抗協同刺激信號轉導分子ailim的人單克隆抗體及其藥物用途的製作方法

2023-06-27 06:47:06

專利名稱：：抗協同刺激信號轉導分子ailim的人單克隆抗體及其藥物用途的製作方法
技術領域：
：ICOS(誘導型協同刺激物))的人抗體；結合AILIM或其一部分的人單克隆抗體；編碼所述人單克隆抗體或其一部分的DNA,或所述DNA的一部分；產生所述人單克隆抗體或其一部分的細胞(包括基因重組細胞)；由所述基因重組細胞產生的人單克隆抗體或其一部分；含有所述人單克隆抗體或其一部分的藥物組合物；治療與遲髮型過l文反應相關的疾病的含有抗AILIM抗體的藥物組合物；鑑定，定量測定或分析結合AILIM或AILIM配體的物質的方法；和用於所述方法的試劑盒。
背景技術：
：哺乳動物活體具有排斥侵入該活體的病原性微生物(病毒，細菌，寄生蟲等)或異物(下文中這兩者被稱為"抗原")的免疫應答系統。其中之一被稱為先天性免疫應答系統，另一個是獲得性免疫應答系統。前者的排斥機理包括吞噬細胞(包括多形核白細胞，單核細胞，巨噬細胞等)的吞噬作用，自然殺傷(NK)細胞的進攻，和補體對抗原的非特異性識別例如調理作用。後者，獲得性免疫應答系統，是通過淋巴細胞(主要是T細胞和B細胞)的排斥機理，所述淋巴細胞獲得對抗原的特異性(即激活的淋巴細胞)。獲得抗原特異性的B細胞通過產生對該抗原特異性的抗體進攻存在於這些細胞外部的抗原。獲得抗原特異性的T細胞(即激活的T細胞)分為輔助T細胞和細胞毒性T細胞(細胞毒性淋巴細胞，CTL)。輔助T細胞調節B細胞的分化和抗體的產生，並且與巨噬細胞共同作用破壞抗原。後者，CTL自身進攻病毒感染的糹田月包等(實驗藥物(ExperimentalMedicine):增刊，"BioScienceTermLibrary,Immunity(生物科學術語文庫，免疫)'，，Yodosha，pp.14-17(1995))。細胞(APC)例如巨噬細胞，B細胞或樹突細胞呈遞的抗原的識別開始的。抗原呈遞細胞處理所摻入的抗原並且通過將他們與主要組織相容性複合體(MHC)結合來呈遞這些處埋過的抗原。通過細胞膜表面上存在的T細胞受體(TcR)和CD3抗原之間的複合體(TcR/CD3複合體)識別抗原呈遞細胞呈遞的處理過的抗原，T細胞接受激活細胞的第一信號(或獲得特異性)。但是，TcR/CD3複合體-介導的第一信號單獨不能充分地激活T細胞並且導致無應答性或克隆無反應性，這樣這些細胞此後不能與接受的任何刺激反應。白細胞介素2(IL-2)的自分泌對於T細胞被激活，T細胞分化成抗原特異性T細胞克隆，和T細胞增殖是必需的。在克隆無反應性中，T細胞由於沒有產生IL-2等物質且沒有細胞分裂而失活。即，IL-2等細胞因子的產生伴隨的T細胞的激活需要通過TcR/CD3複合體的第一信號之後的第二信號。此第二信號被稱為協同刺激信號。T細胞接受該第二信號並且通過T細胞表面上除TcR/CD3複合體之外遞到細胞中。該第二信號避免了細胞無反應性(克隆無反應性)並且激活這些細胞。儘管還沒有對抗原呈遞細胞和淋巴細胞例如T細胞之間的第二信號傳遞的一部分機理的詳細解釋，但是迄今為止的研究表明第二信號傳遞的一個重要因素是主要在T細胞和胸腺細胞上表達的細胞表面分子CD28(也稱之為Tp44，T"或9,3抗原)與在抗原呈遞細胞(巨噬細胞，單核細胞，樹突細胞等)上表達的細胞表面分子CD80(也稱之為B7-l，B7,BB1，或B7/BB1)以及與抗原呈遞細胞上的細胞表面分子CD86(也稱之為B7-2或B70)的相互作用(即，通過這些細胞之間的結合發生的細胞粘附)。此外，通過實驗解釋了認為其表達依據第二信號而加強的細胞毒T淋巴細胞相關抗原4(CTLA-4)與CD80(B7-1)和CD86(B7-2)的相互作用(即，通過這些細胞之間的結合發生的細胞粘附)在通過第二信號調節T細胞激活時起著重要作用。換句話說，通過第二信號的傳遞而調節T細胞激活至少涉及CD28和CD80/CD86之間的相互作用，據認為是依據該相互作用的CTLA-4表達的增強，和CTLA-4與CD80/CD86之間的相互作用。已知CD28是傳遞激活T細胞和避免無反應性所需的第二信號(協同刺激信號)的協同刺激物分子。通過該分子結合抗原呈遞細胞上的CD80(B7-1)和CD86(B7-2)協同刺激物分子(通過這些分子之間的結合而發生細胞粘附)所傳遞的第二信號穩定Thl-型細胞因子的mRNA，並且接著促進T細胞產生大量Th1-型細胞因子例如IL-2，IFNY和TNFa。TcR/CD3傳遞的第一信號誘導CTLA-4的表達，並且CD28和CD80之間的結合傳遞的第二信號還將該表達增強。證明CTLA-4接受這些信號來抑制T細胞功能，這與CD28傳遞的第二信號對T細胞的激活作用相反。人CD28和CTLA-4分別是分子量分別是44Kd和41-43Kd的I型糖蛋白。這兩者都具有免疫球蛋白樣區，屬於免疫球蛋白超家族，並且具有作為細胞粘附分子的功能和作為信號傳遞分子的功能。人CD28通過二硫鍵形成異二聚體，而CTLA-4以單體存在。CD28和CTLA-4基因兩者都定位於人染色體上"2q33"和小鼠染色體上"1C"，都由四個(4)夕卜顯子組成。人CD28和CTLA-4分別由220和223個胺基酸組成，包括前導序列，並且它們之間的胺基酸同源性是20-30%。CD28和CTLA-4在人和小鼠中的的配體是CD80(B7-1)和CD86(B7-2)。CTLA-4對兩種配體的親和性是CD28對兩種配體的親和性的約20倍。已經闡明了動物物種間保守的胺基酸序列結構"MYPPPY(Met-Tyr-Pro畫Pro-Pro-Tyr)"對於CD28和CTLA-4與CD80(B7-1)的結合是重要的。還報導過，當CD28被刺激時，PI3激酶(磷酸肌醇3激酶，PI3K)與CD28的部分序列"YMNM(Tyr-Met-Asn-Met)"中的磷酸化酪氨酸殘基結合，並且CD28在通過該"YxxM"結構的胞內信號傳遞中起著重要的作用。此外，報導過CTLA-4在其胞質區中還具有"YxxM"代表的序列，即"YVKM(Tyr-Val-Lys-Met)"，並且在受刺激後SYP與該序列結合。CD28在胸腺細胞和外周血T細胞中特異表達，CTLA-4在激活的T細胞中特異表達(細胞工程(CellEngineering):增刊，"HamdbookofAdhesienMolecule(粘附分子手冊)"，Shujunsha，93-102頁(1994);同上120-136頁；實驗藥物(ExperimentalMedicine):增刊，"生物科學術語文庫，免疫，，，Yodosha，pp.94-98(1995);實驗藥物(ExperimentalMedicine):增刊，"生物科學術語文庫，胞內信號傳導"，Yodosha，pp.58-59(1995);NihonRinsho，55巻，No.6，pp.215-220(1997))。在T細胞功能的調節(T細胞功能的激活和抑制)中，多個分子例如協同刺激物分子(CD28，CD80(B7-1),CD86(B7-2)等)和與它們一同作用的CTLA-4之間的相互作用的重要性被認識到了，這引起了人們對這些分子和疾病之間的關係以及通過調節這些分子的功能來治療疾病的注意。如上所述，儘管活體激活對活體(自身)來說是外物的抗原的獲得性免疫應答系統，但是其也具有免疫耐受性，這樣就不表現出針對其自身成分(自身抗原)的免疫應答。如果由於某些原因破壞了免疫耐受性，則發生對自身抗原的免疫應答，通過上述相同機理誘導自身抗原-反應性T細胞進入免疫異常狀態，從而引發各種自身免疫疾病。換句話說，因為當活體免疫系統正常時，正常組織中未受刺激的抗原呈遞細胞(APC)不表達協同刺激分子，即使存在與自身抗原反應的自身抗原-反應T細胞，T細胞仍處於無應答狀態而保持免疫耐受性。有人提出，免疫異常狀態下，協同刺激分子異常過度的持續表達，更多的自身抗原-反應T細胞被激活，從而引起自身免疫疾病。最近基於這樣的觀點，有人嘗試通過調節協同刺激信號的傳遞，例如上述CD28/CTLA-4和CD80/CD86之間的信號傳遞，來治療各種自身免疫疾病。這些嘗試的結果還沒有詳細闡明協同刺激分子與相關分子之間的相互作用激活T細胞的機理。該機理中可能涉及其它未知分子。最近，鑑定出了一種新的類似上述"CD28"和"CTLA-4"的協同刺激分子，認為其實現對淋巴細胞例如T細胞的激活所必需的第二信號(協同刺激信號)的轉導，並且實施與所述激活的淋巴細胞例如激活的T細胞的信號相伴的功能調節。該分子已經被指定為AILIM(激活誘導型淋巴細胞免疫調製分子)(在人體，小鼠和大鼠體內國際免疫學(Int.Immunol.)12巻，No.1，p.51-55，2000),也稱作ICOS(可誘導型共同刺激物)(人體內自然(Nature),397巻，No.6716，p.263-266,1999)。另一方面，最近已經鑑定了稱為B7h，B7RP-1，GL50或LICOS的新的分子，它們是與該協同刺激傳遞分子AILIM(ICOS)相互作用的配體(AILIM配體)(自然(Nature),402巻，No.6763，p.827-832，1999;天然藥物(NatureMedicine),5巻，No.12，p.1365-1369，1999;免疫學雜誌(J.Immunology),164巻，p.1653-1657,2000;當今生物學(Curr.Biol.)，10巻，No.6，p.333-336,2000)。將這兩類新的分子，即AILIM(ICOS)和B7RP-l(B7h，GL50,LICOS)鑑定為上述淋巴細胞例如T細胞的激活以及激活的T細胞的功能控制所必需的協同刺激信號的信號轉導途徑表明，除了已知的第一和第二信號途徑，即CD28和CD80(B7-l)/CD86(B7-2)之間的以及CTLA4和CD80(B7-1)/CD86(B7-2)之間的轉導途徑之外，還存在通過AILIM(ICOS)和B7RP-l(B7h,GL50，LICOS)之間相互作用而轉導信號的新的第三途徑。有關這些新分子的生物學功能，通過所迷分子傳導第三協同刺激信號而對淋巴細胞例如T細胞的功能控制，以及新的信號轉導和疾病之間的關係的研究正在進展之中(免疫學雜誌(J.Immunol.),166(1)，l頁，2001;免疫學雜誌(J.Immunol.)，165(9),5035頁,2000;Biochem.Biophys.Res.Commun.,276(1)，335頁，2000;免疫學(Immunity),13(1)，95頁，2000;實驗藥物學雜誌(J.Exp.Med.)，192(1),53頁，2000;歐洲免疫學雜誌(Eur.J.Immunol.)，30(4)，1040頁，2000;WO01/15732)。
發明內容具體地說，本發明的目的是公開^皮認為類似於"CD28"和"CTLA-4"的新分子AILIM,作為傳遞淋巴細胞例如T細胞的激活所必需的第二信號(協同刺激信號)並且通過與該信號一起作用來控制激活的淋巴細胞例如激活的T細胞的功能的生物學功能；公開AILIM的表達與疾病之間的關係；以及提供根據AILIM的表達方式能抑制各種疾病的發展的方法和藥物或通過使用所述醫藥方法(例如單克隆抗體和低分子量化合物等藥物)控制AILIM的生物功能來治療所述疾病的方法和藥物。為了實現上述目的，本發明人主動繼續研究抗哺乳動物AILIM(特別是人AILIM)的人抗體(特別是人單克隆抗體)，結果通過用AILIM(具體地是表達人AILIM的細胞的細胞膜級分)對應用基因重組技術製備的轉基因小鼠進行免疫以產生人抗體，在世界上第一次成功地製備了結合人AILIM的各種單克隆抗體，特別是能調節人AILIM介導的信號轉導的那些與人AILIM結合型單克隆抗體。因為本發明的抗體(特別是單克隆抗體)是從人體得到的，所以它們根本會在宿主中由於抗人的免疫原性，HAMA(人抗小鼠抗原性)而誘導任何嚴重8的免疫排斥，所述免疫原性是使用含有從非人哺乳動物例如'J、鼠得到的抗體的抗體藥物進行治療時的一個大問題(副作用)，因此本發明大大提高了抗體作為藥物的價值。因此，本發明的結合哺乳動物AILIM(特別是人AILIM)的人抗體(特別是人單克隆抗體)和含有所述人抗體(特別是^v單克隆抗體)的藥物組合物可用作不誘導宿主中HAMA所致免疫排斥而控制各種生理反應的藥物，所述生理反應相關於AILIM介導協同刺激信號向AILIM-表達細胞的轉導(例如AILIM-表達細胞的增殖，AILIM-表達細胞的細胞因子產生，AILIM-表達細胞的免疫胞解或凋亡，誘導對AILIM-表達細胞的抗體-依賴性細胞毒性的活性，等等)，和/或所述抗體和組合物可用作抑制和預防各種與所述AILIM介導之信號轉導相關的疾病的症狀發生和/或發展的藥物，以及可用作治療或預防所述疾病的藥物。具體地說，本發明的藥物組合物能控制(抑制或刺激)AILIM-表達細胞的增殖或AILIM-表達細胞產生細胞因子(例如Y幹擾素或白細胞介素-4等)，從而能夠抑制各種病理症狀和治療或預防與AILIM介導的信號轉導相關的生理現象引起的各種疾病。應用本發明的藥物組合物能抑制，預防和/或治療例如，各種疾病(例如，類風溼性關節炎，多發性硬化，自身免疫性曱狀腺炎，過敏性接觸型皮炎，慢性炎性皮膚病例如扁平苔蘚，系統性紅斑狼痴，胰島素依賴性糖尿病，牛皮癬等等)，這些疾病分為自身免疫疾病或過敏性疾病(特別是細胞免疫引起的自身免疫疾病和遲髮型過敏反應)；關節病(例如類風溼性關節炎(RA)和骨關節炎(OA))，炎症(例如肝炎)；移植物抗宿主反應(GVH反應)；移植物抗宿主病(GVHD);伴隨組織(例如皮膚，角膜，骨等組織)或器官(肝臟，心臟，肺，腎，胰臟等)移植(同種移植或異種移植)的免疫排斥；外來抗原或自身抗原引發的免疫應答(例如抗所述抗原的抗體的產生，細胞增殖，細胞因子的產生)；以及可能由異常腸免疫引起的疾病(具體是炎性腸疾病(特別是結腸(clone)病和潰瘍性結腸炎)和食物過敏反應)。此外，在抑制/治療上述組織和器官的移植伴隨的免疫排斥的領域，通過將本發明的藥物組合物與已知在這類移植治療中用於抑制免疫排斥的藥物聯合應用，可能會加強已知免疫抑制劑對移植排斥作用的抑制效果。此外，本發明的藥物組合物能夠用於治療或預防任何能用各種甾族化合物消炎的炎症。本發明的藥物組合物能夠用於炎症疾病，例如各種關節炎伴隨的炎症(例如，類風溼性關節炎，骨關節炎)，肺炎，肝炎(包括病毒性肝炎)，傳染病伴隨的炎症，炎性結腸病，小腸性腸炎，腎炎(腎小^求腎炎伴隨的炎症，腎纖維化)，胃炎，脈管炎，胰腺炎，腹膜炎，支氣管炎，心肌炎，腦炎，局部缺血後再灌注損傷(心肌缺血再灌注損傷)中的炎症，組織和器官移植之後免疫排斥所致炎症，燒傷，各種皮膚炎症(牛皮癬，過敏接觸型皮炎，作為慢性炎症皮膚病的扁平苔蘚)，多器官衰竭中的炎症，PTCA或PTCR術後炎症，和動脈硬化伴隨的炎症，和自身免疫性曱狀腺炎。此外，通過應用是本發明一個方面用於鑑定結合AILIM或AILIM配體的物質的方法，使得有有可能篩選具有通過結合AILIM或AILIM配體來調節它們的相互作用所介導的信號轉導來治療各種疾病的潛在活性的藥物(化學合成化合物或抗體)。具體地說，本發明是下面(1)至(108)描述的本發明。(1)結合AILIM的人抗體。(2)(l)的人抗體，其中所述AILIM從人體得到。(3)結合AILIM或其一部分的人單克隆抗體。(4)(3)的人單克隆抗體或其一部分，其中所述AILIM從人體得到。(5)(3)或(4)的人單克隆抗體或其一部分，其中所述人單克隆抗體具有抑制通過AILIM介導的信號轉導到細胞中的活性。(6)(5)的人單克隆抗體或其一部分，其中所述抑制信號轉導的活性是下面的(a)或(b):(a)抑制AILIM-表達細胞增殖的活性，或(b)抑制細胞因子從AILIM-表達細胞產生的活性。(7)(6)的人單克隆抗體或其一部分，其中所述細胞因子是Thl-型或Th2-型T細胞產生的細胞因子之一。(8)(7)的人單克隆抗體或其一部分，其中所述細胞因子是y幹擾素或白細胞介素-4。(9)(5)的人單克隆抗體或其一部分，其中所述人單克隆抗體具有阻止混合淋巴細胞反應的活性。(10)(3)或(4)的人單克隆抗體或其一部分，其中所述人單克隆抗體具有10誘導通過AILIM介導的信號轉導到細胞中的活性。(11)(10)的人單克隆抗體或其一部分，其中所述誘導信號轉導的活性是下面的(a)或(b):(a)誘導AILIM-表達細胞增殖的活性，或(b)誘導細胞因子從AILIM-表達細胞產生的活性。(12)(11)的人單克隆抗體或其一部分，其中所述細胞因子是Thl-型或Th2-型T細胞產生的細胞因子之一。(13)(12)的人單克隆抗體或其一部分，其中所述細胞因子是Y幹擾素或白細胞介素-4。(14)(3)或(4)的人單克隆抗體或其一部分，其中所述人單克隆抗體具有誘導對AILIM-表達細胞的抗體-依賴性細胞毒活性，和/或AILIM-表達細胞的免疫胞解或凋亡的活性。(15)(3)或(4)的人單克隆抗體或其一部分，其中所述單克隆抗體和AILIM之間的結合速度常數(ka)是1.0X103(1/M.秒)或更大。(16)(15)的人單克隆抗體或其一部分，其中所述結合速度常數(ka)是1.0X104(1/M.秒)或更大。(17)(16)的人單克隆抗體或其一部分，其中所述結合速度常數(ka)是1.0X105(1/M.秒)或更大。(18)(3)或(4)的人單克隆抗體或其一部分，其中所述單克隆抗體和AILIM之間的解離速度常數(kd)是1.0X10、l/秒)或更小。(19)(18)的人單克隆抗體或其一部分，其中所述解離速度常數(kd)是1.oxio-4(i/秒)或更小。(20)(19)的人單克隆抗體或其一部分，其中所述解離速度常數(kd)是1.0X10、l/秒)或更小。(21)(3)或(4)的人單克隆抗體或其一部分，其中所述單克隆抗體和AILIM之間的解離常數(Kd)是1.0X10，M)或更小。(22)(21)的人單克隆抗體或其一部分，其中所述解離常數(Kd)是1.0X10—7(M)或更小。(23)(22)的人單克隆抗體或其一部分，其中所述解離常數(Kd)是1.0X10'8(M)或更小。(24)(23)的人單克隆抗體或其一部分，其中所述解離常數(Kd)是1.ii0X10-9(M)或更小。(25)(4)的人單克隆抗體或其一部分，其中編碼所述人單克隆抗體的重鏈可變區的V區DNA是從人免疫球蛋白重鏈V基因片段1-02或3-13衍生的。(26)(4)的人單克隆抗體或其一部分，其中編碼所述人單克隆抗體的輕鏈可變區的V區DNA是從人免疫球蛋白輕鏈V基因片段L5或A27衍生的。(27)(25)或(26)的人單克隆抗體或其一部分，其中編碼所述人單克隆抗體的重鏈可變區的V區DNA是從人免疫球蛋白重鏈V基因片段1-02或3-13衍生的，並且其中編碼所述人單克隆抗體的輕鏈可變區的V區DNA是從人免疫球蛋白輕鏈V基因片段L5或A27衍生的。(28)(27)的人單克隆抗體或其一部分，其中編碼所述人單克隆抗體的重鏈可變區的V區DNA是從人免疫球蛋白重鏈V基因片段1-02衍生的，並且其中編碼所述人單克隆抗體的輕鏈可變區的V區DNA是從人免疫球蛋白輕鏈V基因片段L5衍生的。(29)(27)的人單克隆抗體或其一部分，其中編碼所述人單克隆抗體的重鏈可變區的V區DNA是從人免疫球蛋白重鏈V基因片段3-13衍生的，並且其中編碼所述人單克隆抗體的輕鏈可變區的V區DNA是從人免疫球蛋白輕鏈V基因片段A27衍生的。(30)(4)的人單克隆抗體或其一部分，其中所述人單克隆抗體的重鏈可變區具有下面(a)至(f)任一項中定義的胺基酸序列(a)包括SEQIDNO:28的20-117位胺基酸的胺基酸序列，(b)包括其中一個或多個胺基酸殘基被缺失或取代的或向其中插入或添加一個或多個胺基酸殘基的SEQIDNO:28的20-117位胺基酸的胺基酸序列，(c)包括SEQIDNO:32的20-116位胺基酸的胺基酸序列，(d)包括其中一個或多個胺基酸殘基被缺失或取代的或向其中插入或添加一個或多個胺基酸殘基的SEQIDNO:32的20-U6位胺基酸的胺基酸序列，(e)包括SEQIDNO:36的20'116位胺基酸的胺基酸序列，(f)包括其中一個或多個胺基酸殘基被缺失或取代的或向其中插入或添加一個或多個胺基酸殘基的SEQIDNO:36的20-116位胺基酸的胺基酸序列。(31)(4)的人單克隆抗體或其一部分，其中所述人單克隆抗體的重鏈多肽具有下面(a)至(f)任一項中定義的胺基酸序列(a)包括SEQIDNO:28的20-470位胺基酸的胺基酸序列，(b)包括其中一個或多個胺基酸殘基被缺失或取代的或向其中插入或添加一個或多個胺基酸殘基的SEQIDNO:28的20-470位胺基酸的胺基酸序列，(c)包括SEQIDNO:32的20-470位胺基酸的胺基酸序列，(d)包括其中一個或多個胺基酸殘基被缺失或取代的或向其中插入或添加一個或多個胺基酸殘基的SEQIDNO:32的20-470位胺基酸的胺基酸序列，(e)包括SEQIDNO:36的20-470位胺基酸的胺基酸序列，(f)包括其中一個或多個胺基酸殘基被缺失或取代的或向其中插入或添加一個或多個胺基酸殘基的SEQIDNO:36的20-470位胺基酸的胺基酸序列。(32)(4)的人單克隆抗體或其一部分，其中所述人單克隆抗體的輕鏈可變區具有下面(a)至(f)任一項中定義的胺基酸序列(a)包括SEQIDNO:30的23-116位胺基酸的胺基酸序列，(b)包括其中一個或多個胺基酸殘基被缺失或取代的或向其中插入或添加一個或多個胺基酸殘基的SEQIDNO:30的23-116位胺基酸的胺基酸序列，(c)包括SEQIDNO:34的21-116位胺基酸的胺基酸序列，(d)包括其中一個或多個胺基酸殘基被缺失或取代的或向其中插入或添加一個或多個胺基酸殘基的SEQIDNO:34的21-116位胺基酸的胺基酸序列，(e)包括SEQIDNO:38的21-116位胺基酸的胺基酸序列，(t)包括其中一個或多個胺基酸殘基被缺失或取代的或向其中插入或添加一個或多個胺基酸殘基的SEQIDNO:38的21-116位胺基酸的胺基酸序列。(33)(4)的人單克隆抗體或其一部分，其中所述人單克隆抗體的輕鏈多肽具有下面(a)至(f)任一項中定義的胺基酸序列13(a)包括SEQIDNO:30的23-236位胺基酸的胺基酸序列，(b)包括其中一個或多個胺基酸殘基被缺失或取代的或向其中插入或添加一個或多個胺基酸殘基的SEQIDNO:30的23-236位胺基酸的胺基酸序列，(c)包括SEQIDNO:34的21-236位胺基酸的胺基酸序列，(d)包括其中一個或多個胺基酸殘基被缺失或取代的或向其中插入或添加一個或多個胺基酸殘基的SEQIDNO:34的21-236位胺基酸的胺基酸序列，(e)包括SEQIDNO:38的21-236位胺基酸的胺基酸序列，或(f)包括其中一個或多個胺基酸殘基被缺失或取代的或向其中插入或添加一個或多個胺基酸殘基的SEQIDNO:38的21-236位胺基酸的胺基酸序列。(34)(4)的人單克隆抗體或其一部分，其中所述人單克隆抗體具有下面的特徵(a)和(b):(a)重鏈可變區具有包括SEQIDNO:28的20-117位胺基酸的胺基酸序列的胺基酸序列，和(b)輕鏈可變區具有包括SEQIDNO:30的23-116位胺基酸的胺基酸序列的胺基酸序列。(35)(4)的人單克隆抗體或其一部分，其中所述人單克隆抗體具有下面的特徵(a)和(b):(a)重鏈多肽具有SEQIDNO:28的20-470位胺基酸的胺基酸序列的胺基酸序列，和(b)輕鏈多肽具有SEQIDNO:30的23-236位胺基酸的胺基酸序列的胺基酸序列。(36)(4)的人單克隆抗體或其一部分，其中所述人單克隆抗體具有下面的特徵(a)和(b):(a)重鏈可變區具有包括SEQIDNO:32的20-116位胺基酸的胺基酸序列的胺基酸序列，和(b)輕鏈可變區具有包括SEQIDNO:34的21-116位胺基酸的胺基酸序列的胺基酸序列。(37)(4)的人單克隆抗體或其一部分，其中所述人單克隆抗體具有下面14的特徵(a)和(b):(a)重鏈多肽具有包括SEQIDNO:32的20-470位胺基酸的胺基酸序列的胺基酸序列，和(b)輕鏈多肽具有包括SEQIDNO:34的21-236位胺基酸的胺基酸序列的胺基酸序列。(38)(4)的人單克隆抗體或其一部分，其中所述人單克隆抗體具有下面的特徵(a)和(b):(a)重鏈可變區具有包括SEQIDNO:36的20-116位胺基酸的胺基酸序列的胺基酸序列，和(b)輕鏈可變區具有包括SEQIDNO:38的21-116位胺基酸的胺基酸序列的胺基酸序列。(39)(4)的人單克隆抗體或其一部分，其中所述人單克隆抗體具有下面的特徵(a)和(b):(a)重鏈多肽具有包括SEQIDNO:36的20-470位胺基酸的胺基酸序列的胺基酸序列，和(b)輕鏈多肽具有包括SEQIDNO:38的21-236位胺基酸的胺基酸序列的胺基酸序列。(40)(3)-(29)任一項的人單克隆抗體或其一部分，其中所述人單克隆抗體是從能產生人抗體的轉基因非人哺乳動物產生的單克隆抗體。(41)(40)的人單克隆抗體或其一部分，其中所述人單克隆抗體是通過用AILIM-表達細胞，從所述細胞衍生的膜級分，構成AILIM的完整分子或其一部分，或編碼AILIM或其一部分的基因對能夠產生人抗體的轉基因非人哺乳動物進行免疫而獲得的。(42)(40)或(41)的人單克隆抗體或其一部分，其中所述轉基因非人哺乳動物是轉基因小鼠。(43)編碼選自下面(a)-(f)的多肽的DNA或其一部分(a)包括SEQIDNO:28的胺基酸20-117的胺基酸序列的多肽，(b)包括SEQIDNO:30的胺基酸23-116的胺基酸序列的多肽，(c)包括SEQIDNO:32的胺基酸20-116的胺基酸序列的多肽，(d)包括SEQIDNO:34的胺基酸21-116的胺基酸序列的多肽，(e)包括SEQIDNO:36的胺基酸20-116的胺基酸序列的多肽，15:f)包括SEQIDNO:38的胺基酸21-116的胺基酸序列的多肽。:44)編碼選自下面(a)-(f)的多肽的DNA或其一部分:a)包括SEQIDNO:28的胺基酸20-470的胺基酸序列的多肽，:b)包括SEQIDNO:30的胺基酸23-236的胺基酸序列的多肽，:c)包括SEQIDNO:32的胺基酸20-470的胺基酸序列的多肽，:d)包括SEQIDNO:34的胺基酸21-236的胺基酸序列的多肽，:e)包括SEQIDNO:36的胺基酸20-470的胺基酸序列的多肽，:f)包括SEQIDNO:38的胺基酸21-236的胺基酸序列的多肽。:45)選自下面(a)-(f)的DNA或其一部分a)包括SEQIDNO:27的核芬酸126-419的核芬酸序列的DNA，:b)包括SEQIDNO:29的核苦酸105-386的核苷酸序列的DNA，c)包括SEQIDNO:31的核苷酸151-441的核苷酸序列的DNA，:d)包括SEQIDNO:33的核苷酸88-375的核苷酸序列的DNA，e)包括SEQIDNO:35的核苷酸153-443的核香酸序列的DNA,和:f)包括SEQIDNO:37的核苷酸93-380的核普酸序列的DNA。46)選自下面(a)-(f)的DNA或其一部分a)包括SEQIDNO:27的核苷酸69-1481的核苷酸序列的DNA，:b)包括SEQIDNO:29的核苷酸39-749的核苦酸序列的DNA,c)包括SEQIDNO:31的核香酸94-1506的核香酸序列的DNA，:d)包括SEQIDNO:33的核苷酸28-738的核普酸序列的DNA，e)包括SEQIDNO:35的核香酸96-1508的核普酸序列的DNA,和:f)包括SEQIDNO:37的核苦酸33-743的核苦酸序列的DNA。:47)包含(43)-(46)任一項的DNA的載體。:48)包含下面(a)-(c)任一項的DNA的(47)的載體:a)包括SEQIDNO:27的核苷酸126-419的核香酸序列的DNA，:b)包括SEQIDNO:31的核普酸151-441的核普酸序列的DNA,或:c)包括SEQIDNO:35的核苷酸153-443的核-芬酸序列的DNA。:49)包含下面(a)-(c)任一項的DNA的(47)的載體:a)包括SEQIDNO:27的核苷酸69-1481的核苷酸序列的DNA，:b)包括SEQIDNO:31的核苷酸94-1506的核普酸序列的DNA,或:c)包括SEQIDNO:35的核苷酸96-1508的核苷酸序列的DNA。(50)包含下面(a)-(c)任一項的DNA的(47)的載體(a)包括SEQIDNO:29的核苷酸105-386的核苷酸序列的DNA，(b)包括SEQIDNO:33的核普酸88-375的核香酸序列的DNA,或(c)包括SEQIDNO:37的核芬酸93-380的核苦酸序列的DNA。(51)包含下面(a)-(c)任一項的DNA的(47)的載體(a)包括SEQIDNO:29的核香酸39-749的核苷酸序列的DNA,(b)包括SEQIDNO:33的核香酸28-738的核苷酸序列的DNA，或(c)包括SEQIDNO:37的核苷酸33-743的核苷酸序列的DNA。(52)包含下面(a)和(b)的DNA的(47)的載體(a)包括SEQIDNO:27的核香酸126-419的核香酸序列的DNA，和(b)包括SEQIDNO:29的核苷酸105-386的核苷酸序列的DNA。(53)包含下面(a)和(b)的DNA的(47)的載體(a)包括SEQIDNO:27的核苦酸69-1481的核普酸序列的DNA,和(b)包括SEQIDNO:29的核苦酸39-749的核苷酸序列的DNA。(54)包含下面(a)和(b)的DNA的(47)的載體(a)包括SEQIDNO:31的核苷酸151-441的核苷酸序列的DNA，和(b)包括SEQIDNO:33的核苦酸88-357的核苦酸序列的DNA。(55)包含下面(a)和(b)的DNA的(47)的載體(a)包括SEQIDNO:31的核苷酸94-1506的核香酸序列的DNA，和(b)包括SEQIDNO:33的核苷酸28-738的核苷酸序列的DNA。(56)包含下面(a)和(b)的DNA的(47)的載體(a)包括SEQIDNO:35的核苷酸153-443的核香酸序列的DNA,和(b)包括SEQIDNO:37的核苷酸93-380的核苷酸序列的DNA。(57)包含下面(a)和(b)的DNA的(47)的載體(a)包括SEQIDNO:35的核苷酸96-1508的核苷酸序列的DNA，和(b)包括SEQIDNO:37的核苷酸33-743的核苷酸序列的DNA。(58)產生(3)-(42)任一項的人單克隆抗體的細胞。(59)(58)的細胞，其中所述細胞是通過融合來自能產生所述人單克隆抗體的哺乳動物的B細胞和來自哺乳動物的骨髓瘤細胞而獲得的融合細胞。(60)通過轉移下面(a)中描述的DNA或包含所述DNA的載體，下面(b)中描述的DNA或包含所述DNA的載體，或下面(a)和(b)中描述的兩個DNA或包含所述兩個DNA的載體而轉化的基因重組宿主(a)編碼結合人AILIM的單克隆抗體的重鏈多肽或其一部分的DNA;或(b)編碼結合人AILIM的單克隆抗體的輕鏈多肽或其一部分的DNA。(61)(60)的基因重組宿主，其中所述單克隆抗體是人單克隆抗體。(62)(60)或(61)的基因重組宿主，其中所述宿主是哺乳動物細胞。(63)(60)或(61)的基因重組宿主，其中所述宿主是哺乳動物受精卵。(64)(60)-(63)任一項的基因重組宿主，其中所述重鏈多肽選自下面(a)-(c)的重鏈多肽之一(a)包括SEQIDNO:28的胺基酸20-117的胺基酸序列的重鏈多肽，(b)包括SEQIDNO:32的胺基酸20-116的胺基酸序列的重鏈多肽，和(c)包括SEQIDNO:36的胺基酸20-116的胺基酸序列的重鏈多肽。(65)(60)-(63)任一項的基因重組宿主，其中所述重鏈多肽選自下面(a)-(c)的重鏈多肽之一(a)包括SEQIDNO:28的胺基酸20-470的胺基酸序列的重鏈多肽，(b)包括SEQIDNO:32的胺基酸20-470的胺基酸序列的重鏈多肽，和(c)包括SEQIDNO:36的胺基酸20-470的胺基酸序列的重鏈多肽。(66)(60)-(63)任一項的基因重組宿主，其中所述輕鏈多肽選自下面(a)-(c)的輕鏈多肽之一(a)包括SEQIDNO:30的胺基酸23-116的胺基酸序列的輕鏈多肽，(b)包括SEQIDNO:34的胺基酸21-116的胺基酸序列的輕鏈多肽，和(c)包括SEQIDNO:38的胺基酸21-116的胺基酸序列的輕鏈多肽。(67)(60)-(63)任一項的基因重組宿主，其中所述輕鏈多肽選自下面(a)-(c)的輕鏈多肽之一(a)包括SEQIDNO:30的胺基酸23-236的胺基酸序列的輕鏈多肽，(b)包括SEQIDNO:34的胺基酸21-236的胺基酸序列的輕鏈多肽，和(c)包括SEQIDNO:38的胺基酸21-236的胺基酸序列的輕鏈多肽。(68)(60)-(63)任一項的基因重組宿主，其中所述重鏈和輕鏈多肽分別是下面(a)和(b)中定義的那些(a)包括SEQIDNO:28的胺基酸20-117的胺基酸序列的重鏈多肽，和(b)包括SEQIDNO:30的胺基酸23-116的胺基酸序列的輕鏈多肽。(69)(60)-(63)任一項的基因重組宿主，其中所述重鏈和輕鏈多肽分別是下面(a)和(b)中定義的那些(a)包括SEQIDNO:28的胺基酸20-470的胺基酸序列的重鏈多肽，和(b)包括SEQIDNO:30的胺基酸23-236的胺基酸序列的輕鏈多肽。(70)(60)-(63)任一項的基因重組宿主，其中所述重鏈和輕鏈多肽分別是下面(a)和(b)中定義的那些(a)包括SEQIDNO:32的胺基酸20-116的胺基酸序列的重鏈多肽，和(b)包括SEQIDNO:34的胺基酸21-116的胺基酸序列的輕鏈多肽。(71)(60)-(63)任一項的基因重組宿主，其中所述重鏈和輕鏈多肽分別是下面(a)和(b)中定義的那些(a)包括SEQIDNO:32的胺基酸20-470的胺基酸序列的重鏈多肽，和(b)包括SEQIDNO:34的胺基酸21-236的胺基酸序列的輕鏈多肽。(72)(60)-(63)任一項的基因重組宿主，其中所述重鏈和輕鏈多肽分別是下面(a)和(b)中定義的那些(a)包括SEQIDNO:36的胺基酸20-116的胺基酸序列的重鏈多肽，和(b)包括SEQIDNO:38的胺基酸21-116的胺基酸序列的輕鏈多肽。(73)(60)-(63)任一項的基因重組宿主，其中所述重鏈和輕鏈多肽分別是下面(a)和(b)中定義的那些(a)包括SEQIDNO:36的胺基酸20-470的胺基酸序列的重鏈多肽，和(b)包括SEQIDNO:38的胺基酸21-236的胺基酸序列的輕鏈多肽。(74)(60)-(63)任一項的基因重組宿主，其中編碼所述重鏈多肽的DNA是下面(a)-(c)任一項中定義的DNA:(a)包括SEQIDNO:27的核苷酸126-4]9的核香酸序列的DNA，(b)包括SEQIDNO:31的核苷酸151-441的核苷酸序列的DNA,和(c)包括SEQIDNO:35的核苷酸153-443的核普酸序列的DNA。(75)(60)-(63)任一項的基因重組宿主，其中編碼所述重鏈多肽的DNA是下面(a)-(c)任一項中定義的DNA:(a)包括SEQIDNO:27的核香酸69-1481的核香酸序列的DNA,(b)包括SEQIDNO:31的核香酸94-1506的核香酸序列的DNA，和(c)包括SEQIDNO:35的核香酸96-1508的核苷酸序列的DNA。(76)(60)-(63)任一項的基因重組宿主，其中編碼所述輕鏈多肽的DNA19是下面(a)-(c)任一項中定義的DNA:(a)包括SEQIDNO:29的核苷酸105-386的核苷酸序列的DNA，(b)包括SEQIDNO:33的核苷酸88-375的核苷酸序列的DNA,和(c)包括SEQIDNO:37的核普酸93-380的核普酸序列的DNA。(77)(60)-(63)任一項的基因重組宿主，其中編碼所述輕鏈多肽的DNA是下面(a)-(c)任一項中定義的DNA:(a)包括SEQIDNO:29的核苦酸39-749的核苷酸序列的DNA，(b)包括SEQIDNO:33的核普酸28-738的核苷酸序列的DNA，和(c)包括SEQIDNO:37的核苦酸33-743的核苷酸序列的DNA。(78)(60)-(63)任一項的基因重組宿主，其中編碼所述重鏈多肽的DNA是下面(a)中描述的DNA,編碼所述輕鏈多肽的DNA是下面(b)中描述的DNA:(a)包括SEQIDNO:27的核苷酸126-419的核香酸序列的DNA,和(b)包括SEQIDNO:29的核香酸105-386的核苷酸序列的DNA。(79)(60)-(63)任一項的基因重組宿主，其中編碼所述重鏈多肽的DNA是下面(a)中描述的DNA,編碼所述輕鏈多肽的DNA是下面(b)中描述的DNA:(a)包括SEQIDNO:27的核苷酸69-1481的核苷酸序列的DNA，和(b)包括SEQIDNO:29的核苷酸39-749的核芬酸序列的DNA。(80)(60)-(63)任一項的基因重組宿主，其中編碼所述重鏈多肽的DNA是下面(a)中描述的DNA，編碼所述輕鏈多肽的DNA是下面(b)中描述的DNA:(a)包3舌SEQIDNO:31的核芬酸151-441的核苷酸序列的DNA，和(b)包括SEQIDNO:33的核苷酸88-375的核苦酸序列的DNA。(81)(60)-(63)任一項的基因重組宿主，其中編碼所述重鏈多肽的DNA是下面(a)中描述的DNA，編碼所述輕鏈多肽的DNA是下面(b)中描述的DNA:(a)包括SEQIDNO:31的核香酸94-1506的核苷酸序列的DNA,和(b)包括SEQIDNO:33的核苷酸28-738的核苦酸序列的DNA。(82)(60)-(63)任一項的基因重組宿主，其中編碼所述重鏈多肽的DNA是下面(a)中描述的DNA，編碼所述輕鏈多肽的DNA是下面(b)中描述的DNA:(a)包括SEQIDNO:35的核苷酸153-443的核苷酸序列的DNA,和(b)包括SEQIDNO:37的核苷酸93-380的核苦酸序列的DNA。(83)(60)-(63)任一項的基因重組宿主，其中編碼所述重鏈多肽的DNA是下面(a)中描述的DNA,編碼所述輕鏈多肽的DNA是下面(b)中描述的DNA:(a)包括SEQIDNO:35的核苷酸96-1508的核苦酸序列的DNA,和(b)包括SEQIDNO:37的核苷酸33-743的核苦酸序列的DNA。(84)(60)-(62)任一項，或(64)-(83)任一項的基因重組宿主(前提是排除所述宿主是受精卯的情況)產生的人單克隆抗體或其一部分。(85)含有(1)或(2)的人抗體和可藥用載體的藥物組合物。(86)含有(3)-(42)任一項的人單克隆抗體或其一部分和可藥用載體的藥物組合物。(87)含有(84)的人單克隆抗體或其一部分和可藥用載體的藥物組合物。(88)(85)-(87)任一項的藥物組合物，其中所述藥物組合物用來抑制AILIM介導的轉導到細胞中的信號轉導。(89)(85)-(87)任一項的藥物組合物，其中所述藥物組合物用來預防AILIM-表達細胞的增殖。(90)(85)-(87)任一項的藥物組合物，其中所述藥物組合物用來預防AILIM-表達細胞產生細胞因子。(91)(85)-(87)任一項的藥物組合物，其中所述藥物組合物用來誘導AILIM介導的轉導到細胞中的信號轉導。(92)(85)-(87)任一項的藥物組合物，其中所述藥物組合物用來誘導AILIM-表達細胞的增殖。(93)(85)-(87)任一項的藥物組合物，其中所述藥物組合物用來誘導AILIM-表達細胞產生細胞因子。(94)(85)-(87)任一項的藥物組合物，其中所述藥物組合物用來誘導針對AILIM-表達細胞的抗體-依賴性細胞毒活性，和/或針對AILIM-表達細胞的免疫胞解或凋亡。(95)用來阻止，治療或預防遲髮型過敏的藥物組合物，含有在調節AILIM介導的信號轉導中有活性的物質，和可藥用載體。(96)(95)的藥物組合物，其中所述物質是一種蛋白物質。(97)(96)的藥物組合物，其中所述蛋白物質選自下面的物質(a)結合AILIM的抗體或其一部分；(b)包括AILIM胞外區的全部或部分的多肽；(c)包括AILIM胞外區的全部或部分，以及免疫球蛋白重鏈恆定區的全部或部分的融合多肽；和(d)結合AILIM的多肽。(98)(97)的藥物組合物，其中所述結合AILIM的抗體是(1)或(2)的人抗體。(99)(97)的藥物組合物，其中所述結合AILIM的抗體是(3)-(")任一項的人單克隆抗體。(100)(97)的藥物組合物，其中所述抗AILIM的抗體是(84)的人單克隆抗體。(101)(95)的藥物組合物，其中所述物質是非蛋白物質。(102)(101)的藥物組合物，其中所述非蛋白物質是DNA，RNA，或一種化學合成的化合物。(103)—種鑑定結合AILIM或AILIM配體的物質的方法，包括下面的步驟(a)製備不溶性載體，AILIM的全部胞外區或其一部分都固定在上面；(b)製備包括用發出可檢測信號的標記材料標記的AILIM配體的全部胞外區或其一部分的多肽；(c)使步驟(a)中的不溶性載體與步驟(b)中的多肽反應；(d)使步驟(a)的不溶性載體，步驟(b)的多肽，以及所述物質以任何順序相互反應；(e)分別檢測步驟(c)中製備的複合體中包含的所述標記材料發出的信號，和步驟(d)中製備的複合體中包含的所述標記材料發出的信號；和(f)比較步驟(e)中檢測到的各個信號的大小。(104)—種鑑定結合AILIM或AILIM配體的物質的方法，包括下面的步驟(a)製備不溶性載體，AILIM的全部胞外區或其一部分都固定在上面；(b)製備包括用發出可^r測信號的標記材料標記的AILIM的全部胞外22區或其一部分的多肽；(c)使步驟(a)中的不溶性載體與步驟(b)中的多肽反應；(d)使步驟(a)的不溶性載體，步驟(b)的多肽，以及所述物質以任何順序相互反應；Ce)分別檢測步驟(c)中製備的複合體中包含的所述標記材料發出的信號，和步驟(d)中製備的複合體中包含的所述標記材料發出的信號；和(f)比較步驟(e)中檢測到的各個信號的大小。(105)(103)或(104)的方法，其中所述包括AILIM的全部胞外區或其一部分的多肽是一種包括AILIM的全部胞外區或其一部分，和免疫球蛋白重鏈的全部恆定區或其一部分的融合多肽。(106)(103)或(104)的方法，其中所述包括AILIM配體的全部胞外區或其一部分的多肽是一種包括AILIM配體的全部胞外區或其一部分，和免疫球蛋白重鏈的全部恆定區或其一部分的融合多肽。(107)(103)-(106)任一項的方法，其中所述AILIM是人AILIM。(108)(103)-(107)任一項的方法，其中所述AILIM配體是人AILIM配體。下面通過定義本發明的術語詳細描述本發明。本文中"哺乳動物"指人，牛，山羊，兔，小鼠，大鼠，倉鼠和豚鼠；優選指人，兔，大鼠，倉鼠或小鼠並且特別優選指人，大鼠，倉鼠或小鼠。這裡使用的術語"除人以外的哺乳動物"和"非人哺乳動物"彼此是同義詞，指上文定義的人之外的所有哺乳動物。這裡使用的術語"胺基酸"指自然界存在的每一種胺基酸，優選根據下面給出的三字母縮寫或單字母縮寫描述的那些胺基酸甘氨酸(Gly/G),丙氨酸(Ala/A)，纈氨酸(Val/V),亮氨酸(Leu/L),異亮氨酸(Ile/L),絲氨酸(Ser/S),蘇氨酸(Thr/T)，天冬氨酸(Asp/D)，穀氨酸(Glu/E)，天冬醯胺(Asn/N),穀氨醯胺(Gln/Q)，賴氨酸(Lys/K),精氨酸(Arg/R)，半胱氨酸(Cys/C),蛋氨酸(Met/M)，苯丙氨酸(Phe/F)，酪氨酸(Tyr/Y)，色氨酸(Trp/W)，組氨酸(His/H)，脯氨酸(Pro/P)。這裡使用的術語"AILIM"是激活誘導型淋巴細胞免疫調製分子的縮寫，指具有先前報告中已經描述的結構和功能的哺乳動物細胞表面分子，更優選地，特別是來自人的AILIM(例如，國際免疫學(InternationalImmunology),12巻，No.1，p.51-55;基因庫登記號:BAA82129(人)，23BAA82128(大鼠)，BAA82127(大鼠變種)，和BAA82126(小鼠))。或，此AILIM也被稱為ICOS(待審公開的日本專利申請(JP-A)平11-29599,國際專利申請W098/38216)，這些縮寫指相同的分子。這裡使用的"AILIM配體"指與所述協同刺激分子AILIM(ICOS)相互作用，並被稱為B7h,B7RP-1，GL50或LICOS的細胞表面分子(自然(Nature),402巻,No.6763,p.827-832，1999;天然藥物(NatureMedicine),5巻,No.12，p.1365-1369,1999;免疫學雜誌(J.Immunology),164巻，p.1653-1657,2000;當今生物學(Curr.Biol.)，10巻，No.6，p.333-336,2000)。此外，這裡使用的"AILIM"也包括與參考文獻中描述的各哺乳動物的AILIM,特別優選人AILIM，具有基本上相同的胺基酸序列的多肽。此外，與已經報導過的大鼠AILIM變體(基因庫登記號BAA82127)相似的人AILIM變體也包括在本發明的"AILIM"之內。這裡使用的"AILIM配體"也具有上述相似意義。這裡"具有基本上相同的胺基酸序列的多肽"指下文所述變體多肽。即，只要這些變體多肽具有基本上等價於天然型AILIM(特別優選來自人的AILIM)的生物學性質，則它們就是本發明的多肽。如具有天然型AILIM的胺基酸序列，且其中多個胺基酸殘基，優選1-10個胺基酸殘基，最優選1-5個胺基酸殘基被缺失和/或修飾，或已向其中添加多個胺基酸殘基，優選1-10個胺基酸殘基，最優選1-5個胺基酸殘基的那些變體。此外，它們可以是分子中具有所述多個胺基酸取代，缺失，修飾和添加的變體多肽。本發明中的"AILIM配體"也具有上述相似意義。除了基因重組技術之外，通過適當地使用本
技術領域：
公知的方法例如化學合成方法，細胞培養方法等，或這些的改進方法，能夠製備本發明中的AILIM(特別是人AILIM)和AILIM配體(特別是人AILIM配體)。根據常規方法(實驗藥物:增刊，"遺傳工程手冊"(1992);等等)實現胺基酸的這些取代，缺失，或插入。用來製備上述突變多肽的方法的例子是合成寡核苷酸定點誘變(缺口雙鏈法)，用亞硝酸鹽或亞^L酸鹽處理隨^/L導入點突變的點誘變法，利用Bal31酶等製備缺失突變體的方法，盒式誘變，接頭分區方法，錯摻方法，錯配引物方法，DNA片段合成方法等等。24例如可以如下進行合成寡核苷酸定點誘變(缺口雙鏈方法)。將要誘變的區克隆到具有琥珀突變的M13噬菌體載體中來製備單鏈噬菌體DNA。通過限制酶處理將沒有琥珀突變的M13載體的RFIDNA線性化之後，將DNA與上述單鏈噬菌體DNA混合，變性，退火，從而形成"缺口雙鏈DNA"。其中導入了突變的合成寡核苷酸與該缺口雙鏈DNA雜交，並且通過DNA聚合酶和DNA連接酶進行的反應製備閉合環雙鏈DNA。用該DNA轉染錯配修復活性有缺陷的大腸桿菌mutS細胞。用成熟噬菌體感染沒有抑制活性的大腸桿菌細胞，只篩選出沒有琥珀突變的噬菌體。用亞硝酸鹽導入點突變的方法應用例如下文所述原理。如果用亞硝酸鹽處理DNA,44基經脫氨基作用將腺。票呤變為次黃噪呤，胞嘧啶變為尿嘧啶，鳥噪呤變為黃噪呤。如果將脫氨基化DNA導入細胞，則"A:T"和"G:C，，分別被"G:C"和"A:T"置換，因為在DNA複製中，次黃嘌呤，尿嘧啶和黃噤呤分別與胞嘧啶，腺嘌呤和胸腺嘧啶形成》鹹基對。實際上，用亞硝酸鹽處理過的單鏈DNA片段與"缺口雙鏈DNA"雜交，然後通過與合成寡核苷酸定點誘變(缺口雙鏈方法)相同的方法操作來分離突變抹。另外，"AILIM"在這裡也包括所述AILIM的"一部分"。這裡，"一部分"指包括上面定義的AILIM胺基酸序列的任何部分序列的多肽。優選地，所述部分指上面定義的AILIM(特別優選人AILIM)的胞外區或其任何部分。本發明中的"AILIM配體"也具有上述相似意義。所述AILIM的"部分"(優選AILIM的胞外區或其任何部分)可根據下述本領域公知方法或其改良法，經基因重組技術或化學合成，或使用蛋白水解酶適當裂解從細胞培養分離的AILIM(特別優選人AILIM)等等而製備。通過上述相似方法也可以製備"AILIM配體的部分"。本發明的"人抗體"是結合上面定義的AILIM或其一部分(特別優選來自人的AILIM或其一部分)的人抗體。具體地說，它指來自人的多克隆抗體(人多克隆抗體，人抗血清)或來自人的單克隆抗體(人單克隆抗體)。本發明的"人單克隆抗體，，是結合上面定義的AILIM或其一部分(特別優選來自人的AILIM或其一部分)的人單克隆抗體。更具體地說，包括重鏈(H-鏈)的可變區和恆定區，和輕鏈(L-鏈)的可變25區和恆定區的所有區都由編碼所述人免疫球蛋白的基因衍生的人免疫球蛋白組成。L-鏈舉例來說是人K鏈或人入鏈。本發明的結合AILIM(特別優選來自人的AILIM)或其一部分的人單克隆抗體是具有上述(5)-(42)或(84)任一項中定義的特徵的人單克隆抗體。更具體地說，包括具有實施例和附圖中描述的各種特徵和工業實用性的各種人單克隆抗體。本發明的人單克隆抗體的優選實施方案是上述(5)-(42)或(84)任一項中定義的結合AILIM或其一部分的人單克隆抗體。最優選的實施方案是上述(30)或(39)中描述的結合人AILIM的人單克隆抗體。通過用下述任何免疫原(抗原)免疫下面的產生人抗體的轉基因非人哺乳動物能夠製備本發明的"人單克隆抗體"。或人工建立的細胞系；AILIM(特別優選來自人的AILIM)的基因重組細胞；(c)通過將上述(a)或(b)中的細胞溶解而獲得的細胞溶胞產物，或從所述細胞溶胞產物純化的AILIM(特別優選來自人的AILIM)的多肽片段；(d)利用基因重組技術製備的以可溶性多肽形式表達上述AILIM(特別優選來自人的AILIM)的一部分(特別優選胞外區或其任何優選的肽)的基因重組細月包；(e)通過培養上述(d)中基因重組細胞獲得的培養上清液或從該培養上清液純化的AILIM(特別優選來自人的AILIM)的胞外區多肽(可溶性AILIM);或①化學合成的AILIM(特別優選來自人的AILIM)的一部分(特別優選胞外區或其任何優選的肽)。此外，通過培養"基因重組宿主"[這裡，所述宿主是除了受精卵之外的真核細胞(優選哺乳動物細胞，例如CHO，淋巴細胞，和骨髓瘤細胞)]，從培養上清液也可以獲得本發明的單克隆抗體，其中所述宿主可以應用基因重組技術將編碼本發明人單克隆抗體的各重鏈和輕鏈的cDNA(優選包含所述cDNA的載體)轉化宿主來製備，其產生基因重組型人單克隆抗體。具體地說，通過培養本發明的上述(60)-(62)或(64)-(80)任一項中描述的基因重組宿主能夠獲得本發明的單克隆抗體(這裡，所述宿主是除了受精卵之外的真核細胞(優選哺乳動物細胞，例如CHO，淋巴細胞，和骨髓瘤細胞))。另夕卜，本發明的人單克隆抗體可以是具有屬於IgG(IgGl,IgG2，IgG3，和IgG4),IgM，IgA(IgAl和IgA2)，IgD或IgE的任何同種型的人單克隆抗體。優選地，所述單克隆抗體屬於IgG(IgGl，IgG2，IgG3，和lgG4),更優選IgGl,IgG2或IgG4。根據已知的常用方法，用上述(a)-(f)中任一種免疫原(抗原)免疫能產生人抗體的轉基因非人哺乳動物例如下述能產生人抗體的轉基因小鼠，能夠製備本發明的人單克隆抗體。即，例如，根據情況要求用與弗氏佐劑混合的所述抗原免疫能產生人抗體的所述轉基因非人哺乳動物。從所述免疫動物採集血清可以獲得多克隆抗體。使從所述免疫動物分離的所述抗體產生細胞與不能產生自身抗體的骨髓瘤細胞製備融合細胞(雜交瘤)，並且克隆所述雜交瘤，從而篩選產生對用來免疫所述哺乳動物的抗原具有特異親和力的多克隆抗體的克隆，最終製備單克隆抗體。更具體地說，如下所述製備單克隆抗體。即，通過皮內，肌內，靜脈內，足墊中，或腹膜內將上面(aHc)中提到的任何免疫原注射一次至幾次，或將所述免疫原移植到所述哺乳動物體內，來免疫所述產生人抗體的轉基因非人哺乳動物(特別優選"產生人抗體的轉基因小鼠，，)。通常，第一次接種之後，每隔1-14天對每隻小鼠接種一至四次。在最後一次接種的約1-5天後從這樣免疫過的哺乳動物獲得產生抗體的細胞。接種的次數和時間間隔可以適當根據，例如，使用的免疫原的特性而安排。通過Kohler和Milstein的方法(自然(Nature)，256巻，p.495-497(1975))或其改良法可以製備分泌人單克隆抗體的雜交瘤。也就是說，從根據上述免疫的產生人抗體的轉基因非人哺乳動物獲得脾，淋巴結，骨髓或扁桃體(優選脾)，使其中含有的產生抗體的細胞與優選從哺乳動物例如小鼠，大鼠，豚鼠，倉鼠，兔或人，更優選小鼠，大鼠或人獲得的沒有產生自身抗體能力的骨髓瘤融合，來製備雜交瘤。例如，來自小鼠的骨髓瘤P3/X63-AG8.653(ATCCNo.CRL-1580),P3/NSI/l-Ag4-l(NS-l)，P3/X63-Ag8.U1(P3U1)，SP2/0-Agl4(Sp2/0，Sp2)，NSO,PAI,F0,或BW5147，來自大鼠的骨髓瘤210RCY3-Ag.2.3.，或來自人的骨髓瘤U-266AR1，GM1500-6TG-A1-2,UC729-6，CEM-AGR,D1R11或CEM-T15可以作為用於細胞融合的骨髓瘤。通過，例如，在微量滴定板中培養細胞和通過測定有雜交瘤生長的孔中的培養上清液對用於上述接種的免疫原的反應性，可以篩選產生單克隆抗體的細胞(例如，雜交瘤)，所用方法如酶免疫方法分析例如》文射免疫分析(RIA)和酶聯免疫-溶劑試驗(ELISA)。通過體外或體內，例如在小鼠，大鼠，豚鼠，倉鼠或兔，優選小鼠或大鼠，更優選小鼠的腹水中培養雜交瘤，並且從所得培養上清液或哺乳動物的腹水分離抗體，能夠從雜交瘤產生單克隆抗體。通過下面的方法能夠大規模製備本發明的單克隆抗體(1)從所述雜交瘤分別克隆出編碼所述單克隆抗體的重鏈和輕鏈的相應基因(cDNA等)；(2)將分別編碼重鏈和輕鏈的克隆基因插入不同載體或單個載體中，以製備表達載體；(3)將所述表達載體轉移到目標非人哺乳動物(例如山羊)的受精卵中；(4)將轉移有所述基因的所述受精卵移植到代孕母體的子宮中獲得嵌合非人動物；(5)通過進一步使所述嵌合山羊與另一個非人哺乳動物交配，產生轉基因非人哺乳動物(牛，山羊，綿羊或豬)，其中編碼重鏈和輕鏈的基因已分別插入到內源基因中；和(6)從所述轉基因非人哺乳動物的奶中大規模獲得從所述人單克隆抗體基因衍生的單克隆抗體(NikkeiScience,1997年4月，p.78-84)。根據，例如，要培養的細胞的性質，研究目的，和培養方法的各種條件，通過應用公知的營養培養基或從已知用於培養，維持和貯存雜交瘤的基礎培養基衍生的任何營養培養基，能夠進行產單克隆抗體的細胞的體外培養，來在培養上清液中產生單克隆抗體。基礎培養基的例子是低4丐濃度培養基，例如Ham，F12培養基，MCDB153培養基，或低釣濃度MEM培養基，和高鈣濃度培養基，例如MCDB104培養基，MEM培養基，D-MEM培養基，RPMI1640培養基，ASF104培養基，或RD培養基。基礎培養基可以根據目的含有，例如，血清，激素，28細胞因子，和/或各種無機或有機物。通過飽和硫酸銨沉澱，優球蛋白沉澱方法，己酸方法，辛酸方法，離子交換層析(DEAE或DE52)，使用抗免疫球蛋白柱或蛋白A柱的親和層析，可以從上述培養上清液或腹水中分離和純化單克隆抗體。本發明的人單克隆抗體包括由重鏈和/或輕鏈組成的人單克隆抗體，其中每條鏈的胺基酸序列中有一個或多個胺基酸殘基缺失，被取代或添加。這裡，"多個胺基酸殘基"指多個胺基酸，特別是1-10個胺基酸殘基，優選1-5個胺基酸殘基。通過部分改變編碼本發明的人單克隆抗體的胺基酸序列的鹼基序列，可以向所述胺基酸序列引入如上所述部分修飾(缺失，取代，插入或添加)。所述對鹼基序列的部分改變可通過標準方法使用已知的定點誘變技術(美國國家科學院院刊(Proc.Natl.Acad.Sci.USA),81巻，p.5662-5666，1984)導入。根據公開的文獻可以製備"轉基因的產生人抗體的非人哺乳動物"，特別是產生人抗體的轉基因小鼠，其是一個優選的實施方案(自然遺傳(NatureGenetics),7巻，p,13-21,1994;自然遺傳(NatureGenetics),15巻，p.146-156,1997;國際公開號平4-504365的公開的日文譯本；國際公開號平7-509137的公開的日文譯本；NikkeiScience,1995年6月，p.40-50;國際專利公開號W094/25585;自然(Nature),368巻，p.856-859，1994;和國際公開號平6-500233的公開的日文譯本等等)。具體地說，例如，應用由下面過程組成的技術，能夠製備所述產生人抗體的轉基因小鼠(1)製備基因敲除小鼠，其內源免疫球蛋白重鏈基因已功能性失活，方法是通過同源重組用抗藥性標記基因(例如新黴素耐藥基因)取代小鼠內源免疫球蛋白K重鏈的基因座位的至少一部分；(2)製備基因敲除小鼠，其內源免疫球蛋白輕鏈基因(特別是K鏈基因)已功能性失活，方法是通過同源重組用抗藥性標記基因(例如新黴素耐藥基因)取代小鼠內源免疫球蛋白輕鏈的基因座位的至少一部分；(3)製備轉基因小鼠，其中已通過諸如能攜帶大基因的酵母人工染色體(YAC)等載體將人免疫球蛋白重鏈基因座位的所需區整合到小鼠染色體中；(4)製備轉基因小鼠，其中已通過諸如能攜帶大基因的酵母人工染色體(YAC)等載體將人免疫球蛋白輕鏈基因座位(特別是K鏈基因)的所需區整合到小鼠染色體中；和(5)製備轉基因小鼠，其內源免疫球蛋白重鏈和輕鏈基因座位都功能性失活，並且已將人免疫球蛋白重鏈和輕鏈基因座位的所需區整合到其染色體中，方法是使上述(1)至(4)的基因敲除小鼠和轉基因小鼠以任意順序交酉己。上述基因敲除小鼠可如下製備通過同源重組，用外源標記基因(例如新黴素耐藥基因)取代小鼠內源免疫球蛋白基因座位的適當區，以失活所述基因座位，從而避免重排。利用所述同源重組進行的失活可以使用例如稱之為陽性陰性選擇(PNS)的方法(NikkeiScience,1994年5月，p.52-62)。通過在J-或C-區的一部分(例如，Cju區)中導入損傷，可以實現免疫球蛋白重鏈基因座位的功能失活。通過在J-或C-區的一部分中導入損傷，或在跨越了J-和C-區的一個區中導入損傷，可以實現免疫球蛋白輕鏈(例如K鏈)的功能失活。根據通常用於產生轉基因動物的方法(例如，參見"動物細胞實驗最新手冊(NewestManualofAnimalCellExperiment)",LIC出版社，第7章，p.361-408(1990))，能夠製備轉基因小鼠。具體地說，應用原生質球融合技術，將例如來自正常小鼠胚泡的HPRT-陰性(次黃嘌呤-鳥嘌呤磷酸核糖轉移酶基因缺陷)ES細胞(胚胎幹細胞)與包含插入了編碼所述人免疫球蛋白重鏈基因座位或輕鏈基因座位或其一部分的基因和HPRT基因的YAC載體的酵母融合。通過HAT篩選方法篩選其小鼠內源基因與所述外源基因整合的ES細胞。然後，將篩選到的ES細胞顯微注射到從另一個正常小鼠獲得的受精卵(胚泡)中(美國國家科學院院刊(Proc.Natl.Acad.Sci.USA),77巻，p.7380-7384，1980;美國專利No.4873191)。將該胚泡移植到作為代孕母體的另一隻正常小鼠的子宮中。然後，從代孕母體小鼠生出嵌合的轉基因小鼠。通過使該嵌合的轉基因小鼠與正常小鼠交配，得到異基因轉基因小鼠。根據Mendel法則，通過使該異基因轉基因小鼠彼此交配，得到同基因轉基因小鼠。本發明中使用的"單克隆抗體的部分"指本發明上述人單克隆抗體的一部分，具體地說，包括F(ab，)2,Fab，，Fab;Fv(抗體的可變區片段)，sFv，dsFv(二硫鍵穩定型Fv)，或dAb(單一結構域抗體)(Exp.Opin.Ther.Patents,6巻，No.5,p.441-456(1996))。30"F(ab，)2"和"Fab，"可通過用蛋白酶例如胃蛋白酶和木瓜蛋白酶處理免疫球蛋白(單克隆抗體)來製備，它們表示通過在兩條H鏈之間的絞鏈區中接近二硫鍵處消化免疫球蛋白產生的抗體片段。例如，木瓜蛋白酶裂解IgG兩條H鏈之間的絞鏈區中二硫鍵的上遊，產生兩個同源抗體片段，其中由VJL鏈可變區)和Cl(L鏈恆定區)組成的L鏈，和由VH(H鏈可變區)和CHYl(H鏈的恆定區中的y1區)組成的H鏈片段通過二石危鍵在它們的C末端區連接。這兩個同源抗體片段都稱為Fab，。胃蛋白酶也裂解IgG兩條H鏈之間絞鏈區中二硫鍵的下遊，產生比由上述兩個Fab，在絞鏈區連接形成的片段稍微大一些的抗體片段。該抗體片段稱為F(ab，)2。"結合速度常數(ka)"表示根據抗體抗原反應動力學計算的所述單克隆抗體與靶抗原的結合強度(程度)。"解離速度常數(kd)"表示所述單克隆抗體與靶抗原解離的強度(程度)。"解離常數(Kd)"是通過將所述"解離速度常數(kd)"除以"結合速度常數(ka)"得到的值。這些常數用來代表所述單克隆抗體對抗原的親和力及它們中和抗原的活性。所述常數可以根據各種方法來分析，並可使用商售分析試劑盒BiacoreX(AmershamPharmacia)或類似的試劑盒，才艮據試劑盒所附的i)L明和實-驗方法，容易地分析所述常數。使用所述試劑盒得到的ka，kd和Kd分別以1/M.秒，1/秒和M(摩爾)單位表示。ka值越高表明所測單克隆抗體的抗原結合活性越強，Kd值越小表明抗體的抗原中和活性越強。本發明的人單克隆抗體包括那些具有下面(l)-(3)所示ka，kd和Kd值的人單克隆抗體(1)以1.0X104(1/M.秒)或更大，優選1.0X105(1/M.秒)或更大的結合速度常數(ka)結合人AILIM或其一部分的人單克隆抗體。(2)以1.0X10、l/秒)或更小，優選1.0X10-s(l/秒)或更小的解離速度常數(kd)結合人AILIM或其一部分的人單克隆抗體。(3)具有對人AILIM或其一部分的反應性，解離常數(Kd)是1.0X10-7(M)或更小，優選1.0X10-s(M)或更小，更優選1.0X10，M)或更小的人單克隆抗體。在該情況下，預期上述ka,kd和Kd各個值隨著在測定時不同的條件而稍有波動，有誤差範圍，但是一般情況下特定指數沒有波動。本發明的"產生單克隆抗體的細胞，，或產生人單克隆抗體的基因重組31的"基因重組宿主"(這裡，所述宿主是除受精卵以外的細胞)指產生上述本發明人單克隆抗體的任何細胞。具體地說，例如，它包括下面(l)-(3)任一項中描述的細胞，但是不局限於它們(1)通過用上面定義的免疫原(抗原)免疫上述產生人抗體的轉基因非人哺乳動物並且從所述接受免疫的動物收集細胞而獲得的產生人單克隆抗體的B細月包。(2)通過使這樣獲得的產生人單克隆抗體的B細胞與來自哺乳動物的骨髓瘤細胞融合得到的上述融合細胞(雜交瘤)。(3)通過用編碼從所述產生人單克隆抗體的B細胞或產生人單克隆抗體的融合細胞(雜交瘤)分離的所述人單克隆抗體的基因(編碼重鏈的基因或編碼輕鏈的基因，或兩者)轉化除所述B細胞和雜交瘤以外的細胞(例如CHO(中國倉鼠卵巢)細胞，BHK(倉鼠胚腎)細胞，淋巴細胞例如骨髓瘤)，獲得的產生人單克隆抗體的基因重組細胞。這裡，(3)中提到的產生人單克隆抗體的基因重組細胞即指產生由上述(l)中B細胞或上述(2)中雜交瘤產生的人單克隆抗體的基因重組體的基因重組細"包。本發明的"基因重組宿主"中的"宿主"除了上述各種哺乳動物細胞之外，包括任何非人哺乳動物(山羊，豬，綿羊，牛，等)的受精卵。通過將本發明編碼抗人AILIM的任何單克隆抗體(優選人單克隆抗體)的基因(編碼重鏈的基因或編碼輕鏈的基因，或兩者)轉移到該受精卵中，能夠獲得本發明的基因重組受精卵。該基因重組受精卵被能製備能大規模從奶中生產蛋白質的轉基因動物(NikkeiScience,1997年4月，p.78-84)。本發明包括的"物質"，具體地說"在調節AILIM介導的信號轉導方面有活性的物質"，更具體地說"在抑制AILIM-表達細胞的增殖方面，或在抑制AILIM-表達細胞產生細胞因子的方面有活性的物質"指自然界存在的天然物質，或人工製備的任意物質。與"結合AILIM的物質"和"結合AILIM配體的物質"相關的"物質"在這裡也指自然界存在的任何天然物質，或人工製備的任意物質。這裡，"AILIM介導的信號轉導"指導致AILIM-表達細胞的任意表型變化(細胞增殖，細胞的激活，細胞的失活，凋亡，和/或從AILIM-表達細胞產生任意細胞因子的能力改變)的經由AILIM的信號轉導。"物質，，可以主要分類為"蛋白質物質"和"非蛋白質物質"。"蛋白質物質"的例子是下面的多肽，抗體(多克隆抗體，單克隆抗體，或單克隆抗體的一部分，並且特別優選上述人抗體)。當所述物質是一種抗體時，所述物質優選是一種單克隆抗體。當所述物質是一種單克隆抗體時，所述物質不僅包括來自非人哺乳動物的單克隆抗體，還包括重組嵌合單克隆抗體，重組人源化單克隆抗體和人單克隆抗體。這裡，"重組嵌合單克隆抗體"是一種通過基因工程製備的單克隆抗體，具體地指一種嵌合抗體例如小鼠/人嵌合單克隆抗體，其可變區來自非人哺乳動物(小鼠，大鼠，倉鼠等)的免疫球蛋白，其恆定區來自人免疫球蛋白。本發明的"人源化單克隆抗體(CDR-移植型抗體)"是一種通過基因工程製備的單克隆抗體，具體地指其中高變區中互補決定區的部分或全部來自非人哺乳動物(小鼠，大鼠，倉鼠等)單克隆抗體高變區的互補決定區，可變區的框架區來自人免疫球蛋白可變區的框架區，恆定區來自人免疫球蛋白恆定區的人源化單克隆抗體。高變區的互補決定區存在於抗體可變區的高變區中，並且指直接結合併互補於抗原的三個區(互補決定區殘基，CDR1，CDR2，和CDR3)。可變區的框架區指位於這三個互補決定區的上遊，下遊或之間的四個比較保守的區(框架區，FR1,FR2,FR3，和FR4)。換句話說，人源化單克隆抗體指其中除了來自非人哺乳動物單克隆抗疫球蛋白的區置換的單克隆抗體。來自人免疫球蛋白的恆定區具有各種同種型例如IgG(IgGl，IgG2，IgG3，和lgG4)，IgM，IgA，IgD和IgE中固有的胺基酸序列。本發明的人源化單克隆抗體的恆定區可以是來自屬於任何同種型的人免疫球蛋白。優選地，其是人IgG的恆定區。對來自人免疫球蛋白恆定區的框架區沒有特別限定。當本發明的物質是一種多肽時，所述物質包括下面的多肽，其片段(寡肽)，融合多肽，其化學修飾的多肽。寡肽的例子是包括5-30個，優選5-20個胺基酸的肽。化學修飾可以根據不同目的設計，例如，體內給藥的情況下提高血液半衰期，或口服的情況下在消化道中增強對降解作用的耐受性或促進消化道吸收。下面是多肽的例子(1)包括AILIM的胞外區的全部或部分的多肽；(2)包括AILIM的胞外區的全部或部分以及免疫球蛋白重鏈恆定區的全部或部分的融合多肽；或(3)結合AILIM的多肽。"非蛋白質"的例子是DNA，RNA，和化學合成的化合物。這裡，"DNA"指根據編碼上述AILIM(優選人AILIM)的DNA(包括cDNA和基因組DNA)的核苷酸序列設計的可用作反義DNA藥物的"包括所述DNA或其化學修飾型DNA的部分核苷酸序列的DNA"。具體地說，所述反義DNA能通過與編碼AILIM的DNA或RNA雜交，抑制編碼AILIM的DNA轉錄為mRNA，或抑制該mRNA翻譯為蛋白質。"部分核苷酸序列"在這裡指包括任意區中任意個核苷酸的部分核苷酸序列。所述部分核苷酸序列由5-100個連續的核苷酸，優選5-70個連續的核苷酸，更優選5-50個連續的核苷酸，更優選5-30個連續的核苷酸組成。當DNA被用作反義DNA藥物時，可以部分化學修飾該DNA序列以延長給藥後該DNA的血液半衰期(穩定性)，以提高該DNA的胞質膜滲透性，或提高口服給藥時該DNA在消化器官中的抗降解性或促進吸收。化學修飾包括對磷酸酯鍵，核糖，核苷酸鹼基，糖部分，寡核苷酸DNA結構中的3，末端和/或5'末端的修飾。磷酸酯鍵的修飾包括，例如，將一個或多個磷酸酯鍵轉化為磷酸二酯鍵(D-寡)，硫代磷酸酯鍵，二硫代磷酸酯鍵(S-寡)，膦酸甲酯(MP-寡)，氨基磷酸酯鍵，非磷酸酯鍵或硫代膦酸曱酯鍵，或它們的組合。核糖的修飾包括例如轉化為2，-氟代核糖或2，-0-曱基核糖。核苷酸鹼基的修飾包括例如轉化為5-丙炔基尿嘧啶或2-氨基腺嘌呤。這裡，"RNA，，指根據編碼上述AILIM(優選人AILIM)的RNA的核苷酸序列設計的用作反義RNA藥物的"包括所述RNA或其化學修飾型RNA的部分核苷酸序列的RNA"。所述反義RNA能通過與編碼AILIM的DNA或RNA雜交，抑制編碼AILIM的DNA轉錄為mRNA,或抑制mRNA翻34譯為蛋白質。"部分核苷酸序列"在這裡指包括任意區中任意個核苷酸的部分核苷酸序列。所述部分核普酸序列由5-100個連續的核苷酸，優選5-70個連續的核苷酸，更優選5-50個連續的核苷酸，更優選5-30個連續的核苷酸組成。可對反義RNA的序列進行部分化學修飾，以延長給藥後該RNA的血液半衰期(穩定性)，提高該RNA的胞質膜滲透性，或提高口服時RNA在消化器官中的抗降解性或促進吸收。化學修飾的例子是適用於上述反義DNA的化學修飾。"化學合成的化合物"的例子是除了上述DNA，RNA和蛋白質物質之外的具有約100至約1000分子量的任何化合物，優選具有約100至約800分子量，更優選約100至約600分子量的任何化合物。包括在上文"物質，，的定義中的"多肽"指構成AILIM(優選人AILIM)的多肽鏈的部分(片段)，優選構成AILIM的多肽的胞外區的全部或部分(可以任選地在該區的N-端和/或C-端加上1-5個胺基酸)。本發明中涉及的AILIM是包括1或2個多肽鏈的穿透細胞膜的跨膜分子。這裡，"跨膜蛋白，，指通過一次或幾次穿透該膜的脂雙層的疏水肽區與膜連接的蛋白質，並且其結構整體由三個主要的區組成，它們是胞外區，跨膜區和胞質區，正如在很多受體或細胞表面分子中見到的一樣。這樣一種跨膜蛋白與具有相同或不同胺基酸序列的另一條鏈構成單體，同型二聚體，異二聚體或寡聚體形式的受體或細胞表面分子。這裡，"胞外區"指上述跨膜蛋白的完整結構中存在於膜外的部分結構(部分區)的全部或部分。換句話說，指跨膜蛋白中除了插入膜中的區(跨膜區)和緊接跨膜區而存在於胞質中的區(胞質區)之外的區的全部或部分。包括在上述"蛋白質物質"中的"融合多肽"指包括構成AILIM(優選人AILIM)的多肽的胞外區的全部或部分，和"免疫球蛋白重鏈(Ig,優選人Ig)恆定區的全部和部分，，的融合多肽。優選地，所述融合多肽是包括AILIM的胞外區和人IgG重鏈恆定區的一部分的融合多肽，特別優選地是AILIM的胞外區與人IgG重鏈中包括絞鏈區，CH2區和CH3區的區(Fc)的融合多肽。IgG優選IgGl，AILIM優選人，小鼠或大鼠的AILIM(優選人的)。這裡使用的"人免疫球蛋白(Ig)重鏈的恆定區的全部或部分"指如上所35述來自人的免疫球蛋白重鏈(H鏈)的恆定區或Fc區，或其一部分。免疫球蛋白可以是屬於任何類和任何亞類的免疫球蛋白。具體地說，免疫球蛋白的例子是IgG(IgGl,IgG2，IgG3，和lgG4)，IgM，IgA(IgAl和IgA2),IgD或IgE。優選地，免疫球蛋白是IgG(IgGl,IgG2，IgG3，和IgG4),或IgM。本發明特別優選的免疫球蛋白的例子是屬於來自人的IgG(IgGl，IgG2，IgG3，和lgG4)的那些。免疫球蛋白具有Y-形結構單元，其中四條鏈由兩條同源輕鏈(L鏈)和兩條同源重鏈(H鏈)組成並且通過二硫鍵(S-S鍵)連接。輕鏈由輕鏈可變區(VO和輕鏈恆定區(CO組成。重鏈由重鏈可變區(VH)和重鏈恆定區(CH)組成。重鏈恆定區由具有各類(IgG,IgM,IgA,IgD和IgE)和各亞類(IgGl，IgG2，IgG3，IgG4，IgAl和IgA2)固有的胺基酸序列的一些區組成。IgG(IgGl，IgG2，IgG3，和IgG4)的重鏈由VH,CH1區，絞鏈區，CH2區和CH3區以此順序自N末端構成。類似地，IgGl的重鏈由VH，Cy!l區，絞鏈區，CYi2區和Cy!3區以此順序自n末端構成。IgG2的重鏈由vh，Cy21區，絞鏈區，CYz2區和CY23區以此順序自N末端構成。IgG3的重鏈由VH，CY31區，絞鏈區，cy32區和cy33區以此順序自n末端構成。IgG4的重鏈由vh，cy4區，絞鏈區，Cy42區和CY43區以此順序自N末端構成。IgA的重鏈由Vh,Ca1區，絞鏈區，Ca2區和Ca3區以此順序自N末端構成。類似地，IgAl的重鏈由VH，Ca!1區，絞鏈區，Con2區和Ca,3區以此順序自N末端構成。IgA2的重鏈由VH，Ca2l區，絞鏈區，Ca22區和Ca23區以此順序自N末端構成。IgD的重鏈由vh,c51區，絞鏈區，c52區和c53區以此順序自N末端構成。IgM的重鏈由VH,1區，CjLi2區和CjLi3區，和Cy4以此順序自N末端構成，沒有IgG，IgA和IgD中見到的絞鏈區。IgE的重鏈由VH，Cs1區，Cs2區和Ce3區，和Cs4以此順序自N末端構成，沒有IgG，IgA和IgD中見到的絞鏈區。如果，例如，用木瓜蛋白酶處理IgG，在絞鏈區中連接兩條重鏈的二硫鍵以外偏N-末端處裂解產生兩個同源Fab,其中由Vh和CHI組成的重鏈片段通過二石克鍵與一條輕鏈連接，還產生一個Fc，其中由絞《連區，CH2區和CH3區組成的兩條同源重鏈片段通過二硫鍵連接(參見ImmunologyIllustrated,原第2版，Nankodo，p.65-75(1992);和最新藥物科學焦點(免疫系統識另'J才幾理)(FocusofNewestMedicalScience'RecognitionMechanismofImmuneSystem'),Nankodo，p.4匿7(1991)等等)。即，上文提到的"免疫球蛋白重鏈的恆定區的一部分"指免疫球蛋白重鏈恆定區中具有如上所述結構特徵的部分，優選地，是沒有CI區或Fc區的恆定區。具體地說，其例子是由來自IgG，IgA,和IgD的絞鏈區，C2區和C3區組成的區，和由來自IgM和IgE的C2區，C3區和C4區組成的區。其特別優選的例子是來自人IgGl的Fc區。上述融合多肽具有下面的優點，即通過利用蛋白質A與免疫球蛋白片段特異性結合的性質經親和柱層析可以非常容易地純化融合多肽，因為本發明的融合多肽具有免疫球蛋白例如上述IgG的恆定區的一部分(Fc)作為融合配對物。此外，由於抗各種免疫球蛋白的Fc的各種抗體是可獲得的，因此可用抗Fc抗體容易地進行融合多肽的免疫測定。上文"物質"的定義中包括的"多肽"包括"結合AILIM的多肽"。"結合AILIM的多肽"的具體例子是構成已知的作為與AILIM相互作用的配體的B7h，B7RP-l，GL50或稱為LICOS分子的多肽的全部或部分(自然(Nature),402巻，No.6763,p.827-832，1999;天然藥物(NatureMedicine),5巻，No.12,p.1365-1369,1999;免疫學雜誌(J.Immunology),164巻，p.1653-1657，2000;當今生物學(Curr.Biol.)，10巻，No.6，p.333-336,2000)。優選地，所述多肽是包括上述配體(B7h，B7RP-1,GL50)胞外區的全部或部分的多肽，或包括該多肽和免疫球蛋白重鏈(優選人免疫球蛋白)恆定區的全部或部分的融合多肽。這裡，術語"胞外區"和"免疫球蛋白重鏈的恆定區"具有和上面相同的意義。上述多肽，多肽的部分(片段)和融合多肽不僅可以通過下面提到的重組DNA技術製備，而且還可以通過本領域公知的方法例如化學合成方法和細胞培養方法或其改進的方法來製備。本發明的"抗體"可以是上文定義的抗哺乳動物AILIM(特別優選人AILIM)的多克隆抗體(抗血清)或單克隆抗體，優選是單克隆抗體。具體地，所述抗體是具有通過結合AILIM而抑制AILIM-表達細胞增殖活性的抗體。這裡"遲髮型過敏反應"是細胞免疫介導的(特別是Thl-型T細胞介導的)過敏反應，即，被抗原(記憶T細胞記憶的抗原)致敏的T細胞介導的過敏反應，並且指任何過敏反應，它是當抗原致敏的活體生物再次接觸該相同抗原時，約24-48小時表現過敏反應，並伴隨所述記憶T細胞引起的炎症。該遲髮型過敏反應包括針對傳染性致病抗原例如來自結核分枝桿菌(Mycobacteriumtuberculosis)的結核桿菌素的過敏反應，針對少量蛋白的瞬時Jones-Mote遲髮型過敏反應，對化學品例如苦基氯或糹直物毒素例如天然漆的接觸型過敏反應，或在異源移植中見到的對移植物的移植排斥相關的過敏反應。"藥物組合物"這裡指含有結合AILIM(優選人AILIM)或其一部分的抗體(優選人抗體)，或單克隆抗體(優選人單克隆抗體)或其一部分作為有效成分並含有"可藥用載體"而作為藥物使用的組合物。"可藥用載體"包括賦形劑，稀釋劑，膨脹劑，分解劑，穩定劑，防腐劑，緩衝劑，乳化劑，芳香劑，著色劑，甜味劑，增粘劑，矯味劑，增溶劑或其它添加劑。使用一種或多種這樣的載體，能夠將藥物組合物配製成片劑，丸劑，粉末劑，顆粒劑，注射劑，溶液，膠嚢，糖錠，酏劑，懸浮液，乳液或糖漿。藥物組合物可以口服或腸胃外給藥。腸胃外給藥的其它形式包括常規方法製備的含有一種或多種活性成分的外用溶液，直腸施用的栓劑，和陰道栓。劑量根據患者的年齡，性別，體重和症狀，治療效果，給藥途徑，治療周期，或藥物組合物中含有的活性成分的類型(上述多肽或抗體)而不同。通常，對成人，可以以IO微克至1000毫克(或IO微克至500毫克)/每次給藥的劑量施用藥物組合物。根據各種條件，小於上述劑量的劑量在某些情況下可能是足夠的，而大於上述劑量的劑量在另外情況下可能是必需的。特別地，通過將抗體溶解於或懸浮於無毒的可藥用載體例如生理鹽水或市售注射用蒸餾水中，將濃度調節為0.1微克抗體/毫升載體至10毫克抗38體/毫升載體，可以製備注射劑。可以以1微克至100毫克/千克體重，優選50微克至50毫克/千克體重的劑量一天一次或多次對需要治療的患者施用這樣製備的注射液。給藥途徑的例子是藥學可接受的給藥途徑，例如靜脈注射，皮下注射，皮內注射，肌內注射，或腹膜內注射，優選靜脈內注射。也可以將注射液製備到不含水的稀釋液(例如丙二醇，聚乙二醇，植物油例如橄欖油，醇例如乙醇)，懸浮劑或乳劑中。通過用細菌不能穿透的除菌濾膜過濾，通過與殺菌劑混合或通過輻射，可將注射劑滅菌。還可將注射劑製備成使用時製備的形式。即，將其凍幹成無菌固體組合物，並且在使用前可以溶解於注射用無菌蒸餾水或另一種溶劑中。含有本發明的人抗體的藥物組合物可作為藥物製劑用於控制與AILIM-介導的向AILIM-表達細胞轉導協同刺激信號(第二信號)相關的各種生物反應(例如AILIM表達細胞的增殖，AILIM表達細胞產生細胞因子，AILIM細胞表達的免疫胞解或死亡(凋亡)或其它)而不誘發HAMA(人抗小鼠抗體)所致宿主免疫排斥作用，和/或用於通過阻抑和抑制與AILIM-介導的信號轉導相關的疾病的發生和/或進展來治療或預防各種疾病。術語"免疫胞解"這裡指下面的一種生物現象。通過抗體(特別是細胞-溶解抗體)以及通過與殺傷細胞結合能夠誘導細胞的裂解(胞解)。細胞-溶解抗體是一種細胞毒活性抗體，其特別具有對細胞例如免疫細胞，組織細胞或精子的溶解活性。當該抗體結合細胞-表面抗原時，其引起對細胞的細胞毒作用或在補體的存在下誘導細胞溶解。補體作用與抗體對細胞-表面抗原的特異性結合聯合誘導免疫胞解。與表面抗原結合的抗體激活Cl補體(C1)。接著，通過與C2-C9補體(C2-C9)的一系列補體-固定反應形成細胞損傷位點，然後從細胞釋放細胞內含物從而〉容解細月包。術語"抗體-依賴性細胞介導的細胞毒活性"這裡指一種生物作用，也縮寫為"ADCC"，並且是效應細胞例如淋巴細胞，巨噬細胞或多形核白細胞對耙細胞的細胞毒作用，其需要的不僅是效應細胞和靶細胞，而且還有參與誘導細胞毒作用的抗體。術語"混合淋巴細胞反應"這裡指縮寫為"MLR"的生物現象。該反應也稱為混合的白細胞反應。將來自不同個體的異源白細胞或淋巴細胞相互混合併且培養幾天，從而使細胞形成母細胞並且在細胞中合成DNA(即細胞增殖)。該反應被稱為MLR(異源MLR)。通過抑制任一淋巴細胞的增殖可以分析DNA合成(細胞增殖)。通過輻射或絲裂黴素處理可以完成抑制。通過測定其它淋巴細胞中合成的DNA量可以進行分析。通過測定用放射性同位素例如摻入到細胞核中的氚標記的胸腺嘧啶核普可以分析合成的DNA的量。根據通常使用的方法，用從編碼AILIM的mRNA克隆出cDNA的方法；分離基因組DNA並剪接它們的方法；以cDNA序列或mRNA序列作為模板經PCR製備DNA的方法；或化學合成DNA的方法，能夠獲得本發明的編碼AILIM(特別優選人AILIM)的DNA。用上述相同的方法還能夠獲得根據本發明的編碼AILIM配體的DNA。通過用合適的限制酶酶切(消化)包括編碼這樣製備的AILIM的DNA的DNA能夠製備根據本發明的編碼AILIM(特別優選人AILIM)的DNA，如果需要，通過使用合適的DNA聚合酶等使所得DNA片段與接頭DNA或標記相連。用相同的方法還能夠製備編碼AILIM配體的DNA。下面將給出一個從mRNA克隆出編碼AILIM(特別優選人AILIM;下面稱該蛋白質為目的蛋白)的cDNA的例示方法。用相同的方法還能夠克隆編碼AILIM配體的DNA。首先，從表達和產生目的蛋白的組織和細胞製備編碼目的蛋白的信使RNA。通過已知方法，例如硫氰酸胍方法(Chirgwin，J.M.等，生物化學(Biochemistry),18巻，p.5294，1979)，熱酚方法，或AGPC方法，從分離的總RNA可以製備mRNA，並且對其進行親和層析(使用寡-dT纖維素或聚尿苦酸Sepharose)。然後，使用所得mRNA作為模板，合成cDNA,例如，通過公知的使用逆轉錄酶的方法，例如Okayama等的方法(分子細胞生物學(Mol.Cell.Biol),2巻,p.161(1982);出處同上，3巻，p.280(1983))或Hoffman等的方法(基因(Gene)，25巻，p.263(1983)),並且轉化為雙鏈cDNA。通過用包含該cDNA的質粒載體，噬菌體載體或粘粒載體轉化大腸桿菌或通過體外包裝之後轉染大腸桿菌而製備CDNA文庫。本發明中使用的質粒載體沒有限制，只要它們能在宿主中維持並複製。也可以使用能在宿主中複製的任何噬菌體載體。通常使用的克隆載體的例子是pUC19，入gt10，Agtll,等等。當該載體被應用於下述免疫篩選時，優選使用包含能在宿主中表達編碼本發明多肽的基因的啟動子的載體。通過，例如Maniatis等的方法(分子克隆，實驗手冊，第二版，冷泉港實驗室，p.1.53,1989)將cDNA插入質粒中。通過，例如Hyunh等的方法(DNA克隆，操作指南，vol.1，p.49,1985)將cDNA插入噬菌體載體中。通過使用市售克隆試劑盒(例如，購自TakaraShuzo的產品)簡單地進行這些方法。將這樣獲得的重組質粒或噬菌體載體導入合適的宿主細胞例如原核細月包(例如大腸桿菌:XLlBlueMRF，DH5a，HB101,MC1061/P3,等)中。將質粒導入宿主的方法有分子克隆，實驗手冊(第二版，冷泉港實驗室，p.1.74，(1989))中描述的氯化鈣方法，氯化4丐/氯化銣法，和電穿孔方法。通過例如其中噬菌體DNA在體外包裝後被導入培養宿主中的方法將噬菌體載體導入宿主細胞。用市售體外包裝試劑盒(例如購自Stratagene或Amersham的產品)能容易進行體外包裝。通過組合通用的cDNA篩選方法能夠從根據上述方法製備的cDNA文庫分離編碼本發明多肽的cDNA。例如，通過已知的菌落雜交方法(Cmnstein等，美國國家科學院院刊(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)72巻，p.3961(1975))或噬菌斑雜交方法(分子克隆，實驗手冊，第二版，冷泉港實驗室，p.2.108，1989),使用3￥-標記的化學合成的相應於本發明多肽之胺基酸序列的寡核苷酸作為探針能夠篩選包含目標cDNA的克隆。或通過用合成的PCR引物經PCR擴增所述區能夠篩選包含編碼本發明多肽中特定區的DNA片斷的克隆。當利用以cDNA表達載體(例如入ZAPII噬菌體載體)製備的cDNA文庫時，通過使用抗本發明多肽的抗體經抗原-抗體反應能夠篩選所需克隆。當篩選很多克隆時優選#_用應用了PCR方法的篩選方法。通過Maxam-Gilbert方法(Maxam等，美國國家科學院院刊(Proc.Natl.Acad.Sci.USA,vol.74,p.560(1977))或使用噬菌體M13的雙脫氧核香酸合成鏈終止方法(Sanger等，美國國家科學院院刊(Proc.Natl.Acad.Sci.USA,vol.74,p.5463-5467(1977))，能夠測定這樣獲得的DNA的核苷酸序列。通41過用限制酶等酶切如上所述獲得的克隆能夠獲得編碼本發明多肽的基因的全部或部分。通過下面的方法能夠從如上所述得自表達本發明多肽的細胞的基因組DNA分離編碼本發明多肽的DNA。這些細胞優選通過SDS或蛋白酶K溶解並且通過酚反覆萃取將DNA脫蛋白。優選用核糖核酸酶消化RNA。用合適的限制酶對所得DNA進行部分消化，獲得的DNA片段用合適的噬菌體或粘粒擴增以產生文庫。含所需序列的克隆通過例如用放射性標記的DNA探針檢測，編碼本發明多肽的基因的全部或部分通過用限制酶等切割這些克隆而獲得。根據常規方法("用於基因擴增的PCR技術-基礎和新技術"KYORITSUSHUPPAN，1992，等)通過使用已知的編碼目的蛋白的mRNA或cDNA作為模板能經PCR製備編碼目的蛋白的DNA。以編碼目的蛋白的核香酸序列為基礎通過常規方法也可以化學合成編碼目的蛋白的DNA。根據包含常用基因重組技術的常規方法，使用合適的限制酶經上述方法切割編碼AILIM的DNA(cDNA或含有內含子的基因組DNA)以給出編碼AILIM的DNA片段，然後根據需要，用合適的DNA酶等將所得DNA片段與接頭DNA或標記相連，可以製備作為重組蛋白的本發明的AILIM(特別優選人AILIM)或其一部分(優選胞外區)。用相同的方法能製備AILIM配體(特別優選人AILIM配體)或其一部分(優選胞外區)。下面詳細說明一個具體的例子。即，將上述製備的DNA插入載體(下面將詳細說明)中，得到表達載體。然後使用該表達載體來轉化如下所述宿主細胞以獲得轉化體。培養該轉化體並允許在培養上清液中產生目的蛋白。利用柱層析等能容易地純化培養上清液中的目的蛋白。對產生重組AILIM(或其胞外區)的表達載體的類型沒有特別限制，只要該載體在各種宿主例如原核細胞和/或真核細胞中能自我複製並維持或自動產生即可。這樣的表達載體包括質粒載體和噬菌體載體(克隆載體:實驗手冊，Elsevier,紐約，1985)。通過常規方法將編碼AILIM(或其胞外區)的DNA與本領域可獲得的用於重組的載體(質粒DNA和噬菌體DNA)相連，能夠容易製備表達載體。使42用的用於重組的載體的具體例子是得自大腸桿菌的質粒例如pBR322,pBR325,pUC12,pUC13，和pUC19，得自酵母的質粒例如pSH19和pSH15，得自枯草芽孢桿菌的質粒，例如pUB110，pTP5和pC194。噬菌體的例子是細菌噬菌體例如入噬菌體，和動物或昆蟲病毒(pVL1393,Invitrogen)例如逆轉錄病毒，痘苗病毒，和核形多角體病病毒。當要在宿主細胞中表達編碼本發明的AILIM(特別優選人AILIM)或其可溶性胞外區的DNA從而在宿主表面上表達AILIM,或要產生AILIM(特別優選人AILIM)的可溶性胞外區時，可使用質粒載體。對這樣的質粒載體沒有特別限制，只要載體能表達編碼AILIM(特別優選人AILIM)或其可溶性胞外區的基因並且在各種宿主細胞例如原核細胞和/或真核細胞中產生編碼蛋白即可。例如，這樣的質粒包括pMALC2，pcDNA3.1(-)，pEF-BOS(核酸研究(NucleicAcidResearch),Vol.18,p.5322，1990;等)，pME18S("基因工程手冊"，實驗藥物(ExperimentalMedicine),增刊，1992;等)，等。當使用細菌特別是大腸桿菌作為宿主時，表達載體一般至少由啟動子-操縱子區，起始密碼子，編碼目的蛋白的DNA，終止密碼子，終止子區和複製子組成。當使用酵母，動物細胞或昆蟲細胞作為宿主時，表達載體優選至少由啟動子，起始密碼子，編碼本發明的AILIM(特別優選人AILIM)或其胞外區的DNA，和終止密碼子組成。也可以包括編碼信號肽的DNA，增強子序列，編碼本發明AILIM的基因的5，-和3，-非翻譯區，剪接連接區，聚腺苷酸化位點，選擇標記區和複製子。如果需要，表達載體還可以包含通常使用的用於基因擴增(標記)的基因。在細菌中表達本發明的AILIM(特別優選人AILIM)或其胞外區的啟動子-操縱子區包括啟動子，操縱子和Shine-Dalgamo(SD)序歹iJ(例如AAGG)。例如，當宿主是埃希氏菌時，其優選包括Trp啟動子，lac啟動子，recA啟動子，人PL啟動子，lpp啟動子，tac啟動子等等。在酵母中表達本發明的AILIM(特別優選人AILIM)或其胞外區的啟動子的例子是PH05啟動子，PGK啟動子，GAP啟動子，ADH啟動子等等。當宿主是芽孢桿菌時，其例子是SL01啟動子，SP02啟動子，penP啟動子等等。當宿主是真核細胞例如哺乳動物細胞時，其例子是SV40-衍生的啟動子，逆轉錄病毒啟動子，熱休克啟動子等等。當然，啟動子不局限於上面的例子。另外，使用增強子對於表達是有效的。優選的起始密碼子是例如曱硫氨酸密碼子(ATG)。通常使用的終止密碼子(例如，TAG,TGA，TAA等)可作為終止密碼子的例子。使用常用的天然或合成終止子作為終止子區。複製子指能在宿主細胞中複製整個DNA序列的DNA,包括天然質粒，人工修飾的質粒(從天然質粒製備的DNA片段)，合成質粒等等。優選的質粒的例子是用於大腸桿菌的pBR322或其人工衍生物(通過用合適的限制酶處理pBR322獲得的DNA片段)，用於酵母的酵母2ju質粒或酵母染色體DNA,用於哺乳動物細胞的pRSVneoATCC37198，pSV2dhfrATCC37145,pdBPV-MMTneoATCC37224，pSV2neoATCC37149，pSV2bsr等等。也可以使用本領域通常使用的增強子序列，聚腺苷酸化位點和剪接連接區，例如從SV40衍生的那些。可以根據常規方法使用通常使用的選擇標記。其例子是針對抗生素的抗藥性基因，例如四環素，氨千青黴素或卡那黴素抗藥性基因，和胸苷激酶基因。用於基因擴增的基因的例子是二氳葉酸還原酶(DHFR)基因，胸苷激酶基因，新黴素抗藥性基因，穀氨酸合酶基因，腺苷脫氨酶基因，鳥氨酸脫羧酶基因，潮黴素-B-磷酸轉移酶基因，天冬氨酸轉氨曱醯酶基因等等。通過將至少上面提到的啟動子，起始密碼子，編碼本發明蛋白的DNA，終止密碼子和終止子區與合適的複製子依次環狀連接，能夠製備本發明的表達載體。如果需要，可通過常規方法例如用限制酶消化或用T4DNA連接酶連接而使用合適的DNA片段(例如接頭，用其它限制酶產生的限制性酶切位點)。通過將上述表達載體導入宿主細胞中能製備本發明的轉化體。本發明中使用的宿主細胞沒有限制，只要與上述表達載體相容並且能夠被轉化。其例子是本發明
技術領域：
中通常使用的各種細胞例如天然細胞或人工建立的重組細胞(例如細菌(埃希氏菌屬或芽孢桿菌屬)，酵母(糖酵母屬，畢赤氏酵母屬等)，動物細胞或昆蟲細胞)。優選使用大腸桿菌或動物細胞。具體的例子是大腸桿菌(DH5a，DH10B,TB1，HBIOI，XL-2Blue，等)，來自小鼠的細胞(COP，L，C127，Sp2/0,NS-1，NIH3T3，等)，來自大鼠的細胞，來自倉鼠的細胞(BHK，CHO，等)，來自猴的細胞(COSl，COS3，COS7,CV1，Velo等)，和來自人的細月包(Hela，二倍體成纖維細胞衍生的細胞，骨髓瘤細胞，Namalwa等)。通過已知方法能將表達載體導入(轉化/轉導至)宿主細胞中。根據例如下面的方法能進行轉化:當宿主是細菌(大腸桿菌，枯草芽孢桿菌等)時，Cohen等的方法(美國國家科學院院刊(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)，69巻,p.2110(1972)),原生質體方法(分子基因遺傳學(Mol.Gen.Genet.)，168巻，p.111(1979))，或感受態方法(分子生物學雜誌(J.Mol.Biol.)，56巻，p.209(1971));當宿主是啤酒糖酵母時，Hinnen等的方法(美國國家科學院院刊(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)，75巻，p.1927(1978))，或鋰方法(J.Bacteriol.153巻，p.163(1983));當宿主是動物細胞時，Graham的方法(病毒學(Virology),52巻，p.456(1973));當宿主是昆蟲細胞時，Summers等的方法(分子細胞生物學(Mol.Cell.Biol.)，3巻，pp.2156-2165(1983))。通過在營養培養基中培養包含上述製備的表達載體的轉化體(下文中該術語包括轉導體)能夠產生本發明AILIM(特別優選人AILIM)的胞外區。用相同方法能產生AILIM配體。營養培養基優選包括宿主細胞(轉化體)生長必需的碳源，無機氮源，或有機氮源。碳源的例子是葡萄糖，葡聚糖，可溶性澱粉和蔗糖，無機或有機氮源的例子是銨鹽，硝酸鹽，胺基酸，玉米漿，蛋白腖，酪蛋白水解物，肉提取物，大豆餅和馬鈴薯提取物。如果需要，它們可以含有其它營養物(例如無機鹽(例如氯化鈞，磷酸二氫鈉和氯化鎂)，維生素，抗生素(例如四環素，新黴素，氨苄青黴素，卡那黴素等))。通過本領域公知的方法進行培養。適當選擇培養條件例如溫度，培養基的pH,和培養時間，使得超量產生本發明的蛋白質。下面詳細說明根據宿主細胞使用的具體培養基和培養條件。當宿主是細菌，放線菌，酵母，絲狀真菌時，包括上述營養源的液體培養基是合適的。優選使用pH5-8的培養基。當宿主是大腸桿菌時，優選的培養基的例子是LB培養基，M9培養基(Miller等，實驗分子遺傳學(Exp.Mol.Genet.)，冷泉港實驗室，p.431(1972))，YT培養基等。使用這些培養基，通常在14°C-43。C下培養約3-24小時，如果需要，通氣並攪拌。當宿主是芽孢桿菌時，通常在30°C-40。C下培養約16-96小時，如果需要，通氣並攪拌。當宿主是酵母時，培養基的例子是Burlholder基本培養基(Bostian,美國國家科學院院刊(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)，77巻，p.4505,1980)。pH優選為5-8。通常在20°C-35。C下培養約14-144小時，如果需要，通氣並攪拌。當宿主是動物細胞時，培養基的例子是含有5-20%胎牛血清的MEM培養基(科學(Science),122巻，p.501(1952))，DMEM培養基(病毒學(Virology),8巻，p.396(1959)),RPMI1640培養基(美國藥物學會雜誌(J，Am.Med.Assoc.)，199巻，p.519(1967))，199培養基(Proc.Soc.Exp.Biol.Med.，73巻，p.1(1950)),HamF12培養基等。培養基的pH優選是約6-8。通常在約30。C-40。C下培養約15-72小時，如果需要，通氣並攪拌。當宿主是昆蟲細胞時，培養基的例子是含有胎牛血清的Grace's培養基(美國國家科學院院刊(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)，82巻，p.8404,1985)。其pH優選是約5-8。通常在約20°C-40。C下培養約15-100小時，如果需要，通氣並攪拌。通過培養上述轉化的細胞(特別是動物細胞或大腸桿菌)並且使之分泌蛋白質到培養上清液中，能產生本發明的AILIM(特別優選人AILIM)的胞外區(可溶性AILIM)。即，通過例如將所得培養物過濾或離心可獲得培養物濾液(上清液)，並且通過常用於純化和分離天然或合成蛋白的方法從培養物濾液純化和分離本發明的多肽或多肽片段。分離和純化方法的例子是利用特異性親和力的方法，例如親和層析，利用溶解度的方法，例如鹽析和溶劑沉澱方法，利用分子量差異的方法，例如透析，超濾，凝膠過濾和十二烷基硫酸鈉-聚丙烯醯胺凝膠電泳，利用電荷的方法，例如離子交換層析和羥基磷灰石層析，利用疏水性差異的方法，例如反相高效液相色鐠，和利用等電點差異的方法，例如等電聚焦。當培養的轉化體的周質或胞質中存在目的蛋白時，首先通過常規方法例如過濾或離心收集真菌菌體或細胞並且懸浮於合適的緩沖液中。通過例如超聲溶解，溶菌酶，和凍融等方法破壞細胞的細胞壁和/或細胞膜之後，通過例如離心或過濾的方法獲得含有本發明多肽的膜級分。這樣的膜級分用去汙劑例如Triton-X100溶解獲得粗提取物。最後，通過如上述常規方法從該粗提取物分離並純化所述多肽或多肽片段。在本發明中，術語"不溶性載體"指用來通過物理吸附或化學連接將多肽固定於其上的載體。例如，所述載體可以是(l)平板，試管，管，或具有內部空間的類似物，小珠，球，濾膜，膜，或由水不溶性材料包括塑料例如聚苯乙烯樹脂，聚碳酸酯樹脂，有機矽樹脂或尼龍樹脂，或玻璃製成的物件，和(2)親和層析中使用的不溶性載體，例如纖維素載體，瓊脂糖載體，聚丙烯醯胺載體，葡聚糖樹脂，聚苯乙烯載體，聚乙烯醇載體，聚胺基酸載體，多孔矽樹脂載體等。本發明的"能給出可檢測信號的標記物質"包括，例如，酶，焚光材料，發光材料，生物素，抗生物素蛋白或放射性同位素，更具體地說，酶例如過氧化物酶(例如辣根過氧化物酶)，鹼性磷酸酶，p-D-半乳糖苷酶，葡糖氧化酶，葡萄糖-6-磷酸脫氫酶，乙醇脫氫酶，蘋果酸脫氫酶，青黴素酶，過氧化氫酶，脫-葡萄糖氧化酶，脲酶，螢光素酶，乙醯膽鹼酯酶等；螢光材料例如異硫氰酸螢光素，藻膽蛋白，稀土金屬螯合劑，丹磺醯氯，異硫氰酸四曱基羅丹明等；放射性同位素例如&,14C，1251,1311等；生物素，抗生物素蛋白和發光材料。其中，放射性同位素或螢光材料甚至單獨使用時都能給出可檢測信號。另一方面，當單獨使用時，酶，發光材料，生物素或抗生物素蛋白不提供可檢測信號，但是當使其與一種或多種物質反應時，其能提供可檢測信號。例如，當標記是一種酶時，^r測時必需有至少一種底物。才艮據用於測定酶活性的方法的類型(比色法，螢光檢查，利用生物發光或化學發光的方法等)可以使用不同類型的底物。例如，當標記是過氧化物酶時，可以使用過氧化氫作為底物。或，當標記是生物素時，通常使用抗生物素蛋白或酶-修飾的抗生物素蛋白，但是不局限於此。根據需要，可按所使用的底物的類型使用各種發光物質。本發明中可以使用任何上述標記。但是，考慮到檢測或測試的靈敏度以及操作的方便，優選的標記是酶，例如過氧化物酶或生物素。根據本發明的"用於鑑定能結合AILIM或AILIM配體的物質的方法"建立在免疫測定的原理上。具體地說，可以利用"免疫測定，，(第三版，編著，EijiIshikawa等，47Igakushoin,1987)中描述的各種方法的原理。優選利用的原理有固相-一抗體方法，液相兩抗體方法，固相兩抗體方法，夾心方法和一鍋法(one-pot),如描述於審查公開的日本專利申請(JP-B)平2-39747。此外，利用抗原-抗體反應的測定方法有EMIT法(酶放大免疫測定技術)，酶通道免疫分析，酶調節劑介導的酶免疫分析(EMMIA)，酶抑制劑免疫分析，免疫酶計量(immunoenzymometric)測定，酶增強的免疫分析和近側鍵合的免疫分析定。在本發明中，根據目的可以適當選擇所述免疫分析原理的任何一個。但是，要考慮程序的方便和/或經濟利益，特別是臨床通用性，優選利用夾心方法，一鍋法，或固相一抗體方法，更優選夾心方法或一鍋法。特別優選的是利用有很多孔的多孔微量滴定板例如96孔微滴培養板的夾心法，或利用固定有多肽的d、珠並使用經酶例如過氧化物酶或經生物素標記的配對物的一鍋法。附圖簡述圖1給出利用流式細胞儀通過細胞ELISA分析的抗-人IgG抗體，抗-人IgK抗體，和抗-人IgFc抗體對人抗-人AILIM單克隆抗體的各自反應性。(a)-(l)組分別給出了下述測定的各自結果。(a)組:在不存在一抗的情況下向已經平鋪了野生型HPB-ALL細胞的微量培養板加入作為二抗的生物素-標記的抗-人IgG抗體的測定結果。(b)組:在不存在一抗的情況下向已經平鋪了野生型HPB-ALL細胞的微量培養板加入作為二抗的生物素-標記的抗-人IgK抗體的測定結果。(c)組:在不存在一抗的情況下向已經平鋪了野生型HPB-ALL細胞的微量培養板加入作為二抗的生物素-標記的抗-人IgFc抗體的測定結果。(d)組:人抗-人AILIM單克隆抗體JMab-136用作一抗並且生物素-標記的抗-人IgG抗體用作二抗的測定結果。(e)組:人抗-人AILIM單克隆抗體JMab-136用作一抗並且生物素-標記的抗-人IgK抗體用作二抗的測定結果。(f)組:人抗-人AILIM單克隆抗體JMab-136用作一抗並且生物素-標記的抗-人IgFc抗體用作二抗的測定結果。(g)組:人抗-人AILIM單克隆抗體JMab-138用作一抗並且生物素-標記的抗-人IgG抗體用作二抗的測定結果。(h)組:人抗-人AILIM單克隆抗體JMab-138用作一抗並且生物素-標記的抗-人IgK抗體用作二抗的測定結果。(i)組:人抗-人AILIM單克隆抗體JMab-138用作一抗並且生物素-標記的抗-人IgFc抗體用作二抗的測定結果。(j)組:人抗-人AILIM單克隆抗體JMab-139用作一抗並且生物素-標記的抗-人IgG抗體用作二抗的測定結果。(k)組:人抗-人AILIM單克隆抗體JMab-139用作一抗並且生物素-標記的抗-人IgK抗體用作二抗的測定結果。(1)組:人抗-人AILIM單克隆抗體JMab-139用作一抗並且生物素-標記的抗-人IgFc抗體用作二抗的測定結果。各組中帶有空心符號的曲線對應於用人抗-KLH單克隆抗體作為對照抗體的測定結果。圖2給出用抗-人IgG抗體經夾心ELISA測定的人IgG單克隆抗體(標準品)的標準曲線。縱軸指示焚光強度，橫軸指示標準品的濃度。圖3給出各種小鼠抗-人AILIM單克隆抗體對人AILIM-過表達型重組CHO細胞或野生型CHO細胞的結合活性。縱軸指示作為與重組細胞的結合活性指數的螢光強度，橫軸指示加入的抗體的濃度。該圖中術語"CHO"指對野生型CHO細胞的結合測定的結果，"人"指對人AILIM-過表達型重組CHO細胞的結合測定的結果。圖4給出各種人抗-人AILIM單克隆抗體或作為陰性對照的人抗-KLH單克隆抗體對人AILIM-過表達型重組CHO細胞或野生型CHO細胞的結合活性。縱軸指示作為與重組細胞的結合活性指數的螢光強度，橫軸指示加入的抗體的濃度。該圖中術語"CHO"指對野生型CHO細胞的結合測定結果，"人，，指對人AILIM-過表達型重組CHO細胞的結合測定結果。圖5給出各種人抗-人AILIM單克隆抗體對人AILIM-過表達型重組49CHO細胞或野生型CHO細胞的結合活性。縱軸指示作為與重組細胞的結合活性指數的螢光強度，橫軸指示加入的抗體的濃度。該圖中術語"CHO"指對野生型CHO細胞的結合測定結果，"人"指對人AILIM-過表達型重組CHO細胞的結合測定結果。圖6給出各種人抗-人AILIM單克隆抗體對人AILIM-過表達型重組CHO細胞或野生型CHO細胞的結合活性。縱軸指示作為與重組細胞的結合活性指數的螢光強度，橫軸指示加入的抗體的濃度。該圖中術語"CHO"指對野生型CHO細胞的結合測定結果，"人"指對人AILIM-過表達型重組CHO細胞的結合測定結果。圖7給出大鼠抗-人AILIM單克隆抗體對小鼠AILIM-過表達型重組CHO細胞或野生型CHO細胞的結合活性。縱軸指示作為與重組細胞的結合活性指數的焚光強度，橫軸指示加入的抗體的濃度。該圖中術語"CHO"指對野生型CHO細胞的結合測定結果，"小鼠"指對小鼠AILIM-過表達型重組CHO細胞的結合測定結果。圖8給出各種人抗-人AILIM單克隆抗體或作為陰性對照的人抗-KLG單克隆抗體對小鼠AILIM-過表達型重組CHO細胞或野生型CHO細胞的結合活性。縱軸指示作為與重組細胞的結合活性指數的螢光強度，橫軸指示加入的抗體的濃度。該圖中術語"CHO"指對野生型CHO細胞的結合測定結果，"小鼠"指對小鼠AILIM-過表達型重組CHO細胞的結合測定結果。圖9給出各種人抗-人AILIM單克隆抗體對小鼠AILIM-過表達型重組CHO細胞或野生型CHO細胞的結合活性。縱軸指示作為與重組細胞的結合活性指數的螢光強度，橫軸指示加入的抗體的濃度。該圖中術語"CHO"指對野生型CHO細胞的結合測定結果，"小鼠"指對小鼠AILIM-過表達型重組CHO細胞的結合測定結果。圖10給出各種人抗-人AILIM單克隆抗體對小鼠AILIM-過表達型重組CHO細胞或野生型CHO細胞的結合活性。縱軸指示作為與重組細胞的結合活性指數的焚光強度，橫軸指示加入的抗體的濃度。該圖中術語"CHO"指對野生型CHO細胞的結合測定結果，"小鼠"指對小鼠AILIM-過表達型重組CHO細胞的結合測定結果。圖11給出各種小鼠抗-大鼠AILIM單克隆抗體對大鼠AILIM-過表達型重組CHO細胞或野生型CHO細胞的結合活性。縱軸指示作為與重組細胞的結合活性指數的焚光強度，橫軸指示加入的抗體的濃度。該圖中術語"CHO"指對野生型CHO細胞的結合測定結果，"大鼠"指對大鼠AILIM-過表達型重組CHO細胞的結合測定結果。圖12給出各種人抗-人AILIM單克隆抗體或作為陰性對照的人抗-KLG單克隆抗體對大鼠AILIM-過表達型重組CHO細胞或野生型CHO細胞的結合活性。縱軸指示作為與重組細胞的結合活性指數的螢光強度，橫軸指示加入的抗體的濃度。該圖中術語"CHO"指對野生型CHO細胞的結合測定結果，"大鼠"指對大鼠AILIM-過表達型重組CHO細胞的結合測定結果。圖13給出各種人抗-人AILIM單克隆抗體對大鼠AILIM-過表達型重組CHO細胞或野生型CHO細胞的結合活性。縱軸指示作為與重組細胞的結合活性指數的螢光強度，橫軸指示加入的抗體的濃度。該圖中術語"CHO"指對野生型CHO細胞的結合測定結果，"大鼠"指對大鼠AILIM-過表達型重組CHO細胞的結合測定結果。圖14給出各種人抗-人AILIM單克隆抗體對大鼠AILIM-過表達型重組CHO細胞或野生型CHO細胞的結合活性。縱軸指示作為與重組細胞的結合活性指數的螢光強度，橫軸指示加入的抗體的濃度。該圖中術語"CHO"指對野生型CHO細胞的結合測定結果，"大鼠"指對大鼠AILIM-過表達型重組CHO細胞的結合測定結果。圖15給出用抗-人CD3單克隆抗體和小鼠抗-人AILIM單克隆抗體一51起包被的微量培養板分析各種小鼠抗-人AILIM單克隆抗體轉導協同刺激信號的活性時，正常健康"供者A"的T細胞的增殖活性。縱軸指示作為細胞增殖程度指數的卩H]腺苷摻入細胞的量，橫軸指示小鼠抗-人AILIM單克隆抗體的濃度。圖16給出用抗-人CD3單克隆抗體和人抗-人AILIM單克隆抗體一起包被的微量培養板分析各種人抗-人AILIM單克隆抗體轉導協同刺激信號的活性時，正常健康"供者A，，的T細胞的增殖活性。縱軸指示作為細胞增殖程度指數的卩H]腺苷摻入細胞的量，橫軸指示人抗-人AILIM單克隆抗體的濃度。圖17給出用抗-人CD3單克隆抗體和小鼠抗-人AILIM單克隆抗體一起包被的微量培養板分析各種小鼠抗-人AILIM單克隆抗體轉導協同刺激信號的活性時，正常健康"供者B"的T細胞的增殖活性。縱軸指示作為細胞增殖程度指數的[311]腺苷摻入細胞的量，橫軸指示小鼠抗-人AILIM單克隆抗體的濃度。在該圖中，"JHCr，指其中抗-人CETP單克隆抗體用作陰性對照代替小鼠抗-人AILIM單克隆抗體的測試結果。圖18給出用抗-人CD3單克隆抗體和人抗-人AILIM單克隆抗體一起包被的微量培養板分析各種人抗-人AILIM單克隆抗體轉導協同刺激信號的活性時，正常健康"供者B，，的T細胞的增殖活性。縱軸指示作為細胞增殖程度指數的[3司腺苷摻入細胞的量，橫軸指示人抗-人AILIM單克隆抗體的濃度。在該圖中，"抗-KLH"指其中人抗-KLH單克隆抗體用作陰性對照代替人抗-人AILIM單克隆抗體的測試結果。圖19給出用抗-人CD3單克隆抗體和人抗-人AILIM單克隆抗體一起包被的微量培養板分析各種人抗-人AILIM單克隆抗體轉導協同刺激信號的活性時，正常健康"供者B，，的T細胞的增殖活性。縱軸指示作為細胞增殖程度指數的[3司腺苷摻入細胞的量，橫軸指示人抗-人AILIM單克隆抗體的濃度。在該圖中，"抗-KLH"指其中人抗-KLH單克隆抗體用作陰性對照代替人抗-人AILIM單克隆抗體的測試結果。圖20給出用抗-人CD3單克隆抗體和小鼠抗-人AILIM單克隆抗體一52起包被的微量培養板分析各種小鼠抗-人AILIM單克隆抗體轉導協同刺激信號的活性時，正常健康"供者C"的T細胞的增殖活性。縱軸指示作為細胞增殖程度指數的[3司腺苷摻入細胞的量，橫軸指示小鼠抗-人AILIM單克隆抗體的濃度。在該圖中，"JHC1"指其中抗-人CETP單克隆抗體用作陰性對照代替小鼠抗-人AILIM單克隆抗體的測試結果。圖21給出用抗-人CD3單克隆抗體和人抗-人AILIM單克隆抗體一起包被的微量培養板分析各種人抗-人AILIM單克隆抗體轉導協同刺激信號的活性時，正常健康"供者C"的T細胞的增殖活性。縱軸指示作為細胞增殖程度指數的卩H]腺普摻入細胞的量，橫軸指示人抗-人AILIM單克隆抗體的濃度。在該圖中，"抗-KLH，，指其中人抗-KLH單克隆抗體用作陰性對照代替人抗-人AILIM單克隆抗體的測試結果。其它注釋如下"124":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl24。"126":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl26。"127":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl27。圖22給出用抗-人CD3單克隆抗體和人抗-人AILIM單克隆抗體一起包被的微量培養板分析各種人抗-人AILIM單克隆抗體轉導協同刺激信號的活性時，正常健康"供者C"的T細胞的增殖活性。縱軸指示作為細胞增殖程度指數的[3司腺苷摻入細胞的量，橫軸指示人抗-人AILIM單克隆抗體的濃度。在該圖中，"抗-KLH"指其中人抗-KLH單克隆抗體用作陰性對照代替人抗-人AILIM單克隆抗體的測試結果。其它注釋如下"128":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl28。"135":人抗-人AILIM單克隆抗體JMab135。"136":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl36。圖23給出用抗-人CD3單克隆抗體和人抗-人AILIM單克隆抗體一起包被的微量培養板分析各種人抗-人AILIM單克隆抗體轉導協同刺激信號的活性時，正常健康"供者C"的T細胞的增殖活性。縱軸指示作為細胞增殖程度指數的[3司腺苷摻入細胞的量，橫軸指示人抗-人AILIM單克隆抗體的濃度。在該圖中，"抗-KLH，，指其中人抗-KLH單克隆抗體用作陰性對照代替人抗-人AILIM單克隆抗體的測試結果。其它注釋如下"137":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl37。"138":人抗-人AIUM單克隆抗體JMabl38。"139":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl39。圖24給出用抗-人CD3單克隆抗體和人抗-人AILIM單克隆抗體一起包被的微量培養板分析各種人抗-人AILIM單克隆抗體轉導協同刺激信號的活性時，正常健康"供者C"的T細胞的增殖活性。縱軸指示作為細胞增殖程度指數的卩H]腺普摻入細胞的量，橫軸指示人抗-人AILIM單克隆抗體的濃度。在該圖中，"抗-KLH，，指其中人抗-KLH單克隆抗體用作陰性對照代替人抗-人AILIM單克隆抗體的測試結果。其它注釋如下"140":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl40。"141":人抗-人AILIM單克隆抗體JMab141。圖25給出用抗-人CD3單克隆抗體和小鼠抗-人AILIM單克隆抗體一起包被的微量培養板分析各種小鼠抗-人AILIM單克隆抗體轉導協同刺激信號的活性時，正常健康"供者D"的T細胞的增殖活性。縱軸指示作為細胞增殖程度指數的[3司腺苷摻入細胞的量，橫軸指示小鼠抗-人AILIM單克隆抗體的濃度。在該圖中，"JHC1"指其中抗人CETP單克隆抗體用作陰性對照代替小鼠抗-人AILIM單克隆抗體的測試結果。圖26給出用抗-人CD3單克隆抗體和人抗-人AILIM單克隆抗體一起包被的微量培養板分析各種人抗-人AILIM單克隆抗體轉導協同刺激信號的活性時，正常健康"供者D"的T細胞的增殖活性。縱軸指示作為細胞增殖程度指數的卩H]腺香摻入細胞的量，橫軸指示人抗-人AILIM單克隆抗體的濃度。在該圖中，"抗-KLH，，指其中人抗-KLH單克隆抗體用作陰性對照代替54人抗-人AILIM單克隆抗體的測試結果。其它注釋如下"124":人抗-人AILIM單克隆抗體JMaM24。"126":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl26。"127":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl27。圖27給出用抗-人CD3單克隆抗體和人抗-人AILIM單克隆抗體一起包被的微量培養板分析各種人抗-人AILIM單克隆抗體轉導協同刺激信號的活性時，正常健康"供者D，，的T細胞的增殖活性。縱軸指示作為細胞增殖程度指數的[3司腺苦摻入細胞的量，橫軸指示小鼠抗-人AILIM單克隆抗體的濃度。在該圖中，"抗-KLH，，指其中人抗-KLH單克隆抗體用作陰性對照代替人抗-人AILIM單克隆抗體的測試結果。其它注^奪如下"128":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl28。"135":人抗-人AILIM單克隆抗體JMab135。"136":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl36。圖28給出用抗-人CD3單克隆抗體和人抗-人AILIM單克隆抗體一起包被的微量培養板分析各種人抗-人AILIM單克隆抗體轉導協同刺激信號的活性時，正常健康"供者D"的T細胞的增殖活性。縱軸指示作為細胞增殖程度指數的[3司腺苷摻入細胞的量，橫軸指示人抗-人AILIM單克隆抗體的濃度。在該圖中，"抗-KLH，，指其中人抗-KLH單克隆抗體用作陰性對照代替人抗-人AILIM單克隆抗體的測試結果。其它注釋如下"137":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl37。"138":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl38。"139":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl39。圖29給出用抗-人CD3單克隆抗體和人抗-人AILIM單克隆抗體一起包被的微量培養板分析各種人抗-人AILIM單克隆抗體轉導協同刺激信號的活性時，正常健康"供者D"的T細胞的增殖活性。縱軸指示作為細胞增殖程度指數的卩H]腺苷摻入細胞的量，橫軸指示人抗-人AILIM單克隆抗體的濃度。在該圖中，"抗-KLH"指其中人抗-KLH單克隆抗體用作陰性對照代替人抗-人AILIM單克隆抗體的測試結果。其它注釋如下"140":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl40。"141":人抗-人AILIM單克隆抗體JMab141。圖30給出用抗-人CD3單克隆抗體和小鼠抗-人AILIM單克隆抗體一起包被的微量培養板分析各種小鼠抗-人AILIM單克隆抗體轉導協同刺激信號的活性時，正常健康"供者E"的T細胞的增殖活性。縱軸指示作為細胞增殖程度指數的卩H]腺苷摻入細胞的量，橫軸指示小鼠抗-人AILIM單克隆抗體的濃度。在該圖中，"JHCl"指其中抗人CETP單克隆抗體用作陰性對照代替小鼠抗-人AILIM單克隆抗體的測試結果。圖31給出用抗-人CD3單克隆抗體和人抗-人AILIM單克隆抗體一起包被的微量培養板分析各種人抗-人AILIM單克隆抗體轉導協同刺激信號的活性時，正常健康"供者E"的T細胞的增殖活性。縱軸指示作為細胞增殖程度指數的[3司腺苷摻入細胞的量，橫軸指示人抗-人AILIM單克隆抗體的濃度。在該圖中，"抗-KLH，，指其中人抗-KLH單克隆抗體用作陰性對照代替人抗-人AILIM單克隆抗體的測試結果。其它注釋如下"124":人抗-人AILIM單克隆抗體JMab124。"126":人抗-人AILIM單克隆抗體JMab126。"127":人抗-人AILIM單克隆抗體JMab127。圖32給出用抗-人CD3單克隆抗體和人抗-人AILIM單克隆抗體一起包被的微量培養板分析各種人抗-人AILIM單克隆抗體轉導協同刺激信號的活性時，正常健康"供者E"的T細胞的增殖活性。縱軸指示作為細胞增殖程度指數的[3司腺苷摻入細胞的量，橫軸指示人抗-人AILIM單克隆抗體的濃度。在該圖中，"抗-KLH"指其中人抗-KLH單克隆抗體用作陰性對照代替人抗-人AILIM單克隆抗體的測試結果。其它注釋如下"128":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl28。"135":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl35。"136":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl36。圖33給出用抗-人CD3單克隆抗體和人抗-人AILIM單克隆抗體一起包被的微量培養板分析各種人抗-人AILIM單克隆抗體轉導協同刺激信號的活性時，正常健康"供者E，，的T細胞的增殖活性。縱軸指示作為細胞增殖程度指數的[3閉腺苷摻入細胞的量，橫軸指示人抗-人AILIM單克隆抗體的濃度。在該圖中，"抗-KLH，，指其中人抗-KLH單克隆抗體用作陰性對照代替人抗-人AILIM單克隆抗體的測試結果。其它注釋如下"137":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl37。"138":人抗-人AILIM單克隆抗體JMab138。"139":人抗-人AILIM單克隆抗體JMab139。圖34給出用抗-人CD3單克隆抗體和人抗-人AILIM單克隆抗體一起包被的微量培養板分析各種人抗-人AILIM單克隆抗體轉導協同刺激信號的活性時，正常健康"供者E"的T細胞的增殖活性。縱軸指示作為細胞增殖程度指數的卩H]腺苷摻入細胞的量，橫軸指示人抗-人AILIM單克隆抗體的濃度。在該圖中，"抗-KLH，，指其中人抗-KLH單克隆抗體用作陰性對照代替人抗-人AILIM單克隆抗體的測試結果。其它注釋如下"140":人抗-人AILIM單克隆抗體JMab140。"141":人抗-人AILIM單克隆抗體JMab141。圖35給出當單獨向用抗-人CD3單克隆抗體包被的樣i量培養板加入小鼠抗-人AILIM單克隆抗體(於液相中)的溶液時，對各種小鼠抗-人AILIM單克隆抗體轉導協同刺激信號的活性的測定中正常健康"供者D"的T細胞的增殖活性。縱軸指示作為細胞增殖程度指數的卩H]腺苷摻入細胞的量，橫軸指示小鼠抗-人AILIM單克隆抗體的濃度。在該圖中，"JHCl"指其中抗人CETP單克隆抗體用作陰性對照代替小鼠抗-人AILIM單克隆抗體的測試結果。圖36給出當單獨向用抗-人CD3單克隆抗體包被的微量培養板加入人抗-人AILIM單克隆抗體(於液相中)的溶液時，對各種人抗-人AILIM單克隆抗體轉導協同刺激信號的活性的測定中正常健康"供者D"的T細胞的增殖活性。縱軸指示作為細胞增殖程度指數的[3司腺苷摻入細胞的量，橫軸指示人抗-人AILIM單克隆抗體的濃度。在該圖中，"抗-KLH，，指其中人抗-KLH單克隆抗體用作陰性對照代替人抗-人AIUM單克隆抗體的測試結果。其它注釋如下"124":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl24。"125":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl25。"126":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl26。圖37給出當單獨向用抗-人CD3單克隆抗體包被的微量培養板加入人抗-人AILIM單克隆抗體(於液相中)的溶液時，對各種人抗-人AILIM單克隆抗體轉導協同刺激信號的活性的測定中正常健康"供者D"的T細胞的增殖活性。縱軸指示作為細胞增殖程度指數的卩H]腺苷摻入細胞的量，橫軸指示人抗-人AILIM單克隆抗體的濃度。在該圖中，"抗-KLH"指其中人抗-KLH單克隆抗體用作陰性對照代替人抗-人AILIM單克隆抗體的測試結果。其它注釋如下"128":人抗-人AILIM單克隆抗體jMabl28。"135":人抗-人AILIM單克隆抗體JMab135。"136":人抗-人AILIM單克隆抗體JMab136。圖38給出當單獨向用抗-人CD3單克隆抗體包被的微量培養板加入人抗-人AILIM單克隆抗體(於液相中)的溶液時，對各種人抗-人AILIM單克隆抗體轉導協同剌激信號的活性的測定中正常健康"供者D"的T細胞的增殖活性。縱軸指示作為細胞增殖程度指數的卩H]腺苷摻入細胞的量，橫軸指示人抗-人AILIM單克隆抗體的濃度。在該圖中，"抗-KLH，，指其中人抗-KLH單克隆抗體用作陰性對照代替人抗-人AILIM單克隆抗體的測試結果。其它注釋如下"137":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl37。"138":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl38。"139":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl39。圖39給出當單獨向用抗-人CD3單克隆抗體包被的微量培養板加入人抗-人AILIM單克隆抗體(於液相中)的溶液時，對各種人抗-人AILIM單克隆抗體轉導協同剌激信號的活性的測定中正常健康"供者D"的T細胞的增殖活性。縱軸指示作為細胞增殖程度指數的[3司腺苷的細胞摻入的量，橫軸指示人抗-人AILIM單克隆抗體的濃度。在該圖中，"抗-KLH"指其中人抗-KLH單克隆抗體用作陰性對照代替人抗-人AILIM單克隆抗體的測試結果。其它注釋如下"140，，人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl40。"141":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl41。圖40給出在用小鼠抗-人AILIM單克隆抗體和抗-人CD3單克隆抗體一起包被的微量培養板中培養的來自正常健康"供者B，，的T細胞的培養上清液中產生的IFN-Y的量。縱軸指示IFN-Y的濃度，橫軸指示小鼠抗-人AILIM單克隆抗體的濃度。在該圖中，"JHC1"指其中抗-人CETP單克隆抗體用作陰性對照代替小鼠抗-人AILIM單克隆抗體的測試結果。圖41給出在用人抗-人AILIM單克隆抗體和抗-人CD3單克隆抗體一起包被的微量培養板中培養的來自正常健康"供者B，，的T細胞的培養上清液中產生的IFN-Y的量。縱軸指示IFN-Y的濃度，橫軸指示小鼠抗-人AILIM單克隆抗體的濃度。在該圖中，"抗-KLH"指其中人抗-KLH單克隆抗體用作陰性對照代替59人抗-人AILIM單克隆抗體的測試結果。圖42給出在用人抗-人AILIM單克隆抗體和抗-人CD3單克隆抗體一起包被的微量培養板中培養的來自正常健康"供者B"的T細胞的培養上清液中產生的IFN-y的量。縱軸指示IFN-Y的濃度，橫軸指示小鼠抗-人AILIM單克隆抗體的濃度。在該圖中，"抗-KLH"指其中人抗-KLH單克隆抗體用作陰性對照代替人抗-人AILIM單克隆抗體的測試結果。圖43給出在用小鼠抗-人AILIM單克隆抗體和抗-人CD3單克隆抗體一起包被的微量培養板中培養的來自正常健康"供者C"的T細胞的培養上清液中產生的IFN-Y的量。縱軸指示IFN-Y的濃度，橫軸指示小鼠抗-人AILIM單克隆抗體的濃度。在該圖中，"JHCl"指其中抗-人CETP單克隆抗體用作陰性對照代替小鼠抗-人AILIM單克隆抗體的測試結果。圖44給出在用人抗-人AILIM單克隆抗體和抗-人CD3單克隆抗體一起包被的微量培養板中培養的來自正常健康"供者C"的T細胞的培養上清液中產生的IFN-Y的量。縱軸指示IFN-Y的濃度，橫軸指示小鼠抗-人AILIM單克隆抗體的濃度。在該圖中，"抗-KLH"指其中人抗-KLH單克隆抗體用作陰性對照代替人抗-人AILIM單克隆抗體的測試結果。其它注釋如下"124":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl24。"125":人抗-人AILIM單克隆抗體JMab125。"126":人抗-人AILIM單克隆抗體JMab126。圖45給出在用人抗-人AILIM單克隆抗體和抗-人CD3單克隆抗體一起包被的微量培養板中培養的來自正常健康"供者C"的T細胞的培養上清液中產生的IFN-Y的量。縱軸指示IFN-Y的濃度，橫軸指示小鼠抗-人AILIM單克隆抗體的濃度。60在該圖中，"抗-KLH"指其中人抗-KLH單克隆抗體用作陰性對照代替人抗-人AILIM單克隆抗體的測試結果。其它注釋如下"128":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl28。"135":人抗-人AILIM單克隆抗體JMab135。"136":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl36。圖46給出在用人抗-人AILIM單克隆抗體和抗-人CD3單克隆抗體一起包被的微量培養板中培養的來自正常健康"供者C，，的T細胞的培養上清液中產生的IFN-Y的量。縱軸指示IFN-Y的濃度，橫軸指示小鼠抗-人AILIM單克隆抗體的濃度。在該圖中，"抗-KLH"指其中人抗-KLH單克隆抗體用作陰性對照代替人抗-人AILIM單克隆抗體的測試結果。其它注釋如下"137":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl37。"138":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl38。"139":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl39。圖47給出在用人抗-人AILIM單克隆抗體和抗-人CD3單克隆抗體一起包被的微量培養板中培養的來自正常健康"供者C，，的T細胞的培養上清液中產生的IFN-Y的量。縱軸指示IFN-Y的濃度，橫軸指示小鼠抗-人AILIM單克隆抗體的濃度。在該圖中，"抗-KLH，，指其中人抗-KLH單克隆抗體用作陰性對照代替人抗-人AILIM單克隆抗體的測試結果。其它注釋如下"140":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl40。"141":人抗-人AILIM單克隆抗體JMab]41。圖48給出在通過混合淋巴細胞反應(MLR)檢驗T細胞增殖的試驗中，各種試驗樣品在正常健康"供者A，，的T細胞與正常健康"供者D，，的PBMC共同培養的情況下對T細胞增殖的抑制作用。縱軸是能指示細胞增殖程度的卩H]腺苷摻入量，橫軸指示試驗樣品的濃度。附圖中的各說明如下。"CD80+86":抗-CD80抗體和抗-CD86抗體的混合物"mlgGl，，抗-人CD34/IgGl小鼠單克隆抗體"CTLA4-Ig":人CTLA4-IgFc嵌合分子"SA12，，抗-人AILIM小鼠單克隆抗體。圖49給出在通過混合淋巴細胞反應(MLR)檢驗T細胞增殖的試驗中，各種人抗-人AILIM單克隆抗體在正常健康"供者A，，的T細胞與正常健康"供者D"的PBMC共培養的情況下對T細胞增殖的抑制作用。縱軸為指示細胞增殖程度的[3司腺苦摻入量，橫軸指示試驗樣品的濃度。其它注;降如下"抗-KLH，，作為陰性對照的人抗-KLH單克隆抗體。"JMab-124，，人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl24。"126":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl26。"127":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl27。"128":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl28。"135":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl35。"136":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl36。"137":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl37。圖50給出在通過混合淋巴細胞反應(MLR)檢驗T細胞增殖的試驗中，各種試驗樣品在正常健康"供者D，，的T細胞與正常健康"供者B"的PBMC共培養的情況下對T細胞增殖的抑制作用。縱軸為指示細胞增殖程度的卩H]腺苷摻入量，橫軸指示試驗樣品的濃度。附圖中的各說明如下。"CD80+86":抗-CD80抗體和抗-CD86抗體的混合物"mlgGl，，抗-人CD34/IgGl小鼠單克隆抗體"CTLA4-Ig，，人CTLA4-IgFc嵌合分子"SA12，，抗-人AILIM小鼠單克隆抗體。圖51給出在通過混合淋巴細胞反應(MLR)檢驗T細胞增殖的試驗各種人抗-人AILIM單克隆抗體在正常健康"供者D，，的T細胞與正常健康"供者B"的PBMC共培養的情況下對T細胞增殖的抑制作用。縱軸為指示細胞增殖程度的pH]腺苷摻入量，橫軸指示試驗樣品的濃度。其它注釋如下"抗-KLH":作為陰性對照的人抗-KLH單克隆抗體。"JMab-124，，人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl24。"126":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl26。"127":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl27。"128":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl28。"135":人抗-人AILIM單克隆抗體JMab135。"136":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl36。"137":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl37。圖52給出在通過混合淋巴細胞反應(MLR)檢驗T細胞增殖的試驗中，各種試驗樣品在正常健康"供者C，，的T細胞與正常健康"供者A"的PBMC共培養的情況下對T細胞增殖的抑制作用。縱軸為指示細胞增殖程度的[3司腺苷摻入量，橫軸指示試驗樣品的濃度。附圖中的各說明如下。"CD80+86":抗-CD80抗體和抗-CD86抗體的混合物"mlgGl，，抗-人CD34/IgGl小鼠單克隆抗體"CTLA4-Ig，，人CTLA4-IgFc嵌合分子"SA12，，抗-人AILIM小鼠單克隆抗體。圖53給出在通過混合淋巴細胞反應(MLR)檢驗T細胞增殖的試驗中，各種人抗-人AILIM單克隆抗體在正常健康"供者C，，的T細胞與正常健康"供者A"的PBMC共培養的情況下對T細胞增殖的抑制作用。縱軸為指示細胞增殖程度的[3司腺苷摻入量，橫軸指示試驗樣品的濃度。其它注釋如下"抗-KLH":作為陰性對照的人抗-KLH單克隆抗體。"JMab-124，，人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl24。"126":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl26。"127":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl27。"128":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl28。"135":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl35。"136":人抗-人AILIM單克隆抗體JMab136。"137":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl37。圖54給出在通過混合淋巴細胞反應(MLR)檢驗T細胞增殖的試驗中，各種試驗樣品在正常健康"供者E"的T細胞與正常健康"供者G"的PBMC共培養的情況下對T細胞增殖的抑制作用。縱軸為指示細胞增殖程度的卩H]腺苷摻入量，橫軸指示試驗樣品的濃度。附圖中的各說明如下。"對照mlgG":抗-人CD34/IgGl小鼠單克隆抗體"CD80+86Ab":抗-CD80抗體和抗-CD86抗體的混合物"SA12，，抗-人AILIM小鼠單克隆抗體"CTLA4-Ig":人CTLA4-IgFc嵌合分子。圖55給出在通過混合淋巴細胞反應(MLR)檢驗T細胞增殖的試驗中，各種人抗-人AILIM單克隆抗體在正常健康"供者E"的T細胞與正常健康"供者G"的PBMC共培養的情況下對T細胞增殖的抑制作用。縱軸為指示細胞增殖程度的[311]腺苷摻入量，橫軸指示試驗樣品的濃度。其它注釋如下"抗-KLH，，作為陰性對照的人抗-KLH單克隆抗體。"JMab-136，，人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl36。"138":人抗-人AILIM單克隆抗體JMab138。"139":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl39。"140":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl40。"141":人抗-人AILIM單克隆抗體JMab141。圖56給出在通過混合淋巴細胞反應(MLR)檢驗T細胞增殖的試驗中，各種試驗樣品在正常健康"供者F，，的T細胞與正常健康"供者E"的PBMC共培養的情況下對T細胞增殖的抑制作用。64縱軸為指示細胞增殖程度的[3司腺苷摻入量，橫軸指示試驗樣品的濃度。附圖中的各說明如下。"對照mlgG，，抗-人CD34/IgGl小鼠單克隆抗體"CD80+86Ab":抗-CD80抗體和抗-CD86抗體的混合物"SA12":抗-人AILIM小鼠單克隆抗體"CTLA4-Ig，，人CTLA4-IgFc嵌合分子。圖57給出在通過混合淋巴細胞反應(MLR)檢驗T細胞增殖的試驗中，各種試驗樣品在正常健康"供者F"的T細胞與正常健康"供者E，，的PBMC共培養的情況下對T細胞增殖的抑制作用。縱軸為指示細胞增殖程度的[3司腺苦摻入量，橫軸指示試驗樣品的濃度。附圖中各說明如下"抗-KLH":作為陰性對照的人抗-KLH單克隆抗體。"JMab-136，，人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl36。"138":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl38。"139":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl39。"140":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl40。"141":人抗-人AILIM單克隆抗體JMab141。圖58給出在通過混合淋巴細胞反應(MLR)檢驗T細胞增殖的試驗中，各種試驗樣品在正常健康"供者G"的T細胞與正常健康"供者F"的PBMC共培養的情況下對T細胞增殖的抑制作用。縱軸為指示細胞增殖程度的[3司腺苷摻入量，橫軸指示試驗樣品的濃度。附圖中的各i兌明如下。"對照mlgG，，抗-人CD34/IgGl小鼠單克隆抗體"CD80+86Ab":抗-CD80抗體和抗-CD86抗體的混合物"SA12":抗-人AILIM小鼠單克隆抗體"CTLA4-Ig，'人CTLA4-IgFc嵌合分子。圖59給出在通過混合淋巴細胞反應(MLR)檢驗T細胞增殖的試驗中，各種試驗樣品在正常健康"供者G，，的T細胞與正常健康"供者F，，的PBMC65共培養的情況下對T細胞增殖的抑制作用。縱軸為指示細胞增殖程度的[3印腺苦摻入量，橫軸指示試驗樣品的濃度。附圖中各說明如下"抗-KLH，，作為陰性對照的人抗-KLH單克隆抗體。"JMab-136":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl36。"138":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl38。"139":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl39。"140":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl40。"141":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl41。圖60給出在使用混合淋巴細胞反應(MLR)的測試中，各種對照試驗物質對T細胞增殖的抑制作用。來自正常健康"供者A，，的T細胞與來自正常健康"供者D"的已在人CTLA4-Ig嵌合分子存在下預培養的PBMC共同培養。縱軸為指示細胞增殖程度的[3司腺苷摻入細胞量，橫軸指示試驗物質的濃度。附圖中的各說明如下。"CD80+86":抗-CD80抗體和抗-CD86抗體的混合物"mlgGl":抗-人CD34/IgGl小鼠單克隆抗體"SA12，，抗-人AILIM小鼠單克隆抗體。圖61給出在使用混合淋巴細胞反應(MLR)的測試中，各種人抗-人AILIM單克隆抗體對T細胞增殖的抑制作用。來自正常健康"供者A，，的T細胞與來自正常健康"供者D，，的已在人CTLA4-Ig嵌合分子存在下預培養的PBMC共同培養。縱軸指示作為細胞增殖程度指數的[3司腺苷摻入細胞的量，橫軸指示試驗物質的濃度。其它注釋如下"抗-KLH，，作為陰性對照的人抗-KLH單克隆抗體。"JMab-124，，人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl24。"126":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl26。"127":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl27。66"128":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl28。"135":人抗-人AILIM單克隆抗體JMab135。"136":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl36。"137":人抗-人AILIM單克隆抗體JMab137。圖62給出在使用混合淋巴細胞反應(MLR)的測試中，各種對照試驗物質對T細胞增殖的抑制作用。來自正常健康"供者D，，的T細胞與來自正常健康"供者B，，的已在人CTLA4-Ig嵌合分子存在下預培養的PBMC共同培養。縱軸指示作為細胞增殖程度指數的^H]腺苷摻入細胞的量，橫軸指示試驗物質的濃度。附圖中的各說明如下。"CD80+86":抗-CD80抗體和抗-CD86抗體的混合物"mlgGl":抗-人CD34/IgGl小鼠單克隆抗體"SA12，，抗-人AILIM小鼠單克隆抗體。圖63給出在使用混合淋巴細胞反應(MLR)的測試中，各種人抗-人AILIM單克隆抗體對T細胞增殖的抑制作用。來自正常健康"供者D"的T細胞與來自正常健康"供者B，，的已在人CTLA4-Ig嵌合分子存在下預培養的PBMC共同培養。縱軸指示作為細胞增殖程度指數的卩H]腺苷摻入細胞的量，橫軸指示試驗物質的濃度。其它注釋如下"抗-KLH":作為陰性對照的人抗-KLH單克隆抗體。"JMab-124，，人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl24。"126":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl26。"127":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl27。"128":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl28。"135":人抗-人AILIM單克隆抗體JMab135。"136":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl36。"137":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl37。圖64給出在使用混合淋巴細胞反應(MLR)的測試中，各種對照試驗物質對T細胞增殖的抑制作用。來自正常健康"供者C"的T細胞與來自正常健康"供者A"的已在人CTLA4-Ig嵌合分子存在下預培養的PBMC共同培養。縱軸指示作為細胞增殖程度指數的[3司腺苦摻入細胞的量，橫軸指示試驗物質的濃度。附圖中的各說明如下。"CD80+86":抗-CD80抗體和抗-CD86抗體的混合物"mlgGl，，抗-人CD34/IgGl小鼠單克隆抗體"SA12，，抗-人AILIM小鼠單克隆抗體。圖65給出在使用混合淋巴細胞反應(MLR)的測試中，各種人抗-人AILIM單克隆抗體對T細胞增殖的抑制作用。來自正常健康"供者C"的T細胞與來自正常健康"供者A"的已在人CTLA4-Ig嵌合分子存在下預培養的PBMC共同培養。縱軸指示作為細胞增殖程度指數的[3司腺苷摻入細胞的量，橫軸指示試驗物質的濃度。其它注糹奪如下"抗-KLH":作為陰性對照的人抗-KLH單克隆抗體。"JMab-124，，人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl24。"126":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl26。"127":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl27。"128":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl28。"135":人抗-人AILIM單克隆抗體JMab135。"136":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl36。"137":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl37。圖66給出在使用混合淋巴細胞反應(MLR)的測試中，各種對照試驗物質對T細胞增殖的抑制作用。來自正常健康"供者E"的T細胞與來自正常健康"供者G"的已在人CTLA4-Ig嵌合分子存在下預培養的PBMC共同培養。縱軸指示作為細胞增殖程度指數的[3司腺苦摻入細胞的量，橫軸指示試驗物質的濃度。附圖中的各說明如下。"對照mlgG，，抗-人CD34/IgGl小鼠單克隆抗體"CD80+86Ab":抗-CD80抗體和抗-CD86抗體的混合物"SA12，，抗-人AILIM小鼠單克隆抗體。圖67給出在使用混合淋巴細胞反應(MLR)的測試中，各種人抗-人AILIM單克隆抗體對T細胞增殖的抑制作用。來自正常健康"供者E，，的T細胞與來自正常健康"供者G"的已在人CTLA4-Ig嵌合分子存在下預培養的PBMC共同培養。縱軸指示作為細胞增殖程度指數的卩H]腺苷摻入細胞的量，橫軸指示試驗物質的濃度。其它注;降如下"抗-KLH，，作為陰性對照的人抗-KLH單克隆抗體。"JMab-136，，人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl36。"138":人抗-人AILIM單克隆抗體JMab138。"139":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl39。"140":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl40。"141":人抗-人AILIM單克隆抗體JMab141。圖68給出在使用混合淋巴細胞反應(MLR)的測試中，各種對照試驗物質對T細胞增殖的抑制作用。來自正常健康"供者G，，的T細胞與來自正常健康"供者F，，的已在人CTLA4-Ig嵌合分子存在下預培養的PBMC共同培養。縱軸指示作為細胞增殖程度指數的[3司腺苷摻入細胞的量，橫軸指示試驗物質的濃度。附圖中的各說明如下。"對照mlgG，，抗-人CD34/IgGl小鼠單克隆抗體"CD80+86Ab，，抗-CD80抗體和抗-CD86抗體的混合物"SA12，，抗-人AILIM小鼠單克隆抗體。圖69給出在使用混合淋巴細胞反應(MLR)的測試中，各種人抗-人AILIM單克隆抗體對T細胞增殖的抑制作用。來自正常健康"供者G"的T細胞與來自正常健康"供者F"的已在人CTLA4-Ig嵌合分子存在下預培養的PBMC共同培養。縱軸指示作為細胞增殖程度指數的[3司腺苷摻入細胞的量，橫軸指示試驗物質的濃度。其它注釋如下"抗-KLH":作為陰性對照的人抗-KLH單克隆抗體。"JMab-136，，人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl36。"138":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl38。"139":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl39。"140":人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl40。"141":人抗-人AILIM單克隆抗體JMab141。圖70給出野生型CHO細胞用作輩巴細胞情況下，各種人抗-人AILIM單克隆抗體和對照抗體的ADCC-誘導活性。縱軸指示抗體的ADCC-誘導活性引起的細胞毒性率，橫軸指示抗體的濃度。圖71給出人AILIM-過表達型重組CHO細胞用作靶細胞情況下，各種人抗-人AILIM單克隆抗體和對照抗體的ADCC-誘導活性。縱軸指示抗體的ADCC-誘導活性導致的細胞損傷率，橫軸指示抗體的濃度。圖72給出抗-AILIM抗體對遲髮型過敏反應的抑制作用。縱軸指示作為遲髮型過敏反應發生指數的紅斑大小，橫軸指示給予動物受試者的試驗樣品的類型。圖73給出用人抗-人AILIM單克隆抗體和抗-人CD3單克隆抗體一起包被的微量培養板測定各種人抗-人AILIM單克隆抗體轉導協同刺激信號的活性時，猴T細胞的增殖活性。縱軸指示作為細胞增殖程度指數的卩H]腺苷摻入細胞的量，橫軸指示人抗-人AILIM單克隆抗體的濃度。在該圖中，"抗-KLH，，指其中人抗-KLH單克隆抗體用作陰性對照代替人抗-人AILIM單克隆抗體的測試結果。圖74給出陰性對照抗體對可溶性AILIM配體(hB7h-IgFc)與各種濃度的可溶性AILIM(AILIM-IgFc)之間的結合的抑制活性。縱軸指示作為抑制活性指數的吸收度，橫軸指示可溶性AILIM的濃度。圖75給出抗AILIM抗體對可溶性ALLIM配體(hB7h-IgFc)與各種濃度的可溶性AILIM(AILIM-IgFc)之間的結合的抑制活性。縱軸指示作為抑制活性指數的吸收度,橫軸指示可溶性AILIM的濃度。與可溶性AILIM(AILIM-IgFc)之間的結合的抑制活性。縱軸指示作為抑制活性指數的吸收度,橫軸指示可溶性AILIM的濃度。圖77給出用可溶性人AILIM配體(hB7h-IgFc)和抗-人CD3單克隆抗體一起包被的微量培養板測定轉導協同刺激信號的活性時，各種人抗-人AILIM單克隆抗體對人T細胞增殖的抑制活性。縱軸指示作為細胞增殖程度指數的卩H]腺苦摻入細胞的量，橫軸指示抗體的濃度。圖78給出用可溶性人AILIM配體(hB7h-IgFc)和抗-人CD3單克隆抗體一起包被的微量培養板測定轉導協同刺激信號的活性時，各種人抗-人AILIM單克隆抗體對猴T細胞增殖的抑制活性。縱軸指示作為細胞增殖程度指數的卩H]腺苷摻入細胞的量，橫軸指示抗體的濃度。實施本發明的最佳方式下面參考實施例對本發明進行詳細說明，但是這不應視為限制。實施例1:免疫原的製備製備表達人AILIM的重組細胞依照在早期公開(JP-ANo.Hei11-29599和W098/38216)，以及本發明人之一，Tezuka的早期報告(Int.Immunology,Vo1.12，No.l，p.51-55，2000)中所述方法製備過表達人AILIM的兩種重組細胞(CHO細胞和HPB-ALL細胞)。具體地，此方法如下將含有編碼人AILIM的全長ORF的cDNA(GenBank登記號AB023135(cDNA);BAA82129(胺基酸))插入到載體pEF-neo中。然後用GenePulser(BioRad)經常用的電穿孔法(960pF,320V)將上述所得重組表達載體引入中國倉鼠卵巢細胞(CHO細胞)和人胸腺瘤細胞系HPB-ALL細胞中。每種細胞培養在含遺傳黴素(0.8mg/ml;GibcoBRL)和10%FCS的RPMI1640培養基中以挑選抗藥性的轉化細胞。<1-2〉選擇過表達人AILIM的重組HPB-ALL細胞將在上述中所選的抗藥性HPB-ALL細胞培養液離心得到細胞沉71澱。將本發明人早期建立並報導(JP-A11-29599(實施例12)和W098/38216(實施例12))的稱為"SA12"的小鼠抗-人AILIM單克隆抗體(小鼠抗-人JTT-1抗原單克隆抗體)力。入到細胞沉澱中(濃度以100|111/105細胞的比例加入經EDTA-BSA/PBS稀釋的抗體溶液(10jug/m1))。所得混合物4°C下保溫30分鐘。用上述EDTA-BSA/PBS(200jil)洗細胞兩次，然後再加入用藻紅蛋白標記的鏈黴抗生物素(SA-PE;100)al500倍稀釋液)。將所得混合物4。C下保溫30分鐘。保溫後，用EDTA-BSA/PBS洗細胞3次，製備細胞懸浮液。用流式細胞儀FACSort(Beckton-Dichinson)分析細胞懸浮液中不同細胞的人AILIM表達水平，以挑選出過表達人AILIM的重組HPB-ALL細胞。在含有10%FCS和G418(lmg/ml)的RPMI1640培養基中培養所選細胞到鋪滿。對過表達人AILIM的重組CHO細胞的篩選將在上述中所選的抗藥性CHO細胞培養液離心得到細胞沉澱。將上述已用FITC標記的小鼠抗人AILIM單克隆抗體SA12加入到每種細胞沉澱中(用EDTA-BSA/PBS稀釋的抗體溶液(100iag/m1))。將所得混合物4°C下保溫30分鐘。用上述EDTA-BSA/PBS清洗細胞，向細胞沉澱中加入EDTA-BSA/PBS(500idl)製備細胞懸浮液。用流式細胞儀FACSort(Beckton-Dichinson)分析細胞懸浮液中不同細胞的人AILIM表達水平，以挑選出過表達人AILIM的重組HPB-ALL細胞。在含有10%FCS和G418(lmg/ml)的RPMI1640培養基中培養所選細胞到鋪滿。<1-4〉從過表達人AILIM的HPB-ALL細胞製備免疫原將上述<1-2〉中所得過表達人AILIM的HPB-ALL細胞離心。用磷酸緩衝液(PBS;NikkenSeibutsu)清洗回收的細胞沉澱4次，然後重懸於含蛋白酶抑制劑的緩沖液(含有25mMHEPES(pH7.4),10mMMgCl2，0.25M蔗糖，和蛋白酶抑制劑(10U/ml抑蛋白酶肽，2pg/ml胃蛋白酶抑制劑，50|ag/ml亮抑蛋白酶肽，和0.35mg/mlPMSF))。在Potter型勻漿器中處理細胞懸浮液，並低速離心(4。C下1，500rpmIO分鐘)。然後將所得上清超速離心(100,000g4。C下l小時)。回收沉澱的膜級分，並懸浮在磷酸緩沖液中(調整膜級分濃度使lmlPBS包含得自1x107個細胞的膜級分)。-S(TC下保存該懸浮液。包含細胞膜級分的懸浮液用作抗原(免疫原)以製備本發明的人抗體，下面有對此的記述。<1-5〉從過表達人AILIM的CHO細胞製備免疫原將上述<1-3〉中所得過表達人AILIM的CHO細胞用刮刀分散並離心。回收的細胞沉澱用磷酸緩沖液(PBS;NikkenSeibutsu)清洗4次，然後重懸於含蛋白酶抑制劑的緩衝液(含有25mMHEPES(pH7.4)，10mMMgCl2，0.25M蔗糖，和蛋白酶抑制劑(10U/ml抑蛋白酶肽，2|Lig/ml胃蛋白酶抑制劑，50pg/ml亮抑蛋白酶肽，和0.35mg/mlPMSF))。在Potter型勻漿器中處理細胞懸浮液，並低速離心(4。C下1,500rpm10分鐘)。然後所得上清液超速離心(100,000g4。C下1小時)。回收沉澱的膜級分，並懸浮在磷酸緩沖液中(調整膜級分濃度使lmlPBS包含得自1x10個細胞的膜級分)。-80。C下保存懸浮液。包含細胞膜級分的懸浮液用作抗原(免疫原)製備本發明的人抗體，下面有對此的記述。實施例2:製備能產生人抗-人AILIM單克隆抗體的雜交瘤在本實施例中，依照"實驗醫學(增刊)，細胞技術手冊"(T.Kuroki等編，Yodosha,pp.66-74,1992)和"單克隆抗體實驗手冊"(T.Ando等，Kodansha，1991)所述典型方法進行單克隆抗體的製備。實施例1中製備自過表達人AILIM的重組細胞的細胞膜級分用作人AILIM的免疫原。進行免疫的動物是通過上述方法(NatureGenetics,Vol.7，p.l3-21，1994;NatureGenetics,Vol.15，p.146-156，1997;公開的國際申請日語翻譯件Hei4-504365;公開的國際申請日語翻i奪件Hei7-509137;NikkiScience,6月，pp.40-50,1995;等)產生的生產人抗體的轉基因小鼠。採用多孔微量培養板進行細胞培養。免疫和雜交瘤的製備對上述產生人抗體的轉基因小鼠給予上述中(得自HPB-ALL)或中(得自CHO)製備的免疫原(100W/小鼠/給藥)。將免疫原與wit弗氏完全佐劑(ICN/CAPPEL)—起注射進足墊作為初次免疫(0天)。初次免疫後，以一周的間隔繼續在足墊注射任一種免疫原作為第二次和/或第三次免疫。以同樣方式進行末次注射，兩天後，如下製備'淋巴細胞。末次免疫的兩天後，從各自免疫的轉基因小鼠的(腹股溝下和膝下)淋巴結和脾製備淋巴細胞。將淋巴細胞和小鼠骨髓瘤細胞P3/X63-AG8.653(ATCC編號CRL-1580)以5:1的比例混合，加入聚乙二醇1500(BoehringerMannheim)作為融合劑。然後，用IO倍體積的無血清基礎培養基EX-CELL301(JRHBioscience)稀釋混合物。混合的細胞隨後用基礎培養基清洗，然後懸浮在HAT培養基(1L基礎培養基中含13.61mg次黃嘌呤，176嗎氨基蝶呤，和3.88mg胸苷)中。將細胞鋪於96孔微量培養板上，培養10-14天完成細胞融合。細胞融合產生許多雜交瘤。<2-2〉篩選產生人單克隆抗體的雜交瘤上述中製備的幾種雜交瘤採用下述的細胞ELISA方法進行篩選，以挑選出生產抗人AILIM人單克隆抗體的雜交瘤。分別將上述過表達人AILIM的重組HPB-ALL細胞和重組CHO細胞鋪板在ELISA96孔微量培養板的每一孔中(lx105個細胞/孔)。37。C下保溫2天。隨後，棄去每孔的上清，加入每種雜交瘤培養液的上清樣品(50)il/孔)，保溫混合物1小時。反應結束後，棄去混合的樣品液，每孔用含有1。/。BSA(Sigma)的PBS清洗3次。隨後，在每孔加入過氧化物酶偶聯的山羊抗-人免疫球蛋白(Fc)抗體(每孔50|nl2000倍稀釋液；AmericanCorex;1。/。BSA/PBS)以檢測雜交瘤上清中的人免疫球蛋白(人單克隆抗體)重鏈。混合物室溫下保溫1小時。另一方面，在每孔加入過氧化物酶偶聯的山羊抗-人免疫球蛋白K鏈抗體(每孔50nl2000倍稀釋液)以檢測雜交瘤上請中的人免疫球蛋白(人單克隆抗體)輕鏈。混合物室溫下保溫15分鐘。從微量培養板的每孔除去抗-人IgFc抗體或抗-人IgK抗體，然後用含有1%BSA的PBS清洗微量培養板的每孔3次。每孔中加入四甲聯苯胺(3,3，，5，5，-四曱基聯苯胺(TMB)，100nl/孔，BIO-RAD)，所得混合物室溫下保溫15分鐘。隨後，每孔中加入INH2SO4(50(al/孔)以終止反應。採用微量培養板讀取儀(3550型微量培養板讀取儀，BIO-RAD)在450nm波長測定吸收值以監控反應。以上述同樣的方法進行對照ELISA實驗，使用下列選項74(1)野生型HPB-ALL細胞，替代表達人AILIM的重組HPB-ALL細胞；(2)野生型CHO細胞，替代表達人AILIM的重組CHO細胞；(3)抗人AILIM小鼠單克隆抗體(SA12或SG430;JP-A1l-29599(實施例12)和W098/38216(實施例12))替代雜交瘤上清；(4)抗KLH(匙孔血藍蛋白，P正RCE)的人單克隆抗體，替代雜交瘤上清。通過用KLH(匙孔血藍蛋白，P正RCE)免疫上述生產人抗體的轉基因小鼠，以與同樣的方法製備人抗-KLH單克隆抗體。通過所述篩選挑選能生產與人AILIM結合的人單克隆抗體的許多雜交瘤。雜交瘤的初次克隆通過下列試驗從<2-2〉所挑選的產生抗人AILIM的人單克隆抗體的多種雜交瘤(親本細胞系)建立多類雜交瘤單克隆。將上述中所選的雜交瘤分別鋪板在24孔微量培養板上。通過滴度確定每孔中的雜交瘤細胞數。隨後，將10。/。胎牛血清(FCS;TraceBiosciencePTY)，1%青黴素/鏈黴素(Sigma),1%HTSupplement(GibcoBRL)含4.0mML-谷胺醯胺和脂類的EX-CELL301培養基(JRHBioscience)。用如此改變的培養基將雜交瘤稀釋到1x10"田胞/ml，將細胞懸浮在每孔中。將每孔的細胞懸浮液(300|^1或600inl)與改變的培養基(150ml或300ml)充分混合，然後在多個96孔板的每孔加入200|Lil細胞懸浮液，使每孔含有4個雜交瘤細胞。將上述改變的培養基(50ml或100ml)新鮮加入到剩下的已充分混合的細胞懸浮液中，然後將所得的細胞懸浮液加入到其它新製備的多個96孔農i量培養板的每孔中，使每孔含有兩個雜交瘤細胞。繼續培養1到2周。培養後，在許多孔中發現了得自單個雜交瘤的單菌落o採用如上<2-2〉所述細胞ELISA方法，證實在含菌落的每孔的培養上清中產生了抗人AILIM的人單克隆抗體。雜交瘤的再次克隆將如上<2-3〉所述所得不同雜交瘤克隆的每一克隆亞克隆(再次克隆)，方法如上<2-3〉所述。96孔微量培養板中每孔的細胞密度在本實驗中調整為1個細胞/孔。篩選產生了許多生產抗人AILIM的人單克隆抗體的雜交瘤單克隆。這些克隆部分如下(克隆名稱)AIF34(JMabl24)，AIF182(JMab-126),AIF348(JMab-127),AIF620(JMab-128),AIF1052(JMab-135)，AIH5D3(JMab-136),AIH386(JMab-137),AII289(JMab-138),AII394(JMab-139)，AII488(JMab-140)，AIJ40(JMab-141),以上名稱在本發明全文中使用，即在包含本實施例的下述所有實施例中，包含本實施例所得分析結果的圖表中使用。實施例3:分析單克隆抗體的性質重鏈和輕鏈的分析通過使用下述ELISA和流式細胞術證實，如上中所述克隆的每一雜交瘤克隆產生的抗人AILIM單克隆抗體確實是人單克隆抗體。將實施例1中製備的過表達人AILIM的重組HPB-ALL細胞鋪板在微量培養板的每一V形孔中(3x104個細胞/孔)。在含10%FCS的RPMI1640培養基中37。C下培養細胞。培養完成後，將板離心(1800rpm,2分鐘)以沉澱細胞，然後棄去所得上清。隨後，將如上所述克隆的每一雜交瘤培養液的上清樣品(50|111/孔)，或作為對照抗體的小鼠抗-人AILIM單克隆抗體SA12(2嗎/50ial)或備選地人抗-KLH單克隆抗體(50iul/孔)加入到每孔中。使該混合物在冰箱中反應30分鐘。反應後，棄去樣品液，用磷酸緩沖液(含5mMEDTA的0.5%BSA-PBS)清洗每孔。隨後，將下列第二抗體的任一加入到每孔中(用上述磷酸緩衝液稀釋1000倍，加入量為50pl/孔)使細胞懸浮。懸浮液在冰箱中反應30分鐘。(第二抗體)生物素標記的抗-人IgG抗體(Zymed);生物素標記的抗-人IgG抗體(Protos);生物素標記的抗-人IgFc抗體(EYLaboratories);或生物素標記的抗-人IgK抗體(Vector)。反應後，棄去第二抗體並用上述磷酸緩衝液清洗板上每一孔。隨後，將藻紅蛋白標記的鏈黴抗生物素(鏈黴抗生物素-PE;Pharmingen;用上述磷酸緩沖液稀釋500倍，加入量為50|11/孔)加入到每孔中。混合物在水箱中反76應30分鐘。反應後，用上述磷酸緩沖液清洗每孔。然後，將上述磷酸緩衝液加入到每孔中(200lal/孔)使細胞懸浮。分析確定每一雜交瘤克隆的培養上清中的抗-人AILIM單克隆抗體對每孔中過表達人AILIM的HPB-ALL細胞的反應性。使用下列項以與上述相同的方法進行對比實驗(1)野生型HPB-ALL細胞，替代表達人AILIM的重組HPB-ALL細胞；(2)抗KLH(匙孔血藍蛋白，PIERCE)人單克隆抗體，替代雜交瘤上清。以如上<2-1〉所述相同方法，通過用KLH(匙孔血藍蛋白，PIERCE)免疫上述生產人抗體的轉基因小鼠製備人抗-KLH單克隆抗體。基於這些實驗結果，上述中所有雜交瘤克隆都被證實為由人-源重鏈和人源K輕鏈組成的單克隆抗體。圖1顯示了這些結果的一個例子，它包括對雜交瘤克隆AIH5D3(JMab-136)，AII289(JMab-138)，AII394(JMab-139)的分析結果。人單克隆抗體的同種型分型鑑定在中克隆並在中分析的雜交瘤產生的每一種人抗-人AILIM單克隆抗體的同種型。採用人單克隆抗體同種型分型試劑盒(AmericanQualex)依照試劑盒所附的實驗方法進行鑑定。所有的人抗-人AILIM單克隆抗體都鑑定為IgG2/K。實施例4:抗人AILIM的人單克隆抗體(人抗-人AILIM單克隆抗體)的大規模製備及其純化<4-1〉方法1將已在上述中製備的產生人抗-人AILIM單克隆抗體的每一雜交瘤克隆的細胞加入到組織培養瓶(50ml，FALCON)中，在含有10。/o極低(UltraLow)牛IgGFBS(GIBCO-BRL)的ASF104培養基(Ajinomoto)中37。C下於5。/。C02中培養至鋪滿。隨後，將全部培養液轉移到新的組織培養搖並瓦(750ml，FALCON)中，將細胞培養在含有10%極低牛IgGFBS(GIBCO-BRL)的ASF104培養基(Ajinomoto)中37°C下於5%C02中培養至鋪滿。培養10-20天後，回收每一雜交瘤的培養上清並轉移到50-ml聚丙烯圓錐管(FALCON)中。將試管在500g下離心5分鐘。隨後，將所得離心上清用除菌過濾組件(NALGEN)過濾，回收濾液。以3ml/min的流速將濾液上柱到已用磷酸緩沖液(30ml)預平衡的HiTrap蛋白G柱(HiTrap親和柱蛋白G;AmershamPharmacia)。隨後，用磷酸緩沖液(20ml)洗柱，目的抗體用100mM檸檬酸鹽緩衝液(pH2.0)以約lml/min的低流速洗脫。隨後，濾液用750mMTris-HCl溶液(pH9.0)中和，經濾膜(Millipore)過濾除去白色沉澱。所得濾液對磷酸緩衝液透析(過夜)，並經濾膜(Millipore)過濾。這樣從每一雜交瘤細胞系得到純化的抗-AILIM人單克隆抗體。用分光光度計測定A28的吸光度以確定蛋白濃度(1A28=1.41mg/ml)。方法2將<2-4〉中製備的每一雜交瘤克隆的細胞置於含有10%極低牛IgGFBS(GffiCO-BRL)的ASF104培養基(Ajinomoto)中(每種為1-2x16個細胞/ml)，鋪板並培養在IntegraCellLine1000(INTEGRACL1000,INTEGRABIOSCIENCE)中。培養7-10天後，當細胞密度達到1x18個/ml時，回收每一雜交瘤培養液的上清。以3ml/min的流速將每一培養上清液上柱到已用磷酸緩沖液(30ml)預平-衡的HiTrap蛋白G柱(HiTrap親和柱蛋白G;AmershamPharmacia)。隨後，用磷酸緩沖液(20ml)洗柱，抗體用100mM檸檬酸鹽緩沖液(pH2.0)以約lml/min的低流速洗脫。隨後，濾液用750mMTris-HCl溶液(pH9.0)中和，經濾膜(Millipore)過濾除去白色沉澱。所得濾液對磷酸緩衝液透析(過夜)，並經濾膜(Millipore)過濾。這樣從每一雜交瘤細胞系得到純化的抗-AILIM人單克隆抗體。實施例5:人抗-人AILIM單克隆抗體對人AILIM的反應性，以及其對小鼠AILIM和大鼠AILIM的交叉反應性採用細胞ELISA方法分析上述各種純化的人抗-人AILIM單克隆抗體對人AILIM的反應性，以及對小鼠AILIM和大鼠AILIM的交叉反應性。<5-1〉建立可測定IgG抗體濃度的ELISA系統並製備標準曲線上述所有純化的人抗-人AILIM單克隆抗體都是IgG(IgG2)抗體，可建立ELISA系統以確定IgG抗體的濃度。在96孔ELISA微量培養板(Nunc)的每孔加入山羊抗-人IgG(Fc)抗體(PBS中1.2|ig/ml;1OO^il/孔；OrganonTeknika)。將培養板室溫下保溫2小時，使抗-IgG(Fc)抗體吸附到微量培養板上。隨後，棄去上清，用含0.05%78吐溫20的磷酸緩衝液(PBS)洗板3次。向每孔中加入封閉試劑(含0.5%牛血清白蛋白(BSA)和0.1%吐溫20的PBS)(200nl/孔)，將板室溫下保溫2小時以封閉板上的抗-IgG(Fc)抗體-游離位點。然後，棄去封閉試劑，用PBS清洗每孔2次。向培養板的不同孔中加入各種濃度(O-100ng/ml)的用作標準抗體的人源IgG2抗體(50|11/孔；TheBindingSite)，將板室溫下保溫2小時。棄去多餘的標準抗體溶液，用含0.05%吐溫20的磷酸緩衝液洗每孔3次。隨後，向每孔加入過氧化物酶偶聯的山羊抗-人IgG/K抗體(4000倍稀釋，100(il/孑L，Protos)，將板室溫下保溫l小時。棄去上清，用含0.05%吐溫20的磷酸緩衝液洗微量培養板3次。向每孔加入含有底物的緩衝液(組成鄰苯二胺(OPD;20mg)/檸檬酸-磷酸緩衝液(pH5.0，50ml)/30。/。過氧化氫水溶液(15^il))(100nl/孔)，將板室溫下保溫約7分鐘。隨後，向每孔中加入2M硫酸(50nl/孔)終止反應。基於微量培養板讀取儀4卯nm波長測定的吸光度結果繪製標定曲線(圖2)。單獨以培養基或BSA溶液為實驗物質以如上相同的方法進行對比實驗。各種純化的人抗-人AILIM單克隆抗體對人AILIM的反應性以及對小鼠AILIM和大鼠AILIM的交叉反應性的分析試劑的製備如下製備在此細胞ELISA中所用的試劑過表達小鼠AILIM的重組CHO細胞的製備用和<1-3〉中所述方法製備並得到過表達小鼠AILIM的重組CHO細胞。將含有小鼠AILIM全長ORF的cDNA(GenBank登記號AB023132(cDNA);BAA82126(胺基酸))插入到載體pEF-neo中，然後將所得重組表達載體採用GenePulser(BioRad)通過常用的電穿孔方法(960^F,320V)引入中國倉鼠卵巢細胞(CHO細胞)。將細胞培養在含遺傳黴素(0.8mg/ml;GibcoBRL)和10%FCS的RPMI1640培養基中以挑選抗藥性的轉化細胞，這樣就得到了過表達小鼠AILIM的重組CHO細胞。<5-2-l-2〉過表達大鼠AILIM的重組CHO細胞的製備用<1_1〉和<1_3〉中所述方法製備並得到過表達大鼠AILIM的重組CHO細胞。將含有大鼠AILIM全長ORF的cDNA(GenBank登記號AB023134(cDNA);BAA82128(胺基酸))插入到載體pEF-neo中，然後將所得重組表達載體採用GenePulser(BioRad)通過常用的電穿孔方法(960pF，320V)引入中國倉鼠卵巢細胞(CHO細胞)。將細胞培養在含遺傳黴素(0.8mg/ml;GibcoBRL)和10%FCS的RPMI1640培養基中以挑選抗藥性的轉化細胞，這樣就得到了過表達大鼠AILIM的重組CHO細胞。抗小鼠AILIM單克隆抗體的製備將如上中製備的過表達小鼠AILIM的重組CHO細胞勻漿，進行超速離心(100000g)。回收所得含細胞膜級分的沉澱並將其懸於PBS中。將所得細胞膜級分同弗氏完全佐劑一起注射進入Wistar大鼠足墊進行初次免疫(第0天)。在初次免疫後第7天，14天，28天，進一步對大鼠足墊給予細胞膜級分抗原。末次免疫的2天後收集它們的淋巴結細胞。將所述淋巴結細胞和小鼠骨髓瘤細胞PAI(JCRNo.B0113;Res.Disclosure,Vol.217，p,155，1982)以5:1的比例組合。採用聚乙二醇4000(BoehringerMannheim)作融合劑將所述細胞相互融合，以製備生產單克隆抗體的雜交瘤。將雜交瘤培養在含HAT，10%胎牛血清和氨基蝶呤的ASF104培養基(Ajinomoto)中以便篩選。通過將培養上清與上述表達小鼠AILIM的CHO細胞反應，然後採用EPICS-ELITE流式細胞儀測定FITC標記型抗-大鼠IgG(Cappel)染色的細胞的螢光強度，以此測定每一雜交瘤的培養上清中的大鼠單克隆抗體對小鼠AILIM的反應性。篩選得到多個雜交瘤，它們可以生產具有對小鼠AILIM的反應性的單克隆抗體。在這些雜交瘤中，有一雜交瘤細胞系命名為"B10.5."。將此雜交瘤的細胞腹膜內注射(10、10"個細胞/0.5ml/小鼠)給ICRnu/nu小鼠(雌性，7到8周齡)。注射10到20天後，依照常規方法於麻醉下通過剖腹術從每隻小鼠收集腹水。從腹水大規模製備大鼠抗-小鼠AILIM單克隆抗體B10.5(IgGl)。抗體對人，小鼠和大鼠AILIM的反應性基於上述中的ELISA和標準曲線確定以下ELISA中所用人抗-人AILIM單克隆抗體和對照抗體的濃度。80實施例1中製備的過表達人AILIM的重組CHO細胞，上述中製備的過表達小鼠AILIM的重組CHO細胞，以及上述中所述過表達大鼠AILIM的重組CHO細胞分別鋪板在96孔ELISA微量培養板的孔中(7x103個細胞/孔)，37。C下培養至鋪滿。隨後，棄去上清，向每孔加入如上製備的純化的任一種人抗-人AILIM單克隆抗體或對照抗體(抗體濃度用含1%BSA的PBS將200|iil/ml的抗體稀釋3倍，32倍，33倍，34倍，35倍，36倍，37倍，38倍，39倍，31倍，3"倍，312倍)，加入量為50^1/孔，將板在室溫下反應2小時。棄去單克隆抗體液，用含1。/。BSA(Sigma)的磷酸緩衝液洗孔3次。隨後，每孔加入辣根過氧化物酶偶聯的抗-人IgG(Fc)抗體(稀釋1000倍，50|11/孔；AmericanQualex)，將板室溫下保溫l小時。棄去多餘的標記抗體液，用含1。/。BSA(Sigma)的磷酸緩沖液洗板3次。向每孔加入含底物的緩沖液(組成鄰笨二胺(OPD;20mg)/檸檬酸-磷酸緩沖液(pH5.0,50m)/過氧化氫的30。/Q水溶液(15jil))(100^i/孔)，將板室溫下保溫約7分鐘。隨後，向孔中加入2M硫酸(50iil/孔)以終止反應。使用微量培養板讀取儀(Bio-Rad)於490nm波長下測定吸光度。採用下列對照抗體，按照上述同樣的方法進行對照ELISA檢測，以評價上述抗體(1)抗人AILIM的小鼠單克隆抗體SA12或SG430(JP-A11-29599(實施例12)和W098/38216(實施例12));(2)抗小鼠AILIM的大鼠單克隆抗體B10.5(如〈5-2-l-3〉所述)；(3)抗大鼠AILIM的小鼠單克隆抗體JTT2(由1996年10月11日以國際保藏號FERMBP-5708保藏在根據布達佩斯條約的微生物國際保藏單位，通商產業省工業技術院國立生命科學和人體技術研究所)；JP-All-29599(實施例1和2)和W098/38216(實施例1和2))。(4)如上製備的抗KLH(鑰孔血藍素，PIERCE)人單克隆抗體，而非雜交瘤上清。採用下列野生型CHO細胞，而非表達AILIM的重組CHO細胞，按照上述同樣的方;去進行ELISA對照實驗。結果示於圖3到14中。81基於結果，計算50。/。有效濃度(ED50:ng/ml)作為每種人抗-人AILIM單克隆抗體對人AILIM(過表達人AILIM的重組CHO細胞)，小鼠AILIM(過表達小鼠AILIM的重組CHO細胞)，大鼠AILIM(過表達大鼠AILIM的重組CHO細胞)的反應性的指標。計算所得結果列於下(A)過表達人AILIM的CHO的ED50值AIF34(JMab-124):5.3ng/mlAIF182(JMab-126):3.6ng/mlAIF348(JMab-127):9.1ng/mlAIF620(她b-128):10.1ng/mlAIF1052(JMab-135):2.0ng/mlAIH5D3(她b隱136):7,5ng/mlAIH386(JMab畫137):9.6ng/mlAII289(JMab-138):10.5ng/mlAII394(JMab-139):10.6ng/mlAII488(她b匿140):11.0ng/mlAIJ40(她b-141):3.7ng/mlSA12:1.8ng/ml。wju:i.zng/mi(B)過表達小鼠AILIM的CHO的ED50值AIF34(JMab-124):42ng/mlAIF348(她b-127):81ng/mlAIF620(JMab畫128):100ng/mlAII289(JMab-138):53ng/mlAII394(JMab畫139):60ng/mlAII488(JMab-140):70ng/ml(C)過表達大鼠AILIM的CHO的ED50值AIF34(JMab-124):45ng/mlAIF348(JMab-127):62ng/mlAIF620(JMab-128):97ng/mlAII289(她b-138):57ng/mlAII394(JMab-139):90ng/mlA浦8(JMab-140):90ng/ml結果表明本發明的人抗-人AILIM單克隆抗體表現出對人AILIM的極高的特異性。此外，還顯示6種類型的人抗-人AILIM單克隆抗體(如上(B)和(C)所示)對小鼠AILIM和大鼠AILIM都有反應性(結合能力，交叉反應性)。實施例6:測定人抗-人AILIM單克隆抗體對抗原(人AILIM)的親和力和中和活性採用市售試劑盒BiacoreX(AmershamPahrmacia)測定如上製備的每種純化的人抗-人AILIM單克隆抗體與人AILIM之間反應的結合速度常數(ka)，解離速度常數(kd)和解離常數(Kd)。<6-1〉製備固定在傳感器晶片上的抗原試劑盒中固定在傳感器晶片上的抗原以重組嵌合抗原的形式(下文中稱為"人AILIM-IgFc")製備，其由人AILIM的胞外區和人IgGl的恆定區(Fc)組成。將本發明人之一，Tezuka的早期文獻(JP-A11-29599(實施例16(2))和W098/38216(實施例16(2))所述方法所得的抗原進一步純化可製備人AILIM-IgFc。將生產人AILIM-IgFc的重組細胞的培養上清以流速3ml/min上樣到已用磷酸緩衝液預平衡的HiTrap蛋白G柱(HiTrap親和柱蛋白G;AmershamPharmacia),以將培養上清中的人AILIM-IgFc吸附到柱上。隨後，用磷酸緩沖液(20ml)洗柱，然後用100mM檸檬酸緩衝液(pH2.0)以約lml/min的流速洗脫人AILIM-IgFc。隨後，洗脫液用750mMTris-HCl(pH9.0)中和，再對磷酸緩衝液透析(過夜)。然後，將透析過的溶液經濾膜(Millipore)過濾。這樣就得到了純化的抗-人AILIM-IgFc。採用分光光度計測定A280吸收度來確定蛋白濃度(lA28=lmg/ml)。人AILIM-IgFc的濃度經測定為0.28mg/ml。依照上述同樣的方法製備由大鼠AILIM胞外區和人IgGl恆定區(Fc)組成的純化嵌合蛋白(大鼠AILIM-IgFc;JP-A11-29599(實施例16(2))和W098/38216(實施例16(2))。所得大鼠AILIM-IgFc的濃度經測定為0.45mg/ml。親和力和中和活性的測定除下述的在傳感器晶片上固定抗原(人AILIM-IgFc)的步驟外，其它實驗步驟都基於市售檢測試劑盒BiacoreX(Amersham-Pharmacia)所附的指導手冊和實,瞼方法。使HPS緩衝液(含0.01MHEPES,0.15MNaCl，3mMEDTA和0.005%去汙劑P20,(pH7.0))流過試劑盒所附FlowCell-1，流速5pl/min。隨後，加入含0.005MNHS(N-羥基琥珀醯亞胺)和0.2MEDC(N-乙基-N，-(二曱基氨丙基)碳二亞胺)的溶液(15!il)以活化包被在傳感器晶片表面的CM的羧基。隨後，加入23^1人AILIM-IgFc溶液(10iig/ml;溶於10mM乙酸鈉緩沖液(pH5.0))中以將人AILIM-IgFc固定在傳感器晶片上。隨後，加入35^11M鹽酸乙醇胺以封閉未反應的活化羧基。通過2次固定化處理固定的人AILIM-IgFc的量分別為2444RU(共振單位)和2213RU。RU對應每單位面積的質量；lRU=lpg/mm2。FlowCell-2，是一個參比流槽，以如上同樣的方式在沒有人AILIM-IgFc的情況下進行包被處理。使磷酸緩沖液以20^/min的流速流過所述流槽(傳感器晶片)，向其中加入上面實施例中製備的每一種純化的人抗-人AILIM單克隆抗體(10-50pg/ml，60|iil)。測定的標準條件是結合階段3分鐘，解離階段10分鐘。按時間進程監控每種抗體結合抗原和與抗原分離的量以得到傳感圖(sensorgram)。通過使PBS以20|^l/min的流速流過傳感器晶片而實現抗原與抗體的解離。基於所得傳感圖數據，通過試劑盒所附分析軟體(BIAevaluation3.0)計算結合速度常數(ka),解離速度常數(kd)和解離常數(Kd;Kd=kd/ka)。以與上述同樣的方法分析上述實施例製備的小鼠單克隆抗體SA12和SG430對人AILIM的親和力和中和活性。所得各數值列於下。AIF34(JMab-124)1.6xl04l.OxlO-46.3xl(T9AIF182(JMab-126)3.2M042.8x10-58.8x10"。AIF348(JMab-127)1.9xl046.4x10-53.4xl0-9AIF620(JMab-128)I."IO4l.OxlO-8AIF1052(JMab-135)1.6xl046.3xl0-53.9xl0-9AIH5D3(JMab-136)2.8xl044.9x1(T6AIH386(JMab-137)1.2xl053.1xl0-42.6x10-9AII289(JMab-138)3.7xl044.2xl(T5l.lxlO-9AII394(JMab-139)3.1xl042.4xl0-57,7"0-10AII488(JMab-140)2.3xl043.5xl(T51.5xl(T9AIJ40(JMab-141)1.9xl04—1.9x10-5l.Oxl(T9SA127.8xl037.9xl(T5l.Oxi(r8SG4302.2xl041.5x0-46.8xl0-9結果顯示所有人抗-人AILIM單克隆抗體和抗-人AILIM小鼠單克隆抗體都表現出對人AILIM具有明顯很高的親和力和中和活性。實施例7:人抗-人AILIM單克隆抗體向人T細胞中轉導協同刺激信號的活性對本發明的人抗-人AILIM單克隆抗體是否具有控制(增強和/或抑制)人T細胞應答(生產細胞因子如IFN-y和IL-4，細胞增殖等)的能力，即所述抗體是否表現出對AILIM介導的協同刺激信號的細胞轉導具有調控活性進行了分析。基於人T細胞產生的細胞因子(IFN-Y和IL-4)的量和人T細胞增殖的程度作為指標進行分析。抗體的稀釋用磷酸緩沖液(PBS)稀釋抗-人CD3單克隆抗體OKT3(ATCCCRL-8001)使終濃度為8^ig/ml。如上製備的每一種人抗-人AILIM單克隆抗體都用PBS稀釋到最終濃度為40]ug/ml。抗體溶液進一步用PBS稀釋以製備各種濃度的抗體(40pg/ml-0.0049|ug/ml)。用抗體包被微量培養板用(l)抗-人CD3單克隆抗體OKT3(8|ng/ml;每孔25|111)和任一種人抗-人AILIM單克隆抗體(40嗎/ml-0.0049嗎/ml;每孔25|il)，或單獨用(2)抗-人CD3單克隆抗體OKT3(8嗎/ml;每孔25(al)包被96孔微量培養板的每孔。將板37。C下保溫2小時。隨後，棄去抗體液，每孔用PBS洗3次。然後，將含10%FCS的RPMI1640培養基加入到每孔中(100|111/孔)，37。C下將板保溫1小時。這樣，板上不同的孔被上述(1)或(2)所述抗體包被。依照同樣的方法進行對照實驗，所用板分別用下列單克隆抗體，而非人抗-人AILIM單克隆抗體作對照抗體進行包被。(l)抗人AILIM的小鼠單克隆抗體SA12或SG430(JP-A11-29599(實施85實施例12));P)小鼠抗-人CETP單克隆抗體JHC1(也稱為JMablO9;JP-A9-20800);和(3)人抗-KLH單克隆抗體(也稱為JMab23;上述實施例)。在下述分析中使用抗體包被的微量培養板。人T細胞懸浮液的製備從每一正常健康人採集外周血(5人；供者A，B,C，D和E)。採用LymphoPrep(Nycomed)通過密度-梯度離心製備含單核細胞的級分。使用Pan-T細胞分離試劑盒(Miltenyi)和磁性分揀儀(MagneticSorter)按說明書從人單核細胞級分分離人T細胞。採用血細胞計數器計數T細胞。將人T細胞懸浮在含10%FCS的RPMI1640培養基中製備人T細胞懸浮液(lx106個細胞/ml)。細胞培養(1)用抗-人CD3抗體和抗-人AILIM抗體包被的微量培養板進行的培養向用上述抗體包被的微量培養板的每孔加入人T細胞懸浮液(供者A，B，C，D和E;100|^1/孔；lxi5個細胞/孔)，將板在C02培養箱中於37'C下保溫3天。培養後，取所得培養液上清的等分試樣(50jil)保藏於-2(TC，並在後面所述分析中使用(IFNy分析)。在採集了培養液上清的等分樣品後，使用不同的微量培養板進行下列分析(2)單獨使用抗-人CD3抗體包被的微量培養板進行的培養人T細胞懸浮液(供者D;100ilU/孔；1x105個細胞/孔)加入到用上述抗體包被的微量培養板的每孔中，然後將任一種人抗-人AILIM單克隆抗體加入其中(25^il40(ig/ml-0.0049嗎/ml的抗體)。將板在C02培養箱中於37°C下保溫3天。測定T細胞的增殖活性保溫後，向各板的每孔加入曱基[3H]胸苷(0.5fiCi/孑L;Amersham-Pharmacia),將各板在0)2培養箱中於37°C下保溫6小時。然後，用細胞收集器將細胞捕獲在GF/C濾膜(Packard)上。隨後，將濾膜40°C下乾燥3小時或更長時間，然後向其中加入Mi畫cinti0(20iul/孔；Packard)。用P-計數器(TOPCOUNT)測定濾膜捕獲的細胞中摻入的3H放射性來分析培養86後T細胞增殖的程度。結果顯示於圖15到39。此分析結果顯示當用抗-人AILIM單克隆抗體(人單克隆抗體或小鼠單克隆抗體)與抗-人CD3抗體一起包被微量培養板時，人T細胞根據細胞濃度顯著增殖。此外，在各個供者中細胞增殖的程度有所不同。在另一方面，當單獨用抗-人CD3抗體包被各板並在細胞培養期間在溶液(液相)中使用抗-人AILIM單克隆抗體(人單克隆抗體或小鼠單克隆抗體)時人T細胞沒有顯著生長。T細胞培養上清中IFNY的定量對的(1)中所述丁細胞(供者B和C)的各自培養物，通過市售人IFNYELISA試劑盒(Amersham-Pharmacia;Endogen)測定培養上清中IFNy的量。結果顯示於圖40到47。此分析結果顯示IFNy的生產隨抗-人AILIM單克隆抗體(人單克隆抗體或小鼠單克隆抗體)的濃度顯著提高。實施例8:人抗-人AILIM單克隆抗體對混合淋巴細胞反應(MLR)的調節活性通過分析對與異源混合淋巴細胞反應(異源MLR)相關的T細胞增殖的控制活性(即，細胞中DNA的合成)作為指標，檢測本發明的人抗-人AILIM單克隆抗體是否能夠控制(增強和/或抑制)T細胞應答(生產細胞因子如IFN-Y和IL-4，細胞增殖等)，即對AILIM介導的協同刺激信號向細胞內的轉導進行調節的能力。人PBMC和T細胞的製備從正常健康人(7人；供者A，B,C，D，E，F，G)採集外周血(200ml)，分散在微管(50ml;Falcon)中的Lymphoprep(15ml;Nycomed)層上。離心(1600rpmIO分鐘)，回收中間層。用磷酸緩衝液將回收的細胞稀釋兩倍或更多，然後離心(1800rpm，IO分鐘)。這樣，製備得到PBMC(外周血單核細胞；2xl08-5x108個細胞)。採用血細胞計數器測定細胞數。取MLR分析中所用細胞的等分試樣(1.08x108/9個微量培養板)並冰上保存。其它細胞用於下述T細胞的分離。PanT分離試劑盒(MiltenyiBiotech)用於從PBMC分離T細胞。依照試劑盒所附手冊，將剩餘的PBMC加入到試劑盒所附的溶液中，保溫所述溶液。隨後，用含5mMEDTA和0.5%BSA的PBS洗滌細胞，然後重懸於PBS中。隨後，將細胞懸浮液上樣至已用PBS溶脹的陽性選擇柱VS+(MiltenyiBiotech),回收未吸附的級分。此外，將PBS上樣至該柱，回收洗液。再同樣處理一次。混合回收的溶液得到T細胞級分。T細胞級分離心後，將細胞重懸在PBS中。使用血細胞計數器測定細胞數。所述細胞用於下列檢測。<8-2〉混合淋巴細胞反應(MLR)如上所述，已知CD28與CD80(B7-1)/CD86(B7-2)之間以及CTLA4與CD80(B7-1)/CD86(B7-2)之間的兩個信號傳遞途徑(已進4亍過詳細分析)是淋巴細胞如T細胞等活化所必需的協同刺激信號傳遞途徑。即，通過兩個已知途徑中的任一個的信號轉導可誘導T細胞應答混合淋巴細胞反應(MLR)而增殖。這樣，通過使用下述底物，本發明的實驗可分析(l)通過阻斷CTLA4-介導的信號傳遞途徑而對MLR的抑制；(2)通過阻斷CD80(B7-l)/CD86(B7-2)-介導的信號傳遞途徑而對MLR的抑制；(3)通過同時阻斷CTLA4-介導的信號傳遞途徑和CD80(B7-l)/CD86(B7-2)-介導的信號傳遞途徑而對MLR的抑制；(4)通過阻斷與AILIM相關的第三信號傳遞途徑而對MLR的抑制；(5)通過同時阻斷CTLA4-介導途徑和AILIM介導途徑而對MLR的抑制。採用下列實驗底物。(1)人抗-人AILIM單克隆抗體(如上述實施例製備)；(2)小鼠抗-人AILIM單克隆抗體SA12(與上述實施例相同)；(3)人抗-KLH單克隆抗體(陰性對照；與上述實施例相同)；(4)小鼠IgG抗體(抗-人CD34;陰性對照；Immunotech);(5)抗-人CDSO單克隆抗體(Pharmingen)和抗-人CD86單克隆抗體(Pharmingen);(6)人CTLA4-IgFc嵌合分子(Ancell)。採用從所述供者製備的PBMC和T細胞對下述組合進行混合淋巴細胞反應(MLR):(i)T細胞(供者A)/PBMC(供者D)(ii)T細胞(供者D)/PBMC(供者B)88(iii)T細胞(供者C)/PBMC(供者A)(iv)T細胞(供者E)/PBMC(供者G)(v)T細胞(供者F)/PBMC(供者E)(vi)T細胞(供者G)/PBMC(供者F)如下調整實驗中所用PBMC和T細胞的濃度。將PBMC懸於PBS中，然後轉移到培養平皿(60mm)。用輻射儀(HitachiMEDICO)對細胞進行X-射線照射。回收細胞，離心然後加入到含10%FCS的PRMI1640培養基中。調整細胞數量為2xio5個/50inl。所得每個供者的T細胞也加入到含10%FCS的PRMI1640培養基中，調整細胞數量為1x105個/50|^1。用人抗-人AILIM單克隆抗體抑制MLR向具有U-形孔的96孔微量培養板的每孔加入含10%FCS的PRMI1640培養基。用含10%FCS的PRMI1640培養基稀釋人抗-人AILIM單克隆抗體溶液或小鼠抗-人AILIM單克隆抗體SA12溶液以製備具有多種抗體濃度的溶液。將稀釋的抗體溶液加入孔中(最終濃度0，0.31,1.25,5和20pg/ml)。隨後，將T細胞加入孔中(50pl)。37。C下C02培養箱(NAPCO)中將板保溫1小時。反應完成後，孔中加入另一供者的PBMC(50ial)以引發MLR。當使用非人抗-人AILIM單克隆抗體的抗體(如上(3H6)所述)作為實驗物質進行MLR時，使PBMC與該實驗物質一起保溫後，再與另一供者的T細月包反應。在培養的第5天，向每孔中加入用含10%FCS的PRMI1640培養基稀釋的氚標記的胸苷pH-胸苷；20nl;lfiCi/孔)。繼續培養1天。培養完成後，用細胞收集器(Packard)收穫細胞。用P-計數器(TOPCOUNT;Packard)測定細胞中摻入的SH放射性來分析培養後T細胞的增殖速度。結果顯示於圖48到59。在CTLA4-介導的信號傳遞途徑已預先阻斷的MLR系統中，用人抗-人AILIM單克隆抗體抑制MLR向具有U-形孔的96孔微量培養板的每孔加入含10%FCS的PRMI1640培養基。用含10%FCS的PRMI1640培養基稀釋人抗-人AILIM單克隆抗體溶液或小鼠抗-人AILIM單克隆抗體SA12溶液以製備具有多種抗體濃度的溶液。將稀釋的抗體溶液加入孔中(最終濃度0，0.31,1.25，5和20ng/ml)。隨後，將T細胞加入孔中(50nl)。37。C下c02培養箱(NAPCO)中將板保溫1小時。除培養T細胞外，另一供者的PBMC(在含10%FCS的PRMI1640培養基中)在添加了人CTLA4-IgFc後單獨培養。37。C下C02培養箱(NAPCO)中培養1小時。在MLR開始時CTLA4-IgFc濃度調整到20|ul/ml。隨後，向上述T細胞培養液中加入PBMC(50jal)以引發MLR。當使用非人抗-人AILIM單克隆抗體的抗體(如上(3)-(5)所述)作為實驗物質進行MLR時，使PBMC(已在CTLA4-IgFc存在下培養)與所述實驗物質一起保溫後，再與另一供者的T細胞反應。在培養的第5天，向每孔中加入用含10%FCS的PRMI1640培養基稀釋的氚標記的胸苷fH-胸苷；20^1;liuCi/孔)。繼續培養1天。培養完成後，用細胞收集器(Packard)收穫細胞。用P-計數器(TOPCOUNT;Packard)測定細胞中摻入的^放射性來分析培養後T細胞的增殖速度。結果顯示於圖60到69。得自上述兩個實驗的實驗結果總結如下(1)CTLA4-IgFc阻斷CTLA-4介導的信號轉導，並因此抑制了異源MLR-誘導的T細胞增殖。(2)抗-CD80抗體和抗-CD86抗體抑制CD80/CD86(CTLA4和CD28的配體)介導的信號轉導，這樣就抑制了異源MLR-誘導的T細胞增殖。(3)抗人AILIM的單克隆抗體，如CTLA4-IgFc,抗-CD80抗體和抗-CD86抗體以抗體濃度依賴性方式顯著抑制異源MLR-誘導的與AILIM-介導的信號轉導有關的t細胞增殖。也就是說，這些結果顯示除已知由CTLA4/CD80/Cd86介導的和CD28/CD80/CD86介導的途徑外，由AILIM及其配體介導的第三途徑作為T細胞活化必需的協同刺激信號傳遞途徑而存在，還顯示AILIM-介導的信號傳遞途徑糹皮抗AILIM抗體抑制。此外，出現了這樣的可能性AILIM-介導的途徑對信號轉導的作用與CTLA4/CD80/Cd86介導的途徑和CD28/CD80/CD86介導的途徑相當。實施例9:人抗-人AILIM單克隆抗體i秀導抗體依賴性細胞介導的細胞毒活性(ADCC)由抗體引起的生物活性包括對抗體依賴性細胞介導的細胞毒活性(ADCC)的誘導。ADCC是除效應細胞和靶細胞外，還需要抗體來誘導由效應細胞，如淋巴細胞，巨噬細胞或多形核白細胞誘發的對靶細胞的破壞的一種細胞毒作用。如下分析了本發明的抗-人AILIM單克隆抗體誘導ADCC的活性51Cr(0.lmCi/106個細胞；Amersham-Pharmacia)力。入到上述實施例中製備的過表達人AILIM的重組HPB-ALL細胞培養中，將混合物37。C下保溫2小時。用RPMI1640培養基洗滌細胞8次。所得同位素標記的細胞用作靶細胞。採用該同位素標記的野生型人HPB-ALL細胞作為對照細胞依照上述同樣的方法進行對照實驗。通過使用LymphoseparI(IBL),從正常健康人體的外周血分離PBMC級分。所得人PBMC用作效應細胞。將靶細胞鋪板在具有U-形孔的96孔微量培養板(Nunc)的每孔上(lx104個細胞/孔；25(al/孔)。隨後，向各孔加入用含5%FBS的RPMI1640培養基(O.OOOl-1.0jag/ml;25jal/孔)，或只用所述培養基(25pl/孔)或用l%NonidetP-40(25pl/孔；具有細胞裂解活性的去汙劑)稀釋的不同濃度的人抗-人AILIM單克隆抗體，然後室溫下將板保溫20分鐘。使用抗-人CD3單克隆抗體0KT3(ATCCCRL-8001)作為陽性對照抗體隨後，各孔加入效應細胞(E/T比=50;1乂105個細胞/孔；50f^l/孔)，37。C下將板在C02培養箱中保溫16小時。培養後，將樣品離心(4。C下1500rpmIO分鐘)。回收所得上清。通過Y-計數器測定離心所得上清中的放射性。所述放射性代表由於ADCC造成的細胞膜損害而使51Cr從細胞中釋放到培養液中的量。假設只採用培養基的情況下觀察到的放射性對應於0%細胞膜損害(O)，採用Nonidet的情況下所測放射性對應於100%細胞膜損害(O),測定由抗-AILIM抗體或抗-CD3抗體誘導的ADCC造成的細胞膜損害的百分比。實驗結果列於圖70和71。實驗結果表明，本發明的人抗-人AIUM單克隆抗體表現出濃度依賴性ADCC誘導活性。實施例10:人抗-人AILIM單克隆抗體的基因和胺基酸序列的測定及其分析如下所述測定了上述實施例中製備的各種人抗-人AILIM單克隆抗體的重鏈以及輕鏈的cDNA序列。還對這些基因的結構特點進行了分析。採用QuickPrepmRNA純化試劑盒(AmershamPharmacia),從如上述實施例製備的產生人抗-人AILIM單克隆抗體的各雜交瘤(克隆AIH5D3(JMab-136),AII289(JMab-138),AIB94(JMab誦139))4是取並純化PolyA+RNA。將雜交瘤細胞懸浮於細胞裂解緩沖液(LysisBuffer)中，通過使用注射器使其裂解而將其溶解。將Oligo(dT)樹脂加入到該已解的物質中，輕微振蕩混合物。隨後，衝洗Oligo(dT)樹脂，然後用ElutionBuffer洗脫PolyA+RNA。洗脫下來的PolyA+RNA用乙醇沉澱，再溶解在Tris-EDTA緩沖液中。在260nm波長測定吸光度確定PolyA+RNA濃度。採用市售cDNA合成試劑盒(GIBCOBRL)依照M-MLV逆轉錄酶方法，以PolyA+RNA作模板，合成的寡DNANotI-T(SEQIDNO:l)作引物合成雙鏈cDNA。具體地，在含有純化自雜交瘤的PolyA+RNA作模板(約5嗎)，引物(400pmol)和M-MLV逆轉錄酶的溶液(約50pl)中，37。C下1小時合成單鏈cDNA。隨後，向反應液(4(il)中加入dNTP,DNA聚合酶I，RNaseH，DNA連接酶，緩沖液和蒸餾水，使混合物16。C下保溫2小時以合成雙鏈cDNA。用酚/氯仿提取所述雙鏈cDNA，然後用乙醇沉澱。隨後，向含有所述雙鏈cDNA的TE緩沖液(50ili1)中加入EcoRI接頭DNA(約300pmole)和DNA連接酶(LigationHigh;33^1;TOYOBO),將混合物16。C下保溫約80分鐘以用接頭DNA連接所述cDNA。所用接頭DNA是由已經常M^方法5，-磷酸化並相互退火的寡DNA(20adp;SEQIDNO:2)和寡DNA(24adp;SEQIDNO:3)組成的雙鏈DNA。用酚/氯仿提取DNA連接體，然後用乙醇沉澱。隨後，用市售限制酶Notl(TOYOBO)消化該DNA反應物，然後與市售ATP溶液(GIBCOBRL)和T4激酶(TOYOBO)37。C一起保溫30分鐘以使其5，末端磷酸化。所得DNA用乙醇沉澱，然後經聚丙烯醯胺凝膠電泳分級分離。切下含約500到2000bp的DNA片段。用UV燈在照相設備中目視觀察用溴乙啶染色的DNA，進行切膠。切下的膠打碎然後懸浮在TE緩沖液中。離心懸浮液，回收所得上清。92在市售DNA連接酶(LigationHigh;TOYOBO)存在下，將回收的DNA與市售入噬菌體載體AJEXcell(0.25ng;AmershamPharmacia)連接(16。C下30分鐘)。然後，採用市售人噬菌體包裝試劑盒GigapackIIIGold(STRATAGENE)將DNA連接體包裝進入X噬菌體，所得噬菌體顆粒感染大腸桿菌NM522宿主以製備cDNA文庫。所有操作依照試劑盒所附實驗方法進行。隨後，如下通過噬菌斑雜交方法篩選cDNA文庫(Maniatis等，"分子克隆實驗室手冊"，冷泉港實驗室，冷泉港，紐約)cDNA文庫(lx104噬菌斑)鋪板在瓊脂平板上，採用Hybond-N尼龍膜(AmershamPharmacia)製備其影印濾膜。按照噬菌斑雜交方法採用Y32P-ATP標記的探針在雜交緩沖液中對這些影印濾膜進行雜交處理。對抗體輕鏈所用的探針是HIGLC(SEQIDNO:4)，對抗體重鏈所用的探針是NHCc2(SEQIDNO:5)。從得自初次篩選和二次篩選的陽性克隆進行單個噬菌斑分離。通過採用單一PCR引物和TaqPCR試劑盒(TAKARA),以每一陽性克隆的噬菌體懸浮液作模板DNA經PCR擴增抗體的每一重鏈和輕鏈。抗體輕鏈所用引物對是ExcellE(SEQIDNO:6)和ckl17(SEQIDNO:7),抗體重鏈所用引物對是Excel正(SEQIDNO:6)和NHCc2(SEQIDNO:5)。依照常見方法採用瓊脂糖凝膠電泳對所得PCR產物分級分離。切下對應於重鏈和輕鏈的含約600bpDNA的膠段。採用DNA測序儀(37SA;PE-AppliedBiosystems),ABIPRISM測序軟體(PE畫AppliedBiosystems)和ABIPRISM自動裝配儀(PE-AppliedBiosystems)分析從膠中純化的DNA的核苷酸序列。證實每一陽性克隆的DNA具有足夠長度的核苷酸序列。用來自每一陽性克隆的噬菌斑的X噬菌體感染大腸桿菌NP66以便體內切割目的質粒DNA，將所得絲狀噬菌體鋪板在含氨千青黴素的平板上以得到菌落。隨後，採用常用方法從菌落回收並純化質粒DNA,用所述質粒轉化大腸桿菌JM109。隨後，將轉化細胞鋪板在含氨千青黴素的營養瓊脂平板上以形成菌落。隨後，將得自每一菌落的細菌在含氨千青黴素的LB培養基中的懸浮液轉移到液體營養培養基，37。C下培養24小時。從培養液中收穫細菌，採用質粒純化試劑盒(Quiagen)純化所述質粒DNA。每一質粒DNA用限制酶EcoRI/NotI消化以證實載體DNA和插入的DNA(重鏈cDNA或輕鏈cDNA)的存在。93採用DNA測序儀(377A;PE-AppliedBiosystems),ABIPRISM測序軟體(PE-AppliedBiosystems)和ABIPRISM自動裝配儀(PE-AppliedBiosystems)，通過常用方法測定已插入每種純化質粒的、編碼抗體重鏈和輕鏈的每種cDNA的核苦酸序列。用於序列測定的引物如下<用於測定重鏈cDNA的引物〉M13R引物(SEQIDNO:8;STRATAGENE)，ExcellE(SEQIDNO:6)，136H(SEQIDNO:9)，138/9H(SEQIDNO:10),AILIMHCL(SEQIDNO:11),HCcl(SEQIDNO:12)，HCc2(SEQIDNO:5),HCc7(SEQIDNO:13)，HCc8(SEQIDNO:14)，HCc3(SEQIDNO:15)，HCc4(SEQIDNO:16)，HCc6(SEQIDNO:17),HIGHC(SEQIDNO:18)，HCc9(SEQIDNO:19)，HCc5(SEQIDNO:20)和polyA(SEQIDNO:2).M13R引物(SEQIDNO:8;STRATAGENE)，ExcellE(SEQIDNO:6)，AILIMLCl(SEQIDNO:22),AILIMLC2(SEQIDNO:23),LCcl(SEQIDNO:24),ckll7(SEQIDNO:7),HIGHC(SEQIDNO:4),LCc2(SEQIDNO:25),HIK(SEQIDNO:26)和polyA(SEQIDNO:21).下列所列序列包括編碼抗人AILIM的人單克隆抗體(由上述每一雜交瘤產生)重鏈和輕鏈的cDNA序列，以及由cDNA序列導出的胺基酸序列。克隆AIH5D3(JMab-136)DNA序列SEQIDNO:27(信號序列核苷酸編號69到125,V區核苷酸編號126到419)胺基酸序列SEQIDNO:28(包含信號序列胺基酸編號1到19，可變區胺基酸編號20到118)DNA序列SEQIDNO:29(信號序列核苷酸編號39到104，V區核苷酸編號105到386)胺基酸序列SEQIDNO:30(包含信號序列胺基酸編號1到22，可變區胺基酸編號23到116)克隆AII289(JMab-138)DNA序列SEQIDNO:31(信號序列核苷酸編號94到150，V區核苦酸編號151到441)胺基酸序列SEQIDNO:32(包含信號序列胺基酸編號1到19，可變區胺基酸編號20到116)DNA序列SEQIDNO:33(信號序列核苷酸編號28到87，V區核苷酸編號88到375)胺基酸序列SEQIDNO:34(包含信號序列胺基酸編號1到20，可變區胺基酸編號21到116)克隆AIB94(JMab-139)DNA序列SEQIDNO:35(信號序列核苷酸編號96到152，V區核普酸編號153到443)胺基酸序列SEQIDNO:36(包含信號序列胺基酸編號1到19，可變區胺基酸編號20到116)<輕鏈〉DNA序列SEQIDNO:37(信號序列核苷酸編號33到92，V區核苷酸編號93到380)胺基酸序列SEQIDNO:38(包含信號序列胺基酸編號1到20,可變區胺基酸編號21到116)用基因序列分析軟體在由Tomlinson等(Immunol.Today,Vol.l6，No.5,p.237-242,1995)構建的人免疫球蛋白可變區基因的VBASE序列庫中檢索在此測定的每一DNA序列。結果表明上述人單克隆抗體的重鏈和輕鏈的V-區基因分別由下列片段構成。95克隆AIH5D3(JMab-136):L5克隆AII289(JMab-138):A27克隆AII394(JMab-139):A27實施例U:人抗-人AILIM單克隆抗體對遲髮型超敏反應(DTH)的抑制作用免疫應答系統的功能是消除對生命體有害的抗原(致病性微生物如病毒，細菌，寄生蟲，異物等)，它可以廣義地分為先天性免疫和獲得性免疫。前者是基於非特異性識別的排除作用系統，包括吞噬細胞(多形核白細胞，單核細胞，巨噬細胞等)的吞噬作用，自然殺傷細胞(NK)的攻擊，和補體的抗原調理作用等。後者，獲得性免疫應答，是獲得了抗原特異性(活化)的淋巴細胞(主要是T細胞和B細胞)實施的排除作用系統。此外，獲得性免疫應答可廣義地分為細胞免疫和體液免疫。與依賴於抗體的體液免疫不同，細胞免疫通常是以T細胞對作為標靶的抗原的直接作用為表現的免疫應答。已知細胞免疫涉及對病毒或腫瘤的免疫應答，組織或器官移植後誘發的免疫應答，對某些藥物的超敏反應，和某些自身免疫疾病。細胞免疫最典型的現象是公知的結核桿菌素過敏(基本上與結核桿菌素超敏反應同義)。結核桿菌素過敏是結核桿菌感染引發的遲髮型過敏。該過敏源於結核桿菌感染並且可通過對活體皮內注射結核桿菌培養上清中的結核桿菌素蛋白引起免疫應答而誘發。遲髮型過敏是抗原致敏的T細胞(能記憶抗原的記憶T細胞)介導的過敏性。這種過敏稱為"遲髮型"是因為被抗原致敏的活體再次與所述抗原接觸時，需要24到48小時才表達出對記憶T細胞誘導的炎症的過敏性應答。結核桿菌素過敏現象是一種有代表性的遲髮型過敏，通常被用於"結核桿菌素試驗"中以診斷在動物體內是否已經建立了對結核桿菌感染的過敏性。具體地，如下進行該試驗對動物皮內注射純化的結核桿菌素(純蛋白衍生物；PPD;普通診斷使用O.lml的濃度為0.05嗎/0.1ml(2.5TU)的所述衍生物)，它是純化自結核桿菌培養物的結核桿菌素蛋白；注射的48小時後測定注射點皮膚紅斑的主軸；根據所測主軸長可診斷結核桿菌感染的存在。如果紅斑的主軸短於4mm,則受試體是陰性的；如果該主軸在4-9mm的範圍內，則受試者為假陽性；如果主軸為10mm或更長則受試體是陽性的。與細胞免疫相關的遲髮型過敏包括，例如，少量蛋白或類似物瞬時誘發的Jones-Mote型超敏反應，對某些藥物如苦基氯或植物毒素如日本漆的接觸過敏，或與移植排斥(如異源移植)相關的過敏，以及上述對感染性病原體的抗原的過敏，如由上述結核桿菌引起的結核桿菌素過敏。此試驗中，利用上述結核桿菌素試驗評價抗-AILIM抗體對遲髮型超敏反應(遲髮型過敏)的抑制作用。所述試驗如下進行將已用BCG(卡介苗)(一種減毒的牛型結核桿菌活菌)致敏的每一隻恆河猴(cynomolgusmonkeys)(雄性,體重6,0-8.5kg,EnvironmentalBiologicalLifeScienceResearchCenterInc.;每組3隻)用鹽酸氯胺酮麻醉(10mg/kg，肌肉內注射)，在其胸部的每一注射點(每隻6個注射點)皮內注射0.1ml下列的任一試驗樣品。樣品注射點間距離是3cm或更長。(1)人抗-人AILIM單克隆抗體(JMab-i:36;02mg;每個注射點lOpg)和結核桿菌素(4)ag/lml生理鹽水)的1:1混合溶液；(2)人抗-人AILIM單克隆抗體(JMab-l^;2mg;每個注射點100|ug)和結核桿菌素(4嗎/lml生理鹽水)的1:1混合溶液；(3)磷酸鹽緩衝液(PBS(-))作對照；(4)市售甾類消炎劑，強的松龍(0.2mg;每個注射點10昭)和結核桿菌素(4嗎/lml生理鹽水)的1:1混合溶液作為陽性對照；(5)人抗-KLH單克隆抗體(實施例<2-2〉；0.2mg;每個注射點10pg)和結核桿菌素(4嗎/lml生理鹽水)的1:1混合溶液作為陰性對照；每個樣品注射24小時後，測量每個注射點紅斑的長軸和短軸，確定紅斑面積。所得結果示於圖72。所得結果表明與對照組和陰性對照組相比，遲髮型過敏引起的紅斑在接受了抗-AILIM抗體注射的組別中受到了顯著抑制。此抑制作用與作為陽性對照的甾類消炎藥的作用相當。實施例12:分析在移才直物抗宿主疾病(GVHD〗病人的各種組織中AILIM的表達採用常規方法分析病人活組織檢查所得多種組織中AILIM的表達，所述病人是移植了來自供者的異源移植物的受者，並在移植後經臨床診斷患有急性或慢性移植物抗宿主疾病(GVHD)。用HE和如上述實施例中製備的人抗-人AILIM單克隆抗體(JMab-36)將組織染色。使用採自急性GVHD病人(28例)各種組織的33個樣品以及慢性GVHD病人(5例)的5個樣品進行分析。結果如下AILIM-陽性反應可見於29個皮膚樣品中的15個；3個胃組織樣品中的1個；1個結腸組織樣品中的1個，上述所有樣品全部得自急性GVHD病人。AIUM-陽性反應可見於3個皮膚樣品中的1個；2個結腸組織樣品中的2個；這些樣品全部得自慢性GVHD病人。此外，在13個觀察到顯著淋巴細胞浸潤的樣品中有10個發現AILIM-陽性反應。實施例13:人抗-人AILIM單克隆抗體將協同刺激信號轉導至猴T細胞中的活性實施例7中進行的試驗表明本發明的人抗-人AILIM單克隆抗體通過控制人T細胞應答，具體是控制AILIM介導的協同刺激信號向細胞內的轉導而促進人T細胞增殖。在此試驗中，如實施例7相同的方式分析了人單克隆抗體是否表現出促進猴T細胞增殖的活性。<13-1〉抗體的稀釋用磷酸緩衝液(PBS)稀釋抗-人CD3單克隆抗體SP34(BD-Pharmingen)，使最終濃度為l嗎/ml。用PBS稀釋如上製備的人抗-人AILIM單克隆抗體JMAbl36至終濃度40pg/ml。再進一步用PBS稀釋抗體溶液以製備多種濃度的抗體(40fig/ml-0.064嗎/ml)。用抗體包被微量培養板96孔微量培養板的每一孔用抗人CD3單克隆抗體SP34(l|ug/ml;每孔25|^1)和人抗-人AILIM單克隆抗體JMAbl36(40|ag/ml-0.064fig/ml;每孔25lal)包被。將板37。C下保溫2小時。隨後，棄去抗體溶液，每孔用PBS洗3遍。洗後，向每孔加入含10%FCS的RPMI1640培養基(100iul/孔)，將板37。C下保溫1小時。從而用上述抗體包被了^反的各孔。以相同的方法進行對照試驗，板上包被的對照抗體是人抗-KLH單克隆抗體(JMAb23;參見前面的實施例)，而非人抗-人AILIM單克隆抗體。在下面的試驗中使用用所述抗體包被的微量培養板。98<13-3〉猴T細胞懸浮液的製備從恆河猴採集外周血，採用NycoPrepl.077A(Nycomed)通過密度梯度離心分離單核細胞。依照實驗手冊，使用抗-人CD4抗體M-T477(BD-Pharmingen)，抗-人CD8抗體RPA-T8(BD-Pharmingen)，抗-小鼠IgG微珠(Miltenyi)和磁性分揀儀從恆河猴單核細胞分離猴T細胞。採用血球計數器測定T細胞數。將猴T細胞懸在含10%FCS的RPMI1640培養基中。這樣就製備得到了猴T細胞懸浮液(lx106個細胞/ml)。細胞培養(l)用抗-人CD3抗體和抗-人AILIM抗體包被的微量培養板進行培養將猿猴(Simian)T細胞懸浮液加入到用上述抗體包被的微量培養板的每孔，將板置於C02培養箱中37。C下保溫2天。培養完成後，各板進行下列試驗T細胞增殖活性的測定向保溫後的每孔加入甲基[3H]胸香(0.5i^Ci/孔，AmershamPharmacia),將板置於C02培養箱中37。C下保溫6小時。保溫後，用細胞收集器將細胞捕獲在GF/C濾膜(Packard)上。隨後，將濾膜40°C下乾燥3小時或更長時間，然後向其中加入Microscinti0(20)nl/孔；Packard)。用(3-計數器(TOPCOUNT)測定濾膜上捕獲的細胞中所摻入的311放射性來分析培養後T細胞增殖的程度。結果顯示於圖73。本試驗結果表明當用抗-人AILIM單克隆抗體(人單克隆抗體或小鼠單克隆抗體)與抗-人CD3抗體一起包被微量培養板時，隨著所述細胞濃度的增加猿猴T細胞顯著增殖。該結果也"^是示，本發明的人抗-人AILIM單克隆抗體可與猴AILIM結合，且具有調節猴AILIM功能的活性。實施例14:建立用於鑑定和定量能與AILIM或AILIM配體結合的物質的方法建立一種ELISA(酶聯免疫溶劑檢測)方法以鑑定或定量能與AILIM(ICOS)或AILIM配體(B7h/B7RPl/GL50/LICOS)結合的物質。下文詳述的方法的原理是基於通過ELISA估計的所述物質對可溶性AIUM(hAILIM-IgFc)和可溶性人AILIM配體(hB7h-IgFc)間結合的抑制程度。樣品使用下列樣，(1)鏈黴抗生素-HRP(SouthernBiotechnologyAssociates,Inc.);(2)可溶性人AILIM配體(人B7h的胞外區與人IgGl的恆定區之間的融合蛋白)；所述蛋白由下述的方法製備；(3)生物素標記的可溶性AILIM-IgFc;依照本發明人之一的Tezuka的較早文獻(JP-A11-29599(實施例16(2))和WO98/38216(實施例16(2)))所述同樣的方法所得抗原可通過進一步純化而製備AILIM-IgFc;(4)人抗-人AILIM單克隆抗體(JMab-136;如上所述)；(5)人抗-KLH單克隆抗體(陰性對照抗體；JMab-23;如上所述)；(6)磷酸鹽緩衝液(PBS(-);NikkenSeibutsu);(7)RPMI1640培養基(NikkenSeibutsu);(8)胎牛血清(FCS;JRH-Bioscience);(9)30。/。牛血清白蛋白(BSA;Sigma);(10)吐溫20(BioRad);(11)TMB+底物色素原(Dako)。可溶性人AILIM配體(人B7h的胞外區與人IgGl的恆定區的融合蛋白(hB7h-IgFc))的製備RNA。以所得總RNA(5昭)為模板並使用PreamplificationSystem用於第一鏈cDNA的合成(GIBCO-BRL)的Superscript預擴增系統合成cDNA。然後，設計併合成5，引物(5'-GAGGTCTCCGCCCTCGAGATGCGGCTGGGCAGTCC-3，，SEQIDNO:39)，其末端具有Xhol限制性位點，3，引物(5'-CACAGGACAGCCAGGGGATCCCACGTGGCCGCG畫3，，SEQIDNO'.40)，其末端具有BamHI限制性位點，通過PCR擴增編碼人AILIM配體(hB7h)胞外區的cDNA。使用所述cDNA為模板並用所述引物經PCR製備DNA,所述DNA包含編碼人B7h胞外區的cDNA且在其不同末端具有Xhol和BamHI位點。所得PCR產物用Xhol和BamHI消化，通過瓊脂糖100凝膠電泳分級以分離得到預計編碼目的胞外區的相當於約720bpcDNA片段的區帶。將分離的cDNA片段亞克隆進入預先用Xhol和BamHI消化的質粒pBluescriptIISK(+)(Stratagene)。採用自動焚光DNA測序儀(AppliedBiosystems)通過序列分析證實所述cDNA片段包含編碼人B7h胞外區的部分。另一方面，通過用Xbal和BamHI消化質粒(參見，細胞，Vol.61，p.1303-1313,1990;Dr.Seed等製備，馬塞諸塞州總醫院)來製備BamHI-XbaIDNA片段形式(約1.3kb)的編碼作為融合配對物的人IgGl的Fc的DNA。所述片段包含編碼人IgGl，Cy12和Cy13的鉸鏈區的外顯子。將如上製備的編碼人B7h(hB7h)胞外區的XhoI-BamHI片段和包含編碼人IgGl的Fc(縮寫為"IgFc，，)的外顯子的BamHI-XbaI片段亞克隆進入預先用Xhol和Xbal消化的質鬥立pBluescriptIISK(+)(Stratagene)。隨後，用Xhol和Xbal消化所述質粒以製備約1.8kb的DNA片段，其包含人B7h與人IgFc胞外區的融合DNA。通過使用T4DNA連接酶，將此融合DNA片段插入到表達載體pME18S(MedicalImmunology,Vol.20，No.1,p.27-32,1990，和"基因工程手冊，'，ExperimentalMedicine,supplement,Yodosha,pp.101-107,1992)的Xhol和Xbal位點之間，以構建質粒phB7h-IgFc。在含10%胎牛血清和氨千青黴素的DMEM培養基中培養單層COS7細胞(ATCCCRL-1651)至亞鋪滿，用質粒phB7h-IgFc通過電穿孔轉化所述細胞以產生轉化細胞。將轉化細胞在無血清ASF104培養基中培養72小時以表達hB7h-IgFc。採用蛋白GSepharose親和柱(AmershamPharmacia)如下糹屯化HB7h-IgFc:將上述培養上清離心得到上清。將所得上清上樣到已用結合緩衝液預平衡的蛋白GSepharose親和柱。隨後，用結合緩衝液洗柱，用洗脫緩衝液進行洗脫。回收洗脫液，然後對磷酸鹽緩衝液透析。將外部透析緩衝液更換2或更多次。這樣就得到了純化的hB7h-IgFc。<14-3〉抗體和可溶性人AILIM(hAILIM-IgFc)的稀釋及其反應抗-人AILIM單克隆抗體(JMab-136)和作為陰性對照抗體的人抗-KLH單克隆抗體(JMab-23)原液系列稀釋為11個水平，將每一樣品(200inl)與200|al101含10%FCS的RPMI1640培養基充分混合。如此製備好各種濃度的抗體溶液。向所製備的各種濃度的溶液中加入生物素標記的hAILIM-IgFc(2pl/管；終濃度l嗎/ml)。將所得溶液充分混合併在室溫下保溫30分鐘。〈14-4〉抗-AILIM單克隆抗體抑制hAILIM-IgFc與hB7h-IgFc結合的活性的檢測向96孔微量培養板的每孔加入hB7h-IgFc(50)tU/孔(800ng/孔))。將板密封並在37。C下保溫1小時。從每孔移去溶液，用PBS(120lul)清洗每孔3次。隨後，將含0.5%BSA的PBS(100ial/孔)加入到每孔中以封閉未反應的點。將板密封並在37。C下保溫1小時。保溫後，除去溶液，用PBS(120nl)清洗每孔3次。隨後將〈14-3〉中製備的每一樣品加入孔中(50jul/孔)。將板密封並在37。C下保溫1小時。棄去溶液，用37。C下預熱的含10%FCS的RPMI1640培養基(120]Lil)清洗每孔3次。隨後，向每孔加入含3.7%福馬林的PBS(100pl/孔)，將板冰上保溫5分鐘。將每孔的溶液棄去，用0.1%吐溫20洗孔3次(120W)。隨後，向每孔加入鏈黴抗生物素-HRP(50(W孔)。將板密封並在室溫下保溫30分鐘。將每孔的溶液棄去，用含0.1%吐溫20的PBS洗孔3次(120iul)。隨後，向每孔加入TMB+底物色素原(50^il/孔)。將板室溫下保溫20分鐘。隨後，向每孔加入2N硫酸(50pl/孔)以終止反應。採用THERMOmax(MolecularDevices)在450nm波長測定每孔的吸光度。結果示於圖74到76。結果顯示抗-AILIM單克隆抗體具有以劑量依賴方式抑制hAILIM-IgFc與hB7h-IgFc結合的活性。相應地，本實施例指出一種由本發明方法闡明的檢測系統可用於篩選和鑑定能與AILIM或AILIM配體結合的物質(例如，抗體或合成的〗氐分子量化合物)。實施例15:人抗-人AILIM單克隆抗體對與AILIM-AILIM配體介導的協同刺激信號轉導相關的人T細胞增殖進行抑制的活性通過測定人抗-人AILIM單克隆抗體對人T細胞與AILIM配體(B7h/B7RPl/GL50/LICOS)相接觸而誘發的細胞增殖的抑制效應，分析本發明的抗-人AILIM單克隆抗體是否具有調節人T細胞表面AILIM所介導的信號轉導的活性。抗體的稀釋用磷酸鹽緩衝液(PBS)稀釋抗-人CD3單克隆抗體OKT3(ATCCCRL-8001)到終濃度為8|ug/ml。用PBS稀釋如上製備的可溶性人AILIM配體(hB7h-lgFc)到終濃度為40)ag/ml。抗體溶液用PBS進一步稀釋以得到多種濃度的抗體(40(ig/ml-0.064嗎/ml)。用抗體包被微量培養板用(1)抗-人CD3單克隆抗體OKT3(8jag/ml;每孔25pl)和hB7h-lgFc(40|Lig/ml-0.064(ag/ml;每孔25pl)包被96孔微量培養板的每一孔。將板37°C下保溫2小時。隨後棄去抗體溶液，每孔用PBS洗3次。清洗後，向每孔加入含10%FCS的RPMI1640培養基(100jil/孔)，將板37。C下保溫1小時。使板的各孔都被包被。<15-3〉人T細胞懸浮液的製備從正常健康人體採集外周血，採用LymphoPrep(Nycomed)通過密度梯度離心對單核細胞分級。使用pan-T細胞分離試劑盒(Miltenyi)和磁性分揀儀，按說明書從人單核細胞分離人T細胞。採用血球計數器測定T細胞數。將人T細胞懸浮在添加了人抗-人AILIM單克隆抗體Jmabl36(20嗎/ml)的含10%FCS的RPMI1640培養基中。將製備好的人T細胞懸浮液(lx106個細胞/ml)室溫下保溫30分鐘。用人抗-人AILIM單克隆抗體JMAb23(20(ig/ml)作為陰性對照抗體。細胞培養依照上述同樣的方式，向已用抗-人CD3抗體和hB7h-IgFc包被的微量培養板的每孔加入人T細胞懸浮液(100pl/孔；lxlS個細胞/孔)，將板置於032培養箱中37。C下保溫3天。<15-5〉T細胞增殖活性的測定保溫後，向各板的每孔加入甲基[3H]胸苷(0.5|iCi/孑L;Amersham-Pharmacia)，將各板在0)2培養箱中於37°C下保溫6小時。然後，用細胞收集器將細胞捕獲在GF/C濾膜(Packard)上。隨後，將濾膜40。C下乾燥3小時或更長時間，然後向其中加入Microscinti0(20|^1/孔；Packard)。用P-計數器(TOPCOUNT)測定濾膜上捕獲的細胞中摻入的"H放射性來分析培養後T細胞增殖的程度。結果顯示於圖77。1此分析結果顯示人T細胞生長顯著依賴於人B7h-IgFc濃度(在使用陰性對照抗體的檢測中)。此外，人抗-人AILIM單克隆抗體顯著抑制人T細胞的殖。實施例16:人抗-人AILIM單克隆抗體對與AILIM-AILIM配體介導的協同刺激信號轉導相關的猴T細胞增殖的抑制活性以猴T細胞取代人T細胞如上實施例15所述進行同樣的實驗。抗體的稀釋及其它用磷酸鹽緩沖液(PBS)稀釋抗-人CD3單克隆抗體SP34(BD-Pharmacia)到終濃度為lpg/ml。用PBS稀釋如上製備的人B7h-IgFc到終濃度為40嗎/ml。用PBS進一步稀釋抗體溶液以得到多種濃度的抗體(40嗎/ml-0.064嗎/ml)。用抗體包被微量培養板用(l)抗-人CD3單克隆抗體SP34(BD-Pharimingen)(l嗎/ml;每孔25|ul)和人B7h-lgFc(40|ig/ml-0.064ng/ml;每孔25(^1)包被96孔微量培養板的每一孔。將板37。C下保溫2小時。隨後棄去抗體溶液，每孔用PBS洗3次。清洗後，向每孔加入含10%FCS的RPMI1640培養基(100pl/孔)，將板37。C下保溫l小時。使板的各孔都被包被。<16-3〉猴T細胞懸浮液的製備從恆河猴採集外周血。採用NycoPrepl.077A(Nycomed)通過密度梯度離心製備含單核細胞的級分。使用抗-人CD4抗體M-T477(BD-Pharimingen),抗-人CD8抗體RPA-T8(BD-Pharimingen)，抗-小鼠IgG微珠(Miltenyi)和磁性分揀儀，按說明書從恆河猴單核細胞分離猴T細胞。採用血球計數器測定T細胞數。將猴T細胞懸浮在含人抗-人AILIM單克隆抗體JMabl36(20嗎/ml)和10%FCS的RPMI1640培養基中以製備猴T細胞懸浮液(lx106個細胞/ml)。將所述懸浮液室溫下保溫30分鐘。將人抗-KLH單克隆抗體JMab23(20pg/ml)用作陰性對照抗體。細胞培養依照上述同樣的方式，向已用抗-人CD3抗體和hB7h-IgFc包被的微量培養板的每孔加入猴T細胞懸浮液(100pl/孔；lxlS個細胞/孔)，將板置於C02培養箱中37。C下保溫3天。T細胞增殖活性的測定104培養後，向各板的每孔加入曱基[3H]胸苷(0.5|LiCi/孔；Amersham-Pharmacia)，將各板在C02培養箱中於37°C下保溫6小時。然後，用細胞收集器將細胞捕獲在GF/C濾膜(Packard)上。隨後，將濾膜40°C下乾燥3小時或更長時間，然後向其中加入Microscinti0(20)ul/孔；Packard)。用(3-計數器(TOPCOUNT)測定濾膜上捕獲的細胞中摻入的^放射性來分析培養後T細胞增殖的程度。結果顯示於圖78。此分析結果顯示猴T細胞生長顯著依賴於人B7h-IgFc濃度(在使用陰性對照抗體的檢測中)。此外，抗-人AILIM單克隆抗體顯著抑制猴T細胞增殖。工業應用本發明的能與人AILIM結合的單克隆抗體是人源的，因此這些抗體不會由於對人的抗原性，即宿主中的HAMA(人抗小鼠抗原性)，誘發嚴重的免疫排斥反應，所述HAMA在包含非-人哺乳動物來源的抗體，如小鼠源抗體的抗體治療製劑中已經是一個嚴重的治療性問題(副作用)。因此本發明的抗體就具有作為抗體藥物的巨大價值。所以本發明抗AILIM(具體地是人AILIM)的人單克隆抗體和含有所述人單克隆抗體的藥物製劑根本不會誘發HAMA引起的宿主免疫排斥反應；所以能作為治療劑用於控制與AILIM介導的共信號(第二信號)轉導到AILIM表達細胞有關的多種生物反應(如，AILIM表達細胞的增殖，由AILIM表達細胞產生的細胞因子，引起AILIM表達細胞的免疫性細胞溶解或細胞死亡(凋亡)，誘導對AILIM表達細胞的抗體依賴性損害)；和/或用於治療或預防與AILIM介導的信號轉導有關的多種疾病，控制和抑制這些疾病的發作和/或發展。具體地，通過提供包含本發明的人抗-人AILIM單克隆抗體或其一部分作為活性成分的藥物製劑，可能能抑制或治療和預防多種疾病(如，類風溼性關節炎，多發性硬化，自身免疫性甲狀腺炎，過敏性接觸型皮炎，慢性炎性疾病扁平莒癬，系統性紅斑狼瘡，胰島素依賴型糖尿病，牛皮癬等)，這些疾病可分類為自身免疫病或過敏性疾病(具體地，由於細胞免疫引起的自身免疫病和遲髮型過敏)；關節病(例如類風溼性關節炎(RA)，骨關節炎(OA)),炎症(如肝炎)；移植物抗宿主反應(GVH反應)；移植物抗宿主疾病(GVHD);與組織(如皮膚，角膜和骨)或器官(肝，心，肺，腎，胰臟等)移植(同種移植或異種移植)有關的免疫排斥反應；對外來抗原或自身抗原的免疫應答(例如抗所述抗原的抗體的生產，細胞增殖，細胞因子的生產等)；可能由腸免疫異常(具體地，炎性腸疾病(特別是Crohn's病和潰瘍性結腸炎)引起的疾病；食物過敏反應等。本發明的藥物組合物使得有可能治療或預防某些採用甾族藥物作消炎藥的炎症，例如，與各種關節炎性皮滲相關的炎症(類風溼性關節炎，骨關節炎等)，肺炎，肝炎(包括病毒性肝炎)，與傳染性疾病相關的炎症，炎性腸疾病，腸炎，腎炎(腎小球腎炎，與腎纖維化相關的炎症，胃炎，脈管炎，胰腺炎，腹膜炎，支氣管炎，心肌炎，腦炎，與局部缺血-再灌注液損傷相關的炎症(心肌缺血-再灌注損傷等)，與組織或器官移植後的免疫排斥反應有關的炎症，燙傷，各種皮膚炎症(牛皮癬，過敏性接觸型皮炎，慢性炎性皮膚病扁平苔癬)，與多器官衰竭有關的炎症，PTCA或PTCR手術後炎症，與動脈粥樣硬化症有關的炎症，自身免疫曱狀腺炎等。此外，在上迷抑制和治療與組織或器官移植相關的免疫排斥反應方面，本發明的藥物組合物可與已知用於抑制移植治療中的免疫排斥反應的免疫抑制劑聯合使用，從而可提高已知藥物對移植排斥的抑制效應。而且，通過使用本發明的用於鑑定能與AILIM或AILIM配體結合的物質的方法，有可能通過與AILIM或AILIM配體的結合來控制與AILIM和AILIM配體間作用有關的信號轉導，這樣就可以篩選和選擇具有治療上述各種疾病的潛在活性的藥物製劑(合成的化學化合物和抗體)。序列表說明文字SEQIDNO:1其它信息人工序列的描述人工合成的引物序列，Notl-T。SEQIDNO:2其它信息人工序列的描述人工合成的接頭序列，20adp。SEQIDNO:3其它信息人工序列的描述人工合成的接頭序列，24adp。SEQIDNO:4其它信息人工序列的描述人工合成的引物序列，HIGLCSEQIDNO:5其它信息人工序列的描述SEQIDNO:6其它信息人工序列的描述SEQIDNO:7其它信息人工序列的描述SEQIDNO:8其它信息人工序列的描述:SEQIDNO:9其它信息人工序列的描述:SEQIDNO:10其它信息人工序列的描述:SEQIDNO:11其它信息人工序列的描述:SEQIDNO:12其它信息人工序列的描述:SEQIDNO:13其它信息人工序列的描述SEQIDNO:14其它信息人工序列的描述:SEQIDNO:15其它信息人工序列的描述SEQIDNO:16其它信息人工序列的描述SEQIDNO:17其它信息人工序列的描述SEQIDNO:18其它信息人工序列的描述SEQIDNO:19其它信息人工序列的描述SEQIDNO:20人工合成的引物序列，NHCc2。人工合成的引物序列，ExcellE。人工合成的引物序列，ckl17。人工合成的引物序列，M13R。人工合成的引物序列，136H。人工合成的引物序列，138/9H。人工合成的？i物序列，AILIMHC1。人工合成的引物序列，HCcl。人工合成的引物序列，HCc7。人工合成的引物序列，HCc8。人工合成的引物序列，HCc3。人工合成的引物序列，HCc4。人工合成的引物序列，HCc6。人工合成的引物序列，HIGHC。人工合成的引物序列，HCc9。107其它信息人工序列的描述:SEQIDNO:21其它信息人工序列的描述:SEQIDNO:22其它信息人工序列的描述:SEQIDNO:23其它信息人工序列的描述:SEQIDNO:24其它信息人工序列的描述:SEQIDNO:25其它信息人工序列的描述:SEQIDNO:26其它信息人工序列的描述:SEQIDNO:39其它信息人工序列的描述:SEQIDNO:40其它信息人工序列的描述:人工合成的引物序列，HCc5。人工合成的引物序列，polyA。人工合成的引物序列，AILIMLC1。人工合成的引物序列，AILIMLC2。人工合成的引物序列，LCcl。人工合成的引物序列，LCc2。人工合成的引物序列，HIK。人工合成的引物序列人工合成的引物序列108序列表<110〉日本菸草產業株式會社(JapanTobacco,Inc.)〈120〉抗協同刺激信號轉導分子AILIM的人單克隆抗體及其藥物用途<130〉J1-A0101Y1P<140〉<141〉<150〉JPP2000-1471162000-05-18JPP2001-995082001-03-3040〈170〉Patentln2.1版<210〉1<211〉45〈212〉DNA〈213〉人工序列〈220〉〈223〉人工序列的描述人工合成的引物序列Not1-T<220〉primer—bind(1)..敏〈400〉1aactggaagcttcagcggccgcagagatttttttttttttttttt45〈210〉2〈211〉20〈212〉DNA人工序列<223〉人工序列的描述人工合成的接頭序列，20adp<400〉2cgtggtgtcatggcactgcg20324DNA人工序列<220〉〈223〉人工序列的描述人工合成的接頭序列，24adp〈400〉3aattcgcagtgccatgacaccacg24<210〉423DNA〈213〉人工序列<220〉人工序列的描述人工合成的引物序列HIGLC〈220〉5〈211〉21<212〉DNA〈213〉人工序列〈220〉人工序列的描述人工合成的引物序列NHCc2<220〉<221〉primer—bind<222〉(1).加〈400〉5caccggttcggggaagtagtc〈210〉6〈211〉21〈212〉DNA〈213〉人工序列<220〉人工序列的描述人工合成的引物序列ExcellE6ggtgacactatagaatacagg21725〈212〉DNA〈213〉人工序列<220〉人工序列的描述人工合成的引物序列ck117〈221>primer—bind〈222〉(1)..(55)〈400〉7gcaggcacacaacagaggcagttcc<210〉8〈211〉20DNA人工序列primer—bind(l)..加o12222222<w\Z〈220〉人工序列的描述人工合成的引物序列M13R<221〉primer_bind(1)..咖8cacaggaaacagctatgacc〈210〉9<211〉21<212〉DNA人工序列人工序列的描述人工合成的引物序列136H〈220〉<221〉primer—bind(1)..加<400〉9cctggacaagggcttgagtgg21〈212〉薩〈213〉人工序列<223〉人工序列的描述人工合成的引物序列138/9H〈220〉primer—bind<222〉(1)..加10acaggaaaaggtctggagtgg〈210〉11<211〉21DNA<213〉人工序列〈220〉人工序列的描述人工合成的引物序列AILIMHC1primer—bind〈222〉(1).加〈400〉11acagtaatacacggccgtgtc1221〈212〉腿〈213〉人工序列111人工序列的描述人工合成的引物序列HCclprimer_bind(1)..加〈■>12gactacttccccgaaccggtg21<210〉13〈211〉22DNA<213〉人工序列〈220〉人工序列的描述人工合成的引物序列HCc7〈220〉primer—bind(1).(幼<400〉13gtggcaggaccgtcagtcttcc2214DNA<213〉人工序列〈220〉人工序列的描述人工合成的引物序列HCc8<220〉〈221〉primer—bind(1).(54)〈400〉14aagaggaagactgacggtcctgcc2423腿人工序列〈220〉〈223〉人工序列的描述人工合成的引物序列HCc3〈221〉primer—bind(1)..(53)〈400〉15ccgttgtgcaccaggactggctg2316〈211>23〈212〉DNA〈213>人工序列〈220>人工序列的描述人工合成的引物序列HCc4112〈221〉<222〉primer—bind(l)..咖16tgcacttgtactccttgccgttc1723<212〉DNA<213〉人工序列〈220〉人工序列的描述人工合成的引物序列HCc6〈221〉primer—bind<222〉(1)..(2—3)17cagccggagaacaactacaagac23<210〉18<211〉22DNA<213〉人工序列<223〉人工序列的描述人工合成的引物序列HIGHC<220〉<221〉primer—bind〈222〉(1)..(幼〈210〉1922〈212〉DNA人工序列〈220〉〈223〉人工序列的描述人工合成的引物序列HCc9primer—bind〈222〉(1)..(幼〈400〉19tacttcccaggcacccagcatg22〈210〉20〈211〉23DNA〈213〉人工序列〈220>人工序列的描述人工合成的引物序列HCc5<400〉18tcttgtagttgttctccggc〈221〉primer—bind〈222〉(1)..(53)<400〉20atgctgggtgcctgggaagtatg23<210〉2121DNA〈213>人工序列〈220〉人工序列的描述人工合成的引物序列polyA〈220>〈221〉primer—bind〈222〉(1).加〈400〉21tcaaactatcggccttgctgg21〈210〉2221腿人工序列<220〉〈223〉人工序列的描述人工合成的引物序列AILIMLC1〈221>primer—bind〈222〉(1)..加22tagcctggtatcagcagaaac21〈210〉23〈211〉21〈212〉DNA〈213>人工序列〈220〉〈223>人工序列的描述人工合成的引物序列AILIMLC2<220〉〈221〉primer—bind(1)..加<400〉23gtttctgctgataccaggcta21<210〉24〈211〉22<212〉DNA〈213〉人工序列〈220〉人工序列的描述人工合成的引物序列LCcl〈220〉〈221〉primer—bind〈222〉(1)..(52)〈400〉24gcaccatctgtcttcatcttcc22〈210〉25〈211〉21〈212〉DNA<213〉人丁序列<220〉人工序列的描述人工合成的引物序列LCc2〈221〉primer—bind(1).加〈400〉25caaagagcttcaacaggggag21〈210〉26〈211〉20〈212〉DNA<213〉人工序列〈220〉〈223〉人工序列的描述人工合成的引物序列HIK<220〉<221〉primer—bind〈222〉(1)..(50)26aggctggaactgaggagcag20〈210〉271616〈212〉DNA人(Homosapiens)〈220〉5'UTR<222〉(1)..(68)〈220〉〈221〉CDS〈222〉(69)..(1481)<220〉〈221〉3'UTR(1482)..(1616)<220〉<221〉sig—peptide<222〉(69丁..(125)27gaattcgcagtgccatgacaccacgcatctgtcctctagagaatcccctgagagctccgt60tcctcaccatggactggacctggaggateetcttcttggtggcagcagcc110MetAspTrpThrTrpArglieLeuPheLeuValAlaAlaAla115formulaseeoriginaldocumentpage116aaggacaccetcatgateteceggacccctgaggtcacgtgcgtggtg926LysAspThrLeuMetlieSerArgThrProGluValThrCysValVal275280285gtggacgtgagecacgaagaccccgaggtccagttcaactggtacgtg974ValAspValSerHisGluAspProGluValGinPheAsnTrpTyrVal290295300gacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccaegggaggagcag1022AspGlyValGluValHisAsnAlaLysThrLysProArgGluGluGin305310315ttcaacageacgttccgtgtggtcagegtcetcaccgttgtgcaccag1070PheAsnSerThrPheArgValValSerValLeuThrValValHisGin320325330gactggctgaacggcaaggagtacaagtgcaaggtctecaacaaaggc1118AspTrpLeuAsnGlyLysGluTyrLysCysLysValSerAsnLysMy335340345350etcccagcccccategagaaaaccatete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