用作一氧化氮合酶抑制劑的脒基化合物及其鹽的製作方法

2023-05-07 20:47:41 2

專利名稱：用作一氧化氮合酶抑制劑的脒基化合物及其鹽的製作方法
本申請要求2000年3月24日提交的美國臨時專利申請第60/191,923號的優先權益，該文獻通過引用結合到本文中。
背景技術：
發明領域本發明涉及用作一氧化氮合酶抑制劑的脒基化合物。
相關技術自20世紀80年代初期以來，就已知乙醯膽鹼引起的血管舒張依賴於血管內皮。現已知為一氧化氮(NO)的內皮細胞舒血管因子(EDRF)在血管內皮中通過一氧化氮合酶(NOS)產生。對作為血管舒張藥的NO活性的深入了解已有100多年。此外，NO是衍生自亞硝酸異戊酯、硝酸甘油和其它硝基血管舒張劑的活性物質(species)。作為NO的EDRF的鑑定與合成NO所經歷的生物化學途徑的發現一致，通過該途徑，使用酶NO合酶，由胺基酸L-精氨酸合成NO。
一氧化氮是可溶性的鳥苷酸環化酶的內生的刺激物。除內皮依賴的舒張外，NO還涉及大量的生物作用，包括吞噬細胞的細胞毒性和中樞神經系統內的細胞與細胞間的通信。
至少有如下三種類型的NO合酶(i)位於內皮的、組成性Ca++/鈣調蛋白依賴酶，它對受體或物理刺激作出反應而釋放NO。
(ii)位於大腦的、組成性Ca++/鈣調蛋白依賴酶，它對受體或物理刺激作出反應而釋放NO。
(iii)在血管平滑肌、巨噬細胞、內皮細胞及大量的其它細胞被內毒素和細胞因子激活後誘導的不依賴於Ca++的酶，一旦被表達，這種可誘導的一氧化氮合酶(此後為「iNOS」)在長時期內連續地產生NO。
由兩種組成酶各自釋放的NO如經受幾種生理學響應的轉導機理般作用。由誘導酶產生的NO為對腫瘤細胞和侵入微生物的細胞毒性分子。也顯示過量NO的產生的副作用，尤其是病理血管舒張和組織損傷，可大部分由iNOS合成的NO所引起。
越來越多的證據表明，NO可能涉及到因某種疾病如關節炎引起的軟骨變性，並且還知道在類風溼性關節炎和骨關節炎中，NO合酶增多。
所提出的用於治療的部分NO合酶抑制劑是非選擇性的；它們抑制組成性和誘導性NO合酶。這類非選擇性NO合酶抑制劑的使用需極為小心，以避免對組成性NO合酶的過分抑制的潛在的嚴重後果，包括高血壓和可能的血栓形成和組織損傷。特別是在用L-NMMA治療中毒性休克時，建議在整個療程中必須對患者進行連續地血壓監測。因此，非選擇性NO合酶抑制劑的具有治療功用的前提是要採取適當的預防措施，NO合酶抑制劑是有選擇性的，在這個意義上說，它們對誘導性NO合酶的抑制遠大於對組成性NO合酶的同工型的抑制，因而甚至具有更大的治療益處且更易於使用(S.Moncada and Higgs，E.FASEB J.，9，1319-1330，1995)。
以下各公布公開了抑制一氧化氮合成並優先抑制誘導性一氧化氮合酶的同工型的化合物PCT專利申請號WO96/35677、PCT專利申請號WO96/33175、PCT專利申請號WO96/15120、PCT專利申請號WO95/11014、PCT專利申請號WO95/11231、PCT專利申請號WO99/46240、
PCT專利申請號WO95/24382、PCT專利申請號WO94/12165、PCT專利申請號WO94/14780、PCT專利申請號WO93/13055、PCT專利申請號WO99/62875、歐洲專利號EP0446699A1、美國專利第5,132,453號、美國專利第5,684,008號、美國專利第5,830,917號、美國專利第5,854,251號、美國專利第5,863,931號、美國專利第5,919,787號、美國專利第5,945,408號、美國專利第5,981,511號。
PCT專利申請號WO95/25717公開了某些用於抑制誘導性一氧化氮合酶的脒基衍生物。
PCT專利申請號WO99/62875公開了用於抑制誘導性一氧化氮合酶的其它的脒基衍生物。
發明概述在人體軟骨外植體試驗，一種用於骨關節炎的模型中，己發現有作為iNOS抑制劑的非常有效的優點的化合物。同時，本發明化合物令人驚喜地不能滲透試驗系統中的某些非-靶器官，與WO95/25717的化合物相比時尤其如此。在靶器官(軟骨)和其它器官之間的預期選擇方面的驚人區別是本發明化合物的未曾料到的優點。
從廣義上說，本發明涉及新的化合物、藥用組合物和用所述化合物和組合物抑制或調節一氧化氮合成的方法，該方法包括對對需要此種抑制或調節的患者給予可優先抑制或調節誘導性一氧化氮合酶的同工型超過組成性一氧化氮合酶的同工型的化合物。本發明的另一個目的是在需要降低一氧化氮水平的患者中降低一氧化氮的水平。本發明化合物具有有用的一氧化氮合酶抑制活性，並預期可用於其中一氧化氮合成或過分合成為部分病因的疾病或病症的治療或預防。
在一實施方案中，本發明提供了一種化合物或其鹽，該化合物具有對應於式1的結構 其中X選自-S-、-S(O)-和-S(O)2-；R2選自C1-C6烷基、C2-C6鏈烯基、C2-C6炔基、C1-C5烷氧基-C1烷基和C1-C5烷硫基-C1烷基；至於R3和R8R8選自-OR14和-N(R15)(R16)；且R3選自-H、-OH、-C(O)-R17、O和-C(O)-S-R19；或R8為-N(R20)-而R3為-C(O)-，其中R8和R3與它們所連結的原子一起形成環；或R8為-O-，而R3為-C(R21)(R22)-，其中R8和R3與它們所連結的原子一起形成環；如果R3為-C(R21)(R22)-，則R4為-C(O)-O-R23；否則R4為-H；R1、R5、R6和R7獨立地選自-H、滷素、C1-C6烷基、C2-C6鏈烯基、C2-C6炔基和C1-C5烷氧基-C1烷基；R9和R10獨立地選自-H、C1-C6烷基、C2-C6鏈烯基、C2-C6炔基和C1-C5烷氧基-C1烷基；至於R11和R12R11選自-H、-OH、-C(O)-O-R24及-C(O)-S-R25；而R12選自-H、-OH、-C(O)-O-R26和-C(O)-S-R27；或R11為-O-，而R12為-C(O)-，其中R11和R12與它們所連結的原子一起形成環；或R11為-C(O)-，而R12為-O-，其中R11和R12與它們所連結的原子一起形成環；和R13為C1烷基；R14選自-H和C1-C6烷基；其中當R14為C1-C6烷基時，R14任選被一個或多個選自環烷基、雜環基、芳基和雜芳基的基團所取代；至於R15與R16R15選自-H、烷基和烷氧基；而R16選自-H、-OH、烷基、烷氧基、-C(O)-R27a、-C(O)-O-R28和-C(O)-S-R29；其中當R15和R16獨立地為烷基或烷氧基時，R15和R16獨立地任選被一個或多個選自環烷基、雜環基、芳基和雜芳基的其團所取代；或R15為-H；而R16選自環烷基、雜環基、芳基和雜芳基；R17、R18、R19、R20、R21、R22、R23、R24、R25、R26、R27、R27a、R28和R29獨立地選自-H和烷基，所述烷基任選被一個或多個選自環烷基、雜環基、芳基和雜芳基的基團所取代；且當R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13、R14、R15、R16、R17、R18、R19、R20、R21、R22、R23、R24、R25、R26、R27、R27a、R28和R29中的任一個獨立地為選自烷基、鏈烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基的基團時，該基團任選被一個或多個選自-OH、烷氧基和滷素的取代基所取代。
另一實施方案提供了治療或預防與炎症相關的疾病的方法，所述的方法包括用與炎症有關的疾病的治療或預防量的本發明化合物治療有此需要的患者。
在另一個實施方案中，本發明提供了一種製備式1化合物的方法，其中所述方法包括用具有對應於式23結構的乙亞氨酸烷基酯(alkyl acetimidate) 其中的R31為C1-C6烷基，處理具有對應於式22的結構的二胺化合物或其鹽 。如需要，所述處理可在酸或鹼的存在下，優選在鹼的存在下進行。
在本發明的另一個實施方案中，提供了一種製備具有對應於式22的結構的二胺化合物或其鹽的方法 其中R30選自-H、-OH、-C(O)-R17、-C(O)-O-R18和-C(O)-S-R19，其它取代基定義如上，其中的方法包括處理具有對應於式24結構的被護二胺化合物或其鹽 其中的R33選自-H和保護的氨基；R32為保護的氨基；和R14選自-H和C1-C6烷基；其中當R14為C1-C6烷基時，R14任選被一個或多個選自環烷基、雜環基、芳基和雜芳基的基團所取代；其中的處理用去保護試劑進行，從而生成所述的二胺化合物。
發明詳述除了別的以外，式1化合物將用於治療患者的炎症或治療其它一氧化氮合酶誘發的疾病，如，作為治療疼痛和頭痛的鎮痛劑，或作為治療發熱的退熱藥。例如，本發明的化合物將用來治療關節炎，包括但不限於類風溼性關節炎、脊椎關節病、痛風性關節炎、骨關節炎、系統性紅斑狼瘡、幼年關節炎、急性風溼性關節炎、腸病性關節炎、神經病性關節炎、銀屑病關節炎和化膿性關節炎。其中本發明的化合物將提供在抑制L-精氨酸產生NO方面的優點的病症包括關節炎病症。
本發明的化合物將進一步用於治療哮喘、支氣管炎、月經痙攣(如，痛經)、早產、腱炎、粘液囊炎、與皮膚有關的病症如銀屑病、溼疹、灼傷、曬斑、皮炎、胰腺炎、肝炎和術後炎症包括眼外科手術如白內障手術和屈光手術後的炎症。本發明的化合物也可用於治療胃腸道疾病如炎性腸道疾病、節段性迴腸炎、胃炎、過敏性大腸症候群和潰瘍性結腸炎。本發明的化合物將用於預防或治療癌症，如結腸直腸癌、乳腺癌、肺癌、前列腺癌、膀胱癌、頸癌和皮膚癌。本發明的化合物將用於治療炎症和組織損傷，這類病有血管病、偏頭痛、結節性動脈外膜炎、甲狀腺炎、再生障礙性貧血、霍奇金氏病、sclerodoma、風溼熱、I型糖尿病、神經肌連接病(meuromusculanjunction)包括重症肌無力、白質病包括多發性硬化、類肉瘤病、腎病症候群、貝赫切特症候群、多肌炎、齦炎、腎炎、過敏、損傷後腫脹、心肌缺血等。本發明化合物也可用於治療眼病，如青光眼、視網膜炎、視網膜病變、眼色素層炎、眼畏光症及與眼組織急性損傷相關的炎症和疼痛。本發明化合物的用途中特別重要的是治療青光眼，尤其是由一氧化氮的產生引起的青光眼的症狀，如一氧化氮介導的神經損傷。本發明化合物也可用於治療肺炎，如與病毒感染和囊性纖維化有關的肺炎。本發明化合物還可用於治療某些中樞神經系統疾病，如皮質性痴呆(cortical dementias)包括阿爾茨海默氏病及由中風、局部缺血和創傷引起的中樞神經系統損傷。本發明的化合物可用作如治療關節炎的消炎藥，同時具有極小有害副作用的額外益處。這些化合物也用於治療變應性鼻炎、呼吸窘迫症候群、內毒素性休克症候群和動脈粥樣硬化。所述化合物還可用於治療疼痛，但不限於術後疼痛、牙痛、肌肉痛及癌症引起的疼痛。所述化合物將用於預防痴呆如阿爾茨海默氏病。
除用作人體治療外，這些化合物也可用於家養的陪伴動物、外來動物和農畜，包括哺乳動物、齧齒動物等的獸醫治療。更優選的動物包括馬、狗和貓。
本發明化合物也可，例如與類固醇、NSAIDs、COX-2選擇性抑制劑、5-脂氧合酶抑制劑、LTB4拮抗劑和LTA4水解酶抑制劑一起用於聯合治療，部分或完全地代替其它常規消炎治療。
其中本發明化合物將提供抑制NO的抑制作用的優點的其它病症包括心血管局部缺血、糖尿病(I型或II型)，充血性心力衰竭、心肌炎、動脈粥樣硬化、偏頭痛、青光眼、主動脈瘤、反流性食管炎、腹瀉、過敏性大腸症候群、囊性纖維化、肺氣腫、哮喘、支氣管擴張、痛覺過敏(異常性疼痛)、腦局部缺血(雙病灶缺血、血栓性中風和整體性缺血(如，繼發性心博停止)、多發性硬化和其它由NO引起的中樞神經系統疾病，如帕金森氏病。其中NO抑制可能是有用的其它神經變性疾病包括神經變性或神經壞死，這些疾病有缺氧、低血糖、癲癇及在中樞神經系統(CNS)創傷的情況(如脊髓和頭部創傷)、高壓氧驚厥和中毒、痴呆如早老性痴呆和與AIDS相關的痴呆、惡病質、西德納姆舞蹈病、亨廷頓氏舞蹈病、肌萎縮側索硬化、科爾薩科夫病、與大腦血管疾病有關的痴愚、睡眠障礙、精神分裂症、抑鬱症、與經前期症候群(PMS)有關的抑鬱症或其它症狀、焦慮症和敗血症性休克。
本發明化合物也可用於治療疼痛包括軀體原(感受傷害的或神經病的)疼痛，包括急性與慢性疼痛。一氧化氮抑制劑可用於包括以普通NSAID或類阿片鎮痛藥傳統給藥的神經病疼痛在內的任何病症。
可用本發明化合物有利地治療的其它疾病或病症還包括對長期需要阿片鎮痛藥的患者的鴉片製劑耐受性及用苯並二氮雜類的患者的苯並二氮雜類耐受性，和其它成癮的行為，如尼古丁癮、酒精中毒和進食障礙的治療或預防。本發明的化合物和方法也可用於藥物戒斷症候群狀的治療或預防，如鴉片癮、酒癮或菸癮的戒斷症狀的治療或預防。當與抗菌藥或抗病毒藥聯合治療時，本發明的化合物還可用於預防組織損傷。
本發明的化合物還可用於抑制L-精氨酸產生NO，包括與由許多種藥劑誘發的膿毒性和/或毒性出血性休克有關的系統性低血壓；用細胞因子如TNF、IL-1和IL-2的治療；和移植治療中，作為短期免疫抑制的輔藥。
本發明還涉及本發明化合物治療和預防瘤形成的用途。可用本發明的化合物和方法治療或預防的瘤形成包括腦癌、骨癌、白血病、淋巴瘤、上皮細胞衍生的瘤形成(上皮癌)如基底細胞癌、腺癌、胃腸癌如唇癌、口腔癌、食管癌、小腸癌和胃癌、結腸癌、肝癌、膀胱癌、胰腺癌、卵巢癌、宮頸癌、肺癌、乳腺癌和皮膚癌，如扁平細胞和基底細胞癌、前列腺癌、腎細胞癌及其它影響全身上皮細胞的已知癌症。優選的瘤形成選自胃腸癌、肝癌、膀胱癌、胰腺癌、卵巢癌、前列腺癌、宮頸癌、肺癌、乳腺癌和皮膚癌，如扁平細胞和基底細胞癌。本發明化合物和方法也可用於治療射療法引起的纖維化。本發明化合物和方法可用來治療患有腺瘤性息肉的患者，包括患家族腺瘤性息肉病(FAP)的患者。另外，本發明化合物和方法可用於預防有FAP風險的患者形成息肉。
本發明化合物與另一種抗腫瘤藥的聯合治療，將通過減少用於療效所需的而引起副作用的藥物的治療劑量，或通過直接減少引起副作用的藥物產生的毒副作用的症狀，產生協同作用或者降低與化療有關的毒副作用。
本發明的化合物還可用作放射治療的輔助劑，以減少副作用或增加效果。在本發明中，可與本發明的化合物聯合的另一藥物包括能抑制酶環加氧酶-2(「COX-2」)的任何治療藥物。優選此種COX-2抑制劑相對酶環加氧酶-1(「COX-1」)而言選擇性地抑制COX-2。這種COX-2抑制劑稱作「COX-2選擇性抑制劑」。更優選地，在體外試驗中，本發明的化合物可與COX-2選擇性抑制劑聯合治療，其中的COX-2選擇性抑制劑以相對於對COX-1的抑制至少10∶1，更優選地至少30∶1，甚至更優選至少50∶1的比例選擇性地抑制COX-2。用於與本發明的化合物聯合治療的COX-2選擇性抑制劑包括celecoxib，valdecoxib，deracoxib，etoricoxib，rofecoxib，ABT-963(2-(3，4-二氟苯基)-4-(3-羥基-3-甲基-1-丁氧基)-5-[4-(甲磺醯)苯基-3(2H)-噠嗪酮；描述於PCT專利申請號WO00/24719)，或美洛昔康。本發明的化合物也可有利地用於與COX-2選擇性抑制劑如parecoxib的前藥的聯合治療。
例如，可從下表中選擇能用於與本發明的化合物聯合的另一化療藥，所述表並非包羅一切，且是且非限定性的α-二氟甲基鳥氨酸(DFMO)、5-FU-血纖維蛋白原、acanthifolicacid、氨基噻二唑、布喹那鈉、卡莫氟、Ciba-Geigy CGP-30694、環戊基胞嘧啶、磷酸硬脂酸阿糖胞苷、阿糖胞苷軛合物、Lilly DATHF、Merrel Dow DDFC、dezaguanine、雙脫氧胞苷、雙脫氧鳥苷、didox、Yoshitomi DMDC、去氧氟尿苷、Wellcome EHNA、Merck Co.EX-015、法扎拉濱、氟尿苷、磷酸氟達拉濱、5-氟尿嘧啶、N-(2』-呋喃烷基(furanidyl)-5-氟尿嘧啶)、Daiichi Seiyaku FO-152、異丙基pyrrolizine、Lilly LY-188011、Lilly LY-264618、methobenzaprim、氨甲蝶呤、Wellcome MZPES、norspermidine、NCI NSC-127716、NCINSC-264880、NCI NSC-39661、NCI NSC-612567、Warner-LambertPALA、噴司他丁、吡曲克辛、普卡黴素、Asahi Chemical PL-AC、TakedaTAC-788、硫鳥嘌呤、噻唑呋林、Erbamont TIF、三甲曲沙、酪氨酸激酶抑制劑、酪氨酸蛋白酶抑制劑、Taiho UFT、uricytin、Shionogi254-s、氧代-磷醯胺類似物、altretamine、阿那昔酮、BoehringerMannheim BBR-2207、bestrabucil、布度鈦、Wakunaga CA-102、carboplatin、亞硝基脲氮芥、Chinoin-139、Chinoin-153、苯丁酸氮芥、順鉑、環磷醯胺、American Cyanamid CL-286558、Sanofi CY-233、cyplatate、Degussa D-19-384、Sumimoto DACHP(Myr)2、二苯基螺甲基二氯乙基胺(diphenylspiromustine)、二鉑細胞抑制劑、Erba司他黴素衍生物、Chugai DWA-2114R、ITI E09、依莫司汀、ErbamontFCE-24517、雌莫司汀磷酸鈉、fotemustine、Unimed G-6-M、ChinoinGYKI-17230、hepsul-fam、異環磷醯胺、iproplatin、洛莫司汀、馬磷醯胺、二溴衛矛醇、Nippon Kayaku NK-121、NCI NSC-264395、NCINSC-342215、奧沙利鉑、Upjohn PCNU、松龍苯芥、Proter PTT-119、雷莫司汀、司莫司汀、SmithKline SKF-101772、Yakult Honsha SN-22、螺莫司汀、Tanabe Seiyaku TA-077、牛磺莫司汀、替莫唑胺、替羅昔隆、tetraplatin、trimelamol、Taiho 4181-A、阿柔比星、放線菌素D、actinoplanone、Erbamont ADR-456、aeroplysinin衍生物、Ajinomoto AN-201-II、Ajinomoto AN-3、Nippon Soda茴香黴素、蒽環類藥、阿齊諾黴素-A、bisucaberin、Bristol-Myers BL-6859、Bristol-Myers BMY-25067、Bristol-Myers BMY-25551、Bristol-MyersBMY-26605、Bristol-Myers BMY-27557、Bristol-Myers BMY-28438、硫酸博萊黴素、薯司他丁-1、Taiho C-1027、刺孢黴素、chromoximycin、放線菌素D、柔紅黴素、Kyowa Hakko DC-102、Kyowa Hakko DC-79、Kyowa Hakko DC-88A、Kyowa Hakko DC89-A1、Kyowa HakkoDC92-B、ditrisarubicin B、Shionogi DOB-41、多柔比星、多柔比星-纖維蛋白原、elsamicin-A、表柔吡星、erbstatin、依索比星、esperamicin-A1、esperamicin-A1b、Erbamont FCE-21954、FuiisawaFK-973、福司曲星、Fujisawa 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LY-186641、NCI(US)MAP、marycin、Merrel Dow MDL-27048、Medco MEDR-340、merbarone、部花青衍生物、甲基苯胺基吖啶、Molecular Genetics MGI-136、minactivin、mitonafide、米託喹酮、莫哌達醇、莫維A胺、Zenyaku Kogyo MST-16、N-(視黃醯基)胺基酸、Nisshin Flour Milling N-021、N-醯基化-脫氫丙氨酸、那法扎瓊、TaishoNCU-190、諾考達唑衍生物、精氨酸血紅素、NCI NSC-145813、NCINSC-361456、NCI NSC-604782、NCI NSC-95580、奧曲肽、OnoONO-112、oquizanocine、Akzo Org-10172、pancratistatin、帕折普汀、Warner-Lambert PD-111707、Warner-Lambert PD-115934、Warner-Lambert PD-131141、Pierre Fabre PE-1001、ICRT肽D、匹羅沙群、多血卟啉、polypreic acid、Efamol卟啉、probimane、丙卡巴肼、丙谷胺、Invitron蛋白酶連接蛋白I，Tobishi RA-700、雷佐生、SapporoBreweries RBS、限制酶素-P(restrictin-P)、retelliptine、視黃酸、Rhone-Poulenc RP-49532、Rhone-Poulenc RP-56976、SmithKlineSKF-104864、Sumitomo SM-108、Kuraray SMANCS、SeaPharmSP-10094、苯丙醇胺酯(spatol)、螺環丙烷衍生物、螺鍺、Unimed、SSPharmaceutical SS-554、止血醇二酮(strypoldinone)、止血醇二酮(Stypoldione)、Suntory SUN 0237、Suntory SUN 2071、超氧化物歧化酶、Toyama T-506、Toyama T-680、紫杉酚、Teijin TET-0303、替尼泊苷、thaliblastine、Eastman Kyowa TJB-29、tocotrienol、Topostin、Teijin TT-82、Kyowa Hakko UCN-01、Kyowa Hakko UCN-1028、ukrain、Eastman Kodak USB-006、硫酸長春花鹼、長春新鹼、長春地辛、vinestramide、長春瑞賓、長春曲醇、長春利定、withanolides、Yamanouchi YM-534、uroguanylin、combretastatin、dolastatin、去甲氧基柔紅黴素、表柔吡星、雌莫司汀、環磷醯胺、9-氨基-2-(S)-喜樹鹼、託泊替堪、伊立替康(Camptosar)、依西美坦、6-D-色氨酸高那瑞林(tryptorelin)或一種Ω-3脂肪酸。
可用於與本發明的化合物聯合治療的放射保護劑的實例包括AD-5、adchnon、氨磷汀類似物、detox、地美司鈉、1-102、MM-159、N-醯化-去氫丙氨酸、TGF-Genentech、噻丙莫德、氨磷汀、WR-151327、FUT-187、經皮酮洛芬、萘丁美酮、超氧化物歧化酶(Chiron)及超氧化物歧化酶Enzon。
本發明的化合物也可用於治療或預防與血管生成相關的疾病或病症，如，瘤的生長、轉移、黃斑變性和動脈粥樣硬化。
在另一實施方案中，本發明也提供治療或預防眼病或眼疾如青光眼的聯合治療。例如，本發明的化合物將有利地用於與降低患青光眼的患者的眼內壓的藥物一起聯合治療。這類眼內壓降低藥物包括但不限於拉坦前列素、travoprost、bimatoprost或烏諾前列醇。本發明的化合物加上一種降眼內壓藥物的聯合治療將是有效的，因為認為它們各自通過不同的機理髮揮其作用。
在本發明的另一聯合治療中，本發明的化合物可用於與抗高脂血藥物或降膽固醇藥物如benzothiepine或苯並硫氮雜(benzothiazepine)抗高脂血藥一起的聯合治療。用於本發明的聯合治療的benzothiepine抗高脂血藥的實例可在美國專利第5,994,391號中找到，該文獻通過引用結合到本文中。某些苯並硫氮雜抗高脂血藥描述於WO93/16055。另外，用於與本發明化合物聯合的抗高脂血藥物或降膽固醇藥物可為HMG Co-A還原酶抑制劑。用於本發明的聯合治療的HMG Co-A還原酶抑制劑的實例分別包括苯氟雷司、氟伐他汀、洛伐他汀、provastatin、辛伐他汀、atorvastatin、cerivastatin、bervastatin、ZD-9720(描述於PCT專利申請號號WO97/06802)、ZD-4522(CAS第147098-20-2號對於鈣鹽；CAS第147098-18-8號對鈉鹽；描述於歐洲專利第EP 521471號)、BMS 180431(CAS第129829-03-4號)或NK-104(CAS第141750-63-2號)。本發明化合物加上抗高脂血藥物或降膽固醇藥物的聯合治療可用於，例如，降低在血管中形成動脈粥樣硬化損害的危險。例如，動脈粥樣硬化損害往往最初發生於血管中的炎症位置上。已確認抗高脂血藥物或降膽固醇藥物通過降低血液中的脂水平來減少形成動脈粥樣硬化損害的危險。本發明不限於單一作用機理，一方面相信本發明化合物的聯合將共同通過例如降低血脂水平從而減少血管中的炎症，提供了對動脈粥樣硬化損害的更有效的控制。
在本發明的另一實施方案中，本發明化合物可用於與其它化合物或藥物聯合治療中樞神經病症或疾病如偏頭痛。例如，所述化合物可用於與咖啡因、5-HT-1B/1D激動劑(例如，triptan如舒馬曲坦、naratriptan、zolmitriptan、rizatriptan、almortriptan或frovatriptan)、多巴胺D4拮抗劑(如，sonepiprazole)、阿斯匹林、醋氨酚、布洛芬、吲哚美辛、甲氧萘丙酸鈉、甲異辛烯胺、氯醛比林、布他比妥、麥角生物鹼(如麥角異胺、二氫麥角異胺、溴隱亭、麥角新鹼或甲基麥角新鹼)、三環抗抑鬱藥(如，阿米替林或去甲替林)、5-羥色胺能拮抗劑(如，二甲麥角新鹼或賽庚啶)、β-andrenergic拮抗劑(如，普萘洛爾、噻嗎洛爾、阿替洛爾、納多洛爾或美託洛爾)或單胺氧化酶抑制劑(如，苯乙肼或異卡波肼)一起聯合治療。
另一實施方案提供本發明的化合物與類阿片化合物一起的聯合治療。可用於該聯合治療的類阿片化合物包括但不限於嗎啡、美沙酮、氫化嗎啡酮、羥嗎啡酮、左嗎喃、烯丙左嗎喃、可待因、二氫可待因、二氫羥基可待因、噴他佐辛、氫可酮、氧可酮、納美芬、埃託菲、左嗎喃、芬太尼、舒芬太尼、DAMGO、丁啡喃、丁丙諾啡、納洛酮、納曲酮、CTOP、二丙諾啡、β-funaltrexanine、naloxonazine、烯丙嗎啡、噴他佐辛、納布啡、納洛酮、苯甲醯腙、布馬佐辛、乙基酮基環吖辛因、U50,488、U69,593、螺朵林、nor-binaltorphimine、naltrindole、DPDPE、[D-la2，glu4]deltorphin、DSLET、蛋氨酸-腦啡肽、亮氨酸-腦啡肽、β-內啡肽、強啡肽A、強啡肽B及α-新內啡肽。本發明與一種類鴉片化合物的聯合的一個優點是本發明的化合物可減少類鴉片化合物的劑量，因而降低類鴉片副作用如類鴉片成癮的危險。
術語「烷基」，單獨或結合使用，指優選含1-約10個碳原子，更優選含1-約6個碳原子的直鏈或支鏈的無環烷基。「烷基」也包括含有3-約7個碳原子，優選3-5個碳原子的環烷基。所述烷基可任選地被如下定義的基團所取代。這類基團的實例包括甲基、乙基、氯代乙基、羥基乙基、正丙基、異丙基、正丁基、氰基丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、氨基戊基、異戊基、己基、辛基等。
術語「鏈烯基」指直鏈或支鏈的不飽和無環烴基，它至少含一個雙鍵。這類基團含2-約6個碳原子，優選2-約4個碳原子，更優選地2-約3個碳原子。所述的鏈烯基可任選被如下定義的基團所取代。適用的鏈烯基實例包括丙烯基、2-氯代丙烯基、丁烯-1-基、異丁烯基、戊烯-1-基、2-甲基丁烯-1-基、3-甲基丁烯-1-基、己烯-1-基、3-羥基己烯-1-基、庚烯-1-基和辛烯-1-基等。
術語「炔基」指直鏈或支鏈的不飽和無環烴基，它含一個或多個三鍵，這類基團含2-約6個碳原子，優選2-約4個碳原子，更優選2-約3個碳原子。所述的炔基可任選被如下定義的基團所取代。適用的炔基的實例包括乙炔基、丙炔基、羥基丙炔基、丁炔-1-基、丁炔-2-基、戊炔-1-基、戊炔-2-基、4-甲氧基戊炔-2-基、3-甲基丁炔-1-基、己炔-1-基、己炔-2-基、己炔-3-基、3，3-二甲基丁炔-1-基等。
術語「烷氧基」包括直鏈或支鏈的、各具1-約6個碳原子，優選1-3個碳原子的含氧基團，如甲氧基。術語「烷氧基烷基」也包括含有連接於烷基的一個或多個烷氧基的烷基，即，形成單烷氧基烷基和雙烷氧基烷基。這類基團的實例包括甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基和叔丁氧基烷基。「烷氧基」可進一步被一個或多個滷原子如氟、氯或溴所取代，得到「滷代烷氧基」。這類基團的實例包括氟代甲氧基、氯代甲氧基、三氟代甲氧基、二氟代甲氧基、三氟代乙氧基、氟代乙氧基、四氟代乙氧基、五氟代乙氧基和氟代丙氧基。
術語「烷硫基」包括含有連接於二價硫原子的1-約6個碳原子的直鏈或支鏈烷基的基團。「低級烷硫基」的一個實例為甲硫基(CH3-S-)。
術語「烷硫基烷基」包括連接於烷基的烷硫基。這類基團的實例包括甲硫基甲基。
術語「滷代基」指滷素如氟、氯、溴或碘原子。
術語「雜環基」指飽和或不飽和的單或多環的碳環，其中的一個或多個碳原子被N、S、P或O所取代。例如，它包括下列結構 或 其中Z、Z1、Z2或Z3為C、S、P、O或N，前提是Z、Z1、Z2或Z3之一不是碳，但當通過雙鍵連接於另一個Z原子時，或當連接於另一個O或S原子時，它不是O或S。此外，只有當Z、Z1、Z2或Z3各自為C時，任選的取代基被理解為連接於Z、Z1、Z2或Z3上。術語「雜環基」也包括完全飽和的環結構如哌嗪基、二噁烷基、四氫呋喃基、環氧乙烷基、吖丙啶基、嗎啉基、吡咯烷基、哌啶基、噻唑烷基及其它。術語「雜環基」也包括部分不飽和環結構如二氫呋喃基、吡唑啉基、咪唑啉基、吡咯啉基、苯並二氫吡喃基、二氫苯硫基及其它。
術語「雜芳基」指完全不飽和的雜環基。
在「雜環基」或「雜芳基」中，連接於所述分子的連接點可在環上的雜原子上或其它地方。
術語「環烷基」指單或多環碳環，其中的各環含3-約7個碳原子，優選3-約5個碳原子。實例包括環丙基、環丁基、環戊基、環己基、環烯基和環庚基。術語「環烷基」另外包括螺系統，其中的環烷基環有與benzothiepine的7-元雜環共有的碳環原子。
術語「氧代基」指帶有雙鍵的氧。
術語「烷氧基」指包括連接於氧原子的烷基的基團，如甲氧基。更優選的烷氧基是有1-約10個碳原子「低級烷氧基」。更優選的烷氧基具有1-約6個碳原子。這類基團的實例包括甲氧基、乙氧基、丙氧基、異丙氧基、丁氧基和叔丁氧基。
術語「芳基」指完全不飽和的單或多環的碳環，包括但不限於取代或未取代的苯基、萘基或蒽基。
術語「聯合治療」指用兩種或多種治療藥物治療本公開所述的的病症或疾病，例如，動脈粥樣硬化、疼痛、炎症、偏頭痛、瘤形成、與血管生成相關的病狀或疾病等。這類給藥包括基本同時地以這些醫治藥物，例如以具有固定比例的活性成分的單一膠囊或以每個含活性成分的多個獨立的膠囊聯合給藥。此外，這類給藥也包括各種類型的治療藥物以順序的方式使用。不論哪種情況，所述治療方法都會為治療本文所述的病症或疾病提供有益的藥物聯合使用的效果。
短語「治療有效的」意指使聯合治療中的各活性成分的聯合用量達到要求。所述聯合用量將達到減少或消除高脂血症的目標。
在一個實施方案中，本發明提供一種化合物或其鹽，所述化合物具有對應於式1的結構 在式1結構中，X選自-S-、-S(O)-和-S(O)2-。X優選為-S-。R2選自C1-C6烷基、C2-C6鏈烯基、C2-C6炔基、C1-C5烷氧基-C1烷基和C1-C5烷硫基-C1烷基，其中的這些基團各任選被一個或多個選自-OH、烷氧基和滷素的取代基所取代。R2優選為被選自-OH、烷氧基和滷素的取代基所取代的C1-C6烷基。至於R3和R8，R8選自-OR14和-N(R15)(R16)，而R3選自-H、-OH、-C(O)-R17、-C(O)-O-R18和-C(O)-S-R19；或R8為-N(R20)-而R3為-C(O)-，其中R3和R8與它們所連接的原子一起形成環；或R8為-O-，而R3為-C(R21)(R22)-，其中R3和R8和與它們所連接的原子一起形成環。如果R3為-C(R21)(R22)-，則R4為-C(O)-O-R23；否則，R4為-H。R1、R5、R6和R7獨立地選自-H、滷素、C1-C6烷基、C2-C6鏈烯基、C2-C6炔基和C1-C5烷氧基-C1烷基。R9和R10獨立地選自-H、C1-C6烷基、C2-C6鏈烯基、C2-C6炔基和C1-C5烷氧基-C1烷基；至於R11和R12，R11選自-H、-OH、-C(O)-O-R24和-C(O)-S-R25，而R12選自-H、-OH、-C(O)-O-R26和-C(O)-S-R27；或R11為-O-，而R12為-C(O)-，其中R11和R12與它們所連接的原子一起形成環；或R11為-C(O)-，而R12為-O-，其中的R11和R12與它們所連接的原子一起形成環。R13為C1烷基。R14選自-H和C1-C6烷基，其中當R14為C1-C6烷基時，R14任選被選自環烷基、雜環基、芳基和雜芳基的一個或多個基團所取代。至於R15和R16，R15選自-H、烷基和烷氧基，而R16選自-H、-OH、烷基、烷氧基、-C(O)-R27a、-C(O)-O-R28和-C(O)-S-R29；其中，當R15和R16獨立為烷基或烷氧基時，R15和R16獨立地任選被選自環烷基、雜環基、芳基和雜芳基的一個或多個基團所取代；或R15為-H；而R16選自環烷基、雜環基、芳基和雜芳基。R17、R18、R19、R20、R21、R22、R23、R24、R25、R26、R27、R27a、R28和R29獨立地選自-H和烷基，它任選被一個或多個選自環烷基、雜環基、芳基和雜芳基的基團所取代；當R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13、R14、R15、R16、R17、R18、R19、R20、R21、R22、R23、R24、R25、R26、R27、R27a、R28和R29中的任一個獨立為選自烷基、鏈烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基的基團時，那麼，該基團任選地被一或多個選自-OH、烷氧基和滷素的取代基所取代。
在一優選實施方案中，R8為-OH。當R8為-OH，X優選為S。在另一實施方案中，R1、R5、R6、R7、R9和R10獨立選自-H和C1-C3烷基。R5、R6、R7、R9、R10各優選為H。R13可為各種基團，如氟代甲基或甲基。R1可為任選地被選自-OH和滷素的取代基所取代的C1-C6烷基；R1優選為任選被滷素取代的C1烷基；更優選地，R1選自氟代甲基、羥基甲基和甲基。在一重要實施方案中，R1可為甲基。另外，R1可為氟代甲基。R1的另一選擇是羥基甲基。在另一實施方案中，R2為被一個選自-OH、烷氧基和滷素的取代基任選取代的C1-C6烷基。在一個優選實施方案中，R2為被滷素任選取代的C1烷基。例如，R2可為甲基。另外，R2可為氟代甲基。在又一個實施例中，R2可為羥基甲基。在另一個實施例中，R2可為甲氧基甲基。
在本發明的化合物中，R3、R4、R11和R12各優選為-H。在該實施方案中，進一步優選R1、R5、R6、R7、R9和R10獨立地選自-H和C1-C3烷基。R5、R6、R7、R9、R10各優選為-H。在這個進一步的實施方案中，例如，R13可為氟代甲基或在另一個實施例中R13可為甲基。在這些實施例的優選化合物中，R2為被選自-OH、烷氧基和滷素的取代基所任選取代的C1-C6烷基。R2優選為被滷素任選取代的C1烷基。在一個這樣的實施例中，R2為氟代甲基。在另一個實施例中，R2為甲基。或者，R2可為羥基甲基。另一選擇是R2可為甲氧基甲基。
當R13為甲基時，R1可為，例如，-H或被選自-OH和滷素的取代基任選取代的C1-C6烷基。在一優選實施方案中R1為-H。或者，R1可為被選自-OH和滷素的取代基任選取代的C1-C6烷基。例如，R1可為甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、仲丁基、異丁基、叔丁基、戊基異構體或己基異構體。例如，R1可為乙基。或者，R1可為被選自-OH和滷素的取代基任選取代的C1烷基；例如，R1可為甲基。或者，R1可為氟代甲基。在另一種選擇中，R1可為羥基甲基。
在另一實施方案中，R8可為-OR14。R14如上所定義。R14優選為任選被一或多個選自環烷基、雜環基、芳基和雜芳基的基團所取代的C1-C6烷基；R14更優選為C1-C3烷基；R14甚至更優選為甲基。在化合物1的另一實施方案中，R8可為-N(R15)(R16)，其中R15和R16的定義如上。在又一實施方案中，R8可為-N(R20)-，而R3可為-C(O)-，其中R8和R3與它們所連接的原子一起形成環。在另一實施方案中，R8可為-O-，而R3可為-C(R21)(R22)-，其中R8和R3與它們所連接的原子一起形成環。
在式1化合物中，R11可選自-OH、-C(O)-O-R24和-C(O)-S-R25。R11優選為-OH。在另一實施方案中，當R11為-OH時，R12為-H。
然而，本發明也提供了有用的式1化合物，其中R11為-O-，而R12為-C(O)-，其中R11和R12與它們所連接的原子一起形成環。在另一個有用的實施方案中，R11為-C(O)-，而R12為-O-，其中R11和R12與它們所連接的原子一起形成環。或者，R12可選自-OH、-C(O)-O-R26和-C(O)-S-R27。在這種選擇中，R11優選為-H。
本發明也提供式1化合物的藥學上可接受的鹽。例如，這種藥學上可接受的鹽可以是這樣的鹽，其中本發明的化合物為帶至少一種陰離子抗衡離子的陽離子形式。用於本發明的藥學上可接受的鹽的陰離子抗衡離子的實例包括滷化物、羧酸鹽、磺酸鹽、硫酸鹽、磷酸鹽、膦酸鹽、樹脂-結合的陰離子、氧化物或硝酸鹽。當陰離子抗衡離子為滷化物時，例如，它可以是氟化物、氯化物、溴化物或碘化物。滷化物抗衡離子優選為氯化物。當陰離子抗衡離子為羧酸鹽時(即含羧酸官能團的化合物的陰離子形式)，所述羧酸鹽抗衡離子可廣泛變化。例如，所述羧酸鹽抗衡離子可為甲酸鹽、乙酸鹽、丙酸鹽、三氟乙酸鹽、琥珀酸鹽、水楊酸鹽、DL-天冬氨酸鹽、D-天冬氨酸鹽、L-天冬氨酸鹽、DL-穀氨酸鹽、D-穀氨酸鹽、L-穀氨酸鹽、甘油酸鹽、琥珀酸鹽、steric、DL-酒石酸鹽、D-酒石酸鹽、L-酒石酸鹽、(±)扁桃酸鹽、(R)-(-)-扁桃酸鹽、(S)-(+)-扁桃酸鹽、檸檬酸鹽、粘酸鹽、馬來酸鹽、丙二酸鹽、苯甲酸鹽、DL-蘋果酸鹽、D-蘋果酸鹽、L-蘋果酸鹽、半蘋果酸鹽、1-全剛烷乙酸鹽、1-全剛烷羧酸鹽、黃安酸鹽、磺基乙酸鹽、(±)-乳酸鹽、L-(+)-乳酸鹽、D-(-)-乳酸鹽、撲酸鹽、D-α-半乳糖醛酸鹽、甘油酸鹽、DL-抗壞血酸鹽、D-抗壞血酸鹽、L-抗壞血酸鹽、DL-胱氨酸鹽、D-胱氨酸鹽、L-胱氨酸鹽、DL-高胱氨酸鹽、D-高胱氨酸鹽、L-高胱氨酸鹽、DL-半胱氨酸鹽、D-半胱氨酸鹽、L-半胱氨酸鹽、(4S)-羥基-L-脯氨酸、環丙烷-1，1-二羧酸鹽、2，2-二甲基丙二酸鹽、方形酸鹽、酪氨酸陰離子、脯氨酸陰離子、富馬酸鹽、1-羥基-2萘甲酸鹽、膦醯基乙酸鹽、碳酸鹽、碳酸氫鹽、3-膦醯基丙酸鹽、DL-焦穀氨酸鹽、D-焦穀氨酸鹽或L-焦穀氨酸鹽。或者，陰離子抗衡離子可為磺酸鹽。例如，磺酸鹽抗衡離子可為甲磺酸鹽、甲苯磺酸鹽、苯磺酸鹽、三氟甲基磺酸鹽、乙磺酸鹽、(±)-樟腦磺酸鹽、萘磺酸鹽、1R-(-)-樟腦磺酸鹽、1S-(+)-樟腦磺酸鹽、2-基磺酸鹽、1，5-萘二磺酸鹽、1，2-乙烷二磺酸鹽、1，3-丙烷二磺酸鹽、3-(N-嗎啉代)丙烷磺酸鹽、聯苯基磺酸鹽、羥乙磺酸鹽或1-羥基-2-萘磺酸鹽。在另一實施方案中，所述陰離子抗衡離子可為硫酸鹽。用於本發明硫酸鹽的實例包括但不限於硫酸鹽、硫酸氫鉀、硫酸氫鈉和硫酸。陰離子抗衡離子可為氨基磺酸鹽。當陰離子抗衡離子為磷酸鹽時，它可為例如磷酸鹽、磷酸二氫鹽、磷酸氫鉀、磷酸二鉀、磷酸鉀、磷酸氫鈉、磷酸二鈉、磷酸鈉、磷酸二氫鈣、磷酸鈣、磷酸氫鈣、三代磷酸鈣(Ca3(PO4)2)或六氟代磷酸鹽。陰離子抗衡離子可為膦酸鹽。例如，膦酸鹽抗衡離子可為乙烯基膦酸鹽、2-羧基乙基膦酸鹽或苯基膦酸鹽。或者，所述陰離子抗衡離子可為硝酸鹽。所述鹽也可得自所述化合物與氧化物如氧化鋅的加成反應。
如需要，所述陰離子抗衡離子可接合於聚合樹脂上。換句話說，陰離子抗衡離子可為樹脂-結合的陰離子。例如，所述的樹脂-結合的陰離子可為聚丙烯酸鹽樹脂，其中的樹脂含陰離子的羥酸鹽基團。用於本發明的鹽的聚丙烯酸鹽樹脂的一個實例為Bio-Rex 70(Bio-Rad生產)。在一個可選擇的實例中，樹脂-結合的陰離子可為磺化聚(苯乙烯二乙烯基苯)共聚物樹脂。用作本發明的陰離子抗衡離子的磺化聚(苯乙烯二乙烯基苯)共聚物樹脂的非限定性實例包括AmberliteIPR-69(RohmHaas)或Dowex 50WX4-400(Dow)。如需要，所述的聚丙烯酸酯樹脂或磺化聚(苯乙烯二乙烯基苯)樹脂可與交聯劑如二乙烯基苯交聯。
在另一實施方案中，式1化合物的藥學上可接受的鹽可為這樣的鹽，其中本發明的化合物為具有至少一個陽離子抗衡離子的陰離子形式。例如，所述陽離子抗衡離子可為銨陽離子、鹼金屬陽離子、鹼土金屬陽離子、過渡金屬陽離子或樹脂-結合的陽離子。當陽離子抗衡離子為銨離子時，它可被取代或不被取代。例如，銨陽離子可為烷基銨陽離子或雙-、三或四烷基銨陽離子。另外，所述銨陽離子可為芳基銨陽離子或二、三或四芳基銨陽離子。所述的銨陽離子可含烷基和芳基兩種基團。銨陽離子可為芳族的，例如，吡啶鎓陽離子。其它官能團也以銨陽離子形式出現。例如，所述銨陽離子可為銨、甲銨、二甲銨、三甲銨、四甲銨、乙醇銨、二環己銨、胍鎓或乙二銨陽離子。或者，陽離子抗衡離子可為鹼金屬陽離子如鋰陽離子、鈉陽離子、鉀陽離子或銫陽離子。在另一種選擇中，所述的陽離子抗衡離子可為鹼土金屬陽離子如鈹陽離子、鎂陽離子或鈣陽離子。如需要，所述的陽離子可為過渡金屬陽離子如鋅陽離子。
如需要，所述陽離子抗衡離子可結合於聚合樹脂上。換句話說，陰離子抗衡離子可為樹脂-結合的陽離子。例如，所述的樹脂-結合的陽離子可為陽離子官能化聚(苯乙烯二乙烯基苯)樹脂。用於本發明的陽離子官能化聚(苯乙烯二乙烯基苯)樹脂的實例是Bio-Rex-5(Bio-Rad)，一種銨官能化樹脂。在另一選擇中，所述的樹脂-結合的陽離子可為陽離子官能化聚丙烯酸酯樹脂如胺化的聚丙烯酸酯樹脂。用作本發明的陽離子抗衡離子的胺化聚丙烯酸酯樹脂的一個實例為AG-4-XR(Bio-Rad)。
在本發明的又一個實施方案中，式1化合物可以以兩性離子的形式出現。換句話說，所述化合物在其分子內可既含陽離子部位又含陰離子部位。這樣的兩性離子形式可以以沒有分離的抗衡離子存在或它可以同時以陽離子抗衡離子和陰離子抗衡離子存在。
另一實施方案提供與炎症相關的疾病的治療或預防的方法，其中所述方法包括用治療或預防與炎症相關的疾病的量的本發明化合物或鹽治療有此需要的患者。
在另一實施方案中，本發明提供一種製備式21化合物或其鹽的方法 其中X選自-S-、-S(O)-和-S(O)2-。R2選自C1-C6烷基、C2-C6鏈烯基、C2-C6炔基、C1-C5烷氧基-C1烷基和C1-C5烷硫基-C1烷基；R30選自-H、-OH、-C(O)-R17、-C(O)-O-R18和-C(O)-S-R19；R1、R5、R6和R7獨立地選自-H、滷素、C1-C6烷基、C2-C6鏈烯基、C2-C6炔基和C1-C5烷氧基-C1烷基；R9和R10獨立地選自-H、C1-C6烷基、C2-C6鏈烯基、C2-C6炔基和C1-C5烷氧基-C1烷基；至於R11和R12R11選自-H、-OH、-C(O)-O-R24和-C(O)-S-R25，而R12選自-H、-OH、-C(O)-O-R26和-C(O)-S-R27；或R11為-O-，而R12為-C(O)-，其中的R11和R12與它們所連接的原子一起形成環；或R11為-C(O)-，而R12為-O-，其中R11和R12與它們所連接的原子一起形成環；R13為C1烷基；R17、R18、R19、R24、R25、R26、R27和R27a獨立選自-H和烷基，該烷基被選自環烷基、雜環基、芳基和雜芳基的一個或多個基團任選取代；當R1、R2、R4、R5、R6、R7、R9、R10、R11、R12、R13、R14、R15、R16、R17、R18、R19、R24、R25、R26、R27和R27a中的任一個獨立為選自烷基、鏈烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基的基團，那麼，該基團任選地被一或多個選自-OH、烷氧基和滷素的取代基所取代。製備化合物21的所述方法包括用具有對應於式23結構的乙亞氨酸烷基酯(或其鹽) 處理具有對應於式22結構的二胺化合物(或其鹽) 在式23中，R31為C1-C6烷基。R11優選選自-H和-OH。例如，R11可為-H。或者，R11可為-OH。當R11為-H或-OH時，R13優選為甲基或滷代甲基。更優選R13為甲基。同樣，當R11為-H或-OH時，R31優選為C1-C3烷基，更優選為乙基。在一優選實施方案中，用乙亞氨酸烷基酯處理二胺化合物可在鹼的存在下進行。例如，所述鹼可為肼、金屬硫化物、金屬氫氧化物、金屬醇鹽、胺、羥基胺、金屬氫化物、金屬氨化物絡合物或鹼性樹脂。當所述鹼為鹼性樹脂時，它可為例如聚合物-結合的二氮雜雙環[4.4.0]癸-2-烯樹脂。例如，所述鹼性樹脂可具有攜帶連接於共聚物的二氮雜雙環[4.4.0]癸-2-烯的聚(苯乙烯二乙烯苯)共聚物主鏈。當所述鹼為胺時，它基本為任何取代或未取代的胺。例如，所述胺可為1，5-二氮雜雙環[4.3.0]壬-5-烯；1，4-二氮雜雙環[2.2.2]辛烷；或1，8-二氮雜雙環[5.4.0]十一碳-7-烯。當所述鹼為鹼金屬氫氧化物時，它可為，例如，氫氧化鉀或氫氧化鈉。當所述鹼為金屬氫化物時，它可為，例如氫化鈉、氫化鉀或氫化鈣。
在本發明的另一實施方案中，提供一種製備具有對應於式22結構的二胺化合物(或其鹽)的方法，其中所述方法包括處理具有對應於式24結構的保護的二胺化合物(或其鹽) 其中R33選自-NH2和保護的氨基；R32為保護的氨基；和R14選自-H和C1-C6烷基；其中當R14為C1-C6烷基時，R14任選地被一或多個選自環烷基、雜環基、芳基和雜芳基的基團所取代；其中的處理用去保護劑進行，從而製備出所述的二胺化合物。用於本發明的保護的氨基在性質上是廣泛變化的。Theodora W.Greene和Peter G.M.Wuts(有機合成的保護基團，第3版.，John Wiley Sons，New York，1999，第494-653頁)描述了本發明使用的對R32或R33的大量保護的氨基。例如，R32或R33可各為或同為4-氯代苄基亞氨基。當R33為4-氯代苄基亞氨基時，優選R32為-NH2。在另一實施方案中，R32或R33可各為或同為叔丁氧基羰基氨基。當R33為叔丁氧基羰基氨基時，R32優選為-NH2。在另一實施方案中，R32或R33可各為或同為N-苯二甲醯亞氨基。當R33為N-苯二甲醯亞氨基時，優選R32為-NH2。在另一實施方案中，R32或R33可各為或同為苄氧基羰基氨基。在本發明的一優選實施方案中，保護的氨基為醛與相關的氨基作用生成席夫鹼的反應所產生的的任何這樣的基團。大量的去保護劑可有利地用於本發明以促進24轉化為22。Greene和Wuts描述了許多這類去保護劑(見上文)。例如，當保護的氨基為4-氯代苄基亞氨基或叔-丁氧基羰基氨基時，所述的去保護劑優選為酸。部分有用的酸去保護劑包括但不限於氫氯酸、氫溴酸、硫酸、三氟乙酸、磷酸(phosphoric acid，phosphorus acid)和乙酸。在另一實施例中，當R32或R33為N-苯二甲醯亞氨基時，所述的去保護劑既可為酸也可為鹼。當對N-苯二甲醯亞氨基的去保護劑為鹼時，所述鹼可為例如肼、金屬硫化物、金屬氫氧化物、金屬醇鹽、胺、羥胺和金屬氨化物絡合物。當對N-苯二甲醯亞氨基的去保護劑為酸時，所述酸可為例如氫氯酸、氫溴酸、氫碘酸、硫酸、甲磺酸、三氟甲磺酸、甲苯磺酸、苯磺酸、三氟乙酸、磷酸(phosphoric acid，phosphorus acid)或乙酸。優選在水的存在下用去保護劑處理化合物24。
在所述反應中，R14優選為-H。R33優選為-NH2，或其鹽。R2優選為甲基。在另一優選實施方案中，R1、R5、R6、R7、R9和R10各為-H。一個更優選的實施方案為其中R33為叔-丁氧基羰基氨基的實施方案。在特別優選的實施方案中，化合物24(或其鹽)有對應於式25的結構 其中括弧中的R指相對於羧酸官能團的α位碳在R絕對構型內。換言之，化合物25為R-對映體或其鹽。
本發明也提供一種製備保護的二胺化合物24(或其鹽)的方法，其中所述方法包括用具有式27結構的保護的氨基乙基烷基化化合物 其中的R34為親核取代的離去基團，處理具有式26結構的硫氫化合物 從而形成保護的二胺化合物。該反應優選在鹼的存在下進行。例如，所述鹼可為肼、金屬硫化物、金屬氫氧化物、金屬醇鹽、胺、羥胺和金屬氨化物絡合物。所述鹼優選為鹼金屬氫氧化物，所述鹼更優選為氫氧化鉀或氫氧化鈉。式27結構中的R34可在寬範圍內變化，並可基本上代表任何親核的離去基團，該基團生成藥學上可接受的陰離子或者可被轉化為藥學上可接受的陰離子的陰離子。也就是說，(R34)-為藥學上可接受的陰離子或可被轉化為藥學上可接受的陰離子的陰離子。例如，R34可為氯代基、溴代基、碘代基、甲磺酸鹽、甲苯磺酸鹽、苯磺酸鹽或三氟甲磺酸鹽。R34優選為氯代基、溴代基或碘代基，R34更優選為溴。在本反應中，R33優選為-NH2。在本反應中R2可為被一或多個選自-OH、烷氧基和滷素的取代基任選取代的C1-C6烷基。R2優選為被一或多個選自-OH、烷氧基和滷素的取代基任選取代的C1-C3烷基，更優選地，R2為C1-C3烷基。例如，R2可有利地為甲基。在另一實施方案中，R5的R6各自可為-H。在又一實施方案中，R1和R7可獨立地選自H和被一或多個滷素任選取代的C1-C6烷基；優選R1和R7各為-H。在本發明中，優選R32可選自4-氯代苄基亞氨基、叔丁氧基羰基氨基和N-苯二甲醯亞氨基，更優選R32為叔丁氧基羰基氨基。
本發明還提供一種製備具有式28結構的硫氫化合物的方法 其中的R2、R5和R6定義如上，所述方法包括在水解條件下處理具有式29結構的噻唑烷化合物或其鹽 其中R35為選自-H和C1-C6烷基的基團；從而生成硫氫化合物。所述水解條件優選包括在水的存在下用酸接觸噻唑烷化合物。優選地，所述酸選自氫氯酸、氫溴酸、氫碘酸、硫酸、甲磺酸、三氟甲磺酸、甲苯磺酸、苯磺酸、三氟乙酸、磷酸(phosphoric acid，phosphorus acid)和乙酸。在本發明的一個實施方案中，R5和R6各為-H。在另一實施方案中，化合物29的R2為被一或多個選自-OH、烷氧基和滷素的取代基任選取代的C1-C6烷基。R2優選為被一或多個選自烷氧基和滷素的取代基任選取代的C1-C3烷基，更優選R2為C1-C3烷基。例如，R2可為甲基。在本發明的另一實施方案中，化合物29的R35為甲基。
本發明也提供一種製備具有式30結構的甲基噻唑烷化合物(或其藥學上可接受的鹽) 的方法，其中R36為C1-C6烷基；所述方法包括在甲基化條件下處理一可脫質子化的具有式31結構的噻唑烷化合物 從而生成甲基噻唑烷化合物。優選地，甲基化條件包括用鹼或甲基化劑處理可脫質子化的噻唑烷化合物。所述鹼的性質可在寬的範圍內變化。例如，所述鹼可為金屬氫氧化物、金屬醇鹽、金屬氫化物和金屬氨化物絡合物。所述鹼優選為金屬氨化物絡合物。用作本發明的鹼的部分金屬氨化物絡合物包括但不限於六甲基二矽疊氮化鋰(hexamethyldisilazide)、六甲基二矽疊氮化鈉、六甲基二矽疊氮化物鉀、二異丙基氨化鋰、二異丙基氨化鈉、二異丙基氨化鉀、氨化鈉、氨化鋰、氨化鉀、二乙基氨化鈉、二乙基氨化鋰、二乙基氨化鉀、甲基鋰、叔丁基鋰、仲丁基鋰、甲基鈉、叔丁基鈉、仲丁基鈉和甲基鎂化溴。在所述甲基化反應中，R36可為C1-C3烷基；例如R36可為甲基。
本發明進一步提供一種製備可脫質子化的噻唑烷化合物31的方法，其中所述方法包括在稠合條件下用新戊醛接觸半胱氨酸C1-C6烷基酯，從而生成可去質子化的噻唑烷化合物。優選的稠合條件包括在鹼存在下進行接觸。所述鹼可在大範圍內變化。例如，所述鹼可為但不限於肼、金屬硫化物、金屬氫氧化物、金屬烷基鹼、金屬醇鹽、胺、羥胺和金屬氨化物絡合物。當所述鹼為金屬氨化物絡合物時，它可為，例如雙(三甲基甲矽烷基)氨化鋰。在所述稠合反應中，R36優選為C1-C3烷基，R36更優選為甲基。
本發明的另一實施方案提供一種製備具有式32結構的α-胺基酸化合物(或其鹽、對映體或外消旋體)的方法 其中R2選自C1-C6烷基、C2-C6鏈烯基、C2-C6炔基、C1-C5烷氧基-C1烷基和C1-C5烷硫基-C1烷基；R1、R5、R6和R7獨立地選自-H、滷素、C1-C6烷基、C2-C6鏈烯基、C2-C6炔基和C1-C5烷氧基-C1烷基；R9和R10獨立地選自-H、C1-C6烷基、C2-C6鏈烯基、C2-C6炔基和C1-C5烷氧基-C1烷基；且當R1、R2、R5、R6、R7、R9和R10中的任何一個獨立為選自烷基、鏈烯基和炔基的基團時，則所述的基團任選被一或多個選自-OH、烷氧基和滷素的取代基所取代；其中所述方法包括在水解條件下處理具有式33結構的乙內醯脲化合物(或其鹽、對映體，或外消旋體) 從而生成所述的α胺基酸化合物。例如，所述的水解條件可包括使乙內醯脲與酸接觸以產生酸的水解產物。用於所述水解反應的酸包括，例如，氫氯酸、氫溴酸、氫碘酸、硫酸、三氟乙酸或磷酸。α胺基酸化合物32的製備方法可進一步包括用離子交換樹脂處理所述酸的水解產物。或者，所述水解條件可包括使乙內醯脲化合物與鹼接觸以產生鹼的水解產物。用於所述鹼水解的鹼包括但不限於肼、金屬硫化物、金屬氫氧化物或金屬醇鹽。無論是鹼催化的(mediated)還是酸催化的水解，都優選化合物33結構中的R1、R5、R6和R7各為-H。也優選R9和R10各為-H。在特別優選的實施方案中，所述α-胺基酸化合物(或其鹽、對映體或外消旋體)具有式34的結構 本發明還提供一種製備具有式35結構的乙內醯脲化合物(或其鹽、對映體或外消旋體)的方法 其中R1、R2、R5、R6、R7、R9和R10定義如上，其中所述方法包括在碳酸銨來源和水的存在下，用氰化物源接觸具有式36結構的α-硫代酮化合物 從而生成乙內醯脲化合物。所述氰化物源可為例如，氰化氫或金屬氰化物鹽。當所述的氰化物源為金屬氰化物鹽時，所述鹽優選為氰化鈉、氰化鉀或氰化鋰。更優選金屬氰化物鹽為氰化鈉。對於在所述生成乙內醯脲的反應中的化合物36，R1、R5、R6和R7各優選為-H。更優選R9和R10各為-H。製備化合物35的方法可進一步包括手性分離步驟。當製備化合物35的方法還包括手性分離步驟時，那麼所述的乙內醯脲化合物產物優選具有化合物33(或其鹽或對映體)的結構。
本發明也提供一種製備α-硫代酮化合物36的方法，其中所述方法包括在鹼的存在下用碳酸二叔丁基酯接觸具有式37結構的氨基硫醇化合物 以生成中間體混合物；再使該中間體混合物與具有式38結構的α-氯代酮化合物 接觸從而生成α-硫代酮化合物。在所述反應中的鹼可在大範圍內變化。例如，所述鹼可為但不限於肼、金屬硫化物、金屬氫氧化物、金屬醇鹽、胺、羥胺和金屬氨化物絡合物。所述鹼優選為金屬氫氧化物如氫氧化鈉、氫氧化鉀或氫氧化鋰。在所述反應中，R1、R5、R6和R7各優選為-H。更優選R9和R10各為-H。
術語「藥學上可接受的鹽」包括普通用來形成鹼金屬鹽和形成游離酸或游離鹼的加成鹽的鹽。所述鹽的性質不是決定性的，只要它是藥學上可接受的。由於藥學上可接受的鹽相對於相應的母體或中性化合物而言有更大的水溶性，它們特別用作本發明的方法的產物。這類鹽必須有藥學上可接受的陰離子或陽離子。適用的本發明化合物的藥學上可接受的酸加成鹽可由無機酸或有機酸製備。這類無機酸的實例有氫氯酸、氫溴酸、氫碘酸、硝酸、碳酸、硫酸和磷酸。合適的有機酸包括來自脂肪族、環脂肪族、芳族、芳基脂肪族、雜環類、羧酸類和磺酸類有機酸，它們的實例有甲酸、乙酸、丙酸、琥珀酸、乙醇酸、葡糖酸、乳酸、蘋果酸、酒石酸、檸檬酸、抗壞血酸、glucoronic、馬來酸、富馬酸、丙酮酸、天冬氨酸、穀氨酸、苯甲酸、鄰氨基苯甲酸、甲磺酸、水楊酸、對-羥基苯甲酸、苯乙酸、扁桃酸、撲酸(pamonic)、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、磺胺酸、硬脂酸、環己基氨基磺酸、藻酸(algenic)、半乳糖醛酸。適用的本發明化合物的藥學上可接受的鹼加成鹽包括由鋁、鈣、鋰、鎂、鉀、鈉和鋅製得的金屬鹽或由N，N』-二苄基乙二胺、膽鹼、氯代普魯卡因、二乙醇胺、乙二胺、葡甲胺(N-甲基葡糖胺)和普魯卡因製得的有機鹽。可能的話，適用的本發明化合物的藥學上可接受的酸加成鹽包括衍生自無機酸，例如，氫氯酸、氫溴酸、硼酸、氟代硼酸、磷酸、偏磷酸、硝酸、碳酸(包括碳酸鹽和碳酸氫鹽陰離子)、磺酸和硫酸，和有機酸，例如，乙酸、苯磺酸、苯甲酸、檸檬酸、乙磺酸、富馬酸、葡糖酸、乙醇酸、isothionic、乳酸、乳糖酸、馬來酸、蘋果酸、甲磺酸、三氟甲磺酸、琥珀酸、甲苯磺酸、酒石酸和三氟乙酸的鹽。適用的藥學上可接受的鹼鹽包括銨鹽、鹼金屬鹽如鈉鹽和鉀鹽，及鹼土金屬鹽如鎂鹽和鈣鹽。通過將適當的酸或鹼分別與所述化合物的共軛鹼或共軛酸反應，用常規方法可由本發明化合物的相應的共軛鹼或共軛酸製備所有的這些鹽。另一種藥學上可接受的鹽為樹脂-結合的鹽。
雖然本發明的化合物有可能作為原料化學品給藥，但優選使它們作為藥用組合物存在。根據另一方面，本發明提供一種包括本發明化合物或其藥學上可接受的鹽或溶劑合物，及其一種或多種藥學上可接受的載體和任選的一或多種其它治療成分的藥用組合物。就可與製劑中的其它成分相適配而言，所述載體必須是可接受的並對其接受者無害。
所述製劑包括適於口服、不經腸(包括皮下的、真皮內的、肌內的、靜脈內的和關節內的)、直腸的和局部的(包括皮膚的、頰的、舌下的和眼內的)給藥的那些製劑，儘管最適合的途徑可能取決於例如接受者的病症和疾病。所述製劑可常規地以單位劑型存在並可通過製藥領域所熟知的任何方法製備。所有方法都包括將本發明的化合物或其藥學上可接受的鹽或溶劑合物與構成一種或多種輔助成分的載體混合的步驟。一般說來，通過均一地和緊密地將所述活性成分與液體載體或細分的固體載體或兩者混合，如需要再將所述產物成型為需要的製劑來製備所述製劑。
適用於口服給藥的本發明製劑可作為各含有預定量的活性成分的分散單位如膠囊、扁囊劑或片劑存在；作為粉劑或顆粒劑；作為含水液體液或非水液體中的溶液或懸液；或作為水包油液體乳劑或油包水液體乳劑的形式存在。所述活性成分也可作為大丸藥團(bolus)、幹藥糖劑或糊劑存在。
可通過任選與一種或多種輔助成分一起進行壓制或模壓製備片劑。通過在合適的設備內壓制任選與粘合劑、潤滑劑、惰性稀釋劑、潤滑劑、表面活性劑或分散劑混合的呈自由流動形式如粉末或顆粒的活性成分可製備壓製片劑。通過在合適的設備內對用惰性液體稀釋劑溼潤的粉末狀化合物的混合物進行模壓或製備模壓片劑。可任選地對所述片劑包衣或刻痕，以及可配製為以使其中的活性成分緩慢或控制釋放。
不經腸給藥的製劑包括含水和不含水的無菌注射液，它可含抗氧化劑、緩衝劑、抑菌劑和令所述製劑與要給予的接受者的血液等滲的溶質；及含水和不含水的可能包括懸浮劑和增稠劑的無菌懸液。所述製劑可裝於單位劑量或多單位劑量容器，例如，密封的安瓿和小瓶中，也可貯存於冷凍乾燥(凍幹)條件下，臨用前僅需加入無菌液體載體，例如，鹽水、注射用水即可。可由前述種類的無菌粉末、顆粒和片劑製備用前臨時配製的注射液和懸液。
用於直腸給藥的製劑可作為帶普通載體如可可油或聚乙二醇的栓劑存在。
用於口腔局部給藥，例如，頰下或舌下給藥的製劑，包括在矯味基質如蔗糖和阿拉伯膠或黃蓍膠中含有活性成分的錠劑，及在諸如明膠和甘油或蔗糖和阿拉伯膠的基質中含有活性成分的軟錠劑。
優選的單位劑量製劑是那些含有如下所述的有效劑量或其適當的分劑量的所述活性成分。
應該理解除了上面特別介紹的成分外，本發明的所述製劑可包括與所述製劑類型有關的本領域的其它常規試劑，例如，適於口服給藥的製劑可包括矯味劑。
本發明的化合物可以以每天0.001-2500mg/kg的劑量口服或經注射給藥。成人的劑量範圍一般為0.005mg-10g/天。以分散單位提供的片劑或其它形式可便利地含有一定量的本發明化合物，即它在這樣的劑量下或作為同樣劑量的多個分劑量，如含有5mg-500mg，通常約10mg-200mg的單位是有效的。
式1化合物優選口服或經注射(靜脈或皮下)給藥。給予患者的化合物的準確量應是主治醫師的責任。然而，所用劑量將取決於大量的因素，包括患者的年齡和性別，要治療的準確疾病及其嚴重性。給藥途徑也隨疾病及其嚴重性而變化。
本發明的化合物可以互變異構體、幾何異構體或立體異構體形式存在。本發明考慮了所有這類化合物，包括順式-和反式-幾何異構體，E-和Z-幾何異構體，R-和S-對映體、非對映體、d-異構體、l-異構體、其外消旋混合物及其其它混合物，這些都屬於本發明的範圍。這類互變異構體、幾何異構體或立體異構體形式的藥學上可接受的鹽也包括在本發明範圍內。
術語「順式」和「反式」指的是幾何異構現象的形式，其中通過雙鍵連接的兩個碳原子各有兩個在雙鍵同側(順式)或在雙鍵對側(反式)的高級(hight ranking)基團。有些所述化合物含鏈烯基，並意欲包括順式和反式或「E」和「Z」的幾何形式。
有些所述化合物含一個或多個立體中心，並對各所述的立體中心而言，意欲包括R、S及R和S形式的混合物。
在進行本發明中，下列總的合成過程是有用的。
流程1a 流程1b R＝烷基或烷氧基烷基(i)戊烷與迪安-斯達克榻分水器；(ii)HCO2Na，Ac2O，HCO2H；(iii)LiN[(CH3)3Si]2，DMPU，THF，-78℃；(iv)RI或R-SO3CF3；(v)6N HCl，回流2天。
流程1c R＝烷基或烷氧基烷基(i)NaH，NMP，Boc-NHCH2CH2Br；(ii)1NHCl；(iii)乙亞氨酸乙酯；(iv)離子交換流程2
流程3 R＝烷基(i)氯代甲酸苄酯，苯；(ii)甲苯磺醯氯，三乙胺；(iii)2-甲基-L-半胱氨酸-HCl，NaH，NMP；(iv))6NHCl回流；(v)乙亞氨酸乙酯，NaOH；(vi)離子交換。
流程4 R＝烷基(i)KHF2，nBu4NH2F3；(ii)甲苯磺醯氯，三乙胺；(iii)2-甲基-L-半胱氨酸-HCl，NaH，NMP；(iv)6NHCl，回流；(v)乙亞氨酸乙酯，NaOH；(vi)離子交換。
流程5 R＝烷基或烷氧基烷基(i)CH3OH，HCl；(ii)4-氯代苯甲醛，(CH3CH2)3N，CH3CN，MgSO4；(iii)NaN[(CH3)3Si]2，-78℃；(iv)RI；(v)HCl；(vi)乙亞氨酸乙酯，鹼；(vii)離子交換。
流程6 (i)HBr(合成1971 646-7，J Chem Soc 1961 3448-52)；(ii)K2Cr2O7；(iii)Boc-NHCH2CH2SH，NaOH，甲苯；(iv)NaCN，(NH4)2CO3，EtOH；(v)手性分離；(vi)48％ HBr；(vii)乙亞氨酸乙酯鹼；(viii)HCl。
流程7 流程8 i)NaOH；ii)乙腈，回流過夜；iii)碳酸二乙酯，叔丁醇鉀；iv)1，2-二溴代乙烷，DMF；v)NaOH，α-甲基半胱氨酸酯下列結構為本發明提供的許多化合物的示例。這裡提供的實例不打算用來限制，本領域的技術人員根據本公開會認識到本發明包括許多可選擇的結構。
下列化合物是本發明包括的其它化合物實例或是用於製備本發明的化合物。
(2R，4R)-2-叔丁基-1，3-噻唑啉-3-甲醯基-4-羧酸甲酯、(2R，4R)-2-叔丁基-1，3-噻唑啉-3-甲醯基-4-甲基-4-羧酸甲酯、S-[2-[[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸三氟乙酸鹽、(S)-1-[(苄氧基羰基)氨基]-2-丙醇、(S)-1-[(苄氧基羰基)氨基]-2-丙醇甲苯磺酸鹽、S-[(1R)-2-(苄氧基羰基氨基)-1-甲基乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸三氟乙酸鹽、S-(1R)-2-氨基-1-甲基乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸鹽酸鹽、S-(2-氨基乙基)-L-半胱氨酸，甲酯、
N-[(4-氯苯基)亞甲基]-S-[2-[[(4-氯苯基)亞甲基]氨基]乙基]-L-半胱氨酸，甲酯、N-[(4-氯苯基)亞甲基]-S-[2-[[(4-氯苯基)亞甲基]氨基]乙基]-2-甲基-D/L-半胱氨酸，甲酯。
提供下列實施例用來說明本發明而不是要限制本發明的範圍。本領域的技術人員容易理解，下列製備方法的條件和過程的改變可用來製備這些化合物。
實施例1 S-[2-[(1-亞氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸，二鹽酸鹽實施例-1A)(2R，4R)-2-叔丁基-1，3-噻唑啉-3-甲醯基-4-羧酸甲酯參見Jeanguenat和Seebach，.J.Chem.Soc.Perkin Trans.1，2291(1991)和Pattenden等.Tetrahedron，49，2131(1993)伴隨著用迪安-斯達克榻分水器(Dean-Stark trap)不斷除去水，使(R)-半胱氨酸甲酯鹽酸鹽(8.58g，50mmol)、新戊醛(8.61g，100mmol)和三乙胺(5.57g，55mmol)於戊烷(800ml)中回流。過濾並蒸發該混合物。將生成物噻唑烷(9.15g，45mmol)和甲酸鈉(3.37g，49.5mmol)於甲酸(68ml)中攪拌再於0-5℃用1小時滴加乙酐(13ml，138mmol)來處理。將所述溶液加熱到室溫並徹夜攪拌。蒸發溶劑並用含水的5％NaHCO3中和殘餘物再用乙醚(3次)萃取。乾燥合併的有機層(無水MgSO4)、過濾並蒸發得到從己烷-乙醚中結晶的白色晶體的標題化合物(8.65g)(總收率80％，8∶1構象異構體混合物)。1H NMR(CDCl3)δ主要構象異構體1.04(s，9H)，3.29(d，1H)，3.31(d，1H)，3.78(s，3H)，4.75(s，1H)，4.90(t，1H)，8.36(s，1H)。MSm/z(電霧化)232(M+H)+(100％)，204(10)164(24)。實施例-1B)(2R，4R)-2-叔丁基-1，3-噻唑啉-3-甲醯基-4-甲基-4-羧酸甲酯於-78℃、N2下，將DMPU(25ml)加入實例-1A的產物(2R，4R)-2-叔丁基-1，3-噻唑啉-3-甲醯基-4-羧酸甲酯(8.65g，37.4mmol)的無水四氫呋喃(130ml)溶液中，並攪拌所述混合物5分鐘。加入四氫呋喃中的1M雙(三甲基甲矽烷基)氨化鋰(37.5ml)，再攪拌該混合物30分鐘。加入甲基碘化物(5.84g，41.1mmol)後，將該混合物維持在-78℃4小時，然後在不斷攪拌下加熱到室溫。真空蒸發溶劑，再加入鹽水和乙酸乙酯。用EtOAc萃取該水相三次，再用10％KHSO4、水和鹽水洗滌合併的有機層。然後乾燥(無水MgSO4)、過濾並減壓汽提所有溶劑。矽膠層析殘餘的油，用1-10％EtOAc/己烷洗脫，得到標題化合物(5.78g，63％，2.4∶1構象異構體混合物)。1H NMR(CDCl3)δ主要的構象異構體1.08(s，9H)，1.77(s，3H)，2.72(d，1H)，3.31(d，1H)，3.77(s，3H)，4.63(s，1H)，8.27(s，1H)。次要的構象異構體，0.97(s，9H)，1.79(s，3H)，2.84(d，1H)，3.63(d，1H)，3.81(s，3H)，5.29(s，1H)，8.40(s，1H)；MS m/z(電霧化)246(M+H)+(100％)，188(55)160(95)。在DaicelChemical Industries Chiracel OAS柱中的保留時間16.5分鐘，10-40％IPA己烷0-25分鐘，＞95％ ee。實施例-1C)(2R)2-甲基-L-半胱氨酸鹽酸鹽在N2下，將實施例-1B的產物(2R，4R)-2-叔丁基-1，3-噻唑啉-3-甲醯基-4-甲基-4-羧酸甲酯(5.7g，23.2mmol)與6N HCl(100ml)一同攪拌並劇烈回流2天。冷卻該溶液，用EtOAc洗滌並蒸發得到淡黃色粉末狀產物(2R)2-甲基-半胱氨酸鹽酸鹽(3.79g，95％)。1H NMR(DMSO-d6)δ1.48(s，3H)2.82(t，1H)，2.96(bs，2H)，8.48(s，3H)。MS m/z(電霧化)136[M+H+]。實施例-1D)S-[2-[[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸三氟乙酸鹽將氫化鈉(2.6g，60％在礦物油中，65mmol)加入烘箱-乾燥的、真空冷卻過的、裝有無氧1-甲基-2-吡咯烷酮(5ml)的RB燒瓶中。將該混合物冷卻到-10℃並在N2下攪拌。分批加入溶於無氧1-甲基-2-吡咯烷酮(25ml)中的實施例-1C的產物2-甲基-L-半胱氨酸鹽酸鹽(3.6g，21.0mmol)。全部H2停止釋放後，於-10℃，加入溶於無氧1-甲基-2-吡咯烷酮(15ml)中的2-[(1，1-二甲基乙氧基羰基)-氨基]乙基溴(4.94g，21mmol)。再攪拌該反應物4小時，加熱到室溫。用1N HCl中和所述溶液，再通過真空蒸發除去1-甲基-2-吡咯烷酮。採用0.05％含水三氟乙酸溶液中的1-20％乙腈的反相層析得到標題化合物(5.9g)，經凍幹適當的流分回收。1H NMR(DMSO-d6/D2O)δ1.31(s，9H)，1.39(s，3H)，2.55(m，2H)，2.78(d，1H)，3.04(d，1H)，3.06(t，2H)。對C11H22N2O4S的HRMS計算值279.1375(M+H+)，實測值279.1379。實施例-1E)S-(2-氨基乙基)-2-甲基-L-半胱氨酸鹽酸鹽將實施例-1D的產物S-[2-[[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸三氟乙酸鹽(5.5g，14.0mmol)溶於1N HCl(100ml)中並在氮氣、室溫下攪拌過夜。凍幹除去所述溶液得到目標物S-(2-氨基乙基)-2-甲基-L-半胱氨酸鹽酸鹽，1H NMR(DMSO-d6/D2O)δ1.43(s，3H)，2.72(m，2H)，2.85(d，1H)，2.95(t，2H)，3.07(d，1H)。M/z[M+H+]179。
將實施例-1E的產物溶於H2O中，用1N NaOH將pH調節到10，再加入乙亞氨酸乙脂鹽酸鹽(1.73g，14.0mmol)。攪拌反應物15-30分鐘，將pH值提高到10，重複該過程三次。用HCl將pH調節到3，再將該溶液裝入洗滌過的DOWEX 50WX4-200柱中。用H2O和0.25MNH4OH洗滌該柱，接著用0.5M NH4OH洗滌。將0.5M NH4OH的洗液部分立即冷凍、合併及凍幹，得到一種油，再將其溶於1N HCl並蒸發得到白色固體的標題化合物(2.7g)。1H NMR(DMSO-d6/D2O)δ1.17(s，3H)，2.08(s，3H)，2.52(d，1H)，2.68(m，2H)，2.94(d，1H)，3.23(t，2H)。對C8H18N3O2S的HRMS計算值220.1120[M+H+]，實測值220.1133。
實施例2 2-[[[2-[(1-亞氨基乙基)氨基]乙基]硫代]甲基]-O-甲基-D-絲氨酸，二鹽酸鹽用於本實施例的步驟和方法與實施例1的那些步驟和方法相同，除了用甲氧基甲基碘代替實施例-1B步驟中的甲基碘外。這些方法產生為白色固體的標題產物(2.7g)。1H NMR (D2O)δ 2.06(s，3H)，2.70(m，3H)，3.05(d，1H)，3.23(s，3H)，3.32(t，2H)，3.46(d，1H)，3.62(d，1H)。對C9H20N3O3S的HRMS計算值250.1225[M+H+]，實測值250.1228。
實施例3 S-[(1R)-2-[(1-亞氨基乙基)氨基]-1-甲基乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸，二鹽酸鹽實施例-3A(S)-1-[(苄氧基羰基)氨基]-2-丙醇O℃下，用20分鐘時間，向(S)-1-氨基-2-丙醇(9.76g，130mmol)的無水苯(60ml)溶液中緩慢、分批加入無水苯(120ml)中的氯代甲酸苄基酯(10.23g，60mmol)，同時在氮氣氛圍下劇烈攪拌。於0℃攪拌所述混合物1小時，再將其加熱到室溫並再攪拌2小時。在有機層經無水MgSO4乾燥前用水(兩次)和鹽水(兩次)洗滌該混合物。蒸發所有溶劑得到油狀的標題產物。1H NMR(CDCl3)δ1.22(d，3H)，2.40(bs，1H)，3.07(m，1H)，3.37(m，1H)，3.94(m，1H)，5.16(s，2H)，5.27(m，1H)，7.38(m，5H)。MS m/z(電霧化)232[M+23]+(100％)，166(96)。實施例-3B)(S)-1-[(苄氧基羰基)氨基]-2-丙醇甲苯磺酸鹽於0℃下，用20分鐘時間，向實施例-3A的產物(S)-1-[(苄氧基羰基)氨基]-2-丙醇(9.74g，46.7mmol)和三乙胺(7.27g，72mmol)的二氯甲烷(60ml)溶液中緩慢、分批加入在二氯甲烷(18ml)中的甲苯黃醯氯(9.15g，48mmol)，同時在氮氣下劇烈攪拌。將該混合物加熱到室溫並再在氮氣下攪拌36小時。在經無水MgSO4乾燥前用1N HCl、水、5％NaHCO3溶液、水和鹽水洗滌該有機層。蒸發全部溶劑得到白色固體，使它通過過含有乙酸乙酯/己烷(1∶4)的二氧化矽柱，以除去過量的甲苯磺醯氯，然後用乙酸乙酯/己烷(1∶3)洗脫，得到白色晶狀的標題產物。將這些物質在乙酸乙酯/己烷中重結晶得到白色針狀物(10.8g)。1HNMR(CDCl3)δ1.22(d，3H)，2.39(s，3H)，3.20(m，1H)，3.43(dd，1H)，4.66(m，1H)，5.02(m，1H)，5.04(ABq，2H)，7.34(m，7H)，7.77(d，2H)。MS m/z(電霧化)386[M+23]+(100％)，320(66)。在RegisTechnologies Inc.Perkle Covalent(R，R)β-GEM1 HPLC柱中測定所述產物，用流動相異丙醇/己烷和10％異丙醇梯度液5分鐘，然後10-40％異丙醇25分鐘，使用紫外線和Laser Polarimetry檢測器。保留時間主要峰值22.2分鐘，＞98％ee。實施例-3C)S-[(1R)-2-(苄氧基羰基氨基)-1-甲基乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸三氟乙酸酯將溶於無氧1-甲基-2-吡咯烷酮(5ml)中的實施例-1C的產物2-甲基-L-半胱氨酸鹽酸鹽(1g，6.5mmol)加至經烘箱-乾燥的、用N2吹洗過的圓底燒瓶中，再將系統冷卻到0℃。加入氫化鈉(0.86g，60％在礦物油中，20.1mmol)，於0℃下攪拌該混合物15分鐘。用10分鐘加入溶於無氧1-甲基-2-吡咯烷酮(10ml)中的實施例-3B產物(2S)-1-[(N-苄氧基羰基)氨基]-2-丙醇甲苯磺酸鹽(2.5g，7mmol)的溶液。於0℃15分鐘後，將反應混合物在室溫下攪拌4.5小時。再用1N HCl酸化該溶液至pH 4，通過真空蒸發除去1-甲基-2-吡咯烷酮。反相層析，用在0.05％三氟乙酸水溶液中的20-40％乙腈洗脫，得到經凍幹回收的標題化合物(0.57g)。1H NMR(H2O，400MHz)δ1.0(d，3H)，1.4(s，3H)，2.6(m，2H)，2.8(m，1H)，3.1(m，2H)，3.6(s，1H)，5.0(ABq，2H)，7.3(m，5H)。MS m/z(電霧化)327[M+H+](100％)，238(20)，224(10)和100(25)。實施例-3D)S-[(1R)-2-氨基-1-甲基乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸鹽酸鹽將實施例-3C的產物S-[(1R)-2-(苄氧基羰基氨基)-1-甲基乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸三氟乙酸鹽(0.5g，1.14mmol)溶於6N HCl中並回流1.5小時。再將該混合物冷卻到室溫，用EtOAc萃取。真空濃縮水層得到標題產物(2R，5R)-S-(1-氨基-2-丙基)-2-甲基-半胱氨酸鹽酸鹽(0.29g)，該產物無需進一步提純而使用。1H NMR(H2O，400MHz)δ1.2(m，3H)，1.4(m，3H)，2.7(m，1H)，2.8-3.2(m，2)，3.4(m，1H)，(有些源於旋轉異構體形式的雙峰)。MS m/z(電霧化)193[M+H+](61％)，176(53)，142(34)，134(100)和102(10)。
將實施例-3D的產物S-[(1R)-2-氨基-1-甲基乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸鹽酸鹽(0.2g，0.76mmol)溶解於2ml H2O中，用1N NaOH將pH調節至10.0，用10分鐘分四批加入乙亞氨酸乙酯鹽酸鹽(0.38g，3mmol)，如需要用1N NaOH將pH調節至10.0。1小時後，用1N HCl將pH調至3。將該溶液裝入水洗過的DOWEX 50WX4-200柱中。用H2O和0.5N NH4OH洗滌該柱。合併鹼性流分並真空濃縮至幹。用1NHCl酸化殘餘物並濃縮得到實施例3的標題化合物(49mg)。1H NMR(H2O，400MHz)δ1.3-1.0(m，3H)，1.5(m，3H)，2.1-1.8(m，3H)，3.4-2.6(m，5H)，3.6(m，1H)(觀察到旋轉異構體)。MSm/z(電霧化)234[M+H+](100％)，176(10)和134(10)。
實施例4 S-[(1S-2-[(1-亞氨基乙基)氨基]-1-甲基乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸，二鹽酸鹽此處所用步驟和方法與實施例3中的相同，除用(R)-1-氨基-2-丙醇代替步驟實施例-3A中的(S)-1-氨基-2-丙醇外，得到所述目標物質S-[(1S)-2-[(1-亞氨基乙基)氨基]-1-甲基乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸鹽酸鹽。1H NMR(H2O，400MHz)δ 3.6(m，1H)，3.4-2.6(m，5H)，2.1-1.8(m，3H)，1.5(m，3H)和1.3-1.0(m，3H)。對C9H19N3O2S[M+H+]的HRMS計算值234.1276的，實測值234.1286。
實施例5 S-(1R/S)-2-[(1-亞氨基乙基)氨基]-1-乙基乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸，二鹽酸鹽用於此合成的步驟和方法與實施例3的相同，除用(R/S)-1-氨基-2-丁醇代替步驟實施例-3A中的(S)-1-氨基-2-丙醇外。
實施例6 S-[(1S)-2-[(1-亞氨基乙基)氨基]-1-(氟代甲基)乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸，二鹽酸鹽在催化劑正Bu4NH2F3存在下，用氟氫化鉀(potassium hydrogendifluoride)處理2-[(2R)-環氧乙烷基甲基]-1H-異吲哚-1，3-二酮(G.Alexander等.Tetrahedron Asymmetry，7，1641-8，1996)的樣品得到2-[(2R)-3-氟-2-羥丙基]-1H-異吲哚-1，3-二酮。在該合成中所用的步驟和方法與實施例3的相同，除用2-[(2R)-3-氟-2-羥丙基]-1H-異吲哚-1，3-二酮代替步驟實施例-3B中的(S)-1-[(苄氧基羰基)氨基]-2-丙醇外，製備標題產物。
實施例7 S-[2-[(1-亞氨基乙基)氨基]乙基]-2-乙基-L-半胱氨酸，二鹽酸鹽用於本合成的步驟與方法與實施例1的步驟與方法相同，除用三氟甲磺酸乙酯代替實施例-1B中的甲基碘外。採用反相層析，用水中10-40％乙腈梯度液，提純標題產物(20％得率)。1H NMR(D2O)δ0.83(t，3H)，1.80(m，2H)，2.08(s，3H)，2.68(m，1H)，2.78(m，1H)，2.83(m，1H)，3.11(m，1H)，3.36(t，2H)。對C9H20N3O2S的HRMS計算值234.1276[M+H+]，實測值234.1284。
實施例8 S-[(1R)-2-[(1-亞氨基乙基)氨基]-1-甲基乙基]-2-乙基-L-半胱氨酸，二鹽酸鹽在該合成中所用的步驟和方法與實施例1相同，除用三氟甲磺酸乙酯代替實施例-1B中的甲基碘外。這樣製得的2-乙基-L-半胱氨酸鹽酸鹽如實施例3C-3E的步驟和方法中所述處理得到標題化合物。
實施例9 S-[(1R/S)-2-[(1-亞氨基乙基)氨基]-1-乙基乙基]-2-乙基-L-半胱氨酸，二鹽酸鹽本合成所用的步驟和方法與實施例5所用的步驟和方法相同，除用2-乙基-L-半胱氨酸鹽酸鹽(在實施例7中製備)代替2-甲基-L-半胱氨酸鹽酸鹽外，得到標題化合物。
實施例10
S-(1S)-2-[(1-亞氨基乙基)氨基]-1-氟代甲基乙基]-2-乙基-L-半胱氨酸，二鹽酸鹽本合成所用的步驟和方法與實施例6所用的步驟和方法相同，除用(2R)-2-乙基半胱氨酸鹽酸鹽(在實施例7中製備)代替(2R)-2-甲基半胱氨酸鹽酸鹽外，得到標題化合物。
實施例11 2-[[[[2-(1-亞氨基乙基)氨基]乙基]硫代]甲基]-D-纈氨酸，二鹽酸鹽實施例11a)三氟甲磺酸異丙基酯在氮氣下，用乙醚(200ml)中的異丙基碘(16.54g，98.5mmol)處理於乙醚(300ml)中攪拌的三氟甲磺酸銀(25.25g，98.3mmol)15分鐘。攪拌該混合物10分鐘再過濾。減壓蒸餾濾液。在大氣壓力下再蒸餾該蒸餾物以除去大部分乙醚，留下無色液體狀的標題三氟甲磺酸異丙基酯-二乙醚(84∶16重量比)的混合物(15.64g，校正後70％)。1H NMR(CDCl3O，400MHz)δ1.52(d，6H)，5.21(七重峰，1H)。
在此所用的步驟和方法與實施例1所用的相同，除用三氟甲磺酸異丙基酯代替實施例-1B中的甲基碘外。粗標題產物經反相層析提純，用在水中的10-40％乙腈的梯度洗脫液洗脫。1H NMR(H2O，400MHz)δ0.94(dd，6H)，2.04(七重峰，1H)，2.10(s，3H)，2.65，2.80(dm，2H)，2.85，3.10(dd，2H)，3.37(t，2H)。對C10H22N3O2S的HRMS計算值248.1433[M+H+]，實測值248.1450。
實施例12 2-[[[(1R)-2-[(1-亞氨基乙基)氨基]-1-甲基乙基]硫代]甲基]-D-纈氨酸，二鹽酸鹽本合成所用的步驟和方法與實施例3所用的相同，除用三氟甲磺酸異丙基酯(在實施例-11A中製備)代替甲基碘外，得到標題化合物。
實施例13 2-[[[(1R/S)-2-(1-亞氨基乙基)氨基)-1-乙基乙基]硫代]甲基]-D-纈氨酸，二鹽酸鹽本合成所用的步驟和方法與實施例5所用的那些相同，除用(2R)-2-三氟甲磺酸異丙基酯(於實施例-11A中製備)代替甲基碘外，得到標題化合物。
實施例14
2-[[[(1S)-2-[(1-亞氨基乙基)氨基]-1-氟代甲基乙基]硫代]甲基]-D-纈氨酸，二鹽酸鹽本合成所用的步驟和方法與實施例6所用的相同，除用(2R)-2-三氟甲磺酸異丙基酯(於實施例-11A中製備)代替甲基碘外，得到標題化合物。
實施例15 S-[(R/S)-2-[(1-亞氨基乙基)氨基]-1-(三氟甲基)乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸，二鹽酸鹽用溴化1，1，1-三氟乙基鎂處理叔丁基-N-(2-氧代乙基)氨基甲酸酯得到(R/S)-1-[(1，1-二甲基乙氧基羰基)]氨基-4，4，4-三氟-2-丁醇。用於本合成的步驟和方法與實施例3所列的那些相同，除用(R/S)-1-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]氨基-4，4，4-三氟-2-丁醇代替(S)-1-[(苄氧基羰基)氨基]-2-丙醇外，得到標題化合物。
實施例16 S-2-(1-亞氨基乙基氨基)乙基]-2-甲基-(D/L)-半胱氨酸，雙三氟乙酸鹽實施例-16A)S-(2-氨基乙基)-L-半胱氨酸，甲酯將10g(50mmol)S-(2-氨基乙基)-L-半胱氨酸樣品溶解於400mL甲醇中。將無水HCl鼓泡通過該冷卻的溶液30分鐘。在室溫下攪拌過夜後，濃縮該溶液得到12.7g標題化合物。實施例-16B)N-[(4-氯苯基)亞甲基]-S-[2-[[(4-氯代苯基)亞甲基]氨基]乙基]-L-半胱氨酸，甲酯將實施例-16A的產物S-(2-氨基乙基)-L-半胱氨酸甲酯的樣品12.7g(50mmol)溶解於乙腈中。向該溶液中加入12.2g(100mmol)無水MgSO4、14g(100mmol)4-氯代苯甲醛和100mmol三乙胺。攪拌該混合物12小時，濃縮至小體積再用500mL乙酸乙酯稀釋。連續用(0.1％)NaHCO3、(2N)NaOH和鹽水溶液洗滌該有機溶液。該有機物經乾燥(無水MgSO4)、過濾和濃縮得到7.5g標題化合物。[M+H+]＝179。實施例-16C)N-[4-氯苯基)亞甲基]-S-[2-[[(4-氯苯基)亞甲基]氨基]乙基]-2-甲基-D/L-半胱氨酸甲酯於-78℃、氮氣下，用17mmol雙(三甲基甲矽烷基)氨化鈉處理無水THF中的實施例-16B的產物N-[(4-氯苯基)亞甲基]-S-[2-[[(4-氯代苯基)亞甲基]氨基]乙基]-L-半胱氨酸甲酯的樣品(7.5g，17mmol)，再用2.4g(17mmol)甲基碘處理。將該溶液在-78℃保持4小時，再邊連續攪拌邊加熱到室溫。真空蒸發其溶劑並加入鹽水和乙酸乙酯。用EtOAc萃取水相三次，用10％KHSO4、水和鹽水洗滌合併的有機層，然後乾燥(無水MgSO4)、過濾和蒸發得到標題化合物。實施例-16D)S-(2-氨基乙基)-2-甲基-D/L-半胱氨酸，鹽酸鹽將實施例-16C的產物N-[4-氯苯基)亞甲基]-S-[2-[[(4-氯苯基)亞甲基]氨基]乙基]-2-甲基-D/L-半胱氨酸甲酯的樣品(4.37g，10mmol)與2NHCl一起徹夜攪拌和加熱(60℃)，再用乙酸乙酯洗滌該溶液三次。凍幹該水溶液得到標題化合物。
將實施例-16D的產物S-(2-氨基乙基)-2-甲基-D/L半胱氨酸二鹽酸鹽的樣品(2.5g，10mmol)溶解於H2O中，用1N NaOH將pH調至10。將乙亞氨酸乙酯鹽酸鹽(1.24g，10.0mmol)加入該反應混合物中。攪拌反應物15-30分鐘，pH提高到10，重複該過程三次。用HCl溶液降低pH至4，蒸發該溶液。經反相HPLC提純殘餘物，用含0.05％三氟乙酸的H2O作為流動相，得到實施例16的標題產物。M+H＝220。
實施例17 S-[2-[(1-亞氨基乙基)氨基]乙基]-2-氟代甲基-L-半胱氨酸，二鹽酸鹽用HF-吡啶處理表溴醇得到二滷代醇，用K2Cr2O7將其氧化得到1-溴-3-氟代丙酮。在NaOH存在下，用(1，1-甲基乙氧基)-N-(2-硫基(sulfanyl)乙基)甲醯胺處理該產物得到(1，1-二甲基乙氧基)-N-[2-(3-氟-2-氧代丙硫基)乙基]甲醯胺。在回流的乙醇中通過NaCN和(NH4)2CO3將其環化成外消旋的乙內醯脲，並用手性層析分離該對映體。用熱48％HBr溶液處理S-對映體，得到S-(2-氨基乙基)-2-氟代甲基-L-半胱氨酸二鹽酸鹽，在鹼的存在下，通過用乙亞氨酸乙酯處理將其轉化為標題化合物。
實施例18 (2R)-2-氨基-3[[2-[(1-亞氨基乙基)氨基]乙基]亞硫醯基]-2-甲基丙酸，二鹽酸鹽將3ml水中的S-[2-[(1-亞氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸，二鹽酸鹽(實施例1，0.2g，0.73mmol)溶液攪拌並冷卻至0℃，以0.3ml為一份分批加入3％H2O2(0.8ml，0.73mmol)的甲酸(0.4ml，0.73mmol)溶液。移走冷浴，將反應混合物於室溫下攪拌48小時。真空濃縮該溶液、用水(10ml)稀釋並再次濃縮得到粗品碸。該殘餘物經層析(C-18反相。用含0.05％三氟乙酸的H2O的移動相)得到純碸。用1M HCl(10ml)處理該碸並真空濃縮得到140mg標題化合物的兩種非對映體混合物，為無色油狀的HCl鹽。1H NMR(300MHz，D2O)δ1.5(s，2H)，1.6(s，1H)，2.0(s，3H)，3.1(m，2H)，3.3(m，2H)，3.6(m，2H)。對C8H18N3O3S的HRMS計算值236.1069[M+H+]，實測值236.1024。
實施例19 (2R)-2-氨基-3[[2-[(1-亞氨基乙基)氨基]乙基]磺醯基]-2-甲基丙酸二鹽酸鹽將在2ml水中的實施例1產物S-[2-[(1-亞氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸，二鹽酸鹽(0.15g，0.54mmol)溶液冷卻至0℃，加入3％ H2O2(1.6ml，1.46mmol)的甲酸(0.8ml，14.6mmol)溶液。移走冷浴，將反應混合物於室溫下攪拌18小時。真空濃縮該溶液、用10ml水稀釋並再次濃縮得到粗品亞碸。該殘餘物用4ml水稀釋並用2.5NNaOH將pH調至9。加入丙酮(5ml)，再加入Boc2O(0.2g)，在室溫下攪拌該反應物48小時。用1M HCl調節該反應混合物到pH 6，再真空濃縮。層析(C-18反相；40-50％ACNH2O，0.05％ TFA)殘餘物得到純Boc保護的原料。真空濃縮該流份，殘餘物用1N HCl(3ml)處理1小時。濃縮該溶液得到30mg無色油狀的標題化合物。1H NMR(400MHz，D2O)δ4.0(d，1H)，3.7(d，1H)，3.6(t，2h)，3.5(t，2h)，2.1(s，3H)和1.5(s，3h)ppm。對C8H18N3O4S的HRMS計算值252.1018[M+H+]的，實測值252.0992。
實施例20 S-2-[(1-亞氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸用水洗滌在玻璃層析柱(38X 560mm)中的DOWEX 50WX4-200(250g)直到洗脫液的pH為6。將溶解於水中的實施例1的產物S-[2-[(1-亞氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸二鹽酸鹽(6g)溶液放入所述柱中，用水洗至pH回到6。再用0.07M NH4OH(流速約為15ml/min)洗滌該柱，將鹼性流分立即放入乾冰/丙酮浴中。收集該流分並經凍幹濃縮至幹得到標題化合物。1H NMR(400MHz，DMSOd6)δ3.4(m，1H)，3.3(m，1H)，3.0(d，1H)，2.7(m，1H)，2.4(m，1H)，2.3(d，1H)，2.1(s，3H)和1.1(s，3H)。對C8H17N3O2S+0.6H2O的分析計算值C41.76，H7.97，N18.26；實測值C41.43，H7.47，N17.96，Cl痕量。
實施例21 S-[2-[(1-亞氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱胺酸，二鹽酸鹽實施例-21A)(2R，4R)-2-叔丁基-1，3-噻唑啉-3-甲醯基-4-羧酸甲酯 根據J.Chem.Soc.Perkin Trans.1991第2291頁和Tetrahedron 1993第2131頁所述製備標題物質。向裝配有回流冷凝器、迪安-斯達克榻分水器、塔頂攪拌器和熱電偶的2L RB燒瓶中加入溶於700ml甲苯中的新戊醛(23.7g，0.275mole)。開始攪拌並將L-半胱氨酸甲酯鹽酸鹽(45g，0.262mole)加入攪拌的溶液中。用幾分鐘向該批中加入三乙胺(29.2g，0.288moles)流。對該反應混合物加熱至回流，再除去水。將該批加熱共3小時，冷卻並過濾。用250ml新鮮甲苯洗滌所述鹽的濾餅，合併洗液。再加入甲酸(24.1g，0.524moles)和固體甲酸鈉(19.6g，0.288moles)，再將生成的懸浮液冷卻至-5℃。向該混合物中小心加入乙酐(53.5g，0.524moles)，保持該批的溫度在5℃以下。加入後，將反應物保持在室溫，持續攪拌18小時，在此期間沉澱出產物。將粗產物過濾並再溶解於400ml EtOAc並過濾除去不溶性鈉鹽。再用200ml飽和碳酸氫鈉溶液中和該有機溶液，最終的含水層的pH接近7。分離該有機相用乙酸乙酯萃取該含水層。合併有機層並濃縮得到粗產物(60.2g)，為粘性油，它可慢慢結晶成白色固體。用含4％ 2-丙醇的環己烷洗滌該固體，得到41.01g純度＞99.5％的標題產物，經GC確定得率為67.8％。所需的標題產物順式異構體佔98％以上。實施例-21B)(2R，4R)-2-叔丁基-1，3-噻唑啉-3-甲醯基-4-甲基-4-羧酸甲酯 將無水氯化鋰(43.0g，0.102moles)與300ml二甲氧基乙烷和500mlTHF混合直至得到澄清溶液。在氮氣氛圍下加入實施例-21A的產物(50.0g，0.216moles)的THF溶液並冷卻至-65℃。加入用45ml THF稀釋過的碘代甲烷(45.0g，0.316moles)，接著加入230ml 1.0M THF雙-三甲基三甲矽烷基氨化鋰溶液。於-65℃下攪拌該反應物10小時。用在600ml水中的30g乙酸令該批反應物猝滅。並用500ml乙酸乙酯萃取。用飽和碳酸氫鈉洗滌有機層並濃縮得到51.22g(96％)淺棕色固體的標題化合物。實施例-21C)(2R)2-甲基-L-半胱氨酸鹽酸鹽 將實施例-21B的產物的樣品(20g，83mmoles)置於裝配有頂部攪拌器和回流冷凝器的圓底燒瓶中。向該固體中加入100ml濃鹽酸。將該反應物緩慢加熱至於95℃7天。再用250ml甲苯處理該反應物以除去非極性有機雜質。然後濃縮該水溶液。得到重14g的橙色樹脂的粗標題產物。將該樹脂在乙醚/二氯甲烷中研成粉並過濾得到13g淡棕色吸溼性粉末的標題物質。1H NMR(D2O)δ4.70(s，HDO交換)，3.08(d，1H)，2.80(d，1H)，1.48(s，3H)。實施例-21D)2-[(1，1-二甲基乙氧基羰基)-氨基]乙基溴 將3升乙酸乙酯置於裝配有頂部攪拌器、熱電偶和氮氣入口的5L圓底燒瓶中，開始攪拌。在氮氣覆蓋下向其中加入二碳酸二叔丁基酯(545g，2.50moles)和2-溴代乙胺氫溴酸鹽(553.7g，2.70moles)。在冰浴中該反應物冷卻至5℃，用約半小時逐滴加入N-甲基嗎啉(273g，2.70moles)。完成加入後，將該批反應物攪拌過夜並加熱到室溫。16小時後，通過加入1.5L去離子水使其猝滅。用稀HCl、碳酸氫鈉溶液，接著用鹽水洗滌有機層。除去乾燥過的有機溶液的溶劑得到凍成淺黃色固體的油。所得標題產物的總量496g(88％得率)、純度約96％。實施例-21E)S-[2-[[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸乙酸酯 將435g甲醇裝入裝配有頂部攪拌器、熱電偶的3L燒瓶中，並保存於N2氛圍中。向該反應燒瓶中小心加入150.0g(0.804moles)的實施例-21C的產物，同時攪拌至溶解。將通過溶解154.7g固體KOH於840ml脫氣甲醇中製得的KOH溶液逐滴加入該反應溶液中，並保持溫度為20-30℃。將實施例-21C的產物(180.2g，0.804moles)溶解於375mL的甲醇中，再用1小時，於10-12℃將該溶液逐滴加入冷反應混合物中。當該反應完成後，將該批反應物的pH值調節至pH 5。再經Celite墊過濾該反應混合物，濃縮濾液得到454g褐色固體產物。用乙酸乙酯將該粗產物淤漿化得到灰白色固體299g。該粗標題產物固體無需提純用於下一步驟。1H NMR作為乙酸酯(D2O)δ4.68(s，D2O交換)，3.12(m，3H)，2.68(m，3H)，1.83(s，3H)，1.42(s，3H)，1.32(s，9H)。實施例-21F)S-(2-氨基乙基)-2-甲基-L-半胱氨酸 向裝配有頂部攪拌器和氮氣清掃裝置的圓底燒瓶中加入150ml37％鹽酸。開動攪拌器並將150ml水加入該容器，接著加入173g實施例-21E的粗產物。攪拌該反應物兩小時，濃縮該棕色澄清的溶液得到棕色漿狀的粗品標題產物的二HCl鹽(約157g)。將其再溶解於200ml水中，用活性碳脫色。使該溶液通過Dowex樹脂柱，再用氫氧化銨水溶液洗脫中性的標題產物，得到64％、純度約94％的這種物質。1H NMR(D2O，300MHz)δ4.68(s，D2O交換)，2.9(m，3H)，2.6(m，3H)，1.20(s，3H)。
在圓底燒瓶中，將38g結合有三氮雜雙環[4.4.0]癸-5-烯樹脂(Fluka)的聚合物懸浮於160ml乙醇中。將40ml乙醇中的實施例21F的胺基酸產物(7.5g)加入該攪拌的樹脂漿中。將6.5g(53mmoles)乙亞氨酸乙酯分批加入該反應物。在氮氣下攪拌該反應物16小時。過濾該樹脂並用100ml含10ml濃HCl的乙醇洗滌過濾器。濃縮合併的濾液得到12g淺棕色的粘性半固體的粗標題產物。得率約為60-70％，標題產物純度顯示為90％。用反相層析進一步提純該標題產物。1H NMR(D2O)δ4.74(s，D2O交換)3.37(t，2H)，3.08(d，1H)，2.93(d，1H)，2.74(m，2H)，2.06(s，3H)，1.48(s，3H)。
實施例22 S-[2-[(1-亞氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸，二鹽酸鹽實施例-22A) N-Boc-半胱胺 用氮氣吹洗3L的4-頸RB燒瓶20分鐘，再相繼加入2-氨基乙硫醇鹽酸鹽(113.6g，1mol)、二碳酸二-叔丁基酯(218.3g，1mol)和500ml甲苯。用冰水浴冷卻該混合物並用氮氣吹掃10分鐘。於0-11℃用約1.5小時將氫氧化鈉(2.5N，880ml，2.2mol)加入該攪拌的混合物中。完成氫氧化物的加入後，移走冷浴，將生成的反應混合物加熱至室溫並於室溫下攪拌過夜。得到所述標題化合物的溶液。實施例-22B) 用冰-水浴冷卻實施例-22A的產物溶液。於8-11℃用約50分鐘將氯代丙酮(101.8g，1.1mol)樣品加入劇烈攪拌的反應混合物。完成氯代丙酮的加入後，移去冷卻浴，將生成的反應混合物於室溫下攪拌過夜。分離甲苯層，用水(250ml)洗滌並在旋轉蒸發器中於85℃室真空濃縮、接著用高真空濃縮，得到粗標題化合物(225.7g，96.7％)。1HNMR(CDCl3，400MHz)δ4.95(bs，1H)3.20(m，4H)，2.54(t，2H)，2.20(s，3H)，1.35(s，9H)。實施例-22C)[2-[[(4-甲基-2，5-二氧代-4-咪唑烷基)甲基]硫代]乙基]氨基甲酸，1，1-二甲基乙基酯 向裝配有頂部攪拌器、熱電偶和聯著一個空燒杯的冷凝器和鹼處理器(caustic trap)的3L 4-頸RB燒瓶中依次加入實施例-22B的產物(70g，0.3mol)、無水乙醇(80ml)、氰化鈉(19.1g，0.39mol)、碳酸銨(43.3g，0.45mol)和水(720mol)。用塞子塞住第4個頸口。所生成的反應混合物於67-68℃加熱6小時。接著，將幾乎澄清的棕色溶液冷卻至室溫。一旦冷卻，即開始形成固體並於室溫下將該多相混合物攪拌過夜。再於-2至2℃，用約1小時用12％鹽酸將反應混合物酸化到pH 2。將該冷卻的反應混合物於pH 2下再攪拌30分鐘，然後過濾。用蒸餾水(2×250ml)漂洗該燒瓶，將每次漂洗液用來洗滌固體餅狀物。該固體再用蒸餾水(2×250ml)洗滌，再風乾四天。用200ml甲苯研磨該乾燥固體半小時。過濾該漿狀物。連續用甲苯(50ml)和1∶4的甲苯/己烷(100ml)漂洗該固體，再於室溫下風乾過夜得到83.1％得率的標題化合物，熔點134-136℃。1H NMR(DMSOd6，400MHz)δ10.62(s，1H)，7.85(s，1H)，6.83(m，0.9H)，6.48(bs，0.1H)，3.29(s，2H)，2.99(m，2H)，2.71(s，2H)，2.95(m，2H)，1.32(s，9H)，1.24(s，3H)；13C NMR(DMSOd6，400MHz)，δ178.1，157.1，156.1，78.4，63.7，40.7，39.4，33.2，28.9，23.8。對C12H21N3O4S的分析計算值C，47.51，H，6.98；N，13.85；S，10.57。實測值C，47.76，H，6.88，N，13.77；S，10.75。實施例-22D)R和S-[2-[[(4-甲基-2，5-二氧代-4-咪唑烷基)甲基]硫代]乙基]氨基甲酸，1，1-二甲基乙基酯 S對映體 R對映體在Chiralpark AD柱上將實施例-22C的反應產物分離成它的R和S對映體，用甲醇洗脫。先洗脫出S異構體，接著洗脫出其R對映異構體。兩種異構體用於後繼轉化反應。S對映異構體[α]於MeOH中，25℃＝+43.0(365nm)。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ1.49(s，9H)，2.05(s，3H)，2.65(t，2H)，2.9(q，2H，d)，3.20(m，2H)。IRλcm-1＝1772，1709。對C12H21N3O4S(式量＝303.38)的分析計算值C，47.51，H，6.98；N，13.85。實測值C，47.39，H，6.62，N，13.83。M+H＝304.R對映異構體[α]於MeOH中，25℃＝-46.3(365nm)。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ1.48(s，9H)，2.05(s，3H)，2.65(t，2H)，2.85(q，2H，d)，3.18(m，2H)。IRλcm-1＝1770，1711。對C12H21N3O4S(式量＝303.38)的分析計算值C，47.51，H，6.98；N，13.85。實測值C，48.15，H，7.04，N，14.37。M+H＝304。實施例-22E)S-(2-氨基乙基)-2-甲基-L-半胱氨酸 酸水解方法向裝配有蒸餾冷凝器的500ml三頸圓底燒杯中加入實施例-22D的R-異構體產物(45.8g，150.9mmol)，並於室溫下邊攪拌邊用48％含水HBr(160ml)分批處理。停止釋放氣體後，用加熱罩加熱該混合物直到燒瓶溫度達到126℃，這時揮發性叔丁基溴(沸點72-74℃)及其後的小量含水HBr(約15ml)被蒸餾出。用回流冷凝器代替蒸餾冷凝器，將該混合物回流加熱30小時。濃縮該溶液，將殘餘物溶解於水(250ml)中並裝入Dowex 50WX4-200離子交換樹脂(8.5×11cm)中，用水(2L)，再用稀釋的氫氧化胺水溶液(30mL 28-30％氫氧化銨用水稀釋到1000mL，3L)洗脫。合併、濃縮含所需產物的流分，並於75-80℃下真空乾燥2小時，得到呈白色固體的22.1g(82％)的標題產物，S-(2-氨基乙基)-2-甲基-L-半胱氨酸。質子和C-13NMR光譜與標題化合物一致。熔點157℃。1H NMR(400MHz，D2O)δ1.19(3H，s)，2.53(1H，d，J＝13.6Hz)，2.57-2.72(2H，m)，2.92(1H，d，J＝13.6Hz)，2.92(2H，t，J＝6.8Hz)；13C NMR(100MHz，D2O)δ24.7，31.3，38.9，40.9，59.6，180.7。對C6H14N2O2S+0.1H2O的分析計算值C，40.02，H，7.95；N，15.56；S，17.81。實測值C，39.93；H，7.98；N，15.38；S，17.70。鹼水解方法向裝配有攪拌器的不鏽鋼高壓釜中加入24.2g(0.08moles)實施例-22D的R-異構體產物。用氮氣吹掃該裝置後，加入128g(0.32moles)10％苛性鹼形成溶液。將該高壓釜密封並加熱到120℃保持30小時。冷卻到室溫後，將高壓釜排空得到142ml(151g)標題化合物的鈉鹽水溶液。1H NMR(樣品經HCl酸化並用D2O稀釋，400MHz)δ1.47(s，3H)，2.75(m，2H)，2.90(d，1H，J＝14.8Hz)，3.06(t，2H，J＝6.4Hz)，3.14(d，1H，J＝14.8Hz)；13C NMR(樣品經HCl酸化並用D2O稀釋，100MHz)δ172.9，60.8，39.1，39.0，30.4，22.2。MS(MS/CI-LC)M+1179。
室溫下(約20℃)，在25ml單頸圓底燒瓶中，將DBU(218L；1.46mmol)和乙亞氨酸乙酯鹽酸鹽(171mg；1.34mmol)溶解於乙醇(6ml)中。將實施例-22E的標題產物(200mg；1.12mmol)一次性加入該溶液中。攪拌該混合物直到實施例-22E的標題產物消耗完(1-2小時)。用冰浴冷卻該混合物，再用6M HCl(830L)處理。1HNMR分析表明化學得率為95％摩爾或更高。蒸發其溶劑，用反相或離子交換層析提純實施例-22的標題產物。
將210g溶液(含約20g鹼水解反應產物的實施例-22E的標題產物)置於500ml三頸圓底燒瓶中。該裝置裝配有機械攪拌器、迪安-斯達克榻(Dean-Stark)裝置(20ml帶活塞)、冷凝器和溫度控制器。從該混合物中蒸餾出水(140m)。向容器中加入1-丁醇(150ml)，再將殘餘水(37ml)共沸蒸餾。通過蒸餾除去另外的1-丁醇(13ml)直到容器溫度達到117℃。將該丁醇漿狀物冷卻到室溫並經硅藻土墊(pad of celite)過濾。用1-丁醇(2×20ml)洗滌該鹽。室溫下，在500ml三頸圓底燒瓶中將DBU(21.8L；146mmol)和乙亞氨酸乙酯鹽酸鹽(17.1mg；134mmol)溶解於1-丁醇(40mL)中。該裝置裝配有機械攪拌器、加料漏鬥和溫度探頭。在保持容器溫度低於25℃的情況下，將實施例-22E的標題產物/1-丁醇溶液置於加料漏鬥中並加入到乙亞氨酸乙酯/DBU溶液中。攪拌該混合物直到初始原料消耗完(2-3小時)。將濃HCl(94ml)和水(100ml)溶液放入1L三頸圓底燒瓶中並冷卻到0℃。該裝置裝配有機械攪拌器、加料漏鬥和溫度探頭。將反應混合物置於加料漏鬥中。在保持容器溫度低於25℃的情況下，將該反應混合物加入HCl水溶液中。將乙酸乙酯(100ml)加入該溶液中，並分離各層。含水層用乙酸乙酯(100ml)洗一次以上，1HNMR分析表明化學得率為95％摩爾或更高。用反相或離子交換層析提純實施例-22的標題產物。1HNMR(400MHz，D2O)1.49(3H，s)，2.08(3H，s)，2.74(2H，m)，2.91(1H，d)，3.17(1H，d)，3.35(2H，t)。
實施例23 S-2-[(1-亞氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸甲酯，二鹽酸鹽將溶解於無水甲醇(40ml)的實施例22的產物(1.0g，3.42mmol)加入到裝配有磁力攪拌器和熱電偶的500ml三頸圓底燒瓶中。該反應在氮氣下被冷卻到0℃。將HCl氣體鼓泡通入反應液1分鐘。將反應混合物加熱到室溫並持續攪拌過夜。從反應混合物中取出樣品並濃縮。NMR和質譜分析表示出初始原料和產物。汽提溶劑，將油狀殘餘物再溶於無水甲醇(40ml)中，冷卻到0℃，並再次將HCl氣體鼓泡通過溶液1分鐘。將該反應混合物加熱到室溫並攪拌過夜。從反應混合物中取出樣品並濃縮。NMR和質譜分析表示出初始原料和產物。汽提溶劑，將油狀殘餘物再溶於無水甲醇(40ml)中，冷卻到0℃，並再次將HCl氣體鼓泡通過溶液1分鐘。將該反應混合物加熱到室溫並攪拌過夜。從反應混合物中取出樣品並濃縮。NMR和質譜分析僅表示出所需的標題產物。濃縮反應混合物得到得率為97％的1.01g淺黃色油。在乙腈(50ml)中攪拌該反應混合物3小時，回收到白色細粉狀的標題產物484mg。質譜分析(ZMD Waters Micromass，電霧化)，M+H在234.21HNMR(400MHz，D2O)δ1.51(s，3H)，2.09(s，3H)，2.72(t，2H)，2.97(d，1H)，3.19(d，1H)，3.36(t，2H)，3.73(s，3H).13CNMRδ18.58，21.69，30.79，37.79，41.58，54.24，60.75，165.41，171.35。對C9H19N3O2S+2HCl+0.3H2O(311.66)的分析計算值C34.68，H，6.98，N13.48，Cl22.75，S10.29。實測值C34.51，H6.99，N13.75，Cl22.75，S10.43。
實施例24 2-甲基-S-[2-(3-甲基-5-氧代-1，2，4-噁二唑-4(5H)-基)乙基]-L-半胱氨酸，單三氟乙酸鹽實施例-24A)V』-羥基乙基亞胺基醯胺(ethanimidamide) 向3L圓底燒瓶中加入乙醇(1.2L)中的羥胺鹽酸鹽(138.98g，2.0mol)，再緩慢加入乙醇鈉(136.1g，2.0mol)。保持其溫度為25-30℃。再於室溫下攪拌反應物30分鐘。過濾出沉澱的NaCl並用乙醇(100ml)洗滌。將丙腈(112.75g，2.75mol)和濾液中的羥胺游離鹼加入3L燒瓶中。然後將該混合物回流過夜。冷卻後，小心地真空除去溶劑至其原體積的50％。將反應物置於冰浴中一小時，形成結晶，並濾出。再次小心地將濾液濃縮至其原體積的50％。將反應物放在冰中，再次過濾分離生成的結晶得到52g(35％)的標題產物。實施例-24B)3-甲基-1，2，4-噁二唑啉-5-酮鉀 向25ml圓底燒瓶中加入實施例-24A的產物(1g，0.013mol)、叔丁醇鉀(1.59g，0.013mol)和碳酸二乙酯(8.18ml，0.067mol)。回流加熱該反應物5小時。除去溶劑，用二氯甲烷和乙醚研磨所生成的固體。在高真空下乾燥該固體標題產物得到1.57g(87％)。1HNMR(d6-DMSO，300MHz)δ1.69(bs，3H)。13C NMR(d6-DMSO，99MHz)δ13.26，166.54，173.99。實施例-24C)3-甲基-1-(1-溴代乙基)-2，4-噁二唑啉-5-酮 向250ml圓底燒瓶中加入實施例-24B的標題產物、DMF(100ml)中的3-甲基-1，2，4-噁二唑啉-5-酮鉀(10.13g，0.0734mol)。向漿狀物中加入1，2-二溴乙烷(31.54mL，0.366mol)。在130℃下在油浴中加熱反應物2小時。移走油浴，反應物冷卻後，加入水(200ml)和乙酸乙酯(50ml)。收集有機物用3×100ml鹽水洗滌。有機物經MgSO4乾燥再真空濃縮得到9.1g(60％)標題化合物。1HNMR(CDCl3，300MHz)δ2.21(s，3H)，3.12(t，2H)，3.91(t，2H)。
通過鼓泡通入氮氣5分鐘，使在100ml圓底燒瓶中的75ml甲醇脫氧。向50ml該甲醇中加入NaOH(1.6g，0.040mol)。在NaOH完全溶解後，於45℃油浴下攪拌該懸浮液30分鐘。將生成的溶液冷卻至室溫，加入10ml脫氧的甲醇中的α-甲基半胱氨酸(1.72g，0.010mol)。室溫下攪拌該反應物45分鐘。向該反應物中加入10ml脫氧的甲醇中的實施例-24C的產物(2.07g，0.010mol)。攪拌過夜後經質譜分析表明反應完成。用水(100ml)稀釋該反應混合物再用反相層析提純得到3.0g(93％)實施例24的標題產物，為其三氟乙酸鹽。M.S.M+H+(262.0)、M+Na+(282.0).1HNMR(CD3OD，300MHz)δ1.39(s，3H)，2.23(s，3H)，2.74(m，2H)，2.84(m，2H)，3.72(t，2H).
實施例25 [2-[[[(4R)-4-甲基-2，5-二氧代-4-咪唑烷基]甲基]硫代]乙基](1-N-亞氨基乙基)胺將實施例-22D的產物[2-[[[(4R)-4-甲基-2，5-二氧代-4-咪唑烷基]甲基]硫代]乙基]氨基甲酸，1，1-二甲基乙酯異構體(2.05g，6.5mmol)溶解於25ml 4.0N HCl的二噁烷溶液中並攪拌10分鐘。加入2N HCl(5ml)後，再攪拌反應物2小時。減壓濃縮反應混合物得到1.68g紅棕色粘合固體。將該原料溶於25ml去離子水中用2N NaOH調節pH至8.4。再在維持pH為8.4的情況下加入乙亞氨酸乙酯鹽酸鹽(2.39g，0.019mol)。在pH 8.4時，於室溫下攪拌該反應混合物一小時。通過加入適量的1N HCl將反應混合物的pH調至3.5，並再攪拌16小時。於旋轉蒸發器中濃縮該反應混合物得到粗產物，用Gilson製備性HPLC提純得到得率為70％的白色吸溼性固體的所需產物。Mass M+1＝245.於25℃水中[α]＝-37.6(365nm)。對C9H16N4O2S+1.0HCl+1.3H2O(式量＝304.20)的計算分析值C35.54，H 6.49，N 18.42，Cl 11.65，S 10.54。實測值C 35.83，H 6.08，N18.55，Cl 11.19，S 10.63。
實施例26 [2-[[[(4S)-4-甲基-2，5-二氧代-4-咪唑烷基]甲基]硫代]乙基](1-N-亞氨基乙基)胺鹽酸鹽實施例-26A)(5S)-5-[[(2-氨基乙基)硫代]甲基]-5-甲基-2，4-咪唑烷二酮，一鹽酸鹽 經用66％甲苯中的乙酸乙酯、Biotage Flash 75矽膠的層析提純實施例-22D的產物[2-[[[(4S)-4-甲基-2，5-二氧代-4-咪唑烷基]甲基]硫代]乙基]氨基甲酸，1，1-二甲基乙酯異構體(2.05g，6.5mmol)。將該原料的樣品(5.9g，16.5mmol，25℃MeOH中[α]＝+45.7，365nm)溶解於165mlTHF並用4.125ml 4.0N HCl的二噁烷溶液處理。將該反應物於室溫下攪拌兩小時並用TLC監測。經用反相介質(YMC-ODS-AQ)的層析提純游離胺產物得到4.8g標題化合物。
用10％NaOH溶液調節實施例-26A的產物的3.5g(17.2mmol)樣品的pH至9-10。通過加入10％NaOH調節pH至9的同時，向該溶液中加入4.26g乙亞氨酸乙酯鹽酸鹽。於pH 9下攪拌2小時後，加入適量0.1N HCl將pH調至7.5。在加入0.1N HCl進一步將pH調至4.5之前再攪拌該溶液2小時。在該溶液攪拌10小時後，減壓(11mbar)並於47℃水浴中除去水。該粗標題產物經用反相介質(YMC-ODS-AQ)的層析得到的156mg標題物質。25℃水中[α]＝+54.8(365nm)。對C9H16N4O2S+1.0HCl+0.85H2O(式量＝296.09)的計算分析值C36.51，H 6.37，N 18.92，Cl 11.97，S 10.83。實測值C 36.69，H 6.32，N18.85，Cl 11.46，S 11.12。
實施例27 N-(乙氧基羰基)-S-[2-[(1-亞氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸，一鹽酸鹽將實施例1的產物的樣品(3.22g，0.01mol)溶於50ml去離子水中，向其中加入K2CO3(2.76g)，接著加入氯代甲酸乙酯(1.08g，0.01mol)。於25℃攪拌該反應混合物1小時並於旋轉蒸發器中濃縮得到白色固體。用HPLC提純該固體得到所需產物。Mass M+1＝292實施例28 S-(2-氨基乙基)-2-甲基-D-半胱氨酸二鹽酸鹽將實施例-22D的[2-[[[(4S)-4-甲基-2，5-二氧代-4-咪唑烷基)甲基]硫代]乙基]氨基甲酸，1，1-二甲基乙酯產物的樣品(1.025g，3.25mmol)溶解於35ml濃HCl中，並在回流溫度下攪拌46小時。減壓濃縮該反應物得到900mg紅棕色粘合固體。用反相HPLC提純該粗產物得到純S-(2-氨基乙基)-2-甲基-D-半胱氨酸二鹽酸鹽(800mg，98％得率)。MassM+1＝179.於25℃水中[α]＝-85.6(365nm)。對C6H14N2O2S+2HCl+1H2O+1.6NH4Cl(式量＝356.39；精確質量178.07)的計算分析值C 20.22，H 7.35，N 14.15，Cl 35.81，S 9.00。實測值C 20.09，H 6.95，N 14.55，Cl 36.15，S9.56。
實施例29 [2-(1-亞氨基乙基氨基)乙基]-2-甲基-D-半胱氨酸鹽酸鹽將實施例28的產物的樣品(1.25g，0.005mol)溶於20ml去離子水中並用0.1N NaOH將pH調節至8.5-9。將pH維持在8.5，再將乙亞氨酸乙酯酯鹽酸鹽(2.39，0.019mol)加入攪拌的反應物中。在25℃和pH8.5時攪拌該反應物2小時。加入適量的0.1N HCl將反應混合物的pH調至4.0。再用旋轉蒸發器將該反應混合物濃縮，粗產物殘餘物經用YMC AQ柱的Gilson HPLC系統提純，用1.1％ AcOH/CH3CN/H2O洗脫，得到定量得率的所需產物。Mass M+1＝220.25℃水中[α]＝-134.5(365nm)。對C8H17N3O2S+1.2HCl+2H2O(式量299.09；精確質量219.10)的計算分析值C 32.13，H 7.48，N 14.05，Cl 14.22，S 10.72。實測值C 32.39，H7.26，N 14.05，Cl 14.33，S 10.42。
實施例30 S-[2-[(1-亞氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸，乙酸鹽將Bio-Rad AG 1×8樹脂(300g，960meqv.)，200-400目所述乙酸鹽形式在HPLC級水中淤漿化並裝入8cm直徑的柱中。在將溶解於10ml水中的37g(116mmol)實施例1的產物裝入該柱之前，將水排至柱頂。用1L水洗脫該物質。減壓除水後，前200ml部分不含產物，但隨後的500ml得到30g白色玻璃狀固體的所需標題產物。對C8H17N3O2S+CH3COOH+1.3H2O的計算分析值C 39.67，H 7.86，N13.88。實測值C 39.96，H 7.87，N 13.69。
實施例31 S-2-[(1-亞氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-D-半胱氨酸，乙酸鹽用實施例30的方法，將作為其一鹽酸鹽的實施例29的產物樣品(101mg，0.33mmol)轉化為標題一乙酸鹽。對C8H17N3O2S.CH3COOH+0.05HCl+2.2H2O的計算分析的計算分析值C 37.41，H 8.01，N 13.2，Cl 0.56。實測值C 37.30，H 7.92，N 13.17，Cl 0.41。
實施例32 S-[2-[(1-亞氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸，一鹽酸鹽採用實施例28所述條件，使實施例1的產物通過反相柱製備該物質。對C8H17N3O2S+1.05HCl+0.8H2O的計算分析值C 35.35，H 7.36，N15.44，Cl 13.65。實測值C 35.33，H 7.28，N 15.45，Cl 3.68。
實施例33S-[2-[(1-亞氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸的D-半乳糖醛酸鹽將D-半乳糖醛酸一水合物(0.21g，0.001mole)加入攪拌的10ml0.001M實施例30的乙酸鹽產物的溶液中。在攪拌2小時後，真空濃縮該溶液。將標題半乳糖醛酸鹽溶解於10ml水中並凍幹。
實施例34S-[2-[(1-亞氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-D-半胱氨酸的琥珀酸鹽通過實施例33的方法，由琥珀酸和實施例31的產物製備標題物質。對C8H17N3O2S+C4H6O4+1.5H2O的計算分析值C 39.55，H 7.19，N11.53。實測值C 39.24，H 6.04，N 11.41。
實施例35S-[2-[(1-亞氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸的琥珀酸鹽通過實施例33的方法，由琥珀酸和實施例30的產物製備標題物質。對C8H17N3O2S+C4H6O4+1.1H2O的計算分析值C 39.99，H 7.40，N12.33。實測值C 40.35，H 7.11，N 11.76。
實施例36S-[2-[(1-亞氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸的乙醇胺鹽通過實施例33的方法，由乙醇胺和實施例30的產物製備標題物質。對C8H17N3O2S+C2H7NO+2HCl+1.3H2O的計算分析值C 31.73，H 7.67，N 14.80，Cl 18.73。實測值C 31.41，H 7.60，N 15.00，Cl 19.12。
實施例37S-[2-[(1-亞氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸的乙二胺鹽通過實施例33的方法，由乙二胺和實施例30的產物製備標題物質。對C8H17N3O2S+2HCl+C2H8N2+1.2H2O的計算分析值C 32.12，H 7.92，N 18.73，Cl 18.96.。實測值C 31.90，H 9.19，N 18.08，Cl 19.11.
實施例38S-[2-[(1-亞氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸的DL-天冬氨酸鹽通過實施例33的方法，由DL-天冬氨酸和實施例30的產物製備標題物質。對C12H24N4O6S+1.8H2O+0.4HOAc(式量＝408.86)的計算分析值C37.60，H 7.20，N 13.70。實測值C 37.59，H 7.66，N 13.73。
實施例39S-2-[(1-亞氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸的D-穀氨酸鹽通過實施例33的方法，由D-穀氨酸和實施例30的產物製備標題物質。對C13H26N4O6S+1.8H2O+0.3HOAc(式量＝416.88)的計算分析值C39.18，H 7.45，N 13.44。實測值C 39.47，H 7.52，N 13.29。
實施例40S-[2-[(1-亞氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸的檸檬酸鹽通過實施例33的方法，由檸檬酸和實施例30的產物製備標題物質。對C14H25N3O9S+0.5H2O+0.1HOAc+0.15EtOH(式量＝433.36)的計算分析值C 40.19，H 6.35，N 9.70。實測值C 40.32，H 5.74，N 9.58.
實施例41S-[2-[(1-亞氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸的DOWEX50WX4-400離子交換樹脂鹽用去離子水(所有用於本實驗的水都是去離子水)洗滌DOWEX50WX4-400(3g，1.6meq/ml，4.8meq/g)直至洗液的pH為6。在室溫下乾燥該樹脂1小時。將30ml水中的實施例30的產物(0.6g)加入DOWEX樹脂(0.2g)。於室溫下，用ORBITTM震動器將該懸浮液震動3小時。再汽提至幹。用每次濃縮反應混合物後加入的30ml新鮮水重複該程序三次。於室溫下將該漿狀物與最後部分的新鮮水一起震動過夜。
反應物汽提至幹後，加入15ml水。過濾樹脂並另用15ml水洗滌三次。濃縮濾液(加入幾滴乙酸)並真空乾燥，得到0.4g由1HNMR(D2O)確證的原料SC-84250。於室溫下在實驗臺上乾燥己負載樹脂(loaded resin)，再真空乾燥1小時，得到0.3g負載樹脂。該樹脂的樣品和未反應的洗過的DOWEX 50WX4-400的樣品經氮氣燃燒分析未處理樹脂的結果為N的百分比(％)為0％；對己負載樹脂的N的百分比(％)為9.72％。
實施例42S-[2-[(1-亞氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸的硫酸氫鉀鹽通過實施例33的方法，由0.001mole的KHSO4和實施例30的產物製備標題物質。對C8H17N3O2S+KHSO4+2H2O的計算分析值C 24.75，H 5.68，N 10.90，S 16.00。實測值C 24.54，H 5.66，N 10.73，S 16.38。
實施例43S-[2-[(1-亞氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸的硫酸氫鉀鹽通過實施例33的方法，由0.001mole的KHSO4和實施例30的產物製備標題物質。
實施例44S-[2-[(1-亞氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸的硫酸氫鹽向實施例30的產物的攪拌的10ml溶液中加入2ml 0.505NH2SO4。攪拌2小時後，真空濃縮該溶液。使生成的鹽溶解於10ml水中並凍幹。對C8H17N3O2S+0.5H2SO4+1.5H2O的計算分析值C 32.58，H 7.23，N14.75，S 16.42。實測值C 32.53，H 7.17，N 14.23，S 16.28.
實施例45S-[2-[(1-亞氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸的甘油酸鹽S-甘油酸可通過將其鈣鹽與其酸形式的Dowex 50W樹脂一起攪拌4小時來製備。過濾該樹脂並用H2O洗滌。濃縮生成的濾液並真空乾燥。對C3H6O4的計算分析值C 31.31，H 6.13。實測值C 31.29，H 6.19。
用實施例33中所述的方法，由實施例30的產物與0.001mole的S-甘油酸一起開始製備S-甘油酸鹽。對C11H23N3O6S+1.5H2O的計算分析值C 37.49，H 7.44，N 11.92，S9.10。實測值C 37.49，H 7.31，N 11.73，S 9.22。
實施例46S-[2-[(1-亞氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸的蘋果酸鹽用實施例33中所述的方法，由實施例30的產物與0.001mole的蘋果酸一起開始製備所述的蘋果酸鹽。對C8H17N3O2S+1.33H2O+C4H6O5的計算分析值C 38.20，H 6.85，N11.15。實測值C 38.37，H 6.51，N 11.09。
實施例47S-[2-[(1-亞氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸的半蘋果酸鹽用實施例33中所述的方法，由實施例30的產物與0.0005mole的蘋果酸一起開始製備所述的蘋果酸鹽。對C8H17N3O2S+1.75H2O+0.5C4H6O5的計算分析值C 37.92，H 7.48，N13.22。實測值C 37.92，H 7.88，N 13.03。
實施例48S-[2-[(1-亞氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸的磷酸二氫鉀鹽用實施例33中所述的方法由實施例30的產物製備標題鹽。對C8H17N3O2S+KH2PO4+2.5H2O+0.66HOAc的計算分析值C 25.44，H 6.10，N 9.55。實測值C 25.27，H 5.95，N 9.80。
實施例49S-[2-[(1-亞氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸的磷酸二氫鈉鹽用實施例33中所述的方法，由實施例30的產物製備標題鹽。對C8H17N3O2S+NaH2PO4+2H2O+0.3HOAc的計算分析值C 26.26，H6.20，N 10.68。實測值C 26.57，H 6.25，N 10.72。
實施例50S-[2-[(1-亞氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸的磷酸二氫鈣鹽用實施例33中所述的方法，由實施例30的產物製備標題鹽。
對C8H17N3O2S+2NaH2PO4+2H2O的計算分析值C 19.40，H 5.09，N 8.48。實測值C 19.34，H 5.10，N 8.56。
實施例51S-[2-[(1-亞氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸的磷酸鈣鹽用實施例33中所述的方法，由實施例30的產物製備標題鹽。
對C8H17N3O2S+Ca(H2PO4)2+0.2HOAc的計算分析值C 19.96，H4.35，N 8.31。實測值C 20.14，H 5.73，N 8.80。
實施例52S-[2-[(1-亞氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸的磷酸氫鈣鹽用實施例33中所述的方法，由實施例30的產物製備標題鹽。
對C8H17N3O2S+CaHPO4+2.2HCl+H2O的計算分析值C 21.18，H4.93，N 9.26。實測值C 21.20，H 5.28，N 9.37。
實施例53S-[2-[(1-亞氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸的三代磷酸鈣鹽(1.62∶1)用實施例33中所述的方法，由實施例30的產物製備標題鹽。對C8H17N3O2S+Ca3(PO4)2+HOAc+3H2O的計算分析值C 14.37，H2.77，N 5.03。實測值C 14.13，H 3.01，N 4.71。
實施例54S-[2-[(1-亞氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸的三代磷酸鈣鹽(1∶1)用實施例33中所述的方法，由實施例30的產物製備標題鹽。對C8H17N3O2S.Ca3(PO4)2+2.2HCl+2H2O的計算分析值C 14.88，H3.62，N 6.51。實測值C 15.09，H 3.85，N 6.23。
實施例55S-[2-[(1-亞氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸的Bio-Rex 70鹽用實施例41中所述的方法，製備實施例1的產物的中性形式的Bio-Rex 70鹽。未處理樹脂的結果的N的百分比(％)為0％；負載樹脂的N的百分比(％)為7.93％.
實施例56S-[2-[(1-亞氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸的IPR(amberlite)-69鹽除先用1N HCl處理該樹脂，使其轉化為H+形式外，用實施例41中所述的相同方法製備實施例1的產物的中性形式的IPR-69鹽。該樹脂為聚苯乙烯二乙烯基苯磺酸樹脂，即所述的Dowex-50。它是GMP質量，但除覆蓋更寬的目尺寸。它比Dowex顏色更淺。在洗滌後和載荷所述化合物前，將該樹脂在H2O中製成漿狀並將升至頂部的細顆粒傾析出。從該反應中回收到4.9g鹽。7.69％ N(或0.401g SC-84250/g樹脂)。
實施例57S-[2-[(1-亞氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸的IPR(安伯來特)-69鹽用實施例41中所述的相同方法及實施例56中所述的細粒的傾析製備實施例1的產物的中性形式的IPR-64鹽。除它為GMP質量外，該樹脂與Bio-Rex 70相同。僅有的不同是在搖動過夜後，將該樹脂再多搖兩次，並在其中進行汽提。從該反應中回收到4.3g。6.20％N(0.346g化合物/g樹脂)。
實施例58由S-[2-[(1-亞氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸的二鹽酸鹽鹽製備一鹽酸鹽 將約120mg的實施例1的產物溶解於3ml DMF。加入1ml氧化丙烯並攪拌。產物會沉澱。用乙醚洗滌。使產物溶解於水中並凍幹。表1顯示了元素分析。
實施例59經AgCl沉澱製備S-[2-[(1-亞氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸鹽的一取代鹽 將實施例58的產物溶解於水中，加入化學計量量的銀鹽。過濾該固體。凍幹剩餘的溶液。表2顯示了元素分析，其中的n代表水的摩爾數。
實施例60經AgCl沉澱製備S-2-[(1-亞氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸鹽的磷酸鹽 將實施例1的產物溶解於水中，每摩爾實施例1的產物加入2摩爾Ag3PO4，並混合。濾出固體並凍幹所生成的溶液。分析生成的物質，並用H3PO4調節磷酸鹽的含量，表3表示元素的分析，其中的x代表磷酸的摩爾數。
實施例61由S-[2-[(1-亞氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸一鹽酸鹽製備混合鹽 將實施例58的產物溶解於水中。加入化學計量量的試劑(R)，表4顯示了元素分析，其中的x代表R的摩爾數。
實施例62由S-[2-[(1-亞氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸二鹽酸鹽製備混合鹽 將實施例1的產物溶解於水中。加入鹼直到pH為6。表5顯示了元素分析。
實施例63由S-[2-[(1-亞氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸的二鹽酸鹽製備鋅鹽 將實施例1的產物溶解於水中。與過量氧化鋅混合。過濾並凍幹所生成的溶液。表6顯示了元素分析。
實施例64由S-[2-[(1-亞氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸的中性化合物製備混合鹽。 將實施例20的產物的中性形式溶解於水中。與所需的試劑混合併凍幹。表7顯示了元素分析，其中的x代表MA、金屬陽離子和與去相反的陰離子的摩爾數。
實施例65由S-2-[(1-亞氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸的中性化合物製備鹽下表8列出由實施例1的產物通過本申請所述的各種方法之一製備的鹽及其元素分析。表8說明這些鹽的元素分析，其中的D代表具有式C8H17N3O2S的S-[2-[(1-亞氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸，A代表所述酸和或抗衡離子源的經驗式。
表1
表2
表3
表4
表5
表6
表7
表8
生物學數據下列試驗的部分或全部用來證明本發明的化合物的一氧化氮合酶抑制活性，並證實有用的藥理學性質。
一氧化氮合酶瓜氨酸試驗可通過監測L-[2，3-3H]-精氨酸向L-[2，3-3H]-瓜氨酸的轉化測定一氧化氮合酶(NOS)的活性(Bredt和Snyder，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.，87，682-685，1990和Moore等，J.Med.Chem.，39，669-672，1996)。從人體組織提取的RNA中各克隆出人誘導性NOS(hiNOS)、人內皮組成性NOS(hecNOS)和人神經元組成性NOS(hncNOS)。人體誘導性NOS(hiNOS)的cDNA分離自從患潰瘍性結腸炎患者的結腸樣品提取的RNA製得的λcDNA庫。人內皮組成性NOS(hecNOS)的cDNA分離自從人臍靜脈內皮細胞(HUVEC)提取的RNA製得的λcDNA庫，人體神經元組成性NOS(hncNOS)的cDNA分離自從屍體獲得的人小腦提取的RNA製得的λcDNA庫。用杆狀病毒媒介將重組酶表達在Sf9昆蟲細胞中(Rodi等，於The Biology of Nitric Oxide，Pt4Enzymology，Biochemistry and Immunology(一氧化氮的生物學，Pt4酶學、生物化學和免疫學)；Moncada，S.，Feelisch，M.，Busse，R.，Higgs，E.，Eds.Portland Press Ltd.London，1995；第447-450頁)。從可溶解細胞提取物中分離出酶的活性，並用DEAE-Sepharose層析部分提純。為測量NOS活性，存在或不存在測試化合物時，將10μL的酶加入40μL 50mM Tris(pH 7.6)中，通過加入含50mM的Tris(pH 7.6)、2.0mg/mL牛的血清白蛋白、2.0mM DTT、4.0mM CaCl2、20μMFAD、100μM四氫生物蝶呤、0.4mM NADPH和含0.9μCi的L-[2，3-3H]-精氨酸的60μM L-精氨酸的50μL的反應混合物開始反應。本試驗中L-精氨酸的最終濃度為30μM。對於hec NOS或hnc NOS，鈣調蛋白被包括在最終濃度40-100nM中。接著於37℃下培養15分鐘，通過加入400μL含10mM EGTA、100mM HEPES、pH5.5和1mML-瓜氨酸的停止緩衝液中的Dowex 50W X-8陽離子交換樹脂的懸浮液(1份樹脂，3份緩衝液)終止該反應。混合後沉澱該樹脂，並用液體閃爍計數器計算出上清液的等分部分來確定L-[2，3-3H]-穀氨酸的形成。結果作為化合物對hiNOS、hecNOS和hncNOS的IC50值報告於表1中。活體內試驗在口服給予或不給予一氧化氮合酶抑制劑的情況下，可對大鼠腹膜內注射1-12.5mg/kg內毒素(LPS)進行處理。確定注射後5小時的血漿亞硝酸鹽/硝酸鹽水平。該結果可用於顯示一氧化氮合酶抑制劑的給藥使血漿中亞硝酸鹽/硝酸鹽水平(內毒素誘導的一氧化氮的產生的一種可靠的指標)的上升有所降低。Raw細胞的亞硝酸鹽試驗在LPS的存在下，將RAW 264.7細胞接種於96-孔組織培養板上，使生長過夜(17小時)至匯合，以誘導NOS。留下一排3-6孔不作處理並用作非專一的本底減少的對照。從各孔中移去培養基，並用含2mg/ml葡萄糖的Kreb-Ringers-Hepes(25mM，pH7.4)洗孔兩次。再將細胞放在冰上，用50μL含L-精氨酸(30μM)+/-抑制劑的緩衝液培養1小時。通過在水浴中加熱該板至37℃ 1小時可開始該試驗。因細胞內iNOS產生的亞硝酸鹽將與時間成線性關係。可將該板放在冰上終止該細胞試驗，取出含亞硝酸鹽的緩衝液，用以前公開的螢光定量法對亞硝酸鹽進行分析。T.P.Misko等，Analytical Biochemistry，214，11-16(1993)。人體軟骨外植體試驗用Dulbecco’s磷酸鹽緩衝鹽水(GibcoBRL)漂洗骨片兩次再用Dulbecco’s Modified Eagles Medium(GibcoBRL)漂洗一次，再與無酚紅的極限必需培養基(MEM)(GibcoBRL)一起置於陪替氏培養皿中。將軟骨切成重量約15-45mg的小外植體，按每孔1-2片外植體放入每孔有200-500μL培養基的96或48孔培養板中。培養基是一種常規的具有非L-精氨酸、非L-谷醯胺和非酚紅製備的Earle’s鹽的極限必需培養基(Eagle)的改良培養基，或一種非L-精氨酸、非胰島素、非抗壞血酸、非L-谷醯胺及非酚紅製備的無血清的Neuman和Tytell(GibcoBRL)常規改良培養基。在使用前用100μM L-精氨酸(Sigma)、2mM L-谷醯胺、1X HL-1補充液(Bio Whittaker)、50mg/ml抗壞血酸(Sigma)和150pg/ml重組人IL-1β(RD系統)對二者進行補充，以誘導一氧化氮合酶。再以10μL等分液加入化合物，用5％CO2於37℃培養外植體18-24小時。然後棄去當的舊的上清液，用含重組人IL-1β和化合物的新鮮培養基替換，再培養20-24小時。對上清液的亞硝酸鹽進行螢光分析(Misko等，Anal.Biochem.，214，11-16，1993)。所有樣品均按一式四份進行。未刺激的對照物在無重組人IL-1β的培養基中培養。通過繪製六個不同濃度的抑制劑對亞硝酸鹽產生的百分抑制率的圖來確定IC50值(表1)。
表9顯示部分本發明的化合物的生物學活性的實例。
表9.生物學活性。數值表示所有實驗和所有研究批次的平均值。
本領域的技術人員可由上所述容易地確定本發明的重要特徵，並在不背離其精神和範圍的情況下，可對本發明進行各種修改和修飾以使其適用於各種用途和條件。
權利要求
1.S-[2-[(1-亞氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸，或其藥學上可接受的鹽。
2.權利要求1的化合物，其中所述化合物為一種藥學上可接受的鹽的形式。
3.權利要求2的藥學上可接受的鹽，它具有至少一個陰離子抗衡離子。
4.權利要求3的藥學上可接受的鹽，其中所述陰離子抗衡離子選自滷化物、羧酸鹽、磺酸鹽、硫酸鹽、磷酸鹽、膦酸鹽、樹脂-結合的陰離子、氧化物和硝酸鹽。
5.權利要求4的藥學上可接受的鹽，其中所述陰離子抗衡離子為滷化物。
6.權利要求4的藥學上可接受的鹽，其中所述滷化物為氯。
7.權利要求4的藥學上可接受的鹽，其中所述陰離子抗衡離子為羧酸鹽。
8.權利要求7的藥學上可接受的鹽，其中所述羧酸鹽選自甲酸鹽、乙酸鹽、丙酸鹽、三氟乙酸鹽、琥珀酸鹽、水楊酸鹽、DL-天冬氨酸鹽、D-天冬氨酸鹽、L-天冬氨酸鹽、DL-穀氨酸鹽、D-穀氨酸鹽、L-穀氨酸鹽、甘油酸鹽、琥珀酸鹽、steric、DL-酒石酸鹽、D-酒石酸鹽、L-酒石酸鹽、(±)扁桃酸鹽、(R)-(-)扁桃酸鹽、(S)-(+)-扁桃酸鹽、檸檬酸鹽、粘酸鹽、馬來酸鹽、丙二酸鹽、苯甲酸鹽、DL-蘋果酸鹽、D-蘋果酸鹽、L-蘋果酸鹽、半蘋果酸鹽、1-全剛烷乙酸鹽、1-全剛烷羧酸鹽、黃安酸鹽、磺基乙酸鹽、(±)-乳酸鹽、L-(+)-乳酸鹽、D-(-)-乳酸鹽、撲酸鹽、D-α-半乳糖醛酸鹽、甘油酸鹽、DL-胱氨酸鹽、D-胱氨酸鹽、L-胱氨酸鹽、DL-高胱氨酸鹽、D-高胱氨酸鹽、L-高胱氨酸鹽、DL-半胱氨酸鹽、D-半胱氨酸鹽、L-半胱氨酸鹽、(4S)-羥基-L-脯氨酸、環丙烷-1，1-二羧酸鹽、2，2-二甲基丙二酸鹽、方形酸鹽、酪氨酸陰離子、脯氨酸陰離子、富馬酸鹽、1-羥基-2萘甲酸鹽、膦醯基乙酸鹽、碳酸鹽、碳酸氫鹽、3-膦醯基丙酸鹽、DL-焦穀氨酸鹽、D-焦穀氨酸鹽和L-焦穀氨酸鹽。
9.權利要求4的藥學上可接受的鹽，其中所述陰離子抗衡離子為磺酸鹽。
10.權利要求9的藥學上可接受的鹽，其中所述磺酸鹽選自甲磺酸鹽、甲苯磺酸鹽、苯磺酸鹽、三氟甲基磺酸鹽、乙磺酸鹽、(±)-樟腦磺酸鹽、萘磺酸鹽、1R-(-)-樟腦磺酸鹽、1S-(+)-樟腦磺酸鹽、2-基磺酸鹽、1，5-萘二磺酸鹽、1，2-乙烷二磺酸鹽、1，3-丙烷二磺酸鹽、3-(N-嗎啉代)丙烷磺酸鹽、聯苯基磺酸鹽、羥乙磺酸鹽和1-羥基-2-萘磺酸鹽。
11.權利要求4的藥學上可接受的鹽，其中所述陰離子抗衡離子為硫酸鹽。
12.權利要求4的藥學上可接受的鹽，其中所述硫酸鹽選自硫酸鹽、硫酸氫鉀、硫酸氫鈉和硫酸。
13.權利要求4的藥學上可接受的鹽，其中所述陰離子抗衡離子為磷酸鹽。
14.權利要求4的藥學上可接受的鹽，其中所述磷酸鹽選自磷酸鹽、磷酸二氫鹽、磷酸氫鉀、磷酸二鉀、磷酸鉀、磷酸氫鈉、磷酸二鈉、磷酸鈉、磷酸二氫鈣、磷酸鈣、磷酸氫鈣、三代磷酸鈣和六氟代磷酸鹽。
15.權利要求4的藥學上可接受的鹽，其中所述陰離子抗衡離子為膦酸鹽。
16.權利要求4的藥學上可接受的鹽，其中所述膦酸鹽選自乙烯基膦酸鹽、2-羧基乙基膦酸鹽和苯基膦酸鹽。
17.權利要求4的藥學上可接受的鹽，其中所述陰離子抗衡離子為樹脂-結合的陰離子。
18.權利要求4的藥學上可接受的鹽，其中所述樹脂-結合的陰離子選自聚丙烯酸鹽樹脂和磺化聚(苯乙烯二乙烯基苯)樹脂。
19.權利要求18的藥學上可接受的鹽，其中所述樹脂-結合的陰離子為含聚丙烯酸鹽的樹脂。
20.權利要求19的藥學上可接受的鹽，其中所述樹脂-結合的陰離子為含與二乙烯基苯交聯的聚丙烯酸鹽的樹脂。
21.權利要求18的藥學上可接受的鹽，其中所述樹脂-結合的陰離子為含磺化聚(苯乙烯二乙烯基苯)的樹脂。
22.權利要求21的藥學上可接受的鹽，其中所述樹脂-結合的陰離子為含與二乙烯基苯交聯的磺化聚(苯乙烯二乙烯基苯)的樹脂。
23.權利要求4的藥學上可接受的鹽，其中所述陰離子抗衡離子為硝酸鹽。
24.權利要求4的藥學上可接受的鹽，其中所述鹽含有至少一個陽離子抗衡離子。
25.權利要求24的藥學上可接受的鹽，其中所述陽離子抗衡離子選自銨陽離子、鹼金屬陽離子、鹼土金屬陽離子、過渡金屬陽離子和陽離子結合樹脂。
26.權利要求25的藥學上可接受的鹽，其中所述陽離子抗衡離子為銨陽離子。
27.權利要求26的藥學上可接受的鹽，其中所述銨陽離子選自銨、甲銨、二甲銨、三甲銨、四甲銨、乙醇銨、二環己銨、胍鎓和乙二銨陽離子。
28.權利要求25的藥學上可接受的鹽，其中所述陽離子抗衡離子為鹼金屬陽離子。
29.權利要求28的藥學上可接受的鹽，其中所述鹼金屬陽離子選自鋰陽離子、鈉陽離子、鉀陽離子和銫陽離子。
30.權利要求25的藥學上可接受的鹽，其中所述陽離子抗衡離子為鹼土金屬陽離子。
31.權利要求30的藥學上可接受的鹽，其中所述鹼土金屬陽離子選自鈹陽離子、鎂陽離子和鈣陽離子。
32.權利要求25的藥學上可接受的鹽，其中所述陽離子抗衡離子為過渡金屬陽離子。
33.權利要求32的藥學上可接受的鹽，其中所述過渡金屬陽離子為鋅陽離子。
34.權利要求25的藥學上可接受的鹽，其中所述陽離子抗衡離子為陽離子結合樹脂。
35.權利要求34的藥學上可接受的鹽，其中所述陽離子結合樹脂為陽離子官能化的聚(苯乙烯二乙烯基苯)樹脂。
36.權利要求34的藥學上可接受的鹽，其中所述陽離子結合樹脂為胺化的聚(苯乙烯二乙烯基苯)樹脂。
37.權利要求34的藥學上可接受的鹽，其中所述陽離子結合樹脂為陽離子官能化的聚丙烯酸酯樹脂。
38.權利要求34的藥學上可接受的鹽，其中所述陽離子結合樹脂為胺化的聚丙烯酸酯樹脂。
39.S-[2-[(1-亞氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸。
全文摘要
本發明涉及S－[2－[(1－亞氨基乙基)氨基]乙基]－2－甲基－L－半胱氨酸，或其藥學上可接受的鹽。
文檔編號A61P29/00GK1419539SQ01807065
公開日2003年5月21日 申請日期2001年3月23日 優先權日2000年3月24日
發明者R·K·韋伯, A·K·阿瓦斯蒂, A·A·伯格馬尼斯, R·C·杜爾利, S·S·岡賽爾, T·J·哈根, A·E·哈利南, D·W·漢森, B·S·希科裡, A·E·穆爾曼, B·S·皮徹勒, M·A·普羅莫, R·R·紗特曼, J·S·斯奈德, M·特裡維迪, S·齊姆巴洛夫 申請人:法馬西亞公司