一種食品中蘇丹紅的檢測方法
2023-10-21 01:59:12 1
專利名稱：一種食品中蘇丹紅的檢測方法
技術領域：
本發明涉及一種蘇丹紅的檢測方法。
背景技術：
目前，歐盟公布的檢測蘇丹紅的標準方法是「高效液相色譜與電噴霧離子化質譜儀聯用」檢測法(HPLC/APCI-MS法)。該方法檢測的步驟是，實際樣品先用乙腈萃取，過濾後通過高效液相色譜分離，之後用質譜進行定量檢測。另用其它檢測方法如「高效液相色譜——紫外檢測方法」(HPLC-UV法)，其前面的步驟與歐盟公布的類似，只是最後定量檢測時用的是紫外分光光度儀。還有「HPLC-DAD」檢測法等。但是，無論是哪種方法，均需用高效液相色譜進行分離，前處理複雜，且所用儀器貴重。
發明內容
本發明的目的在於針對現有蘇丹紅檢測方法存在的不足，提供一種步驟簡單，檢測準確的對食品中蘇丹紅進行檢測的方法。
本方法所涉及的物質有蘇丹紅I、II、III、IV，為最初的研究提供標樣；DMF，即N，N-二甲基甲醯胺，用於溶解蘇丹紅標樣及萃取實際樣品；硝酸銀溶液，做氧化劑；氫氧化鈉，提供強鹼性環境；氨水，防止銀離子沉澱；曲通X-100，穩定生成的銀鈉米粒子；對本醌類物質，反應產物；
銀鈉米粒子，另一反應產物，也是通過其宏觀的棕色及其散射光來間接判斷蘇丹紅的存在。
所使用的設備有QL-901型旋渦混合器，用來充分混合反應溶液；雷射筆(653nm，2.0mW)和光發射二極體(LED，458nm，0.5mW)，用於照射反應溶液，從而用肉眼直接觀察光散射現象；F-4500螢光光度儀，用於精確測定反應後溶液的散射值，建立散射強度與蘇丹紅濃度的線性關係，從而實現蘇丹紅含量的精確測定；LC系統，利用該系統，運用歐盟公布的標準方法對實際樣品進行檢測，與散射法做對照，證明散射法的可靠性。
檢測方法如下1、確定檢測標準A、定性及半定量檢測的標準將1.0-10.0mL 1.0×10-3M硝酸銀溶液、0.1-1.5mL 0.1M氫氧化鈉溶液和0.1-2.0mL 0.4％氨水在10mL試管中充分混合，然後分別加入1.0×10-5M蘇丹紅I、II、III、IV，濃度範圍分別是0.2-2.4μM、0.1-2.4μM、0.1-2.4μM，0.2-3.0μM，和0.1-0.8mL 0.2％曲通X-100溶液，用水稀釋到5.0-10.0mL，再次混勻，10-30min後，得到不同濃度下不同深淺的棕色溶液，對不同濃度下顏色深淺不同的蘇丹紅溶液拍照記錄，當蘇丹紅濃度較小不易觀察顏色變化時，用雷射筆或LED照射溶液，同樣拍照記錄觀察到的散射光強弱，以上述記錄作為定性和半定量檢測的標準；B、定量標準步驟A中加入不同濃度的蘇丹紅的溶液，用F-4500螢光光度儀精確檢測其散射信號，建立散射強度與蘇丹紅濃度的線性關係，計算得到如下參數蘇丹紅I、II、III、IV的線性方程分別為，ΔI＝-130.4+1005.5c，ΔI＝1.74+1082.6c，ΔI＝-67.9+1016.7c，ΔI＝-108.9+1092.9c，線性範圍分別為0.2-2.4μM、0.1-2.4μM、0.1-2.4μM，0.2-3.0μM，相應的檢出限(3σ)分別為3.2nM、3.0nM、3.2nM，2.9nM，相關係數分別為0.9973，0.9958，0.9969，0.9990，以此為實際樣品的測定提供定量標準；2、對待測的食品進行前處理，用DMF稀釋、攪拌、萃取、過濾得濾液，為檢測樣品；3、定性檢測將1.0-10.0mL 1.0×10-3M硝酸銀溶液、0.1-1.5mL 0.1M氫氧化鈉溶液和0.1-2.0mL 0.4％氨水在試管中充分混合，然後再加入0.01-0.2mL的稀釋後的檢測樣品和0.1-0.8mL 0.2％曲通X-100溶液，用水稀釋到5.0-10.0mL，再次混勻，10-30min後，通過觀測樣品溶液的顏色是否變化為棕色來判斷是否含有蘇丹紅。由於鹼性環境下的硝酸銀為無色，蘇丹紅為亮黃色，實驗所用濃度下為很淺的黃色，而當其與硝酸銀髮生氧化還原反應後，生成的銀鈉米粒子顯示棕色，變化明顯，這樣，就可以通過顏色的變化來確定是否含有蘇丹紅。
4、半定量檢測通過與標樣對照樣品溶液的顏色變化或用雷射筆或LED照射得到的散射光強弱，即可粗略確定樣品中含有的蘇丹紅的量，從而實現對蘇丹紅的半定量檢測。
5、定量檢測A、將1.0-10.0mL 1.0×10-3M硝酸銀溶液、0.1-1.5mL 0.1M氫氧化鈉溶液和0.1-2.0mL 0.4％氨水在試管中充分混合，然後再加入0.01-0.2mL的稀釋後的檢測樣品和0.1-0.8mL 0.2％曲通X-100溶液，用水稀釋到5.0-10.0mL，再次混勻，平行加五組，10-30min後，用F-4500螢光光度儀測定散射強度ΔI，根據線性方程計算得到實際樣品中蘇丹紅的濃度c，取平均值後即得測得值；B、在步驟A的基礎上，再加入1.0×10-5M蘇丹紅I、II、III、或IV溶液，然後再稀釋到5.0-10.0mL混勻，平行加五組，10-30min後，測定散射強度，根據線性方程又計算得到蘇丹紅的總濃度，取平均值後即得總測得值；C、計算五次測定的回收率和相對標準偏差；D、根據檢測結果，計算辣椒油或其它樣品中含有的蘇丹紅的含量，由於用線性方程計算得到的蘇丹紅含量的單位是M，即mol/L，再根據具體檢測時處理實際樣品的用量以及用螢光光度儀檢測時實際樣品稀釋的倍數，計算得到每克實際樣品中含有多少毫克蘇丹紅。
為保證實際檢測的可靠性，我們用高效液相色譜法，用LC系統對同樣批次的實際樣品進行平行檢測，通過最終計算結果的對比，證明散射法的準確性。
本發明是從完全不同的角度出發而設計的簡便快速檢測食品中蘇丹紅的方法，檢測成本大大降低，檢測效果好；本方法前處理，只需用DMF進行攪拌萃取和過濾分離，步驟簡單，更容易操作；此外，通過顏色變化即可判斷實際樣品中是否含有蘇丹紅，方便快捷，整個過程更容易實現。比較歐盟標準方法檢測蘇丹紅I的檢出限，1.3×10-2μg/mL，本方法更靈敏，檢出限為1.1×10-3μg/mL。
具體實施例方式
實施例1市售辣椒油中蘇丹紅含量的檢測1、先確定檢測標準A、定性及半定量檢測的標準將2.25mL 1.0×10-3M硝酸銀溶液、0.4mL 0.1M氫氧化鈉溶液和0.25mL 0.4％氨水在10mL試管中充分混合，然後分別加入1.0×10-5M蘇丹紅I、II、III、IV，濃度範圍分別是0.2-2.4μM、0.1-2.4μM、0.1-2.4μM，0.2-3.0μM，和0.3mL 0.2％曲通X-100溶液，用水稀釋到5.0mL，再次混勻，20min後，得到不同濃度下不同深淺的棕色溶液，對不同濃度下顏色深淺不同的蘇丹紅溶液拍照記錄，當蘇丹紅濃度較小不易觀察顏色變化時，用雷射筆或LED照射溶液，同樣拍照記錄觀察到的散射光強弱，以上述記錄作為定性和半定量檢測的標準；B、定量標準對步驟A中得到的不同濃度的蘇丹紅的溶液，用F-4500螢光光度儀精確檢測其散射信號，建立散射強度與蘇丹紅濃度的線性關係，計算得到如下參數蘇丹紅I、II、III、IV的線性方程分別為，ΔI＝-130.4+1005.5c，ΔI＝1.74+1082.6c，ΔI＝-67.9+1016.7c，ΔI＝-108.9+1092.9c，線性範圍分別為0.2-2.4μM、0.1-2.4μM、0.1-2.4μM，0.2-3.0μM，相應的檢出限(3σ)分別為3.2nM、3.0nM、3.2nM，2.9nM，相關係數分別為0.9973，0.9958，0.9969，0.9990，以此為實際樣品的測定提供定量標準。
2、對辣椒油進行前處理分別取1.0g辣椒油加入到試管中，用DMF稀釋到10mL後充分攪拌，萃取其中可能含有的蘇丹紅，攪拌1h後靜置10分鐘，用0.45μm的微孔濾膜過濾上層清液，將濾液稀釋10倍後進行檢測；3、在10mL試管中依次加入2.25mL 1.0×10-3M硝酸銀溶液、0.4mL0.1M氫氧化鈉溶液和0.25mL 0.4％氨水，充分混合，然後再加入0.03mL上述處理好的辣椒油樣品和0.3mL 0.2％曲通X-100溶液，稀釋到5.0mL，再次混勻，平行加五組，20min後，測定散射強度，根據線性方程可計算得到實際樣品中蘇丹紅的濃度，取平均值後即得「測得值」；4、在步驟3的基礎上，再加入0.4mL 1.0×10-5M蘇丹紅IV溶液，稀釋到5.0mL，然後混勻，平行加五組，20min後，測定散射強度，根據線性方程又計算得到蘇丹紅的總濃度，取平均值後即得「總測得值」；4、計算五次測定的回收率和相對標準偏差；具體結果列於下表中
5、根據檢測結果，計算辣椒油樣品中含有的蘇丹紅的量為1.64×10-2mg/g；為證明本方法的實際可靠性，我們利用歐盟公布的標準——高效液相色譜法用LC系統對相同批次的實際樣品進行檢測對照。測定的結果是3.38×10-2mg/g。二者非常接近，證明我們的方法簡單可信。
實施例2市售辣椒醬中蘇丹紅含量的檢測採用的檢測標準與實施例1相同。
1、先對辣椒醬進行前處理分別取1.0g辣椒醬加入到試管中，用DMF稀釋到10mL後充分攪拌，萃取其中可能含有的蘇丹紅，攪拌1h後靜置10分鐘，用0.45μm的微孔濾膜過濾上層清液，將濾液稀釋10倍後進行檢測；2、在10mL試管中依次加入2.25mL 1.0×10-3M硝酸銀溶液、0.4mL0.1M氫氧化鈉溶液和0.25mL 0.4％氨水，充分混合，然後再加入0.02mL上述處理好的辣椒醬樣品，和0.3mL 0.2％曲通X-100溶液，稀釋到5.0mL，再次混勻，平行加五組，20min後，測定散射強度，根據線性方程可計算得到實際樣品中蘇丹紅的濃度，取平均值後即得「測得值」；3、在步驟2的基礎上，再加入0.15mL 1.0×10-5M蘇丹紅IV溶液，稀釋到5.0mL，然後混勻，平行加五組，20min後，測定散射強度，根據線性方程又計算得到蘇丹紅的總濃度，取平均值後即得「總測得值」；4、計算五次測定的回收率和相對標準偏差；具體結果列於下表中
5、根據檢測結果，計算辣椒醬樣品中含有的蘇丹紅的量為7.61×10-3mg/g。
權利要求
1.一種食品中蘇丹紅的檢測方法，其步驟如下(1)確定檢測標準A、定性及半定量檢測的標準將1.0-10.0mL 1.0×10-3M硝酸銀溶液、0.1-1.5mL 0.1M氫氧化鈉溶液和0.1-2.0mL 0.4％氨水在試管中充分混合，然後分別加入1.0×10-5M蘇丹紅I、II、III、IV，濃度範圍分別是0.2-2.4μM、0.1-2.4μM、0.1-2.4μM，0.2-3.0μM，和0.1-0.8mL 0.2％曲通X-100溶液，用水稀釋到5.0-10.0mL，再次混勻，10-30min後，得到不同濃度下不同深淺的棕色溶液，對不同濃度下顏色深淺不同的蘇丹紅溶液拍照記錄，當蘇丹紅濃度較小不易觀察顏色變化時，用雷射筆或LED照射溶液，同樣拍照記錄觀察到的散射光強弱，以上述記錄作為定性和半定量檢測的標準；B、定量標準步驟A中加入不同濃度的蘇丹紅的溶液，用F-4500螢光光度儀精確檢測其散射信號，建立散射強度與蘇丹紅濃度的線性關係，計算得到如下參數蘇丹紅I、II、III、IV的線性方程分別為，ΔI＝-130.4+1005.5c，ΔI＝1.74+1082.6c，ΔI＝-67.9+1016.7c，ΔI＝-108.9+1092.9c，線性範圍分別為0.2-2.4μM、0.1-2.4μM、0.1-2.4μM，0.2-3.0μM，相應的檢出限(3σ)分別為3.2nM、3.0nM、3.2nM，2.9nM，相關係數分別為0.9973，0.9958，0.9969，0.9990，以此為實際樣品的測定提供定量標準；(2)對待測的食品進行前處理，用DMF稀釋、攪拌、萃取、過濾得濾液，為檢測樣品；(3)定性檢測將1.0-10.0mL 1.0×10-3M硝酸銀溶液、0.1-1.5mL 0.1M氫氧化鈉溶液和0.1-2.0mL 0.4％氨水在試管中充分混合，然後再加入0.01-0.2mL的稀釋後的檢測樣品和0.1-0.8mL 0.2％曲通X-100溶液，用水稀釋到5.0-10.0mL，再次混勻，10-30min後，通過觀測樣品溶液的顏色是否變化為棕色來判斷是否含有蘇丹紅；(4)半定量檢測通過與標樣對照樣品溶液的顏色變化或用雷射筆或LED照射得到的散射光強弱，即可粗略確定樣品中含有的蘇丹紅的量，從而實現對蘇丹紅的半定量檢測。
2.根據權利要求1所述的食品中蘇丹紅的檢測方法，其特徵在於還可進一步進行定量檢測，步驟如下A、將1.0-10.0mL 1.0×10-3M硝酸銀溶液、0.1-1.5mL 0.1M氫氧化鈉溶液和0.1-2.0mL 0.4％氨水在試管中充分混合，然後再加入0.01-0.2mL的稀釋後的檢測樣品和0.1-0.8mL 0.2％曲通X-100溶液，用水稀釋到5.0-10.0mL，再次混勻，平行加五組，10-30min後，用F-4500螢光光度儀測定散射強度ΔI，根據線性方程計算得到實際樣品中蘇丹紅的濃度c，取平均值後即得測得值；B、在步驟A的基礎上，再加入1.0×10-5M蘇丹紅I、II、III、或IV溶液，然後再稀釋到5.0-10.0mL混勻，平行加五組，10-30min後，測定散射強度，根據線性方程又計算得到蘇丹紅的總濃度，取平均值後即得總測得值；C、計算五次測定的回收率和相對標準偏差；D、根據檢測結果，計算辣椒油或其它樣品中含有的蘇丹紅的含量，由於用線性方程計算得到的蘇丹紅含量的單位是M，即mol/L，再根據具體檢測時處理實際樣品的用量以及用螢光光度儀檢測時實際樣品稀釋的倍數，計算得到每克實際樣品中含有多少毫克蘇丹紅。
全文摘要
本發明涉及一種食品中蘇丹紅的檢測方法，它通過在硝酸銀、氫氧化鈉和氨水混合溶液中加入經前處理的檢測樣品和曲通X－100溶液，觀測樣品溶液的顏色變化來判斷是否含有蘇丹紅；並通過與標樣對照來進行半定量檢測；進一步採用加標回收法，根據線性方程計算得到實際樣品中蘇丹紅的濃度。本發明的優點是檢測簡便快速，檢測成本大大降低，檢測效果好；前處理只需用DMF進行攪拌萃取和過濾分離，步驟簡單，更容易操作；通過顏色變化即可判斷實際樣品中是否含有蘇丹紅，方便快捷，整個過程更容易實現。
文檔編號G01N21/47GK1975390SQ200610095290
公開日2007年6月6日 申請日期2006年12月13日 優先權日2006年12月13日
發明者黃承志, 武麗萍 申請人:西南大學