲線進行。例如對於P鏈N末端糖化量為已知的Hb標準物，與上述同樣進行吸光度的測定，預先作成示意該標準液的吸光度領'j定值與已知糖化量的關係的標準曲線。隨後將如上所述測定的吸光度代入此標準曲線，由此可計算(3鏈N末端的糖化量。(HbAlc與GHbLys的測定)HbA1c以及GHbLys例如可通過利用FAOD的底物特異性，採用同一試樣連續測定。即用蛋白酶處理含Hb的試樣，切出p鏈N末端纈氨酸或p鏈N末端肽與賴氨酸或含賴氨酸的肽。隨後，首先通過用特異作用於a-氨基的糖化部分(例如纈氨酸的糖化部分)且難以作用於胺基酸側鏈的糖化部分的FAOD-a處理，測定HbAlc。其後再通過用特異作用於賴氨酸側鏈的糖化部分且難以作用於a-氨基的糖化部分的FAOD-S處理，測定GHbLys即可。另夕卜，FAOD的處理順序不限於此，例如也可在通過用FAOD-S處理測定GHbLys之後，通過用FAOD-a處理測定HbAlc。另外，採用全血試樣測定血細胞內Hb的糖化率的情況下，通過使用如上所述的促進化合物，還可得到如下所述的效果。測定血細胞內蛋白質的糖化率時，通常對全血試樣進行溶血處理，以溶血試樣的形式使用。這時，溶血試樣中同時存在著血清中的糖化蛋白質(例如糖化白蛋白)。然而，若在上述促進化合物的存在下進行蛋白酶處理，雖機制不明，能促進如上所述的糖化Hb的切斷而抑制糖化白蛋白的切斷。因此，例如也可避免因試樣中混有糖化白蛋白等、FAOD還作用於其糖化部位的40問題，可更進一步提高測定精度。另外，這種問題產生於例如蛋白酶既作用於Hb又作用於白蛋白，並且後續添加的FAOD作用於各種蛋白質片段的情況。因此，通過選擇如上所述的選擇性切出目標蛋白質的目標部位(FAOD作用的糖化胺基酸及糖化肽)的蛋白酶可解決該問題。本發明的平均血糖值的測定方法，其特徵在於，其為一種反映餐後血糖值的平均血糖值的測定方法，含下述(x)~(y)。(x)測定平均血糖值指標的步驟，所述平均血糖值指標為本發明的餐後高血糖指標，通過本發明的餐後高血糖指標的測定方法來測定Hb的賴氨酸殘基的糖化率的步驟(y)在Hb的賴氨酸殘基的糖化率與反映餐後血糖值的平均血糖值的關係式中，代入上述(x)步驟中測定的Hb的賴氨酸殘基的糖化率，計算反映餐後血糖值的平均血糖值的步驟如上所述，HbAlc為過去平時的平均血糖值的指標，無法作為反映一天內變動的平均血糖值的指標。與此相對，了解到本發明的指標可作為反映餐後血糖值的平均血糖值的指標。因此，通過測定本發明的平均血糖值指標(餐後高血糖指標)，可計算反映餐後血糖值的平均血糖值。且該計算出的平均血糖值例如與健康者的平均血糖值相比相對高的情況下，可判斷有餐後高血糖的可能性。另外，通過同時進行HbAlc的測定，可得到可靠性更佳的判斷結果。上述關係式無特別限制，但例如可如下所述作成。從餐後血糖值不同的多個患者採血，測定GHbLys0/。。另一方面，對於同樣的多個患者，於包括餐後的規定時間點進行多次採血，對於各血液樣品測定血糖值。將各樣品的血糖值相加，計算各患者的平均值。該平均值為反映餐後的血糖值的平均血糖值。另41外，血糖值測定用樣品的採血時間點例如為早晨空腹時、就寢前、餐前、餐後、餐後30分、餐後1小時、餐後2小時。隨後，對於各患者，通過GHbLys%對反映餐後血糖值的平均血糖值作圖，可作成標準曲線。本發明的指標測定用試劑盒為上述本發明的餐後高血糖指標的測定方法中使用的試劑盒，包含蛋白酶、FAOD、POD以及通過氧化而顯色的底物。使用其可以簡易且簡便地進行上述的本發明的餐後高血糖指標的測定方法。本發明的試劑盒中上述構成成分可使用與上述同樣的物質。另外，本發明的試劑盒中，可適當含有能在本發明的餐後高血糖指標的測定中使用的上述物質。上述物質例如可舉出上述促進化合物及四唑化合物等。本發明的危險度確定用試劑盒為本發明的患糖尿病的危險度的確定方法中使用的試劑盒，包含蛋白酶、FAOD、POD以及通過氧化而顯色的底物。另外，本發明的餐後高血糖診斷用試劑盒為本發明的餐後高血糖的診斷方法中使用的試劑盒，包含蛋白酶、FAOD、POD以及通過氧化而顯色的底物。這些試劑盒的組成，例如也可與上述本發明的指標測定用試劑盒相同。但本發明不受限於此。實施例1實驗的前一天，將葡萄糖溶解於0.85重量％的生理鹽水中，製備規定濃度的葡萄糖溶液。上述濃度為500mM、900mM、1900mM、3500mM。空白(BLK)使用0.85重量％的生理鹽水(葡萄糖濃度0mM)。用肝素Na管採集健康者的血液，通過離心分離分離為血漿42與血細胞。分離得到的3mL血細胞分裝至螺旋管(13.5ml)中，再加入分離得到的2.7ml血漿，以及上述0.3mL生理鹽水(空白)或0.3ml各葡萄糖溶液，分別進行混合，製備添加葡萄糖的血。另外，添加葡萄糖的血中葡萄糖的濃度分別為OmM、50mM、90mM、190mM、350mM。使用波形迴轉攪拌器(waverotor)混合這些添加葡萄糖的血，同時置於37度的孵育器中保溫，距開始保溫規定時間(3小時、6小時、24小時)後各分裝1.25ml。通過離心分離將分裝後的添加葡萄糖的血分離為血細胞與血漿，血漿作為糖化白蛋白與葡萄糖濃度的測定用試樣。另一方面，從分離得到的血細胞分裝0.6ml，向其中添加約10倍體積量的1.3%(w/v)食鹽水，室溫下顛倒混合10分鐘洗滌血細胞。其後通過離心分離分離為血細胞與上清，除去上清。上述血細胞再次通過上述食鹽水洗滌，回收的血細胞作為糖化Hb的測定用試樣。HbAlc以及不穩定型HbAlc的測定，直接使用上述血細胞試樣，通過屬於HPLC法的ADAMS-AlcHA-8160(愛科來公司生產)來進行。另一方面，GHbLys的測定中，使用將上述血細胞試樣用下述溶血試劑稀釋至51倍(體積)而製備的溶血試樣。將20jxL上述溶血試樣與76pL下述蛋白酶試劑混合，於37。C下孵育5分鐘。再添加19iaL下述顯色試劑於37。C下孵育3分鐘，測定3分鐘內吸光度的增加量(751nm以及571nm波長)。吸光度的測定使用自動分析裝置(商品名JCA-BM8，日本電子公司生產)。751nm的吸光度表示GHbLys濃度，571nm的吸光度表示Hb濃度。(溶血試劑pH9.4)CHES80mmol/LMOPS80mmol/L聚氧亞乙基月桂基醚9g/L(蛋白酶試劑pH5.5)WST-3(同仁化學研究所制)2mmol/LNaN30.6mmol/LNaCl100mmol/LCaCl22mmol/L中性蛋白酶(愛科來公司生產)4MU/LMESlmmol/L(顯色試劑pH7)DA-64(和光純藥工業公司生產)80pmol/LFAODL(愛科來公司生產)*36KU/LTris-HC1380mmol/LNaN30.5mmol/L*赤黴菌(Gibberella)屬來源的FAOD(FAOD-aS)隨後在預先作成的顯示Hb濃度(g/L)或GHbLys濃度(g/L)與吸光度關係的標準曲線中，代入測定得到的各吸光度求出GHbLys濃度以及Hb濃度，根據下述式計算GHbLys%。另外，上述標準曲線為對於Hb濃度(g/L)以及GHbLys濃度(g/L)為已知的檢測組，將吸光度對Hb濃度(g/L)或GHbLys濃度(g/L)作圖而得到的。GHbLys(%)=(GHbLys濃度/Hb濃度)xlOO葡萄糖的測定中，使用商品名為'J《r、7夕GluHK(口少工47夕、、乂義亍4^夕公司生產)的測定試劑盒，基於上述試劑盒生產商給出的分析參數以及使用說明書進行測定。另夕卜，吸光度測定使用上述自動分析裝置。其結果如圖1~4所示。圖l為示意添加葡萄糖的血的孵育時間與血漿葡萄糖濃度的關係的圖。圖2為示意添加葡萄糖的血的孵育時間與血細胞HbAlc。/。的關係的圖。圖3為示意添加葡萄糖的血的脬育時間與血細胞不穩定型HbA1c%的關係的圖。圖4為示意添加葡萄糖的血的孵育時間與血細胞GHbLys。/。的關係的圖。圖l示意血漿葡萄糖濃度的變動。如該圖所示，因血細胞消化葡萄糖，葡萄糖濃度隨時間而降低，但對於孵育開始24小時後的試樣仍確認有葡萄糖的殘存。圖2示意血細胞的穩定型HbAlc。/。的變動。如該圖所示，穩定型HbAlc。/c)在與葡萄#唐共孵育起6小時後仍未見測定值的上升。另外，即使葡萄糖濃度達到350mM，24小時後測定值也僅上升0.8%左右。這是由於如上所述，從不穩定型HbAlc難以變成穩定型HbAlc的原因。其次，圖3示意血細胞的不穩定型HbAlcW的變動。不穩定型HbAlc0/。雖然顯示隨著向試樣中添加的葡萄糖濃度而變動，但如圖l所示，血漿中的葡萄糖濃度降低時，也會同樣隨之減少。這是由於不穩定型HbAlc的生成與葡萄糖濃度處於平糹軒關係，隨著葡萄糖的減少又變回Hb。與此相對，如圖4所示，血細胞的GHbLys顯示如下的4亍為。即如該圖所示，GHbLys%隨著向試樣中添加的葡萄糖濃度而變動，且3小時的短時間的孵育即可確認生成。此外，GHbLys%測定值也隨著孵育時間而上升。即GHbLys與穩定型HbAlc及不穩定型HbAlc不同，為短時間的血糖值上升也會生成的糖化蛋白質，其測定值可以說是#文感地對應於短時間內血糖值上升的指標。另外，對於未添加葡萄糖的測定試樣(BLK),距試樣製備起第14天再次測定。其結果葡萄糖濃度為O,另外，HbAlc。/。以及GHbLys。X)都未見變動。由此可確i人，生成的糖化物存在而未降解。因此可知這些值僅依賴於Hb的壽命與葡萄糖濃度。45由以上的結果可知，若測定GHbLys,例如即便是僅餐後的短時間內血糖值上升的餐後高血糖，也可間接才企測血糖值。實施例2用加入肝素鋰的採血管採集健康者的全血。將該血液在室溫;故置2小時^f吏血細胞沉降，分離為血細月包成分與血漿成分。添加100mg葡萄糖至分離得到的0.5mL血漿中，溶解，於室溫下放置3小時製備添加葡萄糖的血漿。隨後，將上述分離得到的血細胞與血漿(未添加葡萄糖的血漿、添加葡萄糖的血漿)按下述比例混合，緩慢攪拌，於37。C下保溫。對於距混合開始O分後、30分後、l小時後、2小時後、3.5小時後的試樣，通過下述方法進行HbAlc。/。與GHbLys。/。的測定。tableseeoriginaldocumentpage46<HbAlc%測定方法〉將0.065mL試樣與0.065mL純化水混合，添加0.078mL下述組成的試劑Rl，於37。C下孵育5分鐘。在此對該反應液進行658nm處的第l次的吸光度測定(Ai)與571nm處的吸光度測定(Bj。接著向上述反應液中添加0.0185mL下述組成的試劑R2，於37。C下孵育5分鐘。在此對該反應液進行658nm處的吸光度測定(A2)。隨後計算相當於HbAlc濃度(Hb的p鏈N末端纈氨酸的糖化濃度)的吸光度。該計算過程為，第2次的吸光度(A2)乘以修正容量變化的0.081/0.1095，從所得的值中減去第l次的吸光度(AJ計算得到。這稱為HbAlc吸光度。另外，第l次的571nm處的吸光度(B！)與試樣中的Hb濃度相當。接著由預先準備的標準曲線，對於各試樣計算HbAlc濃度以及Hb濃度。上述標準曲線為示意HbAlc濃度與吸光度的關係的標準曲線，以及示意Hb濃度與吸光度的關係的標準曲線。隨後，算出的HbAlc濃度的值除以算出的Hb濃度的值，再乘上IOO,得到值作為求得的HbAlc。/。。上述標準曲線採用HbAlc濃度以及Hb濃度為已知的標準物質，利用同樣的方法測定吸光度，通過各濃度與吸光度的關係作圖得到。這些吸光度的測定中使用自動分析裝置BM-8(日本電子公司生產)。formulaseeoriginaldocumentpage47十二烷基麥芽糖苷PIPES緩衝劑(R2:pH5.5)金屬蛋白酶(愛科來公司)DA-67(和光純藥工業公司)十六烷基三曱基銨CaCl2Tris緩沖劑〈GHbLys。/o測定方法〉將0.065mL試樣與0.065mL純化水混合，添加0.078mL下述組成的試劑Rl，於37。C下孵育5分鐘。在此對該反應液進行658nm處的第l次的吸光度測定(A)與571nm處的吸光度測定(B「)。接著向上述反應液中添加0.0185mL下述組成的試劑R2，於37。C下孵育5分鐘。在此對該反應液進4亍658nm處的吸光度測定(A2，)。隨後計算相當於GHbLys濃度(Hb的賴氨酸側鏈的糖化濃度)的吸光度。該計1.5KU/L1OKU/L4mmol/L2.5g/L3Ommol/L1800KU/L0.03mmol/LO.lg/L5mmol/L200mmol/L算過程為，第2次的吸光度(A2，)乘以修正容量變化的0.081/0.1095,從所得的值中減去第l次的吸光度(Ar)計算得到。這稱為GHbLys吸光度。另外，第1次的571nm處的吸光度(Bf)與試樣中的Hb濃度相當。接著由預先準備的標準曲線，對於各試樣計算GHbLys濃度以及Hb濃度。上述標準曲線為示意GHbLys濃度與吸光度的關係的標準曲線，以及示意Hb濃度與吸光度的關係的標準曲線。隨後，將算出的GHbLys濃度的值除以算出的Hb濃度，再乘上100，得到的值作為求得的GHbLys%。上述標準曲線採用GHbLys濃度以及Hb濃度為已知的標準物質，通過同樣的方法測定吸光度，通過各濃度與吸光度的關係作圖得到。這些吸光度的測定中使用自動分析裝置BM-8(曰本電子公司生產)。[表4](Rl:pH7)FAODL(愛科來公司)*PODKN02十二烷基麥芽糖苷PIPES緩衝劑*赤黴菌(Gibberella)來源的FAOD(FAOD-aS)(R2:pH5.5)金屬蛋白酶(愛科來公司)DA-67(和光純藥工業公司)十六烷基三曱基銨CaCl2Tris緩衝劑5KU/L10KU/L4mmol/L2.5g/L30mmol/L1800KU/L0.03mmol/LO.lg/L5mmol/L200mmol/L這些結果如圖5以及圖6所示。圖5為示意各試樣的HbAlc%48和與各試樣葡萄糖共孵育時間的關係的圖。圖6為示意各試樣的GHbLys。/。和與各試樣葡萄糖共孵育時間的關係的圖。在兩圖中，^令為葡萄糖濃度0mmol/L的試樣1,■為葡萄糖濃度180mmol/L的試樣2，▲為葡萄糖濃度360mmol/L的試樣3，《為葡萄糖540mmol/L的試樣4的結果。如圖5所示，即便使試樣中葡萄糖濃度從0mmol/L變成540mmol/L，各試樣間的HbAlc%的值基本看不到變化。另夕卜，對於相同葡萄糖濃度的試樣，使與葡萄糖的共孵育時間從0小時~3.5小時變化的情況下，HbAlc%也基本看不到變化。由此可見，與葡萄糖共孵育的時間在03.5小時的範圍內時，無論試樣中的葡萄糖濃度如何，也基本不生成HbAlc。與此相對，如圖6所示，GHbLys%測定值隨試樣中的葡萄糖濃度的增加而增加。此外，隨著與葡萄糖共孵育時間的增加，GHbLys。/o的測定值也增加。由此可見，GHbLys的生成依賴於試樣中的葡萄糖濃度以及共孵育時間。此外，這些結果證明如以下所示，若在GHbLys。/。的測定的同時測定HbAlc%,可區別餐後高血糖與糖尿病。如圖5所示，與葡萄糖共孵育時間為短時間時HbAlc不增加。另一方面，如糖尿病的情況，空腹時血糖值高的情況下，因Hb與葡萄糖的接觸時間變長而生成HbAlc。因此，HbAlc不是餐後高血糖而是糖尿病的指標。一方面，GHbLys在餐後高血並唐下生成。因此若測定GHbLys%與HbA1c%雙方，通過GHbLys%測定可判斷是否為餐後高血糖，此外，通過HbAlc。/。測定，可判斷是否已發展為糹唐尿病。實施例3與上述實施例2同樣，從糖尿病患者以及{建康者採集全血。該全血於室溫放置l天后，置於水箱保存(0~25天)。緩慢攪拌49保存後的全血後，在0.02mL全血中添加0.50mL純化水進行溶血。使用該溶血試樣與上述實施例2同樣進行GHbLys。/。的測定。該結果如圖7所示。圖7為示意全血的保存時間與GHbLys%的關係的圖。如該圖中所示，令為健康者試樣的結果，固為糖尿病患者試樣的結果。如該圖所示，GHbLys%的測定值即-使在全血i文置0至25天的情況下也基本無變動。由此可見，可以說受試體的生物體內的血液以及採自受試體的血液中GHbLys。/。不變。即與以往的直接的血糖值的測定方法不同，通過GHbLys。/。的測定，例如，採血時機及採集得到的血液的分析時機等沒有任何限制，可減輕患者及醫療機構的勞動。實施例4糖尿病患者雖顯示恆定的高血糖，但根據I型患者與II型患者其抑制方法不同。首先，I型患者因體內無法生產胰島素，需通過外部注射胰島素。通過該餐前注射的胰島素，血糖迅速降低。然而，因不是生物體分泌的對應於血糖的胰島素量，由於暫時的胰島素不足，發生餐後高血糖，其後，顯示血糖降低的行為。因此，可認為I型患者通過胰島素的給予，與未給予胰島素的狀態相比，表示平時的平均血糖值的HbAlc。/。顯示較低的值，但作為餐後高血糖的指標的GHbLys%依然顯示較高的值。另一方面，II型患者因體內一定程度上可生產對應於血糖的胰島素量，顯示平緩的血糖變動。因此，II型患者即便未給予胰島素，與未給予胰島素的I型患者相比，顯示平時的平均血糖值的HbAlc。/。顯示較低的值。且通過使用胰島素及延緩小腸內的糖的吸收的延緩劑等，餐後高血糖難以發生。因此，通過糖吸收延緩劑的給予，與未給予糖吸收延緩劑的狀態相比，作為餐後高血糖的指標的GHbLysM顯示較低的值。從而，對I型患者50給予胰島素(未給予糖吸收延緩劑)，對II型患者給予胰島素的同時，給予糖吸收延緩劑，測定GHbLysW,確認了顯示餐後高血糖的GHbLys%與顯示血糖的平均值的HbAlc%的關係。首先，將27名糖尿病患者分類為僅給予胰島素的I型患者與給予胰島素與糖吸收延緩劑的II型患者。隨後對於各患者進行HbAlc%與GHbLys。/。的測定。HbAlc%採用市售的測定器(商品名ADAMSAleHA-8160、愛科來公司生產)，按照其使用說明書進行測定。GHbLys%通過與上述實施例2同樣的方法測定。HbAlc%、GHbLys%、以及兩者之差(GHbLys%-HbAlc%)的結果如下述表所示。tableseeoriginaldocumentpage51tableseeoriginaldocumentpage51如上述表所示，給予胰島素的I型患者，與HbAlc。/o相比GHbLys%顯示為較大的值，給予糖吸收延緩劑的II型患者，與HbAlc。/。相比GHbLys。/。顯示為較小的值。如上所述，給予胰島素的I型患者容易顯示餐後高血糖，給予胰島素與糖吸收延緩劑的II型患者難以顯示餐後高血糖。因此，如上述表5中所示，對於I型患者，表示餐後的血糖值的GHbLys。/。與HbA1c%相比顯示較大的值，"GHbLys%-HbAlc%"與II型患者的"GHbLys%-HbA1c%"相比也顯示較大的值，可以說這證明了GHbLys%反映餐後的血糖值。另外，由這些結果可知，不僅GHbLys。/。的檢測可判斷餐後高血糖，通過GHbLys。/。與HbAlc。/。的關係也可判斷餐後高血糖(臨界性糖尿病)。生產上的利用可能性如上所述，4艮據本發明，通過GHbLys的測定，可間接才企測餐後高血糖。餐後高血糖即所謂的臨界性糖尿病，通過在該階段進行充分的預防，可延遲及防止糖尿病的發展，抑制併發症等。因此，本發明作為餐後高血糖的診斷方法極為有用。權利要求1.一種餐後高血糖指標，其特徵在於，其為用於診斷餐後高血糖的餐後高血糖指標，含賴氨酸殘基被糖化的血紅蛋白。2.根據權利要求l所述的餐後高血糖指標，其中，所述餐後高血糖指標為反映餐後血糖值的平均血糖值指標。3.—種測定方法，其特徵在於，其為餐後高血糖指標的測定方法，所述指標為權利要求1所述的餐後高血糖指標，所述餐後高血糖指標的測定為血紅蛋白的賴氨酸殘基的糖化率的測定。4.根據權利要求3所述的測定方法，其中，所述賴氨酸殘基的糖化率的測定方法為選自高效液相色^普法、免疫法、酶法以及電泳法所組成的組中的至少一種。5.根據權利要求3所述的測定方法，其中，所述賴氨酸殘基的糖化率的測定方法為酶法，所述測定方法包含下述(A)~(C)的步驟(A)用蛋白酶切斷血紅蛋白的步驟；(B)使果糖基胺基酸氧化酶作用於所得到的血紅蛋白片段中的賴氨酸殘基的糖化部分的步驟；(C)通過測定所述糖化部分與果糖基胺基酸氧化酶的氧化還原反應，確定血紅蛋白的賴氨酸殘基的糖化率的步驟。6.根據權利要求5所述的測定方法，其中，所述血紅蛋白片段含選自賴氨酸、被糖化的賴氨酸、含賴氨酸殘基的肽、以及含被糖化的賴氨酸殘基的肽所組成的組中的至少一種。7.才艮據權利要求5所述的測定方法，其中，所述血紅蛋白片段包含胺基酸殘基數為26個的肽。8.根據權利要求3所述的測定方法，其為試樣中包含的所述餐後高血糖指標的檢測方法，所述試樣為全血試樣、血細胞試樣、或它們的溶血試樣。9.根據權利要求3所述的測定方法，其通過血紅蛋白的總量與賴氨酸殘基被糖化的血紅蛋白的量來計算所述血紅蛋白的賴氨酸糖化率。10.根據權利要求9所述的測定方法，其中，所述賴氨酸殘基被糖化的血紅蛋白的量為所述賴氨酸殘基的糖化量。11.一種危險度確定方法，其特徵在於，其為確定受試體患糖尿病的危險度的方法，所述方法包含下述(a)步驟(a)對於採自受試體的血液試樣，通過權利要求3所述的測定方法測定血紅蛋白的賴氨酸殘基的糖化率，來測定權利要求l所述的餐後高血糖指標的步驟。12.4艮據^^利要求11所述的危險度確定方法，其中，還包含(b)步驟(b)採用所述(a)步驟中測定的血紅蛋白的賴氨酸殘基的糖化率，通過選自下述(bl)~(b5)所組成的組中的至少一種方法來確定所述受試體患糖尿病的危險度的步驟(bl)將採自健康者的血液中血紅蛋白的賴氨酸殘基的糖化率與採自餐後高血糖患者的血液中血紅蛋白的賴氨酸殘基的糖化率的邊界值設定為評價基準，與所述評價基準相比，所述(a)步驟中測定的受試體的賴氨酸殘基的糖化率相對高的情況下，確定為危險度相對高；(b2)在採自健康者的血液中血紅蛋白的賴氨酸殘基的糖化率與採自空腹時的健康者的血液的血糖值的關係式中，代入採自空腹時的受試體的血液的血糖值，將由此求得的血紅蛋白的賴氨酸殘基的糖化率的計算值設定為評價基準，與所述評價基準相比，所述(a)步驟中測定的受試體的賴氨酸殘基的糖化率相對高的情況下，確定為危險度相對高；(b3)將採自空腹時的受試體的血液的血糖值設定為評價基準，另一方面，在採自健康者的血液中血紅蛋白的賴氨酸殘基的糖化率與採自空腹時的健康者的血液的血糖值的關係式中，代入所述(a)步驟中測定的受試體的賴氨酸殘基的糖化率，求得受試體空腹時血糖值的計算值，與所述評價基準相比，受試體空腹時血糖值的計算值相對高的情況下，確定為危險度相對高；(b4)在採自健康者的血液中血紅蛋白的賴氨酸殘基的糖化率與採自健康者的血液中血紅蛋白的(3鏈N末端胺基酸殘基的糖化率的關係式中，代入採自受試體的血液中血紅蛋白的(3鏈N末端胺基酸殘基的糖化率，將由此求得的血紅蛋白的賴氨酸殘基的糖化率的計算值設定為評價基準，與所述評價基準相比，所述(a)步驟中測定的受試體的賴氨酸殘基的糖化率相對高的情況下，確定為危險度相對高；(b5)將採自受試體的血液中血紅蛋白的p鏈N末端胺基酸殘基的糖化率設定為評價基準，另一方面，在採自健康者的血液中血紅蛋白的賴氨酸殘基的糖化率與採自健康者的血液中血紅蛋白的p鏈N末端胺基酸殘基的糖化率的關係式中，代入所述(a)步驟中測定的受試體的賴氨酸殘基的糖化率，求得受試體的血紅蛋白的(3鏈N末端胺基酸殘基的糖化率的計算值，與所述評價基準相比，受試體的血紅蛋白的(3鏈N末端胺基酸的糖化率的計算值相對高的情況下，確定為危險度相對高。13.—種診斷方法，其特徵在於，其為診斷受試體的餐後高血糖的方法，所述方法包含下述(c)步驟(c)對於採自受試體的血液試樣，通過權利要求3所述的測定方法測定血紅蛋白的賴氨酸殘基的糖化率，來測定權利要求l所述的餐後高血糖指標的步驟。14.根據權利要求13所述的診斷方法，其還包含(d)步驟(d)採用所述(c)步驟中測定的血紅蛋白的賴氨酸殘基的糖化率，通過選自下述(dl)~(d5)所組成的組中的至少一種方法來判斷所述受試體的餐後高血糖的步驟(dl)將採自健康者的血液中血紅蛋白的賴氨酸殘基的糖化率與採自餐後高血糖患者的血液中血紅蛋白的賴氨酸殘基的糖化率的邊界值設定為評價基準，與所述評價基準相比，所述(c)步驟中測定的受試體的賴氨酸殘基的糖化率相對高的情況下，判斷為餐後高血糖；(d2)在採自健康者的血液中血紅蛋白的賴氨酸殘基的糖化率與採自空腹時的健康者的血液的血糖值的關係式中，代入採自空腹時的受試體的血液的血糖值，將由此求得的血紅蛋白的賴氨酸殘基的糖化率的計算值設定為評價基準，與所述評價基準相比，所述(c)步驟中測定的受試體的賴氨酸殘基的糖化率相對高的情況下，判斷為餐後高血糖；(d3)將採自空腹時的受試體的血液的血糖值設定為評價基準，另一方面，在採自健康者的血液中血紅蛋白的賴氨酸殘基的糖化率與採自空腹時的健康者的血液的血糖值的關係式中，代入所述(c)步驟中測定的受試體的賴氨酸殘基的糖化率，求得受試體空腹時血糖值的計算值，與所述評價基準相比，受試體空腹時血糖值的計算值相對高的情況下，判斷為餐後高血糖；(d4)在採自健康者的血液中血紅蛋白的賴氨酸殘基的糖化率與採自健康者的血液中血紅蛋白的(3鏈N末端胺基酸殘基的糖化率的關係式中，代入釆自受試體的血液中血紅蛋白的p鏈N末端胺基酸殘基的糖化率，將由此求得的血紅蛋白的賴氨酸殘基的糖化率的計算值設定為評價基準，與所述評價基準相比，所述(c)步驟中測定的受試體的賴氨酸殘基的糖化率相對高的情況下，判斷為餐後高血糖；(d5)將採自受試體的血液中血紅蛋白的(3鏈N末端胺基酸殘基的糖化率設定為評價基準，另一方面，在採自健康者的血液中血紅蛋白的賴氨酸殘基的糖化率與採自健康者的血液中血紅蛋白的(3鏈N末端胺基酸殘基的糖化率的關係式中，代入所述(a)步驟中測定的受試體的賴氨酸殘基的糖化率，求得受試體的血紅蛋白的P鏈N末端胺基酸殘基的糖化率的計算值，與所述評價基準相比，受試體的血紅蛋白的(3鏈N末端胺基酸的糖化率的計算值相對高的情況下，判斷為餐後高血糖。15.—種指標測定用試劑盒，其特徵在於，其為權利要求3所述的餐後高血糖指標的測定方法中使用的試劑盒，所述試劑盒包含蛋白酶、果糖基胺基酸氧化酶、過氧化物酶以及通過氧化而顯色的底物。16.—種危險度確定用試劑盒，其特徵在於，其為權利要求11所述的患糖尿病的危險度的確定方法中使用的試劑盒，所述試劑盒包含蛋白酶、果糖基胺基酸氧化酶、過氧化物酶以及通過氧化而顯色的底物。17.—種餐後高血糖診斷用試劑盒，其特徵在於，其為權利要求13所述的餐後高血糖的診斷方法中使用的試劑盒，所述試劑盒包含蛋白酶、果糖基胺基酸氧化酶、過氧化物酶以及通過氧化而顯色的底物。18.—種平均血糖值測定方法，其特徵在於，其為反映餐後血糖值的平均血糖值的測定方法，所述方法包含下述(x)步驟~(y)步驟(x)測定平均血糖值指標的步驟，所述平均血糖值指標為權利要求l所述的指標，對於採自受試體的血液試樣，通過權利要求3所述的餐後高血糖指標的測定方法測定血紅蛋白的賴氨酸殘基的糖化率的步驟；(y)在血紅蛋白的賴氨酸殘基的糖化率與反映餐後血糖值的平均血糖值的關係式中，代入所述(x)步驟中測定的血紅蛋白的賴氨酸殘基的糖化率，計算反映餐後血糖值的平均血糖值的步驟。全文摘要本發明提供一種通過間接測定血糖值來診斷餐後高血糖的新方法。該方法通過測定賴氨酸的側鏈氨基被糖化的血紅蛋白的賴氨酸糖化率(GHbLys％)來檢測餐後高血糖。GHbLys％的測定中，例如用蛋白酶切斷血紅蛋白，將果糖基胺基酸氧化酶作用於所得到的血紅蛋白片段的側鏈氨基的糖化部分，通過測定上述糖化部分與果糖基胺基酸氧化酶的氧化還原反應來確定。文檔編號G01N33/72GK101501502SQ20078002994公開日2009年8月5日申請日期2007年8月10日優先權日2006年8月11日發明者今井敏博,米原聰申請人:愛科來株式會社