苜蓿酸-3-O-β-D-葡萄糖苷在製備防治骨病藥物中的應用的製作方法

2023-10-20 07:04:02 2

苜蓿酸-3-O-β-D-葡萄糖苷在製備防治骨病藥物中的應用的製作方法
【專利摘要】本發明公開了苜蓿酸-3-O-β-D-葡萄糖苷及含苜蓿酸-3-O-β-D-葡萄糖苷的大麻藥總皂苷在製備防治骨病藥物中的用途。藥效學實驗表明，苜蓿酸-3-O-β-D-葡萄糖苷和含苜蓿酸-3-O-β-D-葡萄糖苷的大麻藥總皂苷均具有顯著的改善骨病作用，可使維甲酸所致骨質疏鬆大鼠骨重係數、骨灰含量、骨密度、骨磷含量等明顯增強。可與藥學上可接受載體混合，用於製備防治骨病的藥物。
【專利說明】苜蓿酸-3-0-β -D-葡萄糖苷在製備防治骨病藥物中的應用
【技術領域】
[0001 ] 本發明涉及一種苜蓿酸-3-0- β D-葡萄糖苷及含苜蓿酸-3-0- β -D-葡萄糖苷的大麻藥總皂苷的新用途，尤其是苜蓿酸-3-0-β D-葡萄糖苷在製備防治骨病藥物中的用途。
【背景技術】
[0002]大麻藥為豆科植物鐮扁豆(Dolichos falcatus Kalcatus Klein)的根或葉,另Ij名有麻裡麻，麻三段、豆葉百步還陽等。本品性辛、麻、溫。在我國雲南，四川，甘肅等地均有分布，尤其在雲南有著豐富的植物資源。具有祛風活血，止血止痛等功效。在雲南民間主要用於骨折、跌打損傷、風溼疼痛，外用治療外傷出血，還具有抗癌，利尿的作用。目前有關大麻藥的主要化學成分是三萜皂苷類與生物鹼類化合物。現有技術中這些化合物的提取工藝複雜，且提取物純度不高。
[0003]骨質疏鬆症(OsteopOTosis，0P)是一種由多種原因引起的全身性骨骼疾病，它以骨組織顯微結構退化，骨量減少為主要特徵，導致骨的脆性增加而容易發生骨折。臨床上主要表現為腰背疼痛，病理骨折，身體畸形，或伴有原發病表現。隨著人類壽命的增長和老年型社會的加快形成，骨質疏鬆已成為嚴重危害中老年健康的一類疾病，本病的最大危害是骨折，不僅使國家和個人承擔的醫療費用大大增加，而且會導致殘疾、終身喪失獨立生活能力甚至死亡，給家庭和社會帶來嚴重的危害。
[0004]由於本病複雜的病因病理以及其複雜的調節機制，目前對本病的治療原則主要為抑制骨吸收，促進骨形成。治療藥物主要有雌激素類藥物、促骨形成藥物、抗骨吸收藥物和骨礦化藥物幾大類。雖然療效確切，但各種不可避免的副作用或是價格因素令其難以廣泛推行。例如曾被認為是最有效`治療方法的雌激素替代療法，目前發現該療法有導致乳房脹痛、陰道出血的副作用，而且有增加子宮內膜癌、乳腺癌及心腦血管疾病的危險，因此限制了其在臨床上的廣泛使用。

【發明內容】

[0005]本發明要解決的技術問題是從中國特色民族藥物中提取分離防治骨病的有效部位和/或有效成分，以便製備療效顯著、毒副作用小、服用方便、可長期使用，且價格低廉的治療骨病尤其是防治骨質疏鬆和/或促進骨癒合的藥物。
[0006]本發明提供苜蓿酸-3-0-β -D-葡萄糖苷在製備防治骨病藥物中的應用:所述苜蓿酸-3-0-β -D-葡萄糖苷作為活性成分與藥學上可接受的載體或輔料製備成防治骨病藥物或藥物組合物。
[0007]優選地，所述防治骨病藥物為防治骨質疏鬆和/促進骨損傷癒合藥物。即，苜蓿酸-3-0-β -D-葡萄糖苷優選是用於製備防治骨質疏鬆和/促進骨損傷癒合藥物。
[0008]本發明還提供大麻藥總皂苷在製備防治骨病藥物中的應用:所述大麻藥總皂苷作為活性成分與藥學上可接受的載體或輔料製備成防治骨病藥物或藥物組合物。
[0009]優選地，防治骨病藥物為防治骨質疏鬆和/促進骨損傷癒合藥物。即，大麻總皂苷優選是用於製備防治骨質疏鬆和/促進骨損傷癒合藥物。
[0010]本發明還提供苜蓿酸-3-0-β -D-葡萄糖苷和大麻藥總皂苷的任意比混合物在製備防治骨病藥物中的應用:苜蓿酸-3-0-β -D-葡萄糖苷和大麻藥總皂苷的任意比混合物作為活性成分與藥學上可接受的載體或輔料製備成防治骨病的藥物或藥物組合物。
[0011]優選地，所述防治骨病藥物為防治骨質疏鬆和/促進骨損傷癒合藥物。即，大麻總皂苷和大麻藥總皂苷優選是用於製備防治骨質疏鬆和/促進骨損傷癒合藥物。
[0012]上述藥學上可接受的載體包括口服製劑輔料、胃腸外途徑給藥或外用給藥的輔料。給藥途徑可以是口服、注射、外用局部給藥等。根據本發明的技術方案，該組合物是口服製劑或外用製劑，其中口服製劑包括膠囊劑、顆粒劑、口服液、片劑、滴丸等。所用輔料包括:澱粉、蔗糖、乳糖、糖粉、環糊精、微晶纖維素鈉、丙二醇、甘油、異丙醇、吐溫-80、維生素C、乙醯半胱氨酸、亞硫酸鈉、硬脂酸鎂、檸檬酸和明膠等常規輔料。外用製劑可為巴布貼等。製劑的後期製備工藝及設備均屬製藥領域的常規技術，本發明對此不作限定，故不予詳述。
[0013]與現有技術比較本發明具有有益效果:本發明首次提出了以苜蓿酸-3-0-β-D-葡萄糖苷為主要活性成分的大麻藥提取物，藥效試驗表明，含苜蓿酸-3-0-β-D-葡萄糖苷的大麻藥總皂苷(無特殊提示，後面均簡稱為大麻藥總皂苷)及苜蓿酸-3-0- β -D-葡萄糖苷具有顯著的防治骨病作用，特別是在製備防治骨質疏鬆和/促進骨損傷癒合藥物中的應用，且毒副作用小，療效確切，安全可控，價格低廉。
[0014]圖面說明
[0015]圖1苜蓿酸-3-0- β -D-葡萄糖苷質譜圖
[0016]圖2苜蓿酸-3-0- β -D-葡萄糖苷氫譜圖
[0017]圖3苜蓿酸-3-0- β -D-葡萄糖苷碳譜圖
[0018]圖4苜蓿酸-3-0- β -D-葡萄糖苷結構式
【具體實施方式】
[0019]下面結合具體實施例對本發明作進一步說明，以使本領域的技術人員可以更好的理解本發明並能予以實施，但所舉實施例不作為對本發明的限定。
[0020]實施例1
[0021]大麻藥總皂苷、苜蓿酸-3-0-β -D-葡萄糖苷的製備
[0022]大麻藥總皂苷的製備:取大麻藥顆粒250g，置於5L的圓底燒瓶中，加入大麻藥顆粒10倍重量的體積濃度60%的乙醇，浸泡2小時後，水浴回流提取，共提取三次，提取時間分別為2、1.5、I小時，合併濾液。濾液減壓回收乙醇至無醇味後，經60°C減壓乾燥至幹，得大麻藥總皂苷約55克(HPLC法測定，苜蓿酸-3-0-β -D-葡萄糖苷的含量> 52%).[0023]苜蓿酸-3-0-β -D-葡萄糖苷製備方法:取大麻藥顆粒250g，置於5L的圓底燒瓶中，加入大麻藥顆粒10倍重量的體積濃度60%的乙醇，浸泡2小時後，水浴回流提取，共提取三次，提取時間分別為2、1.5、I小時，合併濾液。濾液減壓回收乙醇至無醇味後，配置成含0.05g生藥材/mL的藥液；藥液用鹽酸調PH為5 ;將配好的藥液上已處理好的HPD500型大孔吸附樹脂柱，柱的徑高比為1: 5，上樣量以藥材量計與樹脂重量比為3: 5(上樣藥液的量以其對應的大麻藥顆粒的重量限定，即為從與樹脂重量比為3: 5的大麻藥顆粒得到藥液)，上樣流速為lBV/h。上樣後，用8倍柱體積的濃度為30%乙醇或甲醇衝洗除雜，流速為2.5BV/h,再用6倍柱體積的濃度為60%乙醇或甲醇洗脫，流速為2BV/h，收集濃度為60%洗脫液，濃縮、乾燥，即得苜蓿酸-3-0-β-D-葡萄糖苷(HPLC法測定純度> 90% )0
[0024]實施例2
[0025]對實施例1提取得到的苜蓿酸-3-0-β -D-葡萄糖苷結構鑑定。
[0026]苜蓿酸-3-0-β D-葡萄糖苷，該化合物分子式為C36H56O11,白色無定型粉末，易溶於甲醇、乙醇與水；熔點:m.p.249-251 °C ；UV:在紫外190_400nm下進行全波段掃描，發現在192nm 下有最大吸收；質譜數據=E1-MS(70eV)m/z, [Μ]-663.5(100)(圖1) ；IR:3400、2930、1695、1445、1260、1165CHT1，表明有酚羥基、羰基、酮基與雙鍵；再結合核磁氫譜與碳譜(圖2與圖3)鑑定化合物為苜蓿酸-3-0-β -D-葡萄糖苷(圖4)。
[0027]實施例3
[0028]大鼠維甲酸骨質疏鬆模型
[0029]苜蓿酸-3-0-β-D-葡萄糖苷(簡稱MD，含MD質量百分比等於92% )和大麻藥總皂苷(簡稱DZ，含MD質量百分比等於65%)的體內抗骨病(具體為抗骨質疏鬆)實驗。
[0030]1.受試藥物
[0031]給藥樣品:自製的大麻藥總皂苷樣品與苜蓿酸-3-0-β -D-葡萄糖苷樣品(特徵同上)；對照藥物:依膦片劑(連雲港正大天晴製藥有限公司生產；批號:Η12562112);維甲酸(上海第六製藥廠生產；批號:110315)。
[0032]2.實驗動物
[0033]實驗動物為SPF級SD大鼠，體重200±20克，雄雌各半，由華中科技大學同濟醫學院提供，許可證號SCXK (鄂)2004-0007，實驗動物合格證號No00009567。動物於25°C、相對溼度為60-75%條件下飼養I周后用於實驗。
[0034]3.主要試劑與設備
[0035]鹼性磷酸酶試劑盒(ALP):南京建成生物工程研究所，批號:20120310 ;血清無機磷試劑盒:南京建成生物工程研究所，批號:20120420 ;生理鹽水:石家莊四藥有限公司生產，批號:110628352 ；Sartorius分析天平:北京賽多利斯天平有限公司。TGL-20M冷凍離心機(湘儀離心機儀器有限公司)；高溫電爐、電晶體式自動恆溫控制臺(江蘇省東臺縣電器廠)；LA204電子天平(常熟市恆器廠)；721分光光度計(上海第三分析儀器廠)；島津AA-670火焰原子吸收光譜儀。
[0036]4.實驗方法
[0037]按體重隨機分為7組，一組作為正常對照組，給予0.3% CMC-Na液，其餘6組大鼠均給予維甲酸70mg/kg，以製備骨質疏鬆模型，在這6組大鼠中，I組作為模型對照組給予0.3 % CMC-Na液，I組給予依瞵片劑40mg/kg作為陽性對照組，其餘4組分別給予苜蓿酸-3-0-β-D-葡萄糖苷高劑量(50mg/kg)、低劑量(25mg/kg)及大麻藥總皂苷高劑量(100mg/kg)、低劑量(50mg/kg)。動物同時灌胃維甲酸及藥物2周後，停服維甲酸，繼續給藥2周，每天給藥一次，均於每天上午8:00-10:00給藥，於給藥過程中，每天稱一次體重，根據體重調整給藥量。末次給藥後禁食24小時(不禁水)後，給大鼠股靜脈放血，用鹼性磷酸酶試劑盒測定血清鹼性磷酸酶含量；股靜脈放血後處死大鼠，分離雙側股骨，取右側股骨測定以下指標:①.稱重並計算骨重係數(g/100g體重)?』②.用直尺測量股骨長度，用千分卡尺測量股骨頭直徑；③.測完上述指標後將標本用10%甲醛溶液固定，用雙能X射線骨密度測定儀測定股骨骨密度將測完骨密度之後的右側股骨幹燥並碳化後置於800°c馬福爐中灰化8小時製成骨灰，測定骨灰含量(mg/g骨)?』⑤.稱取一定量骨灰溶於6N HCl,用血清無機磷測定試劑盒測定骨磷；另取一定量的骨灰用島津AA-670火焰原子吸收光譜測定骨鈣含量，將所測結果折算成每克骨重所含骨鈣或骨磷的量。將所得數據進行組間t檢驗。
[0038]5實驗結果及分析
[0039]5.1苜蓿酸-3-0-β -D-葡萄糖苷與大麻藥總皂苷對維甲酸骨質疏鬆大鼠血清鹼性磷酸酶的影響
[0040]血中50% ALP由成骨細胞分泌，成骨活動增強時，可出現ALP活性升高，被認為是成骨細胞分化的早期標誌物。本實驗中ALP各組間比較，模型組比正常組顯著升高，表明對維甲酸的大量應用，影響了鈣磷代謝和成骨、破骨過程，造成骨鹽丟失，骨負重能力下降。而在服用陽性藥(依瞵片劑)和高、低兩個劑量的苜蓿酸-3-0-β-D-葡萄糖苷與大麻藥總皂苷後，ALP水平較模型組均有回落，且苜蓿酸-3-0-β -D-葡萄糖苷與大麻藥總皂苷分別二個劑量組的作用與陽性藥相當(表1)。
[0041]表1苜蓿酸-3-0-β -D-葡萄糖苷與大麻藥總皂苷對維甲酸骨質疏鬆大鼠血清鹼性磷酸酶的影響(I±SD) (η = 8)
【權利要求】
1.苜蓿酸-3-0-β -D-葡萄糖苷及含苜蓿酸-3-0- β -D-葡萄糖苷> 5 %的大麻藥總皂苷在製備防治骨質疏鬆和/促進骨損傷癒合藥物中的用途。
2.根據權利要求1所述藥物的用途，其特徵在於:大麻藥總皂苷含苜蓿酸-3-0- β -D-葡萄糖苷5-95 %。
3.根據權利要求1所述藥物的用途，其特徵在於:所述骨損傷包括骨折，骨裂。
4.根據權利要求1所述藥物的用途，其特徵在於:所述藥物為含治療有效量的苜蓿酸-3-0- β -D-葡萄糖苷和藥學上可接受組分和/或載體。
5.根據權利要求1所述藥物的用途，其特徵在於:所述藥物為含治療有效量的苜蓿酸-3-0-β -D-葡萄糖苷的大麻藥總皂苷和藥學上可接受組分和/或載體。
6.根據權利要求4或5所述藥物的用途，其特徵在於:藥學上可接受組分為可與苜蓿酸-3-0- β -D-葡萄糖苷或含苜蓿酸-3-0- β -D-葡萄糖苷的大麻藥總皂苷聯合防治骨病的化合物或組合物。
7.根據權利要求4或5所述藥物的用途，其特徵在於:所述藥物為含苜蓿酸-3-0- β -D-葡萄糖苷或含苜蓿酸-3-0- β -D-葡萄糖苷的大麻藥總皂苷，和藥學上可接受組分和/或載體的口服製劑、胃腸外給藥製劑或外用製劑。
【文檔編號】A61P19/10GK103655586SQ201210338442
【公開日】2014年3月26日 申請日期:2012年9月13日 優先權日:2012年9月13日
【發明者】陳旅翼 申請人:陳旅翼