一種利用uplc快速測定豆製品中6種大豆異黃酮的方法
2023-10-18 09:40:59
一種利用uplc快速測定豆製品中6種大豆異黃酮的方法
【專利摘要】本發明公開了一種利用UPLC快速測定豆製品中6種大豆異黃酮的方法，屬於分析化學【技術領域】。測試豆製品種類包括豆漿、豆腐、素雞、豆乾、百葉、腐竹等，測定大豆苷，大豆苷元，黃豆黃苷，黃豆黃素，染料木苷，染料木素6種大豆異黃酮。首先用甲醇溶液對豆製品中的大豆異黃酮進行提取，收集上清液後，殘渣再用甲醇重複提取2次，合併上清液，進行UPLC檢測。本發明採用UPLC達到對豆製品中主要的6種大豆異黃酮的組成和含量的快速測定，本方法樣品前處理簡單，分析速度快，重複性、準確性高，為豆製品質量評價與控制提供高效準確的分析方法手段。
【專利說明】-種利用UPLC快速測定豆製品中6種大豆異黃酮的方法
【技術領域】
[0001] 一種利用UPLC快速測定豆製品中6種大豆異黃酮的方法，屬於分析化學技術領 域。具體設計一種利用UPLC (超高效液相色譜）測定豆漿、豆腐、素雞、豆乾、百葉、腐竹等 豆製品中大豆苷，大豆苷元，黃豆黃苷，黃豆黃素，染料木苷，染料木素6種大豆異黃酮的方 法。
【背景技術】
[0002] 大豆異黃酮是指以3-苯並吡喃酮為母核的一系列化合物，包括3種游離型的甙元 和結合型的糖苷。糖苷型大豆異黃酮包括葡萄糖甙，乙醯化糖甙和丙二醯化的糖苷等四種。 異黃酮甙元比異黃酮葡萄糖苷有更廣泛和明顯的生物活性和更高的吸收利用率。大豆異黃 酮主要來源於豆科植物的莢豆類，其中以大豆中含量最高，是一種天然雌激素，具有抗動脈 粥樣硬化、抗腫瘤、預防骨質疏鬆、神經保護和抗神經退變的作用、抗菌消炎、提高免疫力的 作用、防輻射及雌激素樣作用。豆製品的食用，尤其是豆漿、豆腐等中國傳統食品，是我國人 民群眾攝入大豆異黃酮重要且主要的途徑。
[0003] 現國內外大豆異黃酮的化學定性、定量檢測及分離技術涉及光譜分析、色譜分析、 電泳分析，現在多採用HPLC法。UPLC (超高效液相色譜法)具有比HPLC (高效液相色譜法） 更快分析速度、更高靈敏度、更高分離度和更小溶劑用量，從而使分析具有優越的效率、準 確性、經濟性，被越來越廣泛的應用於食品安全、食品質量評價與監督、環境檢測、藥品監督 等分析測試領域中。
[0004] 目前，大豆異黃酮的檢測主要集中在大豆中，而對豆製品中大豆異黃酮定性定量 的報導較少。如 J.C.Gasparetto，F.S.F.Smolarek，T.M.G. de Francisco，L.C. Miranda 等人用HPLC-PDA對大豆中6種主要的大豆異黃酮進行了定量分析，而國內李豔，李沁媛，譚 濤，張建紅等採用HPLC-PDA對豆腐、豆芽、豆乾中染料木苷、大豆黃素、染料木素進行測定。
【發明內容】
[0005] 本發明的目的在於提供一種利用UPLC快速測定豆漿、豆腐、素雞、豆乾、百葉、腐 竹等豆製品中6種大豆異黃酮的方法。
[0006] 本發明採用UPLC同時分離測定6種大豆異黃酮物質，達到對不同豆製品中大豆異 黃酮的快速定量，本方法前處理簡單，成本低，可同時測定，實現對不同豆製品質量及營養 價值的準確評價和監控。
[0007] 為實現上述目的，本發明採用如下技術方案： 一種利用UPLC快速測定豆製品中6種大豆異黃酮的方法，包括以下步驟： (1) 標準品：大豆苷、大豆苷元、黃豆黃苷、黃豆黃素、染料木苷、染料木素6種標準品均 購自阿拉丁公司； (2) 樣品前處理：取0. 1 mL豆漿加入0. 9 mL甲醇，或0. lg固體豆製品加入1 mL甲 醇，超聲53kHz提取5 min，渦旋混勻，室溫下4000 r/min離心3 min，取上清，殘渣再用甲 醇重複提取2次，合併上清，氮氣吹乾，過0. 22 μ m濾膜，待測； (3) 色譜條件 色譜柱：Kinetex_C18 (2.1 mmXlOO mm，1.7 μπι)，流動相為乙腈A相及0.1 %甲酸 B 相，流動梯度洗脫程序：0-0.5 min:10 % A+90 % B;0.5-10 min:10 % A+90% B - 45% A+55% B;10-13 min:45% A+55% B - 100 % A;流速 0.3 mL/min，柱溫 45 °C，紫外檢測波 長260 nm ;進樣量1 μ L ; (4) 大豆異黃酮含量測定方法的建立 分別稱取大豆苷，大豆苷元，黃豆黃苷，黃豆黃素，染料木苷，染料木素6種標準品5 mg (精確到O.Olmg)，置於25 mL容量瓶中，用甲醇與水的體積比為3:2的甲醇-水溶液定容， 配成混合標準樣品儲備液，於_20°C保存； 用甲醇-水溶液逐級稀釋使6種大豆異黃酮含量分別為0. 15-20 mg/L ;然後以每個濃 度下的標準溶液所得的260nm處積分峰面積為縱坐標，標準溶液的濃度為橫坐標，分別建 立標準曲線；在檢測樣品時，根據樣品所得的260nm處積分峰面積，分別從標準曲線中讀出 樣品中6種大豆異黃酮的含量。
[0008] 本發明的有益效果：本發明顯著優點在於根據不同產品，不同加工方式，所測得的 多種大豆異黃酮含量分析，對豆製品質量得到快速、準確的識別和評價。本發明利用UPLC 測定豆漿、豆腐或腐竹等中6種大豆異黃酮，此方法樣品前處理簡單、快速，成本低，可同時 測定，實現對不同豆製品的識別，同種產品間質量的評價。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0009] 圖1是標準品UPLC圖譜；其中1-大豆苷，2-黃豆黃苷，3-染料木苷，4-大豆苷元， 5_黃豆黃素，6-染料木素。
【具體實施方式】
[0010] 實施例1豆漿中大豆異黃酮的測定 1、標樣：大豆苷、大豆苷元、黃豆黃苷、黃豆黃素、染料木苷、染料木素購自阿拉丁公司。
[0011] 2、樣品前處理：取0. 1 mL豆漿加入0. 9 mL甲醇，超聲53kHz提取5 min，渦旋混 勻，室溫下離心機4000 r/min離心3 min，取上清，殘渣再用甲醇重複提取2次，合併上清， 氮氣吹乾，過0.22 μ m濾膜，待測。
[0012] 3、色譜條件：色譜柱：Kinetex_C18 (2. 1 mmX 100 mm, 1. 7 μ m)，流動相為乙腈 A 相及0. 1 %甲酸B相，流動梯度洗脫程序：0-0. 5 min :10 % A+90 % B ;0. 5-10 min :10 % A+90% B - 45% A+55% B ； 10-13 min ：45°/〇 A+55% B - 100 % A ； 流速0. 3 mL/min，柱溫45 °C，紫外檢測波長260 nm ;進樣量1 μ L。
[0013] 表1豆楽中大豆異黃酮的含量（mg/L)
【權利要求】
1. 一種利用UPLC快速測定豆製品中6種大豆異黃酮的方法，其特徵在於：包括以下步 驟： (1) 標準品：大豆苷、大豆苷元、黃豆黃苷、黃豆黃素、染料木苷、染料木素6種標準品均 購自阿拉丁公司； (2) 樣品前處理：取0. 1 mL豆漿加入0. 9 mL甲醇，或0. lg固體豆製品加入1 mL甲 醇，超聲53kHz提取5 min，渦旋混勻，室溫下4000 r/min離心3 min，取上清，殘渣再用甲 醇重複提取2次，合併上清，氮氣吹乾，過0. 22 μ m濾膜，待測； (3) 色譜條件：色譜柱：Kinetex_C18,2.1 _X100 mm，1.7 μπι，流動相為乙腈A相及 0· 1 % 甲酸 B 相，流動梯度洗脫程序：0-0· 5 min :10 % A+90 % B ;0· 5-10 min :10 % A+90% B - 45% A+55% B ;10-13 min :45% A+55% B - 100 % A ;流速 0· 3 mL/min，柱溫 45 °C，紫 外檢測波長260 nm ;進樣量1 μ L ; (4) 大豆異黃酮含量測定方法的建立：分別稱取大豆苷，大豆苷元，黃豆黃苷，黃豆黃 素，染料木苷，染料木素6種標準品各5 mg，精確到O.Olmg，置於25 mL容量瓶中，用甲醇與 水的體積比為3:2的甲醇-水溶液定容，配成混合標準樣品儲備液，於-20°C保存； 用甲醇-水溶液逐級稀釋使6種大豆異黃酮含量分別為0. 15-20 mg/L ;然後以每個濃 度下的標準溶液所得的260nm處積分峰面積為縱坐標，標準溶液的濃度為橫坐標，分別建 立標準曲線；在檢測樣品時，根據樣品所得的260nm處積分峰面積，分別從標準曲線中讀出 樣品中6種大豆異黃酮的含量。
【文檔編號】G01N30/02GK104267128SQ201410552603
【公開日】2015年1月7日 申請日期:2014年10月17日 優先權日:2014年10月17日
【發明者】張爽, 陳潔, 陶冠軍, 秦昉, 曾茂茂, 鄭宗平, 何志勇 申請人:江南大學