用於癌症治療的p53疫苗的製作方法

2023-12-08 20:08:01 4

專利名稱：：用於癌症治療的p53疫苗的製作方法
技術領域：
：總的來說本發明涉及至少細胞生物學、免疫學、分子生物學和癌症治療領域。更特別地，它涉及引發或促進免疫應答的方法，例如針對由過度增殖細胞呈遞的自身基因抗原的細胞毒性T淋巴細胞應答，所述過度增殖細胞對至少一種過度增殖性疾病治療有抗性。
背景技術：
：正常組織穩態是細胞增殖和細胞死亡的高度調節過程，並且細胞增殖或細胞死亡的失調可以發展成癌性狀態(Solyanik等人，1995;Stokke等人，1997;Mumby和Walter,1991;Natoli等人，1998;Magi-Galluzzi等人，1998)。細胞增殖和細胞死亡的維持至少部分由原癌基因調節。原癌基因可以編碼誘導細胞增殖的蛋白質(例如sis、erbB、src、ras和myc)，抑制細胞增殖的蛋白質(例如Rb、p53、NF1和WT1)或調節編程性細胞死亡的蛋白質(例如bc卜2)(Ochi等人，1998;Johnson和Hamdy,1998;Lieber歸nn等人，1998)。然而，這些原癌基因的基因重排或突變導致原癌基因轉變成潛在的癌症誘導致癌基因。通常單個點突變足以使原癌基因轉化成癌基因。例如，P53腫瘤抑制蛋白中的點突變導致野生型p53功能完全喪失並獲得"顯性"腫瘤促進功能(Vogelstein和Kinzler，1992;Fulchi等人，1998)。癌症研究中快速展開的領域-免疫療法是用於治療某些類型癌症的一種選擇。例如，免疫系統將腫瘤細胞鑑定為外源的且因此通過免疫系統靶向破壞。不幸的是，應答一般不足以阻止大多數腫瘤生長。然而，近來免疫療法領域已集中於開發增加或補充免疫系統的天然防禦機制的方法。目前在研究或使用中的免疫療法的例子是免疫佐劑(例3口牛分才支軒菌(#/co6aCer2'i/zb6o卩isJ,戶7as邁oiZ/w！7/a/c/parw邁，二硝基氯苯和芳香族化合物)(美國專利號5,801,005;美國專利號5,739,169;Hui和Hashimoto,1998;Christodoulides等人，1998);細胞因子療法(例如幹擾素a、卩和Y;IL-l，GM-CSF和TNFXBukowski等人，1998;Davidson等人,1998;Hellstrand等人，1998);基因療法(例如TNF、IL-1、IL-2、p53)(Qin等人，1998;Austin-Edward和Villaseca，1998;美國專利號5,830,880和美國專利號5,846,945);以及單克隆抗體(例如抗神經節苷脂GM2、抗HER-2、抗p185)(Pietras等人，1998;Hanibuchi等人，1998;美國專利號5,824,311)。如上所述，原癌基因在癌症生物學中起重要作用。例如，Rb、p53、NF1和WT1腫瘤抑制物是維持細l包的非腫瘤(tumorogenic)表型所必需的(由Soddu和Sacchi，1998綜述)。所有癌症中大約50%已發現與p53基因的突變有關，所述突變導致p53腫瘤抑制物特性喪失"evine等人，1991;Vogelstein和Kinzler，1992;Hartmarm等人，1996a;Hartmann等人，1996b)。p53基因中的突變還導致細胞中的p53半衰期延長和p53蛋白質的過量表達。在正常細胞中，P53由於其高周轉率是無法檢測的。因此，癌性細胞中的p53過量表達導致可以在免疫療法中使用的多重免疫原性p53表位。涉及pH基因突變的癌症的高發生率已促使許多研究團體經由基因替代研究p53作為癌症治療的途徑。編碼誘導細胞增殖的蛋白質的原癌基因erM,mc、i^s和/z7/c以及調節編程性細胞死亡的Bcl-2家族的原癌基因在細胞的非腫瘤表型中也起重要作用。少數人也已探究p53在免疫療法中的用途。例如，在體外測定法中，鑑定了能夠與HLA-A2.1結合併誘導原發性細胞毒性T淋巴細胞(CTL)應答的p53突變型肽(Houbiers等人，19")。在其中在小鼠中篩選合成p53突變型和野生型肽的免疫原性的研究中，觀察到只有突變型p53表位能夠引發CTL應答(Bertholet等人，1997)。相反，在GM-CSF/IL-4的存在下用骨髓來源的樹突細胞(DC)(用H-2Kd結合野生型p53肽(232-240)預脈沖)免疫接種BALB/c小鼠，觀察到誘導p53抗肽CTL應答(Ciemik等人，1996;Gabrilovich等人，1996;Yanuck等人，1993;DeLeo，1998;Mayordomo等人，1996)。此外，編碼人野生型p53的棵露質粒DM的皮內和肌內注射以及由重組金絲雀痘載體呈遞的人野生型p53的靜脈內注射已成功地破壞腫瘤(Hurpin等人,1998)。使用小鼠模型(Ishida等人，1999;Murakami等人，2004;Espe跳hied等人，2003;Blaszczyk-Thurin等人，2002;Cici纖ti等人，2005)和離體人培養模型(Nikitin等人，2001)的臨床前研究已顯示抗p53CTL細胞應答的誘導已選擇性殺死腫瘤細胞和多餘的正常細胞。此外，抗p53T細胞已顯示存在於癌症患者中(Hoffmann等人，2005;Sirianni等人，2004;vanderBurg等人，2003)。癌症疫苗的另一種關鍵元素是選擇關於TAA的合適載體。這種媒介物應當幫助激活主要免疫應答且在必要時克服對自身蛋白質的耐受性。樹突細胞(DC)是最有效的抗原呈遞細胞且在癌症免疫療法中活躍使用(在Gabrilovich，2002中綜述)。近年來越來越明確的是基於DC的免疫療法的成功依賴於這些細胞的激活狀態。腺病毒提供了激活DC的一種示例性有效手段。它誘導DC表面上的MHCII類和共刺激分子的上調，IL-12、Thl和促炎細胞因子的產生(NikUina等人，2002;Tan等人，2005;Herrera等人，2002)。腺病毒還提供了用於將基因遞送到DC內的極佳工具(在Humrich和Jenne，2003中綜述；Gamvrellis等人，2004)。WO00/54839描述了用野生型自身基因轉導的樹突細胞用於治療過度增殖性疾病。儘管有前文所述，但目前並不存在能夠使用野生型自身基因的基於自身基因的免疫治療方法，以產生對過量表達不同突變型自身蛋白質的各種治療抗性細胞特異的抗腫瘤免疫應答。這將允許治療與自身基因表達增加或改變有關的任何癌性或癌前細胞。此外，它將消除鑑定每個患者中的自身基因突變位點的需要，且產生定製的自身基因突變型肽用於免疫療法。因此，需要能夠減弱或增強天然免疫系統CTL應答的免疫療法，所述CTL應答針對具有突變型自身基因抗原表達增加或改變的過度增殖細胞。發明概述顯然需要新治療方法以改善癌癥結果，並且疫苗可以代表一種此類方法。儘管近年來進行的某些臨床試驗證明了鼓舞人心的結果，但大多數試驗顯示出非常有限的臨床應答(Rosenberg等人，2004)。這些試驗的結果顯露了對成功的癌症免疫療法的主要挑戰。其中最重要的一個是鑑定合適的腫瘤相關抗原(TAA)。理想的TAA不僅將在大部分癌症患者中表達，並且腫瘤細胞的存活將依賴於包含TAA的分子的存在。這將阻止腫瘤細胞通過丟失這些分子逃避免疫識別。腫瘤抑制基因p53具有理想TAA的許多特徵且在本發明中僅用作示例性實施方案。一般而言，本發明涉及與癌症疫苗，特別是用於治療癌症包括治療抗性癌症有關的組合物和方法。需要能夠增加天然免疫系統CTL應答的免疫療法，所述CTL應答針對表達改變的自身基因抗原的治療抗性過度增殖細胞。本發明還提供了引發細胞毒性T淋巴細胞應答的方法，所述應答針對由過度增殖的治療抗性細胞呈遞的p53抗原。在本發明的一個實施方案中，提供了用於治療具有治療抗性過度增殖性疾病(hyperproliferativedisease)的個體和/或防止個體具有治療抗性(therapy-resistant)過度增殖性疾病的方法。在具體方面，具有對癌症治療抗性的至少一種癌症細胞的個體用包含自身基因產物的樹突細胞進行治療，且在另外實施方案中治療進一步包含另外療法。另外療法可以是任何合適種類的癌症治療，儘管在具體方面另外療法是化學療法。在進一步的具體實施方案中，化學療法上調例如p"和/或死亡受體的表達。本發明中的過度增殖性疾病的治療可以包舍鑑定具有過度增殖性疾病的個體的步驟，所述過度增殖性疾病的特徵在於個體的至少某些過度增殖細胞中的自身基因產物表達改變或增加。然而，在可替代的實施方案中，個體可以先前已鑑定具有過度增殖性疾病，所述過度增表達改變或增加。鑑定具有過度增殖性疾^的受試者後，給i試者施用包含在真核樹突細胞中可操作的啟動子控制下的自身基因的表達構建體。在具體方面，自身基因產物由樹突細胞表達且呈遞給免疫效應細胞，從而刺激抗自身基因產物應答。在可替代的實施方案中，在個體中可能改變或具有增加的表達的自身基因產物並不直接或間接鑑定，然而給受試者例如皮內施用包含在真核樹突細胞中可操作的啟動子控制下的自身基因的表達構建體。在可替代的實施方案中自身基因產物的選擇可以包含如在個體群體中已知在統計上有利的自身基因產物的易感性。例如，已知在具有癌症或對其敏感的個體中經常突變的自身基因產物可以在本發明中使用。具有發展特定癌症的高危險個體包括具有特定改變的基因和/或基因表達，例如關於p53、BRCA1、BRCA2、APC、DPC4、NF-1、NF-2、p16、p27或RB;具有腫瘤發生前狀況；個人癌症史；家族癌症史；無保護地暴露於強日照；菸草使用；等等的那些。在一個實施方案中，自身基因產物包含致癌基因，其中所述致癌基因可以選自腫瘤抑制物、腫瘤相關基因、生長因子、生長因子受體、信號轉導物、激素、細胞周期調節物、核因子、轉錄因子和凋亡因子。在具體實施方案中，腫瘤抑制物選自mda-7、Rb、p53、p16、p19、p21、p73、DCC、APC、NF-1、NF-2、PTEN、FHIT、C-CAM、E-cadherin、MEN-I、MEN-II、ZAC1、VHL、FCC、MCC、PMS1、PMS2、MLH-1、MSH-2、DPC4、BRCA1、BRCA2和WT-1。在優選實施方案中，肺瘤抑制物是p53。在優選實施方案中，生長因子受體選自FMS、ERBB/HER、ERBB-2/NEU/HER-2、ERBA、TGF-P受體、PDGF受體、MET、KIT和TRK。在優選實施方案中，信號轉導物選自SRC、AB1、RAS、AKT/PKB、RSK-1、RSK-2、RSK-3、RSK-B、PRAD、LCK和ATM。在優選實施方案中，轉錄因子或核因子選自應、F0S、MYC、BRCA1、BRCA2、ERBA、ETS、EVII、MYB、露I-C、HMGI/LIM、SKI、VHL、WT1、CEBP-P、NFKB、1KB、GL1和REL。在優選實施方案中，生長因子選自SIS、HST、INT-1/WT1和INT-2。在優選實施方案中，凋亡因子選自Bax、Bak、Bim、Bik、Bid、Bad、Bc卜2、Harakiri和ICE蛋白酶。在優選實施方案中，腫瘤相關基因選自CEA、mucin、MAGE和GAGE。表達構建體可以是病毒載體，其中所述病毒載體是腺病毒載體、逆轉錄病毒載體、痘苗病毒載體、腺伴隨病毒載體、多瘤病毒載體、a病毒栽體、或皰瘮病毒載體。在具體實施方案中，病毒載體是腺病毒載體。在某些實施方案中，腺病毒載體是複製缺陷的。在另一實施方案中，複製缺陷是病毒E1區中的缺失。在某些實施方案中，缺失位於病毒的E1B區。在其他實施方案中，缺失包含病毒的整個E1B區。在另一實施方案中，缺失包含病毒的整個E1區。在本發明的一個實施方案中，在真核細胞中可操作的啟動子可以選自CMVIE、dectin-l、dectin-2、人CDllc、F4/80、MHCII類、以及在耙細胞中起作用無論是天然還是合成的其他啟動子。在優選實施方案中，啟動子是CMVIE。在另一實施方案中，表達載體進一步包含多腺苷酸化信號。在本發明的一個實施方案中預期過度增殖性疾病是癌症，其中所述癌症可以選自肺、頭、頸、乳腺、胰腺、前列腺、腎、骨、睪丸、子宮頸、胃腸、淋巴瘤、腦、結腸、皮膚和膀胱的癌症。在其他實施方案中，過度增殖性疾病是非癌性的，且可以選自例如類風溼性關節炎(RA)、炎性腸病(IBD)、骨關節炎(OA)、肺中的瘤前病變、和牛皮癬。在其他實施方案中，對於過度增殖性疾病進行治療的受試者是人。在其他實施方案中預期給受試者施用選自GM-CSF、IL-4、C-KIT、Steel因子、TGF-p、TNF-a和FLT3配體的至少第一種細胞因子。在再一實施方案中，給受試者施用不同於第一種細胞因子的第二種細胞因子。在另一實施方案中，細胞因子作為由表達構建體編碼的多核苷酸進行施用。在其他實施方案中，免疫效應細胞是CTL。在本發明中還預期的是通過單次注射或多次注射皮內施用表達構建體。在一個實施方案中，注射對過度增殖或腫瘤部位局部進行。在另一實施方案中，注射對過度增殖或腫瘤部位區域性地進行。在再一實施方案中，注射在過度增殖或腫瘤部位遠側進行。進一步預期注射同時、在不同時間或經由連續輸注來進行。在具體方面，本發明包含用於在具有治療抗性癌症的受試者中誘導指向p53的免疫應答的方法，所述方法包括下列步驟從受試者獲得樹突細胞、用包含在真核細胞中可操作的啟動子控制下的p53基因的腺病毒載體感染樹突細胞，和給受試者施用腺病毒感染的樹突細胞，由此樹突細胞中表達的p53被呈遞給免疫效應細胞，從而刺激抗p53應答。受試者具有對其可能有抗性癌症的療法可以是任何種類的，儘管在具體實施方案中療法可以包含化學療法、放射或兩者。在本發明的某些實施方案中，存在給予或恢復針對受試者中的一種或多種藥物和/或放射抗性過度增殖細胞的化學敏感性的方法，其中所述過度增殖性疾病的特徵在於自身基因產物改變或增加表達，所述方法包括給受試者提供表達自身基因產物的樹突細胞。在具體實施方案中，該方法進一步包括給受試者施用進一步的藥物或放射療法。樹突細胞的提供可以包含施用由表達自身基因產物的表達構建體轉化的樹突細胞，或者它可以包含給受試者中的樹突細胞施用表達自身基因產物的表達構建體。在具體實施方案中，過度增殖性疾病包含轉移癌，包括治療抗性轉移癌。因此，在本發明的具體實施方案中，存在給具有治療抗性過度增殖性疾病的個體提供包含具有自身基因產物的樹突細胞的免疫原性組合物的方法，所述自身基因產物優選是表達的。在進一步的實施方案中，個體除免疫原性組合物之外還被提供癌症治療，並且在某些方面，2種治療以累加方式或以協同方式起作用以治療過度增殖性疾病，包括對癌症治療有抗性的過度增殖細胞。在另外實施方案中，表達自身基因產物的樹突細胞被視為包含疫苗。在本發明的一個實施方案中，存在給予或恢復針對受試者中的一種或多種治療抗性過度增殖細胞的敏感性的方法，其中所述過度增殖細胞的特徵在於自身基因產物改變或增加表達，所述方法包括給所述受試者提供表達所述自身基因產物的樹突細胞。在一個具體實施方案中，治療抗性過度增殖細胞進一步定義為對藥物、放射或兩者有抗性。在一個進一步的實施方案中，治療抗性過度增殖細胞進一步定義為對幹擾素、白介素、抗體、抑制劑、其混合物或其組合有抗性。在具體實施方案中，抗體進一步定義為單克隆抗體，例如針對Her-2/neu的單克隆抗體，包括Herceptin⑧。在具體方面，單克隆抗體進一步定義為針對VEGF的單克隆抗體，例如Avastin。在另外的具體實施方案中，抑制劑進一步定義為VEGF抑制劑。細胞對其有抗性的藥物可以是任何一種或多種藥物，儘管在具體方面，藥物包含例如泰素、託泊替康、順鉑、卡鉑、阿黴素、或泰索帝。藥物可以是烷化劑，例如白消安、順鉑、或異磷醯胺。藥物可以是蒽環類藥物，例如多柔比星或表柔比星。藥物可以是抗代謝物，例如氟尿嘧啶或氨甲蝶呤。藥物可以是拓樸異構酶抑制劑，例如博來黴素、依託泊苷、或吉西他濱。藥物可以是微管抑制劑，例如泰素、泰索帝、或長春鹼。藥物可以是單克隆抗體，例如曲妥單抗(Herceptin)、貝伐單抗(Avastin)、甲磺酸伊馬替尼(Gleevec)、吉非替尼(gefitinibXIressa)、埃洛替尼(erlotinibXTarceva)、或西妥昔單抗(Erbitux⑧)。藥物可以是環磷醯胺。藥物可以是烷化劑。藥物可以是拓樸異構酶1抑制劑，例如依立替康。在某些實施方案中，本發明的方法進一步包括給受試者施用另外療法，例如包含藥物、金屬、放射、手術、基因療法、免疫療法、激素療法、或其組合的療法。在具體實施方案中，化學療法包含上調P53、Fas、死亡受體、或其組合的表達的組合物。在另外的具體實施方案中，樹突細胞和另外療法同時或依次地提供給受試者。特別地，樹突細胞可以在進一步療法之前提供給受試者，例如在樹突細胞提供給受試者的約1至12個月內。在某些方面，樹突細胞和另外療法提供超過一次，例如循環提供。在其他具體實施方案中，樹突細胞在另外療法之後提供給受試者，例如在進一步療法提供給受試者的約1至2個月內。在本發明的具體方面，存在施用由表達所述自身基因產物例如p53的表達構建體例如腺病毒載體轉化的樹突細胞。自身基因產物可以是肺瘤抑制物或原癌基因產物。它還可以是在癌細胞中上調的基因產物。在具體方面，自身基因產物包含存活蛋白、Her2/neu、CEA、ras、TERT、NY-ES0、PSA、CEA、MART、MAGE1、MAGE3、gp100、BAGE、GAGE、TRP-1、TRP-2、mda-7、susl、或PMSA。在具體實施方案中，本發明中的過度增殖細胞是治療抗性癌細胞，例如轉移癌細胞。在另外的具體實施方案中，癌細胞是小細胞肺癌細胞。過度增殖細胞可以是來自例如肺癌、乳腺癌、結腸癌、黑素瘤、肝癌、腦癌、前列腺癌、腎癌、肉瘤、胰腺癌、淋巴瘤或白血病的細胞。特別地，可以通過本發明的方法和組合物治療的過度增殖細胞包括至少來自膀胱、血液、骨、骨髓、腦、乳腺、結腸、食管、胃腸、牙齦、頭、腎、肝、肺、鼻咽、頸、卵巢、前列腺、皮膚、胃、睪丸、舌、或子宮的細胞。另外，癌症可以特別是下列非限制性組織學類型贅生物，惡性；癌；癌，未分化的；巨大和梭形細胞癌；小細胞癌；乳頭狀癌；鱗狀細胞癌；淋巴上皮癌；基底細胞癌；毛基質癌；移行細胞癌；乳頭狀移行細胞癌；腺癌；胃泌素瘤，惡性；膽管癌；肝細胞癌；組合肝細胞癌和膽管癌；小梁性腺癌；腺樣嚢性癌；腺瘤性息肉內腺癌；腺癌，家族性結腸息肉病；實體癌；類癌瘤，惡性；細支氣管肺泡癌(branchiolo-alveolaradenocarcinoma);乳頭狀腺癌；嫌色細胞癌；嗜酸細胞癌；嗜酸性腺癌；嗜鹼細胞癌；透明細胞腺癌；顆粒細胞腺癌；濾泡狀腺癌；乳頭狀和濾泡狀腺癌；無包膜硬化性癌；腎上腺皮質癌；子宮內膜樣癌(endometroidcarcinoma);皮膚附屬器癌；大汗腺腺癌；皮脂腺癌；耵聹腺腺癌；粘液表皮樣癌；嚢腺癌；乳頭狀嚢腺癌；乳頭狀漿液性嚢腺癌；粘液性嚢腺癌；粘蛋白性腺癌；印戒細胞癌；浸潤性導管癌；髓樣癌；小葉癌；炎性癌；佩吉特氏病，乳房的；腺泡細胞癌；腺鱗癌；腺癌w/鱗狀化生；胸腺瘤，惡性；卵巢間質肺瘤，惡性；泡膜細胞瘤，惡性；粒層細胞瘤，惡性；男性細胞瘤，惡性；Sertoli細胞癌；萊迪希細胞瘤，惡性；脂質細胞瘤，惡性；神經節細胞瘤，惡性；乳房外副神經節瘤，惡性；嗜鉻細胞瘤；血管球肉瘤；惡性黑素瘤；無黑色素性惡性黑素瘤；淺表擴展性黑素瘤；巨大色素痣內惡性黑素瘤；上皮樣細胞黑素瘤；藍痣，惡性；肉瘤；纖維肉瘤；纖維組織細胞瘤，惡性；粘液肉瘤；脂肪肉瘤；平滑肌肉瘤；橫紋肌肉瘤；胚胎性橫紋肌肉瘤；小泡型橫紋肌肉瘤；間質肉瘤；混合瘤，惡性；苗勒管混合瘤；腎胚細胞瘤；肝母細胞瘤；癌肉瘤；間葉瘤，惡性；布倫納瘤，惡性；葉狀腫瘤，惡性；滑膜肉瘤；間皮瘤，惡性；無性細胞瘤；胚胎性癌；畸胎瘤，惡性；卵巢甲狀腺腫，惡性；絨毛膜癌；中腎瘤，惡性；血管肉瘤；血管內皮瘤，惡性；卡波西肉瘤；血管外皮細胞瘤，惡性；淋巴管肉瘤；骨肉瘤；皮質旁骨肉瘤；軟骨肉瘤；成軟骨細胞瘤，惡性；間質軟骨肉瘤；骨巨細胞瘤；尤因氏肉瘤；牙源性腫瘤，惡性；成釉細胞牙肉瘤；成釉細胞瘤，惡性；成釉細胞纖維肉瘤；松果體瘤，惡性；脊索瘤；神經膠質瘤，惡性；室管膜瘤；星形細胞瘤；原漿性星形細胞瘤；纖維性星形細胞瘤；星形母細胞瘤；成膠質細胞瘤；少突神經膠質瘤；成少突神經膠質細胞瘤；原發性神經外胚層；小腦肉瘤；成神經節細胞瘤；成神經細胞瘤；視網膜母細胞瘤；嗅神經源性腫瘤；腦脊膜瘤，惡性；神經纖維肉瘤；神經鞘瘤，惡性；顆粒細胞瘤，惡性；惡性淋巴瘤；何杰金氏病；何杰金氏副肉芽腫；惡性淋巴瘤，小淋巴細胞性；惡性淋巴瘤，大細胞，彌散性；惡性淋巴瘤，濾泡性；萆樣黴菌病；其他特定的非何杰金氏淋巴瘤；惡性組織細胞增生症；多發性骨髓瘤；肥大細胞肉瘤；免疫增生性小腸疾病；白血病；淋巴性白血病；漿細胞白血病；紅白血病；淋巴肉瘤細胞性白血病；髓細胞性白血病；嗜鹼細胞性白血病；嗜酸細胞性白血病；單核細胞性白血病；肥大細胞白血病；巨核母細胞白血病；髓樣肉瘤；和毛細胞性白血病。在本發明的具體方面，具有廣泛期小細胞肺癌的患者用樹突細胞進行疫苗接種，所述樹突細胞用包含野生型p53基因的腺病毒載體轉導。在許多患者中觀察到針對疫苗接種的p53特異性T細胞應答。針對疫苗接種的抗原特異性免疫應答與抗腺病毒抗體滴度中的適度增加正相關，且與未成熟的髓樣細胞積聚負相關。在針對疫苗接種的抗原特異性應答與DC和T細胞的存在和功能活性之間沒有發現關聯。只有1個患者顯示針對疫苗接種的客觀臨床應答，而大多數患者具有疾病進展。然而，這些患者顯示在疫苗接種後立即開始的非常高比率的針對化學治療的客觀臨床應答。這種臨床應答與抗原特異性免疫應答密切相關。在具體實施方案中，本發明涉及癌症免疫療法中的新範例，其中疫苗接種不是作為單一形式而是與另一種癌症治療例如化學療法直接協作是特別有效的。在本發明的另外實施方案中，存在李弗勞明症候群(Li-Fraumenisyndrome)的治療和/或預防，例如使用包含p53自身基因的樹突細胞。因為ras在例如胰腺和結腸直腸癌中是上調的，所以在這些及其他癌症中，可以通過在這些受試者中使用包含rw多核苷酸的樹突細胞來耙向r仏因此，在本發明的一個實施方案中，存在給予或恢復受試者中的一種或多種治療抗性過度增殖細胞的敏感性的方法，其中所述過度增殖細胞的特徵在於自身基因產物改變或增加表達，所述方法包括給所述受試者提供表達所述自身基因產物的樹突細胞。在一個具體實施方案中，治療抗性過度增殖細胞進一步定義為對藥物、放射或兩者有抗性。在一個具體實施方案中，治療抗性過度增殖細胞進一步定義為對幹擾素、白介素、抗體、抑制劑、其混合物或其組合有抗性。抗體可以進一步定義為單克隆抗體，所述單克隆抗體可以進一步定義為針對Her-2/neu的單克隆抗體，例如曲妥單抗(Herceptin)。單克隆抗體可以進一步定義為針對VEGF的單克隆抗體，所述針對VEGF的單克隆抗體可以進一步定義為貝伐單抗(Avastin⑧)。抑制劑可以進一步定義為VEGF抑制劑。藥物可以包含例如泰素、託泊替康、順鉑、卡鉑、阿黴素、環磷醯胺、或泰索帝。藥物可以是烷化劑，例如白消安、順鉑、或異磷醯胺。藥物可以是蒽環類藥物，例如多柔比星或表柔比星。藥物可以是抗代謝物，例如氟尿嘧啶或氨甲蝶呤。藥物可以是拓樸異構酶抑制劑，例如博來黴素、依託泊苷、或吉西他濱。藥物可以是微管抑制劑，例如紫杉醇或長春鹼。藥物可以是單克隆抗體，例如曲妥單抗、貝伐單抗、甲磺酸伊馬替尼、吉非替尼、或埃洛替尼。在某些方面，本發明的方法進一步包括給受試者施用另外療法，例如藥物、金屬、放射、手術、基因療法、免疫療法、激素療法、或其組合。在具體實施方案中，另外療法包含化學療法，例如包含上調p53、Fas、死亡受體、或其組合的表達的組合物。在另一具體實施方案中，樹突細胞和另外療法同時或依次地提供給受試者。在另外的具體實施方案中，樹突細胞可以在進一步療法之前提供給受試者。另外療法可以在樹突細胞提供給受試者的約1至12個月內提供給受試者，且樹突細胞和另外療法可以提供超過一次。在具體方面，樹突細胞和另外療法循環提供。樹突細胞可以在另外療法之後提供給受試者。樹突細胞可以在進一步療法提供給受試者的約1至2個月內提供給受試者。提供可以包含例如施用由表達所述自身基因產物的表達構建體轉化的樹突細胞，其中提供包含給受試者中的樹突細胞施用表達自身基因產物的表達構建體。在本發明的具體方面，表達構建體包含腺病毒載體。在某些方面，自身基因產物包含p53。自身基因產物可以包含腫瘤抑制物或原癌基因產物。自身基因產物可以進一步定義為在癌細胞中上調的基因產物。在具體方面，自身基因產物包含存活蛋白、Her2/neu、CEA、ras、TERT、NY-ES0、PSA、CEA、MART、MAGE1、MAGE3、gp100、BAGE、GAGE、TRP-1、TRP-2、或PMSA。在某些實施方案中本發明的過度增殖細胞是癌細胞，在某些實施方案中包含轉移癌細胞。過度增殖細胞可以是小細胞肺癌細胞，或它們可以是來自肺癌、乳腺癌、結腸癌、黑素瘤、肝癌、腦癌、前列腺癌、腎癌、肉瘤、胰腺癌、淋巴瘤或白血病的細胞。本發明的方法可以進一步包括給受試者遞送增強表達自身基因產物的樹突細胞活性的試劑，例如抗體，包括單克隆抗體，例如CD40抗體。表達自身基因產物的樹突細胞和試劑可以包含在同一組合物中，或它們可以包含在分開的組合物中。在某些實施方案中，表達自身基因產物的樹突細胞和試劑同時遞送給所述受試者，儘管在可替代的實施方案中表達自身基因產物的樹突細胞可以在試劑遞送給受試者之前遞送給受試者。在具體方面，表達自身基因產物的樹突細胞在試劑遞送給受試者之後遞送給所述受試者。在本發明的具體實施方案中，受試者先前已用化學療法、放射、或兩者進行治療。本發明的方法可以進一步包括測定來自受試者的樣品中的過度增殖細胞的步驟，並且樣品包含活檢樣品、血液、尿、頰刮屑(cheekscraping)、唾液、腦脊液、糞便、乳頭抽吸液(mippleaspirate)、或其組合。樣品的測定可以包括測定治療抗性標記，例如一種或多種過度增殖細胞的一種或多種多核苷酸中的突變，或與同一組織的正常非癌性細胞比較，一種或多種多核苷酸的表達上調或下調。在本發明的一個進一步的實施方案中，存在治療受試者中的一種或多種過度增殖細胞的方法，其中所述一種或多種過度增殖細胞對用於過度增殖細胞的臨床公認療法有抗性，或其中所述一種或多種過度增殖細胞在暴露於用於過度增殖細胞的臨床公認療法後將變成有抗性，並且其中所述過度增殖細胞的特徵在於自身基因產物改變或增加表達，所述方法包括給所述受試者提供表達所述自身基因產物的樹突細胞。在某些方面，在暴露於臨床公認療法後將變成有抗性的過度增殖細胞包含多核苷酸上與抗性有關的一種或多種突變。該方法可以進一步包括給受試者遞送增強表達自身基因產物的樹突細胞活性的試劑。此外，本發明可以用於預防治療抗性癌症。來自對治療敏感的癌症的治療抗性癌症的發展可以被本發明的方法停止、中斷或延遲。因此，在一個實施方案中存在治療或預防治療抗性過度增殖細胞發展的方法，其中所述過度增殖細胞的特徵在於自身基因產物改變或增加表達，所述方法包括給所述受試者提供表達所述自身基因產物的樹突細胞。前文已相當廣泛地概述了本發明的特徵和技術優點，以便隨後的本發明的詳細描述可以被更好地理解。本發明的另外特徵和優點將在下文描述，這構成了本發明權利要求的主題。本領域技術人員應當理解公開的概念和具體實施方案可以容易地用作修改或設計用於執行本發明的相同目的的其他結構。本領域技術人員應當認識到此類等價構建沒有背離如附加權利要求中所述的本發明精神和範圍。被認為是本發明特有的、關於其組織和操作方法的新型特徵，連同進一步的目的和優點由於下列描述與附圖結合考慮時將被更好地理解。然而，應當特別理解每個附圖僅為了舉例說明和描述的目的而提供，並且不希望作為限制本發明的限定。附圖簡述為了更全面地理解本發明，現在參考與附圖結合考慮的下列描述，其中圖1提供了示例性常規SCLC治療方案。圖2提供了具有廣泛SCLC的患者中的示例性Advexin⑧-DC疫苗I/II期試驗。圖3顯示了示例性Advexin⑧疫苗方案第一線應答。圖4顯示了Advexin⑧疫苗方案第二線治療。圖5顯示了在所有患者中對於第二線治療的應答的Advexin/DC疫苗存活數據。圖6提供了對第二線化學療法的應答圖表。圖7顯示了與本發明的那種比較在抗性SCLC中的藥物活性。圖8顯示了在接受第二線疫苗/CTX的可評估患者中的Advexin/DC疫苗存活數據。圖9提供了具有廣泛SCLC的患者中的示例性Advexin⑧-DC疫苗II期試驗。圖10A-10B顯示由單核細胞產生的DC的特徵。DC由單核細胞的冷凍樣品製備且如本文中描述的用Adv-p53感染。在第7天，細胞被收集並用FITC綴合的譜系特異性抗體和PerCP綴合的HLA-DR抗體的混合物(圖10A-右圖)或同種型對照IgG(圖10A-左圖)進行標記。表面染色細胞被固定、透化、並用同種型對照(圖10B-右頂部圖)或抗p53抗體(圖10B-右底部圖)染色。為了舉例說明染色的特異性，未感染細胞用同種型對照IgG(圖10B-左頂部圖)或抗p53抗體(圖10B-左底部圖)進行標記。Lin-HLA-DR+細胞被門控(gate)並且用p53的染色在這種DC群體內進行分析。圖11A-11C顯示對免疫接種的p53特異性免疫應答的例子。在圖11A中，2個HLA-A2陰性患者用DC-Adv-p53進行疫苗接種(具有2周間隔的3次疫苗接種)。在免疫接種前、最後一次疫苗後3周和2個月後收集血液。細胞如材料和方法中所述用ALVAC-p53進行刺激。具有"空，，栽體的ALVAC用作對照(ALVAC-cont)。IFN-y生產細胞數目在ELISP0T中一式四份地進行評估並根據每2xl5個單核細胞進行計算。顯示平均值士SD。*-與ALVAC-p53和ALVAC-cont—起孵育的細胞之間的p〈0.05。#-疫苗接種前後樣品之間的p<0.05。圖11B顯示具有廣泛期SCLC的HLA-A2陽性患者用DC-Adv-p53進行疫苗接種。在免疫接種前以及免疫接種後的不同點上收集血液。每2xl5個單核細胞的IFN-Y生產細胞數目在ELISPOT中一式四份地進行評估。細胞用HLA-A2匹配的p53衍生肽(LLGRNSFEV;SEQIDNO:3),PSA衍生的無關肽(FLTPKKLQCV;SEQIDNO:2)進行刺激或單獨留在培養基中(對照)。顯示平均值士SD。*-與p53和PSA肽一起孵育的細胞之間的p<0.05，#-疫苗接種前後樣品之間的p8倍-12個患者)。在每個組中計算顯示細胞p53特異性免疫應答的患者比例。使用曼懷二氏檢驗(MannWhitneytest)計算P值(雙尾)。在圖13B中，疫苗接種前的T細胞功能活性。樣品在疫苗接種前進行收集。MNC用0.1ugTT(TT-應答)或5jag/mlPHA(PHA應答)一式三份地進行刺激。刺激指數計算為在刺激物和單獨的培養基的存在下細胞增殖之間的比率。水平條表示對照組(n-6)中的最小值。顯示了個別結果。在圖13C中，患者分為2組具有針對刺激的正常水平的T細胞應答和減少水平的應答(低於最小對照值)。在每個組中計算具有陽性p53特異性應答的患者比例。在組間沒有發現統計學差異(對於2種刺激，費氏精確檢驗(Fisher，sExactTest)中的p值超過0.4)。在圖13D中，在疫苗接種前和2-3周後收集的MNC用PerCP綴合的抗CD3抗體、PE綴合的抗CD4抗體和FITC綴合的抗CD25抗體進行染色且通過流式細胞術進行分析。計算CD3+CD4+T細胞群體內的CD25高細胞比例。水平條表示組中值的平均值(在曼懷二氏檢驗中P值>0.2)。在圖13E中，患者分為2組具有對照和增加水平的CD^CD2rT細胞(超過最大對照值)。在每個組中計算具有陽性p53特異性應答的患者比例。在組間沒有發現統計學差異(費氏精確檢驗中P值超過0.3)。圖14A-14K顯示針對疫苗接種的p53特異性應答以及DC表型和功能之間的關聯。MNC在疫苗接種前從對照供體和SCLC患者中分離。細胞用抗體混合物進行染色且如方法中所述使用多色流式細胞術進行分析。計算DC(Lin-HLA-DR+)(圖14A)、成熟DC(Lin-CD83+)(圖14B)和ImC(Lin-HLA-DR-CD33+)(圖14G)的比例。雙尾p值使用曼懷二氏檢驗進行計算。在圖14D中，Lin-細胞中的HLA-DR平均螢光強度(MFI)。在圖14E中，MNC如本文所述用作異基因對照T細胞的刺激物。顯示了1:1比率(MNC:T細胞)的結果。每次實驗一式三份地進行。雙尾p值使用曼懷二氏檢驗進行計算。圖14C和14F顯示在疫苗接種前具有對照和減少水平的DC表型的患者組內計算的具有針對疫苗接種患者百分比。組間l異在統計'上不顯著(費氏精確檢驗中:尾P值超過O.3)。圖14H顯示在疫苗施用前具有對照和升高水平的ImC的患者組內計算的p53應答者和p53非應答者的百分比。顯示了費氏精確檢驗中雙尾p值。圖141顯示在疫苗接種前和2-3周後收集的單核細胞用藻紅蛋白綴合的抗CD3抗體、抗原呈遞細胞綴合的抗CD4抗體和FITC綴合的抗CD25抗體進行染色且通過流式細胞術進行分析。計算CD3+CD4+T細胞群體內的CD25*細胞比例。條，組中值的平均值(在曼-懷二氏檢驗中p值〉0.2)。在圖14J中，患者分為2組具有對照和增加水平的CD4+CD25+T細胞(超過最大對照值)。在每個組中計算具有陽性p53特異性應答的患者比例。在組間沒有發現統計學差異(費氏精確檢驗中》0.3)。在圖HK中，單核細胞在疫苗接種前從對照供體和SCLC患者中分離。細胞用抗體混合物進行染色且使用多色流式細胞術進行分析。評估未成熟髓樣細胞(Lin—HLA-DR—CD33+)的比例。圖15A-15D顯示針對疫苗接種的臨床應答。圖15A顯示鉑抗性患者的存活。13個鉑抗性患者從第一次疫苗施用時的存活，所述患者在疫苗接種後接受化學療法。生存中值為9.3個月。圖15B顯示了所有患者的存活。用疫苗治療的所有23個患者從第一次疫苗施用時的存活。生存中值為IO個月。圖15C顯示了針對疫苗接種的p53特異性免疫應答和針對化學療法的臨床應答之間的關係。在疫苗接種後進展且用笫二線化學療法治療的18個患者根據其針對疫苗的免疫應答分為2組。PD-疾病進展，SD-疾病穩定，PR-部分應答，CR-完全應答(所有都根據RESIST標準)。P使用威斯康星秩和檢驗(Wilcoxonsumranktest)進行計算。圖15D顯示了根據免疫應答的存活。對於抗p53免疫應答可評估的22個患者從第一次疫苗施用起的存活。實線表示具有陽性免疫應答的患者(生存中值，12.1個月)，並且虛線表示沒有陽性免疫應答的那些患者(生存中值，7.9個月)。2條存活曲線之間的差異具有0.075的p值。圖16顯示針對疫苗的臨床應答。順鉑/依託泊苷後2個月在腹膜後淋巴結中具有疾病進展的患者(新，且在PET掃描中陽性)在進展時用3次疫苗治療。在第一次疫苗施用後6周觀察到PR。在左側，在笫一次疫苗前1周進行的腹部CT掃描顯示2個腫大的腹膜後淋巴結(有圓圏的，每個直徑2cm)。第三次疫苗後2周獲得的右側的CT掃描顯示2個病灶尺寸減少超過60%。圖17A-17B涉及針對疫苗接種的免疫和臨床應答之間的關聯。在圖17A中是來自發展針對疫苗接種的p53免疫應答的患者的IFN-yELISPOT測定結果。非特異性IFN-y生產(無關肽)的本底水平被扣除。顯示了每lx105個細胞的斑點數目。所有測量一式四份地進行。顯示了關於每種樣品的平均值。在圖17B中是用第二線化學療法治療的患者中的淋巴細胞計數(xl07L)。柱，平均值；條±SD。發明詳述本發明在主題方面涉及美國專利申請公開號20030045499，所述美國專利申請整體引入本文作為參考。I.定義如本文說明書中使用的，"a"或"an"可以指一個(種)或多個(種)。如本文權利要求中使用的，當與單詞"包含"結合使用時，單詞"a"或"an"可以指一個(種)或超過一個(種)。如本文中使用的，"其它"可以指至少第二個(種)或多個(種)。本發明的某些實施方案可以由本發明的一個(種)或多個(種)元件、方法步驟、和/或方法組成，或基本上由其組成。預期本文中描述的任何方法或組合物可以參考本發明描述的任何其他方法或組合物實現。如本文使用的，術語"給予或恢復化學敏感性"指致使癌細胞對癌症治療有應答，其中所述癌細胞目前例如對癌症治療沒有應答，預期對癌症治療是無應答的，或易於對癌症治療無應答。更具體而言，不受特定癌症治療影響的癌細胞的增殖變成受癌症治療影響。癌細胞可以已來自先前已對癌症治療敏感的癌症例如腫瘤中，或癌細胞可以已來自對癌症治療從不敏感的癌症例如肺瘤中。癌細胞可以易於變成對一種或多種癌症治療有抗性，並且本發明的方法使細胞不會變成對一種或多種癌症治療有抗性。在某些實施方案中，癌細胞易於變成對治療有抗性，因為它包含在多核苷酸中的與抗性有關的一種或多種突變，和/或它包含一種或多種多核苷酸的上調或下調，其中所述上調或下調與抗性有關。如本文使用的，術語"第一線治療"指個人在被診斷具有癌症後接受的第一種治療。如本文使用的，術語"免疫原性組合物"指在個體體內引發免疫應答的組合物。在具體實施方案中，免疫原性組合物包含疫苗，所述疫苗可以定義為在後續攻擊後提供免疫性的免疫原性組合物。如本文使用的，術語"抗性"或"治療抗性"指包含不能通過一種或多種癌症療法進行治療的一種或多種癌細胞的癌症。例如，在對細胞實施治療後一種或多種癌細胞仍能夠增殖。在具體實施方案中，一種或多種細胞對其有抗性的癌症治療是化學療法。在其他方面，抗性可以針對一種或多種癌症療法。在進一步的實施方案中，抗性細胞發展出針對治療的抗性，而在可替代的實施方案中抗性細胞始終對治療有抗性，或包含致使其不能對一種或多種癌症治療敏感的生物學或生理學表型或基因型。在某些實施方案中，個體可用本發明的方法治療，其中所述個體先前已用癌症療法例如化學療法、放射、或兩者進行治療，儘管在其他實施方案中，個體先前未用癌症療法進行治療。在其中個體先前未用癌症療法進行治療的方面，個體可以包含在暴露於癌症治療後將變成有抗性的一種或多種癌細胞。這種抗性的表現可以在細胞將變成對其有抗性的癌症治療開始後立即或不久發生，或者抗性可以直到治療開始後數月或數年才表現。對治療有抗性或將變成有抗性的一種或多種癌細胞可以是或不是轉移的。個體對其具有一種或多種抗性細胞的療法在通常對於特定癌症的治療背景中。即，個體對其有抗性的療法就用於那種特定癌症的常規癌症治療而言可以是合格的，並且在某些方面本發明可以涉及對用於特定癌症的臨床公認療法有抗性。例如，技術人員認識到對於乳腺癌，常規的臨床公認療法包括至少HercepUn;芳香酶抑制劑(Arimidex⑧[化學名阿那曲嗤]，Aromasin[化學名依西美坦],和Femara⑧[化學名來曲唑]);它莫西芬、雷洛昔芬、託瑞米芬、或Faslodex(化學名氟維司群)。對於肺癌的示例性臨床公i人療法包括至少順鉑、依託泊苷、卡鉑、紫杉醇、多西他奇、酒石酸長春瑞濱、多柔比星、硫酸長春新鹼、異磷醯胺和/或鹽酸吉西他濱。對於前列腺癌的示例性臨床公認療法包括至少多西他賽；促黃體激素-釋放激素激動劑，例如亮丙瑞林、戈舍瑞林和布舍瑞林；抗雄激素物質，例如氟他胺和比卡魯胺；酮康唑；和/或氨魯米特。本領域技術人員知道對於其他癌症類型的其他常規臨床公認療法。如本文使用的，術語"第二線治療，，指第一線治療另外和隨後的治療，且在具體方面不同於第一線治療。在其中人腫瘤響應(即完全或部分應答)第一線治療的情況下，腫瘤稱為"敏感的"，且如果腫瘤復發，那麼第二線治療可以涉及再次施用相同的第一線活性治療。然而，例如SCLC是特別有侵略性的癌症且具有非常高頻率的腫瘤復發。在其中腫瘤用第一線化學療法治療且腫瘤未能響應(即沒有消退)或繼續生長的情況下，如果腫瘤生長在化學治療方案完成後90天內發生，那麼這些腫瘤視為"有抗性的，，。如上所述，對於有抗性的腫瘤，在具體實施方案中，對於後續治療使用不同的化學療法。如本文使用的，術語"敏感的"指包含能夠用特定癌症療法進行治療的一種或多種癌細胞的癌症。例如，對細胞實施治療後一種或多種細胞不能增殖。在具體實施方案中，對特定癌症治療敏感的細胞被治療殺死。II.本發明本發明考慮了治療抗性過度增殖性疾病的治療。在具體方面，治療通過使具有癌症的個體給予或恢復化學敏感性，其中一種或多種癌細胞對治療有抗性，通過施用在樹突細胞中的自身基因產物表達構建體，所述表達構建體隨後將加工的自身基因產物抗原呈遞給免疫效應細胞。在具體實施方案中，自身基因產物表達構建體包含p53表達構建體。免疫效應細胞隨後產生抗自身基因產物應答，例如抗p53應答，導致呈遞突變型自身基因產物抗原的過度增殖細胞破壞或裂解，包括治療抗性過度增殖細胞，例如示例性突變型p53抗原。在具體實施方案中，樹突細胞從其中自身基因產物例如p53的表達在過度增殖細胞中上調的患者獲得。獲得的樹突細胞用包含p53基因的腺病毒載體感染，並且給個體施用p53腺病毒感染的樹突細胞。預期感染的樹突細胞將自身基因抗原呈遞給免疫效應細胞，刺激患者中的抗自身基因應答，且導致呈遞突變型自身基因抗原的過度增殖細胞破壞或裂解，包括對癌症治療有抗性的至少一些過度增殖細胞。在具體實施方案中，過度增殖性疾病和/或其對癌症治療的抗性的特徵在於自身基因產物改變或增加表達。在進一步的實施方案中，本發明包含使過度增殖性疾病的一種或多種細胞敏化，且在具體實施方案中，疾病及其患病細胞對例如藥物、放射、或兩者有抗性。疾病一般可以通過自身基因產物改變或增加表達來表徵和/或疾病對一種或多種特定治療的抗性一般可以通過自身基因產物改變或增加表達來表徵。在具體實施方案中，除給受試者施用用於過度增殖性疾病的進一步治療例如藥物或放射治療之外，具有疾病的受試者被提供表達自身基因產物的樹突細胞。在另外實施方案中，存在給予或恢復針個體中的一種或多種化學治療抗性癌細胞的化學敏感性的方法，包括給個體遞送治療有效量的表達自身基因產物的樹突細胞和對於癌症的另外治療。在本發明的某一方面，組合物包含置於樹突細胞內的腺病毒栽體中的p53。表達自身基因產物的樹突細胞可以視為免疫原性組合物，且在具體實施方案中，本發明包含提供表達自身基因產物的樹突細胞以及提供不同於表達自身基因產物的樹突細胞的另一種癌症治療的方法，儘管可以使用表達其他自身基因產物的樹突細胞。並非表達自身基因產物的樹突細胞的治療可以包含任何類型的癌症治療，包括例如化學療法、放射、基因療法、手術、免疫療法、激素療法等。2種分開療法可以以任何合適的方案給個體施用，儘管在具體實施方案中免疫原性組合物在其他療法後遞送。樹突細胞療法的部分或全部和第二種療法可以重複，例如通過循環治療。因此，在本發明的具體實施方案中，存在給具有治療抗性過度增合物的方法。在進一步的實施方案中，個體除免疫原性組合物之外還被提供癌症治療，並且在某些方面，2種治療以累加方式或以協同方式起作用以治療過度增殖性疾病，包括對癌症治療有抗性的過度增殖細胞。在另外實施方案中，表達自身基因產物的樹突細胞被視為疫苗。III.Advexin⑧-樹突細胞(DC)儘管包含表達自身基因產物的樹突細胞的任何合適組合物都可以在本發明中使用，但在本發明的具體方面使用Advexin⑧-DC組合物。如本文中使用的，Advexin-DC組合物包含在栽體上的野生型P53，其中所述載體包含在樹突細胞中。在本發明的具體方面，載體可以是任何合適的栽體，從而使得它允許p53在樹突細胞內表達。載體的示例性實施方案包括腺病毒載體、病毒載體、腺伴隨病毒載體、逆轉錄病毒載體例如慢病毒載體、皰疹病毒載體、或痘苗病毒載體。儘管野生型p53對於本領域技術人員是容易獲得的，但示例性野生型序列在SEQIDN0:1中提供(國家生物技術信息中心(NationalCenterforBiotechnologyInformation)GenBank登記號M14695)。其他p53序列可在國家生物技術中心的GenBank資料庫中可獲得。在其他實施方案中，組合物依照美國專利號6,726,907中描述的那些使用，所述美國專利整體引入本文作為參考，所述組合物包括包含例如p53的純化的腺病毒載體組合物。IV.方法和組合物的增強在本發明的某些實施方案中，表達自身基因產物的樹突細胞進一步包含增強樹突細胞組合物活性的一種或多種部分。該部分可以在樹突細胞進行處理以包含自身基因產物前或後加入樹突細胞。在本發明的具體方面，對樹突細胞實施增強其活性的組合物。增強表達自身基因產物的樹突細胞活性的任何組合物可以在本發明中使用，儘管在具體方面所述部分包含抗體，且在具體實施方案中抗體是單克隆抗體，儘管任選地抗體是多克隆抗體。在具體實施方案中，對樹突細胞實施抗CD40抗體(Nikitina等人，200"處理。用於促進DC分化和激活的可替代方法包括用病原體受體和炎症信號進行處理(參見，例如MunzC，Stei畫nRM，FujiiS.Dendriticeel1maturationbyinnatelymphocytes:coordinatedstimulationofinnateandadaptiveimmunity.JExpMed.2005Jul18;202(2):203-7)。關於增強表達自身基因產物的樹突細胞活性的任何組合物的遞送方法可以是任何合適的種類。在某些實施方案中，例如增強組合物作為多核苷酸、多肽、肽、小分子等等提供，且遞送方法是適當匹配的。例如，增強表達自身基因產物的樹突細胞活性的小分子、多肽和/或蛋白質可以在脂質體中遞送給有此需要的個體。可替代地，可以使用編碼增強組合物的多核苷酸。在某些方面，編碼增強組合物的多核苷酸與編碼自身基因產物的多核苷酸相同或不同。在其中包含編碼自身基因產物的序列的相同多核苷酸還包含編碼增強組合物的序列的那些實施方案中，2種序列可以編碼融合基因產物或可以編碼2種分開的基因產物。在進一步的實施方案中，編碼自身基因產物的序列和編碼增強組合物的序列由不同調節區進行調節，儘管在可替代的實施方案中它們由相同調節區進行調節。在具體實施方案中可以稱為啟動子的任何調節區可以是例如組織特異型調節區，誘導型調節區，或組成型調節區。V.用本發明的方法治療的受試者任何個體都可以用本發明的方法和組合物進行治療。在本發明的某些方面，方法和組合物涉及癌症疫苗。在具體實施方案中，個體被施用本發明的疫苗。適合於本發明的方法和組合物的個體可以具有發展一種或多種癌症類型的一種或多種危險因素。危險因素可以定義為增加發展癌症機會的任何事物，並且在這種情況下可以是增加發展治療抗性癌症機會的任何事物。發展治療抗性癌症的危險可以在對其已發生抗性的治療施用之前、之時或之後表現。下列危險因素可能一般適用於發展癌症或特別適用於發展治療抗性癌症，且因此在具體實施方案中，個體具有發展癌症包括治療抗性癌症的一種或多種危險因素。儘管不同癌症具有不同危險因素，但某些危險因素適用於超過一種的癌症類型，例如具有腫瘤發生前條件，個人癌症史，家族癌症史，和/或具有改變的基因和/或基因表達，例如對於p53。某些危險因素對一種或多種癌症類型特異，例如具有特定改變的基因和/或基因表達，例如對於乳腺癌的BRCA1或BRCA2;對於皮膚癌無保護地暴露於強日照；對於肺、喉、口、咽喉、食管、腎、膀胱、結腸和幾種其他器官癌症的菸草使用；等等。關於個體發展治療抗性癌症的危險因素可以是任何種類的，儘管在具體實施方案中，它們包含特定多核苷酸的一種或多種突變和/或表達改變。例子包括例如EGFR突變和非小細胞肺癌對吉非替尼的抗性Uobayashi等人，2005);黑素細胞主要調節物MITF(小眼畸形相關轉錄因子)和對皮膚癌的抗性(Garraway等人，2005);胃癌細胞中的ZNRD1表達變化(Zhang等人，2003)。用於給予對化學治療抗性的一般機制是經由上調負責給予歷&(多藥抗性)表型的P糖蛋白基因家族(ClarkeR，LeonessaF,TrockB.Multidrugresistance/P-glycoproteinandbreastcancer:reviewandmeta-analysis.SeminOncol.2005Dec;32(6Suppl7)S9-15.)。與對乳腺癌抗性有關的突變包括它莫西芬抗性乳腺癌中的雌激素受體突變(Karnik等人，1994);與多柔比星抗性有關的人乳腺癌耐藥蛋白(BCRP)中的482(R482)突變(Allen等人，2002)。具有發展治療抗性癌症的一種或多種危險因素的個體可以在任何時間施用本發明的方法和組合物，包括在發展治療抗性癌症之前，發展治療抗性癌症之後，或兩者。VI.過度增殖性疾病癌症已成為西方社會的主要死亡原因之一，僅次於心臟病。目前評估反映在美國3個人中有1個將發展癌症，且5個人中有1個將死於癌症。從免疫學觀點來看癌症可以視為已喪失正常生長調節機制的改變的自身細胞。致癌基因是具有引起正常細胞癌變的潛力的多核苷酸。目前有反映其不同活性的3種主要類別的致癌基因。一類致癌基因編碼誘導細胞增殖的蛋白質。第二類致癌基因稱為腫瘤抑制基因或抑癌基因，作用是抑制過量細胞增殖。第三類致癌基因通過編碼調節編程性細胞死亡的蛋白質阻斷或誘導凋亡。在本發明的一個實施方案中，過度增殖性疾病的治療涉及給樹突細胞施用自身基因表達構建體，且在具體實施方案中，施用是皮內的。預期樹突細胞將加工的自身基因野生型抗原呈遞給免疫效應細胞，所述免疫效應細胞產生抗自身基因應答，導致呈遞突變型自身抗原的過度增殖細胞破壞或裂解。3種主要類別的致癌基因在下文討論且列於表l中。在具體實施方案中，本發明可以在任何癌症類型的治療中使用，包括，例如，肺、乳腺、前列腺、結腸、胰腺、腦、皮膚、甲狀腺、肝、腎、脾、食管、卵巢、子宮頸、子宮、睪丸、骨、垂體腺、胃、血液、骨髓和淋巴系統。在具體實施方案中，本發明用於治療小細胞肺癌。小細胞肺癌(SCLC)構成美國每年可見的大約170，000肺癌新病例的15-20%。SCLC是最具侵略形式的肺癌，5年存活率<10%。廣泛期疾病(ES)的診斷包含大約三分之二的SCLC新病例，且如果未治療導致僅2-4個月的存活，並且使用攻擊性化學治療方案存活增至6-7個月。局限期和廣泛期疾病對第一線化學治療非常有應答性，通常觀察到超過50%的應答率。然而，這些應答幾乎總是短暫的且ES患者中的疾病復發經常發生。復發或未能對化學治療應答後，患者一般在數月內死於疾病(Schiller,2001)。具有復發SCLC患者的治療特別具有挑戰性如果患者是鉑抗性的(即疾病進展在鉑方案完成後3個月內發生)，那麼生存中值為3.7-4.7個月。對於鉑敏感的患者，生存中值為5.8-6.9個月(Eckardt,2005)。A.細胞增殖誘導物誘導細胞增殖的蛋白質取決於功能進一步分成各種類別。所有這些蛋白質的共性是其調節細胞增殖的能力。例如，PDGF形式的s"致癌基因是分泌型生長因子。致癌基因很少由編碼生長因子的基因產生，且目前s"是唯一已知的天然存在的致癌生長因子。蛋白質fms、erbA、erbB和neu是生長因子受體。這些受體的突變導致可調節功能喪失。例如，影響nue受體蛋白的跨膜結構域的點突變導致/me致癌基因。erW致癌基因來源於曱狀腺激素的細胞內受體。修飾的致癌erbA受體被認為與內源性甲狀腺激素受體竟爭，導致不受控制的生長。最大類的致癌基因是信號轉導蛋白(例如wc、,是信號轉導物。蛋白質src是細胞質蛋白質酪氨酸激酶，且在某些情況下其從原癌基因到致癌基因的轉化經由第527位的酪氨酸殘基突變產生。相反，在一個例子中GTP酶蛋白質ras從原癌基因到致癌基因的轉化由序列中第12位的胺基酸從纈氨酸到甘氨酸的突變產生，減少rasGTP酶活性。蛋白質jun、fos和myc是作為轉錄因子直接發揮其對核功能的作用的蛋白質。表1列出了這部分中描述的各種致癌基因以及未描述的那些中的許多。B.細胞增殖抑制劑胂瘤抑制致癌基因發揮作用以抑制過量細胞增殖。這些基因的滅活致使破壞其抑制活性，導致不受調節的增殖。腫瘤抑制物p53、p16和C-CAM在下文得到描述。高水平的突變型p53已在通過化學致癌作用、紫外輻射和幾種病毒轉化的許多細胞中發現。p53基因是廣泛多樣的人腫瘤中突變滅活的常見靶且已證明是常見的人癌症中最常突變的基因。它在超過50%的人NSCLC(Hollstein等人，1991)和廣鐠的其他腫瘤中是突變的。各種癌症已與p53基因的突變相關，所述突變導致p53腫瘤抑制物特性喪失。p53基因中的突變進一步導致發展的所有癌症中的大約50%(Vogelstein和Kinzler，1992;Levine等人,1991),而這些突變中的大多數是單鹼基錯義突變(Kovach等人，1996)。已觀察到導致p53功能喪失的突變還導致核和細胞質高濃度(即過量表達)的突變型p53蛋白質(Oldstone等人，1992;Finlay等人，1988)。相反，功能性野生型p53蛋白質在細胞中以非常低的水平表達。細胞高濃度的p53突變蛋白作為癌症免疫治療的途徑最近已受到更多的關注。一般觀念是引發針對在細胞表面上呈遞與MHC分子結合的突變型p53肽的腫瘤細胞的免疫應答。使用突變型p53肽作為抗原的抗肺瘤應答的產生已在幾項研究中得到證明(McCarty等人，I"8;Gabrilovich等人，1996;Mayordomo等人，1996;ZUvogel等人，1996)。然而，這種癌症免疫治療方法具有幾個缺陷。例如p53突變可以在蛋白質中的許多不同位點上發生，使得在製備用於p53癌症治療的特異性突變型肽之前必須鑑定每種蛋白質中的突變位點。此外，並非所有突變都包含在已知與MHC分子結合的蛋白質區域中，且因此不會引發抗腫瘤應答(DeLeo，1998)。上述缺陷已刺激研究野生型p53序列中絕大多數腫瘤來源的p53蛋白質共有的抗原表位。野生型p53肽特異性細胞毒性T淋巴細胞已從人和鼠類應答淋巴細胞中產生，其中一些在體外和體內識別p53過量表達的腫瘤(Theobald,等人，1995;Ropke等人，1996;Nijman等人，1994;美國專利號5,747,469，特別整體引入本文作為參考)。然而，因為抗原的呈遞是受MHCI類限制的，由於MHCI類肽結合位點的多態性質只有某些肽可以成功地在某些患者中施用。此外，鑑定與特定個體MHC分子庫結合的所有可能的p53肽是不實際的。另外，的確與患者的MHCI類結合的肽疫苗可能不由MHCII類成功呈遞，所述MHC11類是在004+T細胞免疫應答誘導中關鍵的分子。研究者已嘗試鑑定多重p53表位，它應允許針對腫瘤細胞的更有效的免疫應答，所述腫瘤細胞表達在不同位點上具有突變的多重p53基因。這可以通過用完整的野生型p53免疫細胞來完成以利用大多數人腫瘤中過量表達的整個p53多肽。樹突細胞(DC)是最適合於疫苗抗原遞送的細胞類型(在本文中進一步描述)，因為它們是最有效的抗原呈遞細胞，在初次和二次免疫應答刺激中有效(Steinman,1991;Celluzzi和Falo，1997)。在本發明中預期使用病毒表達構建體用野生型p53蛋白質轉導樹突細胞將引發對表達不同突變型p53蛋白質的各種細胞特異的有效抗腫瘤免疫應答。此外，因為p53的大多數突變是單鹼基錯義突變，所以本發明的方法克服了鑑定p53突變位點和後續製備用於免疫治療的定製突變型肽的缺陷。因此，本發明的方法提供了基於免疫治療的癌症治療的簡單且新型方法的基礎。野生型p53被公認是許多細胞類型中的重要生長調節物。錯義突變是p53基因所共有的且是致癌基因的轉化能力所必需的。通過點突變引起的單個遺傳改變可以產生致癌p53。然而，與其他致癌基因不同，p53點突變已知在至少30個不同密碼子中發生，通常造成在細胞表型中產生變化而不減少純合性的顯性等位基因。另外，這些顯性陰性等位基因中的許多似乎在生物中是耐受的且在種系中傳遞。各種突變體等位基因似乎從最低限度的功能異常到強滲透的顯性陰性等位基因(Weinberg,1991)。另一種細胞增殖抑制劑是p16。真核細胞周期的主要轉變由依賴細胞周期蛋白的激酶或CDK觸發。一種CDK即依賴細胞周期蛋白的激酶4(CDK4)調節通過G,的過程。這種酶的活性可以是在Gi晚期使Rb磷酸化。CDK4的活性受激活亞單位D型細胞周期蛋白控制，並且通過抑制亞單位控制，pl6""已在生物化學上表徵為與CDK4特異性結合且抑制CDK4的蛋白質，且因此可以調節Rb磷酸化(Serrano等人，1993;Serrano等人，1995)。因為pl6腦蛋白質是CDK4抑制劑(Serrano,1993)，所以這種基因的缺失可以增加CDK4的活性，導致Rb蛋白質的高度磷酸化。p16還已知調節CDK6的功能。pl6""屬於新近描述的CDK抑制蛋白質種類，所述CDK抑制蛋白質還包括pl68、p21,和p27,。pl6!w"基因位於9p21(在許多肺瘤類型中經常缺失的染色體區域)。pl6腦基因的純合缺失和突變在人腫瘤細胞系中很頻繁。這種證據暗示pl6,基因是腫瘤抑制基因。然而，這種解釋已受到pl6""基因改變的頻率在原發性未培養的腫瘤中比培養的細胞系中低得多的事實挑戰(Caldas等人，1994;Cheng等人，1994;Hussussian等人，1994;Kamb等人，1994;Kamb等人，1994;Mori等人，1994;0kamoto等人，1994;Nobori等人，1995;0rlow等人，1994;Arap等人，1995)。通過用質粒表達載體轉染恢復野生型pl6INK4功能減少了某些人癌細胞系的集落形成(0kamoto，1994;Arap，1995)。C-CAM基本上在所有上皮細胞中表達(0din和0brink，1987)。表觀分子量為105kD的C-CAM最初通過其與中和細胞聚集的特異性抗體反應從大鼠肝細胞的質膜中分離(0brink,1991)。近期研究指出C-CAM在結構上屬於免疫球蛋白(Ig)超家族且其序列與癌胚抗原(CEA)高度同源(Lin和Guidotti，1989)。使用杆狀病毒表達系統，Cheung等人，(1993)顯示C-CAM的第一個Ig結構域對細胞粘附活性是關鍵的。細胞粘附分子或CAM已知涉及調節器官發育和細胞分化的複雜的分子網絡相互作用(Edelman，1985)。近期數據指出CAM的異常表達可能涉及幾種贅生物的腫瘤發生；例如，在上皮細胞中佔優勢地表達的E鉀粘蛋白的表達減少與幾種贅生物的進展有關(Edelman和Crossin,1991;Frixen等人，1991;Bussemakers等人，1992;Matsura等人，1992;Urabas等人，1992)。同樣，Giancotti和Ruoslahti(1990)證實通過基因轉移增加a5p,整合素的表達可以在體內減少中國倉鼠卵巢細胞的致肺瘤性。C-CAM現在已顯示在體外和體內抑制腫瘤生長。可以根據本發明使用的其他腫瘤抑制物包括RB、APC、DCC、NF-1、NF-2、WT-1、MEN-I、MEN-II、zacl、p73、VHL、MMAC1、FCC和MCC(參見表1)。C.編程性細胞死亡調節物凋亡或編程性細胞死亡是對於正常胚胎發育，維持成人組織中的穩態，和抑制致癌作用必需發生的過程(Kerr等人，1972)。Bcl-2蛋白質家族和ICE樣蛋白酶已證實是其他系統中的重要的凋亡調節物和效應物。與濾泡性淋巴瘤相聯繫發現的Bcl-2蛋白質在響應不同凋亡刺激的凋亡控制和細胞存活增強中起顯著作用(Bakhshi等人，1985;Cleary和Sklar，1985;Cleary等人，1986;Tsujimoto等人，1985;Tsujimoto和Croce，1986)。進化上保守的Bcl-2蛋白質現在已識別為可以歸類為死亡激動劑或死亡拮抗劑的關聯蛋白家族成員。在其發現後，顯示Bcl-2發揮作用以抑制通過各種刺激觸發的細胞死亡。同樣，目前顯而易見的是存在分享共同結構和序列同源性的Bcl-2細胞死亡調節蛋白家族。這些不同的家族成員已顯示具有與Bel-2類似的功能(例如BcU、Bclw、Mcl-l、Al、Bfl-l)或抵制Bcl-2功能且促進細月包死亡(例:i口Bax、Bak、Bik、Bim、Bid、Bad、Harakiri)。tableseeoriginaldocumentpage35來源_人疾病_禽成紅細胞增多擴增的，缺失的鱗症病毒；ALV啟動狀上皮細胞癌；成子插入；擴增的人膠質細胞瘤腫瘤由大鼠擴增的乳腺、卵Glioblatoms轉染巢、胃癌SM貓肉瘤病毒HZ貓肉瘤病毒基因ERBB/HERERBB-2/NEU/HER-2FMSKITTRKMETRETR0SPDGF受體TGF-p受體由人結腸癌轉染由人骨肉瘤轉染易位和點突變URII禽肉瘤病毒易位禽勞斯肉瘤病毒散發性曱狀腺癌；家族性曱狀腺髓樣癌；多發性內分泌腺痛2A和2B慢性粒單核細胞白血病(myclomonocyUc)結腸癌錯配突變靶功能_EGF/TGF-a/雙調蛋白/P動物纖維素hetacellulin)受體由NDF/調蛋白和EGF相關因子調節CSF-1受體MGF/Steel受體造血作用NGF(神經生長因子)受體分散因子/HGF受體孤兒受體Tyr激酶孤兒受體Tyr激酶TEL(ETS樣轉錄因子)/PDGF受體基因融合與RB、RNA聚合酶、CRK、CBL相互作用Src家族；T細胞信號傳導；CD4/CD8T細胞相互作用具有信號轉導功能的膜相關Tyr激酶；由受體激酶活非受體酪氨酸激酶ABI.FPS/FESLCKAbelsonMul.V禽藤浪(Fuji謹i)SV;GAFeSVMul.V(鼠白血病病毒)啟動子插入具有BCR易位的慢性髓細胞性白血病tableseeoriginaldocumentpage37tableseeoriginaldocumentpage38基因MLL/VHRX+ELI/MENMYBMYCN-MYCL-MYCRELSKIVHLWT-1來源_易位/ELL與MLLTrithorax樣基因融合禽成髓細胞病毒禽類MC29;易位B細胞'淋巴瘤；啟動子插入禽白血病病毒擴增禽網狀內皮組織增多症病毒禽SKV770逆轉錄病毒可遺傳的抑制物人疾病_急性髓細胞樣白血病伯基特淋巴瘤成神經細胞瘤肺癌希-林二氏症候群(VonHippel-Landau)威爾姆氏(Wlim)腫瘤功能_AP-1DNA結合和轉甲基酶MLL與ELIRNApolII延伸因子的基因融合DNA結合與MAX配偶體的DNA結合；細胞周期蛋白調節；相互作用RB;調節凋亡NF-kB家族轉錄因子轉錄因子負調節物或延伸素；轉錄延伸複合物轉錄因子細胞周期/DNA損害應答"—21ATM可遺傳病症BCL-2FACCFHIThMLI/MutLhMSH2/MutS易位點突變脆性位點3pl4.2共濟失調性毛細血管擴張症濾泡性淋巴瘤C型範可尼貧血(素因白血病肺癌HNPCCHNPCC蛋白質/脂質激酶同源性；P53途徑上遊DNA損害應答凋亡三聯組氨酸相關二腺苷5'，3'〃'-P1.p4四磷酸鹽不對稱水解酶錯配修復；MutL同系物錯配修復；MutS同tableseeoriginaldocumentpage40VII.與自身基因致腫瘤性相關的免疫應答在本發明的一個實施方案中，其中自身基因表達在治療抗性過度增殖細胞中上調的過度增殖性疾病通過施用能夠引發抗自身基因應答的自身基因表達構建體來治療。自身基因p53在本文中將僅作為示例性實施方案提及。將p53表達構建體遞送至給定抗原呈遞細胞後，免疫事件級聯必須跟著發生以刺激所需抗p53應答。因此，與p53表達有關的免疫應答，且更一般地過度增殖性疾病中自身基因表達的基本了解是必需的。A.細胞毒性T淋巴細胞T淋巴細胞起於骨髓中的造血幹細胞，且移動到胸腺成熟。T細胞在其膜上表達獨特的抗原結合受體(T細胞受體)，所述受體可以只識別與其他細胞表面上的主要組織相容性複合物(MHC)分子結合的抗原。存在至少2種T細胞群體，稱為T輔助細胞和T細胞毒性細胞。T輔助細胞和T細胞毒性細胞主要通過其分別顯示的膜結合糖蛋白CD4和CD8來區分。T輔助細胞分泌各種淋巴因子，所述淋巴因子對B細胞、T細胞毒性細胞、巨噬細胞和免疫系統的其他細胞激活是關鍵的。相反，識別抗原-MHC複合物的T細胞毒性細胞增殖且分化成稱為細胞毒性T淋巴細胞(CTL)的效應細胞。CTL通過產生導致細胞裂解的物質來消滅展示抗原的機體細胞，例如病毒感染細胞和腫瘤細胞。本發明的一個重要方面是刺激針對野生型自身基因抗原的CTL應答。已觀察到p53基因的突變導致腫瘤細胞中過量表達突變型p53蛋白質(Harris,1996),而野生型p53在正常細胞以低水平表達。已進一步證實野生型和突變型p53肽可以刺激針對表達p53抗原肽的腫瘤細胞的CTL應答(DeLeo，1998;Mayordomo等人，1996)。在本發明中預期類似的抗自身基因CTL應答將通過用完整野生型自身基因多肽免疫樹突細胞得到刺激，且因此可以用作過度增殖性疾病的治療。B.抗原呈遞細胞抗原呈遞細胞包括巨噬細胞、B淋巴細胞和樹突細胞，通過其表達的特定MHC分子來區分。APC使抗原內在化並再表達連同其外細胞膜上的MHC分子一起的那種抗原的部分。在本發明的一個優選實施方案中，樹突細胞是選擇用於自身基因遞送和抗原呈遞的抗原呈遞細胞。樹突細胞是最有效的抗原呈遞細胞用於起始抗原特異性T細胞激活(Arthur等人，1997)。它們還是短期培養和各種基因轉移方法(例如，DNA/脂質體複合物、電穿孔、CaP04沉澱和重組腺病毒)的極佳候選物(Arthur等人，1997)。人和小鼠樹突細胞已成功地通過腺病毒基因轉移進行修飾(Sonderbye等人，1998)。在本研究中，腺病毒(AdLacZ)用於在樹突細胞中表達細胞內P半乳糖苷酶(gal)抗原，大約40%用AdLacZ轉導的細胞表達高水平的P-gal。此外，用卵白蛋白(OVA)肽皮下免疫接種小鼠樹突細胞誘導OVA特異性CD8+CTL應答(Celluzzi和Falo，1997)。C.主要組織相容性複合物主要組織相容性複合物(MHC)是具有多重基因座的大遺傳複合物。MHC基因座編碼2個主要種類的MHC膜分子，稱為I類和II類MHC。T輔助淋巴細胞一般識別與MHCII類分子結合的抗原，且T細胞毒性淋巴細胞識別與MHCI類分子結合的抗原。在人中，MHC稱為HLA複合物而在小鼠中稱為H-2複合物。本發明的一個重要方面是用完整的野生型自身基因免疫接種樹突細胞以利用大多數人腫瘤中相對過量表達的整個自身基因分子。在一個實施方案中考慮p53免疫治療方法以勝過用突變型p53肽作為抗原免疫動物的先前免疫治療(Gabrilovich等人，1996;Mayordomo等人，1996;Zitgovel等人，1996)。儘管使用突變型p53肽的上述方法在產生抗腫瘤應答方面是有效的，但它們具有幾個缺陷。例如，p53突變及其他自身基因在蛋白質中的許多位點上發生，使得在構建用於治療的定製突變型肽之前必須鑑定每種蛋白質中的突變位點。此外，並非所有突變都包含在已知與MHC分子結合的蛋白質區域中。在使用野生型p53肽的另一項研究中，CTL從人和鼠類應答淋巴細胞中產生，其中一些在體外識別p53過量表達的腫瘤(Theobald,等人，1995;Ropke等人,1996;Nijman等人，1994)。然而，因為抗原的呈遞是受MHCI類限制的，由於高度多態的MHCI類肽結合位點只有某些寡肽可以在某些患者中使用。在本發明中預期用完整的野生型自身基因蛋白質免疫樹突細胞將產生各種自身基因抗原用於MHCI類呈遞，且從而有效刺激細胞溶解性T淋巴細胞應答。VIII.關於自身基因上調或改變表達的測定法在本發明的一個實施方案中，具有治療抗性過度增殖性疾病的患者的鑑定是需要的，在所述過度增殖性疾病中自身基因表達是上調的。在具有治療抗性過度增殖性疾病的患者中，例如高度增殖組織的樣品將用於測定上調。在某些實施方案中，廣泛多樣的檢測方法可以在本發明的某些實施方案中用於檢測至少一種治療抗性細胞的自身基因狀態。存在例如針對致癌蛋白質的眾多抗體，且因此利用抗體用於檢測的任何測定法例如ELISA、蛋白質印跡法、免疫測定技術等預期在本發明中是有用的。可替代地，使用核苷酸探針的測定法可以用於鑑定自身基因的存在，例如DNA印跡法、RNA印跡法或PCRTM技術。所有上述技術是本領域技術人員眾所周知的，且無需不適當的實驗即可在本發明中使用。A.ELISA、免疫測定法和免疫組織學測定法。在本發明的一個具體實施方案中，免疫組織學測定法用於檢測在治療抗性腫瘤樣品(例如，組織切片)中自身基因的表達增加或改變。免疫組織化學測定法和免疫螢光測定法的示例性方法先前已得到描述(美國專利號5，858，723;W094/11514,特別整體引入本文作為參考)。本發明包含的更多免疫測定法包括但不限於美國專利號4,367，110(雙單克隆抗體夾心測定法)和美國專利號4,452,901(蛋白質印跡法)中描述的那些。其他測定法包括體外和體內標記配體的免疫沉澱和免疫細胞化學。免疫測定法一般是結合測定法。某些優選免疫測定法是本領域已知的各種類型的酶聯免疫吸附測定法(ELISA)和放射免疫測定法(RIA)。在一種示例性ELISA中，抗自身基因抗體被固定在所選表面上，例如聚苯乙烯微量滴定板的孔、浸漬片或柱栽體。隨後，將懷疑包含所需抗原的測試組合物例如臨床樣品加入孔中。結合和洗滌以去除非特異性結合的免疫複合物後，可以檢測結合抗原。檢測一般通過添加對所需抗原特異的另一種抗體來完成，所述另一種抗體與可檢測標記連接。這種類型的ELISA稱為"夾心ELISA"。檢測還可以通過添加對所需抗原特異的第二種抗體，隨後添加對第二種抗體具有結合親和力的第三種抗體來完成，而所述笫三種抗體與可檢測標記連接。B.DNA和RM印跡^支術DNA和RNA印跡法是分子生物學中的常用技術且完全在本領域技術人員的掌握中。DNA和RNA印跡樣品從過度增殖組織獲得。來自測試細胞的DNA和RNA在陽離子螯合劑例如EDTA的存在下通過溫和細胞破碎來回收。蛋白質和其他細胞碎片通過與飽和苯酚或苯酚/氯仿混合且離心乳狀液來去除。DNA和RNA在上層水相中，它是脫去蛋白質的且與乙醇混合。這種溶液允許DNA和RNA沉澱，DNA和RNA隨後可以通過離心回收。在RNA提取的情況下，需要RNA酶抑制劑例如DEPC以防止RNA降解。在瓊脂糖或聚丙烯醯胺凝膠中電泳是分離DM和RM分子的最通常方法。DNA印跡法將證實自身基因編碼DNA的身份。這通過將DNA從完整凝膠轉移到硝化纖維紙上來完成。硝化纖維紙隨後在緩衝液中進行洗滌，所迷緩衝液具有例如包含與野生型自身基因DNA互補的序列的放射標記cDNA。探針與編碼自身基因區域的DNA特異性結合，且可以使用放射自顯影術通過使探測的硝化纖維紙與照相膠片接觸進行檢測。自身基因編碼mRNA可以以類似方法通過稱為RNA印跡的方法進行檢測。關於緩衝液凝膠製備、電泳條件等的更詳細描述，技術人員可以參考Sambrook，1989。C.聚合酶鏈式反應(PCRTM)PCRTM是現代分析生物學中的有力工具。設計長度通常為15-35bp的短寡核苷酸序列，與待擴增的自身基因序列任一側的側翼區域同源。在緩衝液、酶和游離核苷酸的存在下向來源DNA中加入過量引物。來源DNA在95。C變性且隨後冷卻至50-60'C以允許引物退火。對於延伸期，溫度調整至適合於聚合酶的最佳溫度。這個循環重複25-40次。特別地本發明使用PCIT檢測細胞的自身基因狀態。自身基因中的突變首先用單鏈構象多態性(SSCP)進行檢測，所述SSCP基於由點突變誘導的單鏈DM分子中的構象變化，或其他形式的輕度核苷酸變化的電泳測定。為了鑑定突變位於自身基因內的什麼地方，每個外顯子通過PCRTM使用對特定外顯子特異的引物分開擴增。擴增後，PCIT產物被變性且在聚丙烯醯胺凝膠上進行分離，以檢測由於構象變化的遷移率改變，所述構象變化由於基因中的點突變或其他小核苷酸變化而產生。突變導致DNA物理構象中的變化以及分子電荷中的變化。因此在電泳過程中，當對分子施加電荷時，與野生型比較在形狀和電荷方面略微不同的DNA將以不同速率移動且因此佔據凝膠中的不同位置。測定哪個DNA片段包含突變後，特異性核普酸變化通過擴增的PCR產物的DNA測序進行檢測。線狀DNA的測序以核苷酸在完整分子中裝配的順序將DNA分子分解成其個別核苷酸。通過在測序膠上電泳分離個別核苷酸允許檢測與野生型比較的個別核苷酸變化，且用於測定突變的純合或雜合性，這通過測序膠中的單一條帶或雙重條帶的出現容易區分。IX.自身基因遞送許多癌症類型已與致癌基因中的突變相關。這些突變一般導致肺瘤細胞中的突變型自身基因蛋白質過量表達。已進一步顯示野生型p53肽特異性細胞毒性T淋巴細胞從人和鼠類應答淋巴細胞中產生，且在體外識別p53過量表達的肺瘤(Theobald,等人，1995;Ropke等人，1996;Nijman等人，1994)。在其他方面，癌症對一種或多種治療的抗性與自身基因產物的活性和/或表達相關，例如其過量表達。本發明預期通過引發針對在其表面上呈遞自身基因抗原的細胞的抗自身基因免疫應答來體內治疔過度增殖性疾病。在本發明的某些實施方案中，包含在真核細胞中可操作的啟動子控制下的自身基因的表達構建體被施用並在樹突細胞中表達，以便引發針對例如p53的免疫應答。A.病毒轉化1.腺病毒感染用於遞送重組DM的一種方法涉及腺病毒表達載體的使用。儘管腺病毒載體已知具有整合到基因組DNA中的低能力，但這個特徵被這些載體提供的高效率基因轉移彌補。"腺病毒表達載體"意欲包括包含腺病毒序列的那些構建體，所述腺病毒序列足以(a)支持構建體的包裝和(b)最終表達已在其中克隆的重組基因構建體。載體包含遺傳改造形式的腺病毒。腺病毒遺傳結構的了解-36kb、線性、雙鏈DNA病毒，允許用高達7kb的外源序列替換大片段的腺病毒DM(Grunhaus和Horwitz，1992)。與逆轉錄病毒相反，宿主細胞的腺病毒感染不會導致染色體整合，因為腺病毒DNA可以以游離方式複製而無潛在的遺傳毒性。同樣，腺病毒在結構上是穩定的，且在廣泛擴增後沒有檢測到基因組重排。因為其中等大小的基因組、易於處理、高滴度、廣泛的靶細胞範圍和高傳染性，所以腺病毒特別適合於用作基因轉移載體。病毒基因組的2個末端都包含100-200個鹼基對的反向重複(ITR)序列，這是病毒DNA複製和包裝所需的順式元件。基因組的早期(E)和晚期(L)區域包含通過病毒DM複製開始分開的不同轉錄單位。El區(E1A和E1B)編碼負責病毒基因組轉錄調節的蛋白質和少數細胞基因。E2區(E2A和E2B)的表達導致合成用於病毒DNA複製的蛋白質。這些蛋白質涉及DM複製、晚期基因表達和宿主細胞關閉(Renan，1990)。晚期基因產物包括大多數病毒衣殼蛋白僅在通過主要晚期啟動子(MLP)產生的單一原始轉錄物顯著加工後表達。MLP(位於16.8m.u.)在感染晚期時特別有效，且由這種啟動子產生的所有mRNA都具有5'-三聯先導(TPL)序列，這使得它們成為用於翻譯的優選mRNA。在目前系統中，重組腺病毒由穿梭栽體和前病毒(provirus)栽體之間的同源重組產生。由於2種前病毒載體之間的可能重組，野生型腺病毒可以由這個過程產生。因此，從個別斑塊分離單個病毒克隆且檢查其基因組結構是關鍵的。複製缺陷的目前腺病毒載體的產生和繁殖依賴於命名為293的獨特輔助細胞系，所述輔助細胞系通過Ad5DM片段由人胚腎細胞轉化，且組成性表達El蛋白質(Graham等人，1977)。因為E3區對於腺病毒基因組是可有可無的(Jones和Shenk，1978)，所以目前的腺病毒載體在293細胞的幫助下，在E1、D3或2個區域中攜帶外源DNA(Graham和Prevec，1991)。在自然界中，腺病毒可以包裝大約105%的野生型基因組(Ghosh-Choudhury等人，1987)，提供了額外的約2kbDNA的容量。與E1和E3區中可替換的大約5.5kbDNA組合，目前腺病毒載體的最大容量在7.5kb之下，或栽體全長的約15%。超過80%的腺病毒基因組保留在載體主鏈中。輔助細胞系可以來源於人細胞，例如人胚腎細胞、肌細胞、造血細胞或其他人胚間充質細胞或上皮細胞。可替代地，輔助細胞可以來源於允許人腺病毒的其他哺乳動物種類的細胞。此類細胞包括例如非洲綠猴腎細胞(verocell)或其他猴胚間充質細胞或上皮細胞。如上所述，優選的輔助細胞系是293。Racher等人(1995)已公開了用於培養293細胞和繁殖腺病毒的改進方法。在一種形式中，天然細胞集合物通過將個別細胞接種到包含100-200ml培養基的l升矽化處理的轉瓶(Techne，Cambridge,UK)中進行培養。在40rpm下攪拌後，細胞存活力用臺盼藍進行評估。在另一種形式中，Fibra-Ce微載體(BibbySterlin，Stone，UK)(5g/l)如下使用。向250ral錐形瓶中的栽體(50ml)加入在5ml培養基中重懸浮的細胞接種物，且保持穩定l-4小時，偶爾攪動。培養基隨後用50ml新鮮培養基替換，且開始振蕩。對於病毒生產，細胞被允許生長至約80%匯合，這之後培養基被替換(至25%的最終體積)且以0.05MOI加入腺病毒。培養物靜置過夜，隨後體積增加至100%且開始振蕩另外72小時。腺病毒載體可以是複製缺陷的，或至少條件缺陷，不認為腺病毒載體的性質對於本發明成功實踐是關鍵的。腺病毒可以是42種不同的已知血清型或亞群A-F中的任何一種。C亞群的5型腺病毒是優選原材料以便獲得用於在本發明中使用的條件複製缺陷的腺病毒載體。這是因為5型腺病毒是人腺病毒，關於它的大量生物化學和遺傳信息是已知的，並且它在歷史上已用於使用腺病毒作為載體的大多數構建體。如上所述，根據本發明的一般栽體是複製缺陷的且將不具有腺病毒E1區。因此，在El編碼序列已從其中去除的位置上引入轉化構建體是最方便的。然而，構建體在腺病毒序列內的插入位置對於本發明不是關鍵的。編碼目的基因的多核苷酸也可以如Karlsson等人(1986)所述插入E3置換載體中替代缺失的E3區，或當輔助細胞系或輔助病毒補足E4缺陷時插入E4區中。腺病毒的生長和處理是本領域技術人員已知的，且顯示體外和體內的廣泛宿主範圍。這群病毒可以以高滴度獲得，例如1(T-1U空斑形成單位/ml，且它們是高度傳染性的。腺病毒的生活周期不需要整合到宿主細胞基因組內。由腺病毒載體遞送的外源基因是游離的，且因此對宿主細胞具有低遺傳毒性。在用野生型腺病毒疫苗接種的研究中沒有報導副作用(Couch等人，1963;Top等人，1971)，顯示了其作為體內基因轉移載體的安全性和治療可能性。腺病毒載體已在真核基因表達(Levrero等人，1991;Gomez-Foix等人，1992)和疫苗開發(Grunhaus和Horwitz，1992;Graham和Prevec，1992)中使用。動物研究已暗示重組腺病毒可以用於基因治療(Stratford-Perricaudet和Perricaudet，1991;Stratford-Perricaudet等人，1990;Rich等人，1993)。給不同組織施用重組腺病毒的研究包括氣管滴注(Rosenfeld等人，1991;Rosenfeld等人，1992)、肌肉注射(Ragot等人，1993)、外周靜脈內注射(Herz和Gerard，1993)和功能區定位接種到腦內(LeGalLaSalle等人，1993)。2.逆轉錄病毒感染逆轉錄病毒是單鏈RNA病毒，其特徵在於通過逆轉錄過程在受感染細胞中將其RNA轉換成雙鏈DNA的能力(Coffin,1990)。所得到的DM隨後作為前病毒穩定整合到細胞染色體內且指導病毒蛋白質的合成。整合導致病毒基因序列保留在受體細胞及其後代中。逆轉錄病毒基因組包含分別編碼衣殼蛋白、聚合酶和包膜組分的3種基因gag、pol和env。在gag基因上遊發現的序列包含用於將基因組包裝成病毒粒子的信號。2個長末端重複(LTR)序列存在於病毒基因組的5'和3'末端。這些包含強啟動子和增強子序列且同樣是整合到宿主細胞基因組中所需的(Coffin,1990)。為了構建逆轉錄病毒載體，將編碼目的基因的核酸插入病毒基因組內代替某些病毒序列以產生複製缺陷的病毒。為了產生病毒粒子，構建包含gag、pol和env基因但不含LTR和包裝組分的包裝細胞系(Mann等人，1983)。當包含cDNA連同逆轉錄病毒LTR和包裝序列的重組質粒引入這種細胞系內(通過例如磷酸鉤沉澱)時，包裝序列允許重組質粒的RNA轉錄物糹皮包裝成病毒顆粒，所述病毒顆粒隨後分泌到培養基內(Nicolas和Rubenstein，1988;Terain，1986;Mann等人，1983)。隨後收集包含重組逆轉錄病毒的培養基，任選濃縮，且用於基因轉移。逆轉錄病毒載體能夠感染廣泛多樣的細胞類型。然而，整合和穩定表達要求宿主細胞分裂(Paskind等人，1975)。對於缺陷型逆轉錄病毒載體使用的擔心是在包裝細胞中可能出現野生型可複製病毒。這可以起因於其中來自重組病毒的完整序列插入宿主細胞基因組中整合的gag、pol、env序列上遊的重組事件。然而，可以利用應極大減少重組可能性的包裝細胞系(Markowitz等人，1988;Hersdorffer等人,1990)。3.AAV感染腺伴隨病毒(AAV)是用於在本發明中使用的吸引人的載體系統，因為它具有高整合效率並且它可以感染未分裂細胞，從而使得它能夠用於將基因遞送到組織培養中的哺乳動物細胞內(Muzyczka，1992)。AAV具有用於傳染的廣泛宿主範圍(Tratschin，等人，1984;Laughlin，等人，1986;Lebkowski，等人，1988;McLaughlin，等人，1988)，這意味著它適合與本發明一起使用。關於產生和使用rAAV載體的細節在美國專利號5，139，941和美國專利號4，797，368中描述，所述專利各自引入本文作為參考。顯示AAV在基因遞送中的用途的研究包括LaFace等人，(1988);Zhou等人,(1993);Flotte等人，(1993);和Walsh等人,(1994)。重組AAV載體已成功用於標記基因的體外和體內轉導(Kaplitt等人，1994;Lebkowski等人，1988;Sarnulski等人，1989;Shelling和Smith,1994;Yoder等人，1994;Zhou等人，1994;Hermonat和Muzyczka,1984;Tratschin等人，1985;McLaughlin等人，1988)和參與人類疾病的基因的體外和體內轉導(Flotte等人，1992;Luo等人，1994;0hi等人，1990;Walsh等人，1994;Wei等人，1994)。近來，AAV載體已批准用於嚢性纖維化治療的I期人試驗。AAV是依賴性細小病毒，因為它需要與另一種病毒(腺病毒或皰滲病毒家族成員)一起共感染以在培養細胞中進行增殖性感染(Muzyczka，1992)。在不存在與輔助病毒共感染的情況下，野生型AAV基因組通過其末端整合到人染色體19內，在其中它作為前病毒以潛伏狀態存在(Kotin等人，1990;Samulski等人，1991)。然而，對於整合rAAV並不限制於染色體19，除非AAVRep蛋白質也表達(Shelling和Smith,1994)。當攜帶AAV前病毒的細胞用輔助病毒超感染時，AAV基因組從染色體或重組質粒中"被救出"，且建立正常增殖性感染(Samulski等人，1989;McLaughlin等人，1988;Kotin等人，1990;Muzyczka，1992)。一般地，重組AAV(rAAV)病毒通過共轉染包含側翼為2個AAV末端重複序列的目的基因的質粒(McLaughlin等人，1988;Samulski等人，1989;各自引入本文作為參考)和包含無末端重複序列的野生型AAV編碼序列的表達質粒例如pIM45(McCarty等人，1991;引入本文作為參考)進行製備。細胞還用腺病毒或攜帶AAV輔助功能所需的腺病毒基因的質粒感染或轉染。以這種方式製備的rAAV病毒原液用腺病毒汙染，所述腺病毒必須與rAAV顆粒物理分開(例如，通過氯化銫密度離心)。可替代地，可以使用包含AAV編碼區的腺病毒載體、或包含AAV編碼區以及部分或全部腺病毒輔助基因的細胞系(Yang等人，1994a;Clark等人，1995)。也可以使用攜帶作為整合前病毒的rAAVDM的細胞系(Flotte等人，1995)。4.其他病毒載體其他病毒載體可以在本發明中用作構建體。可以使用來源於病毒例如痘苗病毒(Ridgeway，1988;Baichwal和Sugden，1986;Coupar等人，1988)和皰滲病毒的載體。它們提供了用於各種哺乳動物細胞的幾種吸引人的特徵(Friedmann，1989;Ridgeway，1988;Baichwal和Sugden,1986;Coupar等人，1988;Horwich等人，1990)。可替代地，可以使用oc病毒載體和複製子(Leitner等人，2000;Caley等人，1999)。委內瑞拉馬腦炎(VEE)病毒的分子克隆林已在遺傳上改進為可複製的疫苗載體用於表達異源病毒蛋白質(Davis等人，1996)。研究已證實VEE感染刺激有效的CTL應答且已暗示VEE可能是用於免疫接種的非常有用的載體(Caley等人，1997)。在本發明中預期VEE病毒可以在靶向樹突細胞中有用。對於近期識別的缺陷型B型肝炎病毒，在不同病毒序列的結構-功能關係中獲得新理解。體外研究顯示儘管其缺失高達80%的基因組，該病毒仍可保留輔助依賴性包裝和逆轉錄作用的能力(Horwich等人，1990)。這暗示大部分基因組可以用外源遺傳材料替換。Chang等人近期將氯黴素乙醯轉移酶(CAT)基因引入鴨B型肝炎病毒內代替聚合酶、表面和前表面編碼序列。它與野生型病毒一起共轉染到禽類肝癌細胞系內。包含高滴度重組病毒的培養基用於感染雛鴨原代肝細胞。穩定的CAT基因表達在轉染後至少24天檢測到(Chang等人，1991)。在本發明的再進一步的實施方案中，待遞送的核酸置於感染性病毒內，所述感染性病毒已改造為表達特異性結合配體。病毒顆粒將因此與靼細胞的相關受體特異性結合且將組分遞送給細胞。最近基於逆轉錄病毒的化學修飾通過給病毒包膜化學添加乳糖殘基開發了設計為允許逆轉錄病毒載體特異性靶向的新型方法。這種修飾可以允許經由唾液酸糖蛋白受體特異性感染肝細胞。設計了重組逆轉錄病毒耙向的另一種方法，其中使用針對逆轉錄病毒包膜蛋白和針對特異性細胞受體的生物素化抗體。抗體經由生物素組分通過使用鏈黴親和素偶聯(Roux等人，1989)。使用針對主要組織相容性複合物I類和II類抗原的抗體，他們顯示用親嗜性病毒體外感染了攜帶表面抗原的各種人細胞(Roux等人，1989)。B.非病毒遞送除了自身基因的病毒遞送之外，下列是將重組基因遞送至給定宿主細胞的另外方法，且因此在本發明中預期。1.電穿孔在本發明的某些優選實施方案中，基因構建體經由電穿孔引入樹突細胞內。電穿孔涉及使細胞和DNA的懸浮液暴露於高壓放電。使用電穿孔轉染真核細胞已是相當成功的。以這種方式小鼠前B淋巴細胞已用人K免疫球蛋白基因轉染(Potter等人，1984)，且大鼠肝細胞已用氯黴素乙醯轉移酶基因轉染(Tur-Kaspa等人，1986)。預期對於來自不同來源的樹突細胞的電穿孔條件可以進行優化。可能特別希望優化此類參數如電壓、電容、時間和電穿孔介質組成。其他常規調整的實行將是本領域技術人員已知的。2.粒子轟擊用於將棵露DM構建體轉移到細胞內的本發明的另一實施方案涉及粒子轟擊。這種方法依賴於使DNA包被的微粒加速到高速允許它們穿透細胞膜且進入細胞而不是殺死細胞的能力(Klein等人，1987)。使用的微粒已由生物學惰性物質例如鎢、鉑或金珠組成。在某些情況下預期DNA沉澱在金屬顆粒上不是使用粒子轟擊將DM遞送給受體細胞所必需的。預期顆粒可以包含DM而不是由DNA包#皮。因此提出DM包,皮的顆粒可以增加經由粒子轟擊的DNA遞送水平，但不是自身和自然所必需的。用於使小顆粒加速的幾種裝置已得到開發。一種此類裝置依賴高壓放電以產生電流，所述電流依次提供動力(Yang等人，l"0)。另一種方法涉及使用BiolisticParticleDeliverySystem,它可以用於通過濾網例如不鏽鋼或Nytex濾網推進由DNA包被的顆粒，所述濾網在由懸浮液中的細胞覆蓋的過濾器表面上。濾網使顆粒分散，從而使得它們不能以大集合物遞送給受體細胞。認為發射裝置和待轟擊細胞之間插入的濾網通過減少經由太大的發射物對受體細胞造成的損害減少發射集合物的大小且可以促成更高的轉化頻率。對於轟擊，懸浮液中的細胞優選在過濾器上，或可替代地在固體培養基上進行濃縮。待轟擊的細胞置於巨粒(macroprojectile)停止板下方合適的距離處。必要時，一個或多個濾網同樣置於加速裝置和待轟擊細胞之間。在轟擊轉化中，可以優化轟擊前培養條件和轟擊參數以得到最大數目的穩定轉化體。關於轟擊的物理和生物學參數在這種技術中都是重要的。物理因素是涉及DM/微粒沉澱處理的那些，或影響巨或微粒飛行或速度的那些。生物學因素包括轟擊前和後不久細胞處理中涉及的所有步驟，靶細胞的滲透性調整以幫助減輕與轟擊有關的創傷，以及轉化DNA的性質，例如線性化DNA或完整的超螺旋質粒。認為轟擊前處理對於原始生殖細胞的成功轉化是特別重要的。因此，預期可能希望在小規模研究中調整各種轟擊參數以充分優化條件。可能特別希望調整物理參數例如間隙距離、飛行距離、組織距離和氦壓。還可以通過修改影響受體細胞的生理學狀態且因此可以影響轉化和整合效率的條件來優化創傷減少因素。例如，滲透狀態、組織水合和受體細胞的亞培養階段或細胞周期可以對於最佳轉化進行調整。其他常規調整的實行將是本領域技術人員已知的。3.磷酸鉤共沉澱或DEAE-葡聚糖處理在本發明的其他實施方案中，轉基因構建體使用磷酸鈣共沉澱引入細胞中。小鼠原始生殖細胞已用SV40大T抗原轉染，結果極佳(Watanabe等人，1997)。人KB細胞已使用這種技術用腺病毒5DNA(Graham和VanDerEb,1973)轉染。同樣以這種方式，小鼠L(A9)、小鼠C127、CH0、CV-1、BHK、NIH3T3和HeLa細胞用新黴素標記基因轉染(Chen和0kayama，1987)，並且大鼠肝細胞用各種標記基因轉染(Rippe等人，1990)。在另一實施方案中，表達構建體使用DEAE-葡聚糖隨後為聚乙二醇遞送到細胞內。以這種方式將報導質粒引入小鼠骨髓瘤和紅白血病細胞內(Gopal，1985)。4.直接顯微注射或超聲處理裝載本發明的進一步的實施方案包括通過直接顯微注射或超聲處理裝載引入基因構建體。直接顯微注射已用於將核酸構建體引入爪蟾卵母細胞內(Harland和Weintraub，1985)，且LTK成纖維細胞已通過超聲處理裝載用胸苷激酶基因轉染(Fechheimer等人，1987)。5.脂質體介導的轉化在本發明的一個進一步的實施方案中，基因構建體可以包裹在脂質體內。脂質體是特徵在於磷脂雙層膜和內部水介質的嚢泡結構。多層脂質體具有通過水介質分開的多重脂質層。它們在磷脂懸浮於過量水溶液中時自發形成。脂質組分在形成閉合結構之前經歷自身重排且在脂質雙層之間包裹水和溶解的溶質(Ghosh和Bachhawat，1991)。還預期的是與Lipofectamine(GibcoBRL)或D0TAP-膽固醇製劑複合的基因構建體。脂質體介導的核酸遞送和外源DM體外表達已非常成功(Nicolau和Sene，1982;Fraley等人，1979;Nicolau等人，1987)。Wong等人，(1980)指出在培養的雞胚、HeLa和肝細胞瘤細胞中外源DNA的脂質體介導遞送和表達的可行性。在本發明的某些實施方案中，脂質體可以與血凝病毒(HVJ)複合。這已顯示促進與細胞膜融合且促進脂質體包裹DNA的細胞進入(Kaneda等人，1989)。在其他實施方案中，脂質體可以與核非組蛋白染色體蛋白質(HMG-l)複合或與之結合使用(Kato等人，1991)。在再進一步的實施方案中，脂質體可以與HVJ和HMG-1複合或與之結合使用。C.載體和調節信號本發明的載體被設計為主要用在調節的真核啟動子(即，誘導型、阻抑型、組織特異型)控制下的自身基因轉化樹突細胞。同樣，載體通常將包含可選標記(如果沒有其他原因)，以促進其體外生產。然而，可選標記可以在重組細胞生產中起重要作用且因此啟動子的討論在本文中是有用的。下表2和表3分別列舉了誘導型啟動子元件和增強子元件。表2-可誘導元件tableseeoriginaldocumentpage55表3-其他啟動子/增強子元件tableseeoriginaldocumentpage56tableseeoriginaldocumentpage57優選用於在本發明中使用的是細胞巨化病毒(CMV)啟動子。這種啟動子在載體pcDNAIII中從Invitrogen商購可得，這優選用於在本發明中使用。還預期在本發明中有用的是dectin-1和dectin-2啟動子。下文列出了可以與本發明組合使用的其它外病毒啟動子、細胞啟動子/增強子和誘導型啟動子/增強子。另外任何啟動子/增強子組合(按照真核啟動子資料庫(EukaryoticPromoterDataBase)EPDB)也可以用於驅動編碼寡糖加工酶、蛋白質摺疊輔助蛋白質、可選標記蛋白質或目的異源蛋白的結構基因的表達。使用內部核糖體結合位點(IRES)元件用於產生多基因或多順反子信使。IRES元件能夠繞開甲基化帽依賴性翻譯的核糖體掃描模型且在內部位點上開始翻譯(Pelletier和Sonenberg，1988)。來自微小RNA病毒科的2個成員(脊髓灰質炎和腦心肌炎)的IRES元件(Pelletier和Sonenberg，1988)，以及來自哺乳動物信使的IRES(Macejak和Sarnow，1991)已得到描述。IRES元件可以與異源可讀框連接。多個可讀框可以一起轉錄，各自由IRES分開，產生多順反子信使。由於IRES元件，每個可讀框易接近核糖體用於有效翻譯。多基因使用單個啟動子/增強子可以有效表達以轉錄單個信使。可能證明有用的另一種信號是多腺苷酸化信號(hGH、BGH、SV40)。如上文討論的，在本發明的某些實施方案中，細胞可以通過在表達構建體中包括標記在體外或體內進行鑑別和選擇。此類標記對細胞給予可鑑別的變化，允許容易鑑別包含表達構建體的細胞。通常，藥物選擇標記的包含可以幫助克隆和選擇轉化體，例如給予新黴素、嘌呤黴素、潮黴素、DHFR、GPT、zeocin、四環素和組氨醇抗性的基因是有用的可選標記。可替代地，可以使用酶例如單純皰疹病毒胸苷激酶(tk)或氯黴素乙醯轉移酶(CAT)。控制蛋白質編碼基因在真核細胞中的轉錄的啟動子和增強子由多個遺傳元件構成。細胞結構能夠聚集且整合由每個元件傳達的調節信息，允許不同基因不同進展，通常是複雜模式的轉錄調節。術語啟動子在本文中將用於指在RNA聚合酶II的起始位點周圍成簇的一群轉錄控制模塊。關於啟動子如何組織的許多觀點來源於幾種病毒啟動子的分析，包括關於HSV胸苷激酶(tk)和SV40早期轉錄單位的那些。由最近工作補充的這些研究已顯示啟動子由分離的功能模塊構成，各自由大約7-20bpDNA組成，且包含關於轉錄激活蛋白的一個或多個識別位點。每個啟動子中的至少一種模塊發揮作用以定位關於RNA合成的起始位點。這個的最為人所知的例子是TATA盒，但在某些啟動子中缺乏TATA盒，例如關於哺乳動物末端脫氧核苷醯轉移酶基因的啟動子和關於SV40晚期基因的啟動子，這種情況下在起始位點上的分散元件幫助固定起始位置。另外的啟動子元件調節轉錄起始頻率。一般地，這些位於起始位點上遊30-110bp區域中，儘管眾多啟動子近期已顯示也包含起始位點下遊的功能元件。元件之間的間隔是靈活的，從而使得在元件倒置或彼此相對移動時啟動子功能被保留。在tk啟動子中，在活性開始降低之前元件之間的間隔可以增至相隔50bp。取決於啟動子，似乎個別啟動子可以合作或獨立地發揮作用以激活轉錄。增強子最初鑑定為增加來自位於同一DNA分子遠離位置上的啟動子轉錄的遺傳元件。這種經過長距離起作用的能力在原核轉錄調節的傳統研究中幾乎沒有先例。後續工作顯示具有增強子活性的DNA區域的組織很類似啟動子。即，它們由許多個體元件構成，所述元件各自與一種或多種轉錄蛋白質結合。增強子和啟動子之間的基本區別是操作。增強子區域就整體而言必須能夠隔開一定距離刺激轉錄；這無需適用於啟動子區域或其組分元件。另一方面，啟動子必須具有指導特定位點處和特定方向上的RNA合成起始的一種或多種元件，而增強子缺乏這些特異性。除了這種操作區別之外，增強子和啟動子是非常相似的實體。啟動子和增強子具有在細胞中激活轉錄的相同一般功能。它們通常是重疊和鄰接的，通常看起來具有非常相似的模塊結構。總之，這些考慮暗示增強子和啟動子是同源實體且與這些序列結合的轉錄激活蛋白可能以基本上相同的方式與細胞轉錄結構相互作用。在任何情況下，應當理解啟動子是在功能上位於基因上遊時導致那種基因表達的DNA元件。本發明的大多數轉基因構建體在功能上位於啟動子元件下遊。X.藥物組合物和自身基因遞送途徑在本發明的一個優選實施方案中，預期了治療具有其中自身基因表達是增加或改變的過度增殖性疾病受試者的方法，且在具體方面，受試者的一種或多種細胞對過度增殖性疾病的一種或多種治療有抗性。在本發明中過度增殖性疾病或對最可能被治療的治療抗性是起因於自身基因中的突變和抗性過度增殖細胞中的自身基因蛋白質過量表達的那些。預期治療的過度增殖性疾病的例子是例如肺癌，頭與頸癌，乳腺癌，胰腺癌，前列腺癌，腎癌，骨癌，睪丸癌，子宮頸癌，胃腸癌，淋巴瘤，肺、結腸、乳腺和膀胱中的瘤前病變以及涉及自身基因表達的突變和上調的任何其他過度增殖性疾病。這個實施方案的一個重要方面是將自身基因腺病毒載體遞送給樹突細胞，用於加工和呈遞自身基因抗原肽給免疫效應細胞，從而刺激抗自身基因應答。在一個實施方案中，100-300PFU/細胞的自身基因腺病毒濃度轉導超過50%的樹突細胞。在本發明的某一方面，遞送本發明中的自身基因構建體的優選方式是經由腺病毒載體。在本發明的一個優選實施方案中，預期了治療具有其中P53表達上調的治療抗性過度增殖性疾病的受試者的方法。本發明中的過度增殖性疾病及其最可能被治療的治療抗性是起因於p53基因中的突變和過度增殖細胞中的p53蛋白質過量表達的那些。預期治療的過度增殖性疾病的例子是例如肺癌，頭與頸癌，乳腺癌，胰腺癌，前列腺癌，腎癌，骨癌，睪丸癌，子宮頸癌，胃腸癌，淋巴瘤，肺、結腸、直腸、乳腺和膀胱中的瘤前病變以及涉及p53表達的突變和上調的任何其他過度增殖性疾病。這個實施方案的一個重要方面是將P53腺病毒栽體遞送給樹突細胞，用於加工和呈遞p53抗原肽給免疫效應細胞，從而刺激抗p53應答。在一個實施方案中，100-30GPFU/細胞的p53腺病毒濃度轉導超過50%的樹突細胞。遞送本發明中的p53腺病毒載體構建體的優選方式是經由皮內注射樹突細胞，儘管其他方式也是預期的。在某些實施方案中，注射部位用趨化因子或細胞因子預處理以引發樹突細胞遷移至皮內注射部位並成熟。在進一步的實施方案中，給樹突細胞施用自身基因腺病毒栽體包含多次皮內注射。例如，某些癌症類型的治療可能需要3次或更多次免疫接種，每2-4周一次。樹突細胞皮內注射可以進一步在腫瘤生長部位局部、區域、或遠側進行，以及例如皮下、腹膜內或注射到引流淋巴結內或附近。樹突細胞的鑑定、分離和獲得在本文中得到描述。在某些實施方案中，本發明還涉及製備一種或多種自身基因腺病毒組合物用於給哺乳動物施用，所述組合物轉導哺乳動物的樹突細胞。對於人中治療抗性過度增殖性疾病的治療，預期腺病毒栽體是複製缺陷的，包含在真核細胞中可操作的啟動子(例如CMVIE、dectin-l、dectin-2)控制下的自身基因。還應當理解必要時本文公開的自身基因組合物可以與其他試劑以及例如各種藥學活性試劑組合施用。只要組合物包含至少一種自身基因表達構建體，對於還可以包括的其他組分基本上沒有限制，條件是其他組分在與樹突細胞接觸後不引起明顯的不利效應。佐劑是非特異性增強或加強針對抗原的免疫應答(例如CTL)的物質，且因此考慮在本發明製劑中有用。例如，霍亂毒素局部地充當黏膜佐劑用於在用CTL表位肽鼻內免疫接種樹突細胞後誘導肽特異性CTL(Porgador等人，1997;Porgador等人，1998)。對樹突細胞特異的幾種免疫佐劑(例如MF59)及其製備先前已得到描述(Dupis等人，1998;Allison,1997;Allison,1998)。考慮了此類佐劑在本發明中的使用。在本發明的另一實施方案中，細胞因子與p53表達構建體的遞送組合使用。細胞因子是分泌型低分子量蛋白質，它通過對淋巴細胞及其他免疫細胞產生各種影響來調節免疫應答的強度和持續時間。幾種細胞因子已與影響樹突細胞遷移至淋巴樣組織(例如TNF-a)、使樹突細胞加速成熟為關於T淋巴細胞的有效的抗原呈遞細胞(例如GM-CSF，IL-1和IL-4)(Dupis等人，1998;Allison,1997;Allison,1998;美國專利號5,849,589,特別整體引入本文作為參考)和充當免疫佐劑(例如IL-12)(Gabrilovich等人，1996)直接關聯。在本發明中預期了這些及其他細胞因子(例如FLT-3配體，CD40)。藥學可接受的賦形劑和栽體溶液的配製是本領域技術人員眾所周知的，因為是開發合適的給藥和治療方案用於以各種治療方案使用本文描述的具體組合物，包括例如皮內、腸胃外、靜脈內、肌內、鼻內、瘤內、膜內、和/或口部施用和製備。A.可注射的組合物和遞送在本發明中將自身基因腺病毒表達構建體遞送給樹突細胞的優選方法是經由皮內注射。然而，本文公開的藥物組合物可替代地可以如美國專利號5，543，158;美國專利號5,641,515和美國專利號5，399，363(各自特別整體引入本文作為參考)中所述腸胃外、靜脈內、肌內、或甚至腹膜內施用。自身基因構建體和轉導的樹突細胞的注射可以通過注射器或用於溶液注射的任何其他方法遞送，條件是表達構建體或轉導細胞可以通過注射所需特定規格的針。新型無針注射系統近期已得到描述(美國專利號5，846，233)，它具有限定用於保存溶液的安瓿室的噴嘴和用於將溶液從噴嘴中推出至遞送部位的能量裝置。用於在基因治療中使用的注射器系統也已得到描述，它允許以任何深度精確地多次注射預定量的溶液(美國專利號5，846，225)。作為游離鹼或藥理學可接受鹽的活性化合物的溶液可以在水中與表面活性劑例如羥丙基纖維素適當混合進行製備。分散相還可以在例如甘油、液體聚乙二醇、及其混合物和油中進行製備。在普通的貯存和使用條件下，這些製劑包含防腐劑以防止微生物的生長。適合於可注射用途的藥物形式包括無菌水溶液或分散相以及用於臨時製備無菌可注射溶液或分散相的無菌粉末(美國專利號5，466，468，特別整體引入本文作為參考)。在所有情況下形式必須是無菌的且必須流動至存在容易注射性的程度。它在製備和貯存條件下必須是穩定的且必須針對微生物例如細菌和真菌的汙染活動進行防腐。載體可以是包含例如水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇、和液體聚乙二醇等)、其合適的混合物、和/或植物油的溶劑或分散介質。適當的流動性可以例如通過使用包衣例如卵磷脂、在分散相的情況下通過維持所需顆粒大小、和通過使用表面活性劑來維持。微生物活動的預防可以通過各種抗菌劑和抗真菌劑產生，例如對羥苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、山梨酸、硫柳汞等。在許多情況下，將優選包括等滲劑，例如糖或氯化鈉。可注射組合物的延長吸收可以通過在組合物中4吏用延遲吸收劑例如單硬脂酸鋁和明膠來產生。例如對於在水溶液中的腸胃外施用，必要時溶液應當是適當緩沖的且液體稀釋劑首先用足夠的鹽或葡萄糖變得等滲。這些特定的水溶液特別適合於靜脈內、肌內、皮下和腹膜內施用。在這方面，可以使用的無菌水介質按照本公開內容對於本領域技術人員將是已知的。例如，一個劑量可以溶解於1ml等滲NaCl溶液中且加入1000ml皮下輸液中或在計劃的輸注位點處進行注射，(參見例如"Remington'sPharmaceuticalSciences"，第15版，第1035-1038和1570-1580頁)。取決於待治療受試者的病症，劑量中的某些變化將必然發生。在任何情況下，負責施用的人將決定關於個別受試者的合適劑量。此夕卜，對於人施用，製劑應當滿足如FDA生物製品標準辦公室(FDAOfficeofBiologiesstandards)要求的無菌、致熱原性、一般的安全性和純度標準。無菌可注射溶液通過在含上文列舉的各種其他成分的合適溶劑中摻入所需量的活性化合物，必要時，隨後過濾滅菌來製備。一般地，分散相通過將各種已滅菌的活性成分摻入無菌媒介物來製備，所述無菌媒介物包含基本分散介質和來自上文列舉那些的所需其他成分。在用於製備無菌可注射溶液的無菌粉末的情況下，優選製備方法是真空乾燥和冷凍乾燥技術，它們由其先前無菌過濾溶液產生活性成分加任何另外所需成分的粉末。本文公開的組合物可以以中性或鹽形式進行配製。藥學可接受的鹽包括酸加成鹽(由蛋白質的游離氨基形成)以及由無機酸例如鹽酸或磷酸形成的鹽，或由此類有機酸如乙酸、草酸、酒石酸、扁桃酸等形成的鹽。由游離羧基形成的鹽也可以來源於無機鹼，例如氫氧化鈉、鉀、銨、鉤、或鐵，以及此類有機鹼如異丙胺、三甲胺、組氨酸、普魯卡因等。配製後，溶液將以與劑量製劑相容的方式和以治療有效的量進行施用。製劑以各種劑型例如可注射的溶液、藥物釋放膠嚢等容易進行施用。如本文使用的，"載體，，包括任何和所有溶劑、分散介質、媒介物、包衣、稀釋劑、抗菌劑和抗真菌劑、等滲劑和吸收延遲劑、緩沖液、載體溶液、懸浮液、膠體等。用於藥學活性物質的此類介質和試劑的使用是本領域眾所周知的。除非任何常規介質或試劑與活性成分不相容，否則考慮其在治療組合物中的使用。補充性活性成分也可以摻入組合物中。短語"藥學可接受的"指當給人施用時不會產生過敏或類似不利反應的分子實體和組合物。包含蛋白質作為活性成分的含水組合物的製備是本領域眾所周知的。一般地，此類組合物製備為可注射的液體溶液或懸浮液；也可以製備成在注射之前溶解或懸浮於液體中的固體形式。製劑也可以是乳化的。B.口服組合物和遞送本文公開的藥物組合物可以經由口服施用遞送給動物，且像這樣，這些組合物可以與惰性稀釋劑或與可同化的可食用載體一起配製，或它們可以封裝在硬或軟殼明膠膠嚢中，或它們可以壓製成片劑，或它們可以直接與飲食的食物合併。活性化合物甚至可以與賦形劑合併，且以可攝取片劑、含化片劑(buccaltable)、錠劑、膠嚢、酏劑、懸浮液、糖漿劑、糯米紙等的形式使用(Mathiowitz等人，19";Hwang等人，19";美國專利號5，641,515;美國專利號5，580，579和美國專利號5，792，451，各自特別整體引入本文作為參考)。片劑、錠劑、丸劑、膠嚢等也可以包含下列結合劑，如黃蓍膠、阿拉伯膠、玉米澱粉或明膠；賦形劑，例如磷酸二鈣；崩解劑，例如玉米澱粉、馬鈴薯澱粉、褐藻酸等；潤滑劑，例如硬脂酸鎂；和甜味劑，例如蔗糖、乳糖或糖精，或調味劑，例如薄荷、冬青油或櫻桃調味料。當單位劑型是膠嚢時，除上述類型的材料之外它還可以包含液體載體。各種其他材料可以作為包衣存在或以其他方式修飾劑量單位的物理形式。例如，片劑、丸劑或膠嚢可以由蟲膠、糖或兩者包被。酏劑糖漿可以包含活性化合物，作為甜味劑的蔗糖，作為防腐劑的對羥苯甲酸曱酯和對羥苯曱酸丙酯，染料和調味料例如櫻桃或桔子香料。當然，在任何單位劑型製備中使用的任何材料應當是藥學純的且在使用的量上基本上無毒的。此外，活性化合物可以摻入緩釋製劑和配方。一般地，這些製劑可以包含至少約0.1%或更多的活性化合物，儘管活性成分的百分比當然可以改變，且方便地可以是總製劑重量或體積的約1或2%-約60%或70%或更多。當然，每種治療有用組合物中的活性化合物量可以以這樣的方式製備，使得合適劑量將在任何給定的單位劑量的化合物中獲得。因素例如溶解性、生物利用度、生物學半衰期、施用途徑、產品貯存期、以及其他藥理學考慮將由製備此類藥物製劑領域的技術人員加以考慮，且像這樣，各種劑量和治療方案可能是希望的。對於口服使用，本發明的組合物可以可替代地以漱口劑、潔牙劑、含化片劑、口腔噴霧劑、或舌下經口施用製劑的形式與一種或多種賦形劑合併。例如，漱口劑可以在合適溶劑例如硼酸鈉溶液(Dobell's液)中摻入所需量的活性成分來製備。可替代地，活性成分可以摻入口部溶液內例如包含硼酸鈉、甘油和碳酸氫鉀的那些，或在潔牙劑中分散，包括凝膠劑、糊劑、粉劑和骨劑，或以治療有效量加入糊劑潔牙劑中，所述糊劑潔牙劑可以包括水、結合劑、研磨劑、調味劑、發泡劑、和溼潤劑，或可替代地塑造成可以置於舌下或以其他方式在口中溶解的片劑或溶液形式。C.另外的遞送形式除上述遞送方法之外，下列技術也預期作為自身基因遞送的可替代方法。超聲促滲(sonophoresis)(即超聲)作為用於增強藥物滲透進入且通過循環系統的比率和功效的裝置已得到使用且在美國專利號5,656,016(特別整體引入本文作為參考)中得到描述。預期的其他藥物遞送可替代方法是骨內注射(美國專利號5，779，708)、微晶片裝置(美國專利號5,797,898)、眼製劑(Bourlais等人，1998)、經皮基質(美國專利號5，770,219和美國專利號5,783,208)、直腸遞送(美國專利號5，811，128)和反饋控制遞送(美國專利號5,697,899)，所述參考文獻整體引入本文作為參考。XI.免疫應答的監控在本發明的一個實施方案中，自身基因腺病毒載體皮內施用給樹突細胞。隨後，樹突細胞表達且呈遞自身基因抗原給免疫效應細胞，從而刺激抗自身基因應答。在另一實施方案中，免疫效應細胞是細胞毒性T淋巴細胞(CTL)。因此，本發明的一個重要方面是監控免疫應答特別是CTL的能力。A.CTL測定法細胞毒性T淋巴細胞活性可以在新.分離的外周血單核細胞(PBMC)中，在由PBMC建立的植物血凝素刺激的IL-2擴增細胞系中(Bernard等人，1998),或通過從先前免疫的受試者中分離且用被腺病毒自身基因感染的DC再刺激6天的T細胞中使用標準6小時51Cr釋放微量毒性測定法進行測定。已在重定向的細胞毒性測定法中測試結腸T細胞介導穿孔素和Fas配體依賴性殺死的能力(Simpson等人，1998)。結腸細胞毒性T淋巴細胞顯示Fas和穿孔素依賴性殺死。近期，已開發了利用新螢光擴增系統的體外脫氫酶釋放測定法(Page等人，1998)。這種方法是敏感、快速、可重複的，且可以有利地用於混合淋巴細胞反應(MLR)。它可以容易地進一步自動化用於使用細胞膜完整性的大規模細胞毒性測試，且因此在本發明中加以考慮。在開發用於檢測細胞介導的細胞毒性的另一種螢光測定法中，使用的螢光團是無毒的分子阿爾瑪藍(alamarblue)(Nociari等人，1998)。阿爾瑪藍被螢光粹滅(即低量子產量)直至發生線粒體減少，這隨後導致阿爾瑪藍螢光強度顯著增加(即量子產量增加)。這種測定法被報導是非常敏感、特異的，且需要比標準"Cr釋放測定法明顯更低數目的效應細胞。B.抗CTL抗體在本發明中還預期針對特異性CTL表位的抗體可以用於測定CTL免疫應答。單核白細胞的培養以及用已知激活此類細胞的標準刺激物激活已在美國專利號5，843，689(特別整體引入本文作為參考)中得到描述。培養後，細胞的等分試樣與螢光團綴合的、針對特定單核亞類(例如CTL)的抗原決定簇的單克隆抗體一起孵育。孵育的等分試樣在流式細胞焚光計上進行分析。預期CTL特異性單克隆抗體和螢光團綴合的單克隆抗體(例如CD8+、FasL、CD4+)的使用作為本發明中的測定法將是特別有用的。XII.樹突細胞的離體製備在本發明的一個實施方案中，關於受試者中自身基因介導(例如p53介導)的免疫應答的方法由下列至少一種誘導1)從受試者中獲得樹突細胞，2)用包含在真核細胞中可操作的啟動子控制下的p53基因的腺病毒載體感染樹突細胞；和3)給受試者施用p"腺病毒感染的樹突細胞。預期受感染的樹突細胞將p53抗原呈遞給免疫效應細胞且因此刺激受試者中的抗p53應答。因此，本發明的一個重要方面是從受試者獲得樹突細胞或誘導前體細胞(例如單核細胞)分化成樹突細胞用於由p53腺病毒載體感染，用於在過度增殖性疾病的治療中使用。已在實驗上觀察到具有某些癌症類型晚期的患者具有減少的樹突細胞的功能(即，有缺陷的抗原呈遞)，但這些患者通過幹細胞的體外生長和刺激可以產生有功能的樹突細胞(Gabrilovich等人，19")。從癌症患者獲得幹細胞、通過添加粒細胞/巨噬細胞集落刺激因子和IL4進行刺激以分化成樹突細胞，且觀察到引發比從癌症患者獲得的成熟樹突細胞高得多的CTL應答水平(Gabrilovich等人，199"。因此在本發明中預期千細胞前體刺激的樹突細胞分化用作離體治療過度增殖性疾病的方法。培養和誘導單核細胞分化成樹突細胞的方法已在美國專利號5，849，589(特別整體引入本文作為參考)中得到描述。單核細胞分化成樹突細胞的方法由用GM-CSF、IL-4和TNFa刺激的培養基組成。分離樹突細胞的可替代方法已由Cohen等人(美國專利號5，643，786，特別整體引入本文作為參考)描述。這種方法涉及從淘選轉子以至少4種流速淘選外周血樣品。鉤離子載體用於刺激在加工成樹突細胞過程中分離的單核細胞，並且還公開了涉及再引入激活的樹突細胞的疾病治療。還可以製備預期在本發明中有用的永生的前體細胞(美國專利號5,830,682;美國專利號5,811,297，各自能別整體引入本文作為參考)。在另一例子中，製備了來源於p53生長抑制基因缺陷動物的未成熟的樹突細胞系(美國專利號5，648，219，特別整體引入本文作為參考)。未成熟的樹突細胞系可以進行誘導以變成能刺激T細胞增殖的活化的、永生樹突細胞系，且因此考慮用於在本發明中使用。用於使用人樹突細胞激活T細胞用於針對原發性和轉移性前列腺癌的免疫治療應答的方法和組合物也已得到描述(美國專利號5，788，963,特別整體引入本文作為參考)。使樹突細胞在體外暴露於前列腺癌抗原後，給前列腺癌患者施用樹突細胞以在體內激活T細胞應答。上述的本發明的一個重要實施方案(美國專利號5，788，963)是通過超低溫保存延長人樹突細胞的生存期的方法。這種方法在本發明中用於長期貯存p53腺病毒感染的樹突細胞可以具有重要效用。XIII.治療癌症的藥物和方法在一個具體方面，本發明提供了用於治療各種治療抗性過度增殖性疾病的方法。治療方法將涉及用包含目的自身基因的有效量樹突細胞治療個體。一般地，有效量描述為足夠可檢測和重複地改善、減少、最小化或限制疾病程度或其症狀的量，包括其對一種或多種治療的抗性。可以應用更嚴格的定義，包括消除、根除或治癒治療抗性疾病。為了殺死細胞、抑制細胞生長、抑制轉移、減少腫瘤或組織大小以及以其他方式逆轉或降低治療抗性腫瘤細胞的惡性表型，使用本發明的方法和組合物，一般可以使樹突細胞與治療表達構建體接觸。這可以與包含在治療抗性過度增殖細胞的治療中有效的其他試劑的組合物組合。這些組合物將以有效殺死或抑制細胞增殖的組合量提供。這個過程可以涉及使細胞與表達構建體和一種或多種試劑或一種或多種因子同時接觸。這可以通過使細胞與包括2種試劑的單一組合物或藥理學製劑接觸，或使細胞與2種不同組合物或製劑同時接觸來完成，其中一種組合物包括表達構建體且另一種包括第二種試劑。儘管在具體實施方案中示例性p53構建體在樹突細胞中施用，但另外治療可以在或不在樹突細胞內施用，或者在或不在包含示例性p53構建體的樹突細^^內施用。可替代地，樹突細胞治療可以以數分鐘至數周的間隔在其他試劑治療之前或之後進行。在其中其他試劑和表達構建體分開應用於細胞的實施方案中，一般將確保有效時間段在每次遞送時間之間不期滿，從而使得試劑和表達構建體將仍能夠對細胞發揮有利的組合效應。在此類情況下，預期可以使細胞或個體與兩種模式在約12-24小時內互相接觸，且更優選地，在約6-12小時互相接觸。然而在某些情況下，可能希望顯著延長用於治療的時間段，其中在分別的施用之間經過數天(2、3、4、5、6或7)至數周(1、2、3、4、5、6、7或8)。可以使用各種組合，例如下列示例性情況，其中包含自身基因產物的樹突細胞是"A"且其他治療是"B":A/B/AB/A/BB/B/AA/A/BA/B/BB/A/AA/B/B/BB/A/B/BB/B/B/AB/B/A/BA/A/B/BA/B/A/BA/B/B/AB/B/A/AB/A/B/AB/A/A/BA/A/A/BB/A/A/AA/B/A/AA/A/B/A本發明的治療表達構建體對患者的施用將遵循用於施用化學療法的一般方案，考慮任何載體的毒性(如果有)。預期治療循環在必要時可以重複。還預期各種標準治療以及手術千預可以與所述樹突細胞治療組合應用。本發明的含水組合物包含溶解或分散於藥學可接受的載體或水介質中的有效量的化合物。此類組合物還可以稱為接種物。短語"藥學或藥理學可接受的"指當給適當的動物或人施用時不會產生不利、過敏或其他不良反應的分子實體和組合物。如本文使用的，"藥學可接受載體"包括任何和所有溶劑、分散介質、包衣、抗菌劑和抗真菌劑、等滲劑和吸收延遲劑等。用於藥學活性物質的此類介質和試劑的使用是本領域眾所周知的。除非任何常規介質或試劑與活性成分不相容，否則考慮其在治療組合物中的使用。補充性活性成分也可以摻入組合物中。治療可以包括各種"單位劑量，，。單位劑量定義為包含計算產生與其施用即合適途徑和治療方案相關的所需應答的預定量治療組合物。待施用的量，以及具體途徑和製劑在臨床領域技術人員的技術內。同樣重要的是待治療的受試者，特別是受試者的狀態和所需保護。單位劑量無需作為單次注射進行施用，還可以包含經過設定時間段的連續輸注。本發明的單位劑量可以方便地用病毒構建體的蝕斑形成單位(pfu)進行描述。單位劑量為103、l(T、105、106、107、108、109、101。、1011、1012、1013pfu和更高。優選地，患者將具有足夠的骨髓功能(定義為外周粒細胞絕對計數>2，000/mm3和血小板計數為100,000/ram3)、足夠的肝功能(膽紅素<1.5mg/dl)和足夠的腎功能(肌酸酐<1.5mg/dl)。A.基因療法本發明的一個優選實施方案涉及使用病毒載體將治療基因遞送給樹突細胞用於治療癌症，且這個實施方案可以涉及樹突細胞/自身基因產物、其他治療、或2種治療。待治療的抗性癌細胞包括肺、腦、前列腺、腎、肝、卵巢、乳腺、皮膚、胃、食管、頭與頸、睪丸、結腸、子宮頸、淋巴系統和血液癌症。特別感興趣的是非小細胞肺癌包括鱗狀上皮細胞癌、腺癌和大細胞未分化癌、腫瘤抑制物、反義致癌基因、和凋亡抑制劑。根據本發明，可以通過用病毒載體直接注射腫瘤來治療抗性癌症。可替代地，抗性腫瘤可以使用任何合適的遞送裝置用載體進行輸注或灌注。還考慮了對於腫瘤的局部或區域施用。最後，可以進行全身施用。適當時也可以應用連續施用，例如當腫瘤被切除且瘤床進行處理以消除殘留的微觀疾病時。經由注射器或導管插入的遞送是優選的。此類連續灌注可以在治療開始後發生約1-2小時至約2-6小時、至約6-12小時、至約12-24小時、至約1-2天、至約1-2周或更長時間段。一般地，經由連續輸注的治療組合物劑量將等於經由輸注發生時的時間段調整由單次或多次注射產生的那種。對於〉4cm的肺瘤，待施用的體積將是約4-10ml(優選10ml)，而對於<4cm的腫瘤，將使用約1-3ml的體積(優選3ml)。作為單次劑量遞送的多次注射包含約0.1-約0.5ml的體積。病毒顆粒可以有利地通過給腫瘤施用以大約1cm間隔隔開的多次注射來接觸。在某些實施方案中，待治療的腫瘤至少早期可能不是可切除的。使用治療病毒構建體的治療由於邊緣處的收縮或通過消除某些特別的侵襲部分可以增加腫瘤的可切除性。治療後，切除術可以是可能的。切除術後的另外病毒治療將用於消除腫瘤部位處的微觀殘留疾病。關於原發性腫瘤或切除後瘤床的一般療程將涉及多個劑量。一般的原發性腫瘤治療涉及經過2周時間段的6次劑量應用。2周方案可以重複1次、2次、3次、4次、5次、6次或更多次。在療程中，完成計劃給藥的需要可以重新評估。B.化學療法癌症治療還包括與基於化學和放射療法的各種治療組合。組合化學療法包括例如順鉑(CDDP)、卡鉑、曱基苄肼、氮芥、環磷醯胺、喜樹鹼、異磷醯胺、美法侖、苯丁酸氮芥、白消安、亞硝基脲(nitrosurea)、更生菌素、道諾紅黴素、多柔比星、博來黴素、plicomycin、絲裂黴素、依託泊苷(VP16)、它莫西芬、紫杉醇、反鉑、5-氟尿嘧啶、長春新鹼、長春鹼和氨曱蝶呤、或其任何類似物或衍生物變體。在具體實施方案中，使用上調p53表達的化學療法。C.放射療法引起DNA損害且已廣泛使用的其他因素包括通常稱為Y射線、X射線、和/或將放射性同位素定向遞送給腫瘤細胞。也考慮了其他形式的DNA損害因子例如微波和UV照射。最可能所有這些因素對DNA、對DM前體、對DNA複製和修復、且對染色體裝配和維持造成廣泛範圍的損害。關於X射線的劑量範圍為關於延長時間段(3至4周)的50-200倫琴日劑量到2000-6000倫琴的單次劑量。關於放射性同位素的劑量範圍廣泛不同，且取決於同位素的半衰期、發出放射的強度和類型、以及由贅生細胞的吸收。術語"接觸"和"暴露"當應用於細胞時，在本文在用於描述通過其治療構建體和化學療法或放射治療試劑遞送給靶細胞或直接與靶細胞並列放置的過程。為了達到細胞殺死或停滯，2種試劑以有效殺死細胞或預防其分裂的組合量遞送給細胞。XIV.化學療法在本發明的某些實施方案中，化學療法與本發明有關。例如，受試者可以是或受試者可以變成對一種或多種特定化學療法有抗性，和/或化學療法可以與本發明的方法結合使用。術語"化學療法"指使用藥物治療癌症。"化療劑"用於指在癌症治療中施用的化合物或組合物。這些試劑或藥物通過其在細胞內的作用方式進行分類，例如是否對細胞周期產生影響和在哪個階段產生影響。可替代地，試劑可以基於其直接交聯DNA、插入DNA內、或通過影響核酸合成誘導染色體和有絲分裂畸變的能力進行分類。大多數化療劑包括在下列類別內烷化劑、抗代謝物、抗腫瘤抗生素、有絲分裂抑制物、和亞硝基脲。化療劑的例子包括烷化劑例如噻替派和環磷醯胺；烷基磺酸酯例如白消安、英丙舒凡和-秦消安；氮丙咬例如benzodopa、卡波醌、美妥替p底和uredopa;吖丙啶和甲基蜜胺包括六甲蜜胺、三乙撐蜜胺、三乙撐磷醯胺、石危替派和trimethylolomelamine;乙醯精寧(acetogenins)(特別是泡番荔枝辛(bullatacin)和bullatacinone);喜樹鹼(包括合成類似物託泊替康)；苔蘚抑素；callystatin;CC-1065(包括其阿多來新、卡折來新和比折來新合成類似物)；念珠藻環肽(cryptophycin)(特別是cryptophycinl和cryptophycin8);多拉司他汀(dolastatin);duocarmycin(包括合成類似物KW-2189和CB1-TM1);eleutherobin;水鬼蕉鹼(pancratistatin);sarcodictyin;海綿素(spongistatin);氮芥例如苯丁酸氮芥、萘氮芥、cholophosphamide、磷雌氮芥、異磷醯胺、二氯甲基二乙胺(mechlorethamine)、氬氧氮芥(mechlorethamineoxidehydrochloride)、美法侖、新氮芥、苯芥膽甾醇(phenesterine)、松龍苯芥、曲洛磷胺、尿嘧啶氮芥；亞硝基脲例如卡莫司汀、氯脲菌素、福替目丁、羅莫司丁、尼莫司丁和雷莫司汀；抗生素例如烯二炔(enediyne)抗生素(例如刺孢黴素，特別是刺孢黴素YI和刺孢黴素QI1;蒽環類藥物，包括蒽環類藥物A;二膦酸鹽例如氯膦酸鹽；埃斯波黴素A(esperamicin);以及新制癌蛋白發色團和有關色蛋白烯二炔抗生素髮色團、aclacinomysins、放射菌素、authrarnycin、重氮絲氨酸、博來黴素、放線菌素、carabicin、洋紅黴素、嗜癌素、色黴素、更生菌素、道諾紅黴素、地託比星、6-重氮基-S-氧代-L-正亮氨酸、多柔比星(包括嗎啉代-多柔比星、cyanoraorpholino-多柔比星、2-吡咯啉基-多柔比星和脫氧多柔比星)、表柔比星、依索比星、去甲氧正定黴素、麻西羅黴素、絲裂黴素例如絲裂黴素C、黴酚酸、nogalarnycin、橄欖黴素、派來黴素、potfiromycin、嘌呤黴素、三鐵阿黴素、羅多比星、鏈黑黴素、鏈唑黴素、殺結核菌素、烏苯美司、新制癌素、佐柔比星；抗代謝物例如氨曱蝶呤和5-氟尿嘧啶(5-FU);葉酸類似物例如二甲葉酸、氨甲蝶呤、蝶醯三穀氨酸、曲美沙特；嘌呤類似物例如氟達拉濱、6-巰基嘌呤、硫唑嘌呤、硫鳥嘌呤；嘧啶類似物例如環胞苷、氮雜胞苷、6-氮尿苷、嘧福祿、阿糖胞苷、二脫氧尿苷、脫氧氟尿苷、依諾他濱、氟尿苷；雄激素例如卡普睪酮、丙酸曱雄烷酮、表硫雄醇、美雄烷、睪內酯；抗腎上腺素例如氨魯米特、米託坦、曲洛司坦；葉酸補充物例如frolinicacid;乙醯葡醛酸內酯；醛磷醯胺糖苷；氨基乙醯丙酸；恩尿嘧啶；安吖啶；bestrabucil;比山群；依達曲沙；defofamine;地美可辛；地吖硫；elformithine;依利醋銨；epothilone;依託格魯；硝酸鎵；羥基脲；蘑菇多糖；氯尼達明；類美坦素(maytansinoids)例如美登素和美登木素；丙米腙；米託蒽醌；mopidanmol;nitraerine;噴司他丁；蛋氨氮芥(phenaraet);吡柔比星；洛索蒽醌；鬼臼酸；2-乙基肼；曱基千肼；PSK多糖複合物)；丙亞胺；根瘤黴素；西佐喃；螺旋鍺；細交鏈孢菌酮酸；三亞胺醌；2，2'，2"-三氯三乙胺；單端孢黴烯(特別是T-2毒素；verracurinA、杆孢菌素和anguidine);烏拉坦；長春醯胺；氮烯咪胺；甘露醇氮芥；二溴甘露醇；二溴衛矛醇；溴丙哌嗪；gacytosine;阿糖胞苷("Ara-C");環磷醯胺；噻替派；紫杉烷，例如紫杉醇和多西他賽；苯丁酸氮芥；吉西他濱；6-硫鳥嘌呤；巰基嘌呤；氨曱蝶呤；鉑配位絡合物例如順鉑、奧沙利鉑和卡鉑；長春鹼；鉑；依託泊苷(VP-16);異磷醯胺；米託蒽醌；長春新鹼；長春瑞濱；諾消靈；替尼泊苷；依達曲沙；道諾黴素；氨蝶呤；希羅達；伊班膦酸鹽；依立替康(例如CPT-11);拓樸異構酶抑制劑RFS2000;二氟曱基鳥氨酸(DFM0);類視黃醇例如維甲酸；卡培他濱；和上述任何的藥學可接受的鹽、酸或4汙生物。這個定義中還包括的是用於調節或抑制激素對腫瘤的作用的抗激素試劑例如抗雌激素和選擇性雌激素受體調節物(SERMs),包括例如它莫西芬、雷洛昔芬、屈洛昔芬、4-羥泰米芬、曲沃昔芬、雷洛昔芬鹽酸鹽(keoxifene)、LY117018、奧那司酮、和託瑞米芬；抑制芳香酶的芳香酶抑制劑，所述芳香酶調節腎上腺中的雌激素生產，例如4(5)-咪唑、氨魯米特、乙酸曱地孕酮、依西美坦、formestanie、法倔唑、伏氯唑、來曲唑、和阿納託唑；以及抗雄激素例如氟他米特、尼魯米特、比卡魯胺、亮丙瑞林和戈舍瑞林；以及曲沙他濱U，3-二氧戊環核苷胞嘧啶類似物)；反義寡核苷酸，特別是抑制異常細胞增殖中涉及的信號轉導途徑的基因表達的那些，例如PKC-ot、Ralf和H-Ras;核酶例如VEGF表達抑制劑和HER2表達抑制劑；疫苗例如基因治療疫苗和上述任何的藥學可接受的鹽、酸或衍生物。FDA批准的腫瘤學藥物以及批准適應症和批准日期列表，這可以在美國食品與藥物管理局的環球網址上獲得tableseeoriginaldocumentpage75tableseeoriginaldocumentpage76tableseeoriginaldocumentpage77tableseeoriginaldocumentpage78tableseeoriginaldocumentpage79tableseeoriginaldocumentpage80tableseeoriginaldocumentpage81阿法依伯汀epogen阿法依伯汀lepogen阿法依伯汀epogen磷雌氮芥■Emcyt磷酸依託泊苷:Etopophos磷酸依託泊苷iEtopophos磷酸依託泊苦;Etopophosl依託泊苦，VP-16:Vepesid依託泊苷，VP-16VePesidInc素的貧血應當被適當處理。EPOGENB用不治^^^i受ii^性、4心臟、非血管性手術的貧血患者(血紅蛋白>10至iAmgen,::13^dL)以^少對同，體輸血的需要。IiP0GEiF"S^治療^_著惡,S^i:——者中的貧血，其中貧血是由於伴隨施用的化！學療法的結果。EPOGENB用於減少患者中對；輸血的需要，所述患者將接受最少2個月的|伴隨的化學療法。EP0GENB未指出用於治療;gen,癌症患者中由於其他因素例如鐵或葉酸缺i乏、溶血或胃腸道出血的貧血，所述由於其i他因素的貧血應當被適當處理。1999年i月26日1999年月26日|EP0GENB用於治療與CRF有關的貧血，;透析(ESRD)患者和未透析的患者。前列腺癌的減輕;Amgen,Inch!1999年^J6日lPharmacia&Upjohdl981;;Company|月24日12!i與其他批准的化療劑組合治療難治性睪丸腫:瘤.Bristol—MyersSquibb與其他批准的化療劑組合第一線治療小細胞肺癌。難治性睪丸腫瘤和小細胞肺癌的治療,Bristol—MyersSquibbBristol—MyersSquibbj難治性睪丸腫瘤-與其他批准的化療劑組合i;治療具有難治性睪丸腫瘤的患者，所述患者JBristol-MyersSquibbl已接受合適的手術、化學療法和放射治療。I——§1996年1月」7曰!17曰i月27日;1983年U10日i癌患者的第一線治療,Bristol—MyersSquibb1986年月30日tableseeoriginaldocumentpage83:吉西他濱i吉西他濱l吉姆單抗奧佐米星:乙酸戈舍瑞林乙酸戈舍瑞林鞋基脲i替伊莫單抗伊達比星GcmzarGemzarMylotarg!ZoladexImplant;Zoladex;Hydrea■Hydrea;Zevalinlldamycin^t^受體陽竺的轉移'i^ai^的治療^SS(不■i^Tii111S)!或轉移性(iv期)胰腺腺癌的患者。用於第一線治療和用於先前用包含5-氟尿嘧啶的方考^61^^———__^—宜動手術的、局部晚期(niA或niB期)或轉移性(iv期)非小細胞肺癌的患者。EliLilly加速批准(臨床利益未確定)治療第一次復發患者中的CD33陽性急性髓細胞樣白血病，所述患者60歲或更大，且不是細胞毒性化學療法的考慮候選者。EliLillyWyethAyersti絕經前和圍絕經期女性中的晚期乳腺癌的姑iAstraZenecal息療法。IPharmaceuticals減少鐮狀細胞性貧血中對輸血的需要PharmaceuticalsBristol—MyersSquibb;iii比—準(臨5^rHii)治療具已ii或難治性低級別、濾泡性或轉化B細胞性非何杰金氏淋巴瘤的患者，包括具有利妥昔單^^，'%非!'傑線'淋Ml:於治療成人中的急性髓細胞樣白血病(AML)。Bristol—MyersSquibb:月25日1996年月15日;1998年8|;月25曰i2000年月17日IDECPharmaceuticalsCorpAdriaLaboratories|1995年12!月18日|l995;12'月18日—1967;12J1998;2月25日2002年2月19日1990不9|月27日jtableseeoriginaldocumentpage85tableseeoriginaldocumentpage86tableseeoriginaldocumentpage87tableseeoriginaldocumentpage88imageseeoriginaldocumentpage89tableseeoriginaldocumentpage90tableseeoriginaldocumentpage91tableseeoriginaldocumentpage92tableseeoriginaldocumentpage93imageseeoriginaldocumentpage94tableseeoriginaldocumentpage95tableseeoriginaldocumentpage96XV.疫苗及其他藥物組合物和施用A.疫苗本發明包括用於預防或改善治療抗性過度增殖性疾病的方法。像這樣，本發明考慮了用於在主動和被動免疫接種實施方案中使用的疫苗。提出適合於用作疫苗的免疫原性組合物可以直接從包含自身基因產物或編碼其的多核苷酸的樹突細胞最容易地製備，且製備成易於配製到所需媒介物內。作疫苗。包含樹i細胞的疫苗製備作^可注^的液體溶液或懸浮液也可以製備適合於在注射前溶解或懸浮於液體中的固體形式。製劑也可以是乳化的。活性免疫原性成分可以與賦形劑混合，所述賦形劑是藥學可接受的且與活性成分相容。合適的賦形劑是例如水、鹽水、葡萄糖、甘油、乙醇等及其組合。另外，必要時，疫苗可以包含輔助物質，例如溼潤劑或乳化劑、pH緩沖劑、或增強疫苗效力的佐劑。在具體實施方案中，如美國專利號6,793，923和6,733，754中所述疫苗用物質組合進行配製，所述專利整體引入本文作為參考。疫苗可以方便地通過注射例如皮下或肌內腸胃外施用。適合於其他施用形式的另外製劑包括栓劑，且在某些情況下為口服製劑。對於栓劑，可以包括一般的結合劑和載體，例如聚烷撐二醇或甘油三酯此類栓劑可以由包含約0.5%-約10%,優選約1%-約2%的活性成分的混合物形成。口服製劑包括此類常用賦形劑如，例如藥物級別的甘露醇、乳糖、澱粉、硬脂酸鎂、糖精鈉、纖維素、碳酸鎂等。這些組合物採取溶液、懸浮液、片劑、丸劑、膠嚢、薄膜、漱口劑、緩釋製劑或粉末的形式，且包含約10%-約95%，優選約25%-約70%的活性成分。一般地，疫苗以與劑型相容的方式，且以治療上有效和免疫原性的此類量施用。待施用的量取決於待治療的受試者，包括個體免疫系統對組合物反應的能力，和所需保護程度。待施用的所需活性成分的精確量取決於從業者的判斷。然而，合適的劑量範圍是每次疫苗接種大約數百微克的活性成分。用於最初施用和加強注射的合適方案也是可變的，但一般為最初施用隨後為後續接種或其他施用。應用方式可以廣泛不同。用於施用疫苗的任何常規方法都是可應用的。這些被認為包括在固體生理學可接受的基底上的口部施用或在生理學可接受的分散相中通過注射等腸胃外施用。疫苗劑量將取決於施用途徑且將依受試者的大小和健康狀態而變。在許多情況下，將希望疫苗的多次施用，通常不超過6次疫苗接種，最通常不超過4次疫苗接種，且優選一次或多次，通常為至少約3次疫苗接種。疫苗接種可以是2-12周的間隔，更通常為3-5周的間隔。間隔為l-5年，通常為3年的定期加強劑量將是希望的以維持抗體的保護水平。免疫接種過程隨後可以是對於針對抗原的抗體的測定法，如上文美國專利號3，791，932;4,174,384;和3，949，064中所述的是這些測定法類型的舉例說明。B.載體給定組合物可以在其免疫原性方面不同。因此通常必須強化宿主免疫系統。示例性和優選載體是鑰孔血藍蛋白(KLH)和牛血清白蛋白(BSA)。其他白蛋白例如卵白蛋白、小鼠血清白蛋白或兔血清白蛋白也可以用作載體。用於使多肽與載體蛋白綴合的方法是本領域眾所周知的，且包括戊二醛、間馬來醯亞胺基苯甲酸(maleimidobencoyl)-N-幾基琥珀醯亞胺酯、碳化二亞胺和雙偶氮聯苯胺。C.佐劑組合物的免疫原性可以通過使用稱為佐劑的免疫應答的非特異性刺激物得到加強。合適的佐劑包括所有可接受的免疫刺激化合物，例如細胞因子、毒素、或合成組合物。佐劑可以促進下列中的一種或多種1)在體內捕捉抗原以引起緩釋；2)將免疫應答中涉及的細胞吸引至施用部位；3)誘導免疫系統細胞增殖或活化；或4)改善抗原遍布受試者身體的散布。佐劑包括但不限於水包油型乳劑、油包水型乳劑、礦物鹽、多核苷酸、和天然物質。可以使用的具體佐劑包括IL-1、IL-2、IL-4、IL-7、IL-12、y-幹擾素、GMCSP、BCG、氫氧化鋁或其他鋁化合物、MDP化合物例如thur-MDP和nor-MDP、CGP(MTP-PE)、脂質A和單磷醯脂質A(MPL)。RIBI包含在2%角簠烯/吐溫80乳劑中的從細菌中提取的3種組分-MPL、海藻糖二黴菌酸酯(TDM)和細胞壁骨架(CWS)。甚至可以使用MHC抗原。其他佐劑或方法在美國專利號6,814,971;5,084,269;6,656，462中例示，所述專利各自引入本文作為參考。達到關於疫苗的佐劑效應的各種方法包括使用試劑例如氫氧化鋁或磷酸鹽(明礬)，通常作為在磷酸鹽緩沖鹽水中的約0.05-約0.1%溶液使用，與作為約0.25%溶液使用的糖合成聚合物(Carbopol)混合，通過用約70t:-約iorc的溫度分別熱處理30秒-2分鐘的時間段使疫苗中的蛋白質聚集。通過用針對白蛋白的胃蛋白酶處理的(Fab)抗體再活化聚集；與細菌細胞(例如短小棒狀桿菌(C.parvum))、內毒素或革蘭氏陰性菌的脂多糖組分混合；在生理學可接受的油媒介物(例如二縮甘露醇單油酸酯(AracelA))中的乳狀液；或含用作封閉替代物的20°/。全氟碳溶液的乳狀液(Fluosol-DA)也可以用於產生佐劑效應。示例性的通常優選的佐劑包括完全弗氏佐劑(包含被殺死的結核分支桿菌(Mycobacteriumtuberculosis)的免疫應答的非特異性刺激物)、不完全弗氏佐劑、和氫氧化鋁。除佐劑之外，可能希望共施用生物應答調節劑(BRM)以增強免疫應答。BRM已顯示上調T細胞免疫或下調抑制性細胞活性。此類BRM包括但不限於西米替丁(CIM;1200rag/d)(Smith/Kline，PA);或低劑量環磷醯胺(CYP;300rag/ra2)(Johnson/Mead，NJ)和細胞因子例如Y-幹擾素、IL-2或IL-12或編碼免疫輔助功能中涉及的蛋白質例如B-7的基因。D.脂質組分和部分在某些實施方案中，本發明涉及包含與核酸或多核苷酸/多肽結合的一種或多種脂質的組合物或包含其的樹突細胞。脂質是不溶於水且可用有機溶劑萃取的物質。除本文具體描述的那些之外的化合物是本領域技術人員了解的脂質，且由本發明的組合物和方法包含。脂質組分和非脂質可以共價或非共價地互相附著。脂質可以是天然存在的脂質或合成脂質。然而，脂質通常是生物學物質。生物學脂質是本領域眾所周知的，且包括例如中性脂肪、磷脂、磷酸甘油酯、類固醇、萜、溶血脂質、鞘糖脂、糖脂、硫脂、含醚和酯連接的脂肪酸的脂質和可聚合脂質，及其組合。在某些實施方案中，組合物可以包含約1%、約2%、約3%、約4%、約5%、約6%、約7%、約8%、約9%、約10%、約11%、約12%、約13%、約14%、約15%、約16%、約17%、約18%、約19%、約20%、約21%、約22%、約23%、約24%、約25%、約26%、約27%、約28%、約29%、約30%、約31%、約32%、約33%、約34%、約35%、約36%、約37%、約38%、約39%、約40%、約41%、約42%、約43%、約44%、約45%、約46%、約47%、約48%、約49%、約50%、約51%、約52%、約53%、約54%、約55%、約56%、約57%、約58%、約59%、約60%、約61%、約62%、約63%、約64%、約65%、約66%、約670/"約68%、約69%、約70%、約71%、約72%、約73%、約74%、約75%、約76%、約77%、約78%、約79%、約亂約81%、約82%、約83%、約84%、約85%、約86%、約87%、約88%、約89%、約90%、約91%、約92%、約93%、約94%、約95%、約96%、約97%、約98%、約99%,或其中間的任何範圍的特定脂質、脂質類型、或非脂質組分例如佐劑、抗原、肽、多肽、糖、核酸或本文公開的或將是本領域技術人員已知的其他材料。在一個非限制性例子中，組合物可以包含約10%-約20%的中性脂質，和約33%-約34%的腦苷脂、和約1%的膽固醇。在另一非限制性例子中，脂質體可以包含約4%-約12%的闢，其中約1%的膠束特別是番茄紅素，剩下約3%-約11%的脂質體包含其他萜；和約10%-約35%的磚脂醯膽鹼，和約1%的非脂質組分。因此，預期本發明的組合物可以包含以任何組合或百分比範圍的任何脂質、脂質類型或其他組分。E.體外、離體或體內施用如本文使用的，術語體外施用指對從動物中取出的細胞或在動物之外進行的處理，包括但不限於培養的細胞。術語離體施用指在體外處理，且隨後施用於活動物的細胞。術語體內施用包括在動物內進行的所有處理。在本發明的某些方面，組合物可以進行體外、離體或體內施用。美國專利4，690，915和5，199，942公開了用於在治療應用中使用的血單核細胞和骨髓細胞的離體處理方法，所述專利都引入本文作為參考。XVI.試劑盒各種試劑盒可以被提供作為本發明的部分。試劑盒可以包含鑑定過度增殖性疾病的組分和/或治療過度增殖性疾病的組分，且在具體實施方案中，過度增殖性疾病包含對至少一種癌症治療有抗性的過度增殖性疾病。在具體實施方案中，試劑盒包含用於從需要治療的個體收集一種或多種樹突細胞的裝置和/或反應物。試劑盒還可包含用於將表達構建體遞送給樹突細胞的裝置和/或反應物。在進一步的實施方案中，試劑盒除包含自身基因產物表達構建體的樹突細胞之外還包含用於治療例如化學療法的裝置和/或反應物，用於手術的一種或多種工具、用於放射的反應物或裝置等等。當試劑盒的組分在一種或多種液體溶液中提供時，液體溶液優選是水溶液，而無菌水溶液是特別優選的。試劑盒組分還可以以乾燥或冷凍乾燥的形式提供。當反應物或組分作為乾燥形式提供時，重建一般是添加合適溶劑。設想溶劑還可以在另一種容器工具中提供。本發明的試劑盒還可以包括概述與本發明有關的建議治療的說明書。本發明的試劑盒一般還將包括用於使小瓶包含在緊密限制中用於商業銷售的工具，例如其中保留所需小瓶的注射或吹塑成型的塑料容器。與容器的數目或類型無關，本發明的試劑盒還可以包含器具，或由器具包裝，所述器具用於幫助樣品收集、評估、治療施用等。此類器具可以是例如吸入器、注射器、吸液管、鑷子、定量匙、滴眼管或任何此類醫學上批准的遞送媒介物。XVII.預防實施方案在本發明的某些方面，本發明的方法和組合物涉及發展治療抗性過度增殖性疾病的預防。發展治療抗性過度增殖性疾病的預防可以在例如受試者已診斷具有癌症之前、受試者已診斷具有癌症之後但受試者接受癌症治療之前，或受試者已接受癌症治療之後但對治療的抗性發展之前發生。"預防"根據其普通和通常的含義用於指"預先發揮作用"或此類動作。在特定疾病或健康相關病症的背景中，那些術語指為了阻斷疾病或健康相關病症發作的目的給受試者施用或應用試劑、藥物或補救，或對受試者進行的操作或用藥程式。在本發明的某些實施方案中，該方法涉及遞送表達自身基因產物的樹突細胞以預防受試者中的疾病或健康相關病症。適合於預防疾病或病症的藥物組合物量是已知或懷疑阻斷疾病或健康相關病症發作的量。本發明預期可以給受試者提供表達自身基因產物的樹突細胞，以預防治療抗性癌症的發作或預防對治療有抗性的癌細胞數目增加。XVIII.實施例包括下列實施例以顯示本發明的優選實施方案。本領域技術人員本發明人發現的技術，且因此可以視為構成用於其實踐的優選形式。然而，根據本公開內容，本領域技術人員應當理解無需背離本發明的概念、精神和範圍即可在公開的具體實施方案中進行許多改變且仍獲得相同或相似的結果。更具體而言，顯而易見的是化學和生理學相關的某些試劑可以代替本文描迷的試劑，同時達到相同或相似的結果。要求中限定的本發明的概念、精神和範圍內。實施例1示例性Advexin⑧-樹突細胞研究在具體實施方案中，具有癌症的個體用本發明的方法和組合物進行治療，例如包含Advexin⑧的樹突細胞。癌症對至少一種癌症治療有抗性。下文說明書僅涉及示例性實施方案，且可以應用於除小細胞肺癌(SCLC)外的癌症。具有廣泛期疾病(已散布超過鎖骨上區的轉移性疾病)的患者可以用化學療法(在具體實施方案中為手術、或放射)去腫塊(de-bulked)，且隨後用由Advexin⑧轉導的自體樹突細胞進行疫苗接種。疫苗#1-3每2周給予；患者隨後進行分級(疫苗#3後2周)，且如果沒有疾病進展的證據，則例如以一月的時間段給予另外3次疫苗接種。24個患者已完成或目前正在接受治療。大多數患者在第l個疫苗接種療程時進展(3個患者完成了6次疫苗接種)。因此對疫苗療法的總應答率是0%。13個患者接受第二線化學治療且對於應答是可評估的(n=9紫杉醇;n=2C證/CPT11;n=l託泊替康；n-l卡鈿(carbo)/VP16)。對第二線CTX的應答用評估如下O個是CR;7個是PR;2個是SD，且4個是PD，而得到的總應答率是54°/。。對於這13個可評估的患者，從第一次疫苗時的生存中值是9個月(注-從診斷到疫苗#1的時間是約6個月，即15個月的存活)。對於24個可評估的患者，從疫苗#1的存活=8個月(注-從診斷到疫苗#1的時間是約6個月，即14個月的存活)。對於具有廣泛疾病的患者的預期存活時間是9個月(Kurup和Hanna，2004(生存中值是8-10個月)；Neubauer等人，2004(生存中值是7.2個月)；Thomas等人，2001(生存中值是38周))。因此看起來好像疫苗是良好耐受的且對具有廣泛期疾病的患者提供了顯著的生存優勢。對於疫苗研究，參與的總數目是47(直到2004年7月)；22個患者參與且同意但未接受任何研究藥物(錯誤單倍型；迅速死亡等)。在剩下的受試者中，9/24個受試者接受疫苗且已死亡(從疫苗#1的存活是2-12個月)；從疫苗#1的平均值是6.5個月。對於5個可評估的患者，從參與到死亡的時間-16;13;10;7;3個月，而平均值是10個月。對初次CTX(n=24)的應答如下5個是CR;12個是PR;1個是SD，且6個是PD。初次CTX是75n/。的患者卡柏/VP16;且25。/。是CDDP/CPT11(50%的患者在Moffitt進行治療;50%在社區)。24個患者接受疫苗n=3個患者接受6次疫苗；21個接受1-3次疫苗。隨後23/24個患者在第1個療程中或結束時(疫苗l-3)進展。1個患者在3次疫苗接種後是SD且6次疫苗接種後是PD。疫苗#6後的TTP是1個月(n=3)，且對疫苗的ORR-0、在鉑抗拒患者中，對第二次CTX的RR是10%，其中13個患者接受第二線CTX;且對第二線CTX的ORR是54%。實施例2本發明的示例性小細胞肺癌實施方案儘管本發明的方法和組合物可應用於各種癌症類型，但在本發明的一個具體和示例性實施方案中，它們用於治療佔所有肺癌20%的小細胞肺癌(SCLC)。SCLC是任何肺腫瘤中最具攻擊性的，而5年存活率50%的生存優勢。在具體方面，具有廣泛期疾病的24個患者已完成或目前正在接受治療(8個患者自2004年6月以後接受其第一次疫苗)。5個患者顯示在第一個疫苗接種周期(3次疫苗注射)時疾病穩定，且其中3個已接受6次疫苗接種。2個另外的患者正在接受第二個疫苗周期。在這24個可評估的患者中，9個已死亡，因此生存中值仍未達到，儘管從疫苗#1開始的生存中值是8+個月(從診斷到疫苗#1的時間是6-8個月)。在歷史上，關於具有廣泛SCLC的患者的預期存活時間是7-9個月。因此與標準化學療法比較這24個患者看起來具有顯著改善的存活(>14個月)。13個患者的子集接受第二線化學療法且對於應答是可評估的(n-9紫杉醇;n=2CDDP/CPT11;n=l託泊替康；n=l卡鉑/VP16)。對第二線CTX的應答評估如下O個是CR;7個是PR;2個是SD，且4個是PD，而得到的總應答率是54%。對於這13個可評估的患者，從第一次疫苗時的生存中值是8+個月，其中從診斷到疫苗#1的時間是6-8個月，即14+個月的存活。在本發明的具體實施方案中，疫苗方案在早期疾病階段的患者中使用，即具有局限期SCLC的那些。在歷史上，關於癌症的疫苗療法未能顯示轉化成生存優勢的顯著功效。這被認為是由於腫塊性疾病提供的局部免疫抑制，且因此更近的研究已集中於在去腫塊(手術以去除大部分腫瘤，這通常為了另外療法例如化學療法和/或放射療法而進行)後輔助疫苗接種的使用。在這項研究中，對初次化學療法具有CR應答的5/5個患者仍活著，儘管仍未觀察到延長的存活。在對初次化學療法具有PR的12個患者中，5個已死亡。在第一線化學療法後具有PD的50%(n-3)的患者仍活著。因此，在本發明的具體實施方案中，對初次化學療法應答良好的患者顯示通過疫苗接種對第二線化學療法的加強作用。近期ProvengeIII期試驗在具有無症狀、轉移性、非雄激素依賴性前列腺癌的患者中顯示統計上顯著的存活利益。注意入選標準限制無症狀且具有<7的格裡森(Gleason)得分的患者。可能這些患者在疫苗接種後具有低容量疾病。在IIIb期NSCLC中的近期Biomira試驗還入選顯示穩定疾病或對第一線化學療法或放射療法有應答的患者。研究結果不支持在具有IIIB期和IV期疾病的較大的患者群體中統計上改善的存活，進一步暗示最小殘留病灶是良好靶。因此本研究指出疫苗是良好耐受的且對具有廣泛期疾病的患者提供了顯著的生存優勢。在本發明的具體方面，綜述了病例表，更新了生存分析，且使p53免疫性與存活利益關聯。在另外的實施方案中，受控的多中心n/ni期研究用於評估和優化具有廣泛疾病的患者中Advexin⑧-DC疫苗接種的利益，所述患者對第一線化學療法有應答。圖1提供了示例性常規SCLC治療方案。相反，圖2提供了在具有廣泛SCLC的患者中的示例性Advexin⑧-DC疫苗1/1I期試驗。圖3顯示了示例性Advexin⑧疫苗方案第一線應答，而圖4顯示Advexin⑧疫苗方案第二線治療。圖5顯示在對第二線治療應答的所有患者中的Advexin/DC疫苗存活數據。圖6提供了對第二線化學療法的應答表。特別地，13個患者在第二線CTX後是可評估的。在第一線CTX後TTP平均為1.75個月，但TTP<3個月限定大多數這些患者是"藥物抗性的"。對第二線CTX的應答，7個是PR;2個是SD;4個是PD;總應答率(ORR)是54%;生存中值是從疫苗l起9+個月。在歷史上，藥物抗性患者中的生存中值是3-6個月。例如，紫杉醇顯示100天的生存中值，而在20°/。的患者中有危及生命的毒性(Smit，1998)。圖7顯示與本發明的那種比較在抗性SCLC中的藥物活性。圖8顯示在接受第二線疫苗/CTX的可評估患者中的Advexin/DC疫苗存活數據。從Advexin⑧疫苗起的生存中值大於9個月，這明顯長於如Ardizzoni等人(2003)中顯示的抗性癌症中6.1個月的生存中值。圖9提供了在具有廣泛SCLC的患者中的示例性Advexin⑧-DC疫苗II期試驗。總之，Advexin⑧療法是良好耐受的且在具有復發疾病的患者中對第二線CTX致敏。特別地，Advexin⑧疫苗療法在具有廣泛和復發SCLC的患者中提供了實質上的生存優勢。實施例3示例性臨床試驗概述在2003年1月和2005年6月之間，對於免疫應答和臨床應答完全可評估的29個患者用疫苗進行治療。所有患者在疫苗接種時具有ESSCLC(17個患者具有新近診斷的ES疾病和12個具有復發疾病；表4)。年齡中值是63歲(範圍為39-76)。20個患者在僅有的一次先前化學治療方案後進行疫苗接種(6個患者在2個方案後，且3個患者在3個方案後)。所有患者已接受先前的鉑療法。患者特徵列於表4中。表4:患者特徵tableseeoriginaldocumentpage108DC由外周血單核前體產生且隨後如方法中所述用包含野生型p53(ADVEXIN)的腺病毒構建體感染。Ad-p53治療後細胞表型的一般例子呈現於圖10A中。p53陽性DC的數目使用流式細胞術進行評估(圖10B)。患者預定接受皮內注射的3次疫苗劑量，間隔為2周。如果患者顯示穩定疾病，那麼他們被給予另外3次疫苗劑量，每月l次。施用疫苗的總數目為2-6(中值=3)，而研究自始至終施用了總共82次疫苗。試驗I期部分具有從5xl(^到5xl07p53+DC逐步增加疫苗劑量的初期目標。然而，每次劑量大於5xl06p53+DC的產生難以達到(在少於10%的所有情況下產生>107p53+DC)。因此，為了維持試驗自始至終的一致性，本發明人決定不將p53+DC的單次劑量逐步增加到大於5xl(T細胞。平均起來，每次劑量產生7.7xl07DC和8.6xl06p53+DC(表5)。表5.對於疫苗產生的DC數目每個疫苗產生的DC總數目每個疫苗產生的p53+DC數目每個疫苗注射的p53+DC數目中值2.42xl074.66xl064.78xl06平均值7.69xl078.64xl063.84xl0《最大值1.59xl082.7xl085xl06最小值1.47x10'2.4xl052.4xl05注射的p53+DC數目限於5xl06，即使產生了更多的細胞。平均起來每個患者每次疫苗接種接受3.8xl06p53+DC。在5個病例中，由於疫苗生產中的困難患者接受了少於106p53+DC。實施例4針對疫苗的抗原特異性細胞免疫應答為了評估免疫應答，來自患者的外周血樣品在免疫接種前、3輪免疫接種完成後2-3周和2個月後收集。p53特異性免疫應答在IFN-YELISPOT中使用包含野生型p53的金絲雀痘病毒(ALVAC)或對照病毒進行評估。包含全長p53基因的ALVAC的使用允許不管患者的HLA類型評估p53特異性應答。針對P53的免疫應答的發展視為顯著的，如果它比針對對照ALVAC的應答高至少2SD。針對疫苗接種的應答視為顯著的，如果免疫接種後的p53特異性應答比免疫接種前的p53特異性應答高過2SD,且比針對對照ALVAC的應答高至少2SD。顯示了關於示例性患者1和2的代表性ELISPOT數據(圖11A)。儘管針對對照ALVAC和p53的基線免疫反應性在患者2中比患者1中更低，但在2種情況下，疫苗接種後3周產生了針對p53的顯著免疫反應性(p-O.045;圖11A)。到疫苗接種後2個月時應答的量級已減少，然而信號仍顯著超過疫苗前水平。使用HLA-A2匹配的p53衍生或對照肽，在12個HLA-A2陽性患者子集中進一步評估免疫應答。舉例說明性結果顯示於圖11B中。在這個患者中，疫苗前的免疫反應性對於對照、PSA和p53肽是相同的。疫苗接種後l個月，顯著的p53特異性反應性是顯而易見的。免疫應答在隨後3次每月l次的疫苗治療中維持，且似乎在最後一次疫苗後3個月回到基線水平(圖11B)。沒有觀察到針對對照PSA肽的免疫反應性的誘導，表明了應答的特異性。針對p53肽的應答允許更精確評估CD8+T細胞特異性應答。在這些患者中，同樣評估了抗原特異性CD8+T細胞的存在且使用四聚體染色證實(圖11C)。使用ALVAC-p53在19個患者中的9個中(47.3%)發現，且使用p53衍生肽在12個患者中的7個中(58.3%)發現針對疫苗接種的顯著p53特異性應答(圖12A和12B)。圖12C和12D顯示使用ALVAC-p53在25個患者中的13個中(52%)，和使用p53衍生肽在12個患者中的7個中(58.3%)針對疫苗接種的適度但明顯的p53特異性T細胞應答。使用p53衍生肽測量對疫苗接種具有顯著應答的3個患者由於技術原因未使用ALVAC-p53進行測試。總之，22個測試患者中的12個(54.5%;稱為p53應答者)具有針對免疫接種的統計上顯著的p53特異性應答。當2種測定法使用同一患者細胞進行測試時，與p53衍生肽比較對ALVAC-p53的應答率沒有明顯不同(p>0.1)，然而使用四聚體染色可見更低的應答。11個測試的患者中只有3個(27.2%)在四聚體染色中顯示出顯著增加(數據未顯示)。p53特異性免疫的疫苗接種前水平在對疫苗免疫應答的患者和不應答的那些中是相似的(圖12A和12B)。p53特異性免疫應答水平在疫苗接種完成後2個月顯著減少。這與第二線化學療法一致，所述第二線化學療法在疫苗接種結束後3-4周在大多數患者中開始。實施例5在針對疫苗的細胞和體液免疫應答之間的關聯在22個測試患者中的10個中觀察到可檢測的免疫接種前的抗p53抗體水平，且只有3個患者在免疫接種後顯示抗p53抗體水平中的顯著增加。有趣的是，所有那些患者具有可檢測的疫苗前抗體水平。具有可檢測的免疫接種前的抗p53抗體水平的10個患者中的4個(40%)具有針對疫苗接種的陽性p53特異性細胞應答，這與沒有預先存在的抗p53水平的患者中的應答率沒有統計上不同。抗腺病毒抗體可能在限制基於腺病毒的癌症疫苗效應中起關鍵作用。本發明人通過ELISA使用系列稀釋的患者血清測量了抗AdvIgG和IgM抗體。大多數患者具有可檢測的免疫接種前的抗AdvIgG抗體水平。使用Adv-p53DC的3輪免疫接種後，抗Adv抗體滴度在23個患者中的12個中(52.1%)增加。在10個患者中觀察到適度增加(>2和〈8倍)，和在2個患者中觀察到大量(>8倍)增加。具有抗腺病毒應答大量增加的2個患者沒有發展針對免疫接種的p53特異性細胞應答。在抗Adv抗體滴度有適度增加的IO個患者的9個中(90%),和在抗體滴度沒有可檢測的增加的11個患者中只有4個(36.3%)觀察到針對疫苗接種的p53特異性細胞應答(在費氏精確檢驗中雙尾p值-0.011)(圖13A)。因此，針對免疫接種的抗Adv抗體的適度增加的還與陽性應答相關。在那些患者中檢測到的抗腺病毒抗體具有中和滴度中值為1600的中和活性(數據未顯示)。實施例6針對疫苗接種的免疫應答與疫苗接種前的T細胞水平、DC活性、和未成熟的髓樣細胞存在的關聯p53特異性細胞應答的產生可能不僅取決於抗原刺激的質量，還取決於T細胞和宿主抗原呈遞細胞特別是DC的功能活性。本發明人表徵了影響疫苗接種結果的宿主免疫系統的預存情況。為了解決這個問題，在疫苗接種前從患者中分離的MNC用破傷風類毒素(TT)或PHA進行刺激，且通過力-胸苷的攝取測量細胞增殖。應答的正常水平使用來自健康志願者和供體的MNC確定。刺激指數(SI)用於評估響應刺激的T細胞增殖。它計算為在O.1jagTT或5pg/mlPHA存在下和在單獨的培養基中的細胞增殖之間的比率。在健康供體中關於TT剌激的SI為15-80,而中值為30.4,而關於PHA刺激的SI為25-90，而中值為53.5。20個測試患者中的9個(45%)具有低於正常樣品下限的TT應答，且19個測試患者中的9個(47.3%)具有低於對照範圍的PHA應答(圖13B)。然而，針對TT或PHA的T細胞應答減少的患者發展針對疫苗接種的p53特異性免疫，速率與具有正常T細胞應答水平的患者相同(圖13C)。近期研究已暗示天然CD4+CD25+調節性T細胞(T\eg)可能在抗腫瘤免疫應答的下調中起重要作用(在Chattopadhyay等人，2005中綜述)。對於T^群體的初期評估，我們計算003+(:1)4+T細胞總群體內的CD25《細胞的存在。在疫苗接種前或在疫苗接種剛完成後，在健康供體和SCLC患者組間沒有發現這些細胞比例的差異(圖13D)。本發明人在具有升高水平的CD4+CD25+T細胞的患者組中表徵了針對疫苗接種的p53特異性應答。然而，在疫苗接種前後患者血液中CD3+CD4+CD25+細胞的存在和針對疫苗接種的p53特異性T細胞應答之間沒有觀察到統計上顯著的聯繫(圖13E)。近期研究已暗示CD4+CD25+調節性T細胞(Leg)可能在抗腫瘤免疫應答的下調中起重要作用(在Chattophadhyay等人，2005中綜述)。作為Treg群體的初期評估，在CD3+CD4+T細胞總群體內計算CD25高細胞。在疫苗接種前或在疫苗接種完成後2-3周，在健康受試者和具有SCLC的患者組間沒有發現這些細胞比例的差異(圖141)。此外，在疫苗接種前後患者血液中這些細胞的存在和針對疫苗接種的p53特異性T細胞應答之間沒有發現統計上顯著的聯繫(圖14J)。本發明人表徵了疫苗接種前DC的存在和功能活性與針對疫苗接種的抗原特異性應答之間的關聯。在SCLC患者中沒有發現DC(Lin—HLADR+)和其成熟的CD83+子集的比例中統計上顯著的減少。大量患者具有減少水平的DC。本發明人比較了在具有減少比例的DC(低於對照組中的最小值)的患者中與具有正常DC水平的那些患者中針對疫苗接種的p53特異性免疫應答水平。沒有發現差異(圖14C)。來自具有SCLC患者的DC上的HLA-DR表達顯著低於健康供體。平均螢光強度從對照組中的50.5±1.9減少為疫苗接種前SCLC中的35.5±4.3(p=0.03)(圖14D)。在異基因混合白細胞反應中可見甚至更大量的減少，功能特別歸於DC。應答者的異基因T細胞增殖從通過來自對照組的MNC刺激後的13279±140.7CPM減少為用來自SCLC患者的MNC刺激後的1740±767.4CPM(p50%的患者具有難治性疾病(與在我們的患者群體中一樣)的研究為6%-16%(Davies等人，2004)。然而，本發明人發現在用第二線化學療法治療的所有18個患者中客觀臨床應答(PR+CR)為66.7%(表6)。在用疫苗治療的13個柏抗性患者中(當他們在接受疫苗後進展時接受了各種化學治療方案)，應答率為61.5%(表6)。這些鉑抗性患者(n-13)從第一次疫苗施用時的生存中值為9.3個月，而95%置信區間下限為7.1個月(圖15A)。所有23個可評估患者的總存活從第一次疫苗施用時為IO個月，而95%置信區間下限為7.1個月(圖15B)。表6.在疫苗接種的患者中對第二線化學療法的應答tableseeoriginaldocumentpage114本發明人評估了針對免疫接種的免疫應答和針對第二線化學療法的臨床應答之間的關係。與具有無法檢測的免疫應答的9個患者中的3個(33.3%)比較，具有針對免疫接種的陽性免疫應答的9個患者中的8個(88.9%)具有針對第二線化學療法的CR或PR(在費氏精確檢驗中雙尾p=0.0497)(圖15C)。與對疫苗接種沒有免疫應答的患者比較(生存中值，7.9個月)，具有針對疫苗接種的陽性免疫應答的患者改善總存活(中值為12.1個月)(圖15D)。然而，2條存活曲線之間的差異沒有達到統計學顯著性(p=0.0")。第二線化學療法的施用在疫苗接種結束後3-4周在大多數患者中開始。為了追蹤觀察這些患者中的特異性免疫應答狀態，我們在最後一次疫苗接種後2個月評估了p53特異性免疫應答。在大多數患者中，存在p53特異性免疫應答的顯著減少(圖12A,17A)。這種減少與顯著的化學療法誘導的淋巴細胞減少症無關(圖17B)。實施例83次疫苗後在1個患者中的臨床應答1個患者未包括在上文的臨床分析中，因為她未完成免疫應答分析。這個患者在第3次疫苗施用後達到PR。這個患者在初次診斷後立即接受與胸放射療法同時發生的4個順鉑和依託泊苷循環。她隨後在她的最後一次順鉑劑量後2個月進展，出現幾個PET陽性腫大的腹膜後淋巴結。她在那時接受了3次疫苗，且在2周後重新分級。總體RECIST測量顯示她的所有可測量損傷尺寸減少60%(圖16)。實施例9本發明的重要性本發明涉及皮內施用示例性Ad-p53處理的樹突細胞(DC)後產生的免疫應答。因為Adv相關抗原和p53衍生表位都呈遞在同一DC上，所以在具體實施方案中，抗Adv免疫的評估可以充當DC功能活性的相關物。然而，由於呈遞表位之間的免疫學竟爭，非常高水平的抗Adv應答可能是有害的。在第二線化學療法失敗的3個患者中，2個沒有抗Adv抗體應答中的可檢測增加，且1個具有非常高(>8倍)的增加，而對化學療法應答的8個患者中的6個具有適度增加的抗Adv抗體水平，且2個沒有這種增加。然而，數據與共享的DC抗原呈遞的概念一致，且因此抗Adv免疫可以充當關於p53免疫誘導的代替標記。為了優化免疫系統的p53特異性應答，本發明人使用裝載包含野生型p53基因的腺病毒的DC。腺病毒不僅是用於將基因遞送到DC內的極佳工具(在Humrich和Jenne，2003;Gamvrel1is等人，2004中綜述)，還誘導這些細胞的活化，這表現為DC表面上MHCII類和共刺激分子的上調，IL-12、Thl和促炎細胞因子以及功能效力的產生(Nikitina等人，2002;Tan等人，2005;Herrera等人，2002;Miller等人，2002;Korst等人，2002;Miller等人，2003)。因此，腺病毒提供了將Ag遞送和DC活化組合的獨特機會，且可以提供對基於DC的癌症免疫療法的另外利益。在具體方面，不管細胞的有絲分裂狀態，Adv提供對許多細胞類型的高水平的轉導效率(Becker等人，1994)。在El區中具有缺失的複製缺陷Adv在許多臨床試驗中已直接注射到人內(在Roth和Cristiano，1997中綜述)。APC且特別是DC用模型Ags的成功轉導已得到報導(Broassart等人，1997;Dietz和vuk—Pavlovic，1998)。轉導的DC能夠有效呈遞重組蛋白質Ags。使用荷瘤鼠類模型的臨床前研究結果和評估人p53特異性CTL前體的初期結果已證實Ad-p53轉導的DC能夠誘導有效的抗腫瘤應答(Nikitina等人，2002)。這種應答識別與不同突變型p53有關的表位，且導致p53相關腫瘤的腫瘤保護以及已建立的腫瘤生長中的顯著減少(Nikitina等人，2002;Ishida等人，1999)。因此，p53具有"理想"TAA的許多特徵，且是用於在癌症免疫療法中使用的非常吸引人的候選物。DC在抗肺瘤免疫應答中起關鍵作用。當DC用於誘導免疫應答時，腫瘤保護以及有限的療效被誘導(在Gabrilovich，2002中綜述)。因此，DC是作為遞送特異性Ags用於誘導免疫的媒介物的理想候選物。許多臨床試驗已在各種類型的癌症中使用基於DC的疫苗。這些研究顯示裝載Ag的DC免疫接種在癌症治療中是安全的且有希望的。它們包括在非何杰金氏淋巴瘤、B細胞淋巴瘤、多發性骨髓瘤、前列腺癌、惡性黑素瘤、結腸直腸癌等中的試驗。目前看起來基於DC的免疫接種中的關鍵因素之一是DC的活化狀態。未成熟的DC不能刺激有效的免疫應答。此外，它們可能誘導Ag特異性T細胞的抑制(Dhodapkar等人，2001)。腺病毒提供了將Ag遞送和DC活化組合的獨特機會。使用CD83上調和CD14下調的表型標準，用Adv轉導的DC明顯變得更成熟。轉導的DC還減少IL-10的產生，且轉導的DC的子集產生增加水平的IL-12p70。這種成熟水平優於通過用腫瘤壞死因子-oc或幹擾素-oc處理這些細胞達到的那些，但不如用CD40L三聚體或CD40L加幹擾素-Y的組合顯著(Schumacher等人，200O。通過單獨的Adv轉導的成熟導致使用2種限定的人腫瘤相關Ags即MART-1和AFP有效刺激來自健康供體和具有晚期癌症患者的Ag特異性T細胞(Schumacher等人，2004)。Adv誘導DC成熟/活化的能力已充分確定(Nikitina等人，2002;Miller等人，2003;Miller等人，2002;Korst等人，2002)。這些數據指出腺病毒構建體可以提供對基於DC的癌症免疫療法的另外利益。具有ESSCLC的患者的選擇允許本發明人不僅給具有相對低腫瘤體積(初次化學療法後)的患者施用疫苗，還提供了評估針對疫苗接種的臨床應答的機會。本發明評估了皮內施用Ad-p53處理的DC後產生的免疫應答。ifn-yelispot目前是針對疫苗接種的免疫應答的最敏感測量之一。在本發明中，本發明人使用這種測試的2種不同變體一種使用ALVACp53且另一種使用HLA-A2匹配的肽。ALVAC允許不管患者的HLA類型評估p53特異性應答。然而，它不允許區分CD4+和CD8+t細胞應答。肽允許分析特異性cd8+t細胞應答，但只能在hla-a2陽性患者中使用。在本發明人的掌握中，在ALVAC和肽方法之間沒有看到應答頻率中的差異。總之，54.5%的所有患者顯示針對疫苗接種的p53特異性應答。這個比率與用其他基於DC的疫苗治療的患者中先前報導的免疫應答率一致。本發明人表徵了限制針對疫苗接種的p53特異性應答的因素。使用疫苗接種前收集的血液樣品，比較疫苗接種前的T細胞水平和DC功能與針對疫苗的抗原特異性應答。儘管外周血中DC的存在只在小部分患者中減少，但許多患者具有減少的T細胞和DC功能。這些數據與先前報導的觀察一致(在Gabrilovich，2004中綜述；Gabrilovich和Pisarev，2003)。然而，在這些參數和針對疫苗接種的p53特異性應答之間沒有發現關聯。CD4+CD25+乙g已涉及癌症相關的免疫缺陷(Zou等人，2005)。這些細胞群體的增加不一定指示Treg的上調，因為大部分CD4+CD25+T細胞由活化T細胞代表。目前，幾種標記可以用於更精確鑑定T^群體；然而，功能測試仍是測定這些細胞性質的唯一可靠方法(Chattopadhyay等人，2005;Zou等人，2005)。本發明人不能檢測T細胞的CD4+CD25*群體存在的大量增加，這使得進一步的分析不必要。數據不一定指出SCLC中缺乏T^的涉及。患者在分析前6周正好用基於鉑的化學療法治療。在具體實施方案中，化學療法可以消除這些細胞中的一些，如同先前對於環磷醯胺報導的(Ghiringhelli等人，2004)。具有ESSCLC的患者具有增加的ImC水平-腫瘤相關的免疫抑制中涉及的細胞(Kusmartsev和Gabrilovich，2002;Gabrilovich,2004;Bronte等人,2001)。重要的是，與具有升高的疫苗前ImC水平的患者只有28.6°/。比較，具有正常的疫苗前IfflC水平的80%患者具有針對疫苗接種的p53特異性應答。儘管這些差異沒有達到統計學顯著性(P=0.07)，但它們顯示強的傾向且暗示ImC中的增加可能負面影響針對疫苗的抗原特異性應答。疫苗接種後ImC的存在甚至進一步增加，只有2個患者具有正常水平的這些細胞(2個都具有針對疫苗接種的陽性應答)。IfflC中的增加可能由下列事實引起大多數患者在評估時具有進行性疾病。在具體實施方案中，ImC的去除在增強癌症疫苗的效應方面是有利的。抗腺病毒抗體應答的誘導視為這種載體用於在基因療法中使用的主要限制因素之一。在這些研究中，23個患者中的12個顯示抗腺病毒抗體滴度增加。有趣的是，針對疫苗接種的p53特異性應答主要在具有適度增加的滴度的患者中發現(90%)。沒有滴度增加的患者中只有1/3已發展針對疫苗接種的陽性p53特異性應答(p-0.011)。因為腺病毒和p53衍生的抗原都呈現在同一DC上，所以抗Adv免疫的評估可以充當DC功能活性的相關物。然而，由於呈遞表位之間的免疫學竟爭，非常高水平的抗Adv應答可能是有害的。發展非常強的抗腺病毒應答的患者不能產生針對疫苗接種的P53特異性應答。這些數據與在動物模型中獲得的結果一致，所述動物模型顯示在用不同的腺病毒構建體轉導的DC免疫接種小鼠後產生的有限抗腺病毒應答不會影響抗原特異性CTL活性(Nikitina等人，2002;Brossart等人,1997)。儘管在超過一半的患者中誘導抗原特異性免疫應答，但只在1個患者中觀察到客觀臨床應答(4.2%)。重要的是，這類似於先前臨床試驗中描述的那種(Rosenberg等人，2004)。然而，用第二線化學療法治療患者後，大多數疫苗接種的患者具有針對治療的客觀臨床應答(CR或PR)。重要的是，針對疫苗接種的臨床應答與免疫應答關聯。沒有針對疫苗接種的p53特異性應答的患者中少於40%對第二線化學療法臨床應答，而幾乎90%的p53應答者具有針對疫苗接種的客觀臨床應答。p53細胞免疫性的誘導與這個不能治癒的患者群中改善的存活關聯。這些數據指出疫苗接種在具有SCLC的患者中與化學療法協同增強。化學療法最後減弱抗原特異性T細胞應答，因為在化學療法開始後6-8周它幾乎無法檢測。在具體方面，免疫療法和化學療法的協同效應在治療開始後的第一個雙周時發生。在具體實施方案中，可能使用觀察到的效應的下列機制中的一種或多種化學療法可能下調腫瘤產生的免疫抑制因子的效應，所述免疫抑制因子阻止CTL殺死腫瘤細胞；化學療法可以上調腫瘤細胞中的p53,使得它們更易於被CTL識別；化學療法可能通過上調穿孔素或顆粒酶的表達水平激活CTL;以及顆粒酶的促凋亡效應和化學療法可能在分子水平上協同增強。近期已提出癌症免疫療法和免疫療法組合可能提供有效的顯著利益(Lake和Robinson,2005)。本發明提供了支持在癌症免疫療法的實際應用中新出現的這種範例的第一種直接臨床實證。癌症疫苗與其他治療方法特別是化學療法組合得到增強。總之，本文呈現的數據指出在具有ES或復發SCLC的患者中用示例性Ad-p53處理的DC主動免疫接種是安全的，且在〉5(T/0的患者中產生p53特異性免疫激活誘導。本發明人提供在體液和細胞水平上的P53和Adv免疫誘導的廣泛分析。p53細胞免疫性的誘導與這個不能治癒的患者群中改善的存活關聯。實施例10示例性材料和方法在本發明中合適的示例性材料和方法在本文中得到描述，儘管本領域技術人員將識別這些在性質上是非限制性的。免疫激活測定法。簡言之，單核細胞用ALVAC-p53或ALVAC-對照感染，且如先前描述(Pisarev等人，2003)使用自動ELISPOT閱讀器(CTL)評估IFN-y生產細胞的數目。如先前描述(Nikitina等人，2001)。所有ELISP0T實驗一式四份地進行。抗p53和抗Adv抗體水平使用至少4個系列稀釋度在ELISA中進行評估。由製造商提供的內部對照用於建立"截止，，水平。患者合格性。在入選患者前，方案被下列機構檢查和批准FDA(BB-IND9792)、NIH生物技術活動重組體DNA諮詢委員會辦公室(OBA#0205-538)，南佛羅裡達大學機構審查委員會，和USF機構生物安全委員會。具有廣泛期SCLC組織學診斷的年滿18或更大的患者對於參與是合格的。需要ECOG體力狀態0-2，和足夠的器官功能(WBC>3，000/mm3和ANC>1500/mm3,血小板>100，000/mm3，血細月包比容>25%，膽紅素<2.0mg/dl，和肌酸酐<2.0mg/dl)。具有預先存在的自身免疫性病症、免疫缺陷病症、嚴重的進行性感染和不受控制的腦轉移的患者是不合格的。治療計劃。所有患者在接受研究疫苗前用常規細胞毒性化學療法進行治療。在化學療法後具有進行性疾病的患者是合格的，如果他們在其他方面符合所有其他入選標準。在最後一次化學治療劑量後至少6周，患者經歷白細胞清除術。疫苗被生產且通過皮內注射在4個分開位點處進行施用，所述位點被引流至雙側腋窩和腹股溝淋巴結盆。這以3次分開的機會重複，每2周一次。第3組疫苗後2周，患者進行重新分級。在這個點上未顯示進行性疾病的那些患者經歷第二次白細胞清除術操作，且接受另外3組疫苗，這次每4周一次。在第3次或第6次疫苗後發展進行性疾病的患者提供另外的細胞毒性化學療法。疫苗生產。用於DC生產的單核細胞在白細胞清除術後獲得且貯存於液氮中。解凍後，細胞以1.3-1.7xl(T細胞/cm2可用培養表面的濃度置於組織培養燒瓶中的X-VIV0-15培養基(Biowhittaker，Walkersville,MD)中。培養2小時後，非貼壁細胞被去除，且燒瓶再裝填補充5ng/mlGM-CSF(Immunex)、5ng/mlIL-4(R&DSystems,Minneapolis,MN)和2%人血清白蛋白的X-VIVO-15培養基。將燒瓶孵育48小時，在這時向燒瓶中加入另外補充細胞因子的培養基。燒瓶隨後再孵育72小時。在孵育結束時，非貼壁和鬆散的貼壁細胞將被收集和用於用Ad-p53感染2小時，病毒顆粒與細胞比率為15，000:1。測定將產生最高的人p53表達水平和對樹突細胞的最小毒性量的腺病毒最佳劑量。在2小時的孵育結束時，加入X-VIVO培養基至106細胞/mL的最終細胞濃度，且細胞在燒瓶中再孵育46小時，這時細胞進行收集和分析。疫苗釋放標準包括(a)革蘭氏染色陰性；(b)通過PCR分析支原體測試陰性；(c)最大內毒素濃度5EU/mL;和(d)證據為通過流式細胞術分析的細胞內p53表達的成熟DC表型。為了測定後者，細胞用"固定和透化(fixandperm)"反應物(Caltag)處理。用p53特異性抗體染色，隨後用PE標記的抗鼠類抗體染色。洗去過量抗體後，進行使用FITC標記的單克隆抗體對譜系標記(CD3、CD14、CD19、CD20、CD56)，和使用PE標記的單克隆抗體對HLA-DR的表面染色。最終產物在流式細胞術上進行分析。疫苗施用。在預定的疫苗施用日，將適當測試的DC懸浮於1ml無菌PlasmaLyteA培養基中。將0.25mL的細胞懸浮液皮內注射到包括近側上肢和下肢的4個分開位點內。在注射後至少1小時監控患者的急性毒性。簡言之，單核細胞用ALVAC-p53或ALVAC-對照感染，且如先前描述(Pisarev等人，2003)如早期所述(Nikitina等人，2001)使用自動ELISP0T閱讀器(CTL)評估IFN-y生產細胞的數目。所有ELISP0T實驗一式四份地進行。抗p53和抗Adv抗體水平使用至少4個系列稀釋度在ELISA中進行評估。由製造商提供的內部對照用於建立"截止"水平。患者評估。監控患者的毒性、特別是關於自身免疫性的證據。關於血液學毒性的CBC監控、關於腎毒性的血清肌酸酐監控，關於肝毒性的LFT監控，和標準臨床毒性評估將在免疫接種期間自始至終每隔一周進行一次。另外，醫療史和體格檢查將在每月一次的基礎上進行。免疫應答評估。在ELISPOT測定法中進行IFN-y生產細胞分析。在疫苗接種前、3次疫苗接種完成後2-3周和2個月後從患者中收集外周血單核細胞。樣品以等分試樣保存在液氮中。來自l個患者的樣品被解凍且同時進行分析。包含全長野生型p53的重組金絲雀痘病毒ALVAC-p53從AventisPasteur(Toronto,Canada)獲得。ALVAC-對照包含空載體。單核細胞在無血清培養基中以4蝕斑形成單位(PFU)/細胞的感染複數(MOI)用ALVAC-p53或ALVAC-對照感染2小時。感染後，將細胞一式四份地接種在用抗IFN-Y抗體預包被的96孔板中的補充IL-2的完全培養基中(2xl(T細胞/孔)，且孵育36小時。IFN-Y生產細胞數目如先前描述(Nikitina等人，2001;Pisarev等人，2003)使用自動ELISP0T閱讀器(CTL)進行評估。在HLA-A2陽性患者中，MNC與10jag/mlp53衍生的HLA-A2結合肽LLGRNSFEV或對照PSA衍生肽FLTPKKLQCV—起平行孵育36小時。IFN-y生產細胞數目如先前描述(Pisarev等人，2003)在ELISP0T測定法中進行評估。四聚體染色。四聚體HLA-A-0201/LLGRNSFEV在耶基斯地區靈長類動物研究中心(YerkesRegionalPrimateResearchCenter)的NIAIDMHC四聚體核心機構中進行。MNC細胞用APC綴合的抗CD8抗體和PE綴合的四聚體(1:100稀釋)於4'C染色60分鐘。計算CD8+T細胞群體內的四聚體陽性細胞比例。人免疫應答的評估。抗p53和抗Adv抗體水平(IgG和IgM)使用至少4個系列稀釋度在ELISA中進行評估。由製造商提供的內部對照用於建立"截止"水平。樣品始終一式兩份地進行測定。吸光度在分光光度計上450nm波長處針對620nm的參考濾光片進行閱讀，以便補償二敞量滴定板材料的差異。p53-AutoantibodyElisaPLUSkit(OncogeneResearch)用於測量人血清樣品中針對p53的循環抗體。腺病毒IgG/IgMELISA試劑盒購自IBLImmuno—BiologicalLaboratories(Hamburg,Germany)。統計分析。接受至少一次疫苗的所有患者對於從其第一次用Ad-p53DC疫苗治療時的毒性是可評估的。接受至少一次疫苗的3個患者具有早期進展且在接受使用3次疫苗的最低限度治療前從研究中去除，且在最終分析中加以考慮。存活評估使用Kaplan和Meier的方法進行測定，而變量使用Greenwood氏公式進行計算。Log排序測試(logranktest)用於測定2條存活曲線之間的差異顯著性。參考文獻下列參考文獻特別引入本文作為參考，參考的程度為它們提供補充本文闡述的那些的示例性操作或其他細節。專利和專利申請1984年2月7日授予的美國專利號4,430,434。1984年6月5日授予的美國專利號4，452,901。1988年2月23日授予的美國專利號4,727,028。1990年10月2日授予的美國專利號4，960，704。1995年3月21日授予的美國專利號5，399，363。1995年11月14日授予的美國專利號5,466,468。1996年8月6日授予的美國專利號5,543,158。1996年12月3日授予的美國專利號5,580,579。1997年2月11日授予的美國專利號5,602，306。1997年5月27日授予的美國專利號5，633，016。1997年6月17日授予的美國專利號5，639，940。1997年6月24日授予的美國專利號5，641，515。1997年7月1日授予的美國專利號5，643，786。1997年7月15日授予的美國專利號5,648,219。1997年8月12日授予的美國專利號5，656,016。1997年8月19日授予的美國專利號5，658，583。1997年12月16日授予的美國專利號5,697,899。1998年1月13日授予的美國專利號5，707，644。1998年2月17日授予的美國專利號5,718,914。1998年2月24日授予的美國專利號5,720,936。1998年3月10日授予的美國專利號5，725,871.1998年4月14日授予的美國專利號5，739，169。1998年5月5日授予的美國專利號5,747,469。1998年5月26日授予的美國專利號5，756，353。1998年6月23日授予的美國專利號5，770，219。1998年7月14日授予的美國專利號5，780，045。1998年7月21日授予的美國專利號5，783，208。1998年8月4日授予的美國專利號5，788，963。1998年8月4日授予的美國專利號5，789，655。1998年8月11日授予的美國專利號5,792,451。1998年8月25日授予的美國專利號5,797,898。1998年8月25日授予的美國專利號5，798，339。1998年9月1日授予的美國專利號5,801，005。1998年9月8日授予的美國專利號5,804,212。1998年9月22日授予的美國專利號5，811，128。1998年9月22日授予的美國專利號5,811,297。1998年9月29日授予的美國專利號5，814，599。1998年10月20日授予的美國專利號5,824,311。1998年10月20日授予的美國專利號5，824,346。1998年10月27日授予的美國專利號5,827,530。1998年11月3日授予的美國專利號5,830,682。1998年11月3日授予的美國專利號5,830,880。1998年11月7日授予的美國專利號5，836，935。1998年12月1日授予的美國專利號5,843,689。1998年12月8日授予的美國專利號5,846,225。1998年12月8日授予的美國專利號5,846,233。1998年12月8日授予的美國專利號5，846，928。1998年12月15日授予的美國專利號5，849,589。EPO0273085WPO94/11514出版物Allen等人，"AMutationHotSpotintheBcrpl(Abcg2)MultidrugTransporterinMouseCellLinesSelectedforDoxorubicinResistancel,，，CancerResearch62，2294-2299，April15，2002.Allison,"Immunologicaladjuvantsandtheirmodesofaction,"Arch.Immunol.Ther.Exp.(Warsz)，45(203):141-147，1997.Allison,"Themodeofactionofimmunologicaladjuvants,11Dev.Biol.Stand.，92:3-11，1998.Alt,Kellems，BertinoandSchimke，J.Biol.Chem.，253:1357，1978.Ardizzoni,A.等人Topotecan,anewactivedruginthesecond—linetreatmentofsmall—celllungcancer:aphaseIIstudyinpatientswithrefractoryandsensitivedisease.TheEuropeanOrganizationforResearchandTreatmentofCancerEarlyClinicalStudiesGroupandNewDrugDevelopmentOffice,andtheLungCancerCooperativeGroup.JClinOncol.15，2090-6(1997).Arthur等人,"Acomparisonofgenetransfermethodsinhumandendriticcells,"CancerGeneTher.，4(1):17-25，1997.Austin-Ward,Villaseca，"Genetherapyanditsapplications,"Rev.Med.Chil.,126(7):838-45，1998.Baichwal等人，"VectorsforgenetransferderivedfromanimalDNAviruses:Transientandstableexpressionof"In:Genetransfer,KucherlapatiR，ed.，NewYork:PlenumPress,第117—148頁，1986.Becker,T.C.等人UseofRecombinantAdenovirusforMetabolicEngineeringofMammalianCells.Meth.CellBiol,43，161-176.(1994).Bernard等人，"HIV-specificcytotoxicT-lymphyocyteactivityinimmunologicallynormalHIV-infectedpersons,"AIDS:12(16):2125-2139,1998.Bertholet等人，"CytotoxicTlymphocyteresponsestowild-typeandmutantmousep53peptides,"Eur.J.Immunol.,27(3):798-801,1997.Blaszczyk-Thurin，M，，Ertl，1.0.&Ertl，H.C.Anexperimentalvaccineexpressingwild-typep53inducesprotectiveimmunityagainstglioblastomacellswithhighlevelsofendogenousp53.ScandJImmunol.56，361-75(2002).Bodner,S.M.等人Expressionofmutantp53proteinsinlungcancercorrelateswiththeclassofp53genemutation.Oncogene.7,743-9.(1992).Bourlais等人,"Opthalmicdrugdeliverysystems-recentadvances."Prog.Retin.EyeRes.，17:33-58，1998.Brizel，"Futuredirectionsintoxicityprevention,"Semin.Radiat.Oncol.，8(4Suppl.1):17-20，1998.Brossart，P.，Goldrath，A.W.，Butz，E.A.，Martin,S.&Bevan，M.J.Virus—mediateddeliveryofantigenicepitopesintodendriticcellsasameanstoinduceCTL.J.Immunol.158，3270-3276(1997).Bukowski，Rayman，Uzzo，Bloom，Sandstrom，Peereboom,Olencki,Budd，McLain,Elson，Novick，Finke，"SignaltransduictionabnormalitiesinTlymphocytesfrompatientswithadvancedrenalcarcinoma:clinicalrelevanceandeffectsofcytokinetherapy,"Clin.CancerRes.,4(10):2337-47，1998.Caldovic和HackettJr.,"Developmentofposition-independentexpressionvectorsandtheirtransferintotransgenicfish,"Mol.Mar.Biol.Biotechnol.，4(1):51-61，1995.Caley，Betts，Davis，Swanstrom，Frelinger，Johnston,"VenezuelanequineencephalitisvirusvectorsexpressingHIV-lproteins:vectordesignstrategiesforimprovedvaccineefficacy,"Vaccine17(23-24):3124-35，1999.Carver,Dalrymple,Wright,Cottom，Reeves,Gibson,Keenan，Barrass，Scott，Colman，等人,"Transgeniclivestockasbioreactors:stableexpressionofhumanalpha-l一antitrypsinbyaflockofsheep，"BiotechnologyN.Y.，1(11):1263—1270，1993.Celluzzi和Falo，"Epidermaldendriticcellsinducepotentantigen-specificCTL-mediatedimmunity，"J.Invest.Dermatol.，108(5):716-720,1997.Chalfie等人，Science,263:802-805,1994.Chang等人，"ForeigngenedeliveryandexpressioninhepatocytesusingahepatitisBvirusvector,"Hepatology，14:134A，1991.Chattopadhyay,等人，"RegulatoryTcellsandtumorimmunity,"CancerImmunolImmunother，54:1153-61，2005.Chen和Okayama，"High-efficiencytransfectionofmammaliancellsbyplasmid腿，"Mol.CellBiol.，7:2745-2752，1987.Chikamatsu，K.等人Generationofanti-p53cytotoxicTlymphocytesfromhumanperipheralbloodusingauologousdendriticcells.Clin.CancerRes.5，1281-1288(1999).Christodoulides，Brooks,Rattue，Heckels，"Immunizationwithrecombinantclass1outer-membranceproteinfromNeisseriameningitidis:influenceofliposomesandadjuvantsonantibodyavidity,recognitionofnativeproteinandtheinductionofabactericidalimmuneresponseagainstmeningococci,"Microbiology,144(Pt11):3027-37,1998.Cicinnati,V.R.等人Impactofp53-basedimmunizationonprimarychemically-inducedtumors.IntJCancer.113，961—70(2005).Ciernik，Berzofsky，Carbone，"InductionofcytotoxicTlymphocytesandantitumorimmunitywithDNAvaccinesexpressingsingleTcellepitopes,".Immunol.,156(7):2369-75，1996.Clark,Voulgaropoulou，Fraley，Johnson,"Celllinesfortheproductionofrecombinantadeno-associatedvirus,"HumanGeneTherapy,6:1329-1341，1995.ClarkeR，LeonessaF，TrockB.Multidrugresistance/P-glycoproteinandbreastcancer:reviewandmeta-analysis.SeminOncol.Dec;32(6S卿l7):S9-15，2005.Coffin,"Retroviridaeandtheirreplication,"In:Virology,Fields等人(eds.)，NewYork:RavenPress,第1437-1500頁，1990.Colberre-Garapin等人，J.Mol.Biol.,150:1,1981.Cotten，Wagner,Zatloukal，Phillips,Curiel，"Highefficiencyreceptor—mediateddeliveryofsmallandlarge(48kilobase)geneconstructsusingtheendosomedisruptionactivityofdefectiveorinactivatedadenovirusparticles,"Proc.Natl.Acad.Sci.USA,89:6094-6098，1992.Couch等人，"Immunizationwithtypes4and7adenovirusbyselectiveinfectionoftheintestinaltract,"Am.Rev.Resp.Dis.，88:394-403，1963.Coupar等人，"Ageneralmethodfortheconstructionofrecombinantvacciniavirusexpressingmultipleforeigngenes,"Gene，68:1-10，1988.Cozzi，Tucker,Langford，Pino-Chavez，Wright,O'Connell，Young,Lancaster,McLanghlin，Hunt,Bordin，White,"Characterizationofpigstransgenicforhumandecay-acceleratingfactor,'1Transplantation,64(10):1383-13921997.Curiel，"Genetransfermediatedbyadenovirus-polylysineDNAcomplexes,"In:VirusesinHumanGeneTherapy,J.-M.H.Vos(Ed.),CarolinaAcademicPress,Durham,N.C.，第179-212頁，1994.Curran，"Radiation-inducedtoxicities:theroleofradioprotectants，"Semin.Radial.Oncol.，8(4Suppl.1):2-4，1998.D'Amico,D.等人Highfrequencyofsomaticallyacquiredp53mutationsinsmall-celllungcancercelllinesandtumors，Oncogene.7，339-46.(1992).Davidson,Musk,Wood,Morey，Ilton，Yu，Drury，Shilkin，Robinson,"Intralesionalcytokinetherapyincancer:apilotstudyofGM-CSFinfusioninmesothelioma,"J.Immunother.，21(5):389-98，1998.Davies，A.M.,Evans,W丄，Mackay，J丄&Shepherd,F.A.Treatmentofrecurrentsmallcelllungcancer.HematolOncolClinNorthAm.18，387-416(2004).Davies，A.M.,Evans,W.K.，Mackay，J丄&Shepherd,F.A，Treatmentofrecurrentsmallcelllungcancer.HematolOncolClinNorthAm.18，387-416(2004).DeLeo,A.B.p53-basedimmunotherapyofcancer.ApproachesroreversingunresponsivenesstoTlymphocytesandpreventingtumorescape.AdvOtorhinolaryngol.62，134-50(2005).DeLeo，"p53-basedimmunotherapyofcancer,"Crit.Rev.Immunol.，18(l-2):29-35，1998.Dhodapkar，M.V.，Steinman，R.M.，Krasovsky，J.，Munz，C.&Bhardwaj,N.Antigen-specificInhibitionofEffectorTCellFunctioninHumansafterInjectionofImmatureDendriticCells.J.Exp.Med.193，233—238(2001).Dietz，A.，B.，&Vuk-Pavlovic，S.Highefficiencyadenovirus-mediatedgenetransfertohumandendriticcells.Blood.91，392-398(1998).Dupuis等人，"Dendriticcellsinternalizevaccineadjuvantafterintramuscularinjection,"CellImmunol.，186(1):18-27，1998.Ebert,Selgrath，DiTulio，Denman，Smith,Memon，Schindler,Monastersky,Vitale，Gordon,"Transgenicproductionofavariantofhumantissue-typeplasminogenactivatoringoatmilk:generationoftransgenicgoatsandanalysisofexpression,"BiotechnologyN.Y.，9(9):835-838，1991.el-Kareh，Secomb，"Theoreticalmodelsfordrugdeliveryinsolidtumors,"Crit.Rev.Biomed.Eng.,25(6):503-71，1997.Erlandsson，"Moleculargeneticsofrenalcellcarcinoma,"CancerGenet.Cytogenet,104(1)H8，1998.Erlandsson,"Moleculargeneticsofrenalcellcarcinoma,'1CancerGenet.Cytogenet.,104(1):1-18，1998.Espenschied，J.等人CTLA-4blockadeenhancesthetherapeuticeffectofanattenuatedpoxvirusvaccinetargetingp53inanestablishedmurinetumormodel.JImmunol.170，3401-7(2003).Eura，M.等人Awild—typesequencep53peptidepresentedbyHLA-A24inducescytotoxicTlymphocytesthatrecognizesquamouscellcarcinomasoftheheadandneck.Clin.CancerRes.6,979-986(2000).Ferkol等人，FASEBJ.，7:1081-1091，1993.Finlay等人，"Activatingmutationsfortransformationbyp53produceageneproductthatformsanhsc70-p53complexwithanalteredhalf-life，"Mol.Cell.Biol.，8:531-539，1988.Flotte，Afione，Conrad，McGrath，Solow，Oka,Zeitlin，Guggino和Carter,"Stable//7"、0expressionofthecysticfibrosistransmembraneconductanceregulatorwithanadeno-associatedvirusvector,"Proc.Natl.Acad.Sci.USA,90:10613-10617，1993.Flotte，Barraza-0rtiz，Solow，Afione，Carter和Guggino，"Animprovedsystemforpackagingrecombinantadeno-associatedvirusvectorscapableof//7transduction,"GeneTherapy,2:29-37，1995.Flotte，Solow，0wens，Afione，Zeitlin和Carter,"Geneexpressionfromadenoassociatedvirusvectorinairwayepithelialcells,"Am.J.Respir.CellMol.Biol.，7:349-356，1992.Fraley等人，"Entrapmentofabacterialplasmidinphospholipidvesicles:Potentialforgenetransfer，11Proc.Natl.Acad.Sci.USA,76:3348-3352，1979.Franz,Mueller,Haartong,Frey，Katus，"Transgenicanimalmodels:newavenuesincardiovascularphysiology，'1J.Mol.Med.，75(2):115-119，1997.Friedmann,"Progresstowardhumangenetherapy,"Science,244:1275-1281，1989.Fulci，Ishii，VanMeir，"p53andbraintumors:fromgenemutationstogenetherapy,"BrainPathol.，8(4)599-613,1998.Gabrilovich等人，"Decreasedantigenpresentationbydendriticcellsinpatientswithbreastcancer,"Clin.CancerRes.，3(3):483-490，1997.Gabrilovich等人,"Dendriticcellsinantitumorimmuneresponses.II.Dendriticcellsgrownfrombonemarrowprecursors,butnotmatureDCfromtumor—bearingmice,areeffectiveantigencarriersinthetherapyofestablishedtumors,"CellImmunol,170(1):111-119，1996.Gabrilovich等人，"IL-12andmutantP53peptide-pulseddendriticcellsforthespecificimmunotherapyofcancer,11J.Immunother.EmphasisTumorImmunol.,19(6):414-418，1996.Gabrilovich，等人，"Dendriticcellsinantitumorimmuneresponses'I,Defectiveantigenpresentationintumor-bearinghosts,"CellImmunol.，170(1):IO卜IO，1996.Gabrilovich,D.I.Dendriticcellvaccinesforcancertreatment.Curr0pinMolTher.4，452-458(2002).Garroway等人,"IntegrativegenomicanalysesidentifyMITFasalineagesurvivaloncogeneamplifiedinmalignantmelanoma,"Nature436(7047):117-22，2005.Gertig和Hunter,"Genesandenvironmentintheetiologyofcolorectalcancer,"Semin.CancerBiol.，8(4):285-298，1997.Ghosh和Bachhawat，"Targetingofliposomestohepatocytes，"In.LiverDiseases,TargetedDiagnosisandTherapyUsingSpecificReceptorsandLigands，"WuG.andC.Wued.NewYork:MarcelDekker，第87-104頁，1991.Ghosh-Choudhury等人，"ProteinIX,aminorcomponentofthehumanadenoviruscapsid，isessentialforthepackagingoffulHengthgenomes,"EMBOJ，6:1733—1739，1987.Gomez-Foix等人，"Adenovirus-mediatedtransferofthemuscleglycogenphosphorylasegeneintohepatocytesconfersalteredregulationofglycogen,"J.Biol.Chem.，267:25129-25134，1992.Gopal.，"Genetransfermethodfortransientgeneexpressionstabletransfection，andcotransfectionofsuspensioncellcultures,"Mol.CellBiol.，5:1188-1190，1985.Graham和Prevec，"Adenovirus-basedexpressionvectorsandrecombinantvaccines,'1Biotechnology,20:363-390，1992.Graham和Prevec，"Manipulationofadenovirusvector,"In:MethodsinMolecularBiology:GeneTransferandExpressionProtocol,E.J.Murray(ed.)，Clifton,N.J.:HumanaPress,7:109-128，1991.Graham和vanderEb，"Anewtechniquefortheassayofinfectivityofhumanadenovirus5DNA"，Virology,52:456—467，1973.Graham等人，"CharacteristicsofahumancelllinetransformedbyDNAfromhumanadenovirustype5"，J.Gen.Virol.，36:59-72,1977.Graham等人，"CharacteristicsofahumancelllinetransformedbyDNAfromhumanadenovirustype5"，J.Gen.Virol.，36:59-72，1977.Grunhaus和Horwitz，"Adenovirusascloningvector,11SeminarinVirology,3:237-252，1992.Hanibuchi，Yano，Nishioka，Yanagawa，Kawano，Sone，"Therapeuticefficacyofmouse—humanchimericantigangliosideGM2monoclonalantibodyagainstmultipleorganmicrometastasesofhumanlungcancerinNKeell-depletedSCIDmice,"Int.J.Ca腦r，78(4):480—5，1998.Harland和Weintraub，"TranslationofmammalianmRNAinjectedintoXenopusoocytesisspecificallyinhibitedbyantisenseRNA，"J.CellBiol.，101:1094-1099，1985.Hartmann等人，"Highfrequencyofp53genemutationsinprimarybreastcancersinJapanesewomen,alow-incidencepopulation,"Br.J.Cancer,73(8):896-901，1996.Hartmann等人，"Overexpressionandmutationsofp53inmetastaticmalignantmelanomas,"Int.J.Cancer,67(3):313-317:1996.Haskell和Bowen，"Efficientproductionoftransgeniccattlebyretroviralinfectionofearlyembryos,"Mol.Reprod.Dev.，40(3):386-390，1995.Hellstrand，Hermodsson,Naredi，Mellqvist，Brune，"Histamineandcytokinetherapy,'1Acta.Oncol.,37(4):347-53，1998.Hermonat和Muzyczka，"Useofadeno-associatedvirusasamammalianDNAcloningvector;transductionofneomycinresistanceintomammaliantissueculturecells,"Proc.Natl.Acad.Sci.USA,81:6466-6470，1984.Hersdorffer等人,"Efficientgenetransferinlivemiceusingauniqueretroviralpackagingline,"DNACellBiol.，9:713-723，1990.Herz和Gerard,11Adenovirus-mediatedtransferoflowdensitylipoproteinreceptorgeneacutelyacceleratescholesterolclearanceinnormalmice,"Proc.Natl.AcadSci.USA90:2812-2816,1993.Ho，Lau，Leung，Johnson,"Internalradiationtherapyforpatientswithprimaryormetastatichepaticcancer:areview,"Cancer,83(9):1894-907，1998.Hoffmann,T丄，Bier，H.,Don羅berg,A.D.，Whiteside,T丄&DeLeo,A.B.p53asanimmunotherapeutictargetinheadandneckcancer.AdvOtorhinolaryngol.62，151-60(2005).Horwich等人"Synthesisofhepadenovirusparticlesthatcontainreplication-defectiveduckhepatitisBvirusgenomesinculturedHuH7cells,"J.Virol.，64:642-650，1990.Houbiers等人，"/刀y"roinductionofhumancytotoxicTlymphocyteresponsesagainstpeptidesofmutantandwild-typep53，"Eur.J.Immunol.,23(9):2072-2077，1993.Hui，Hashimoto,"Pathwaysforpotentiationofimmunogenicityduringadjuvant—assistedimmunizationswithPlasmodiumfalciparummajormerozoitesurfaceprotein1，"Infect.I隨n.，66(11):5329-36，1998.Hurpin等人,"Themodeofpresentationandrouteofadministrationarecriticalfortheinductionofimmuneresponsestop53andantitumorimmunity,"Vaccine,16(2-3):208-215，1998.Ishida，T.等人DendriticcellstransducedwithwiIdtypep53geneelicitpotentantitumorimmuneresponses.Clinic.Exper.Immunol.117,244-251(1999).Ishida，T.等人Dendriticcellstransducedwithwild-typep53geneelicitpotentant卜tumourimmuneresponses.ClinExpImmunol.117，244-51.(1999).Johnson和Hamdy,"Apoptosisregulatinggenesinprostatecancer(review)，"Oncol.Rep.，5(3):553-557，1998.Johnson,Hamdy，"Apoptosisregulatinggenesinprostatecancer(review)，"Oncol.Rep.，5(3):553-7，1998.Jones和Shenk，"Isolationofdeletionandsubstitutionmutantsofadenovirustype5，"Cell,13:181—188，1978.Kaneda等人,"IncreasedexpressionofDNAcointroducedwithnuclearproteininadultratliver,"Science,243:375-378，1989.Kang，Cho,Kole，"Up-regulationofluciferasegeneexpressionwithantisenseoligonucleotides:implicationsandapplicationsinfunctionalassaydevelopment,"Biochemistry,37(18):6235-6239，1998.Kaptitt，Leone,Samulski，Siao，Pfaff，O'Malley，During,"Long-termgeneexpressionandphenotypiccorrectionsuingadeno-associatedvirusvectorsinthemammalianbrain,"NatureGenetics,8:148-154，1994.Karlsson等人，EMBOJ.，5:2377-2385，1986.Karnik，等人Estrogenreceptormutationsintamoxifen-resistantbreastcancer,CancerResearch,Vol54，Issue2349-353，1994.Kato等人，"Expressionofhepatitis.beta,virussurfaceantigeninadultratliver,"J，Biol.Chem.，266:3361—3364，1991.Kaufman,"SelectionandCoamplificationofHeterologousGenesinMammalianCel1s，"MethodsinEnzymology,185:537-566，1990.Keilholz，U.等人ImmunologicMonitoringofCancerVaccineTherapy:ResultsofaWorkshopSponsoredbytheSocietyforBiologicTherapy.J.Immunoth.25，97-139(2002).Kelleher和Vos，"Long-termepisomalgenedeliveryinhumanlymphoidcellsusinghumanandavianadenoviral-assistedtransfection，"Biotechniques，17(6):1110-1117，1994.Klein等人，"High-velocitymicroprojectilesfordeliveringnucleicacidsintolivingcells,"Nature,327:70—73，1987.Kobayashi等人,"EGFRMutationandResistanceofNonSmall-CellLungCancertoGefUinib，"NewEnglJMed，Volume352:786-792，2005.Kolmel，"Cytologyofneoplasticmeningosis，'1J.Neurooncol.，38(2-3):121-125，1998.Korst，R.J.，Mahtabifard，A.，Yamada，R.&Crystal,R.G.Effectofadenovirusgenetransfervectorsontheimmunologicfunctionsofmousedendriticcells.MolTher.5，307-15(2002).Kosmas,C.，Tsavaris，N.B.，Malamos，N.A.，Vadiaka，M.&Koufos，C.PhaseIIstudyofpaclitaxel，ifosfamide，andcisplatinassecond—linetreatmentinrelapsedsmall-celllungcancer,JClinOncol.19,119-26(2001)，Kotin，Siniscalco，Samulski，Zhu,Hunter,McLaughlin,Muzyczka,Bems，"Site-specificintegrationbyadeno-associatedvirus,"Proc.Natl.Acad.Sci.USA，87:2211-2215，1990.Kovach，Hartmann，Blaszyk,Cunningham,Schaid，andSommer，"Mutationdetectionbyhighlysensitivemethodsindicatesthatp53genemutationsinbreastcancercanhaveimportantprognosticvalue,"Proc.Natl.Acad.Sci.USA,93:1093-1096,1996.Kuball，J.等人Generatingp53-specificcytotoxicTlymphocytesbyrecombinantadenoviralvector-basedvaccinationinmice,butnotman.GeneTher.9,833-43(2002).Kurup，Hanna，"Treatmentofsmallcelllungcancer,"CritRevOncolHematol.52(2):117-26，2004.LaFace，Hermonat，Wakeland，Peck,"Genetransferintohematopoieticprogenitorcellsmediatedbyanadeno-associatedvirusvector,"Virology,162:483-486，1988.Laughlin，Cardel1ichio，Coon，"LatentInfectionofKBCelIswithAdeno-AssociatedVirusType2，"J.Virol.，60:515-524，1986.LeGalLaSalle等人，"Anadenovirusvectorforgenetransferintoneuronsandgliainthebrain,"Science,259:988-990，1993.Lebkowski,McNally，0karma，和Lerch，"Adeno-associatedvirus:avectorsystemforefficientintroductionandintegrationofDNAintoavarietyofmammaliancelltypes,"Mol.Cell.Biol.,*:3988-3996，1988.Leitner，Ying，Driver,Dubensky，Restifo，"Enhancementoftumor—specificimmuneresponsewithplasmidDNArepliconvectors,"CancerRes60(1):51-5，2000.Levine，A.J.，Momand，J.，和Finlay，C.A."Thep53tumorsuppresorgene,"Nature,351.'453-456，1991-Levrero等人，"Defectiveandnondefectiveadenovirusvectorsforexpressingforeigngenes/力"."oand">o，"Gene:101:195-202，1991.Liebermann,Gregory,Hoffman,"AP-l(Fos/Jun)transcriptionfactorsinhematopoieticdifferentiationandapoptosis,"Int.J.Oncol.，12(3):685-700，1998.Luo，Zhou,Cooper,Munshi，Boswell，Broxmeyer,Srivastava，"Adeno-associatedvirus2mediatedtransferandfunctionalexpressionofageneencodingthehumangranulocyte—macrophagecolony-stimulatingfactor,"Blood，82(Supp.):1，303A，1994.Magi-Galluzzi，Murphy，Cangi，Loda，"Proliferationapoptosisandcellcycleregulationinprostaticcarcinogenesis,"Anal.Quant.Cytol.Histol.，20(5):343-350，1998.Mangray和King,"Molecularpathobiologyofpancreaticadenocarcinoma,11FrontBiosci.，3:D1148-1160，1998.Mann等人，"Constructionofaretroviruspackagingmutantanditsusetoproducehelper-freedefectiveretrovirus,11Cell,33:153-159，1983.Markowitz等人,"Asafepackaginglineforgenetransfer:Separatingviralgenesontwodifferentplasmids，"J.Virol.,62:1120-1124，1988.Masters,G.A.等人PhaseIItrialofgemcitabineinrefractoryorrelapsedsmall—celllungcancer:EasternCooperativeOncologyGroupTrial1597.JClinOncol.21，1550-5(2003).Mathiowitz等人，"Biologicallyerodablemicrospheresaspotentialoraldrugdeliverysystems.'1Nature,386:410-414，1998.Mayer，Futuredevelopmentsintheselectivityofanticanceragents:drugdeliveryandmoleculartargetstrategies,"CancerMetastasisRev.，17(2):211-8，1998.Mayordomo等人,"Therapyofmurinetumorswithp53wild-typeandmutantsequencepeptide-basedvaccines,"J.Exp.Med.，183(4):1357-1365,1996.McCarty，Christensen，Muzyczka,"SequencesRequiredforCoordinateInductionofAdeno-AssociatedViruspl9andp40PromotersbyRepProtein,"J.Virol.,65:2936-2945，1991.McLaughlin,Collis，Hermonat,Muzyczka,"Adeno-AssociatedVirusGeneralTransductionVectors:AnalysisofProviralStructures,"J.Virol.，62:1963-1973，1988.Menard,S，，Pupa，S.M.，Campiglio，M.&Tagliabue，E.BiologicandtherapeuticroleofHER2incancer.Oncogene.22，6570-8(2003).Miller,G.，Lahrs，S.，Pi1larisetty,V.G.，Shah,A.B.&DeMatteo，R.P.AdenovirusinfectionenhancesdendriticcellimmunostimulatorypropertiesandinducesnaturalkillerandT-cell-mediatedtumorprotection.CancerRes.62，5260-6(2002).Miller,G.,Lahrs，S.，Shah,A.B.&DeMatteo,R.P.Optimizationofdendriticcellmaturationandgenetransferbyrecombinantadenovirus.CancerImmunolImmunother.52,347—58(2003).Mougin，Bernard,Lab,"BiologyofpapillomavirusIIinfections.Theirroleinthecarcinogenesisofthecervix,"Ann.Biol.Clin.(Paris),56(1):21-8，1998.Mumby和Walter,"ProteinphosphatasesandDNAtumorviruses:transformationthroughthebackdoor"CellRegul.，2(8):589-598，1991.MunzC，SteinmanRM，FujiiS.Dendriticcellmaturationbyinnatelymphocytes:coordinatedstimulationofinnateandadaptiveimmunity.JExpMed.Jul18;202(2):203-7，2005.Murakami,T.等人Antitumoreffectofintratumoraladministrationofbonemarrow—deriveddendriticcellstransducedwithwild-typep53gene.CIinCancerRes.10，3871—80(2004).Muzyczka，"UseofAdeno-AssociatedVirusasaGeneralTransductionVectorforMammalianCells，"Curr.Top.Microbiol.Immunol.,158:97-129，1992.Natoli，Costanzo，Guido，Moretti，Levrero，Apoptotic，non-apoptotic,andanti-apoptoticpathwaysoftumornecrosisfactorsignalling,"Biochem.Pharmacol.,56(8):915-920，1998.Nicolas和Rubinstein，"Retroviralvectors,"In:Vectors:Asurveyofmolecularcloningvectorsandtheiruses,RodriguezandDenhardt(eds.)，Stoneham:Butterworth,第494-513頁，1988.Nicolau和Sene，"Liposome-mediatedDNAtransferineukaryoticcells,"Biochera.Biophys.Acta,721:185-190，1982.Nijman等人，"p53，apotentialtargetfortumor-directedTcells,"Immunol.Letters,40:171-178，1994.Nikitina,E.Y.等人Aneffectiveimmunizationandcancertreatmentwithactivateddendriticcellstransducedwithfull-lengthwild-typep53.GeneTherapy.9，345-352(2002).Nikitina,E.Y.等人Dendriticcellstransducedwithfull-lengthwild-typep53generateantitumorcytotoxicTlymphocytesfromperipheralbloodofcancerpatients.ClinCancerRes.7，127-35.(2001).Nikitina,E.Y.等人DendriticCellsTransducedwithFull—LengthWild-Typep53GenerateAntitumorCytotoxicTLymphocytesfromPeripheralBloodofCancerPatients.ClinCancerRes.7，127-135(2001).Nociari等人，"Anovelone-step,highlysensitivefluorometricassaytoevaluateeell-mediatedcytotoxicity,"J.Immunol.Methods,213(2):157-167，1998.Noguchi,Y.，Chen,Y.&Old,L.Amousemutantp53productrecognizedbyCD4+andCD8+Tcells.Proc.Natl.Acad.Sci.USA.91，3171-3175(1994).Ochi，Hasuoka，Mizushima，Matsumura，Harada，"Acaseofsmallpancreaticcancerdiagnosedbyserialfollow-upstudiespromptlybyapositiveK-raspointmutationinpurepancreaticjuice,"Am.J.Gastroenterol.,93(8):1366-1368，1998.Ohara，"Radiotherapy:asignificanttreatmentoptioninmanagementofprostaticcancer,"Gan.To.Kagaku.Ryoho.，25(6):823-8，1998.0hi,Dixit,Ti1lery，和Plonk，"Constructionandreplicationofanadeno-associatedvirusexpressionvectorthatcontainshuman.lambda.-globinc腿，"Gene,89L:279-282，1990.Oldstone等人，"AcommonantiviralcytotoxicT-lymphocyteepitopefordiversemajorhistocompatibilitycomplexhaplotypes:implicationsforvaccination,11Proc.Natl.Acad.Sci.USA,89:2752-2755，1992.0no，Hirose,Miyazaki，Yamamoto，Mats認oto，"Transgenicmedakafishbearingthemousetyrosinasegene:expressionandtransmissionofthetransgenefollowingelectroporationoftheorange-coloredvariant,11PigmentCellRes.，10(3):168-175，1997.Page等人，"Anonisotopicmethodforthemeausrementofeel1membraneintegrity,"AnticancerRes.,18(4A):2313-2316，1998.Parajuli,P.等人Immunizationwithwild-typep53genesequencescoadministeredwithFlt3ligandinducesanantigen—specifictype1T-cellresponse.CancerRes.61，8227-34(2001).Paskind等人，"Dependenceofmoloneymurineleukemiavirusproductiononcellgrowth,"Virology,67:242-248，1975.Pelletier和Sonenberg，Nature,334:320-325，1988.Perales等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,91:4086-4090,1994.Philpott,N.J.，Nociari，M.，Elkon,LB.&Falck-Pedersen，E.Adenovirus-inducedmaturationofdendriticcellsthroughaPI3kinase-mediatedTNF-alphainductionpathway.ProcNatlAcadSciUSA.101，6200-5(2004).Pietras，Pegram，Finn,Maneval,Slamon，"RemissionofhumanbreastcancerxenograftsontherapywithhumanizedmonoclonalantibodytoHER-2receptorandDNA-reactivedrugs,"Oncogene,17(17):2235-49，1998.Pinto-Sietsma和Paul,"Transgenicratsasmodelsforhypertension,"J.Hum.Hypertens.，11(9):577-581,1997.Pisarev，V.等人Full-LengthDominant-NegativeSurvivinforCancerImmunotherapy.ClinCancerRes.15，6523-6533(2003).Porgador等人，"IntranasalimmunizationwithcytotoxicT-lymphocyteepitopepeptideandmucosaladjuvantcholeratoxin:selectiveaugmentationofpeptide-presentingdendriticcellsinnasalmucosa—associatedlymphoidtissue,"Infect.Immun.，66(12):5876-5881，1998.Potter等人，"Enhancer-dependentexpressionofhumankimmunoglobulingenesintroducedintomousepre-Blymphocytesbyelectroporation，"Proc.Nat'1Acad.Sci.USA,81:7161-7165，1984.Qin，Tao，Dergay，Moy，Fawell，Davis,Wilson,Barsoum，"Interferon-betagenetherapyinhibitstumorformationandcausesregressionofestablishedtumorsini腿une-deficientmice,"Proc.Natl.Acad.Sci.USA，95(24):1411-6，1998.Racher等人，BiotechnologyTechniques,9:169-174，1995.Ragot等人，"Efficientadenovirus-mediatedtransferofahumanminidystrophingenetoskeletalmuscleofmdxmice,'1Nature,361:647-650，1993.Renan，"Cancergenes:currentstatus,futureprospects,andapplicantsinradiotherapy/oncology,"Radiother.Oncol.，19:197-218，1990.Rich等人,"Developmentandanalysisofrecombinantadenovirusesforgenetherapyofcysticfibrosis,'1H亂GeneTher.，4:461-476，1993.Ridgeway，"Mammalianexpressionvectors,"In:RodriguezRL，DenhardtDT，ed.Vectors:Asurveyofmolecularcloningvectorsandtheiruses.Stoneham:BuUerworth,第467-492頁，1988.Rippe等人，"DNA-mediatedgenetransferintoadultrathepatocytesinprimaryculture,'1Mol.CellBiol.，10:689-695,1990.Ropke等人，"SpontaneoushumansquamouscellcarcinomasarekilledbyahumancytotoxicTlymphocyteclonerecognizingawild-typep53-derivedpeptide,"Proc.Natl.Acad.Sci.USA,93:14704-14707，1996.Rosenberg,S.A.，Yang，J.C.&Restifo，N.P.Cancerimmunotherapy:movingbeyondcurrentvaccines.NatMed.10，909-15(2004).Rosenfeld等人，"Adenovirus-mediatedtransferofarecombinantal-antitrypsingenetothelungepitheliumw>o，11Science,252:431-434，1991.Rosenfeld等人,"w><9transferofthehumancysticfibrosistransmembraneconductanceregulatorgenetotheairwayepitheli畫，"Cell,68:143-155，1992.Roth，J.A.&Cristiano,R.J.Genetherapyforcancer:whathavewedoneandwherearewegoingJ.Natl.CancerInst.89，21-39(1997).Roux等人，"Aversatileandpotentiallygeneralapproachtothetargetingofspecificcelltypesbyretroviruses:ApplicationtotheinfectionofhumancellsbymeansofmajorhistocompatibilitycomplexclassIandclassIIantigensbymouseecotropicmurineleukemiavirus-derivedviruses,"Proc.Natl.Acad.Sci.USA,86:9079—9083，1989.Samulski,Chang，Shenk，"Helper—freestocksofrecombinantadeno-associatedviruses:Normalintegrationdoesnotrequireviralgeneexpression,"J.Virol.，63:3822-3828，1989.Samulski,Zhu，Xiao,Brook,Housman，Epstein,Hunter,"Targetedintegrationofadeno-associatedvirus(AAV)intohumanchromosome19，"EMBOJ.，10:3941-3950，1991.Sandler,A.B.Irinotecaninsmall—celllungcancer:theUSexperience.Oncology(Huntingt).15，11-2(2001).Santerre，等人，Gene，30:147，1984Saurwein-Teissl等人，"Wholevirusinfluenzavaccineactivatesdendriticcells(DC)andstimulatescytokineproductionbyperipheralbloodmononuclearcells(PBMC)whilesubunitvaccinessupportTcellproliferation,"Clin.Exp.Immunol.,114(2):271-276，1998.Schumacher,L.等人Humandendriticcellmaturationbyadenovirustransductionenhancestumorantigen-specificT-cel1responses.JImm畫ther.27，19卜200(2004)，Shelling和Smith,"Targetedintegrationoftransfectedandinfectedadeno-associatedvirusvectorscontainingtheneomycinresistancegene,11GeneTherapy,1:165—169，1994.Simpson等人，"ConsequencesofFas-ligandandperforinexpressionbycolonTcellsinamousemodelofinflammatoryboweldisease,"Gastroenterology,115(4):849-855，1998.Sirianni，N.等人Effectofhumanpapi1lomavirus-16infectiononCD8+T-cellrecognitionofawild-typesequencep53264-272peptideinpatientswithsquamouscellcarcinomaoftheheadandneck.ClinCancerRes.10，6929-37(2004).Soddu和Sacchi，"p53:prospectsforcancergenetherapy,"CytokinesCellMol.Ther.,4(3):177-185，1998.Solyanik，Berezetskaya，Bulkiewicz，Kulik,"Differentgrowthpatternsofacancercellpopulationasafunctionofitsstartinggrowthcharacteristics:analysisbymathematicalmodelling,"CellProlif.，28(5):263-278，1995.Sonderbye等人，'172>oand//27/modulationofimmunestimulatorycapacityofprimarydendriticcellsbyadenovirus-mediatedgenetransduction,"Exp.Clin.I,nogenet.，15(2):100-111，1998.Steinman，"Thedendriticcellsystemanditsroleinimmunogenecity，"Annu.Rev.Immunol.,9:271—296，1991.Stokke，Smedshammer，Jonassen，Blomhoff，Skarstad，Steen，"UncouplingoftheorderoftheSandMphases:effectsofstaurosporineonhumancellcyclekinases,"CellProlif.，30(5):197-218,1997.Stratford-Perricaudet和Perricaudet,"Genetransferintoanimals:thepromiseofadenovirus,"In:HumanGeneTransfer,Eds,0.Cohen-HaguenauerandM.Boiron，EditionsJohnLibbeyEurotext,France,第51-61頁，1991.Stratford-Perricaudet等人，"Evaluationofthetransferandexpressioninmiceofanenzyme-encodinggeneusingahumanadenovirusvector,"Hum.GeneTher.，1:241-256，1990.Svane，I.M.等人Vaccinationwithp53-peptide-pulseddendriticcells,ofpatientswithadvancedbreastcancer:reportfromaphaseIstudy.CancerImmunolImmunother.53，633—41(2004).Temin，"Retrovirusvectorsforgenetransfer:EfficientintegrationintoandexpressionofexogenousDMinvertebratecellgenome,"In:GeneTransfer，Kucherlapati(ed.)，NewYork,PlenumPress,第149-188頁，1986.Theobald等人，"Targetingp53asageneraltumorantigen,"Proc.Natl.Acad.Sci.USA，92:11993011997，1995.Theobald,M.等人Thesequencealterationassociatedwithamutationalhotspotinp53protectscellsfromlysisbycytotoxicTlymphocytesspecificforaflankingpeptideepitope.JExpMed.188,1017-28(1998).ThomasP，等人"PhaseIItrialofpaclitaxelandcarboplatininmetastaticsmall-celllungcancer:aGroupeFrancaisdePneumo-Cancerologiestudy."JClinOncol.，19(5):1320-5，2001.Thomson,S.A，等人MinimalepitopesexpressedinarecombinantpolyepitopeproteinareprocessedandpresentedtoCD8+cytotoxicTcells:implicationsforvaccinedesign.Proc.Natl.Acad.Sci.USA.92，5845-5849(1995).Top等人，"Immunizationwithlivetypes7and4adenovirusvaccines.II.Antibodyresponseandprotectiveeffectagainstacuterespiratorydiseaseduetoadenovirustype7，"J.Infect.Dis.，124:155-160，1971.Tratschin，Miller,Smith,Carter,"Adeno-associatedvirusvectorforhigh-frequencyintegration,expressionandrescueofgenesinmamma1ianeel1s，"Mol.Cell.Biol.，5:32581-3260，1985.Tratschin,West,Sandbank,Carter,"Ahumanparvovirus,adeno—associatedvirus,asaeucaryoticvector:transientexpressionandencapsidationoftheprocaryoticgeneforchloramphenicolacetyltransferase,"Mol.Cell.Biol.，4:2072-2081，1984.Tur-Kaspa等人，"Useofelectroporationtointroducebiologicallyactiveforeigngenesintoprimaryrathepatocytes，"Mol.CellBiol.，6:716-718，1986.VanCott，Lubon，Russell,Butler,Gwazdauskas,-Knight，Drohan，Velander，"PhenotypicandgenotypicstabilityofmultiplelinesoftransgenicpigsexpressingrecombinanthumanproteinC，"TransgenicRes.，6(3):203-212，1997.vanderBurg,S.H.等人Inductionofp53-specificimmuneresponsesincolorectalcancerpatientsreceivingarecombinantALVAC-p53candidatevaccine.CIinCancerRes.8，1019-27(2002).vanderBurg,S.H.等人MagnitudeandpolarizationofP53-specificT-helperimmunityinconnectiontoleukocyteinfiltrationofcolorectaltumors.IntJCancer.107，425—33(2003).Vierboom，M.P.M.等人Tumoreradicationbywild-typep53-specificcytotoxicTlymphocytes.J.Exper.Med.186，695-704(1997).Vierboom，M.P.M.，Gabrilovich，D.I.，0ffringa，R.，Kast，W.M.&Melief，C.J.M.p53:atargetforT-cellmediatedimmunotherapy,inPeptide-basedCancerVaccines(ed.Kast，W.M.)40—55(LandesBioscience,2000).Vogelstein和Kinzler，"p53functionanddysfunction,"Cell:70(4):523-526,1992.Wagner等人，Science,260:1510-1513，1990.Wahlstrom等人，Mol.Endrocrinol.，6:1013-1022，1992.Walsh,Nienhuis，Samulski，Brown,Miller,Young,Liu，"PhenotypiccorrectionofFanconianemiainhumanhematopoieticcellswitharecombinantadeno-associatedvirusvector,"Proc.Natl.Acad.Sci.USA,89:7257-7261，1994;J.Clin.Invest.,94:1440-1448,1994.Wan，Y.，Bramson，J.,Carter,R.，Graham,F.&Gauldie，J.Dendriticcellstransducedwithanadenoviralvectorencodingamodeltumor-associatedantigenfortumorvaccination.HumanGeneTherapy.8，1355-1363(1997).Watanabe,M.，Shirayoshi,Y.，Koshimizu，U.，Hashimoto,S.，Yonehara，S.，Eguchi，Y.，Tsujiraoto,Y.andNakatsuji，N.，"Genetransfectionofmouseprimordialgermcells//7andanalysisoftheirsurvivalandgrowthcontrol,"Exp.CellRes.230:76-83，1997.Wei，Wei，Samulski，Barranger,"ExpressionofthehumanglucocerebrosidaseandarylsulfataseAgenesinmurineandpatientprimaryfibroblaststransducedbyanadeno-associatedvirusvector,"GeneTherapy,1:261-268，1994.Wheeler,C.J.，Das,A.，Liu，G.，Yu，J.S.&Black,K.L.Clinicalresponsivenessofglioblastomamultiformetochemotherapyaftervaccination.ClinCancerRes.10，5316—26(2004).Wong等人，"Appearanceof.beta.-lactamaseactivityinanimalcellsuponliposomemediatedgenetransfer,"Gene,10:87-94，1980.Wu和Wu，"EvidencefortargetedgenedeliverytoHepG2hepatomacells/刀"."o，"Biochemistry,27:887-892，1988.Wu和Wu，"Receptor-mediated//7genetransfectionsbyasolubleDNAcarriersystem,"J.Biol.Chem.，262:4429-4432，1987.Wu和Wu，Adv.DrugDeliveryRev.，12:159—167，1993.Yang等人，"F2>oand//77"rogenetransfertomammaliansomaticcellsbyparticlebombardment,"Proc.Nat'1Acad.Sci.USA，87:9568-9572，1990.Yang，Chen，Trempe，"Characterizationofcelllinesthatinduciblyexpresstheadeno-associatedvirusRepproteins,"J.Virol.，68:4847-4856，1994.Yanuck，Carbone，Pendleton,Tsukui，Winter,Minna,Berzofsky，"Amutantp53tumorsuppressorproteinisatargetforpeptide-inducedCD8+cytotoxlcT—cells,CancerRes.，53(14):3257-61，1993.Yanuck，M.等人Mutantp53tumorsuppressorproteinisatargetforpeptide-inducedCD8+cytotoxicT-cells.Cancerresearch.53,3257-3261(1993).Yeom，Fuhrmann，0vitt，Brehm，Ohbo，Gross,Huibner，Scholer"GermlineregulatoryelementofOct—4specificfortotipotentcycleofembryonalcells,"Development,122:881-894，1996.Yoder，Kang，Zhou,Luo,Srivastava，genetransferinmurinehematopoieticreconstitutingstemcellsmediatedbytheadeno-associatedvirus2-basedvectors,'1Blood,82(Supp.):1:347A，1994.Zhou，Broxmyer，Cooper,Harrington,Srivastava,"Adeno-associatedvirus2mediatedgenetransferinmurinehematopoieticcells,Exp.Hematol.(NY)，21:928-933，1993.Zhou，Cooper,Kang，Ruggieri，Heimfeld，Srivastava,Broxmeyer,"Adeno-associatedvirus2—mediatedhighefficiencygenetransferintoimmatureandmaturesubsetsofhematopoieticprogenitorcellsinhumanumbi1icalcordblood,"J.Exp.Med.，179:1867-1875,1994.Zwaveling，S.等人Antitumorefficacyofwild-typep53-specificCD4(+)T-helpercells.CancerRes.62，6187-93(2002).儘管本發明及其優點已得到詳細描述，但應當理解無需背離權利要求限定的本發明的精神和範圍即可在本文中進行各種變化、替代和改變。此外，本申請的範圍不希望限制於說明書中描述的過程、機器、製備、物質組合物、手段、方法和步驟的具體實施方案。如本領域普通技術人員由於本發明的公開內容將容易理解的，基本上執行相同的功能或達到基本上與本文所述相應實施方案相同結果的目前存在或以後開發的過程、機器、製備、物質組合物、手段、方法或步驟可以根據本發明使用。因此，權利要求預期在其範圍內包括此類過程、機器、製備、物質組合物、手段、方法或步驟。權利要求1.一種給予或恢復受試者中一種或多種治療抗性過度增殖細胞的敏感性的方法，其中所述過度增殖細胞的特徵在於自身基因產物的改變或增加表達，所述方法包括給所述受試者提供表達所述自身基因產物的樹突細胞。2.權利要求1的方法，其中所述治療抗性過度增殖細胞進一步定義為對藥物、放射或兩者有抗性。3.權利要求1的方法，其中所述治療抗性過度增殖細胞進一步定義為對千擾素、白介素、抗體、抑制劑、其混合物或其組合有抗性。4.權利要求3的方法，其中所述抗體進一步定義為單克隆抗體。5.權利要求4的方法，其中所述單克隆抗體進一步定義為針對Her-2/羅的單克隆抗體。6.權利要求5的方法，其中所述針對Her-2/neu的單克隆抗體是曲妥單抗。7.權利要求4的方法，其中所述單克隆抗體進一步定義為針對VEGF的單克隆抗體。8.權利要求7的方法，其中所述針對VEGF的抗體進一步定義為Avastin。9.權利要求3的方法，其中所述抑制劑進一步定義為VEGF抑制劑。10.權利要求2的方法，其中所述藥物包括泰素、託泊替康、順鉑、卡鉑、阿黴素、環磷醯胺、或泰索帝。11.權利要求2的方法，其中所述藥物是烷化劑。12.權利要求11的方法，其中所述烷化劑是白消安、順鉑、或異磷醯胺。13.權利要求2的方法，其中所述藥物是蒽環類藥物。14.權利要求13的方法，其中所述蒽環類藥物是多柔比星或表柔比星。15.權利要求2的方法，其中所述藥物是抗代謝物。16.權利要求15的方法，其中所述抗代謝物是氟尿嗜啶或氨曱蝶呤。17.權利要求2的方法，其中所述藥物是拓樸異構酶抑制劑。18.權利要求17的方法，其中所述拓樸異構酶抑制劑是博來黴素、依託泊苷、或吉西他濱。19.權利要求2的方法，其中所述藥物是微管抑制劑。20.權利要求19的方法，其中所述微管抑制劑是紫杉醇或長春鹼。21.權利要求2的方法，其中所述藥物是單克隆抗體。22.權利要求21的方法，其中所述單克隆抗體是曲妥單抗、貝伐單抗、曱磺酸伊馬替尼、吉非替尼或埃洛替尼。23.權利要求1的方法，其進一步包括給所述受試者施用另外療法。24.權利要求23的方法，其中所述另外療法包含藥物、金屬、放射、手術、基因療法、免疫療法、激素療法、或其組合。25.權利要求23的方法，其中所述另外療法包含化學療法。26.權利要求25的方法，其中所述化學療法包含上調p53、Fas、死亡受體或其組合表達的組合物。27.權利要求23的方法，其中所述樹突細胞和所述另外療法同時或依次地提供給所述受試者。28.權利要求27的方法，其中所述樹突細胞在所述進一步療法之前提供給所述受試者。29.權利要求28的方法，其中所述另外療法在提供所述樹突細胞給所述受試者的約1至12個月內提供給所述受試者。30.權利要求23的方法，其中所述樹突細胞和所述另外療法提供超過一次。31.權利要求30的方法，其中所述樹突細胞和所述另外療法循環提供。32.權利要求23的方法，其中所述樹突細胞在所述另外療法之後提供給所述受試者。33.權利要求32的方法，其中所述樹突細胞在提供所述進一步療法給所述受試者的約1至2個月內提供給所述受試者。34.權利要求l的方法，其中提供包括施用由表達所述自身基因產物的表達構建體轉化的樹突細胞。35.權利要求l的方法，其中提供包括給所述受試者中的樹突細胞施用表達所述自身基因產物的表達構建體。36.權利要求35的方法，其中所述表達構建體包含腺病毒載體。37.權利要求35的方法，其中所述自身基因產物包含p53。38.權利要求35的方法，其中所述自身基因產物包含腫瘤抑制物或原癌基因產物。39.權利要求35的方法，其中所述自身基因產物進一步定義為在癌細胞中上調的基因產物。40.權利要求35的方法，其中所述自身基因產物包含存活素(survivin)、Her2/neu、CEA、ras、TERT、NY-ES0、PSA、CEA、MART、MAGE1、MAGE3、gp100、BAGE、GAGE、TRP-1、TRP-2、或PMSA。41.權利要求l的方法，其中所述過度增殖細胞是癌細胞。42.權利要求41的方法，其中所述癌細胞是轉移癌細胞。43.權利要求1的方法，其中所述過度增殖細胞是小細胞肺癌細胞。44.權利要求l的方法，其中所述過度增殖細胞是來自肺癌、乳腺癌、結腸癌、黑素瘤、肝癌、腦癌、前列腺癌、腎癌、肉瘤、胰腺癌、、淋巴瘤或白血病的細月包。45.權利要求l的方法，其進一步包括給所述受試者遞送增強表達所述自身基因產物的所述樹突細胞活性的試劑。46.權利要求45的方法，其中所述試劑包含抗體。47.權利要求45的方法，其中所述試劑包含單克隆抗體。48.權利要求45的方法，其中所述試劑包含CD40抗體。49.權利要求45的方法，其中表達所述自身基因產物的所述樹突細胞和所述試劑包含在同一組合物中。50.權利要求45的方法，其中表達所述自身基因產物的所述樹突細胞和所述試劑包含在分開的組合物中。51.權利要求50的方法，其中表達所述自身基因產物的所述樹突細胞和所述試劑同時給所述受試者遞送。52.權利要求50的方法，其中表達所述自身基因產物的所述樹突細胞在所述試劑遞送給所述受試者之前遞送給所述受試者。53.權利要求50的方法，其中表達所述自身基因產物的所述樹突細胞在所述試劑遞送給所述受試者之後遞送給所述受試者。54.權利要求l的方法，其中所述受試者先前已用化學療法、放射或兩者治療。55.權利要求l的方法，其進一步包括測定來自所述受試者的樣品中的所述過度增殖細胞的步驟。56.^又利要求55的方法，其中所述樣品包含活檢樣品、血液、尿、頰刮屑、唾液、腦脊液、糞便、乳頭抽吸液、或其組合。57.權利要求55的方法，其進一步定義為測定所述樣品的治療抗性標記。58.權利要求57的方法，其中所述治療抗性標記包含一種或多種所述過度增殖細胞的多核苷酸中的突變。59.—種治療受試者中的一種或多種過度增殖細胞的方法，其中所述一種或多種過度增殖細胞對用於所述過度增殖細胞的臨床公認療法有抗性，或其中所述一種或多種過度增殖細胞在暴露於用於所述過度增殖細胞的臨床公認療法後將變得有抗性，並且其中所述過度增殖細胞的特徵在於自身基因產物的改變或增加表達，所述方法包括給所述受試者提供表達所述自身基因產物的樹突細胞。60.權利要求59的方法，其中在暴露於所述臨床公認療法後將變得有抗性的所述過度增殖細胞包含具有與所述抗性有關的一種或多種突變的多核苷酸。61.權利要求59的方法，其進一步包括給所述受試者遞送增強表達所述自身基因產物的所述樹突細胞活性的試劑。62.—種治療或預防治療抗性過度增殖細胞發生的方法，其中所述過度增殖細胞的特徵在於自身基因產物的改變或增加表達，所述方法包括給所述受試者提供表達所述自身基因產物的樹突細胞。全文摘要本發明涉及用於治療人中的過度增殖性疾病的免疫治療方法，特別是對治療抗拒的過度增殖性疾病。更具體而言，在一個實施方案中本發明涉及用於治療具有過度增殖性疾病的受試者的方法，在所述過度增殖性疾病中自身基因的表達在治療抗性的過度增殖細胞中是上調的。在另一實施方案中，給治療抗性過度增殖細胞施用包含自身基因的腺病毒表達構建體，所述自身基因在真核細胞中可操作的啟動子的控制下。本發明因此提供了通過減弱針對過度增殖細胞或過量表達例如突變型p53抗原的天然免疫系統的CTL應答用於治療治療抗性過度增殖性疾病的免疫療法。文檔編號A61K39/00GK101291687SQ200680025576公開日2008年10月22日申請日期2006年5月12日優先權日2005年5月12日發明者D·I·伽布裡洛維馳,K·B·米安德,S·安東尼婭,S·查達申請人:因特羅根治療公司;南佛羅裡達大學