一種中華鱉胚胎期雄性性別誘導劑及誘導方法
2023-10-06 19:58:44 2
專利名稱：一種中華鱉胚胎期雄性性別誘導劑及誘導方法
技術領域：
本發明涉及到水產品養殖領域，具體指一種中華鱉胚胎期雄性性別誘導劑及誘導方法。
背景技術：
鱉是我國傳統高檔滋補水產品，也是百姓喜愛的名貴水產品和水產養殖的重要品種，在我國養殖業中有舉足輕重的作用。在長期的鱉養殖實踐中發現，雌、雄個體間存在著很大的生長差異。雄性中華鱉的生長明顯快於雌鱉，據試驗，中華鱉養殖至平均體重300g的群體，雄鱉比雌鱉生長快12. 7% 17. 0%，隨著養殖期的延長，雌、雄鱉的生長差異還會進一步增大，雄性中華鱉肌肉中脂肪少，裙邊寬厚，內臟小，具有更高的營養價值和經濟價值，並且消費者喜食雄鱉，雄鱉不但暢銷，而且同比單價雄性比雌性高25%。目前全國中華鱉年
產量約在22 25萬噸，其中浙江省中華鱉養殖年產量達10 12萬噸，約佔全國總產量的一半，產值達50億元，是浙江省第一大水產養殖產業。因此，如果能人為控制中華鱉的雄鱉苗比例，將大大提高中華鱉養殖的產量、產值和效益。作為產業可持續發展的重要技術，業內也對中華鱉性別控制開展積極的技術探索。公告號為CN102487883A的中國發明專利申請公開了《一種中華鱉性別控制方法》，其是在23°C 35°C的孵化溫度下，向中華鱉卵的動物極每天滴加20 30微克的甲基睪丸素，直至幼鱉出殼。此技術存在以下兩個缺陷①雖然甲基睪丸素能誘導中華鱉外部性徵，但是由於雌性本體中存在的芳香化酶能將睪丸素轉變成雌激素，因此單獨的甲基睪丸素處理時很難達到徹底的性逆轉的效果，無法使全部個體雄性化。②此法需每天滴加藥物，操作繁瑣，且高劑量的甲基睪丸素極易導致胚胎發育以及日後性腺發育的不正常。
發明內容
本發明所要解決的技術問題是針對現有技術的現狀提供一種性別控制效果好且不會影響中華鱉性腺發育的中華鱉胚胎期雄性性別誘導劑。本發明所要解決的另一個技術問題是提供一種性別控制效果好且不會影響中華鱉性腺發育的中華鱉胚胎期雄性性別誘導方法。本發明解決上述技術問題所採用的技術方案為該中華鱉胚胎期雄性性別誘導齊U，其特徵在於包括將芳香化酶抑制劑和輔助劑溶於純度為92-98%的酒精中，得到芳香化酶抑制劑濃度為5(Γ 50μ g/μ1、輔助劑濃度為5(Γ 50μ g/μ I誘導劑；其中，所述輔助劑選自睪酮，甲睪酮或丙酸睪酮。為了儘量避免誘導劑的殘留，較好的，所述芳香化酶抑制劑的濃度為50μ g/μ 1，所述輔助劑的濃度為50 μ g/ μ I。該濃度的誘導劑其性別轉換率可達到95%或以上。使用上述中華鱉胚胎期雄性性別誘導劑進行中華鱉胚胎期雄性性別誘導方法，其特徵在於包括下述步驟①挑選受精鱉卵，在溫度為31°C ±3°C、相對溼度為75 85%的孵化條件下孵化至第15期，通過照蛋器確定胚胎的位置，然後在正對胚胎的卵殼上施加所述的誘導劑 5 10 μ I ；
②按相同的條件繼續孵化至第16期，採用同樣方法和同樣劑量在正對胚胎的卵殼上施加所述的誘導劑5 10μ I ；
③在相同的條件繼續孵化至稚鱉出殼。
上述施加方法可以為注射、噴灑或塗抹。
上述孵化過程可以使用現有技術中的任意一種孵化器，較好的，可以使用下述孵化器，在該孵化器中進行完全裸孵，可獲得較好的孵化率，並可自動控制，節省人力。該孵化器包括
孵化箱，具有箱體和箱門，
孵化板，設置在所述箱體內，有多塊，這些孵化板在箱體的高度方向上間隔設置；
收集盒，設置在所述箱體內，用於收集剛孵化出的稚鱉；
其特徵在於該孵化器還包括
孵化箱，具有箱體和箱門，
孵化板，設置在所述箱體內，有多塊，這些孵化板在箱體的高度方向上間隔設置；
收集盒，設置在所述箱體內，用於收集剛孵化出的稚鱉；
其特徵在於該孵化器還包括
溫度傳感器，設置在所述箱體內，用於實時檢測箱體內的溫度；溫度傳感器的輸出端連接控制模塊；
溼度傳感器，設置在所述箱體內，用於實時檢測箱體內的溼度；溼度傳感器的輸出立而連接控制|吳塊；
溫控裝置，連接控制模塊的輸出端，用於對箱體的內環境進行加熱升溫或製冷降溫，以提供鱉卵孵化所需要的溫度；
加溼管，設置在所述箱體內，連通超聲波加溼裝置的排汽管道，用於向所述箱體內提供霧化顆粒水滴，以提供鱉卵孵化所需要的溼度；所述超聲波加溼裝置連接所述控制模塊的輸出端；
通風裝置，包括設置在所述箱體上部和下部的殼壁上的上通氣孔和下通氣孔以及設置在所述箱體內的風扇，在所述風扇的吹動作用下，使所述箱體內的空氣與所述箱體外的空氣形成循環流動；
各所述孵化板上間隔設有多個用於限位待孵化的定位孔，並且各定位孔的周圍間隔設有多個透氣孔。
所述孵化板採用塑料或不鏽鋼製備，所述定位孔為直徑為12 18mm的圓孔，所述透氣孔的直徑為5 8mm,並且相鄰的定位孔與透氣孔之間的間距為5 10mm。
各所述透氣孔與各所述定位孔交錯排列。
相對於所述透氣孔，各所述定位孔位於正方形的中心位置，與該定位孔相鄰的透氣孔則位於該正方形的四個角的位置上；
同樣，相對於所述的定位孔，各所述透氣孔位於正方形的中心位置，而該透氣孔所相鄰的定位孔則位於該正方形的四個角的位置上。
所述加溼管為不鏽鋼管或PVC塑料管，所述加溼管的管壁上間隔設有多個透氣微孔，並且各所述微孔的直徑為I 3mm。與現有技術相比，本發明採用獨特的誘導劑對中華鱉在胚胎期進行雄性性別的誘導和控制，通過性腺切片組織學染色也證實了本發明能夠徹底將其雄性化的效果，避免了現有技術中長時間、高劑量地使用甲基睪丸素極易導致的稚鱉性腺發育的不正常，出現生殖器外翻等現象；本發明所提供的誘導方法選擇在胚胎發育中性別決定關鍵時間點僅噴灑2次誘導劑，即可使雄性誘導率在95%以上，同時保證了中華鱉性腺的正常發育以及低藥物殘留；操作簡便，成本低，經濟效益顯著，是目前中華鱉養殖中值得推廣的性別控制技術。而優選方案中所使用的孵化器，採用超聲波加溼器提供鱉卵孵化所需要的溼度，超聲波加溼·器能夠產生粒徑為I 3微米的霧化狀超微粒子，水霧通過加溼管道均勻擴散到箱體內，極易使空氣吸收而溼潤，並伴生豐富的負氧離子，能同時清新箱內空氣，有利於蛋內胚胎發育，能持續穩定供溼與控溼，溼度精度可控制在土 1%，且不會形成水滴滴落在鱉卵上，既克服了傳統噴淋加溼或紗布加溼、水蒸氣加溼等保溼方法容易在鱉卵表面形成水珠導致鱉卵發黴、滋生細菌的缺點，又克服了加溼不均勻、溼度控制不穩定、介質流通不暢的缺點，孵化率高，稚鱉的質量好；並且該孵化器單位體積孵化量大，每立方米可孵化1200(Γ15(ΚΚ)枚鱉卵；箱體內環境可自動控制，孵化期間無需人工管理，可全自動孵化，節約了人力物力，且孵化清潔、操作安全、環保節能，省時省力；克服了傳統孵化方法利用介質吸溼、需人工間隙式噴水加溼的技術缺陷，真正實現了中華鱉的裸孵，且無需任何介質輔助的全自動控制的孵化方法，孵化率高。
圖1為本發明實施例中孵化器的立體結構示意圖；圖2為本發明實施例中孵化板的立體結構示意圖；圖3為本發明實施例中收集盒的立體結構示意圖；圖4中的A是雌性出殼稚鱉的性腺切片組織學H&E染色照片；圖4中的B為雄性出殼稚鱉的性腺切片組織學H&E染色照片；圖4中的C為雌性出殼稚鱉的性腺切片Sox9免疫組織化學染色示意圖；圖4中的D為雄性出殼稚鱉的性腺切片Sox9免疫組織化學染色示意圖。
具體實施例方式以下結合附圖實施例對本發明作進一步詳細描述。如圖1至圖3所示，下述實施例中所使用的孵化器包括孵化箱I，為前開門的櫃式結構，由箱體11和箱門12組成。孵化板2,有多塊,相互平行地水平地設置在箱體11內。箱體的側壁上設有擱板13，各孵化板2可拆卸地擱置在對應的擱板13上。各所述孵化板上均布有多個用於限位待孵化的定位孔21，並且各定位孔的周圍間隔設有多個透氣孔22。本實施例中的孵化板採用塑料或不鏽鋼製備，透氣孔與各所述定位孔交錯排列，定位孔21與透氣孔22的位置關係為以定位孔所在位置為正方形的中心位置時，其相鄰的透氣孔則位於該正方形的四個角的位置上；以透氣孔所在位置為正方形的中心位置時，其相鄰的定位孔則位於該正方形的四個角的位置上。各定位孔的直徑為15_，透氣孔的直徑為6_，相鄰定位孔與透氣孔之間的間距為8mm。
收集盒3，用於收集剛孵化出的稚鱉。根據孵化量的多少，可以在箱體的底面上設置一個收集盒，也可以在每塊孵化板或幾塊孵化板設置一個收集盒。本實施例中收集盒通過每塊孵化板或幾塊靠近箱門12的一側均可拆卸地設置有收集盒3。
溫度傳感器4，設置在箱體11內，用於實時檢測箱體內的溫度；溫度傳感器的輸出端連接控制模塊(圖中未示出)；
溼度傳感器5，設置在箱體11內，用於實時檢測箱體內的溼度；溼度傳感器的輸出端連接控制模塊；
加熱裝置6，設置在箱體的後壁內，用於對箱體的內環境進行加熱，以提供鱉卵孵化所需要的溫度；加熱裝置6連接控制模塊的輸出端，根據控制模塊的指令工作。
加溼管7，設置在箱體11內，連通超聲波加溼裝置8的排汽管道81，用於向箱體內提供霧化水汽，以提供鱉卵孵化所需要的溼度。本實施例中加溼管7採用不鏽鋼管或PVC 塑料管制備，管徑可在20 40mm中選擇，沿箱體的高度方向豎直設置，所述加溼管的管壁上間隔設有多個透氣微孔71，各所述微孔的直徑為2mm，保證相鄰孵化板之間的空隙中至少有廣2個透氣微孔。
超聲波加溼裝置8連接控制模塊的輸出端，由控制模塊控制其工作。本實施例中採用功率為30W、加溼量為300ml/h的市售超聲波加溼器。
通風裝置，包括設置在所述箱體頂部的風扇9和設置在箱體頂面和底面上的上、 下通氣孔(圖中未示出)，通氣孔還可以設置在箱體的後壁上。本實施例採用功率為20W的風扇。通過風扇的吹動，使外界空氣從通氣孔內進入箱體內，經由隔板上的透氣孔循環至下通氣孔送出箱體，以實現空氣在箱體內的循環以及空氣在箱體內和箱體外的循環，從而將箱體內的代謝氣體排出，將外界的新鮮空氣引入，以保證鱉卵孵化所需要的氧氣。
實施例1
1、誘導劑配製
將芳香化酶抑制劑和輔助劑溶於酒精中，混合均勻得到不同濃度的誘導劑。各誘導劑的具體情況如表I所示。
表I
權利要求
1.一種中華鱉胚胎期雄性性別誘導劑，其特徵在於包括將芳香化酶抑制劑和輔助劑溶於純度為92-98%的酒精中，得到芳香化酶抑制劑濃度為5(Γ 50μ g/μ1、輔助劑濃度為 50^150 μ g/μ I 誘導劑;所述輔助劑選自睪酮，甲睪酮或丙酸睪酮。
2.根據權利要求1所述的中華鱉胚胎期雄性性別誘導劑，其特徵在於所述芳香化酶抑制劑的濃度為50 μ g/μ 1，所述輔助劑的濃度為50 μ g/μ I。
3.使用上述中華鱉胚胎期雄性性別誘導劑進行中華鱉胚胎期雄性性別誘導方法，其特徵在於包括下述步驟①挑選受精鱉卵，在溫度為31°C ±3°C、相對溼度為75 85%的孵化條件下孵化至第15 期時，通過照蛋器確定胚胎的位置，然後在正對胚胎的卵殼上施加所述的誘導劑5 10μ I ；②按相同的條件繼續孵化至第16期時，採用同樣方法和同樣劑量在正對胚胎的卵殼上施加所述的誘導劑5 10μ1;③在相同的條件繼續孵化至稚鱉出殼。
4.根據權利要求3所述的中華鱉胚胎期雄性性別誘導劑，其特徵在於所述施加為注射、噴灑或塗抹。
5.根據權利要求3所述的中華鱉胚胎期雄性性別誘導方法，其特徵在於所述孵化是在孵化器中進行的，所述的孵化器包括孵化箱，具有箱體和箱門，孵化板，設置在所述箱體內，有多塊，這些孵化板在箱體的高度方向上間隔設置；收集盒，設置在所述箱體內，用於收集剛孵化出的稚鱉；其特徵在於該孵化器還包括溫度傳感器，設置在所述箱體內，用於實時檢測箱體內的溫度；溫度傳感器的輸出端連接控制|吳塊；溼度傳感器，設置在所述箱體內，用於實時檢測箱體內的溼度；溼度傳感器的輸出端連接控制|吳塊；溫控裝置，連接控制模塊的輸出端，用於對箱體的內環境進行加熱升溫或製冷降溫，以提供鱉卵孵化所需要的溫度；加溼管，設置在所述箱體內，連通超聲波加溼裝置的排汽管道，用於向所述箱體內提供霧化顆粒水滴，以提供鱉卵孵化所需要的溼度；所述超聲波加溼裝置連接所述控制模塊的輸出端；通風裝置，包括設置在所述箱體上部和下部的殼壁上的上通氣孔和下通氣孔以及設置在所述箱體內的風扇，在所述風扇的吹動作用下，使所述箱體內的空氣與所述箱體外的空氣形成循環流動；各所述孵化板上間隔設有多個用於限位待孵化鱉卵的定位孔，並且各定位孔的周圍間隔設有多個透氣孔。
6.根據權利要求5所述的中華鱉胚胎期雄性性別誘導方法，其特徵在於所述孵化板採用塑料或不鏽鋼製備，所述定位孔為直徑為12 18mm的圓孔，所述透氣孔的直徑為5 8mm,並且相鄰的定位孔與透氣孔之間的間距為5 10mm。
7.根據權利要求6所述的中華鱉胚胎期雄性性別誘導方法，其特徵在於各所述透氣孔與各所述定位孔交錯排列。
8.根據權利要求7所述的中華鱉胚胎期雄性性別誘導方法，其特徵在於相對於所述透氣孔，各所述定位孔位於正方形的中心位置，與該定位孔相鄰的透氣孔則位於該正方形的四個角的位置上；同樣，相對於所述的定位孔，各所述透氣孔位於正方形的中心位置，而該透氣孔所相鄰的定位孔則位於該正方形的四個角的位置上。
9.根據權利要求5至8任一權利要求所述的中華鱉胚胎期雄性性別誘導方法，其特徵在於所述加溼管為不鏽鋼管或PVC塑料管，所述加溼管的管壁上間隔設有多個透氣微孔， 並且各所述微孔的直徑為I 3mm。
全文摘要
本發明涉及到一種中華鱉胚胎期雄性性別誘導劑及誘導方法，其特徵在於包括將芳香化酶抑制劑和輔助劑溶於純度為92-98%的酒精中，得到芳香化酶抑制劑濃度為50~150μg/μl、輔助劑濃度為50~150μg/μl誘導劑；所述輔助劑選自睪酮，甲睪酮或丙酸睪酮。本發明所提供的誘導方法選擇在胚胎發育中性別決定關鍵時間點僅噴灑兩次誘導劑，即可使雄性誘導率在95%以上，同時保證了中華鱉性腺的正常發育以及低藥物殘留；操作簡便，成本低，經濟效益顯著，是目前中華鱉養殖中值得推廣的性別控制技術。
文檔編號A61P15/00GK102988986SQ20121043209
公開日2013年3月27日 申請日期2012年11月2日 優先權日2012年11月2日
發明者錢國英, 葛楚天, 王莉, 汪財生, 王偉, 李彩燕 申請人:浙江萬裡學院