具有降低血清葡萄糖和降低血清脂質活性的α－苯硫基羧酸和α－苯氧基羧酸的用途的製作方法

2023-10-23 21:56:32 2

專利名稱：具有降低血清葡萄糖和降低血清脂質活性的α－苯硫基羧酸和α－苯氧基羧酸的用途的製作方法
技術領域：
本發明涉及α-苯硫基羧酸和α-苯氧基羧酸的衍生物用於製備具有降低血清葡萄糖和/或降低血清脂質活性的通式(I)藥物的用途。
背景技術：
糖尿病是一種全世界分布廣泛的疾病並且與嚴重的臨床併發症有關，其中包括微血管併發症如糖尿病性視網膜病、糖尿病性神經病和糖尿病性腎病，和大血管併發症如動脈粥樣硬化、外周血管病、心肌梗塞和中風。
表徵糖尿病的胰島素抵抗還涉及症候群X、多囊性卵巢症候群、肥胖、高血壓、高脂血症和高膽固醇血症(J.Am Osteopath Assoc 2000Oct；100(10)621-34；JAMA 2002 Nov 27；288(20)2579-88)。
已知高脂血症、高膽固醇血症和高血壓在冠心病(CHD)發作方面起決定性作用。
蛋白糖基化的提高涉及上述糖尿病併發症也是已知地(Diabetologia 2001 Feb；44(2)129-46)。
所述併發症對個體的健康和安寧構成嚴重威脅。
糖尿病的不同臨床形式是已知的，最普遍的是2型和1型糖尿病。2型糖尿病的特徵在於對胰島素作用的敏感性降低(胰島素抵抗)並且為了補償這種缺陷導致體內胰島素水平增加及隨後葡萄糖水平增加。許多報導已證實除2型糖尿病本身外，胰島素抵抗還牽涉多種疾病如血脂異常、肥胖、動脈高血壓、脂肪肝和糖尿病本身的某些大血管和微血管表現。胰島素抵抗和肥胖、高血壓和血脂異常合稱為症候群X。
為治療2型糖尿病，許多藥物如雙胍類和磺醯脲類藥物已上市一段時間。最著名的雙胍類藥物是二甲雙胍，但它的作用機制仍不清楚並且它存在副作用如胃腸功能紊亂和在腎臟、心臟、肝臟和肺功能不全等的情況下發生酸中毒的危險。磺醯脲類藥物促進β-細胞分泌胰島素，並且可能存在低血糖發作的副作用。此外，所有使用磺醯脲類藥物或二甲雙胍的單一療法長期使用均註定失敗(UKPDS研究)。
最近引進市場的藥物是噻唑烷二酮類，即胰島素敏化的抗糖尿病藥劑如曲格列酮(J.Med.Chem.，1989，32，421-428)，吡格列酮(Arzneim，Forsch./Drug Res.，1990，40(1)，37-42)和羅格列酮(Bioorg.Med.Chem.Lett.，1994，4，1181-1184)，它們能夠降低糖尿病性高血糖和胰島素水平。使用曲格列酮已確認的並且擔心屬於此類的其他化合物也存在的副作用是肝臟毒性(其已經導致曲格列酮從美國市場撤出)、LDL-膽固醇增加、體重增加和水腫。
這些化合物是對過氧化物酶體增殖物激活性受體γ(PPARγ)具有高親和性的合成配體(J.Biol.Chem.，1995，270，12953-12956)。
過氧化物酶體增殖物激活性受體(PPARs)是屬於核受體超家族的受體，其功能是控制涉及碳水化合物和脂質代謝的基因的表達(J.Med.Chem.，2000，43，527-550)。PPARs的各種亞型已確認PPARγ、PPARα和PPARβ(也稱為δ)。γ同種型(PPARγ)涉及調節脂肪細胞的分化和能量穩態，而α同種型(PPARα)控制脂肪酸氧化，導致調節血漿中的脂質水平。值得注意的是，在用PPARγ激動劑如羅格列酮治療的齧齒動物中獲得的脂質水平降低在人類受治療者中很難發現，而由貝特類引起的齧齒動物脂質水平降低則在人類中被證實。在旨在確定可能具有抗糖尿病作用的新分子的結構-活性關係研究中，已證明在PPARγ受體活化和降低血清葡萄糖活性間存在對應性(J.Med.，Chem.，1996，39，665-668；J.Med.Chem.，1998，41，5020-5036；5037-5054；5055-5069)。胰島素敏化作用似乎與激活的PPARγ受體調節的脂肪酸募集作用有關，據認為這通過改善血糖水平並降低胰島素水平而導致組織的胰島素抵抗改善(Diabetes，1998，47，507-514)。
近年來具有混合特徵的分子，即PPARγ和PPARα的配體已出現(KRP297，Diabetes，1998，47，1841-1847；DRF 2725，Diabetes，2001，50，suppl.2，A108；AZ 242，Diabetes，2001，50，suppl.2，A121-A122；WO01/16120)。在此情況下我們應看看最近公開的Smithkline Beecham專利(2002年9月6日公開的WO 02/067912)，其提到一類被定義為「PPAR全-激動劑」的新化合物，即能夠激活所有三種PPAR同種型，從而使PPARγ激活的有害副作用最小化的激動劑。特別是，這類新的抗糖尿病藥劑，雖然維持PPARγ激活的典型特徵，但被認為導致體重增加較少和水腫較輕。這些化合物可能施加對糖尿病的良好控制，表現出具有降低血清葡萄糖和血清脂質的作用，而較少噻唑烷二酮類中第一系列化合物典型的副作用，所述噻唑烷二酮類中的第一系列化合物僅為PPARγ受體的配體。專利WO01/16120和WO02/067912中要求保護的結構具有共同特徵，即它們具有貝特樣部分。
但並非科學界全都同意上面描述的內容。事實上，近來對新一代化合物，無論是噻唑烷二酮衍生物還是其它化合物的研究(MC555，J.Biol.Chem.，1998，vol.273(49)，32679-32684；NC2100 Diabetes，2000，49，759-767，YM440，Metabolism，2000，49，411-417)，在基因反式激活試驗、肌肉組織的體外葡萄糖攝取實驗和PPARγ受體表達缺陷的轉基因動物體內實驗方面，已提出在PPARγ受體激活和這些化合物降低血清葡萄糖和血清脂質的活性間可能無直接關係(Toxicology Letters，2001，120，9-19)。
通過這一點的證明，很多研究者選擇使用糖尿病動物(db/db小鼠，ob/ob小鼠)體內篩選以識別不必是良好PPAR配體的可能的胰島素敏化劑。根據這些實驗，選擇了許多具有有希望的抗糖尿病活性的化合物，且它們仍然處於動物模型的研究過程中(DRF 2189，J.Med.Chem.，1998，41，1619-1630；JTT-501，J.Med.Chem.，1998，41，1927-1933)。
科學界現在似乎轉向尋找具有不同作用機制的新化合物，所述新化合物對胰島素敏感性和葡萄糖體內穩態具有相似或更好的作用，而無毒性作用(J.Med.Chem.，2001，44，2601-2611)且它們所具有的降低血清脂質的活性要優於目前使用的舊的和新的抗糖尿病藥劑。
高脂血症是糖尿病的一個嚴重方面，與常常存在的高血壓一起構成動脈粥樣硬化和心血管病的危險因素，後者是導致糖尿病患者死亡的首要原因。
降低血液中脂質水平的需要常常使用貝特類藥物達到，其儘管在胰島素抵抗方面獲得陽性結果，但從未被證實作為降低血清葡萄糖的藥劑是成功的。
發明概述
現已發現下面描述的式(I)化合物作為降低血清葡萄糖和/或血清脂質的藥劑是有效的，特別是能夠提高HDL-膽固醇水平。
式(I)化合物具有較低毒性且因此用於治療高血糖症和/或高脂血症並提高HDL-膽固醇水平。
優選的應用是預防和治療糖尿病，特別是2型糖尿病、糖尿病的微血管併發症如糖尿病性視網膜病、糖尿病性神經病和糖尿病性腎病、糖尿病的大血管併發症如動脈粥樣硬化、外周血管病、心肌梗塞、中風、症候群X、多囊性卵巢症候群、肥胖、高脂血症、高膽固醇血症、高血壓、各種形式的胰島素抵抗、脂肪肝、特別是NAFLD(非酒精性脂肪肝疾病)和NASH(非酒精性脂肪肝炎(steatohepatitis))和冠心病(CHD)的一級和二級預防。
因此，本發明其中一個目的是式(I)化合物
(I)
其中
R是-H；可能被一個或多個滷素基團、硝基、羥基、烷基和烷氧基取代的單環、雙環或三環的芳基或雜芳基，其中所述烷基和烷氧基可能被一個或多個滷素基團取代；
n是0-3；
p是0-1；
X是-OH、-O-C1-C4烷基；
R1和R2，其可以相同或不同，選自-H；C1-C5烷基，-COX；
Q選自NH、O、S、-NHC(O)O-、-NHC(O)NH-、-NHC(O)S-、-OC(O)NH-、-NHC(S)O-、-NHC(S)NH-、-C(O)NH-；
且Y是O、S；
及其藥學上可接受的鹽、外消旋混合物、各對映異構體、立體異構體或幾何異構體和互變異構體用於製備預防和治療糖尿病，特別是2型糖尿病；糖尿病的微血管併發症如糖尿病性視網膜病、糖尿病性神經病和糖尿病性腎病；糖尿病的大血管併發症如動脈粥樣硬化、外周血管病、心肌梗塞和中風；症候群X、多囊性卵巢症候群、肥胖、高脂血症、高膽固醇血症、高血壓、和各種形式的胰島素抵抗；脂肪肝，特別是NAFLD(非酒精性脂肪肝疾病)和NASH(非酒精性脂肪肝炎)；和用於冠心病(CHD)的一級和二級預防，以及用於增加HDL-膽固醇水平的藥物的用途。
本發明另一目的是含有一種或多種式(I)化合物作為活性成分以及至少一種藥學上可接受的稀釋劑和/或賦形劑的藥物組合物。
發明詳述
在式(I)化合物中，第一組優選化合物由下述化合物組成，其中R是芳基，可能被一個或多個滷素原子、烷基、烷氧基或滷代烷基優選甲基、甲氧基或三氟甲基、硝基、單-或二-烷基胺取代。
在該第一組的範圍內，優選p是1，n是0、1或2，且Q是氧。
第二組優選化合物由下述化合物組成，其中R是雜芳基，優選含有氮作為雜原子，例如，吲哚和咔唑，經由所有容許的位置與分子的其餘部分結合；這些之中特別優選1-吲哚基和1-咔唑基。
在該第二組的範圍內，優選p是1，n是0、1或2，且Q是氧。
特別優選的是按照下面描述的一般方法及合成過程製備的下列化合物，它們只是舉例說明，而不是對本發明應用性的限制
i.2-[3-[2-(4-氯苯基)乙氧基]苯硫基]異丁酸甲酯(ST2195)；
ii.2-[3-[2-(4-氯苯基)乙氧基]苯硫基]-2-甲基-丙酸(ST2518)；
iii.2-[4-[2-(4-氯苯基)乙氧基]苯硫基]異丁酸甲酯(ST1929)；
iv.2-[3-(2-(2，4-二氯苯基)乙氧基)苯硫基]異丁酸甲酯(ST2534)；
v.2-[4-(2-(2，4-二氯苯基)乙氧基)苯硫基]異丁酸甲酯(ST2531)；
vi.2-[3-(2-(咔唑-9-基)乙氧基)苯硫基]異丁酸甲酯(ST2365)；
vii.2-[4-(2-(咔唑-9-基)乙氧基)苯硫基]異丁酸甲酯(ST2387)；
viii.2-[4-[2-(1-吲哚基)乙氧基]苯硫基]異丁酸甲酯(ST1983)；
ix.2-[3-[2-(1-吲哚基)乙氧基]苯硫基]異丁酸甲酯(ST2394)；
x.2-[3-[2-(2-萘基)乙氧基]苯硫基]異丁酸甲酯(ST2167)；
xi.2-[4-[2-(2-萘基)乙氧基]苯硫基]異丁酸甲酯(ST2011)；
xii.2-[4-[2-(4-氯苯基)乙氧基]苯硫基]-2-甲基-丙酸(ST2505)；
xiii.2-[3-(2-(2，4-二氯苯基)乙氧基)苯硫基]-2-甲基丙酸(ST2653)；
xiv.2-[4-(2-(2，4-二氯苯基)乙氧基)苯硫基]-2-甲基丙酸(ST2652)；
xv.2-[3-(2-(咔唑-9-基)乙氧基)苯硫基]-2-甲基丙酸(ST2618)；
xvi.2-[4-[2-(1-吲哚基)乙氧基]苯硫基]-2-甲基丙酸(ST2622)；
xvii.2-[3-[2-(1-吲哚基)乙氧基]苯硫基]-2-甲基丙酸(ST2651)；
xviii.2-[3-[2-(2-萘基)乙氧基]苯硫基]-2-甲基-丙酸(ST2609)；
xix.2-[4-[2-(2-萘基)乙氧基]苯硫基]-2-甲基-丙酸(ST2036)；
xx.2-[4-[2-(1-(5-甲氧基)吲哚基)乙氧基]苯硫基]異丁酸甲酯(ST2577)；
xxi.2-[4-[2-(1-(5-苄氧基)吲哚基)乙氧基]苯硫基]異丁酸甲酯(ST2562)；
xxii.2-[3-[5-(4-硝基苯基)糠氧基]苯硫基]異丁酸甲酯(ST2501)；
xxiii.2-[4-[2-(1-(5-甲氧基)吲哚基)乙氧基]苯硫基]異丁酸(ST2733)；
xxiv.2-[4-[2-(1-(5-苄氧基)吲哚基)乙氧基]苯硫基]-2-甲基丙酸(ST2740)；
xxv.2-甲基-2-[3-[5-(4-硝基苯基)糠氧基]苯硫基]丙酸(ST2753)。
特別優選的是化合物ST2518和ST2195。
式(I)化合物是使用一般方法A-C描述的反應製備的。
一般合成方法
下列簡圖舉例說明用於合成式(I)化合物的方法。
除非另有說明，各種符號的含義與通式(I)中給出的一致。方法A中描述的水解過程還可用於其它方法。
方法A
通式(I)化合物的製備是通過使通式II化合物與鹼，優選無機鹼，優選氫化鈉反應，形成相應的陰離子，然後其與含離去基團，如氯、溴、碘、甲磺醯基、甲苯磺醯基和重氮基(在重氮基的情況下，代替無機鹼使用二價乙酸銠二聚物作為催化劑)的通式III化合物，例如2-甲基-α-溴異丁酸酯在極性溶劑如乙腈、甲苯、或優選二甲基甲醯胺中，在10-50℃，優選25℃的溫度下反應18-48小時進行的。由此獲得的產物經過鹼或酸水解，使用例如NaOH或例如HCl/乙酸混合物，溫度為10-100℃，優選25℃，時間為1-72小時，優選3小時，得到相應的酸IA。
方法B
通式(I)化合物的製備是從通式IV的化合物開始進行的，其與通式V的醇在經典Mitsunobu反應條件下反應，如Synthesis 1981，1-28所述，其中使用無水和質子惰性溶劑如苯、甲苯、醚或優選四氫呋喃，時間為30分鐘-72小時，優選48小時，溫度為10-40℃，優選25℃。
方法C
W＝O，NH，S
K＝-NCS，-NCO，-OC(O)Cl，-COOH
Q≠N，O，S
用該方法製備的化合物是從溶於質子惰性溶劑，例如甲苯、醚、苯、優選四氫呋喃中的VI開始獲得的，然後加入相關的異氰酸酯、異硫氰酸酯(thioisocyanate)或氯甲酸酯VII，可能在有催化或化學計量用量的無機或有機鹼，優選三乙胺存在的條件下進行，並使其在10-40℃，優選25℃下反應6-72小時，優選48小時。在K＝COOH的情況下，使用與底物的比例為1∶3當量，優選1∶1.5當量的縮合劑如二乙基偶磷氰化物(diethylphosphorocyanidate)、EEDQ、DCC或CDI等，或通過醯基氯形成的過程，在有機溶劑如DMF、CH3CN、CHCl3、THF等中，在20-80℃，優選25℃的溫度下，進行縮合反應18小時-3天，優選24小時。
下列實施例進一步舉例說明本發明，然而並不排除其它
實施例1
2-[3-[2-(4-氯苯基)乙氧基]苯硫基]異丁酸甲酯(ST2195)的製備
中間產物2-(3-羥基-苯硫基)異丁酸甲酯的製備
方法A(步驟1)
產物是0℃下，從3-巰基苯酚(2.00g，15.9mmol)在40mL無水CH3CN、NaH 80％(0.572g 19.1mmol)中開始製備的。5分鐘後，向混懸液中加入甲基-2-溴異丁酸酯(2.88g，15.9mmol)。室溫下，磁攪拌由此獲得的反應混合物過夜。之後將混合物倒在H2O中並用乙酸乙酯萃取。在無水硫酸鈉上乾燥有機相併蒸發至幹。所得殘餘物通過使用CHCl3/CH3OH 98/2作為洗脫劑的矽膠色譜純化。得到2.900g產物(產率81％)；Mp(熔點)41.5-42.5℃；TLC矽膠，洗脫劑CHCl3/CH3OH98/2，Fr(前沿比)0.23；1H NMR(CDCl3，300MHz)δ7.19(t，1H)，7.00(d，1H)，6.95(brt，1H)，6.81(dd，1H)，3.69(s，3H)，1.50(s，6H)；HPLC柱Inertisil ODS-3(5μm)4.6×250mm，T室溫，流動相CH3CN/H2O 50/50(v/v)，pH按現狀，流速0.75mL/分，205nm UV檢測器，保留時間13.82分；KF0.3％ H2O；E.A.符合C11H14O3S。
2-[3-[2-(4-氯苯基)乙氧基]苯硫基]異丁酸甲酯(ST2195)的製備
方法B
產物是從將2-(3-羥基苯硫基)異丁酸甲酯(按照上述製備的)(1.00g，4.42mmol)和4-氯苯乙醇(0.692g，4.42mmol)溶於15mL無水THF中，分小部分向其中加入DIAD(1.16g，5.75mmol)和三苯膦(1.500g，5.75mmol)開始製備的，保持溫度低於30℃。室溫下磁攪拌反應過夜。之後，蒸去溶劑並通過使用己烷/AcOEt 9/1作為洗脫劑的矽膠色譜純化殘餘物。得到1.146g油狀產物(產率71％)；TLC矽膠，洗脫劑己烷/AcOEt 9/1，Fr＝0.28；1H NMR(CDCl3，300MHz)δ7.25(m，6H)，7.00(m，1H)，6.90(d，1H)，4.15(t，2H)，3.65(s，3H)，3.08(t，2H)，1.55(s，6H)；HPLC柱Inertisil ODS3(5μm)4.6×250mm，T30℃，流動相CH3CN/H2O 80/20(v/v)，pH按現狀，流速0.75mL/分，205nm UV檢測器，保留時間19.34分；KF1.7％H2O；E.A.符合C19H21ClO3S。
實施例2
2-[3-[2-(4-氯苯基)乙氧基]苯硫基]-2-甲基-丙酸(ST2518)的製備
方法A(步驟2)
產物是從ST2195(按照實施例1所述製備的)(0.150g，0.41mmol)於9mL甲醇中的溶液，並向其中加入4mL NaOH 1N開始製備的。室溫下，磁攪拌由此獲得的溶液48小時。之後，用水稀釋溶液，用HCl 1N酸化並用AcOEt萃取水相。在無水Na2SO4上乾燥有機相併過濾，真空蒸去溶劑。得到0.128g產物(產率88％)；Mp105-106℃；TLC矽膠，洗脫劑CHCl3/CH3OH 9.4/0.6，Fr0.42；1H NMR(CDCl3，300MHz)δ7.45(m，5H)，7.10(m，2H)，6.80(dd，1H)，4.15(t，2H)，3.05(t，2H)，1.50(s，6H)；HPLC柱子Symmetry-C18(5μm)4.6×250mm，T30℃，流動相CH3CN/乙酸銨10mM 35/65(v/v)，pH按現狀，流速0.80mL/分，205nm UV檢測器，保留時間4.66分；E.A.符合C18H19ClO3S。
實施例3
2-[4-[2-(4-氯苯基)乙氧基]苯硫基]異丁酸甲酯(ST1929)的製備
中間產物2-(4-羥基苯硫基)異丁酸甲酯(ST 1923)的製備
標題產物是按照方法A(步驟1)中描述的過程，將4-巰基苯酚(0.500g，4.0mmol)溶於10mL無水CH3CN中，並向其中加入NaH80％(0.144g，4.8mmol)開始製備的。將混合物冷卻至0℃，5分鐘後加入甲基-α-溴異丁酸酯(0.724g，4.0mmol)。室溫下，磁攪拌反應2天。之後，將混合物倒入H2O中並用乙酸乙酯萃取；用HCl 1N酸化水相併再次用乙酸乙酯萃取。將收集合併的有機相在Na2SO4上乾燥、過濾並蒸發。通過使用CHCl3作為洗脫劑的矽膠色譜純化所得殘餘物。得到0.760g產物(產率84％)；Mp110-112℃；TLC矽膠，洗脫劑CHCl3，Fr0.11；1H NMR(CDCl3，300MHz)δ7.30(d，2H)，6.73(d，2H)，5.57(brm，1H)，3.70(s，3H)，1.45(s，6H)；HPLC柱Symmetry-C18，(5μm)4.6×250mm，T30℃，流動相CH3CN/H2O 50/50(v/v)，pH按現狀，流速0.75mL/分，205nm UV檢測器，保留時間10.14分；E.A.(元素分析)符合C11H14O3S。
2-[4-[2-(4-氯苯基)乙氧基]苯硫基]異丁酸甲酯(ST1929)的製備
標題產物是按照方法B中描述的過程，將2-(4-羥基苯硫基)異丁酸甲酯(按照上面所述製備的)(0.800g，3.54mmol)和4-氯苯乙醇(0.554g，3.54mmol)溶於20mL無水THF中開始製備的。分小部分逐漸加入DEAD(0.801g，4.6mmol)和三苯膦(1.205g，4.6mmol)，維持溫度低於30℃。室溫下，磁攪拌反應過夜。之後，蒸去溶劑並通過使用己烷/乙酸乙酯9/1作為洗脫劑的矽膠色譜純化殘餘物。得到0.416g油狀產物(產率32％)；TLC矽膠，洗脫劑己烷/乙酸乙酯9/1，Fr0.32；1H NMR(CDCl3，300MHz)δ7.40-7.19(m，6H)，6.80(d，2H)，4.15(t，2H)，3.65(s，3H)，3.08(t，2H)，1.45(s，6H)；HPLC柱Symmetry-C18，(5μm)4.6×250mm，T30℃，流動相CH3CN/H2O70/30(v/v)，pH按現狀，流速0.75mL/分，205nm UV檢測器，保留時間31.40分；KF0.4％H2O；E.A.符合C19H21ClO3S。
實施例4
2-[3-(2-(2，4-二氯苯基)乙氧基)苯硫基]異丁酸甲酯(ST2534)的製備
標題產物是按照方法B中描述的過程，從2-(3-羥基苯硫基)異丁酸甲酯(按照實施例1所述製備的)(0.280g，1.24mmol)和DIAD(0.325g，1.61mmol)溶於3mL無水THF中並在0℃下滴加到2，4-二氯苯乙醇(0.260g，1.36mmol)和三苯膦(0.422g，1.61mmol)溶於4mL無水THF的溶液中開始製備的。室溫下，磁攪拌反應過夜。之後，蒸去溶劑並通過使用己烷/AcOEt 9.6/0.4作為洗脫劑的矽膠色譜純化殘餘物。得到0.327g油狀產物(產率66％)；TLC矽膠，洗脫劑己烷/AcOEt 9/1，Fr0.34；1H NMR(CDCl3，300MHz)δ7.40(d，1H)，7.20(m，3H)，7.00(m，2H)，6.90(dd，1H)，4.15(t，2H)，3.65(s，3H)，3.20(t，2H)，1.45(s，6H)；HPLC柱Inertisil ODS-3(5μm)4.6×250mm，T室溫，流動相CH3CN/H2O 90/10(v/v)，pH按現狀，流速0.8mL/分，205nm UV檢測器，保留時間12.40分；KF0.2％H2O；E.A.符合C19H20Cl2O3S。
實施例5
2-[4-(2-(2，4-二氯苯基)乙氧基)苯硫基]異丁酸甲酯(ST2531)的製備
標題產物是按照方法B中描述的過程，自2-(4-羥基苯硫基)異丁酸甲酯(按照實施例3所述製備的)(0.280g，1.24mmol)和DIAD(0.325g，1.61mmol)溶於3mL無水THF中並在0℃下滴加到2，4-二氯苯乙醇(0.260g，1.36mmol)和三苯膦(0.422g，1.61mmol)溶於4mL無水THF的溶液中開始製備的。室溫下，磁攪拌反應過夜。之後，蒸去溶劑並通過使用己烷/AcOEt 9.6/0.4作為洗脫劑的矽膠色譜純化殘餘物。得到0.346g產物(產率70％)；Mp73-74℃；TLC矽膠，洗脫劑己烷/AcOEt 9/1，Fr0.26；1H NMR(CDCl3，300MHz)δ7.35(m，3H)，7.22(m，2H)，6.83(d，2H)，4.18(t，2H)，3.65(s，3H)，3.20(t，2H)，1.45(s，6H)；HPLC柱Inertisil ODS-3(5μm)4.6×250mm，T室溫，流動相CH3CN/H2O 85/15(v/v)，pH按現狀，流速1mL/分，205nm UV檢測器，保留時間12.58分；KF0.4％H2O；E.A.符合C19H20Cl2O3S。
實施例6
2-[3-(2-(咔唑-9-基)乙氧基)苯硫基]異丁酸甲酯(ST2365)的製備
標題產物是按照方法B中描述的過程，自2-(3-羥基苯硫基)異丁酸甲酯(按照實施例1所述製備的)(0.609g，2.7mmol)、9H-咔唑-9-乙醇(0.570g，2.7mmol)、DIAD(0.708g，3.5mmol)和三苯膦(0.917g，3.5mmol)分小部分逐漸加入到14mL無水THF中，並維持溫度低於30℃開始製備的。室溫下，磁攪拌反應18小時。之後，蒸去溶劑並通過使用己烷/AcOEt 9/1作為洗脫劑的矽膠色譜純化殘餘物。得到0.510g產物(產率45％)；Mp101-103℃；TLC矽膠，洗脫劑己烷/AcOEt8/2，Fr0.38；1H NMR(CDCl3，300MHz)δ8.05(d，2H)，7.50(m，4H)，7.15(m，2H)，7.08(t，1H)，7.00(d，1H)，6.90(s，1H)，6.80(m，1H)，4.75(t，2H)，4.35(t，2H)，3.60(s，3H)，1.40(s，6H)；HPLC柱Symmetry-C18，(5μm)4.6×150mm，T室溫，流動相CH3CN/H2O65/35(v/v)，pH按現狀，流速0.80mL/分，205nm UV檢測器，保留時間11.45分；E.A.符合C25H25NO3S。
實施例7
2-[4-(2-(咔唑-9-基)乙氧基)苯硫基]異丁酸甲酯(ST2387)的製備
產物是按照方法B中描述的過程，自2-(4-羥基苯硫基)異丁酸甲酯(按照實施例3所述製備的)(0.609g，2.7mmol)、9H-咔唑-9-乙醇(0.570g，2.7mmol)、DIAD(0.708g，3.5mmol)和三苯膦(0.917g，3.5mmol)分小部分逐漸加入到14mL無水THF中，並維持溫度低於30℃開始製備的。室溫下，磁攪拌反應18小時。之後，蒸去溶劑並通過使用己烷/AcOEt 9/1作為洗脫劑的矽膠色譜純化殘餘物。得到0.702g產物(產率62％)；Mp72-74℃；TLC矽膠，洗脫劑己烷/AcOEt 8/2，Fr0.30；1H NMR(CDCl3，300MHz)δ8.05(d，2H)，7.50(m，4H)，7.15(m，4H)，6.75(d，2H)，4.75(t，2H)，4.35(t，2H)，3.60(s，3H)，1.40(s，6H)；HPLC柱Symmetry-C18，(5μm)4.6×150mm，T室溫，流動相CH3CN/H2O 70/30(v/v)，pH按現狀，流速0.80mL/分，205nm UV檢測器，保留時間11.60分；E.A.符合C25H25NO3S。
實施例8
2-[4-[2-(1-吲哚基)乙氧基]苯硫基]異丁酸甲酯(ST1983)的製備
中間產物1-(2-羥乙基)吲哚的製備
在J.Med.Chem.，1998，41/10，1619-1639中報導的中間產物是按照其中描述的過程製備的，區別在於反應持續時間(等於30小時代替30分鐘)，自吲哚(5.0g，42.7mmol)、KOH(3.6g，64.1mmol)和溴乙醇(6.4g，51.3mmol)溶於50ml無水DMSO中的溶液開始，溫度為25-30℃，得到5g油狀產物(產率73％)。
2-[4-[2-(1-吲哚基)乙氧基]苯硫基]異丁酸甲酯(ST1983)的製備
產物是按照方法B中描述的過程自2-(4-羥基苯硫基)異丁酸甲酯(按照實施例3所述製備的)(0.671g，2.97mmol)、1-(2-羥乙基)吲哚(0.478g，2.97mmol)、DEAD(0.672g，3.86mmol)和三苯膦(1.011g，3.86mmol)分小部分逐漸加入到15mL無水THF中，並維持溫度低於30℃開始製備的。室溫下，磁攪拌反應48小時。之後，蒸去溶劑並通過使用己烷/乙酸乙酯8/2作為洗脫劑的矽膠色譜純化殘餘物。總共得到0.500g還不純的產物，將其溶於乙酸乙酯中並用NaOH 1N溶液洗滌。乾燥有機相併蒸發得到0.230g殘餘物，其通過矽膠色譜、用CHCl3洗脫而被再次純化。得到0.184g油狀產物(產率17％)；TLC矽膠，洗脫劑己烷/乙酸乙酯8/2，Fr0.29；1H NMR(CDCl3，300MHz)δ7.62(d，1H)，7.40-7.10(m，6H)，6.78(d，2H)，6.50(d，1H)，4.50(m，2H)，4.24(m，2H)，3.61(s，3H)，1.40(s，6H)；HPLC柱Symmetry-C18，(3.5μm)4.6×75mm，T室溫，流動相CH3CN/H2O60/40(v/v)，pH按現狀，流速0.90mL/分，205nm UV檢測器，保留時間，10.70分；KF1.7％H2O；E.A.符合C21H23NO3S。
實施例9
2-[3-[2-(1-吲哚基)乙氧基]苯硫基]異丁酸甲酯(ST2394)的製備
標題產物是按照方法B中描述的過程，自甲基2-(3-羥基苯硫基)異丁酸甲酯(按照實施例1所述製備的)(1.00g，4.42mmol)和1-(2-羥乙基)吲哚(按照實施例8所述製備的)(0.711g，4.42mmol)溶於20mL無水THF中，並向其中分小部分逐漸加入DIAD(1.16g，5.75mmol)和三苯膦(1.500g，5.75mmol)，維持溫度低於30℃而開始製備的。室溫下，磁攪拌反應過夜。之後，蒸去溶劑並通過使用己烷/AcOEt 8/2作為洗脫劑的矽膠色譜純化殘餘物。得到0.581g油狀產物(產率35％)；TLC矽膠，洗脫劑己烷/AcOEt 9/1，Fr0.22；1H NMR(CDCl3，300MHz)δ7.62(d，1H)，7.42(d，1H)，7.30-6.80(m，7H)，6.52(d，1H)，4.55(m，2H)，4.30(m，2H)，3.61(s，3H)，1.50(s，6H)；HPLC柱Supelco-C18(5μm)4.6×150mm，T30℃，流動相CH3CN/H2O70/30(v/v)，pH按現狀，流速0.90mL/分，205nm UV檢測器，保留時間6.36分；E.A.符合C21H23NO3S。
實施例10
2-[3-[2-(2-萘基)乙氧基]苯硫基]異丁酸甲酯(ST2167)的製備
產物是按照方法B中描述的過程(區別在於用DIAD代替DEAD)從2-(3-羥基苯硫基)異丁酸甲酯(按照實施例1所述製備的)(1.110g，4.9mmol)、2-(2-萘基)乙醇(0.842g，4.9mmol)、DIAD(1.290g，6.37mmol)和三苯膦(1.670g，6.37mmol)溶於20mL無水THF中開始製備的。室溫下，磁攪拌反應過夜。之後，蒸去溶劑並通過使用己烷/AcOEt 7/3作為洗脫劑的矽膠色譜純化殘餘物。通過將該產物溶於乙酸乙酯中並用Na2CO3溶液洗滌有機相而進一步純化它。在硫酸鈉上乾燥有機相併真空蒸去溶劑。得到1.14g產物(產率61.2％)；TLC矽膠，洗脫劑己烷/AcOEt 9/1，Fr0.20；1H NMR(CDCl3，300MHz)δ7.80(m，3H)，7.75(s，1H)，7.45(m，3H)，7.25(t，1H)，7.05(m，2H)，6.90(d，1H)，4.25(t，2H)，3.65(s，3H)，3.30(t，2H)，1.50(s，6H)；HPLC柱Inertisil ODS-3(5μm)4.6×250mm，T室溫，流動相CH3CN/H2O 80/20(v/v)，pH按現狀，流速0.9mL/分，205nm UV檢測器，保留時間18.91分；KF1.0％H2O；E.A.符合C23H24O3S。
實施例11
2-[4-[2-(2-萘基)乙氧基]苯硫基]異丁酸甲酯(ST2011)的製備
產物是按照方法B中描述的過程，從2-(4-羥基苯硫基)異丁酸甲酯(按照實施例3所述製備的)(1.000g，4.42mmol)、2-(2-萘基)乙醇(0.760g、4.42mmol)、DEAD(1.000g、5.75mmol)和三苯膦(1.500g、5.75mmol)分小部分逐漸加入到30mL無水THF中，並維持溫度低於30℃開始製備的。室溫下，磁攪拌反應過夜。之後，蒸去溶劑並通過使用己烷/AcOEt 9/1作為洗脫劑的矽膠色譜純化殘餘物。得到1.262g產物(產率75％)；Mp56-57℃；TLC矽膠，洗脫劑己烷/AcOEt 9/1，Fr0.23；1H NMR(CDCl3，300MHz)δ7.85-7.70(m，4H)，7.45-7.28(m，5H)，6.83(d，2H)，4.27(t，2H)，3.65(s，3H)，3.26(t，2H)，1.45(s，6H)；HPLC柱Inertisil ODS-3(5μm)4.6×250mm，T室溫，流動相CH3CN/H2O 80/20(v/v)，pH按現狀，流速0.75mL/分，205nm UV檢測器，保留時間23.51分；KF0.16％H2O；E.A.符合C23H24O3S。
實施例12
2-[4-[2-(4-氯苯基)乙氧基]苯硫基]-2-甲基-丙酸(ST2505)的製備方法A(步驟2)
產物是從ST1929(按照實施例3所述製備的)(0.572g，1.57mmol)於36mL甲醇中的溶液，並向其中加入15.7mL NaOH 1N開始製備的。回流溫度下，磁攪拌所得溶液過夜。之後，用HCl 1N酸化該溶液並用AcOEt萃取水相。將有機相在無水Na2SO4上乾燥並過濾，真空蒸去溶劑。產物是通過矽膠柱色譜，使用己烷/AcOEt 7∶3洗脫而被純化的。得到0.448g產物(產率81.5％)；Mp87-88℃；TLC矽膠；洗脫劑己烷/AcOEt 6/4，Fr0.3；1H NMR(CDCl3，300MHz)δ7.40(d，2H)，7.25(d，2H)，7.20(d，2H)，6.80(d，2H)，4.15(t，2H)，3.05(t，2H)，1.50(s，6H)；HPLC柱Symmetry-C18(5μm)4.6×250mm，T室溫，流動相CH3CN/乙酸銨10mM 45/55(v/v)，pH按現狀；流速0.70mL/分，205nm UV檢測器；保留時間4.73分；E.A.符合C18H19ClO3S。
實施例13
2-[3-(2-(2，4-二氯苯基)乙氧基)苯硫基]-2-甲基丙酸(ST2653)的製備
方法A(步驟2)
產物是從ST2534(按照實施例4所述製備的)(0.700g，1.75mmol)於11mL CH3OH中的溶液，向其中加入21mL NaOH 1N開始製備的。40℃下，磁攪拌所得溶液2天。之後，真空蒸去CH3OH並用HCl 1N酸化水相，用AcOEt萃取。在無水Na2SO4上乾燥有機相，過濾並真空蒸去溶劑。得到0.486g產物(產率72％)；Mp86-88℃；TLC矽膠，洗脫劑CHCl3/CH3OH 9.6/0.4，Fr0.18；1H NMR(CDCl3，300MHz)δ7.40(s，1H)，7.20(m，3H)，7.05(m，2H)，6.90(d，1H)，4.15(t，2H)，3.05(t，2H)，1.45(s，6H)；HPLC柱Inertisil ODS 3(5μm)4.6×250mm，T室溫，流動相CH3CN/KH2PO4 50mM 70/30(v/v)，pH約3(H3PO4)，流速1mL/分，205nm UV檢測器，保留時間16.78分；E.A.符合C18H18Cl2O3S。
實施例14
2-[4-(2-(2，4-二氯苯基)乙氧基)苯硫基]-2-甲基丙酸(ST2652)的製備
方法A(步驟2)
產物是從ST2531(按照實施例5所述製備的)(0.130g，0.32mmol)於3mL四氫呋喃中的溶液，向其中加入3mL LiOH水溶液(0.040g，1.67mmol)開始製備的。室溫下，磁攪拌所得混懸液過夜。之後，真空蒸去四氫呋喃，用HCl 1N酸化水相併用AcOEt萃取。在無水Na2SO4上乾燥有機相，過濾並真空蒸去溶劑。用矽膠色譜柱純化所得殘餘物，其中用CHCl3/CH3OH 9.6/0.4洗脫。得到0.044g產物(產率36％)；TLC矽膠，洗脫劑CHCl3/CH3OH 9.6/0.4，Fr0.20；1H NMR(CDCl3，300MHz)δ7.40(m，3H)，7.20(m，2H)，6.80(d，2H)，4.15(t，2H)，3.15(t，2H)，1.45(s，6H)；HPLC柱Inertisil ODS 3(5μm)4.6×250mm，T室溫，流動相CH3CN/KH2PO4 50mM 65/35(v/v)，pH約3(H3PO4)，流速1mL/分，205nm UV檢測器，保留時間27.20分；E.A.符合C18H18Cl2O3S。
實施例15
2-[3-(2-(咔唑-9-基)乙氧基)苯硫基]-2-甲基-丙酸(ST2618)的製備
方法A(步驟2)
產物是從ST2365(按照實施例6所述製備的)(0.120g，0.286mmol)於3mL四氫呋喃中的溶液，向其中加入1mL LiOH水溶液(0.014g，0.5mmol)開始製備的。室溫下，磁攪拌由此獲得的混懸液過夜。之後，真空蒸去四氫呋喃，用HCl 1N酸化水相併在無水Na2SO4上萃取，過濾，真空蒸去溶劑。得到0.042g產物(產率36％)；TLC矽膠；洗脫劑CHCl3/CH3OH 9.6/0.4，Fr0.24；1H NMR(CDCl3，300MHz)δ8.05(d，2H)，7.50(m，4H)，7.10-7.00(m，5H)，6.80(d，1H)，4.70(t，2H)，4.30(t，2H)，1.50(s，6H)；HPLC柱Inertisil ODS 3(5μm)4.6×250mm，T室溫，流動相CH3CN/KH2PO4 50mM 70/30(v/v)，pH按現狀；流速1mL/分，205nm UV檢測器；保留時間11.92分；E.A.符合C24H23NO3S。
實施例16
2-[4-[2-(1-吲哚基)乙氧基]苯硫基]-2-甲基-丙酸(ST2622)的製備
方法A(步驟2)
產物是從ST1983(按照實施例8所述製備的)(1g，2.71mmol)於15mL CH3OH中的溶液，向其中加入30mL NaOH 1N開始製備的。40℃下，磁攪拌所得溶液48小時。之後，真空蒸去CH3OH，用HCl 1N酸化水相併用AcOEt萃取。在無水Na2SO4上乾燥有機相，過濾並真空蒸去溶劑。用矽膠色譜柱純化所得殘餘物，其中用CHCl3/CH3OH 9.6/0.4洗脫。得到0.679g產物(產率70％)；TLC矽膠，洗脫劑CHCl3/CH3OH9.6/0.4，Fr0.27；1H NMR(CDCl3，300MHz)δ7.60(d，1H)，7.40(d，3H)，7.20(m，3H)，6.80(d，2H)，6.50(d，1H)，4.50(t，2H)，4.25(t，2H)，1.50(s，6H)；HPLC柱Inertisili ODS 3(5μm)4.6×250mm，T室溫，流動相CH3CN/KH2PO4 50mM 70/30(v/v)，pH按現狀；流速1mL/分，205nm UV檢測器；保留時間8.30分；E.A.符合C20H21NO3S。
實施例17
2-[3-[2-(1-吲哚基)乙氧基]苯硫基]-2-甲基-丙酸(ST2651)的製備
方法A(步驟2)
產物是從ST2394(按照實施例9所述製備的)(0.140g，0.38mmol)於3mL四氫呋喃中的溶液，向其中加入2mL LiOH水溶液(0.040g，1.67mmol)開始製備的。室溫下，磁攪拌所得混懸液過夜。之後，真空蒸去四氫呋喃，用HCl 1N酸化水相併用AcOEt萃取。在無水Na2SO4上乾燥有機相，過濾並真空蒸去溶劑。用矽膠色譜柱純化所得殘餘物，其中用CHCl3/CH3OH 9.6/0.4洗脫。得到0.086g產物(產率63％)；TLC矽膠；洗脫劑CHCl3/CH3OH 9.6/0.4，Fr0.19；1H NMR(CDCl3，300MHz)δ7.60(d，1H)，7.40(d，1H)，7.20-7.00(m，6H)，6.80(d，1H)，6.50(d，1H)，4.50(t，2H)，4.20(t，2H)，1.50(s，6H)；HPLC柱Inertisil ODS 3(5μm)4.6×250mm，T室溫；流動相CH3CN/KH2PO4 50mM 65/35(v/v)，pH按現狀；流速1mL/分，205nm UV檢測器，保留時間8.77分；E.A.符合C20H21NO3S。
實施例18
2-[3-[2-(2-萘基)乙氧基]苯硫基]-2-甲基-丙酸(ST2609)的製備
方法A(步驟2)
產物是從ST2167(按照實施例10所述製備的)(0.270g，0.71mmol)於18mL CH3OH中的溶液，向其中加入15mL NaOH 2N開始製備的。回流溫度下，磁攪拌所得溶液48小時。之後，冷卻反應混合物，用HCl1N酸化並用AcOEt萃取。在無水Na2SO4上乾燥有機相，過濾並真空蒸去溶劑。使用矽膠色譜柱純化所得殘餘物，其中用己烷/AcOEt 7/3洗脫。得到0.030g產物(產率14％)；TLC矽膠，洗脫劑己烷/AcOEt 6/4，Fr0.24；1H NMR(CDCl3，300MHz)δ7.80(m，3H)，7.70(s，1H)，7.40(m，3H)，7.20(m，1H)，7.10(s，2H)，6.90(d，1H)，4.20(t，2H)，3.20(t，2H)，1.50(s，6H)；HPLC柱Inertisil ODS 3(5μm)4.6×250mm，T室溫，流動相CH3CN/KH2PO4 50mM 70/30(v/v)，pH按現狀，流速1mL/分，205nm UV檢測器，保留時間11.77分；E.A.符合C22H22O3S。
實施例19
2-[4-[2-(2-萘基)乙氧基]苯硫基]-2-甲基-丙酸(ST2036)的製備
方法A(步驟2)
產物是從ST2011(按照實施例11所述製備的)(0.498g；1.29mmol)於30mL CH3OH中的溶液，向其中加入12.9mL di NaOH 1N開始製備的。回流溫度下，磁攪拌所得溶液過夜。之後，冷卻反應混合物，用HCl 1N酸化並用AcOEt萃取。在無水Na2SO4上乾燥有機相、過濾並真空蒸去溶劑。得到0.450g產物(產率95％)；Mp103-104℃；TLC矽膠，洗脫劑CHCl3/CH3OH 9.8/0.2，Fr0.13；1H NMR(CDCl3，300MHz)δ7.80(m，3H)，7.70(s，1H)，7.40(m，5H)，6.80(d，2H)，4.20(t，2H)，3.20(t，2H)，1.50(s，6H)；HPLC柱Inertisil ODS 3(5μm)4.6×250mm，T室溫，流動相CH3CN/KH2PO4 50mM 75/25(v/v)，pH按現狀，流速0.75mL/分，205nm UV檢測器，保留時間13.10分；E.A.符合C22H22O3S。
實施例20
2-[4-[2-(1-(5-甲氧基)吲哚基)乙氧基]苯硫基]異丁酸甲酯(ST2577)的製備
方法B
向ST1923(按照實施例3所述製備的)(0.2g，0.88mmol)的無水THF(6mL)溶液中分小部分加入2-(5-甲氧基-吲哚-1-基)-乙醇(按照實施例8所述，自5-甲氧基吲哚和2-溴-乙醇開始製備的)(0.185g，0.97mmol)、DIAD(0.230g，1.14mmol)和三苯膦(0.299g，1.14mmol)。室溫下，磁攪拌反應混合物過夜，然後真空除去溶劑並將殘餘物溶於AcOEt中，用NaOH 1N洗滌。在Na2SO4上乾燥有機相、過濾並蒸發。通過使用己烷/AcOEt 87/13作為洗脫劑的矽膠色譜純化所得殘餘物，得到0.180g終產物(產率51％)。TLC矽膠，洗脫劑己烷/AcOEt 7/3，Fr0.39；1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.30(m，3H)，7.15(d，1H)，7.10(d，1H)，6.90(dd，1H)，6.78(d，2H)，6.40(d，1H)，4.50(t，2H)，4.25(t，2H)，3.85(s，3H)，3.65(s，3H)，1.40(s，6H)；HPLC柱Inertisil ODS 3(5μm)4.6×250mm，R.T.，流動相CH3CN/H2O 85/15v/v，pH按現狀，流速0.75mL/分，205nm UV檢測器，保留時間7.80分；A.E.符合C22H25NO4S預期值。
實施例21
2-[4-[2-(1-(5-苄氧基)吲哚基)乙氧基]苯硫基]異丁酸甲酯(ST2562)的製備
方法B
向ST1923(按照實施例3所述製備的)(0.2g，0.88mmol)的無水THF(6mL)溶液中分小部分加入2-(5-苄氧基-吲哚-1-基)乙醇(按照實施例8所述，自5-苄氧基吲哚和2-溴-乙醇開始製備的)(0.26g，0.97mmol)、DIAD(0.230g，1.14mmol)和三苯膦(0.299g，1.14mmol)。室溫下，磁攪拌反應混合物過夜，然後真空除去溶劑，並將殘餘物溶於AcOEt中，用NaOH 1N洗滌。在Na2SO4上乾燥有機層，過濾並真空蒸發。通過使用己烷/AcOEt 85/15作為洗脫劑的矽膠色譜純化所得殘餘物，得到0.240g終產物(產率57％)。MP87-88℃；TLC矽膠，洗脫劑己烷/AcOEt 7/3，Fr0.41；1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.45-7.2(m，10H)，7.00(dd，1H)，6.80(d，2H)，6.40(d，1H)，5.10(s，2H)，4.50(t，2H)，4.25(t，2H)，3.60(s，3H)，1.40(s，6H)；HPLC柱Inertisil ODS 3(5μm)4.6×250mm，R.T.，流動相CH3CN/H2O90/10v/v，pH按現狀，流速0.80mL/分，205nm UV檢測器，保留時間8.21分；A.E.符合C28H29NO4S預期值。
實施例22
2-[3-[5-(4-硝基苯基)糠氧基]苯硫基]異丁酸甲酯(ST2501)的製備
方法B
向2-(3-羥基-苯硫基)異丁酸甲酯(按照實施例1所述製備的)(1.02g，4.5mmol)的無水THF(23mL)溶液中分小部分加入5-硝基糠醇(0.986g，4.5mmol)、DIAD(1.18g，5.85mmol)和三苯膦(1.53g，5.85mmol)。室溫下磁攪拌反應混合物過夜，然後真空除去溶劑並將殘餘物溶於AcOEt中，用NaOH 1N洗滌。在Na2SO4上乾燥有機層，過濾並真空除去。通過使用己烷/AcOEt 9.4/0.6作為洗脫劑的矽膠色譜純化所得殘餘物，得到0.380g終產物(產率20％)。MP81-82℃；TLC矽膠，洗脫劑己烷/AcOEt 7/3，Fr 0.45；1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.22(d，2H)，7.80(d，2H)，7.22(m，2H)，7.10-7.00(m，3H)，6.80(d，1H)，6.60(d，1H)，5.10(s，2H)，370(s，3H)，1.50(s，6H)；HPLC柱Symmetry C18(5μm)4.6×250mm，R.T.，流動相CH3CN/H2O 85/15v/v，pH按現狀，流速0.85mL/分，205nm UV檢測器，保留時間6.24分；A.E.符合C22H21NO6S預期值。
實施例23
2-[4-[2-(1-(5-甲氧基)吲哚基)乙氧基]苯硫基]異丁酸(ST2733)的製備
方法A(步驟2)
向ST2577(按照實施例20所述製備的)(0.2g，0.50mmol)的CH3OH(3.2mL)溶液中加入NaOH 1N溶液(6mL)。40℃下，磁攪拌反應混合物過夜，然後真空除去有機相，用AcOEt萃取水相。分離水相併用HCl 1N酸化，然後再次用AcOEt萃取。用水洗滌該第二有機萃取物，在Na2SO4上乾燥，過濾並真空蒸發，得到0.138g終產物(產率72％)。MP100-102℃；TLC矽膠，洗脫劑CHCl3/CH3OH 8/2，Fr0.62；1HNMR(300MHz，CDCl3)δ7.40(d，2H)，7.25(s，1H)，7.10(d，2H)，6.90(d，1H)，6.78(d，2H)，6.40(d，1H)，4.50(t，2H)，4.20(t，2H)，3.80(s，3H)，1.40(s，6H)；HPLC柱Inertisil ODS 3(5μm)4.6×250mm，R.T.，流動相CH3CN/KH2PO4 50mM 70/30，pH按現狀，流速1mL/分，205nm UV檢測器，保留時間7.32分，A.E.符合C21H23NO4S預期值。
實施例24
2-[4-[2-(1-(5-苄氧基)吲哚基)乙氧基]苯硫基]-2-甲基丙酸(ST2740)的製備
方法A(步驟2)
向ST2562(按照實施例21所述製備的)(0.430g，0.90mmol)的CH3OH(10mL)溶液中加入NaOH 1N溶液(15mL)。40℃下磁攪拌反應混合物48小時，然後真空除去有機相併用AcOEt萃取含水殘餘物。分離水相併用HCl 1N酸化，然後再次用AcOEt萃取。用水洗滌該第二有機萃取物，在Na2SO4上乾燥並真空蒸發，得到0.310g終產物(產率74％)。MP160-162℃；TLC矽膠，洗脫劑CHCl3/CH3OH 9/1，Fr.0.57；1HNMR(300MHz，CDCl3)δ7.40-7.15(m，10H)，7.20(s，2H)，7.00(d，1H)，6.90(d，2H)，6.40(s，1H)，5.15(s，2H)，4.50(t，2H)，4.20(t，2H)，1.40(s，6H)；HPLC柱Inertisil ODS 3(5μm)4.6×250mm，R.T.，流動相CH3CN/KH2PO4 50mM 70/30，pH按現狀，流速1mL/分，205nm UV檢測器，保留時間11.60分；A.E.符合C27H27NO4S預期值。
實施例25
2-甲基-2-[3-[5-(4-硝基苯基)糠氧基]苯硫基]丙酸(ST2753)的製備
方法A(步驟2)
向ST2501(按照實施例22所述製備的)(0.4g，0.93mmol)的CH3OH(10mL)溶液中加入NaOH 1N溶液(25mL)。40℃下磁攪拌反應混合物4天，然後真空除去有機相併用AcOEt萃取含水殘餘物。分離水相併用HCl 1N酸化，然後再次用AcOEt萃取。用水洗滌該第二有機萃取物，在Na2SO4上乾燥並真空蒸發。通過矽膠色譜純化殘餘物，其中用CHCl3/CH3OH 9.4/0.6洗脫，得到0.215g終產物(產率56％)。MP137-138℃；TLC矽膠，洗脫劑CHCl3/CH3OH 9/1，Fr 0.53；1H NMR(300MHz，DMSO)δ8.30(d，2H)，8.00(d，2H)，7.40(m，2H)，7.10(d，3H)，6.80(s，1H)，4.20(s，2H)，1.40(s，6H)；HPLC柱Inertisil ODS3(5μm)4.6×250mm，R.T.，流動相CH3CN/KH2PO4 50mM 70/30，pH按現狀，流速1mL/分，205nm UV檢測器，保留時間11.38分；A.E.符合C21H19NO6S預期值。
實施例26
db/db小鼠中的抗糖尿病和降低血清脂質的活性
實驗動物的突變使得可能開發出呈現伴有肥胖、高脂血症和胰島素抵抗的非胰島素依賴型糖尿病的模型，並且該模型能使我們測試新的抗糖尿病化合物的效力(Reed和Scribner，Diabetes，obesity andmetabolism 175-86，1999)。
廣泛使用的遺傳性糖尿病小鼠模型是C57BL/KsJ db/db小鼠。
此模型的遺傳基礎是苗條蛋白受體基因缺陷(db/db小鼠)，導致苗條蛋白抗性和引起飲食過多、肥胖、高胰島素血症和胰島素抵抗，隨後產生胰島素分泌不足和高血糖症狀(Kodama等，Diabetologia37739-744，1994；Zhang等，Nature 372425-432，1994；Chen等，Cell 84491-495，1996)。
由於高血糖伴有肥胖和胰島素抵抗，db/db小鼠具有類似人類2型糖尿病的特徵，可用於測定胰島素敏化化合物。
實驗所用C57BL/KsJ db/db小鼠由Jackson Lab(經由Ch.River)提供。在標準條件(22±2℃，55±15％溼度；換氣15-20/小時；12小時光-暗循環，光照從上午7.00到下午7.00)下，給予標準4RF21飲食(Mucedola)，適應環境10天後，在吸收後狀態下(從上午8.30到下午4.30禁食)，藉助於Jelco 22G導管(Johnson and Johnson)從尾靜脈取血樣。監測葡萄糖、胰島素、甘油三酯、膽固醇、游離脂肪酸和尿素的血漿水平以確保處理組中小鼠的良好匹配分布。
處理開始時，檢查小鼠體重，進行監測水和食物消耗的準備。
使用本發明的化合物每天兩次(8.30a.m.和6.30p.m.)口服處理小鼠25天(實驗I)或12天(實驗II)，使用羅格列酮、苯扎貝特和非諾貝特(實驗I)或實施例1中的化合物(實驗II)作為參照化合物。
以10ml/kg載體(含0.5％吐溫80去離子水溶液的1％CMC)中含25mg/kg本發明實施例1化合物ST2195的相當劑量給予所述化合物。具體而言，以5mg/kg的劑量給予羅格列酮(Lohray等，J.Med Chem41，1619-1630，1998)，苯扎貝特為24.8mg/kg和非諾貝特為24.7mg/kg。
在實驗過程中，監測血清葡萄糖水平、口服葡萄糖耐量試驗(OGTT)結果、多種脂質狀態參數和體重增加。
本發明化合物證實能夠降低進食(表1)、吸收後(表2、2a、5和5a)以及禁食狀況(表3和3a)的血清葡萄糖水平。
它們還證實能夠改善葡萄糖耐量(表4和4a)並減少果糖胺，其是蛋白糖基化的一個指標(表5)，如上所述，蛋白糖基化在糖尿病的微-和大-血管併發症的發生中起重要作用。
本發明的化合物還顯示出良好的降低血清甘油三酯水平的能力，與羅格列酮和非諾貝特類似(表6和6a)。
此外，與羅格列酮不同，本發明的化合物可增加HDL-膽固醇水平(表6和6a)並且其所致的體重增加比由羅格列酮引起的要低，且與貝特類誘導的接近(表7和7a)。
HDL-膽固醇值的增加構成PPARα激動作用和動脈粥樣硬化危險降低的指示。事實上，PPARα激動作用增加組織中的脂肪酸氧化，減少胞內甘油三酯的積聚，而胞內甘油三酯會促進胰島素抵抗(Virkamki等，Diabetes 50，2337-2343，2001；Mensink等，Diabetes 50，2545-2554，2001；Kelley和Goodpaster，Diabetes Care 24，933-941，2001)。
表1(實驗I)
每天兩次口服給予db/db小鼠實施例1的化合物、貝特類(劑量相當於25mg/kg實施例1的化合物)和羅格列酮(5mg/kg)，處理12天後，小鼠血液中的葡萄糖水平。在最後一次處理後大約15小時，採集進食狀態下的樣品。
平均值±S.E.和與對照相比的變化(％)
每組動物數6隻。
Student’s t檢驗▲表示與對照相比P＜0.001。
表2(實驗I)
每天兩次口服給予db/db小鼠實施例1的化合物、貝特類(劑量相當於25mg/kg實施例1的化合物)和羅格列酮(5mg/kg)，處理12天後，小鼠血液中的葡萄糖水平。
採集吸收後狀態(從9a.m.-5p.m.禁食)和最後一次處理後8小時的樣品。
平均值±S.E.和與對照相比的變化(％)
每組動物數6隻。
Student’s t檢驗□和▲分別表示與對照相比P＜0.05和P＜0.001。
表2a(實驗II)
每天兩次口服給予db/db小鼠實施例1的化合物和實施例2的化合物(劑量相當於25mg/kg實施例1的化合物)，處理9天後，小鼠血液中的葡萄糖水平。
採集吸收後狀態(從9a.m.-5p.m.禁食)和最後一次處理後8小時的樣品。
平均值±S.E.和與對照相比的變化(％)
每組動物數6隻。
Student’s t檢驗△和▲分別表示與對照相比P＜0.01和P＜0.001。
表3(實驗I)
每天兩次口服給予db/db小鼠實施例1的化合物、貝特類(劑量相當於25mg/kg實施例1的化合物)和羅格列酮(5mg/kg)，處理18天後，小鼠血液中的葡萄糖水平。
採集禁食18小時和最後一次處理後6小時的樣品。
平均值+S.E.和與對照相比的變化(％)
每組動物數6隻。
Student’s t檢驗■和△分別表示與對照相比P＜0.02和P＜0.01。
表3a(實驗II)
每天兩次口服給予db/db小鼠實施例1的化合物和實施例2的化合物(劑量相當於25mg/kg實施例1的化合物)，處理11天後，小鼠血液中的葡萄糖水平。
採集禁食18小時和最後一次處理後5小時的樣品。
平均值±S.E.和與對照相比的變化(％)
每組動物數6隻。
Student’s t檢驗▲表示與對照相比P＜0.001。
表4(實驗I)
每天兩次口服給予db/db小鼠實施例1的化合物、貝特類(劑量相當於25mg/kg實施例1的化合物)和羅格列酮(5mg/kg)，處理18天後，小鼠血液中OGTT葡萄糖的曲線下面積(AUC)。
禁食18小時和最後一次處理後5小時的小鼠OGTT(葡萄糖3g/kg)。
平均值±S.E.和與對照相比的變化(％)
每組動物數6隻。
Student’s t檢驗△和▲分別表示與對照相比P＜0.01和P＜0.001。
表4a(實驗II)
每天兩次口服給予db/db小鼠實施例1和實施例2的化合物(劑量相當於25mg/kg實施例1的化合物)，處理11天後，小鼠血液中OGTT葡萄糖的曲線下面積(AUC)。
禁食18小時和最後一次處理後5小時的小鼠OGTT(葡萄糖3g/kg)。
平均值±S.E.和與對照相比的變化(％)
每組動物數6隻。
Student’s t檢驗▲表示與對照相比P＜0.001。
表5(實驗I)
每天兩次口服給予db/db小鼠實施例1的化合物、貝特類(劑量相當於25mg/kg實施例1的化合物)和羅格列酮(5mg/kg)，處理25天後，小鼠的血漿葡萄糖和果糖胺的水平。
採集吸收後狀態(從9a.m.-4.30p.m.禁食)和最後一次處理後7.5小時的樣品。
平均值±S.E.和與對照相比的變化(％)
每組動物數6隻。
Student’s t檢驗■、△和σ分別表示與對照相比P＜0.02、P＜0.01和P＜0.001。
表5a(實驗II)
每天兩次口服給予db/db小鼠實施例1和實施例2的化合物(劑量相當於25mg/kg實施例1的化合物)，處理12天後，小鼠的血漿葡萄糖水平。
採集吸收後狀態(從9a.m.-4.30p.m.禁食)和最後一次處理後7.5小時的樣品。
平均值±S.E.和與對照相比的變化(％)
每組動物數6隻。
Student’s t檢驗▲表示與對照相比P＜0.001。
表6(實驗I)
每天兩次口服給予db/db小鼠實施例1的化合物、貝特類(劑量相當於25mg/kg實施例1的化合物)和羅格列酮(5mg/kg)，處理25天後，小鼠的血漿甘油三酯和HDL-膽固醇的水平。
採集吸收後狀態(從9a.m.-4.30p.m.禁食)和最後一次處理後7.5小時的樣品。
平均值±S.E.和與對照相比的變化(％)
每組動物數6隻。
Student’s t檢驗□、△和σ分別表示與對照相比P＜0.05、P＜0.01和P＜0.001。
表6a(實驗II)
每天兩次口服給予db/db小鼠實施例1和實施例2的化合物(劑量相當於25mg/kg實施例1的化合物)，處理12天後，小鼠的血漿甘油三酯和HDL-膽固醇水平。
採集吸收後狀態(從9a.m.-4.30p.m.禁食)和最後一次處理後7.5小時的樣品。
平均值+S.E.和與對照相比的變化(％)
每組動物數6隻。
Student’s t檢驗△和▲分別表示與對照相比P＜0.01和P＜0.001。
表7(實驗I)
每天兩次口服給予db/db小鼠實施例1的化合物、貝特類(劑量相當於25mg/kg實施例1的化合物)和羅格列酮(5mg/kg)，處理25天後，小鼠最初和最終的體重。
吸收後狀態(從9a.m.-4.30p.m.禁食)的測量值。
平均值±S.E.和與對照相比的變化(％)
每組動物數6隻。
Student’s t檢驗△和σ分別表示與對照相比P＜0.01和P＜0.001。
表7a(實驗II)
每天兩次口服給予db/db小鼠實施例1和實施例2的化合物(劑量相當於25mg/kg實施例1的化合物)，處理12天後，小鼠最初和最終的體重。
吸收後狀態(從9a.m.-4.30p.m.禁食)的測量值。
平均值±S.E.和與對照相比的變化(％)
每組動物數6隻。
Student’s t檢驗□表示與對照相比P＜0.05。
實施例27
瞬時轉染真核細胞以評價PPARα配體的激動劑活性
在該實施例中，證實本發明的化合物也具有PPARα激動劑活性。
PPARα激動劑的鑑定是通過基於細胞生物學技術的體外篩選進行的。
真核細胞的反式激活測定法可定量評價假設配體幫助轉錄因子與其特有的在啟動子內的反應元件相互作用的能力[Sladek R.等，Nuclear ReceptorsA Practical Approach，Oxford Presspp.63-68(1999)]。
因為過氧化物酶體增殖物激活性受體α(PPARα)發揮其轉錄調節功能，因此它與9-順式-視黃酸受體(RXR)的二聚是必需的。所形成的二聚物能夠結合位於靶基因啟動子中的過氧化物酶體增殖物反應元件(PPRE)，僅在因兩個受體中至少一個的配體存在而被激活時[BergerJ.和Moller D.E.，Annu.Rev.Med.53，409-35(2002)]。
反式激活測定法因此要求在預選細胞系中同時存在下列
a)足量PPARα；
b)足量9順式-視黃酸受體(RXR)；
c)包含受位於病毒異源啟動子上遊的PPRE控制的報導基因的嵌合質粒。在我們的實例中，報導基因是氯黴素-乙醯基轉移酶(CAT)。
每當PPARα和RXR的內源水平不足時，可通過含所涉及受體基因的表達載體轉染而從外部補充[Kersten S.和Wahli W.NuclearReceptorsA Practical Approach，Oxford Press 74-76頁(1999)]。
質粒pCH110包含β-半乳糖苷酶基因且與受體基因CAT一起共-轉染，為轉染效率和結果的標準化提供內部對照。
然而，使用該轉染和報導基因系統，不能完全消除由所用細胞系組成型表達的內源受體導致的幹擾。
因此使用選擇性方法，其能使我們避開可能的內源受體導致的幹擾問題。
在該模型中，使用反式激活測定法，其中表達載體mPPARαLBD/Ga14DBD容許轉染細胞合成嵌合蛋白，其中PPARα的配體結合域(LBD)與酵母轉錄因子GAL4的DNA結合域(DBD)融合[Luckow B.等，Nucleic Acids Res.15，5490(1987)]。同時，質粒(pG5CAT)被轉染，其包含5個拷貝的GAL4高親和性結合位點(也稱作UAS，上遊激活序列)，在與CAT報導基因融合的病毒啟動子Elb的上遊[Moya-Camarena S.Y.等，J.Lipid Res.40(8)，1426-33(1999)]。該模型消除了由可能的內源受體所致的幹擾。
這是由於Elb的激活和CAT的產生將僅僅由於GAL4DBD與其特有的反應元件(UAS)的相互作用而發生。因為轉錄因子GAL4不在真核細胞中表達，因此報導基因的反式激活僅當由於配體與PPARα的LBD相互作用，嵌合蛋白PPARα/GAL4識別質粒pG5CAT上的UAS序列時才能發生。連同表達載體和報導載體，還用質粒pCH110轉染細胞，其提供轉染效率和結果標準化的內部對照。
實驗過程
使用猴腎成纖維細胞系(COS-7)[Elbrecht A.等，J.Biol.Chem.274(12)，7913-22(1999)]。用報導載體、編碼融合蛋白Ga14DBD/PPARαLBD的表達質粒和對照載體pCH110共轉染該細胞。使細胞與濃度逐漸增加的研究化合物接觸並評價CAT活性。使用未處理過的細胞作為對照。
細胞培養
按照通常的細胞培養技術培養猴腎成纖維細胞(COS-7)，37℃，5％v/v二氧化碳氣氛，使用3.7g/l碳酸氫鈉、4mM L-穀氨醯胺、4.5g/l葡萄糖、1mM丙酮酸鈉和10％v/v胎牛血清修飾的DMEM(Dulbecco′s修飾的Eagle′s培養基)作為生長培養基，在有鏈黴素100μg/ml和青黴素100U/ml(終濃度)存在的條件下。
COS-7細胞的瞬時轉染
使用由能夠複合DNA並把它轉運到細胞中的脂類的限定混合物組成的轉染試劑FuGENE6(Roche)將細胞共-轉染。轉染之前24小時，以1.2×105個細胞/孔的密度將細胞平板接種在12-孔平板中並在37℃、5％v/v CO2氣氛下維持。轉染之前2小時，更換沒有血清的培養基，然後按照供應商建議的說明用轉染試劑FuGENE6處理細胞。簡單地說，在沒有血清的培養基存在的條件下，將含有0.8μg表達載體、1.6μg報導載體、0.8μg對照載體和9μl FuGENE6試劑/孔的轉染混合物直接加入到細胞中。5小時後，在有或沒有3種不同濃度(2、20和100μM)待測分子存在的條件下，用1ml含血清和抗生素的完全培養基更換轉染培養基。Wy-14，643(2μM)，一種已知的PPARα配體，用作陽性參照化合物。
細胞蛋白提取物的製備和CAT活性的測定
在37℃、5％v/v CO2氣氛中培養48小時後，用1ml磷酸鹽緩衝液(PBS)洗滌該細胞2次並從孔中通過機械方法取出移入TEN緩衝液(三[羥甲基]氨基甲烷10mM pH8，乙二胺-四乙酸1mM pH8、氯化鈉0.1M)中。1000rpm離心3分鐘後，將細胞重懸於65μl溶胞緩衝液(Tris-HCl0.25M，pH8)中，然後經過3次快速的凍-融循環進行溶胞。4℃、15,000rpm離心15分鐘除去不溶性細胞物質(碎片)，回收上清液並用於CAT和β-半乳糖苷酶活性測定。
將細胞提取物在-80℃貯存，直到在75μl終體積中加入甘油(終濃度10％v/v)和β-巰基乙醇(終濃度5mM)後進行測定。
評價CAT活性的測定法是通過運用Sleigh描述的方法[Sleigh M.J.Annal Biochem.，156(1)，251-6(1986)]的變體進行的。簡單地說，將20μl蛋白細胞提取物(預熱至65℃達10分鐘，從而使內部脫乙醯酶活性滅活)加入到含10μl正丁醯基-輔酶A(3.5mg/ml)，5μl[14C]-氯黴素(0.25μCi)和65μl蒸餾H2O的溶液中。37℃培養2小時後，用200μl二甲苯/2，6，10，14-四甲基-十五烷(1∶2v/v)的溶液阻斷反應。
劇烈攪拌並以最大速度離心5分鐘後，將150μl上清液加入到5ml閃爍液中，在β-計數器(閃爍器)下分析，確定酶促反應形成的[14C]丁醯基-氯黴素含量。
測定β-半乳糖苷酶活性的試驗
作為相對於轉染效率CAT活性標準化的內部對照，使用由共-轉染質粒pCH110中相應基因編碼的β-半乳糖苷酶活性。
β-半乳糖苷酶活性是按照Sambrook描述的方法[Sambrook等，Molecular Cloning，A Laboratory Manual，Cold Spring HarborLaboratory Press編(1989)]的變體測量的。簡單地說，將20μl蛋白提取物加入到750μl含1體積的2mg/ml ONPG(O-硝基苯基-β-D-吡喃半乳糖苷)和3體積的「Z緩衝液」(10mM氯化鉀、1mM氯化鎂、50mMβ-巰基乙醇的磷酸鹽緩衝液)的反應緩衝液中。37℃下進行反應並在典型的黃色外觀清晰可見時，通過加入200μl碳酸鈉1M溶液中斷反應。室溫培養樣品10分鐘，然後通過在分光光度計下測量420nm波長處的吸光度(A420)而分析。
下列公式用於CAT測定結果相對於β-半乳糖苷酶活性的標準化
CAT樣品計數/分鐘(cpm)-空白計數/分鐘(cpm)
β-半乳糖苷酶單位*
β-半乳糖苷酶單位*＝A420×稀釋倍數/培養時間(分鐘)
表8舉例給出實施例1、2、4、10、13和18中化合物的PPARα激動劑活性。
表8
mPPARαLBD/Ga14DBD在COS-7細胞中介導的反式激活測定。結果以報導基因CAT的激活百分比表示，通常把在有參照化合物(WY-14，643 2μM)存在的條件下測量的值假定為100％。
實施例28
瞬時轉染真核細胞以評價PPARγ配體的激動劑活性
在該實施例中，證實本發明的多種化合物也具有PPARγ激動劑活性。
PPARγ激動劑的鑑定是通過真核細胞中的特異性反式激活測定法進行的。
因為過氧化物酶體增殖物激活性受體γ(PPARγ)發揮其轉錄調節功能，因此它與9-順式-視黃酸受體(RXR)的二聚是必需的。所形成的二聚物能夠結合位於靶基因啟動子中的過氧化物酶體增殖物反應元件(PPRE)，僅在因兩個受體中至少一個的配體存在而被激活時[Berger J.和Moller D.E.，Annu.Rev.Med.53，409-35(2002)]。
對PPARγ特異性的反式激活測定法因此要求在預選細胞系中同時存在下列
a)足量PPARγ；
b)足量9順式-視黃酸受體(RXR)；
c)包含受位於病毒異源啟動子上遊的PPRE控制的報導基因的嵌合質粒。在我們的實例中，報導基因是氯黴素-乙醯基轉移酶(CAT)。
在所用反式激活測定法中，用表達載體pSG5 Stop-mPPARg1轉染預選細胞，其容許轉染細胞合成PPARγ受體。同時，轉染報導質粒(pBLCAT2-PPRE)，其包含由醯基-CoA氧化酶的基因啟動子分離的過氧化物酶體增殖物反應元件(PPRE)，在與報導基因CAT融合的病毒胸苷激酶(TK)的異源啟動子的上遊。因為RXR受體的內源細胞水平足夠高，無需轉染RXR特異性表達載體。編碼CAT的基因的表達受TK啟動子的控制，其不合任何PPRE。因此，CAT水平的任何增加將是由於基因轉錄的增加，其依賴於PPARγ與RXR的二聚和與過氧化物酶體增殖物反應元件形成的異二聚物鍵。連同表達載體和報導載體，還用質粒pCH110轉染細胞，其提供轉染效率和結果標準化的內部對照。
實驗過程
使用小鼠胚胎成纖維細胞系(NIH-3T3)[Hogan J.C.等，BiochemBiophys Res Commun.287(2)，484-92(2001)]。用報導質粒、編碼PPARγ受體的表達質粒和對照載體pCH110轉染該細胞。使細胞與濃度逐漸增加的試驗化合物接觸並評價CAT活性。使用未處理過的細胞作為對照。
細胞培養
按照通常的細胞培養技術培養小鼠胚胎成纖維細胞(NIH-3T3)，37℃，5％v/v二氧化碳氣氛，使用3.7g/l碳酸氫鈉、4mM L-穀氨醯胺、4.5g/l葡萄糖、1mM丙酮酸鈉和10％v/v小牛血清修飾的DMEM(Dulbeceo′s修飾的Eagle′s培養基)作為生長培養基，在有鏈黴素100μg/ml和青黴素100U/ml(終濃度)存在的條件下。
NIH-3T3細胞的瞬時轉染
使用已在先前實施例中描述過的轉染試劑FuGENE6(Roche)對細胞進行共轉染。轉染之前24小時，以8.0×104個細胞/孔的密度將細胞平板接種在12-孔平板中並在37℃、5％v/v CO2氣氛下維持。轉染之前2小時，更換沒有血清的培養基，然後按照先前實施例所述用轉染試劑FuGENE6處理細胞。5小時後，在有或沒有3種不同濃度(2、20和100μM)待測分子存在的條件下，用1ml含血清和抗生素的完全培養基更換轉染培養基。羅格列酮，一種已知的PPARγ配體，用作陽性參照化合物。
細胞蛋白提取物的製備和CAT活性的測定
完全按先前實施例所述製備細胞蛋白提取物並進行CAT活性測定。
測定β-半乳糖苷酶活性的試驗
作為CAT活性相對於轉染效率標準化的內部對照，使用由共-轉染質粒pCH110中相應基因編碼的β-半乳糖苷酶活性。
完全按照先前實施例所述測量β-半乳糖苷酶活性。
為了使CAT測定結果相對於β-半乳糖苷酶活性標準化，使用先前實施例中描述的公式。
表9舉例給出多種化合物的PPARγ激動劑活性。
表9
PPARγ在NIH-3T3細胞中介導的反式激活測定。
結果以報導基因CAT的激活百分比表示，通常把有參照化合物(羅格列酮，2μM)存在條件下的測量值假定為100％。
在表1-7a中給出的所得結果表明本發明的化合物是用於治療糖尿病和高脂血症、用於增加HDL-膽固醇水平、和用於預防和治療與糖尿病和胰島素抵抗有關的併發症、用於CHD的一級和二級預防的有效藥劑，且可用於脂肪肝的治療。
本發明的目的是藥物組合物，它含有作為其活性成分的至少一種式(I)化合物，單獨或與一種或多種式(I)化合物聯合，或者所述一種或多種式(I)化合物與用於治療本發明所述疾病的其它活性成分，例如具有降低血清葡萄糖和血清脂質活性的其他產品聯合；為分開的劑量形式或適於聯合療法的形式。本發明活性成分將是與藥劑學常規使用的適宜載體和/或賦形劑(如最新版的「Remington’sPharmaceutical Sciences Handbook」中所述的那些)的混合物。本發明組合物含治療有效量的活性成分。劑量由本部門專家例如臨床醫生或初級保健護理醫生根據待治療的疾病類型和患者的狀況確定，或伴隨服用其他活性成分。例如可給予0.01-400mg/天，優選0.1-200mg/天的劑量。
藥物組合物的實施例是允許口服或非腸道—靜脈內、肌內、皮下、經皮給藥的那些。適用於此目的的適宜藥物組合物是片劑、硬膠囊或軟膠囊、粉劑、溶液、混懸液、糖漿劑和用於當場配成液體藥劑的固體形式。非腸道給藥的組合物是，例如，所有的肌內、靜脈內、皮下可注射形式，或其形式為溶液、混懸液或乳液。還可提及脂質體製劑。其它形式是用於控釋活性成分或用於口服給藥的片劑，用適宜塗層包衣的片劑、微囊化粉劑、環糊精複合物，和長效製劑，例如，皮下長效製劑，如長效注射劑或植入製劑。
權利要求
1.式(I)的化合物及其藥學上可接受的鹽、外消旋混合物、各對映異構體、立體異構體或幾何異構體和互變異構體用於製備預防和治療高脂血症和高血糖症的藥物的用途
其中
R是-H；可能被一個或多個滷素基團、硝基、羥基、烷基和烷氧基取代的單環、雙環或三環的芳基或雜芳基，其中所述烷基和烷氧基可能被一個或多個滷素基團取代；
n是0-3；
p是0-1；
X是-OH、-O-C1-C4烷基；
R1和R2，其可以相同或不同，選自-H；C1-C5烷基，-COX；
Q選自NH、O、S、-NHC(O)O-、-NHC(O)NH-、-NHC(O)S-、-OC(O)NH-、-NHC(S)O-、-NHC(S)NH-、-C(O)NH-；
且Y是O、S。
2.根據權利要求1所述的用途，其中R是可能被一個或多個滷素原子、烷基、烷氧基或滷代烷基優選甲基、甲氧基或三氟甲基、硝基、單-或二-烷基胺取代的芳基，優選p是1，n是0、1或2，且Q是氧。
3.根據權利要求1所述的用途，其中R是雜芳基，優選含有氮作為雜原子，例如，吲哚和咔唑，經由所有容許的位置與分子的其餘部分結合；特別優選的是1-吲哚基和1-咔唑基，且優選p是1，n是0、1或2，且Q是氧。
4.根據權利要求1所述的用途，其中所述化合物選自
i.2-[3-[2-(4-氯苯基)乙氧基]苯硫基]異丁酸甲酯(ST2195)；
ii.2-[3-[2-(4-氯苯基)乙氧基]苯硫基]-2-甲基-丙酸(ST2518)；
iii.2-[4-[2-(4-氯苯基)乙氧基]苯硫基]異丁酸甲酯(ST1929)；
iv.2-[3-(2-(2，4-二氯苯基)乙氧基)苯硫基]異丁酸甲酯(ST2534)；
v.2-[4-(2-(2，4-二氯苯基)乙氧基)苯硫基]異丁酸甲酯(ST2531)；
vi.2-[3-(2-(咔唑-9-基)乙氧基)苯硫基]異丁酸甲酯(ST2365)；
vii.2-[4-(2-(咔唑-9-基)乙氧基)苯硫基]異丁酸甲酯(ST2387)；
viii.2-[4-[2-(1-吲哚基)乙氧基]苯硫基]異丁酸甲酯(ST1983)；
ix.2-[3-[2-(1-吲哚基)乙氧基]苯硫基]異丁酸甲酯(ST2394)；
x.2-[3-[2-(2-萘基)乙氧基]苯硫基]異丁酸甲酯(ST2167)；
xi.2-[4-[2-(2-萘基)乙氧基]苯硫基]異丁酸甲酯(ST2011)；
xii.2-[4-[2-(4-氯苯基)乙氧基]苯硫基]-2-甲基-丙酸(ST2505)；
xiii.2-[3-(2-(2，4-二氯苯基)乙氧基)苯硫基]-2-甲基丙酸(ST2653)；
xiv.2-[4-(2-(2，4-二氯苯基)乙氧基)苯硫基]-2-甲基丙酸(ST2652)；
xv.2-[3-(2-(咔唑-9-基)乙氧基)苯硫基]-2-甲基丙酸(ST2618)；
xvi.2-[4-[2-(1-吲哚基)乙氧基]苯硫基]-2-甲基丙酸(ST2622)；
xvii.2-[3-[2-(1-吲哚基)乙氧基]苯硫基]-2-甲基丙酸(ST2651)；
xviii.2-[3-[2-(2-萘基)乙氧基]苯硫基]-2-甲基-丙酸(ST2609)；
xix.2-[4-[2-(2-萘基)乙氧基]苯硫基]-2-甲基-丙酸(ST2036)；
xx.2-[4-[2-(1-(5-甲氧基)吲哚基)乙氧基]苯硫基]異丁酸甲酯(ST2577)；
xxi.2-[4-[2-(1-(5-苄氧基)吲哚基)乙氧基]苯硫基]異丁酸甲酯(ST2562)；
xxii.2-[3-[5-(4-硝基苯基)糠氧基]苯硫基]異丁酸甲酯(ST2501)；
xxiii.2-[4-[2-(1-(5-甲氧基)吲哚基)乙氧基]苯硫基]異丁酸(ST2733)；
xxiv.2-[4-[2-(1-(5-苄氧基)吲哚基)乙氧基]苯硫基]-2-甲基丙酸(ST2740)；
xxv.2-甲基-2-[3-[5-(4-硝基苯基)糠氧基]苯硫基]丙酸(ST2753)。
5.根據權利要求1所述的用途，其中所述化合物是2-[3-[2-(4-氯苯基)乙氧基]苯硫基]異丁酸甲酯(ST2195)。
6.根據權利要求1所述的用途，其中所述化合物是2-[3-[2-(4-氯苯基)乙氧基]苯硫基]-2-甲基丙酸(ST2518)。
7.根據權利要求1所述的用途，用於預防和治療糖尿病，特別是2型糖尿病；糖尿病的微血管併發症，如糖尿病性視網膜病、糖尿病性神經病和糖尿病性腎病；糖尿病的大血管併發症，如動脈粥樣硬化、外周血管病、心肌梗塞和中風。
8.根據權利要求1所述的用途，用於預防和治療症候群X、多囊性卵巢症候群、肥胖和各種形式的胰島素抵抗。
9.根據權利要求1所述的用途，用於預防和治療脂肪肝、特別是NAFLD(非酒精性脂肪肝疾病)和NASH(非酒精性脂肪肝炎)。
10.根據權利要求1所述的用途，用於預防和治療高脂血症、高膽固醇血症、高血壓，用於冠心病(CHD)的一級和二級預防，並用於提高HDL-膽固醇水平。
11.根據權利要求1所述的用途，其中所述藥物是片劑、軟膠囊或硬膠囊、粉劑、溶液、混懸液、糖漿劑、用於臨時配成液體製劑的固體形式、乳液、脂質體製劑、活性成分的控釋形式、用適宜塗層包衣的包衣片劑、微囊化的粉劑、環糊精複合物、長效製劑形式，例如，皮下長效製劑形式，如長效注射劑或植入製劑。
12.根據權利要求1所述的用途，其中所述藥物可口服或非腸道給藥。
13.根據權利要求1所述的用途，其中式(I)化合物以0.01-400mg的劑量存在。
14.根據權利要求1所述的用途，其中式(I)化合物以0.1-200mg的劑量存在。
15.含有作為其活性成分的至少一種式(I)化合物以及混合一種或多種藥學上可接受的載體和/或成分的藥物組合物。
全文摘要
本發明描述了式(I)的α－苯硫基羧酸和α－苯氧基羧酸的衍生物的用途其中的取代基具有正文中描述的含義，用於製備預防和治療糖尿病，特別是2型糖尿病，其併發症，各種形式的胰島素抵抗和高脂血症的藥物。
文檔編號C07C327/00GK1728992SQ200380106699
公開日2006年2月1日 申請日期2003年12月16日 優先權日2002年12月19日
發明者F·基安尼斯, E·塔索尼, M·O·緹恩緹, P·派索託, N·德爾沃莫, A·F·斯阿羅尼, T·布魯尼緹, F·M·米拉佐 申請人:希格馬託製藥工業公司