微生物製劑菌體的濃縮方法

2023-10-26 13:21:17 3

專利名稱：微生物製劑菌體的濃縮方法
技術領域：
本發明屬於應用微生物技術領域，涉及一種水產養殖、畜牧養殖、汙水淨化應用的 微生物製劑菌體的濃縮方法。
背景技術：
微生物製劑由於具有無毒副作用，無殘留汙染，不產生抗性等優點，在水產養殖， 畜牧養殖及環境保護方面起著越來越重要的作用。隨著微生物製劑的普及和升溫，人們為 了降低運輸儲藏成本和使用成本，提高製劑濃度，提高使用效果，對發酵所得菌體進行了不 同方式和不同程度的濃縮。目前微生物製劑的濃縮方法主要有兩種一是物理方法，包括離心法和過濾法，這 種濃縮方法設備投入高，運行成本也高；二是化學方法主要採用明礬、聚鋁、聚鐵等高分 子化合物作為絮凝劑，這些絮凝劑本身具有毒性，對微生物產品有毒害作用，同時對微生物 產品的使用對象及其環境也有不利影響。因此，針對微生物菌劑研製出一種高效經濟，安全 無毒的濃縮方法是本領域技術人員有待解決的難題之一。

發明內容
本發明所要解決的技術問題是針對以上現有技術存在的問題，提出一種微生物 製劑菌體的濃縮方法，簡單易行，無毒高效，能將微生物菌液中的菌體濃縮20-60倍，細胞 得率可達95%以。本發明解決以上技術問題的技術方案是微生物製劑菌體的濃縮方法，按以下步驟進行(1)將發酵好的微生物菌液裝入容器中；(2)稱取海藻酸鈉，用蒸餾水配製成20g/L 30g/L的海藻酸鈉溶液；(3)稱取羧甲基纖維素鈉，用蒸餾水配製成20g/L 30g/L的羧甲基纖維素鈉溶 液；(4)按照海藻酸鈉溶液微生物菌液=1 10 1 20的比例將步驟(2)所得海 藻酸鈉溶液緩慢加入步驟(1)的微生物菌液中，使海藻酸鈉在微生物菌液中的濃度為2g/ L 3g/L，攪拌靜置使菌體與海藻酸鈉粘合，得到菌體與海藻酸鈉粘合的微生物菌液；(5)按照羧甲基纖維素鈉溶液步驟(4)所得菌體與海藻酸鈉粘合的微生物菌液 =1 10 1 20的比例將步驟(3)所得羧甲基纖維素鈉溶液緩慢加入步驟(4)所得菌 體與海藻酸鈉粘合的微生物菌液中，使羧甲基纖維素鈉在微生物菌液中的濃度為2g/L 3g/L，攪拌靜置後，用虹吸管吸掉上部清液，收集沉澱即為濃縮菌體。這樣，本發明採用海藻酸鈉與羧甲基纖維素鈉為絮凝劑來濃縮微生物菌劑，簡單 易行，無毒高效，細胞得率達到了 95%以，能將微生物菌液中的菌體濃縮20 60倍。作為本發明進一步限定的技術方案步驟(4)中，海藻酸鈉溶液緩慢加入微生物菌液中後，先快速攪拌5 10分鐘，隨後緩慢攪拌30 60分鐘，隨後靜置1 2小時使菌體與海藻酸鈉粘合。步驟(5)中，羧甲基纖維素鈉溶液緩慢加入步驟(4)所得菌體與海藻酸鈉粘合的 微生物菌液中後，先快速攪拌5 10分鐘，隨後緩慢攪拌30 60分鐘，最後靜置24 36 小時，再用虹吸管吸掉上清液，收集沉澱即為濃縮菌體。步驟(1)中，容器為圓柱形容器。本發明的優點是(1)成本低廉本發明中需要的設備投入很少，耗能少，運行成 本低，原材料來源廣泛，成本低廉；(2)無毒無害，安全性高本發明中所用的海藻酸鈉與羧 甲基纖維素鈉都是安全無毒的食品添加劑，作為增稠劑，粘合劑廣泛的應用於食品，醫藥等 行業；(3)濃縮效率高本發明的方法能將液體微生物菌劑濃縮20 60倍，濃縮回收率達 到95 %以上，具有高效的濃縮效果；(4)操作簡便，易於大規模生產本發明操作簡便，成 本低，克服了傳統的離心法和過濾法設備投資大，耗能高成本高的缺點，非常便於大規模生 產。
具體實施例方式實施例一光合細菌菌劑的濃縮將光合細菌菌劑成品100L倒入圓柱型容器中，在圓柱型容器中抽取IOmL菌液對 其進行菌體濃度檢測，檢測方法按照NY527-2002《光合細菌菌劑》標準中的MPN5管法進行； 稱取海藻酸鈉和羧甲基纖維素鈉，用蒸餾水分別單獨配製成20g/L溶液；先加入海藻酸鈉 溶液，按海藻酸鈉溶液微生物菌液=1 10的比例的將海藻酸鈉溶液緩慢加入光合細菌 微生物菌液中，先快速攪拌5分鐘，隨後緩慢攪拌30分鐘，靜置1小時使菌體與海藻酸鈉粘 合充分；再加入羧甲基纖維素鈉溶液，按羧甲基纖維素鈉溶液微生物菌液=1 10的比 例緩慢加入菌液中，先快速攪拌5分鐘，隨後緩慢攪拌30分鐘，隨後靜置24小時，用虹吸管 吸掉上清液，收集沉澱，約得到4. 6L的濃縮的光合細菌菌劑。吸取濃縮後的光合細菌菌劑 10mL，測定濃縮後菌體濃度。檢測結果如下表表1 實施例二枯草芽孢桿菌菌劑的濃縮將枯草芽孢桿菌菌劑成品IOOL倒入圓柱型容器中，在圓柱型容器中抽取IOmL菌 液對其進行菌體濃度檢測，檢測方法按照NYT 1467-2007《飼料微生物添加劑-地衣芽孢 桿菌》標準中的方法進行；稱取海藻酸鈉和羧甲基纖維素鈉，用蒸餾水分別單獨配製成25g/ L溶液；先加入海藻酸鈉溶液，按海藻酸鈉溶液微生物菌液=1 15的比例的將海藻酸鈉溶液緩慢加入光合細菌微生物菌液中，先快速攪拌8分鐘，隨後緩慢攪拌45分鐘，隨後靜 置1. 5小時使菌體與海藻酸鈉粘合充分；再加入羧甲基纖維素鈉溶液，按羧甲基纖維素鈉 溶液微生物菌液=1 20的比例緩慢加入菌液中，先快速攪拌10分鐘，隨後緩慢攪拌60 分鐘，隨後靜置30小時，用虹吸管吸掉上清液，收集沉澱，用虹吸管吸掉上清液，收集沉澱， 約得到4. 4L的濃縮的枯草芽孢桿菌菌劑。吸取濃縮後的枯草芽孢桿菌菌劑10mL，測定濃縮 後菌體濃度。檢測結果如下表
表 2 實施例三產朊假絲酵母菌菌劑的濃縮將產朊假絲酵母菌菌劑成品IOOL倒入圓柱型容器中，在圓柱型容器中抽取IOmL 菌液對其進行菌體濃度檢測，檢測方法按照GB/T4789. 15-2003《食品衛生微生物學檢驗黴 菌和酵母計數》標準進行；稱取海藻酸鈉和羧甲基纖維素鈉，用蒸餾水分別單獨配製成30g/ L溶液；先加入海藻酸鈉溶液，按海藻酸鈉溶液微生物菌液=1 20的比例的將海藻酸 鈉溶液緩慢加入產朊假絲酵母菌微生物菌液中，先快速攪拌10分鐘，隨後緩慢攪拌60分 鍾，靜置2小時使菌體與海藻酸鈉粘合充分；再加入羧甲基纖維素鈉溶液，按羧甲基纖維素 鈉溶液微生物菌液=1 15的比例緩慢加入菌液中，先快速攪拌8分鐘，隨後緩慢攪拌 40分鐘，隨後靜置36小時，用虹吸管吸掉上清液，收集沉澱，約得到3. 2L的濃縮的產朊假絲 酵母菌菌劑。吸取濃縮後的產朊假絲酵母菌菌劑10mL，測定濃縮後菌體濃度。檢測結果如 下表表3 本發明還可以有其它實施方式，凡採用同等替換或等效變換形成的技術方案，均 落在本發明要求保護的範圍之內。
權利要求
微生物製劑菌體的濃縮方法，其特徵在於按以下步驟進行(1)將發酵好的微生物菌液裝入容器中；(2)稱取海藻酸鈉，用蒸餾水配製成20g/L～30g/L的海藻酸鈉溶液；(3)稱取羧甲基纖維素鈉，用蒸餾水配製成20g/L～30g/L的羧甲基纖維素鈉溶液；(4)按照海藻酸鈉溶液∶微生物菌液＝1∶10～1∶20的比例將步驟(2)所得海藻酸鈉溶液緩慢加入步驟(1)的微生物菌液中，使海藻酸鈉在微生物菌液中的濃度為2g/L～3g/L，攪拌靜置使菌體與海藻酸鈉粘合，得到菌體與海藻酸鈉粘合的微生物菌液；(5)按照羧甲基纖維素鈉溶液步驟(4)所得菌體與海藻酸鈉粘合的微生物菌液＝1∶10～1∶20的比例將步驟(3)所得羧甲基纖維素鈉溶液緩慢加入步驟(4)所得菌體與海藻酸鈉粘合的微生物菌液中，使羧甲基纖維素鈉在微生物菌液中的濃度為2g/L～3g/L，攪拌靜置後，用虹吸管吸掉上部清液，收集沉澱即為濃縮菌體。
2.如權利要求1所述的微生物製劑菌體的濃縮方法，其特徵在於所述步驟(4)中，海 藻酸鈉溶液緩慢加入微生物菌液中後，先快速攪拌5 10分鐘，隨後緩慢攪拌30 60分 鍾，隨後靜置1 2小時使菌體與海藻酸鈉粘合。
3.如權利要求1所述的微生物製劑菌體的濃縮方法，其特徵在於所述步驟(5)中，羧 甲基纖維素鈉溶液緩慢加入步驟(4)所得菌體與海藻酸鈉粘合的微生物菌液中後，先快速 攪拌5 10分鐘，隨後緩慢攪拌30 60分鐘，最後靜置24 36小時，再用虹吸管吸掉上 清液，收集沉澱即為濃縮菌體。
4.如權利要求1所述的微生物製劑菌體的濃縮方法，其特徵在於所述步驟(1)中，容 器為圓柱形容器。
全文摘要
本發明屬於應用微生物技術領域，涉及一種微生物製劑菌體的濃縮方法，按以下步驟進行用蒸餾水配製成20g/L～30g/L海藻酸鈉溶液；用蒸餾水配製成20g/L～30g/L甲基纖維素鈉；按照海藻酸鈉溶液∶微生物菌液＝1∶10的比例的將海藻酸鈉糊狀體緩慢加入微生物菌液中，使海藻酸鈉在菌液中濃度為2g/L～3g/L，攪拌靜置使菌體與海藻酸鈉粘合；按照羧甲基纖維素鈉溶液∶微生物菌液＝1∶10的比例的的將羧甲基纖維素鈉溶液緩慢加入微生物菌液中，使羧甲基纖維素鈉在菌液中濃度為2g/L～3g/L，攪拌靜置後，用虹吸管吸掉上清液，收集沉澱即為濃縮菌體。本發明簡單易行，無毒高效，能將微生物菌液中的菌體濃縮20～60倍，細胞得率可達95％以。
文檔編號C12N1/00GK101914446SQ20101023308
公開日2010年12月15日 申請日期2010年7月22日 優先權日2010年7月22日
發明者孫義 申請人:領綠生物鎮江有限公司