抗hpv病毒凝膠敷料及其製備方法
2023-10-06 20:09:59 3
抗hpv病毒凝膠敷料及其製備方法
【專利摘要】本發明公開一種抗HPV病毒凝膠敷料及其製備方法，特別是在治療和預防HPV病毒感染及其相關疾病中的應用。抗HPV病毒凝膠敷料主要包括抗HPV病毒凍乾粉和溶解液；其中抗HPV病毒凍乾粉組分包括茶酸性蛋白AP、異聚麥芽糖、凍幹保護劑、殺/抑菌劑；溶解液組分包括水、磷酸鹽、甘油、薄荷油。本發明製備的抗HPV病毒凝膠敷料，無油膩感，能吸收組織滲出液，不易流出，不妨礙黏膜正常功能，能有效治療生殖器病毒感染，預防宮頸癌和陰莖癌，對由病毒感染引發的宮頸上皮細胞瘤變(CIN)、慢性宮頸炎等疾病具有顯著療效。
【專利說明】抗HPV病毒凝膠敷料及其製備方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及醫藥領域，更具體地說，涉及抗HPV病毒凝膠敷料及其製備方法，以及 在治療和預防生殖器病毒感染，慢性宮頸炎、宮頸癌和陰莖癌等HPV相關疾病中的應用。
【背景技術】
[0002] 在我國，宮頸癌新增發病數佔女性生殖系統惡性腫瘤發病率的73-93%，是發達國 家的6倍，以25歲到45歲的婦女最為常見，個別地區高於全國平均數的10倍。2008年諾 貝爾生理學和醫學獎獲得者哈拉爾德?楚爾?豪森博士發現（Human Papillomavirus，HPV) 是導致子宮頸癌的病因。在美國等發達國家的醫療保險中已明確規定，女性在30歲以後每 年進行一次宮頸塗片細胞學檢查，如發現細胞異常，馬上進行HPV病毒檢測。由於引發宮頸 癌病變的高危型HPV病毒為弱病毒，如能及時發現感染，及時清除，可達到防治宮頸癌的目 的。控制宮頸癌的發生，重在預防，關鍵在早期篩查，而難點是，目前還沒有理想的方法能有 效的將HPV病毒清除。
[0003] HPV是一種嗜上皮性病毒，在人和動物中分布廣泛，有高度的特異性。病毒粒子呈 球形，20面體對稱，直徑45-55nm，是一類無包膜雙鏈小分子環狀DNA病毒，由蛋白衣殼和 DNA核心組成，其中蛋白衣殼由Ll和L2組成，其中Ll蛋白的C端具有一段富含正電荷氨 基酸（R和K)，這段順序即核定位信號，可以和宿主細胞內相應的受體結合而進入核內。L2 蛋白的的N端有一段富含正電荷胺基酸區域。研宄發現（Dasgupta J, Bienkowska-Haba MjOrtega MEjPatel HDj Bodevin Sj Spillmann D，Bishop Bj Sapp Mj Chen XS. Structural basis of oligosaccharide receptor recognition by human papillomavirus. J Biol Chem.2011，28;286(4):2617-24)，帶有大量負電荷的肝素（糖蛋白）可以和攜帶正電荷的 病毒外殼蛋白結合，從而阻止HPV病毒感染。
[0004] 目前婦科疾病的藥物治療主要通過陰道給藥，目前常用陰道給藥製劑的劑型主要 有栓劑、凝膠劑、泡騰片、陰道片、洗劑、膠囊劑、膜劑等，但這些劑型或多或少存在一些缺 陷，影響藥物發揮作用。
[0005] 如①洗液，作用時間短，不易深入腔道深處，難以充分到達病症部位，藥物不易充 分發揮作用，用於治療宮頸糜爛的藥物，不宜製成洗劑。
[0006] ②陰道片劑，普通陰道片劑分布性差，與黏膜接觸面小，不宜滲入皺襞；陰道泡騰 片需要陰道黏液的配合，不適於乾燥性陰道炎患者。同時泡騰片易吸潮崩解，影響儲存。而 且，片劑的輔料主要為一些不溶性成分，排除困難，引起病人的不適。
[0007] ③栓劑，藥物釋放不好，與陰道黏膜接觸面小，難以滲入黏膜皺襞。而且栓劑在溫 度較高時易變形，穩定性不好。
[0008] ④膠囊劑，藥物不易釋放，塗布面較差，受膠囊崩解的影響。
[0009] ⑤陰道膜劑，藥物與黏膜接觸面小、滲透性差，不適於陰道分泌物少的婦女。有時 粘滯的高分子漿狀物會使人產生不適。
[0010] ⑥陰用凝膠劑，藥物塗布面及滲透性較不夠，穩定性不好。
[0011] ⑦噴霧劑，不易達到腔道深處，在陰道給藥中應用較少。噴霧用藥難以均勻分布到 陰道壁，難以充分發揮藥效。治療宮頸糜爛時，噴霧用藥也有難以達到用藥部位的缺點。
[0012] ⑧泡沫氣霧劑，成本較高（因需內壓容器、閥門系統和特殊的生產設備），拋射劑 的致冷效應可引起創面不適與刺激。
[0013] ⑨擠捏液，站位時藥物易流出。
【發明內容】
[0014] 本發明的目的是提供了一種抗HPV病毒凝膠敷料及其製備方法，以及在治療和預 防生殖器病毒感染，慢性宮頸炎、宮頸癌和陰莖癌等HPV相關疾病中的應用。
[0015] 為了實現上述目的，本發明的技術方案為：提供抗HPV病毒凝膠敷料，包括抗HPV 病毒凍乾粉和溶解液；其中所述抗HPV病毒凍乾粉組分包括茶酸性蛋白AP、異聚麥芽糖、殺 /抑菌劑、凍幹保護劑；所述溶解液組分包括水、磷酸鹽、甘油、薄荷油。
[0016] 優選的，所述茶酸性蛋白AP是一類分子量為3-100KD的糖蛋白，等電點PI為 2. 0~5, 0〇
[0017] 優選的，所述茶酸性蛋白AP按照下述方法製備獲得：
[0018] (a)取新鮮茶葉以I :3-10(w/v)料水比研磨勻眾，調PH7-9,10-40°C浸提1-5小 時，過濾離心，取上清液，調PH2-5,離心，取沉澱，冷凍乾燥後得到茶酸性蛋白AP粗品；
[0019] (b)茶酸性蛋白AP粗品復溶後，過CM Sepharose Fast Flow層析柱，去除鹼性蛋 白，收取含酸性蛋白的流穿液，經真空冷凍乾燥製成茶酸性蛋白AP。
[0020] 優選的，所述抗HPV病毒凍乾粉組分包括以下重量百分比的組分：
[0021] 茶酸性蛋白 AP :0· 01-10% ;
[0022] 異聚麥芽糖：1-25%
[0023] 凍幹保護劑：20-90%
[0024] 殺 / 抑菌劑：0.01-1% ;
[0025] 其中所述茶酸性蛋白AP從茶樹（Camellia sinensis)新鮮葉片中提取，優先選擇 海南種植的茶樹（海南五指山新鮮茶葉）；所述凍幹保護劑為多糖；所述殺/抑菌劑為氯己 定。
[0026] 優選的，所述溶解液具體包括以下重量百分比的組分：
[0027] 水：60-100%
[0028] 磷酸鹽：0-2%
[0029] 甘油：0-15%
[0030] 薄荷油：0-8%
[0031] 抗HPV病毒凝膠敷料的製備方法，其中，包括以下步驟：
[0032] (1)茶酸性蛋白AP提取；
[0033] (2)將步驟（1)提取的茶酸性蛋白AP在溶劑介質中溶解，加入異聚麥芽糖、凍幹保 護劑和殺/抑菌劑的一種或幾種，均勻攪拌後，低溫真空乾燥，製得抗HPV病毒凍乾粉；
[0034] (3)將步驟（2)製得的抗HPV病毒凍乾粉，根據等量遞增原則，添加生物凝膠、增稠 劑、助流劑，混合均勻，製備成凍乾粉散劑，分裝後包裝；
[0035] (4)將水、磷酸鹽、甘油、薄荷油的一種或幾種按比例配成溶解液，分裝後包裝；
[0036] (5)使用前將步驟（3)得到的散劑和步驟（4)製備的溶解液混合。
[0037] 本發明中，所述的抗HPV病毒凍乾粉疏鬆多孔，可直接配合噴粉器使用，在治療和 預防生殖器病毒感染，慢性宮頸炎、宮頸癌和陰莖癌等HPV相關疾病中的應用。
[0038] 本發明中，所述的抗HPV病毒凍乾粉散劑，可直接配合噴粉器使用，在治療和預防 生殖器病毒感染，慢性宮頸炎、宮頸癌和陰莖癌等HPV相關疾病中的應用。
[0039] 本發明中，所述的抗HPV病毒凝膠敷料在治療和預防生殖器病毒感染，慢性宮頸 炎、宮頸癌和陰莖癌中應用。
[0040] HPV病感染毒宿主特異，雙受體，不進入血液。HPV感染特異宿主宮頸鱗狀上皮基 底細胞有2個必要條件：1、游離態HPV病毒粒子，2、游離態的HPV病毒粒子通過由於宮頸上 皮黏膜的微創而導致的通往宮頸上皮基底細胞層，先與基底細胞膜的第一受體結合，然後 通過病毒外殼結構的改變，才能與基底細胞吸附，進入細胞，進行病毒複製。本發明的茶酸 性蛋白AP等電點為2. 0-5.0,在抗HPV病毒凝膠敷料中帶有大量的負電荷，可以和攜帶正電 荷的病毒外殼蛋白結合，阻斷游離態HPV病毒粒子通過鱗狀上皮微創而導致的間隙進入基 底細胞層，從而阻斷和清除HPV病毒感染。
[0041] 本發明的抗HPV病毒凝膠敷料，具有較好的貯存穩定性，在常溫下更穩定，更易於 保存。給藥後，可深入腔道深處並達到宮頸等病症部位，遇水後溶解迅速並黏附在黏膜上， 與黏膜接觸面大，藥物作用直接，起效快。無油膩感，能吸收組織滲出液，不易流出，不妨礙 黏膜正常功能。同時，本發明的凍乾粉在製造工藝過程中，不會對熱敏性物質（如蛋白）、成 分造成損害，是一種療效確切、使用方便、穩定性好的新型陰道給藥製劑。該製劑能有效治 療HPV病毒感染，預防宮頸癌和陰莖癌，對由HPV病毒感染引發的宮頸上皮細胞瘤變（CIN)、 慢性宮頸炎等疾病具有顯著療效，具有良好的臨床應用前景。
【具體實施方式】
[0042] 實施例1
[0043] 1、茶酸性蛋白AP的製備
[0044] 取海南五指山新鮮茶葉以I :5(w/v)料水比研磨勻眾，調PH7_9,40°C浸提3小時， 過濾離心，取上清液，調PH2-5,離心，取沉澱，冷凍乾燥後得到茶酸性蛋白AP粗品。茶酸性 蛋白AP粗品復溶後，過CM Sepharose Fast Flow層析柱，去除鹼性蛋白，收取含酸性蛋白 的流穿液，經真空冷凍乾燥製成茶酸性蛋白AP。
[0045] 2、抗HPV病毒凍乾粉的製備：
[0046] 加入茶酸性蛋白AP 0. 01份、異聚麥芽糖10份、多糖89. 94份，氯己定0. 05份，加 水溶解後，均勻攪拌，低溫真空乾燥製得。
[0047] 3、溶解液的製備：
[0048] 加入甘油5份，薄荷油5份、水90份，所有原料混合均勻製成。
[0049] 4、抗HPV病毒凝膠敷料的製備方法，包括以下步驟：
[0050] (1)茶酸性蛋白AP提取；
[0051] (2)將步驟（1)提取的茶酸性蛋白AP在溶劑介質中溶解，加入異聚麥芽糖、多糖和 氯己定，均勻攪拌後，低溫真空乾燥，製得抗HPV病毒凍乾粉；
[0052] (3)將步驟（2)製得的抗HPV病毒凍乾粉，根據等量遞增原則，添加生物凝膠、增稠 劑、助流劑，混合均勻，製備成凍乾粉散劑，分裝後包裝；
[0053] (4)將水、甘油、薄荷油按比例配成溶解液，分裝後包裝；
[0054] (5)使用前將步驟（3)得到的散劑和步驟（4)製備的溶解液混合。
[0055] 實施例2
[0056] 1、茶酸性蛋白AP的製備
[0057] 取海南五指山新鮮茶葉以I :8 (w/v)料水比研磨勻漿，調PH7-9, 25°C浸提3小時， 過濾離心，取上清液，調PH2-5,離心，取沉澱，冷凍乾燥後得到茶酸性蛋白AP粗品。茶酸性 蛋白AP粗品復溶後，過CM Sepharose Fast Flow層析柱，去除鹼性蛋白，收取含酸性蛋白 的流穿液，經真空冷凍乾燥製成茶酸性蛋白AP。
[0058] 2、抗HPV病毒凍乾粉的製備：
[0059] 加入茶酸性蛋白AP 1份、異聚麥芽糖15份、多糖83. 99份，氯己定0. 01份，加水 溶解後，均勻攪拌，低溫真空乾燥製得。
[0060] 3、溶解液的製備：
[0061] 加入磷酸二氫鉀0. 03份，磷酸氫二鉀0. 18份，水99. 79份，所有原料混合均勻制 成。
[0062] 4、抗HPV病毒凝膠敷料的製備方法，包括以下步驟：
[0063] (1)茶酸性蛋白AP提取；
[0064] (2)將步驟⑴提取的茶酸性蛋白AP在溶劑介質中溶解，加入異聚麥芽糖、多糖和 氯己定，均勻攪拌後，低溫真空乾燥，製得抗HPV病毒凍乾粉；
[0065] (3)將步驟⑵製得的抗HPV病毒凍乾粉，根據等量遞增原則，添加生物凝膠、增稠 劑、助流劑，混合均勻，製備成凍乾粉散劑，分裝後包裝；
[0066] (4)將水、磷酸二氫鉀，磷酸氫二鉀按比例配成溶解液，分裝後包裝；
[0067] (5)使用前將步驟（3)得到的散劑和步驟（4)製備的溶解液混合。
[0068] 實施例3
[0069] 1、茶酸性蛋白AP的製備
[0070] 取海南五指山新鮮茶葉以I :10(w/v)料水比研磨勻漿，調PH7-9，10°C浸提3小 時，過濾離心，取上清液，調PH2-5,離心，取沉澱，冷凍乾燥後得到茶酸性蛋白AP粗品。茶酸 性蛋白AP粗品復溶後，過CM Sepharose Fast Flow層析柱，去除鹼性蛋白，收取含酸性蛋 白的流穿液，經真空冷凍乾燥製成茶酸性蛋白AP。
[0071] 2、抗HPV病毒凍乾粉的製備：
[0072] 加入茶酸性蛋白AP 5份、異聚麥芽糖25份、多糖69. 98份，氯己定0. 02份，加水 溶解後，均勻攪拌，低溫真空乾燥製得。
[0073] 3、溶解液的製備：
[0074] 加入磷酸二氫鉀0. 05份，甘油3份，水96. 95份，所有原料混合均勻製成。
[0075] 4、抗HPV病毒凝膠敷料的製備方法，包括以下步驟：
[0076] (1)茶酸性蛋白AP提取；
[0077] (2)將步驟⑴提取的茶酸性蛋白AP在溶劑介質中溶解，加入異聚麥芽糖、多糖和 氯己定，均勻攪拌後，低溫真空乾燥，製得抗HPV病毒凍乾粉；
[0078] (3)將步驟（2)製得的抗HPV病毒凍乾粉，根據等量遞增原則，添加生物凝膠、增稠 劑、助流劑，混合均勻，製備成凍乾粉散劑，分裝後包裝；
[0079] (4)將水、磷酸二氫鉀，甘油按比例配成溶解液，分裝後包裝；
[0080] (5)使用前將步驟（3)得到的散劑和步驟（4)製備的溶解液混合。
[0081 ] 上述三個實施例製備的抗HPV病毒凝膠敷料的批號為1308001、1308002、 1308003〇
[0082] 1、抗HPV病毒凍乾粉穩定性考察
[0083] 採用考馬斯亮藍法檢測蛋白含量。將抗HPV病毒凍乾粉樣品（1308001、1308002、 1308003)室溫留樣考察24個月，在第3、6、9、12、18、24個月檢測，考察結果如下表1
[0084] 表1抗HPV病毒凍乾粉樣品室溫留樣考察結果
[0085]
【權利要求】
1. 一種抗HPV病毒凝膠敷料，其特徵在於：包括抗HPV病毒凍乾粉和溶解液；其中所述 抗HPV病毒凍乾粉組分包括茶酸性蛋白AP、異聚麥芽糖、凍幹保護劑、殺/抑菌劑；所述溶 解液組分包括水、磷酸鹽、甘油、薄荷油。
2. 如權利要求1所述的抗HPV病毒凝膠敷料，其特徵在於：所述茶酸性蛋白AP是一類 分子量為3-100KD的糖蛋白，等電點PI為2. 0-5. 0。
3. 如權利要求2所述的抗HPV病毒凝膠敷料，其特徵在於：所述茶酸性蛋白AP的製備 方法包括以下步驟： (a) 取新鮮茶葉以1 :3-10w/v料水比研磨勻漿，調PH7-9,10-40°C浸提1-5小時，過濾 離心；取上清液，調PH2-5,離心，取沉澱；冷凍乾燥後得到茶酸性蛋白AP粗品； (b) 茶酸性蛋白AP粗品復溶後，過CM Sepharose Fast Flow層析柱，去除鹼性蛋白，收 取含酸性蛋白的流穿液，經真空冷凍乾燥製成茶酸性蛋白AP。
4. 如權利要求1所述的抗HPV病毒凝膠敷料，其特徵在於：所述抗HPV病毒凍乾粉組 分具體包括： 茶酸性蛋白AP :0.01-10% 異聚麥芽糖1-25% 凍幹保護劑20-90% 殺/抑菌劑0.01-1 % ; 其中所述茶酸性蛋白AP從茶樹（Camellia sinensis)新鮮葉片中提取，優先選擇海南 種植的茶樹；所述凍幹保護劑為多糖；所述殺/抑菌劑為氯己定。
5. 如權利要求1所述的抗HPV病毒凝膠敷料，其特徵在於：所述溶解液組分具體包括： 水：60-100% 磷酸鹽：0-2% 甘油：0-15% 薄荷油：〇-8%。
6. 如權利要求1所述的抗HPV病毒凝膠敷料的製備方法，其特徵在於，具體包括以下步 驟： (1) 茶酸性蛋白AP提取； (2) 將步驟（1)提取的茶酸性蛋白AP在溶劑介質中溶解，加入異聚麥芽糖、凍幹保護劑 和殺/抑菌劑的一種或幾種，均勻攪拌後，低溫真空乾燥，製得抗HPV病毒凍乾粉； (3) 將步驟（2)製得的抗HPV病毒凍乾粉，根據等量遞增原則，添加生物凝膠、增稠劑、 助流劑，混合均勻，製備成凍乾粉散劑，分裝後包裝； ⑷將水、磷酸鹽、甘油、薄荷油的一種或幾種按比例配成溶解液，分裝後包裝； (5)使用前將步驟（3)得到的凍乾粉散劑和步驟（4)製備的溶解液混合。
7. 如權利要求1所述的抗HPV病毒凝膠敷料，其特徵在於：所述的抗HPV病毒凍乾粉 疏鬆多孔，可直接配合噴粉器使用，在治療和預防生殖器病毒感染，慢性宮頸炎、宮頸癌和 陰莖癌HPV疾病中的應用。
8. 如權利要求6所述的抗HPV病毒凝膠敷料，其特徵在於：所述凍乾粉散劑，可直接配 合噴粉器使用，在治療和預防生殖器病毒感染，慢性宮頸炎、宮頸癌和陰莖癌HPV疾病中的 應用。
9. 一種如權利要求6所述製備的抗HPV病毒凝膠敷料在治療和預防生殖器病毒感染， 慢性宮頸炎、宮頸癌和陰莖癌HPV疾病中的應用。
【文檔編號】A61P31/20GK104491838SQ201410798607
【公開日】2015年4月8日 申請日期:2014年12月19日 優先權日:2014年12月19日
【發明者】張春發, 鄧柳紅, 高海波, 唐權, 黃超, 陳一萍, 王勝, 王桂玉 申請人:海南森瑞譜生命科學藥業股份有限公司