具有酪氨酸酶抑制活性的新1,3－二苯基丙烷衍生物及其製備方法

2023-05-27 17:37:26

專利名稱：具有酪氨酸酶抑制活性的新1,3－二苯基丙烷衍生物及其製備方法
技術領域：
本發明涉及一種由下式(Ⅰ)表示的具有酪氨酸酶抑制活性的新1,3-二苯基丙烷衍生物

其中=表示雙鍵或單鍵，R1表示氫或C1-C10烷基，R2表示C1-C5烷基或C1-C5烷氧基烷基，或R1和R2一起表示可以被C1-C5烷基取代的5-6元雜環，且該雜環包含氧作為雜原子，R3表示氫或C1-C7烷基，R4表示氫、羥基、或氧代，和R5和R6彼此獨立地表示氫或C1-C5烷基。
本發明還涉及製備如上定義的式(Ⅰ)化合物的新方法。
背景技術：
黑素是通過位於色素細胞中的酪氨酸酶的作用將酪氨酸轉化成多巴(氨基二氧環己二烯丙酸)，然後通過非酶氧化而形成。黑素分布在整個皮膚中，並具有保護身體不受各種刺激的重要功能。然而，據報導黑素瘤與黑素的過量產生有密切關係，並且還可能導致黑化皮膚、雀斑等等。因此，近些年防止黑素過量形成的各種化妝品和藥物得到廣泛的開發。
氫醌是迄今主要使用的用於黑素過量形成的防止劑。但是這種化合物還表現出諸如使黑素退化或致死突變、細胞功能破壞等副作用，因此目前在韓國、日本等國氫醌被禁止在化妝品中使用(參見J.Soc.CosmetChem.,42,361,1991)。此外，一種氫醌的糖衍生物，熊果苷已被開發成為商品，但被認為具有很小的增白效果，而抗壞血酸、曲酸等具有較差的產品穩定性以致使用範圍受到限制。自古以來，眾所周知，甘草根、桑白皮等等的提取物具有皮膚增白的效果。但是，這些提取物根據產地會非經常性地表示出較差的效果，以致難於保持產品質量的穩定(參見Fragrance J.,6,59,1990)。從構樹中提取的Carzinol F(參見Chem.Parm,Bull.,34(5),1968,1986；Cosmetics Toiletries,101,51,1995)由於對酪氨酸酶具有良好的抑制活性而被商品化。但該物質也具有難以保持產品質量穩定的問題，因為Carzinol F也是一種提取物。具體說，無法獲得足夠的Carzinol F的刺激性和穩定性數據，並且它屬於異戊二烯基兒茶酚族的化合物而具有不易合成的缺點。
發明公開因此，本發明者作了深入的研究，以便開發出一種具有通過少量便能產生卓越酪氨酸酶抑制活性的新化合物。而且所希望的化合物應當由起始原料容易合成並且穩定。在研究過程中，本發明者分析了已知具有增白作用的各種天然物質的效果和結構。結果，我們開發出式(Ⅰ)的新1,3-二苯基丙烷衍生物，它能夠滿足上述目的，由此完成本發明。
本發明的目的是提供一種由下式(Ⅰ)表示的新1,3-二苯基丙烷衍生物

其中=表示雙鍵或單鍵；R1表示氫或C1-C10烷基；R2表示C1-C5烷基或C1-C5烷氧基烷基，或R1和R2一起表示可以被C1-C5烷基取代的5-6元雜環，且該雜環包含氧作為雜原子，R3表示氫或C1-C7烷基；R4表示氫、羥基、或氧代，並且R5和R6彼此獨立地表示氫或C1-C5烷基。
在對上式(Ⅰ)化合物取代基的定義中，單獨使用的或以複合形式如「烷氧基」或「烷氧基烷基」中使用的術語「烷基」是指直鏈或支鏈的飽和烴基，如甲基、乙基、正丙基、異丙基或幾種丁基異構體。
本發明的另一個目的是提供一種製備式(Ⅰ)化合物的新方法。發明的最佳實施方式在如上定義的式(Ⅰ)的新化合物中，優選的化合物包括其中R1表示氫、甲基或乙基，R2表示甲基，或R1和R2一起表示

，R3表示氫或甲基，R4表示氫或羥基，R5和R6彼此獨立地表示甲基的化合物。
在式(Ⅰ)的化合物中，由下式(Ⅰa)表示的化合物，其中R4是氫，可以按下面的反應式1來方便地製得，該反應式為將下式(Ⅳ)表示的化合物在溶劑中還原成下式(Ⅴ)表示的化合物，然後去除保護基。
反應式1

其中P1、P2和P3是羥基保護基，即P1表示苄基、甲基、乙基、四氫吡喃基、甲氧基甲基、甲氧基乙氧基甲基或對甲氧基苄基，
P2表示苄基、甲基或乙基，P3表示苄基、四氫吡喃基、甲氧基甲基、甲氧基乙氧基甲基或對甲氧基苄基，R1-R3、R5和R6如前述定義。
下面將較具體解釋上述反應式1的過程。
在將化合物(Ⅳ)還原製備成化合物(Ⅴ)的反應步驟中，可以優選使用醚如乙醚、四氫呋喃(THF)作為溶劑，並且可以優選使用氫化鋁鋰作為還原劑。最好在-30至30℃的溫度範圍下進行反應。反應完成之後，將化合物(Ⅴ)中包含的保護基去除，得到化合物(Ⅰa)。根據所要去除的保護基，通過常規已知的方法可方便地將保護基去除。本領域的普通技術人員可以選擇出合適的保護條件。具體說，當保護基是苄基時，可以通過在乙酸乙酯中進行氫化反應或通過在鹽酸和乙酸的溶劑混合物中回流製備化合物(Ⅰa)。
化合物(Ⅳ)至化合物(Ⅴ)的還原反應通常可以根據前述過程進行。然而，化合物(Ⅴ)還可以通過預先將化合物(Ⅳ)的雙鍵經過氫化(H2,Pd-C)還原得到下式(Ⅴ′)表示的酮化合物，然後將化合物(Ⅴ′)的酮基轉化成化合物(Ⅴ)的醇基而製備。
另一方面，由下式(Ⅰb)表示的化合物(其中R4是氧代)可以通過將化合物(Ⅴ′)包含的保護基去除而不是將其還原而製得。化合物(Ⅰb)還可以在氫硼化鈉或氫化鋁鋰存在下還原成化合物(Ⅰa)。
上述解釋的過程可以總結成下面的反應式2。
反應式2

其中P1、P2、P3、R1-R3、R5和R6如前述所定義。
在上述反應式2中，化合物(Ⅳ)還原成化合物(Ⅴ′)可以通過在常溫常壓下將化合物(Ⅳ)包含的雙鍵在如乙酸乙酯的溶劑中氫化2小時而實現。通過氫硼化鈉或氫化鋁鋰處理，將酮化合物(Ⅴ′)還原成醇化合物(Ⅴ)。通過在化合物(Ⅴ′)上實行脫保護而獲得化合物(Ⅰb)的過程和上述反應式1的過程一樣。具體說，當保護基是苄基時，化合物(Ⅰb)可以通過(ⅰ)在常溫和2-4大氣壓下將化合物(Ⅴ′)在乙酸乙酯溶劑中氫化10-15小時，或者通過(ⅱ)在35-55℃和常壓下於鹽酸和低級醇(甲醇、乙醇、異丙醇等)的溶劑混合物中氫化20分鐘-1小時而製備，或者還可以通過在條件(ⅰ)和(ⅱ)條件下將化合物(Ⅳ)氫化而直接獲得化合物(Ⅰb)。
在反應式1中作為起始原料使用的化合物(Ⅳ)可以按照下面描述的反應式3製備，該反應式是通過將式(Ⅱ)化合物和式(Ⅲ)化合物在鹼的存在下在溶劑中縮合。
反應式3

其中P1、P2、P3、R2、R5和R6如前述所定義。
在該反應中，優選使用選自乙醇、四氫呋喃和二甲基甲醯胺的一種或幾種作為溶劑，並且使用選自氫氧化鈉、氫氧化鉀和氫化鈉中的一種或幾種作為鹼。通過攪拌反應物約5-24小時獲得所需產物。當P1和P2各自不同時，化合物(Ⅱ)可由現有的化合物容易製得(參見Chem.Ber.,95.1413,1962；J.Med.Chem.,34,2152,1991)。
在式(Ⅰa)的化合物中，其中R1和R2一起形成雜環的化合物可以通過使用下式(Ⅱa)表示的化合物代替使用式(Ⅱ)的化合物，按照上述相同的過程製備(參見J.Chem.Soc.Perkin Trans I,1437,1981)。

最後，由下式(Ⅰc)表示的化合物，其中R4是氫，可以按照下面描述的反應式4進行製備，該反應式是通過將化合物(Ⅴ)在酸的存在下於溶劑中脫水，形成由下式(Ⅵ)表示的化合物，然後將這樣製成的化合物(Ⅵ)還原和脫保護。
反應式4

其中P1-P3、R1-R3、R5和R6如前述所定義。
下面將較具體解釋反應式4描述的過程。
在選自硫酸、磷酸和對甲苯磺酸的一種或幾種酸的存在下，將化合物(Ⅴ)在選自苯、甲苯和二甲苯的一種或幾種溶劑中脫水，得到化合物(Ⅵ)。這個脫水過程優選在80-100℃下進行。將化合物(Ⅵ)通過氫化反應，然後通過去除保護基，獲得所需化合物(Ⅰc)。去除保護基的過程按照反應式1的相同過程進行。
根據上述過程製備的化合物(Ⅰ)的典型實例在下表中列出。
表1

以下，本發明者按照下述過程鑑別了本發明的化合物(Ⅰ)對酪氨酸酶的抑制活性。所說過程是，將樣品引入微板上，向其中加入磷酸緩衝液(pH6.8)和L-酪氨酸溶液。向上述混合物添加酪氨酸酶溶液開始酶反應，然後在475nm吸光度下測定，計算酪氨酸酶抑制率(％)(參見實驗實施例1)。
另外，為測定化合物(Ⅰ)對黑素生物合成的抑制活性，將該化合物添加到包含B-16黑素瘤細胞的培養基中並且培養。然後，將細胞離心提取黑素，並根據吸光度測定黑素的產生量(參見實驗實施例2)。
結果，鑑定出本發明的式(Ⅰ)化合物對酪氨酸酶和黑素生物合成具有比現有增白物質更優越或相似的抑制作用。因此，具有這種效果的本發明的化合物可以應用於藥品、非藥用供給品和化妝品。化合物(Ⅰ)的使用劑量可以隨製劑的類型、使用目的等有所不同。
本發明將通過以下製備例、實施例和實驗實施例作更具體的解釋。但應當指出這些實例旨在舉例說明，而沒有以任何方式限制本發明範圍的目的。製備例1合成3-(2,4-二苄氧基-苯基)-1-(2,5-二苄氧基-3,4,6-三甲基-苯基)-丙烯酮

將1.7g(4.54mmol)的1-(2,5-二苄氧基-3,4,6-三甲基-苯基)-乙酮和2.9g(9.08mmol)的2,4-二苄氧基-苯甲醛溶解於32ml乙醇和四氫呋喃的混合溶劑中(1/1,v/v))，向其中緩慢滴加6ml的50％氫氧化鈉水溶液。添加完畢之後，將反應混合物在常溫下攪拌16小時。通過減壓蒸餾除去溶劑，並將所得殘餘物用25ml水稀釋，然後用10％鹽酸水溶液中和至pH 7。用乙酸乙酯萃取該反應溶液，然後減壓蒸餾除去包含在其中的溶劑。將所得的具有高粘度的混合物進行矽膠柱色譜純化(洗脫液正己烷/乙酸乙酯=7/1,v/v)，獲得1.8g(2.61mmol，產率58％)標題化合物。實施例1合成4-[3-羥基-3-(2,5-二羥基-3,4,6-三甲基苯基)-丙基]-苯-1,3-二酚步驟1製備3-(2,4-二苄氧基-苯基)-1-(2,5-二苄氧基-3,4,6-三甲基-苯基)丙-1-醇

方法1將0.57g(0.83mmol)製備例1製備的3-(2,4-二苄氧基-苯基)-1-(2,5-二苄氧基-3,4,6-三甲基-苯基)-丙烯酮溶解在5ml無水四氫呋喃中，並在-30℃下一點一點加入0.1g(2.52mmol)氫化鋁鋰(LAH)，同時攪拌。將反應溶液攪拌1小時，將0.1ml水、0.1ml的15％氫氧化鈉水溶液和0.3ml水依次加入溶液中，然後將整個混合物攪拌另外30分鐘。濾掉所得的沉澱物並將濾液蒸餾，獲得白色固體，然後通過矽膠柱色譜純化(洗脫液正己烷/乙酸乙酯=5/1,v/v)，獲得0.56g(產率98％)的標題化合物。方法2將0.15g(0.22mmol)製備例1製備的3-(2,4-二苄氧基-苯基)-1-(2,5-二苄氧基-3,4,6-三甲基-苯基)-丙烯酮溶解在4ml乙酸乙酯(EtOAc)中。向該溶液緩慢添加5ml的10％鈀-碳催化劑，在加壓的氫氣氛(2大氣壓)下反應30分鐘。用50ml乙酸乙酯稀釋反應溶液，然後過濾。將濾液減壓蒸餾，得到0.17g的3-(2,4-二苄氧基-苯基)-1-(2,5-二苄氧基-3,4,6-三甲基-苯基)丙酮。將0.17g(0.22mmol)這樣獲得的化合物溶解在2ml甲醇中，0℃下向其中一點一點加入20mg(0.53mmol)的氫硼化鈉(NaBH4)。混合物在0℃下攪拌10分鐘，然後通過減壓蒸餾除去溶劑。殘餘物用10ml水稀釋，用乙酸乙酯萃取並通過無水硫酸鈉乾燥。減壓蒸餾掉溶劑，並對殘餘物進行矽膠柱色譜純化(洗脫液正己烷/乙酸乙酯=1/1,v/v)，獲得0.1g(產率66％)的標題化合物。
步驟2製備4-[3-羥基-3-(2,5-二羥基-3,4,6-三甲基-苯基)-丙基]-苯-1,3-二酚

將0.31g(0.45mmol)的3-(2,4-二苄氧基-苯基)-1-(2,5-二苄氧基-3,4,6-三甲基-苯基)-丙-1-醇溶解在6ml乙酸乙酯中。向該溶液緩慢添加10mg的10％鈀-碳催化劑，在加壓的氫氣氛(4大氣壓)下反應12.5小時。反應溶液用50ml乙酸乙酯稀釋，然後過濾。將濾液減壓蒸餾，獲得0.14g(產率100％)標題化合物。實施例2合成4-[3-(2,5-二羥基-3,4,6-三甲基苯基)-丙基]-苯-1,3-二酚

將2.39g(3.46mmol)的3-(2,4-二苄氧基-苯基)-1-(2,5-二苄氧基-3,4,6-三甲基-苯基)丙-1-醇用100ml無水苯稀釋，並加入30mg對甲苯磺酸。在回流下將混合物攪拌4小時，將水除去。將這樣製得的溶液冷卻至室溫，並用飽和的碳酸氫鈉水溶液洗滌一次。用二氯甲烷萃取洗液，並將萃取物和原始有機層合併。然後，將合併的混合物乾燥，減壓蒸餾並進行矽膠柱色譜純化(洗脫液正己烷/乙酸乙酯=10/1,v/v)，得到2.1g(產率90％)4-[3-(2,5-二苄氧基-3,4,6-三甲基-苯基)-烯丙基]-1,3-二苄氧基苯。將2.1g(3.12mmol)這樣獲得的化合物用30ml乙酸乙酯稀釋，向其中緩慢加入45mg的10％鈀催化劑。所得溶液在60psi氫氣壓下攪拌72小時，用50ml乙酸乙酯稀釋，然後過濾。濾液減壓蒸餾並進行矽膠柱色譜純化(洗脫液正己烷/乙酸乙酯=1/1,v/v)，得到0.74g(產率79％)標題化合物。製備例2合成3-(2,4-二苄氧基-苯基)-1-(5-苄氧基-2-甲氧基-3,4,6-三甲基-苯基)-丙烯酮

將0.23g(0.77mmol)的1-(5-苄氧基-2-甲氧基-3,4,6-三甲基-苯基)-乙酮和0.62g(1.94mmol)的2,4-二苄氧基-苯甲醛溶解於7ml乙醇和四氫呋喃的混合溶劑中(1/1,v/v)，然後將1.5ml的50％氫氧化鈉水溶液緩慢滴加在其中。添加完畢之後，混合物在常溫下攪拌16小時。除去包含在其中的溶劑，用水稀釋殘餘物，並使用10％鹽酸水溶液中和至pH7。用乙酸乙酯萃取該溶液，並減壓蒸餾除去溶劑。將所得的具有高粘度的殘餘物進行矽膠柱色譜純化(洗脫液正己烷/乙酸乙酯=7/1,v/v)，獲得0.30g(產率65％)標題化合物。實施例3合成4-[3-羥基-3-(5-羥基-2-甲氧基-3,4,6-三甲基-苯基)-丙基]-苯-
合成4-[3-羥基-3-(5-羥基-2-甲氧基-3,4,6-三甲基-苯基)-丙基]-苯-1,3-二酚

將290mg(0.48mmol)製備例2製備的3-(2,4-二苄氧基-苯基)-1-(5-苄氧基-2-甲氧基-3,4,6-三甲基-苯基)-丙烯酮溶解在5ml乙酸乙酯中。向該溶液緩慢添加15mg的10％鈀-碳催化劑，在加壓的氫氣氛(4大氣壓)下反應12小時。用100ml乙酸乙酯稀釋反應溶液，然後過濾。將濾液減壓蒸餾獲得160mg(0.48mmol，產率98％)3-(2,4-二羥基-苯基)-1-(5-羥基-2-甲氧基-3,4,6-三甲基-苯基)-丙酮。將160mg(0.48mmol)這樣獲得的化合物溶解在2ml乙醚中，並在0℃下一點一點加入160mg(4.21mmol)氫化鋁鋰。攪拌1小時後，依次加入0.1ml水、0.1ml的15％氫氧化鈉水溶液和0.3ml水，並且將混合物攪拌另外30分鐘。濾掉所得的沉澱物，並將濾液蒸餾獲得白色固體，然後進行矽膠柱色譜純化(洗脫液正己烷/乙酸乙酯=5/1,v/v)，獲得158mg(產率98％)標題化合物。實施例4合成4-[3-(2-甲氧基-5-羥基-3,4,6-三甲基-苯基)-丙基]-苯-1,3-二酚

將550mg(0.92mmol)3-(2,4-二苄氧基-苯基)-1-(5-苄氧基-2-甲氧基-3,4,6-三甲基-苯基)-丙烯酮溶解在7ml乙酸乙酯中。向該溶液緩慢添加15mg的10％鈀-碳催化劑，並在常壓的氫氣氛(1大氣壓)下反應2小時。反應溶液用15ml乙酸乙酯稀釋，然後過濾。將濾液減壓蒸餾獲得552mg(產率100％)3-(2,4-二苄氧基-苯基)-1-(2-甲氧基-5-苄氧基-3,4,6-三甲基-苯基)-丙酮。將225mg(0.37mmol)這樣獲得的化合物用NaBH4還原成醇化合物，然後用10ml無水苯稀釋。加入30mg對甲苯磺酸，並在回流下將混合物攪拌4小時。將反應混合物冷卻至室溫，然後用飽和的含碳酸氫鈉水溶液洗滌一次。洗液再用二氯甲烷萃取，並將萃取物和原始有機層合併。然後將合併的混合物乾燥，減壓蒸餾，並進行矽膠柱色譜純化(洗脫液正己烷/乙酸乙酯=10/1,v/v)，獲得169mg(0.29mmol,產率78％)4-[3-(2-甲氧基-5-苄氧基-3,4,6-三甲基-苯基)-烯丙基]-1,3-二苄氧基苯。將160mg(0.27mmol)這樣獲得的化合物用30ml乙酸乙酯稀釋，向其中緩慢加入45mg的10％的鈀催化劑。所得混合物在60psi氫氣壓下攪拌48小時，用10ml乙酸乙酯稀釋，然後過濾。將濾液減壓蒸餾並將殘餘物進行矽膠柱色譜純化(洗脫液正己烷/乙酸乙酯=1/1,v/v)，得到74mg(0.234mmol，產率86％)標題化合物。製備例3合成3-(2,4-二苄氧基-苯基)-1-(2-苄氧基-5-甲氧基-3,4,6-三甲基-苯基)-丙烯酮

將1.22g(4.09mmol)的1-(2-苄氧基-5-甲氧基-3,4,6-三甲基-苯基)-乙酮和2.8g(9mmol)的2,4-二苄氧基-苯甲醛溶解於40ml乙醇和四氫呋喃的混合溶劑中(1/1,v/v)，然後將10ml的50％氫氧化鈉水溶液緩慢滴加在其中。添加完畢之後，混合物在常溫下攪拌16小時。通過減壓蒸餾除去包含在其中的溶劑，用40ml水稀釋所得的殘餘物，然後使用10％鹽酸水溶液中和至pH 7。用乙酸乙酯萃取該溶液，並減壓蒸餾除去萃取物中包含的溶劑。將所得的具有高粘度的混合物進行矽膠柱色譜純化(洗脫液正己烷/乙酸乙酯=7/1,v/v)，獲得2.37g(產率97％)標題化合物。實施例5合成4-[3-羥基-3-(2-羥基-5-甲氧基-3,4,6-三甲基-苯基)-丙基]-苯-1,3-二酚

將1.28g(0.21mmol)製備例3製備的3-(2,4-二苄氧基-苯基)-1-(2-苄氧基-5-甲氧基-3,4,6-三甲基-苯基)-丙烯酮溶解在6ml乙酸乙酯中。向該溶液緩慢添加45mg的10％鈀-碳催化劑，在加壓的氫氣氛(4大氣壓)下蒸餾獲得660mg(產率95％)3-(2,4-二羥基-苯基)-1-(2-羥基-5-甲氧基-3,4,6-三甲基-苯基)-丙酮。將660mg(2mmol)這樣獲得的化合物溶解在12ml乙醚中，並在0℃下一點一點加入750mg氫化鋁鋰，然後將混合物攪拌1小時。之後依次將1ml水、1ml的15％氫氧化鈉水溶液和3ml水加入反應溶液中，並且將混合物攪拌另外30分鐘。濾掉所得的沉澱物，並將濾液蒸餾獲得白色固體，然後進行矽膠柱色譜純化(洗脫液正己烷/乙酸乙酯=5/1,v/v)，獲得524mg(1.58mmol，產率79％)標題化合物。實施例6合成4-[3-(2-羥基-5-甲氧基-3,4,6-三甲基苯基)-丙基]-苯-1,3-二酚

將300mg(0.50mmol)3-(2,4-二苄氧基-苯基)-1-(2-苄氧基-5-甲氧基-3,4,6-三甲基-苯基)-丙烯酮溶解在3ml乙酸乙酯中。向該溶液緩慢添加15mg的10％鈀-碳催化劑，在常壓氫氣氛(1大氣壓)下反應3小時。反應溶液用20ml乙酸乙酯稀釋，然後過濾。將濾液減壓蒸餾獲得3-(2,4-二苄氧基-苯基)-1-(2-苄氧基-5-甲氧基-3,4,6-三甲基-苯基)-丙酮。這樣獲得的化合物不進行進一步純化，而用40mg NaBH4的5ml甲醇溶液還原成醇化合物。將包含醇化合物的反應溶液減壓蒸餾，除去甲醇，並用二氯甲烷萃取，獲得277mg(產率92％)的醇化合物，然後用10ml無水苯進行稀釋。加入30mg對甲苯磺酸，並在回流下將混合物攪拌4小時。將反應混合物冷卻至室溫，並用飽和的碳酸氫鈉水溶液洗滌一次。洗液再用二氯甲烷萃取，並將萃取物和原始有機層合併。然後，將合併的混合物乾燥，減壓蒸餾，並進行矽膠柱色譜純化(洗脫液正己烷/乙酸乙酯=10/1,v/v)，獲得244mg(0.42mmol，產率91％)4-[3-(2-苄氧基-5-甲氧基-3,4,6-三甲基-苯基)-烯丙基]-1,3-二苄氧基苯。將這樣獲得的化合物用30ml乙酸乙酯稀釋，向其中緩慢加入45mg的10％鈀催化劑。所得混合物在60psi氫氣氛下攪拌20小時，用10ml乙酸乙酯稀釋，然後過濾。將濾液減壓蒸餾並將殘餘物進行矽膠柱色譜純化(洗脫液正己烷/乙酸乙酯=1/1,v/v)，得到118mg(產率88％)標題化合物。製備例4製備例4合成3-(2，4-二苄氧基-苯基)-1-(2-苄氧基-5-乙氧基-3,4,6-三甲基-苯基)-丙烯酮

將310mg(1mmol)的l-(2-苄氧基-5-乙氧基-3,4,6-三甲基-苯基)-乙酮和650mg(2.1mmol)的2,4-二苄氧基-苯甲醛溶解於15ml乙醇和四氫呋喃的混合溶劑中(1/1,v/v)，然後將5ml的50％氫氧化鈉水溶液緩慢滴加在其中。添加完畢之後，混合物在常溫下攪拌24小時。通過減壓蒸餾除去包含在反應溶液中的溶劑，用10ml水稀釋所得的殘餘物，然後使用10％鹽酸水溶液中和至pH7。用乙酸乙酯萃取該溶液，並減壓蒸餾除去萃取物中包含的溶劑。將所得的殘餘物進行矽膠柱色譜純化(洗脫液正己烷/乙酸乙酯=7/1,v/v)，獲得440mg(產率72％)標題化合物。實施例7合成4-[3-羥基-3-(2-羥基-5-乙氧基-3,4,6-三甲基-苯基)-丙基]-苯-1,3-二酚

將440mg(0.72mmol)製備例4製備的3-(2,4-二苄氧基-苯基)-1-(2-苄氧基-5-乙氧基-3,4,6-三甲基-苯基)-丙烯酮溶解在6ml乙酸乙酯中。向該溶液緩慢添加15mg的10％鈀-碳催化劑，在加壓的氫氣氛(4大氣壓)下反應15小時。用30ml乙酸乙酯稀釋反應溶液，然後過濾。將濾液減壓蒸餾獲得205mg(產率91％)3-(2,4-二羥基-苯基)-l-(2-羥基-5-乙氧基-3,4,6-三甲基-苯基)-丙酮。將205mg(0.66mmol)這樣獲得的化合物溶解在12ml乙醚中，並在0℃下一點一點加入200mg氫化鋁鋰，然後將混合物攪拌1小時。之後依次將0.2ml水、0.2ml的15％氫氧化鈉水溶液和0 6ml水加入反應溶液中，所得溶液攪拌另外30分鐘。濾掉所得的沉澱物，並將濾液蒸餾獲得白色固體，然後進行矽膠柱色譜純化(洗脫液正己烷/乙酸乙酯=5/1,v/v)，獲得160mg(產率70％)標題化合物。製備例5合成3-(2,4-二苄氧基-苯基)-1-(6-苄氧基-2,2,7,8-四甲基-苯並二氫吡喃-5-基)-丙烯酮

將1.69g(5mmol)的1-(6-苄氧基-2,2,7,8-四甲基-苯並二氫吡喃-5-基)-乙酮和3.2g(10.5mmol)的2,4-二苄氧基-苯甲醛溶解於50ml乙醇和四氫呋喃的混合溶劑中(1/1,v/v)，將10ml的50％氫氧化鈉水溶液緩慢滴加在其中。添加完畢之後，混合物在常溫下攪拌16小時。通過減壓蒸餾除去包含在反應溶液中的溶劑，用50ml水稀釋所得的殘餘物，然後使用10％鹽酸水溶液中和至pH7。用乙酸乙酯萃取該溶液，並減壓蒸餾除去萃取物中包含的溶劑。將所得的殘餘物進行矽膠柱色譜純化(洗脫液正己烷/乙酸乙酯=7/1,v/v)，獲得2.13g(產率68％)標題化合物。實施例8合成4-[3-羥基-3-(6-羥基-2,2,7,8-四甲基-苯並二氫吡喃-5-基)-丙基]-苯-1,3-二酚

將2.13g(3.33mmol)製備例5製備的3-(2,4-二苄氧基-苯基)-1-(6-苄氧基-2,2,7,8-四甲基-苯並二氫吡喃-5-基)-丙烯酮溶解在50ml乙酸乙酯中。向該溶液緩慢添加30ml的10％鈀-碳催化劑，然後在加壓的氫氣氛(4大氣壓)下反應12小時。用50ml乙酸乙酯稀釋反應溶液，然後過濾。將濾液減壓蒸餾獲得1.14g(0.31mmol，產率94％)3-(2,4-二羥基-苯基)-1-(6-羥基-2,2,7,8-四甲基-苯並二氫吡喃-5-基)-丙酮。將1.14g這樣獲得的化合物溶解在10ml乙醚中，並在0℃下一點一點加入1.0g氫化鋁鋰，然後將混合物攪拌1小時。之後依次將1ml水、1ml的15％氫氧化鈉水的沉澱物，並將濾液蒸餾獲得白色固體，然後進行矽膠柱色譜純化(洗脫液正己烷/乙酸乙酯=1/1,v/v)，獲得1.04g(2.80mmol，產率90％)標題化合物。實施例9合成4-[3-(6-羥基-2,2,7,8-四甲基-苯並二氫吡喃-5-基)-丙基]-苯-1,3-二酚

將550mg(0.86mmol)製備例5製備的3-(2,4-二苄氧基-苯基)-1-(6-苄氧基-2,2,7,8-四甲基-苯並二氫吡喃-5-基)-丙烯酮溶解在7ml乙酸乙酯中。向該溶液緩慢添加10mg的10％鈀-碳催化劑，然後在常壓氫氣氛(1大氣壓)下反應2小時。用50ml乙酸乙酯稀釋反應溶液，然後過濾。將濾液減壓蒸餾獲得478mg(0.75mmol，產率87％)3-(2,4-二苄氧基-苯基)-1-(6-苄氧基-2,2,7,8-四甲基-苯並二氫吡喃-5-基)-丙酮。將200mg(0.31mmol)這樣獲得的化合物用125mgNaBH4還原成醇化合物，然後用無水苯稀釋。其中加入30mg對甲苯磺酸，並將混合物攪拌4小時，同時回流。將反應混合物冷卻至室溫，然後用飽和的碳酸氫鈉水溶液洗滌一次。洗液再用二氯甲烷萃取，並將萃取物和原始有機層合併。然後，將合併的混合物乾燥，減壓蒸餾，並進行矽膠柱色譜純化(洗脫液正己烷/乙酸乙酯=10/1,v/v)，獲得169mg(0.271mmol，產率88％)的烯化合物。將160mg(0.26mmol)這樣獲得的烯化合物用30ml乙酸乙酯稀釋，向其中緩慢加入4.5mg的10％鈀催化劑。所得混合物在60psi氫氣壓下攪拌48小時，用10ml乙酸乙酯稀釋，然後過濾。將濾液減壓蒸餾並將殘餘物進行矽膠柱色譜純化(洗脫液正己烷/乙酸乙酯=3/1,v/v)，得到74mg(0.21mmol，產率80％)標題化合物。實施例10合成4-[3-羥基-3-(2-羥基-5-甲氧基-3,4,6-三甲基-苯基)-丙基]-苯-1,3-二酚

將5.5g(9.2mmol)製備例3製備的3-(2,4-二苄氧基-苯基)-1-(2-苄氧基-5-甲氧基-3,4,6-三甲基-苯基)-丙烯酮溶解在20ml乙醇和乙酸乙酯的混合溶劑(1/3,v/v)中，向該溶液緩慢添加50mg的10％鈀-碳催化劑。將混合物溫度升至40℃，然後在常壓下進行0.5小時的氫化。用60ml乙酸乙酯稀釋反應溶液，過濾，然後將濾液減壓蒸餾。殘餘物用乙醚稀釋，用碳酸氫鈉水溶液洗滌，通過無水硫酸鈉乾燥，然後過濾。濾液減壓蒸餾獲得2.88g(8.73mmol，產率95％)3-(2,4-二羥基-苯基)-1-(2-羥基-5-甲氧基-3,4,6-三甲基-苯基)-丙酮。將2.88g(8.73mmol)這樣獲得的化合物溶解在12ml甲醇中，並在0℃下一點一點加入165mg(4.37mmol)氫化鋁鋰。混合物在常溫下攪拌1小時，減壓蒸餾，用10ml乙酸乙酯稀釋，然後用10ml水洗滌三次。將分離的有機層通過無水硫酸鈉乾燥，然後過濾。濾液減壓蒸餾並將殘餘物進行矽膠柱色譜純化(洗脫液正己烷/乙酸乙酯=5/1,v/v)，獲得767mg(2.31mmol，產率80％)標題化合物。
根據上面製備例和實施例，合成表1列出的化合物，且其物化性質在下表2中給出。
表2

根據以下實驗實施例1和2測定本發明化合物(Ⅰ)對酪氨酸酶和黑素生物合成的抑制效果。實驗實施例1酪氨酸酶抑制活性本實驗使用從蘑菇中提取的酪氨酸酶(Sigma生產)。首先，將底物L-酪氨酸溶解在磷酸緩衝液(0.05M,pH6.8)中達到1.5mM濃度，然後將0.01ml的該溶液放入分光光度計的0.3ml比色杯中。將作為輔助因子(cofacter)的多巴製備成濃度0.06mM的溶液，並且將0.01ml的多巴溶液添加到底物溶液中。向所得的混合物添加式(Ⅰ)的抑制劑和磷酸緩衝液，達到總共0.31ml體積。通過添加0.1ml酶溶液開始反應，其中所說的酶溶液是將酪氨酸酶溶解在磷酸緩衝液中達到60U/ml的濃度。用0.1ml磷酸緩衝溶液代替酶溶液添加到空白樣品中。反應在37℃下進行10分鐘，然後使用分光光度計(Beckman DU-7500)在475nm下測定吸光度。
根據在475nm下的吸光度計算化合物(Ⅰ)對酪氨酸酶的抑制率(％)，並且將酶活性抑制率(％)達到50％時抑制劑的濃度測定為IC50值。抑制率(％)可以根據下式進行計算，結果示於下表3中。
抑制率(％)=(A-B)/A×100上式中，A表示添加抑制劑時475nm下的吸光度，B表示未加抑制劑時475nm下的吸光度。
表3酪氨酸酶的抑制活性

正如從表3結果中看出的，本發明的式(Ⅰ)化合物表現出比現有抑制劑更優越或相似的酪氨酸酶抑制活性。因此，將本發明化合物用於這種用途是有利的。實驗實施例2對B-16小鼠黑素瘤細胞中黑素生物合成的抑制效果將本發明的化合物添加到B-16小鼠黑素瘤細胞的培養基中，並進行觀察，以便實驗其細胞水平的增白效果。
將B-16小鼠黑素瘤細胞在培養基中培養成密度為106細胞/皿，分別加入各種濃度的化合物，並且培養3天。用胰蛋白酶處理從培養皿中分離細胞，然後離心以提取黑素(其中小丸用2N高氯酸提取)。將1ml的1N氫氧化鈉水溶液添加到提取的黑素中，並將所得混合物加熱至將黑素溶解。通過分光光度計在400nm下測定吸光度，並用吸光度/單元細胞數(106細胞)來表示黑素所產生的數量。將酶活性抑制率(％)達到50％時的抑制劑濃度測定作為IC50值，結果示於下表4中。
表4

從表4結果中可以看出本發明的化合物對小鼠黑素瘤細胞中的黑素生物合成表現出卓越的抑制活性。因此，可以認為本發明的化合物通過防止黑素的合成表現出突出的增白活性，這主要是由於對酪氨酸酶的抑制活性。
權利要求
1．一種由下式(Ⅰ)表示的1,3-二苯基丙烷衍生物
其中=表示雙鍵或單鍵，R1表示氫或C1-C10烷基，R2表示C1-C5烷基或C1-C5烷氧基烷基，或R1和R2一起表示可以被C1-C5烷基取代的5-6元雜環，且該雜環包含氧作為雜原子，R3表示氫或C1-C7烷基，R4表示氫、羥基、或氧代，並且R5和R6彼此獨立地表示氫或C1-C5烷基。
2．權利要求1的化合物，其中R1表示氫、甲基或乙基，R2表示甲基，或R1和R2一起表示
，R3表示氫或甲基，R4表示氫或羥基，以及R5和R6彼此獨立地表示甲基。
3．一種下式(Ⅰa)所示化合物的製備方法，
其中R1-R3、R5和R6如權利要求1所定義，該方法包括，在溶劑中將下式(Ⅳ)表示的化合物還原，
其中P1表示苄基、甲基、乙基、四氫吡喃基、甲氧基甲基、甲氧基乙氧基甲基或對甲氧基苄基，P2表示苄基、甲基或乙基，P3表示苄基、四氫吡喃基、甲氧基甲基、甲氧基乙氧基甲基或對甲氧基苄基，R2、R5和R6如權利要求1所定義，得到下式(Ⅴ)表示的化合物，
其中P1-P3如上所定義，R2、R5和R6如權利要求1所定義，然後除去式(Ⅴ)化合物中的保護基。
4．權利要求3的方法，其中還原是在選自乙醚和四氫呋喃(THF)的溶劑中在氫化鋁鋰(LAH)的存在下進行。
5．權利要求4的方法，其中還原是在-30至30℃下進行。
6．一種下式(Ⅰb)所示化合物的製備方法，
其中R1-R3、R5和R6如權利要求1所定義，該方法包括，在溶劑中將下式(Ⅳ)所示化合物的雙鍵氫化
其中P1-P3如權利要求3所定義，R2、R5和R6如權利要求1所定義，以便得到下式(Ⅴ′)表示的化合物，
其中P1-P3如權利要求3所定義，R2、R5和R6如權利要求1所定義，然後除去式(Ⅴ′)化合物中的保護基。
7．權利要求6的方法，其中溶劑是乙酸乙酯。
8．權利要求6的方法，其中保護基是苄基，且式(Ⅰb)的化合物從式(Ⅴ′)化合物中獲得，或者通過在乙酸乙酯或者乙酸乙酯和低級醇的混合溶劑中進行氫化由化合物(Ⅳ)直接獲得。
9．權利要求8的方法，其中溶劑是乙酸乙酯，且氫化在常溫和2-4大氣壓下進行10-15小時。
10．權利要求8的方法，其中溶劑是乙酸乙酯和低級醇的混合物，且氫化在35-55℃和常壓下進行20分鐘-1小時。
11．一種下式(Ⅰc)所示化合物的製備方法，
其中R1-R3、R5和R6如權利要求1所定義，該方法包括，在酸的存在下於溶劑中將下式(Ⅴ)表示的化合物脫水，
其中P1-P3如權利要求3所定義，R2、R5和R6如權利要求1所定義，得到下式(Ⅵ)表示的化合物，
其中P1-P3如權利要求3所定義，R2、R5和R6如權利要求1所定義，然後將所得式(Ⅵ)的化合物還原和脫保護。
12．權利要求11的方法，其中脫水在選自苯、甲苯和二甲苯的溶劑中，在選自硫酸、磷酸和對甲苯磺酸的酸的存在下進行。
13．權利要求12的方法，其中脫水在80-100℃下進行。
全文摘要
本發明涉及一種具有酪氨酸酶抑制活性的由式(Ⅰ)表示的新1,3－二苯基丙烷衍生物及其製備方法:其中－表示雙鍵或單鍵;R
文檔編號A61K8/00GK1217709SQ98800210
公開日1999年5月26日 申請日期1998年3月2日 優先權日1997年3月6日
發明者李映昊, 金京愛, 李賢浩, 崔鍾權, 李相和 申請人:Lg化學株式會社