用於輔助和新輔助療法以及早期腫瘤的治療的vegf特異性拮抗劑的製作方法

2023-10-06 04:37:14

專利名稱：用於輔助和新輔助療法以及早期腫瘤的治療的vegf特異性拮抗劑的製作方法
用於輔助和新輔助療法以及早期腫瘤的治療的VEGF特異性拮抗劑
背景技術：
癌是對人類健康最致命的威脅之一。僅在美國，癌每年侵襲近130萬名新患者並且是次於心血管疾病的死亡的第二大主要原因，佔死亡的約4分之I。實體瘤是造成大多數這類死亡的原因。儘管在某些癌的醫學治療上有了顯著的進步，但在過去的20年中，所有癌的總的5年存活率僅提高了約10%。癌或者惡性腫瘤以不受控制的方式轉移並迅速生長，使得及時的檢測和治療變得非常困難。癌治療的現行方法是相對非選擇性的並通常在癌已經發展至更加惡性的階段後靶向腫瘤。手術移除患病組織；放射療法收縮實體瘤；以及化學療法迅速殺死分裂細胞。尤其是化學療法引起了大量副作用，在某些實例中如此嚴重以致限制了可提供的劑量並因此阻礙了可能有效的藥物的使用。而且，癌常常對化學治療藥物產生耐藥性。為了阻止向惡性或轉移性狀態的發展，藉此減少與癌相關的發病率和死亡率，早期或良性腫瘤的治療是所需要的。對於大多數新近被診斷為患有可手術的癌的患者來說，標準的治療是確定性手術以及之後的化學療法。這種治療目的在於儘可能多的除去原發的和轉移的疾病以便預防復發並提高存活率。事實上，這些患者中的大多數在手術後都不具有殘留腫瘤的可見跡象。然而，他們中許多人後來會發生復發並最後死於他們的疾病。這是因為少量存活的腫瘤細胞在手術前變得轉移，逃過了手術並且由於現有的檢測技術的限制在手術後變得無法檢測而發生的。因此，為了在這些殘留的微轉移的癌細胞開始重新群體化並變得難以治療之前消除它們，手術後的輔助治療作為對手術的輔助工具而變得重要。在過去的幾十年中，輔助療法上的發展通常是集中於不同化學治療劑的使用而增加的。許多化學療法方案已經在輔助地治療患有早期主要癌適應症例如肺，乳腺和結腸直腸癌的患者中顯示出臨床益處。Strauss 等人.J Clin Oncol 22:7019(2004) ；International Adjuvant LungCancer Trial Collaboration Group (國際輔助肺癌試驗協作組)N Engl J Med 350:351-60(2004)。Moertel 等人.Ann Intern Med 122:321-6(1995) ；IMPACT Lancet 345:939-44(1995) ;Citron 等人.J Clin Oncol 21:1431-9 (2003)。儘管化學基礎的輔助療法有公認的益處，但與任何類型的化學療法都相關的一種主要缺陷是顯著的毒性。通常化學治療藥物並不靶向腫瘤部位，並且不能分辨正常細胞和腫瘤細胞。由於漫長的治療和其 對患者生活質量持久的影響，在輔助情況(setting)中的毒性問題是特別具有挑戰性的。而且，在具有較低復發風險的患者中輔助化學療法的益處還不清楚，使得對於他們來說是否值得忍受化學療法的副作用變得有疑問。—種在主要的確定性手術之前提供的輔助療法即新輔助療法已經作為癌療法的另一個重要部分出現。在確定性手術之前提供新輔助治療有幾個優點。第一，由於腫瘤體積、腹水和胸腔積液的減少，它可以幫助改善患者在手術前的體力狀態。第二，腫瘤體積的減小可使得手術範圍變小因此保護患者的器官和其功能。這對於例如乳腺癌患者來說是特別有價值的。腫瘤體積的減小還可使本來不能手術的腫瘤能夠手術。最後，新輔助療法可提高通過手術完全除去腫瘤的機率，由此提高存活率。在過去的十年間，已有許多對使用不同化學治療劑和或放射以治療患有例如乳腺癌、頭頸癌、直腸癌、膀胱癌、非小細胞肺癌、子宮頸癌、食道和胃癌以及前列腺癌的癌患者的新輔助療法的臨床試驗。綜述參見Tanvetyanon等人，Southern Med.J.98:338-344(2005)。如上文所講，與任何類型的化學療法都有關的一種主要的缺陷是顯著的毒性。許多新輔助化學療法方案是麻煩的，需要在很長的一段時間內頻繁的治療。而且，在具有較低復發風險的患者中新輔助化學療法的益處，尤其是存活率益處還不清楚，使得對於他們來說是否值得等待而不是立即手術變得有疑問。血管生成是重要的細胞事件，其中血管內皮細胞增殖、修剪(prune)並重組以從現存的血管網絡形成新的血管。令人矚目的證據是對於正常的和病理學的增殖過程來說血管聯結(vascular supply)的發育是必須的。氧和養分的傳遞以及分解代謝產物的去除代表了多細胞生物體中發生的大部分生長過程中的限速步驟。儘管新血管的引入被認為是腫瘤血管生成的主要方式，但近來的數據已表明有些腫瘤可通過借用(co-opting)現有的宿主血管生長。之後被借用的血管系統退化，導致腫瘤退化，其最終被在腫瘤邊緣的缺氧誘導的血管生成所逆轉。正常和非正常的血管生成的關鍵的正向調節物之一是血管內皮生長因子(VEGF) -A0 VEGF-A 是包括 VEGF-B、VEGF-C、VEGF-D、VEGF-E、VEGF-F 和 PlGF 的基因家族的一部分。VEGF-A主要與兩個高親和力的受體酪氨酸激酶VEGFR-1 (Flt-1)和VEGFR-2 (Flk-1/KDR)結合，後者是VEGF-A的血管內皮細胞促有絲分裂信號的主要遞質。此外，神經氈蛋白-1已被確認為肝素結合 的VEGF-A同種型的受體並可在血管發育中起作用。除了是血管生成因子外，VEGF作為多效的生長因子在其他生理過程例如內皮細胞存活和增殖、血管通透性和血管舒張、單核細胞趨化性和鈣內流中表現出多種生物效應。而且其他研究已經報導了 VEGF對少數非內皮細胞類型例如視網膜色素上皮細胞、胰管細胞和施萬氏細胞(Schwann cell)的促有絲分裂作用。對於VEGF作為病理狀態中血管生成的主要調節物的認可已引起了對在涉及病理血管生成的狀態中阻斷VEGF活性的許多嘗試。在大多數惡性腫瘤中VEGF表達被上調並且VEGF的過表達與許多實體瘤中更晚期的階段或與更差的預後相關。因此，抑制VEGF信號通路的分子已被用於治療其中病理血管生成顯著的相對晚期的實體瘤。儘管有證據暗示VEGF在涉及病理血管生成的疾患或者疾病(包括晚期和轉移性或擴散性腫瘤)的發展中的作用，但是關於VEGF在早期或良性癌、休眠之後腫瘤的復發中或者在來自休眠腫瘤、惡性腫瘤或微轉移(micrometastase)的繼發部位的腫瘤的發展中的作用了解得少。如依據下列公開內容的綜述明顯的，本發明解決了這些和其他需求。發明概述與化學療法相結合的VEGF特異性拮抗劑的使用已表現出對患有轉移性結腸直腸癌和非小細胞肺癌以及其他癌的患者是有益的，但關於VEGF特異性拮抗劑療法對良性或早期腫瘤；休眠、手術或其他幹預後腫瘤的復發；來自休眠腫瘤、惡性腫瘤或微轉移的繼發性部位腫瘤的發展；或在輔助或新輔助情況中的影響知之甚少。本文中我們提供了證明VEGF特異性拮抗劑可被用於早期腫瘤包括良性的、癌前的、非轉移性的和可手術的腫瘤的治療的結果。所述結果進一步證明了 VEGF特異性拮抗劑可被用於癌(例如良性或惡性癌)的新輔助療法或用於預防和/或減小癌復發(例如良性或惡性癌)的可能性，包括輔助療法的方法。本發明構成了為患有癌包括良性的、早期和可手術的癌的患者提供(手術前和手術後)更有效的、毒性更小的護理的重大醫療突破。因此，本發明以治療受治療者中良性的、癌前的或非轉移性的癌的方法為特徵，所述方法包括對受治療者施用有效量的VEGF特異性拮抗劑。在某些實施方案中，VEGF特異性拮抗劑的施用預防了良性的、癌前的或非轉移性的癌變成擴散性或轉移性癌。例如，良性的、癌前的或非轉移性的癌可是O期、I期或II期癌，而在某些實施方案中，VEGF特異性拮抗劑的施用預防了良性 的、癌前的或非轉移性的癌發展為下一期例如I期、II期、III期或IV期癌。在某些實施方案中，將VEGF特異性拮抗劑以足夠治療受治療者中良性的、癌前的或非轉移性的腫瘤或預防良性的、癌前的或非轉移性的腫瘤變成擴散性或轉移性癌的量和時間施用。在某些實施方案中，施用VEGF特異性拮抗劑減小了良性的、癌前的或非轉移性的腫瘤的腫瘤大小、腫瘤負荷或腫瘤數目。還可以將VEGF特異性拮抗劑以降低良性的、癌前的或非轉移性的腫瘤中的血管密度的量和時間施用。如本文所述的，本發明的方法可被用於治療例如O期(諸如原位癌)、I期或II期癌。新輔助和輔助療法的方法可被用於治療任何類型的癌例如良性的或惡性的。在本發明的某些實施方案中，所述癌是上皮細胞實體瘤，包括但不限於胃腸癌、結腸癌、乳腺癌、前列腺癌、腎癌、肺癌(例如非小細胞肺癌)、黑素瘤、卵巢癌、胰腺癌、頭頸癌、肝癌和軟組織癌(例如，B細胞淋巴瘤諸如NHL和多發性骨髓瘤以及白血病諸如慢性淋巴細胞性白血病)。在另一個實施方案中，所述良性的、癌前的或非轉移性的腫瘤是息肉、腺瘤、纖維瘤、脂肪瘤、胃泌素瘤、胰島素瘤、軟骨瘤、骨瘤、血管瘤、淋巴管瘤、腦脊膜瘤、平滑肌瘤、橫紋肌瘤、鱗狀細胞乳頭狀瘤、聽神經瘤、神經纖維瘤、膽管囊腺瘤(cystanoma)、平滑肌瘤、間皮瘤、畸胎瘤、粘液瘤、沙眼、肉芽瘤、錯構瘤、移行細胞乳頭狀瘤、唾液腺的多形性腺瘤、硬纖維瘤、皮樣囊乳頭狀瘤(dermoid cystpapilloma)、囊腺瘤、局灶性結節狀增生或結節狀再生性增生。在另一個實施方案中，所述方法被理想地用於治療腺瘤。腺瘤的非限制性實例包括肝細胞腺瘤、腎腺瘤、後腎腺瘤、支氣管腺瘤、肺泡腺瘤、腎上腺腺瘤、垂體腺瘤、甲狀旁腺腺瘤、胰腺腺瘤、唾液腺腺瘤、肝細胞腺瘤、胃腸腺瘤、管狀腺瘤和膽管腺瘤。本發明還以包括對受治療者施用有效量的VEGF特異性拮抗劑以在受治療者中預防良性的、癌前的或非轉移性的癌的發生或復發的方法為特徵。在本發明的某些實施方案中，受治療者處於患癌、息肉或癌症候群的危險。在一個實例中，受治療者具有癌、息肉或遺傳性癌症候群(例如I型多發性內分泌腺瘤(MENl))的家族史。在本發明的某些方面中，受治療者處於發展良性的、癌前的或非轉移性的胃腸腫瘤、硬纖維瘤或腺瘤(例如胃腸腺瘤、垂體腺瘤或胰腺腺瘤)的危險。在某些實施方案中，所述方法在從未患過腫瘤的受治療者、從未患過臨床可檢測的癌的受治療者、只患過良性腫瘤的受治療者中預防所述良性的、癌前的或非轉移性的癌的發生或復發。在另一個方面，本發明以治療受治療者中O期、I期或II期胃腸腫瘤的方法為特徵，該方法包括對受治療者以足夠治療受治療者中O期、I期或II期胃腸腫瘤的量和時間施用VEGF特異性拮抗劑。胃腸腫瘤可是胃腸系統的任何O期、I期或II期的癌，包括肛門癌、結腸直腸癌、直腸癌、食管癌、膽囊癌、胃癌、肝癌、胰腺癌和小腸癌。在一個實施方案中，胃腸腫瘤是O期(例如高級別腺瘤)或I期腫瘤。在一個實施方案中，受治療者之前沒有經歷過治療胃腸腫瘤的切除術。在另一個方面，本發明以治療處於發展胃腸腫瘤危險的受治療者的方法為特徵，該方法包括以足夠預防受治療者中胃腸腫瘤的發生或復發的量和時間對受治療者施用VEGF特異性拮抗劑。所述胃腸腫瘤可是任何胃腸腫瘤，包括但不限於腺瘤、一種或多種息肉或者O、I或II期癌。在上述方法的某些實施方案中，受治療者是超過50歲的人類，患有遺傳性癌症候群或有結腸癌或息肉的家族史。遺傳性胃腸癌症候群的非限制性實例包括家族性腺瘤性息肉病(FAP)、加德納症候群、胰腺癌和遺傳性非息肉病性結腸直腸癌(HNPCC)。在某些實施方案中，受治療者之前可已經歷或沒有經歷過結腸鏡檢查。在一個實施方案中，將VEGF特異性拮抗劑以減少患有FAP的受治療者中腺瘤性結腸直腸息肉的數目的量和時間施用。在另一個方面，本發明以預防或降低受治療者中癌復發的可能性的方法為特徵，該方法包括以足夠預防或降低受治療者中癌復發的可能性的量和時間對受治療者施用VEGF特異性拮抗劑。本發明包括預防患有腫瘤的受治療者中癌復發的方法，該方法包括去除腫瘤(例如使用確定性手術)和之後對受治療者施用VEGF特異性拮抗劑的步驟。本發明包括預防受治療者中腫瘤再生長的方法，該方法包括去除腫瘤(例如使用確定性手術)和之後對受治療者施用VEGF特異性拮抗劑的步驟。在相關方面，本發明包括預防受治療者中癌復發或降低受治療者中癌復發的可能性的方法，該方法任選地包括在手術之前對受治療者施用有效量的VEGF特異性拮抗劑，進行確定性手術，和在手術後施用有效量的VEGF特異性拮抗劑，其中手術後VEGF特異性拮抗劑的施用預防癌復發或降低癌復發的可能性。在另一個相關方面，本發明包括預防受治療者中癌復發或降低受治療者中癌復發的可能性的方法，該方法包括在不存在任何其它的抗癌治療劑的情況下對受治療者施用有效量的VEGF特異性拮抗劑，其中所述施用預防受治療者中癌復發或降低受治療者中癌復發的可能性。對於上文的每一個方面來說，腫瘤可是任何類型的腫瘤，包括但不限於本文描述的實體瘤，以及特別是腫瘤和腺瘤。受治療者可具有休眠腫瘤或微轉移，其可是或可不是臨床上可檢測的。 在這一方面的一個實施方案中，將VEGF特異性拮抗劑以足夠減少休眠腫瘤或微轉移的新血管形成的量和時間施用。在另一個實施方案中，將VEGF特異性拮抗劑以足夠預防臨床可檢測的腫瘤發生或其轉移或者增加受治療者生存持續時間的量和時間施用。在一個實施方案中，VEGF特異性拮抗劑是單一療法。在另一個實施方案中，受治療者之前已經治療過腫瘤，例如使用抗癌療法。在一個實例中，抗癌療法是手術。在另一個實施方案中，在施用VEGF特異性拮抗劑之前、之時(例如同時地)或之後用其它的抗癌療法進一步治療受治療者。抗癌療法的實例包括但不限於手術、放射療法(放射線療法)、生物療法、免疫療法、化學療法或這些療法的組合。在受治療者已經經歷過確定性手術的實施方案中，通常在受治療者已經從手術復原一段時間後施用VEGF特異性拮抗劑。這段時間可包括傷口癒合或手術切口癒合所需要的時間段、降低傷口裂開風險所需要的時間段或受治療者恢復至與手術前的健康水平本質上相似或更好的健康水平所需要的時間段。確定性手術完成和VEGF特異性拮抗劑的首次施用之間的時間段還可包括藥物假期所需要的時間段，其中受治療者需要或要求在治療方案之間的一段時間。通常，確定性手術完成和VEGF特異性拮抗劑療法開始之間的時間段可包括少於一周、I周、2周、3周、4周(28天)、5周、6周、7周、8周、3個月、4個月、5個月、6個月、7個月、8個月、9個月、10個月、11個月、I年、2年、3年或更久。在一個實施方案中，確定性手術和施用VEGF特異性拮抗劑之間的時間段大於2周並小於I年。上述的每一個方面可進一步包括監測受治療者癌的復發。本發明還提供了在受治療者例如人類患者中手術去除可手術的癌之前的新輔助療法的方法，該方法包括對患者施用有效量的VEGF特異性拮抗劑例如貝伐單抗，其中患者已經被診斷為患有腫瘤或癌。VEGF特異性拮抗劑可單獨或與至少一種化學治療劑結合施用。本發明還包括治療患有可手術的癌的受治療者的方法，該方法包括在手術前對受治療者施用有效量的VEGF特異性拮抗劑並且之後進行手術，藉以切除癌。在一個實施方案中，所述方法進一步包括在手術後對受治療者施用有效量的VEGF特異性拮抗劑以預防癌復發的步驟。在另一個方面，本發明涉及新輔助療法的方法，該方法包括在確定性手術前對患有可手術的癌的受治療者施用有效量的VEGF特異性拮抗劑例如貝伐單抗，以及至少一種化學治療劑。所述方法可被用於延長受治療者的無病生存期(disease free survival,DFS)或總體生存期(overall survival, OS)。在一個實施方案中,在治療開始後約2至5年評估DFS或OS。在另一個方面，本發明包括減小具有不可切除的腫瘤的受治療者中腫瘤大小的方法，該方法包括對受治療者施用有效量的VEGF特異性拮抗劑，其中所述施用減小了腫瘤大小由此允許腫瘤的完全切除。在一個實施方案中，所述方法進一步包括在完全切除腫瘤後對受治療者施用有效量的VEGF特異性拮抗劑。在另一個方面，本發明涉及治療受治療者中癌的方法，該方法包括以下步驟:a)包括多個治療周期的第一階段，其中每個周期包括以預定的間隔對受治療者施用有效量的VEGF特異性拮抗劑例如貝伐單抗，以及至少一種化學治療劑；b)確定性手術，藉以去除癌；以及c)包括多個維持周期的第二階段，其中每個周期包括以預定的間隔對受治療者施用有效量的VEGF特異性拮抗劑例如貝伐單抗，但沒有任何化學治療劑。在一個實施方案中，第一階段包括第一個多個治療周期，其中施用VEGF特異性拮抗劑例如貝伐單抗以及第一化學療法方案，之後是第二個多個治療周期，其中施用VEGF特異性拮抗劑例如貝伐單抗以及第二化學療法方案。在一個實施方案中，如果待治療的癌是乳腺癌，那麼第一化學療法方案包括阿黴素和環磷醯胺而第二化學療法方案包括紫杉醇。本發明提供了包括在確定性手術後對患有轉移性或非轉移性的癌的受治療者施用有效量的VEGF特異性拮抗劑例如貝伐單抗的方法。在一個實施方案中，所述方法進一步包括至少一種化學治療劑的使用。所述方法可被用於延長受治療者的DFS或OS。在一個實施方案中，在治療開始後約2至5年評估DFS或OS。在一個實施方案中，受治療者在治療後至少I至5年是無病的。在一個方面，該方法包括 以下步驟:a)包括多個治療周期的第一階段，其中每個周期包括以預定的間隔對受治療者施用有效量的VEGF特異性拮抗劑例如貝伐單抗，以及至少一種化學治療劑；以及b)包括多個維持周期的第二階段，其中每個周期包括以預定的間隔對受治療者施用有效量的VEGF特異性拮抗劑例如貝伐單抗，但沒有任何化學治療劑；其中組合的第一和第二階段在最初的手術後治療後持續至少一年。在一個實施方案中，第一階段包括第一個多個治療周期，其中施用VEGF特異性拮抗劑例如貝伐單抗以及第一化學療法方案，之後是第二個多個治療周期，其中施用VEGF特異性拮抗劑例如貝伐單抗以及第二化學療法方案。如果待治療的癌是乳腺癌，那麼例如，第一化學療法方案包括阿黴素和環磷醯胺而第二化學療法方案包括紫杉醇。在上述每一個方面的某些實施方案中，VEGF特異性拮抗劑是與VEGF結合或者減少VEGF表達或生物活性的化合物。VEGF特異性拮抗劑可以是下列示例性化合物中的任何一個:與VEGF特異性結合的多肽、VEGF特異性核酶、VEGF特異性肽體(p印tibody)、與編碼VEGF多肽的核酸分子的至少一部分互補的反義核鹼基寡聚體、與編碼VEGF多肽的核酸分子的至少一部分互補的小RNA分子或適體。特異性結合VEGF的多肽可是可溶的VEGF受體蛋白或其VEGF結合片段或者是嵌合的VEGF受體蛋白例如Flt-1/Fc、KDR/Fc或Flt/KDR/Fe。特異性結合VEGF的多肽還可是抗VEGF抗體或其抗原結合片段。抗VEGF抗體或其抗原結合片段可是單克隆抗體、嵌合抗體、完全人類抗體或人源化抗體。在本發明的方法中有用的示例性抗體包括貝伐單抗(AVASTIN )、G6-31、B20-4.1和其片段。所述抗體或其抗原結合片段還可是缺少Fe部分、F(ab』)2、Fab或Fv結構的抗體。依賴於疾病的類型和嚴重度，VEGF特異性拮抗劑例如貝伐單抗的優選劑量為本文所描述並且可從約I P g/kg變化至約50mg/kg,最優選從約5mg/kg變化至約15mg/kg,包括但不限於7.5mg/kg或10mg/kg。施用的頻率將依賴於疾病的類型和嚴重度而變化。為了將施用重複幾天或更久，依賴於疾患，將治療維持直到如通過本文描述的或本領域已知的方法所測量的治療了癌或達到所需的治療效果。在一個實例中，將本發明的VEGF特異性拮抗劑(例如抗體)以從約5mg/kg變化至約15mg/kg,包括但不限於7.5mg/kg或10mg/kg的劑量每周、每兩周或每三周施用一次。但其他劑量方案可以是有效的。通過常規的技術和測定容易地監測本發明的療法的過程。在上述每一個方面的另外的實施方案中，局部或系統地(例如口服或靜脈內地)施用VEGF特異性拮抗劑。在一個實施方案中，將使用VEGF特異性拮抗劑的治療延長直到患者在達選自由I年、2年、3年、4年、5年、6年、7年、8年、9年、10年、11年和12年所組成的組的時間段是無癌的。儘管可在施用VEGF特異性拮抗劑之前、之時或之後以許多不同的方式治療受治療者，但在本發明的每一個方面的一個實施方案中，受治療者沒有進行手術或化學療法的治療。在其他實施方案中，如由臨床醫生所評價或本文所描述的，使用VEGF特異性拮抗劑的治療是單一療法或持續VEGF特異性拮抗劑治療期持續時間的單一療法。在其他實施方案中，使用VEGF特異性拮抗劑的治療是與其它的抗癌療法相結合的，所述其它的抗癌療法包括但不限於手術、放射療法、化學療法、分化療法(differentiating therapy)、生物療法、免疫療法、血管生成抑制劑和抗增殖化合物。使用VEGF特異性拮抗劑的治療還可包括上文類型的治療方案的任何組合。此外，細胞毒性劑、抗血管生成劑和抗增殖劑可與VEGF特異性拮抗劑結合使用。在一個實施方案中，抗癌療法是化學療法。例如，化學治療 劑選自諸如烷化劑、抗代謝物、葉酸類似物、嘧啶類似物、嘌呤類似物和相關的抑制劑、長春花生物鹼、表鬼白毒素(epipodopyyllotoxin)、抗生素、L-天冬醯胺酶、拓撲異構酶抑制劑、幹擾素、鉬配位(cooridnation)絡合物、蒽醌取代的尿素、甲基肼衍生物、腎上腺皮質抑制藥、腎上腺皮質留類(adrenocorticosteroide)、孕酮、雌激素、抗雌激素、雄性激素、抗雄性激素、促性腺激素釋放激素類似物等。在某些方面，化學治療劑和VEGF特異性拮抗劑並行(concurrently)施用。在包括其它的抗癌療法的實施方案中，可在施用VEGF特異性拮抗劑之前、之時(例如同時地)或之後用其它的抗癌療法進一步治療受治療者。在一個實施方案中，抗癌療法是包括施用伊立替康、氟尿嘧啶、甲醯四氫葉酸、吉西他濱或其組合的化學療法。在一個實施方案中，可將單獨或與抗癌療法一起施用的VEGF特異性拮抗劑作為維持療法施用。在一個方面，前列腺癌、卵巢癌和乳腺癌的抗癌療法可是激素療法。在一個示例性實施方案中，將VEGF特異性拮抗劑與抗癌療法結合施用，該抗癌療法不包括抗Her2抗體或者其片段或衍生物(例如Herceptin 抗體)。本發明的方法對治療和預防早期腫瘤，由此預防向更晚期發展，引起與晚期癌相`關的發病率和死亡率的下降是尤其有益的。本發明的方法還對預防腫瘤的復發或腫瘤的再生長(例如在去除原發腫瘤後一直存在的休眠腫瘤)或對減少或預防微轉移的發生或增殖有益。對於本發明的方法來說，癌可是實體瘤，例如諸如乳腺癌、結腸直腸癌、直腸癌、肺癌、腎細胞癌、神經膠質瘤(例如間變性星形細胞瘤、間變性少突星形細胞瘤、間變性少突神經膠質瘤、多形性膠質母細胞瘤)、腎癌、前列腺癌、肝癌、胰腺癌、軟組織肉瘤、類癌(carcinoid carcinoma)、頭頸癌、黑素瘤和卵巢癌。在一個實施方案中，癌是胃腸癌。在本發明上述每一個方面的另外的實施方案中，將VEGF特異性拮抗劑以一定量或一定時間(例如特定的治療方案的全部時間)施用以減少(例如20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、100%或更多的)腫瘤或癌(包括但不限於良性的、癌前的或非轉移性的癌)中的癌細胞數目；以減小腫瘤、息肉或腺瘤的大小；以減小腫瘤負荷；以抑制(即降低至某種程度和/或停止)癌細胞浸潤入外周器官中；以減少激素分泌；以減少息肉的數目；以減小腫瘤或癌(包括但不限於良性的、癌前的或非轉移性的癌)中血管密度；以抑制腫瘤轉移；以減少或抑制腫瘤生長或腫瘤細胞增殖；以減少或預防休眠腫瘤的生長；以減少或預防微轉移的生長或增殖；以減少或預防治療或去除後腫瘤的再生長；以增加或延長易患或被診斷為患有良性的、癌前的或非轉移性的腫瘤的受治療者的DFS或OS ;和/或以將與癌相關的一種或多種症狀緩解至某種程度。在一個實例中，生存期被測量為受治療者的DFS或OS，其中在治療開始後約2至5年評估DFS或OS。在一些另外的實施方案中，VEGF特異性拮抗劑被用於預防受治療者中癌的發生或復發。在一個實例中，約四年後在受治療者的群體中評估癌復發的預防以證實在群體的至少約80%中沒有發生疾病復發。在另一個實例中，VEGF特異性拮抗劑被用於減小受治療者中腫瘤或癌復發的可能性。在一個實例中，在約3年時評估癌復發，其中與只用化學療法治療的受治療者相比，癌復發被減少了至少約50%。本發明的方法還可包括監測受治療者癌或腫瘤的復發。根據下列的詳細描述、附圖和權利要求，本發明的其他特徵和優點將是明顯的。附圖簡述

圖1A-1F是顯不Apcmin/+腺瘤和正常續毛中VEGF-A表達的系列顯微照片。用VEGF-A探針在來自14周大Apcmin7+小鼠的小腸(圖1A、1D)和大腸(圖1B、1E)的腸腺瘤以及正常絨毛(圖1C、1F)上進行的原位雜交表明上皮細胞(arrow,箭)和基質細胞(arrowhead，箭頭)中VEGF-A的表達。明視野:圖1A-1C，暗視野:圖1D-1F0圖2A-2F是顯示VEGF-A的抑制降低腫瘤負荷並延長生存期的系列圖示。圖2A是顯示組中單獨小鼠的腫瘤負荷的圖示。通過從腫瘤負荷的最大值到最小值的條標示腫瘤負荷。白色十字標示組平均值。*P < 0.008，**p < 5.3xl(T5。N指明動物的數目。圖2Β是通過直徑和作為腫瘤總數目的百分比顯示腫瘤分布的系列圖示。N指明組中腫瘤的數目。圖2C是顯示治療3周後(上)和治療6周後(中)腫瘤大小頻率覆蓋(overlay)的系列圖示。下部的圖示顯示與第O天相比的腫瘤大小頻率覆蓋(下)。豎線示出這樣一種大小一小於或等於該大小時mAbG6-31處理的動物中腫瘤頻率較大；其在3周處理組中為Imm而在6周處理組中為1.2mm。圖2D是顯示對腸中位置繪製的平均腫瘤直徑的圖示。N分別指明在第一、第二、第三和第四腸四分之一區中每組的腫瘤數目。第O天組包括12隻動物，其他組為10隻。S:胃；C:盲腸，R:直腸。條代表SEM。與mAb G6-31三或六周相比，*P
<1.0xl0_1Q,#p < 0.002。圖 2E 是顯示十四隻 Apcmin/+、Villin-Cre (黑色柱)和 ApCniin7+、VEGF1^Villin-Cre (灰色柱)小鼠的平均腫瘤直徑的以降序顯示的圖示。條代表標準偏差(SD)。圖2F是顯示mAb G6-31 (灰線)或對照IgG(黑線)處理的小鼠的Kaplan-Meier的圖示。中空的箭指明治療的持續時間。用灰色的箭表示中值生存期。*P<2.4xlO_3。N指明組中小鼠的數目。圖3A-3L顯示抗VEGF-A處理在改變腫瘤形態學但不是增殖指數上的作用。圖3A-3B是亞甲基藍染色的小腸的空腸段的顯微照片。圖3C-3D是顯示H&E染色的來自空腸的切片的低放大倍數圖像的顯微照片。圖3E-3F是顯示H&E染色的來自空腸的腫瘤切片的高放大倍數圖像的顯微照片。圖3G-3J是顯示腫瘤組織和正常黏膜的使用K1-67抗體進行免疫組織化學染色的顯微照片。以H&E復染。圖3K是顯示表示為K1-67的陽性細胞核相對於細胞核總數目的百分比的增殖指數的圖示。條代表SEM。圖3L是來自用對照IgG(Nl-M)或mAb G6-31(N5-N8)處理的動物的正常黏膜溶解產物的蛋白質印跡分析。來自用對照IgG(Tl-T4)或mAb G6_31(T5_T8)處理的動物的腫瘤溶解產物。圖4A-4C顯示用mAb G6-31處理時減小的腫瘤血管區域密度。圖4A-4B是免疫組織化學染色的來自空腸的腫瘤的80μπι切片的共焦圖像。綠色-⑶31，血管內皮細胞；藍色-E-鈣粘蛋白，上皮細胞；紅色-平滑肌肌動蛋白。圖4C是顯示表示為CD31的陽性區域相對於所分析的總腫瘤區域的百分比的血管密度的圖示。條代表SEM ;η指明所分析的腫瘤數目。圖5Α- 是顯示抗VEGF-A處理抑制垂體腫瘤生長的系列圖示。圖5A是顯示對照IgG (黑線)和mAb G6-31 (灰線)處理的組在處理9、25、39、53和67天時的平均腫瘤體積的圖示。條代表SEM。N指明組中小鼠的數目。圖5B是顯示用對照IgG (實線)或mAbG6-31(虛線)處理的單獨小 鼠的腫瘤體積的圖示。由於不健康將七隻小鼠在研究終點前安樂死(線在67天時間點前結束)。圖5C是顯示在處理開始後9、25、39、53和67天時評價的對照IgG(黑線)和mAb G6-31 (灰線)處理的組的無腫瘤倍增的-生存期的圖示。圖是顯示在處理1、7、14、21、28和35天時對照IgG (黑線)和mAb G6_31(灰線)處理的皮下垂體腫瘤移植物的腫瘤體積測量值的圖示。條代表SEM。N指明組中小鼠的數目。
圖6是顯示垂體腺和Menl+垂體腺瘤表達VEGF-A、VEGFR-1和VEGFR-2的圖示。顯示了野生型垂體腺(黑色柱)、來自Menl+/~j、鼠的非腫瘤性的垂體腺組織(灰色)、來自Menl+/_小鼠的小的未處理的垂體腺瘤、對照IgG處理的垂體腫瘤(紅色)和mAb G6-31處理的垂體腫瘤(藍色)的VEGF-A、VEGFR-1和VEGFR-2的相對表達。條代表SEM。Ns:不顯著。圖7是來自Menl+小鼠的代表性的垂體腫瘤的系列MRI圖像。顯示了對照IgG和mAb G6-31處理的小鼠在處理9、39和67天時具有垂體腺瘤的冠狀切面。對於第9天，用黃色星號突出了垂體腺瘤的邊緣。在處理開始後9、39和67天時，分別地，對照IgG處理的腫瘤的體積是23.2,55.9和142.0mm3，而mAb G6-31處理的腫瘤的體積是18.9,27.2和35.3mm3。圖8A-8H是顯示Menl+/_小鼠的垂體腫瘤和胰腺腫瘤的組織學檢查的系列圖像。圖8A-8B顯示H&E染色的垂體腫瘤而圖8E-8F顯示H&E染色的胰腺腫瘤。圖8C-8D顯示用泛內皮(panendothelial)標記MECA-32進行的原位垂體腫瘤的免疫組織化學染色而圖8G-8H顯示用泛內皮標記MECA-32進行的原位胰腺腫瘤的免疫組織化學染色。圖81是顯示在對照IgG和抗VEGF處理的動物中測定垂體腫瘤中血管密度的結果的圖示而圖8J是顯示在對照IgG和抗VEGF處理的動物中測定胰腺腫瘤中血管密度的結果的圖示。條代表SD。Ns =不顯著。圖9A-9D是顯示催乳素染色陽性的來自Menl+/_小鼠的垂體腫瘤和垂體腫瘤移植物的系列圖像。顯示了用抗催乳素抗體進行的原位垂體腫瘤(圖9A-9B)和皮下垂體腫瘤移植物(圖9C-9D)的免疫組織化學染色。圖9E和9F是顯示靠近乳腺的移植的垂體腫瘤表現出催乳素誘導的分泌變化(圖像的左邊)的圖像。圖10A-10D顯示在具有垂體腫瘤和垂體腫瘤移植物的小鼠中血清催乳素和生長激素水平被升高。圖1OA是顯示對來自19隻未處理的、帶有腫瘤的Menl+/_小鼠的垂體腫瘤體積(mm3)繪製的血清PRL(ng/ml)水平的圖示，表明正相關。圖1OB是顯示對在研究終點時對照IgG(黑色三角形)和mAb G6-31 (灰色球形)處理的Menl+/_小鼠的垂體腫瘤體積繪製的血清PRL水平的圖示。圖10C-10D是顯示在處理I天和35天時來自具有垂體腺瘤移植物的小鼠的血清催乳素(C)和生長激素(D)水平的圖示。圖11是顯示在胰島腫瘤發育的小鼠Rip-TPAg模型中早期腫瘤發展期間抗VEGF處理(「幹預」)的作用的圖示。圖示顯示與用同種型匹配的對照單克隆抗體處理相比，用抗VEGF抗體處理後9至11周時通過血管生成胰島的平均數目測量的腫瘤血管生成的下降。圖12A和12B顯示退化試驗的結果，其中在胰島腫瘤發育的小鼠Rip-T β Ag模型中用抗VEGF抗體和同種型匹配的對照單克隆抗體處理之間未檢測到腫瘤負荷或生存期的顯著差異。圖12Α是顯示與用同種型匹配的對照單克隆抗體處理的那些小鼠相比，用抗VEGF抗體處理的小鼠中腫瘤負荷的圖示。圖12Β是顯示與用同種型匹配的對照單克隆抗體處理的那些小鼠相比，用抗VEGF抗體處理的小鼠隨著時間存活的圖示。圖13是顯示在紫杉烷或吉西他濱進行細胞減少後長期的抗VEGF療法抑制腫瘤的再生長的有效性的圖示。圖14A-14D是顯示與鄰近的正常垂體前葉(下方的點線)相比，原發未處理的垂體腺瘤(圖14Α，點線之上)對生長激素呈變化並弱的陽性的系列圖像。四個移植的垂體腫瘤(對照IgG處理的)中的一個對生長激素呈弱的陽性(圖14B)。來自用mab G6-31 (圖14C)或對照IgG(圖14D)處理的小鼠的原發垂體腫瘤對生長激素呈病灶陽性。發明的詳細描述1.定義術語「VEGF」或「VEGF-A」被用來指165個胺基酸的人類血管內皮細胞生長因子和相關的121、145、189和206個胺基酸的人類血管內皮細胞生長因子(如由例如Leung等人 Science, 246:1306(1989)和 Houck 等人 Mol.Endocrin.，5:1806(1991)所描述的)，以及其天然存在的等位的和加工過的形式。VEGF-A是包括VEGF-B、VEGF-C、VEGF-D、VEGF-E、VEGF-F和PlGF的基因家族的一部分。VEGF-A主要與兩個高親和力的受體酪氨酸激酶VEGFR-1 (Flt-1)和VEGFR-2 (Flk-1/KDR)結合，後者是VEGF-A的血管內皮細胞促有絲分裂信號的主要遞質。此外，神經氈蛋白-1已被確認為肝素結合的VEGF-A同種型的受體並可在血管發育中起作用。術語「VEGF」或「VEGF-A」還指來自非人類物種例如小鼠、大鼠或靈長目動物的VEGF。有時通過術語例如用於人類VEGF的hVEGF或用於鼠科動物VEGF的mVEGF標示來自特定物種的VEGF。術語「VEGF」還被用來指含有165個胺基酸的人類血管內皮細胞生長因子的胺基酸8至109或I至109的多肽的截短形式或片段。可例如通過「VEGF (8-109) 」、「VEGF (1-109) 」或「VEGF165」來識別本申請中所提及的任何這種形式的VEGF。如在天然VEGF序列中所標示的對「截短的」天然VEGF的胺基酸位置編號。例如，在截短的天然VEGF中的胺基酸位置17 (甲硫氨酸)也是天然VEGF中的位置17(甲硫氨酸)。截短的天然VEGF具有與天然VEGF相當的對KDR和Flt-1受體的結合親和力。如本文所用的，術語「VEGF變體」是指包括天然VEGF序列中的一個或多個胺基酸突變的VEGF多肽。任選地，一個或多個胺基酸突變包括胺基酸取代。為了簡化本文所描述的VEGF變體的名稱，應當注意的是號碼是指沿公認的天然VEGF的胺基酸序列的胺基酸殘基的位置(在Leun g等人，如上和Houck等人，如上中所提供的)。「天然序列」多肽包含具有與來自自然的多肽的相同胺基酸序列的多肽。因此，天然序列多肽可具有來自任何哺乳動物的天然存在的多肽的胺基酸序列。可從自然分離或可通過重組或合成方法生產這種天然序列多肽。術語「天然序列」多肽尤其包含所述多肽的天然存在的截短的或分泌的形式(例如細胞外結構域序列)、所述多肽的天然存在的變體形式(例如可選擇地剪接的形式)和所述多肽的天然存在的等位變體。多肽「變體」意指具有與天然序列多肽至少約80%的胺基酸序列同一性的生物活性多肽。這種變體包括，例如，其中在多肽的N或C末端添加或缺失一個或多個胺基酸殘基的多肽。通常，變體具有與天然序列多肽至少約80 %的胺基酸序列同一性、更優選地至少約90 %的胺基酸序列同一性、以及甚至更優選地至少約95 %的胺基酸序列同一性。「 VEGF生物活性」包括與任何VEGF受體結合或任何VEGF信號轉導活性例如調節正常和非正常的血管生成和血管發生(Ferrara和Davis-Smyth(1997)EndocrineRev.18:4-25 ；Ferrara(1999) J.Mol.Med.77:527-543);促進胚胎的血管發生和血管生成(Carmeliet 等人(1996) Nature 380:435-439 -,Ferrara 等人(1996) Nature 380:439-442);以及調節雌性生殖道中的和為了骨生長以及軟骨形成的周期性血管增殖(Ferrara 等人(1998)Nature Med.4:336-340 ；Gerber 等人.(1999)Nature Med.5:
623-628)。除了作為血管生成和血管發生中的血管生成因子之外，VEGF作為多效的生長因子在其他生理過程例如內皮細胞存活、血管通透性和血管舒張、單核細胞趨化性和隹丐內流中表現出多種生物效應(Ferrara和Davis-Smyth (1997),如上和Cebe-Suarez等人.Cell.Mol.Life Sc1.63:601-615 (2006))。而且最近的研究已經報導了 VEGF對少數非內皮細胞類型例如視網膜色素上皮細胞、胰管細胞和施萬氏細胞的促有絲分裂作用。Guerrin等人.(1995) J.Cell Physiol.164:385-394 ;0berg_Welsh等人.(1997)Mol.Cell.Endocrinol.126:125-132 ；Sondell 等人.(1999) J.Neurosc1.19:5731_5740。本文在第III部分描述「VEGF特異性拮抗劑」。「抗VEGF抗體」是以足夠的親和力和特異性與VEGF結合的抗體。所選擇的抗體將通常具有對VEGF的足夠強 的結合親和力，例如抗體可以IOOnM-1pM之間的Kd值結合hVEGF。可例如通過表面等離子體共振為基礎的測定(例如，如PCT申請公開第WO 2005/012359號中描述的BIAcore測定)；酶聯免疫吸附測定(ELISA);以及競爭測定(例如RIA的)確定抗體親和力。在某些實施方案中，本發明的抗VEGF抗體可被用作靶向並幹預其中涉及VEGF活性的疾病或疾患的治療劑。抗體還可經受其他的生物活性測定，例如為了評價其作為治療劑的效力。這種測定是本領域已知的並取決於目標抗原和抗體的預期用途。實例包括HUVEC抑制測定(如下文的實施例中所描述的)；腫瘤細胞生長抑制測定(例如，如WO 89/06692中所描述的)；抗體依賴性細胞的細胞毒性(ADCC)和補體介導的細胞毒性(CDC)的測定(美國專利5，500，362);以及激動性活性或血細胞生成的測定(參見WO 95/27062)。抗VEGF抗體通常不會與其他VEGF同源物例如VEGF-B或VEGF-C結合，也不與其它生長因子例如P1GF、PDGF或bFGF結合。關於抗VEGF抗體的另外的信息可在第III部分，A找到。遍及本說明書和權利要求書中，免疫球蛋白重鏈中殘基的編號是如Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest (免疫學關注的蛋白質的序列)，第
5版，Public Health Service (公共衛生局)，National Institutes of Health(美國國家衛生研究院)，BetheSda，Md.(1991)中的EU索引的編號，明確地通過引用併入本文。「如Kabat中的EU索引」是指人類IgGlEU抗體的殘基編號。術語「抗體」被以最廣泛的意義使用並特別地涵蓋單克隆抗體(包括全長單克隆抗體)、多克隆抗體、多特異性抗體(例如雙特異性抗體)以及抗體片段，只要它們表現出所需的生物活性。依照本發明的「Kd」或「Kd值」是在一個實施方案中通過如下列測定所描述的用抗體的Fab形式和VEGF分子進行的放射標記的VEGF結合測定(RIA)來測量的:通過使Fab與最小濃度的(125I)標記的VEGF(109)在未標記的VEGF滴定系列存在的情況下平衡，之後用抗Fab抗體包被的板捕獲結合的VEGF，測量Fab對VEGF的溶液結合親和力(Chen等人，(1999) J.Mol Biol 293:865-881)。為確立測定的條件，用溶於50mM碳酸鈉(pH 9.6)的5ug/ml的捕獲抗Fab抗體(Cappel Labs)將微量滴定板(Dynex)包被過夜，並隨後用溶於PBS的2% (w/v)的牛血清白蛋白於室溫(約23°C)封閉二至五小時。在非吸附性(non-adsorbant)板(Nunc#269620)中，將 IOOpM或 26pM 的[125I] VEGF (109)與感興趣的 Fab例如Fab-12的系列稀釋液混合(Presta等人，(1997) Cancer Res.57:4593-4599)。之後將感興趣的Fab孵育過夜；但孵育可持續65小時以確保達到平衡。此後，將混合物轉移至捕獲板以便於室溫孵育一小時。之後去除溶液並將板用溶於PBS的0.1%的吐溫-20洗八次。當板已幹，加入150ul/孔的閃爍體(MicroScint-20 ；Packard),並將板在Topcount Y計數器(Packard)上計數十分鐘。選擇產生小於或等於最大結合的20%的每種Fab的濃度用於競爭性結合測定中。依照另一個實施方案，Kd或Kd值是通過使用表面等離子體共振測定(使用了 BIAcore -2000 或 BIAcore -3000 (BIAcore, Inc., Piscataway, NJ))於 25°C用固定的hVEGF(8-109) CM5晶片以 10響應單元(RU)測量的。簡單地說，依照供應商的說明書將羧甲基化葡聚糖生物傳感器晶片(CM5，BIAcore Inc.)用N-乙基-N』-(3-二甲氨基丙基)-碳二亞胺鹽酸鹽(EDC)和N-羥基丁二醯亞胺(NHS)活化。在以5ul/分鐘的流速注入前用IOmM醋酸鈉，pH4.8將人類VEGF稀釋至5ug/ml ( 0.2uM)以獲得約10響應單元(RU)的偶聯蛋白。注入人類VEGF之後，注入IM的乙醇胺以封閉未反應的基團。為了動力學測量，將兩倍的Fab系列稀釋液(0.78nM至500nM)於25°C以約25ul/min的流速注入含有0.05%的吐溫20的PBS (PBST)中。用簡單的一對一 Langmuir結合模型(BIAcore評估軟體3.2版)通過同時擬合締合和解離感應譜(sensorgram)計算締合速率(km)和解離速率U。將平衡解離常數(Kd)計算為IwZkm的比率。參見例如Chen，Y.等人，(1999) J.MolBiol293:865-881。如果通過上文的表面等離子體共振測定的結合速率(on_rate)超過IO6M-1S-1,那麼可通過在逐漸增加濃度的人類VEGF短形式(8-109)或小鼠VEGF存在的情況下如在分光儀，例如裝備了停流的分光光度計(spectrophometer) (Aviv Instruments)或具有攪拌吸收池的8000系列SLM-Aminco分光光度計(ThermoSpectronic)中所測量的使用測量25°C時溶於PBS，pH 7.2的20nM抗VEGF抗體(Fab形式)的螢光發射強度(激發=295nm ;發射=340nm, 16nm帶通)的增大或減小的突光淬滅技術確定結合速率。「封閉性」抗體或抗體「拮抗劑」是抑制或降低其結合的抗原的生物活性的抗體。例如，VEGF特異性拮抗劑抗體結合VEGF並抑制VEGF的誘導血管內皮細胞增殖的能力。優選的封閉性抗體或拮抗劑抗體完全抑制抗原的生物活性。除非以其他方式指出，遍及此說明書使用詞組「多價抗體」表示含有三個或更多抗原結合位點的抗體。例如，多價抗體被改造為具有三個或更多抗原結合位點並通常不是天然序列的IgM或IgA抗體。「Fv」片段是包含完整抗原識別和結合位點的抗體片段。這一區由緊密締合的一個重鏈和一個輕鏈可變結構域的二聚物組成，例如在scFv中所述締合性質上可是共價的。它處於這樣的構型——每個可變結構域的三個CDR相互作用以界定Vh-' 二聚物表面上的抗原結合位點。六個CDR或其子集共同將抗原結合特異性賦予抗體。但是，單個的可變結構域(或僅包含三個對抗原特異的⑶R的半個Fv)也具有識別和結合抗原的能力，儘管通常以比完整結合位點低的親和力。如本文所用的，「抗體可變結構域」是指包括互補決定區(CDRJP⑶R1、⑶R2和CDR3)和框架區(FR)的胺基酸序列的抗體分子的輕鏈和重鏈的一部分。￥11是指重鏈的可變結構域。Vl是指輕鏈的可變結構域。依照本發明中所使用的方法，可按照Kabat (SequencesofProteins of Immunological Interest (免疫學關注的蛋白質的序列)(NationalInstitutes of Health(美國國家衛生研究院)，Bethesda, Md.，1987 和 1991))定義分配給CDR和FR的胺基酸位置。抗體或抗原結合片段的胺基酸編號也按照Kabat的編號。如本文所用的，術語「互補決 定區」(CDR ；BP⑶R1、⑶R2和⑶R3)是指其存在是抗原結合所必需的抗體可變結構域的胺基酸殘基。每個可變結構域通常具有被鑑定為CDR1、⑶R2和⑶R3的三個⑶R區。每個互補決定區可含有來自如由Kabat所定義的「互補決定區」的胺基酸殘基(即，輕鏈可變結構域中的大約24-34 (LI)、50-56 (L2)和89-97 (L3)和重鏈可變結構域中的 31-35 (HI)、50_65(H2)和 95-102 (H3)殘基；Kabat 等人，Sequencesof Proteins of Immunological Interest (免疫學關注的蛋白質的序列)，第 5 版.PublicHealth Service (公共衛生局)，National Institutes of Health (美國國家衛生研究院)，Bethesda，MD.(1991))和/或來自「高變環」的那些殘基(即，輕鏈可變結構域中的大約 26-32(Ll)、50-52(L2)和 91-96 (L3)和重鏈可變結構域中的 26-32 (HI)、53_55 (H2)和96-101 (H3)殘基;Chothia 和 LeskJ.Mol.Biol.196:901-917 (1987))。在某些實例中，互補決定區可包含來自按照Kabat定義的⑶R區和高變環兩者的胺基酸。例如，抗體4D5的重鏈的⑶RHl包含胺基酸26至35。「框架區」(此後的FR)是除了⑶R殘基以外的那些可變結構域殘基。每個可變結構域通常具有被鑑定為FRl、FR2、FR3和FR4的四個FR。如果按照Kabat定義CDR，那麼輕鏈 FR 殘基位於大約 1-23 (LCFRl)、35-49 (LCFR2)、57-88 (LCFR3)和 98-107 (LCFR4)殘基而重鏈FR殘基位於重鏈殘基中的大約1-30 (HCFRl)、36-49 (HCFR2)、66-94 (HCFR3)和103-113 (HCFR4)殘基。如果CDR含有來自高變環的胺基酸殘基，那麼輕鏈FR殘基位於輕鏈中的大約 1-25 (LCFRl)、33-49 (LCFR2)、53-90 (LCFR3)和 97-107 (LCFR4)殘基而重鏈 FR 殘基位於重鏈殘基中的大約 1-25 (HCFRl)、33-52 (HCFR2)、56-95 (HCFR3)和 102-113 (HCFR4)殘基。在某些實例中，當⑶R含有來自如Kabat所定義的⑶R和高變環的那些胺基酸的胺基酸時，那麼FR殘基將被相應地調整。例如，當⑶RHl包括胺基酸H26-H35時，重鏈FRl殘基是在1-25位置而FR2殘基是在36-49位置。「Fab」片段含有輕鏈的可變和恆定結構域以及重鏈的可變結構域和第一恆定結構域(CHl)。F(ab』)2抗體片段含有一對通常通過它們之間的鉸鏈半胱氨酸在它們的羧基末端附近共價連接的Fab片段。抗體片段的其他化學偶聯也是本領域已知的。

「單鏈Fv」或「scFV」抗體片段含有抗體的V1^P \結構域，其中這些結構域存在於單個的多肽鏈中。通常Fv多肽進一步包括Vh和\結構域之間的多肽連接體，其使scFv能夠形成抗原結合所需要的結構。scFv的綜述，參見Pluckthun在The Pharmacologyof Monoclonal Antibodies (單克隆抗體的藥理學)，113 卷，Rosenburg 和 Moore 編輯，Springer-Verlag, New York,第 269-315 頁(1994)。術語「雙抗體」是指具有兩個抗原結合位點的小的抗體片段，該片段包含與同一條多肽鏈(Vh和VJ中的輕鏈可變結構域(')相連的重鏈可變結構域(Vh)。通過使用太短而不允許相同鏈上兩個結構域之間配對的連接體，迫使結構域與另一條鏈的互補結構域配對並產生兩個抗原結合位點。雙抗體被更加完整地描述於例如EP 404, 097 ；W093/11161以及Hollinger 等人，Proc.Natl.Acad.Sc1.USA, 90:6444-6448 (1993)中。詞組「線性抗體」是指Zapata 等人，Protein Eng.,8(10):1057-1062(1995)中描述的抗體。簡單地說，這些抗體含有一對串聯的Fd區段(Vh-Ch1-Vh-ChI)，其與互補的輕鏈多肽一起形成一對抗原結合區。線性抗體可是雙特異性或單特異性的。如本文所用 的，術語「單克隆抗體」是指從基本上均一的抗體的群中獲得的抗體，即所述群所包含的單個抗體除了可以較小量存在的可能自然發生的突變以外是完全相同的。針對單一的抗原性位點的單克隆抗體是高特異性的。此外，與通常包括針對不同決定簇(表位)的不同抗體的常規(多克隆)抗體製劑相比，每個單克隆抗體針對抗原上單一的決定簇。修飾語「單克隆」表明抗體的特徵是從基本上均一的抗體群中獲得的，並不被解釋為需要通過任何特定的方法生產抗體。例如，將依照本發明使用的單克隆抗體可通過首次由Kohler等人，Nature 256:495(1975)描述的雜交瘤方法製得，或可通過重組DNA的方法(參見，例如美國專利第4, 816, 567號)製得。還可使用例如Clackson等人，Nature352:
624-628 (1991)和 Marks 等人.J.Mol.Biol.222:581-597 (1991)中描述的技術從噬菌體抗體文庫分離「單克隆抗體」。本文單克隆抗體特別包括「嵌合」抗體(免疫球蛋白)，以及這些抗體的片段，只要它們表現出所需的生物活性(美國專利第4，816，567號；和Morrison等人，Proc.Natl.Acad.Sc1.USA 81:6851-6855 (1984))，所述「嵌合」抗體中，重鏈和/或輕鏈的一部分與來自特定物種或屬於特定的抗體類或亞類的抗體中的相應序列完全相同或同源，而鏈的其餘部分與來自另一個物種或屬於另一個抗體類或亞類的抗體中的相應序列完全相同或同源。非人類(例如鼠科動物)抗體的「人源化」形式是含有最少的來自非人類免疫球蛋白的序列的嵌合抗體。對於大部分來說，人源化抗體是人類免疫球蛋白(受者抗體)，其中來自受者高變區的殘基被來自具有所需要的特異性、親和力和能力的非人類物種例如小鼠、大鼠、兔或非人類靈長目動物的高變區(供者抗體)的殘基取代。在一些實例中，人類免疫球蛋白的Fv框架區(FR)殘基被相應的非人類殘基取代。此外，人源化抗體可包含在受者抗體或供者抗體中找不到的殘基。進行這些修飾以進一步完善抗體性能。通常，人源化抗體將包括基本上全部的至少一個、通常兩個可變結構域，其中全部或基本上全部的高變環與非人類免疫球蛋白的高變環一致並且全部或基本上全部的FR區是人類免疫球蛋白序列的FR區。人源化抗體還將任選地含有免疫球蛋白恆定區(Fe)，通常是人類免疫球蛋白的恆定區的至少一部分。對於進一步的細節，參見Jones等人，Nature 321:522-525 (1986) ;Riechmann 等人，Nature332:323-329(1988);和 Presta, Curr.0p.Struct.Biol.2:593-596(1992)。「人類抗體」是具有與通過人生產的抗體和/或使用如本文所公開的任何一項製造人類抗體的技術製得的 抗體的胺基酸序列一致的胺基酸序列的抗體。人類抗體的這一定義尤其排除了含有非人類抗原結合殘基的人源化抗體。可使用本領域已知的不同技術生產人類抗體。在一個實施方案中，人類抗體選自噬菌體文庫，其中噬菌體文庫表達人類抗體(Vaughan 等人.Nature Biotechnology 14:309-314(1996) ;Sheets 等人.Proc.Natl.Acad.Sc1.95:6157-6162(1998)) ；Hoogenboom 和 Winter, J.Mol.Biol.，227:381 (1991)；Marks等人，J.Mol.Biol.，222:581 (1991))。還可通過將人類免疫球蛋白基因座引入轉基因動物例如小鼠中製得人類抗體，所述轉基因動物中的內源免疫球蛋白基因已經被部分或完全地失活。攻擊後，觀察了人類抗體的產生，其在包括基因重排、組裝和抗體譜的所有方面上都與在人類中所見到的非常相似。這一方法被描述於例如美國專利第5，545，807 ；5，545，806 ;5，569，825 ;5，625，126 ;5，633，425 ;5，661，016 號和下列科學出版物中:Marks等人，Bio/Technology 10:779-783(1992) ;Lonberg 等人，Nature 368:856-859(1994)；Morrison, Nature 368:812-13(1994) ；Fishwild 等人，Nature Biotechnology 14:845-51(1996) ；Neuberger, Nature Biotechnology 14:826(1996) ；Lonberg 和 Huszar,Intern.Rev.1mmunol.13:65-93 (1995)。可選擇地,可經由針對目標抗原產生抗體的人類B淋巴細胞(這類淋巴細胞可從個體中被回收或可在體外被免疫)的無限增殖化製備人類抗體。參見，例如 Cole 等人，Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy (單克隆抗體和癌療法)，Alan R.Liss，第 77 頁(1985) ;Boerner 等人，J.1mmunol., 147(1):86-95(1991)和美國專利第5，750, 373號。「親和力成熟的」抗體是在其一個或多個CDR中具有一個或多個變更的抗體，所述變更產生與不具有那些變更的母體抗體相比抗體對抗原的親和力上的改善。優選的親和力成熟的抗體具有對目標抗原的納摩爾或甚至皮摩爾級的親和力。通過本領域已知的程序生產親和力成熟的抗體。Marks等人.Bio/Technology 10:779-783 (1992)描述了通過VH和VL結構域改組(shuffling)的親和力成熟。由以下描述了 CDR和/或框架殘基的隨機的誘變:Barbas 等人.Proc Nat.Acad.Sci, USA 91:3809-3813(1994) ;Schier 等人,Gene 169:147-155(1995) ；Yelton 等人.J.1mmunol.155:1994-2004(1995) Jackson 等人，J.1mmunol.154 (7):3310-9 (1995)和 Hawkins 等人，J.Mol.Biol.226:889-896 (1992)。抗體的「功能性抗原結合位點」是能夠結合目標抗原的位點。抗原結合位點的抗原結合親和力不必與抗原結合位點所來自於的母體抗體一樣強，但結合抗原的能力必須是使用已知的評估抗體對抗原的結合的多種方法中的任何一種可測量的。而且，本文的多價抗體的每一個抗原結合位點的抗原結合親和力在數量上不必相同。對於本文的多聚體抗體來說，可使用如美國專利申請公開第20050186208號的實施例2中所描述的超速離心分析評價功能性抗原結合位點的數目。依照這一分析方法，將目標抗原比多聚體抗體的不同比率聯合併且假定功能性結合位點的不同數目而計算複合物的平均分子量。將這些理論值與所獲得的實際的實驗值對比以便評價功能性結合位點的數目。具有指定抗體的「生物特性」的抗體是具有該抗體的一種或多種使其區別於與相同抗原結合的其他抗體的生物特性的抗體。為了篩查與感興 趣的抗體所結合的抗原上的表位結合的抗體，可進行常規的交叉封閉測定例如Antibodies, A Laboratory Manual (抗體的實驗室手冊)，Cold SpringHarbor Laboratory (冷泉港實驗室)，Ed Harlow 和 David Lane (1988)中描述的測定。「物種依賴性抗體」是對來自第一哺乳動物物種的抗原具有比對來自第二哺乳動物物種的該抗原的同源物的親和力更強的結合親和力的抗體。通常，物種依賴性抗體「特異性地結合」於人類抗原(即具有不超過約1x10_7M，優選地不超過約1χ10_8Μ，並最優選地不超過約IxlO-9M的結合親和力(Kd)值)，但具有對來自第二非人類哺乳動物物種的抗原的同源物的結合親和力比所述抗體對人類抗原的結合親和力弱至少約50倍，或至少約500倍，或至少約1000倍。物種依賴性抗體可以是如上文所定義的不同類型的抗體中的任何一種，但通常是人源化或人類抗體。如本文所用的，「抗體突變體」或「抗體變體」是指物種依賴性抗體的胺基酸序列變體，其中物種依賴性抗體的一個或多個胺基酸殘基已被修飾。這種突變體必須具有與物種依賴性抗體的小於100%的序列同一性或相似性。在一個實施方案中，抗體突變體將具有與物種依賴性抗體的重鏈或輕鏈可變結構域的胺基酸序列具有至少75%，更優選地至少80 %，更優選地至少85 %，更優選地至少90 %，並最優選地至少95 %的胺基酸序列同一性或相似性的胺基酸序列。本文關於這一序列的同一性或相似性被定義為在比對序列並引入空位(如果需要)以達到最大百分比的序列同一性後，候選序列中與物種依賴性抗體殘基相同(即同樣的殘基)或相似(即來自以共同側鏈特性為基礎的相同組的胺基酸殘基，參見下文)的胺基酸殘基的百分比。對可變結構域外部的抗體序列的N-末端、C-末端或內部的延伸、缺失或插入都不應當被理解為影響序列同一性或相似性。為了增加含有本發明的胺基酸序列的抗體或多肽的半衰期，如例如美國專利5，739，277中所描述的，可對抗體(尤其是抗體片段)附加一個補救受體結合表位。例如，可將編碼補救受體結合表位的核酸分子在框架中與編碼本發明的多肽序列的核酸連接以便通過改造的核酸分子表達的融合蛋白含有補救受體結合表位和本發明的多肽序列。如本文所使用的，術語「補救受體結合表位」是指IgG分子(例如IgGp IgG2, IgG3或IgG4)的Fe區的表位,其起到增加IgG分子的體內血清半衰期的作用(例如Ghetie等人,Ann.Rev.1mmunol.18:739-766 (2000)，表I)。其Fe區中具有取代以及具有增加的血清半衰期的抗體還描述於 W000/42072、W0 02/060919 !Shields 等人，J.Biol.Chem.276:6591-6604(2001)；Hinton, J.Biol.Chem.279:6213-6216 (2004))中。在另一個實施方案中，通過例如附加其他多肽序列也可增加血清半衰期。例如，可將用於本發明方法中的抗體或其他多肽附加於與FcRn受體或血清白蛋白結合肽結合的血清白蛋白或血清白蛋白的一部分以便血清白蛋白與抗體或多肽例如W001/45746中所公開的這些多肽序列結合。在一個實施方案中，將被附加的血清白蛋白肽含有DICLPRWGCLW的胺基酸序列。在另一個實施方案中，通過這些方法增加了 Fab的半衰期。對於血清白蛋白結合肽序列也參見Dennis等人，J.Biol.Chem.277:35035-35043(2002)。
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「嵌合VEGF受體蛋白」是具有來自至少兩個不同蛋白質(其中至少一個是VEGF受體蛋白)的胺基酸序列的VEGF受體分子。在某些實施方案中，嵌合VEGF受體蛋白能夠結合VEGF並抑制VEGF的生物活性。「分離的」多肽或「分離的」抗體是已經從其自然環境的一個組分中識別並分離和/或回收的多肽或抗體。其自然環境的汙染物組分是會干擾多肽或抗體的診斷或治療用途的物質，可包括酶、激素和其他蛋白質的或非蛋白質的溶質。在某些實施方案中，多肽或抗體將被純化(I)以至大於如通過羅氏法(Lowry method)測定的多肽或抗體的95%重量,並最優選的大於99%重量，(2)以至足以通過使用轉杯式測序儀獲得N-末端或內部胺基酸序列的至少15個殘基的程度，或(3)以至通過在還原或非還原條件下使用考馬斯藍或銀染色的SDS-PAGE達到同質性。分離的多肽或抗體包括重組細胞中原位的多肽或抗體，因為多肽天然環境的至少一個組分將不存在。然而，通常將通過至少一個純化步驟製備分離的多肽或抗體。所謂的「片段」，意指優選地含有參考核酸分子或多肽的全長的至少10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%或更多的多肽或核酸分子的一部分。片段可含有 10、20、30、40、50、60、70、80、90 或 100、200、300、400、500、600 或更多核苷酸或者 10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、120、140、160、180、190、200 或更多胺基酸。「抗血管生成劑」或「血管生成抑制劑」是指直接或間接地抑制血管生成、血管發生或不需要的血管通透性的小分子量物質、多核苷酸、多肽、分離的蛋白質、重組的蛋白質、抗體、或者其軛合物或融合蛋白。應當理解的是，抗血管生成劑包括結合血管生成因子或其受體並阻斷其血管生成活性的那些劑。例如，抗血管生成劑是如上文定義的血管生成劑的抗體或其他拮抗劑，例如VEGF-A或VEGF-A受體(諸如KDR受體或Flt-1受體)的抗體、抗TOGFR抑制劑諸如GleeVecTM(甲磺酸伊馬替尼)。抗血管生成劑還包括天然的血管生成抑制劑例如血管他丁、內皮他丁等。參見,例如Klagsbrun和D』 Amore, Annu.Rev.Physiol.,53:217-39(1991) ;Streit 和 Detmar，Oncogene，22:3172-3179(2003)(例如列出惡性黑素瘤的抗血管生成療法的表 3) ；Ferrara&Alitalo, Nature Medicine 5:1359-1364(1999)；Tonini等人，Oncogene, 22:6549-6556 (2003)(例如列出已知的抗血管生成因子的表2)以及Sat0.1ht.J.Clin.0ncol.，8 =200-206(2003)(例如表I列出臨床試驗中所使用的抗血管生成劑)。「治療」是指治療性處理和預防疾病的或預防性的措施。需要治療的那些包括已經患有良性的、癌前的或非轉移性的腫瘤的那些以及其中癌的發生或復發有待被預防的那些。術語「治療上有效的量」是指治療或預防哺乳動物中疾病或病症的VEGF特異性拮抗劑的量。在癌前的、良性的或早期腫瘤的實例中，治療上有效的量的VEGF特異性拮抗劑可減少癌細胞的數目；減小原發腫瘤的大小；抑制(即減慢至某種程度和優選地停止)癌細胞浸潤入外周器官中；抑制(即減慢至某種程度和優選地停止)腫瘤轉移，抑制(至某種程度)腫瘤生長；和/或使與所述病症相關的一種或多種症狀緩解至某種程度。對於腫瘤休眠或微轉移的治療來說，治療上有效的量的VEGF特異性拮抗劑可減少微轉移的數目或增殖；減少或預防休眠腫瘤的生長；或在治療或去除(例如，使用抗癌療法諸如手術、放射療法或化學療法)後減少或預防腫瘤的復發。藥物可以某種程度預防生長和/或殺死存在的癌細胞，它可是抑制細胞生長的和/或細胞毒性的。對於癌治療，體內效力可例如通過評定存活的持續時間、疾病發展時間(TTP)、響應率(RR)、響應持續時間、緩解的時間和/或生活質量來測量。有效的量可增加無病生存期(DFS)、增加總體生存期(OS)、減小復發的可能性、延長復發的時間、延長遠處復發的時間(即在原發部位外部的復發)、治癒癌、改善癌症狀(例如使用癌特定的檢查所測量的)、減少第二原發癌的出現等。「可手術的」癌是被局限於原發器官並適於手術的癌。

「生存期」是指患者依然活著，並包括無病生存期(DFS)、無發展生存期(PFS)和總體生存期(OS)。可通過Kaplan-Meier法評估生存期,並使用分層的時序檢驗(stratifiedlog-rank test)計算生存期的任何差異。「無病生存期(DFS) 」是指患者自治療開始或自最初的診斷保持活著、沒有復發癌所持續的確定的一段時間，例如約I年、約2年、約3年、約4年、約5年、約10年等。在本發明的一個方面，依照意向治療的原則分析DFS，即在他們的指定的療法的基礎上評估患者。用於DFS的分析的事件可包括癌的原處(local)、區域和遠處的復發，繼發性癌的發生和沒有之前事件(例如，乳腺癌復發或第二原發癌)的患者中的由於任何原因的死亡。「總體生存期」是指患者自治療開始或自最初的診斷保持活著所持續的確定的一段時間，例如約I年、約2年、約3年、約4年、約5年、約10年等。在本發明的研究中，用於生存期分析的事件是由於任何原因的死亡。所謂的「延長生存期」，意指在已治療的患者中相對於未治療的患者(即相對於沒有用VEGF特異性拮抗劑例如VEGF抗體治療的患者)，或相對於對照治療方案例如僅用化學治療劑諸如紫杉醇的治療增加DFS和/或OS。在治療開始之後或在最初的診斷之後，監測生存期至少約六個月，或至少約一年，或至少約2年，或至少約3年，或至少約4年，或至少約5年，或至少約10年等。
生存期分析中的「危害比」是兩個生存期曲線之間差異的概括，表示在隨訪的時間段內與對照相比治療時死亡風險上的降低。危害比是事件比率的統計學定義。為了本發明，將危害比定義為表示在任何時間上的特定點實驗組(arm)中的事件的概率除以對照組中的事件的概率。本文術語「並行地」被用於指兩種或更多種治療劑的施用，其中所述施用的至少一部分在時間上重疊。因此，並行施用包括當在停止一種或多種劑的施用後繼續一種或多種其他劑的施用時的給藥方案。所謂的「單一療法」，意指在治療期的過程中僅包括一種用於癌或腫瘤治療的治療劑的治療方案。使用VEGF特異性拮抗劑的單一療法意指在治療期期間在不存在其它的抗癌療法的情況下施用VEGF特異性拮抗劑。所謂的「維持療法」，意指被提供以減小疾病復發或發展的可能性的治療方案。可將維持療法提供達任何長度的時間，包括延長的直到受治療者壽命的時間段。可將維持療法在最初的療法之後或與最初或其它的療法聯合起來提供。維持療法所使用的劑量可變化並且可包括與用於其他類型療法的劑量相比減少的劑量。本文「新輔助療法」或「手術前療法」是指在手術前提供的療法。新輔助療法的目的是提供即時的系統的治療，可能地根除微轉移(不然其會增殖，如果遵照手術隨後是系統療法的標準順序)。新輔助療法還可幫助減小腫瘤大小由此允許完全切除最初不可切除的腫瘤，或保留部分器官和其功能。而且，新輔助療法允許在體內評定藥物效力，這可指導隨後的治療選擇。本文「輔助療法」是指在手術後不能檢測到殘留疾病的跡象時提供的療法，以降低疾病復發的風險。輔助療法的目的是預防癌的復發並因此減低癌相關的死亡的機率。本文「標準的護理」化學療法是指常規使用以治療特定癌的化學治療劑。如在醫學團體中使用該術語的方式使用「確定性手術」。確定性手術包括例如手術的或其他方面的導致腫瘤去除或切除的程序，所述程序包括導致所有很可見的腫瘤去除或切除的那些程序。確定性手術包括，例如完全或有療效的切除或者完全的全切除腫瘤。確定性手術包括在一個或多個階段內發生的程序並包括:例如切除腫瘤前進行一個或多個手術或其它程序的多階段手術的程序。確定性手術包括移走或切除腫瘤，包括所涉及的器官、部分器官和組織以及周圍器官例如淋巴結、部分器官或組織的程序。術語「癌」或「癌的」是指或描述哺乳動物中通常以不受調節的細胞生長為特徵的生理疾患。這一定義中包括良性的和惡性的癌以及休眠的腫瘤或微轉移。所謂的「早期癌」或「早期腫瘤」意指未擴散或轉移的或者被分類為O、I或II期癌的癌。術語「癌前的」是指通常先於癌或發展為癌的狀況或生長。「癌前的」生長將具有以可通過細胞周期調節、細胞增殖或分化的標記測定的不正常的細胞周期調節、增殖或分化為特徵的細胞。所謂的「發育異常」意指組織、器官或細胞的任何不正常的生長或發育。優選地，發育異常是高級別或癌前的。
所謂的「轉移」意指癌從其原發部位向體內其他地方的擴散。癌細胞可從原發腫瘤脫離，滲入淋巴管和血管，通過血流循環並在體內別處的正常組織中的遠處病灶中生長(轉移)。轉移可以是原處或遠處的。轉移是相繼的過程，視腫瘤細胞從原發腫瘤脫離，通過血流移動並在遠處部位停留的情況而定。在新的部位，細胞建立血液供給並可生長以形成威脅生命的塊(mass)。腫瘤細胞中刺激性和抑制性分子通路都調節這一行為並且在遠處部位中腫瘤細胞和宿主細胞之間的相互作用也是顯著的。所謂的「微轉移」意指已從原發腫瘤向身體其他部分擴散的少量細胞。微轉移在篩查或診斷試驗中可或不可被檢測。所謂的「非轉移性的」意指是良性的或保留在原發部位並沒有滲入淋巴管或血管系統或原發部位以外的組織的癌。通常，非轉移性的癌是為0、1或II期癌，並且偶爾為III期癌的任何癌。提到腫瘤或癌為「O期」、「I期」、「II期」、「III期」或「IV期」是指使用本領域已知的總體時期分組或羅馬數字分期法(Overall Stage Grouping or Roman Numeral Stagingmethod)的腫瘤或癌的分級。儘管癌的實際階段依賴於癌的類型，但通常，0期癌是原位病變，I期癌是小的局部的腫瘤，II和III期癌是表現出涉及局部淋巴結的局部晚期腫瘤，和IV期癌代表轉移性癌。每種類型腫瘤的具體階段是熟練的臨床醫生已知的。如本文所用的「腫瘤」是指所有腫瘤性的細胞生長和增殖(無論惡性或良性的)以及所有癌前的和癌的細胞和組織。所謂的「原發腫瘤」或「原發癌」意指起初的癌而不是定位於在受治療者體內的其他組織、器官或位置的轉移性的病變。所謂的「良性腫瘤」或「良性癌」意指保持局限於起源的部位並且不具有浸潤、侵入或轉移至遠處部位的能力的腫瘤。本文「癌復發」是指治療後癌的再次發生，並包括原發器官中癌的再次發生以及癌在原發器官外部再次發生時的遠處復發。所謂的「腫瘤休眠」意指其中腫瘤細胞存在但腫瘤發展不是臨床上明顯的長時間靜止狀態。在篩查或診斷試驗中休眠腫瘤可或不可被檢測。所謂的「腫瘤負荷」意指體內癌細胞的數目、腫瘤的大小或癌的量。腫瘤負荷也被稱為腫瘤負載。所謂的「腫瘤數目」意指腫瘤的數目。所謂的「受治療者」意指哺乳動物，包括但不限於人類或非人類的哺乳動物，例如牛科動物、馬科動物、犬科動物、綿羊科動物或貓科動物。優選地，受治療者是人類。受治療者「群體」是指患有癌的受治療者組,例如在臨床試驗中，或如腫瘤學家按照FDA批准用於特定適應症的、例如癌新輔助療法所見到的。在一個實施方案中，群體包括至少3000例受治療者。
術語「抗癌療法」是指在治療癌中有用的療法。抗癌治療劑的實例包括但不限於例如手術、化學治療劑、生長抑制劑、細胞毒性劑、用於放射療法的劑、抗血管生成劑、細胞凋亡劑、抗微管蛋白劑以及治療癌的其他劑，例如抗HER-2抗體、抗CD20抗體、表皮生長因子受體(EGFR)拮抗劑(例如酪氨酸激酶抑制劑HER1/EGFR抑制劑(諸如埃羅替尼(Tarceva )、血小板衍生的生長因子的抑制劑(諸如GleeVeCTM(甲磺酸伊馬替尼))、C0X_2抑制劑(例如塞來昔布)、幹擾素、細胞因子；與下列目標ErbB2、ErbB3、ErbB4、PDGFR- β、BlyS、APRIL、BCMA或VEGF受體、TRAIL/Apo2中的一個或多個結合的拮抗劑(例如中和抗體)以及其他的生物活性和有機的化學劑等。本發明中也包括其組合。
如本文所用的，術語「細胞毒性劑」是指抑制或阻斷細胞功能和/或導致細胞破壞的物質。該術語意在包括放射性同位素(例如I131、I125、Y90和Re186)、化學治療劑和毒素例如細菌、真菌、植物或動物來源的酶促活性的毒素或其片段。「化學治療劑」是在癌的治療中有用的化學化合物。化學治療劑的實例包括在癌的治療中有用的化學化合物。化學治療劑的實例包括烷化劑例如噻替派和CYTOXAN 環磷醯胺(cyclosphosphamide);燒基磺酸酯例如白消安、英丙舒凡和哌泊舒凡；氮丙唳例如苯佐替派(benzodopa)、卡巴醌、美妥替哌(meturedopa)和烏瑞替派(uredopa)；乙撐亞胺和甲基蜜胺(methylamelamines)包括六甲蜜胺、曲它胺、三亞乙基磷醯胺(trietyIenephosp horamid)、三亞乙基硫代憐酉先胺(triethiyIenethiophosphoramide)和三輕甲基蜜胺(trimethylolomelamine);多聚乙醯(尤其是布拉它辛和布拉它辛酮)；喜樹鹼(包括合成類似物拓撲替康)；苔蘚抑素；callystatin ;CC_1065 (包括其阿多來新、卡折來新和比折來新合成類似物)；自念珠藻環肽(尤其是自念珠藻環肽I和自念珠藻環肽8);多拉司他汀；duocarmycin(包括合成類似物KW-2189和CB1-TM1)；艾槽素(eleutherobin);水鬼蕉鹼(pancratistatin);匍枝珊瑚醇(sarcodictyin)；spongistatin ;氮芥例如苯丁酸氮芥、萘氮芥、cholophosphamide、雌莫司汀、異環磷醯胺、雙氯乙基甲胺、鹽酸甲氧氮芥、美法侖、新氮芥、苯芥膽留醇、潑尼莫司汀、曲磷胺、尿嘧啶氮芥；亞硝基脲例如亞硝基脲氮芥、氯脲菌素、福莫司汀、洛莫司汀、尼莫司汀和雷莫司汀(ranimnustine);抗生素例如烯二炔類抗生素(諸如加裡剎黴素，尤其是加裡剎黴素YlI和加裡剎黴素 ω (參見，例如 Agnew，Chem Intl.Ed.Engl., 33: 183-186 (1994));達內黴素包括達內黴素A ;二磷酸鹽例如氯膦酸鹽；埃斯培拉黴素；以及新制癌菌素髮色團以及相關的色素蛋白烯二炔類抗生素髮色團)、阿克拉黴素(aclacinomysins)、放線菌素、authramycin、重氮絲氨酸、博來黴素、放線菌素C、卡柔比星(carabicin)、洋紅黴素、嗜癌素、色黴素(chromomycinis)、放線菌素D、道諾黴素、地託比星、6-重氮-5-氧-L-正亮氨酸、ADRIAMYCIN 阿黴素(包括嗎啉代阿黴素、氰基嗎啉代阿黴素、2-吡咯啉代阿黴素和脫氧阿黴素)、表柔比星、依索比星、伊達比星、麻西羅黴素、絲裂黴素例如絲裂黴素C、麥考酚酸、諾拉黴素、橄欖黴素、培洛黴素、泊非黴素(potfiromycin)、嘌呤黴素、三鐵阿黴素、羅多比星、鏈黑菌素、鏈佐星、殺結核菌素、烏苯美司、淨司他丁、佐柔比星；抗代謝物例如甲氨蝶呤和5-氟尿嘧啶(5-FU);葉酸類似物例如二甲葉酸、甲氨蝶呤、蝶醯蝶呤、三甲曲沙；嘌呤類似物例如氟達拉濱、6-巰基嘌呤、硫咪嘌呤、硫鳥嘌呤；嘧啶類似物例如安西他濱、阿扎胞苷、6-氮尿苷、卡莫氟、阿糖胞苷、雙去氧尿苷、去氧氟尿苷、依諾他濱、氟尿苷；雄性激素例如卡魯睪酮、丙酸屈他雄酮、環硫雄醇、美雄烷、睪內酯；抗腎上腺物例如氨魯米特、米託坦、曲洛司坦；葉酸補充物例如亞葉酸(frolinic acid);醋葡醒內酯；醒磷醯胺糖苷；氨基果糖酸；恩尿喃唳；安吖唳；百垂布昔(bestrabucil);比生群；依達曲沙(edatraxate) ；defofamine ;地美可辛；地卩丫醌；依氟鳥氨酸(elfornithine);依利醋銨；埃博黴素；依託格魯；硝酸鎵；羥基脲；蘑菇多糖；氯尼達明(1nidainine);美登醇(maytansinoid)例如美登素和安絲菌素；米託胍腙；米託蒽醌；莫哌達醇(mopidanmol)；二胺硝吖唳(nitraerine);噴司他丁 ；蛋氨氮芥；卩比柔比星；洛索蒽醌；鬼臼酸乙肼(podophyllinic acid ;2_ethylhydrazide);甲節餅；PSK 多糖絡合物(JHS NaturalProducts, Eugene, OR);雷佐生；根黴素；西佐喃；螺旋鍺；細交鏈孢菌酮酸；三亞胺醌；2，r，2"-三氯三乙胺；單端孢黴烯(尤其是T-2毒素、疣孢黴素(verracurin)A、杆孢菌素A和蛇形菌素(anguidine));烏拉坦；長春地辛；達卡巴嗪；甘露莫司汀；二溴甘露醇；二溴衛矛醇；哌泊溴燒；gacytosine ;阿拉伯糖苷(「Ara C」)；環磷醯胺；噻替派；紫杉燒例如TAXOL 紫杉醇(Bristol-Myers Squibb Oncology, Princeton, N.J.)、ABRAXANE 無Cremophor且白蛋白改造的紫杉醇納米顆粒製劑(American Pharmaceutical Partners,Schaumberg, Illinois)和 TAXOTERE 多西紫杉醇(doxetaxel) ( Rhdne-PoulencRore Antony, France);苯丁酸氮芥(chloranbucil) ;GEMZAR 吉西他濱；6_ 硫鳥嘌呤；巰基嘌呤；甲氨蝶呤；鉬類似物例如順鉬和碳鉬；長春鹼；鉬；依託泊苷(VP-16);異環磷醯胺；米託蒽醌；長春新鹼；NAVELBINE 長春瑞濱；諾消靈；替尼泊苷；依達曲沙；道諾黴素；氨喋呤；希羅達；伊班膦酸鹽；伊立替康(Camptosar，CPT-1I)(包括與5-FU和甲醯四氫葉酸一起的伊立替康的治療方案)；拓撲異構酶抑制劑RFS 2000;二氟甲基鳥氨酸(difluorometlhylornithine) (DMFO);類視黃醇例如視黃酸；卡培他濱；考布他汀；甲醯四氫葉酸(LV);奧沙利鉬，包括奧沙利鉬治療方案(FOLFOX);減少細胞增殖的PKC-a、Raf、H-Ras, EGFR(例如埃羅替尼(Tarceva ))和VEGF-A的抑制劑以及上述任何一種物質的藥學上可接受的鹽、酸或衍生物。這一定義中還包括作用為調節或抑制激素對腫瘤的作用的抗激素劑例如抗雌激素藥和選擇性雌激素受體調節劑(SERM)，包括諸如三苯氧胺(包括NOLVADEX 三苯氧胺)、雷洛昔芬、屈洛昔芬、4-羥基三苯氧胺、曲沃昔芬、鹽酸雷洛昔芬(keoxifene)、LYl 17018、奧那司酮和FAREST0N託瑞米芬；抑制在腎上腺中調節雌激素產生的芳香酶的芳香酶抑制劑，例如，諸如4(5)-咪唑、氨魯米特、MEGASE 醋酸甲地孕酮、AROMASIN 依西美坦、福美坦(formestanie)、法倔唑、RIVISOR 伏氯唑、FEMARA 來曲唑和ARIMIDEX 阿那曲唑；以及抗雄性激素藥例如氟他胺、尼魯米特、比卡魯胺、亮丙瑞林和戈舍瑞林；以及曲沙他濱(1，3-二氧戍環核苷胞喃唳類似物)；反義寡核苷酸，尤其是抑制在粘附細胞(abherantcell)增殖中涉及的信號通路中的基因(例如，諸如PKC-a、Raf和H-Ras)的表達的那些；核酶例如VEGF表達抑制劑(諸如ANGIOZΥΜΕ 核酶)和HER2表達抑制齊U;疫苗例如基因療法疫苗，諸如ALLOVECTIN 疫苗、LEUVECTIN 疫苗和VAXID 疫苗；PROLEUKIN rIL-2; LURTOTECAN 拓撲異構酶 I 抑制劑；ABARELIX rmRH;長春瑞濱和埃斯培拉黴素(參見美國專利第4，675，187號)以及上述任何一種物質的藥學上可接受的鹽、酸或衍生物。當本文使用「生長抑制劑」時是指在體外和/或體內抑制細胞生長的化合物或組合物。因此，生長抑制劑可是顯著減小S期中細胞的百分比的劑。生長抑制劑的實例包括阻斷細胞周期進行(在除了 S期的某處)的劑，例如誘導Gl停滯和M期停滯的劑。典型的M期阻斷劑包括長春鹼類(vincas)(長春新鹼和長春花鹼)、TAXOL 和拓撲異構酶II抑制劑例如阿黴素、表柔比星、道諾黴素、依託泊苷和博來黴素。停滯Gl的那些劑也擴溢至S期停滯，例如DNA烷化劑諸如三苯氧胺、潑尼松、達卡巴嗪、雙氯乙基甲胺、順鉬、甲氨蝶呤、5-氟尿卩密唳和阿糖胞苷。進一步的信息可在The Molecular Basis of Cancer(癌的分子基礎)，Mendelsohn 和 Israel 編輯，第 I 章,Murakami 等人題名為 「Ce 11 cycle regulation,oncogenes, and antineoplastic drugs (細胞周期調節、致癌基因和抗腫瘤藥物)」，(WBSaunders !Philadelphia, 1995)，具體地可在第 13 頁中找到。術語「細胞因子」是用於由一種細胞群釋放的對其他細胞起細胞間介質作用的蛋白質的通用術語。這種細胞因子的實例是淋巴因子、單核因子和傳統的多肽激素。細胞因子中包括生長激素例如人類生長激素、N-蛋氨醯人類生長激素和牛生長激素；甲狀旁腺激素；甲狀腺素；胰島素；胰島素原；鬆弛素；鬆弛素原；糖蛋白激素例如促濾泡素(FSH)、促甲狀腺激素(TSH)和黃體生成素(LH);表皮生長因子；肝細胞生長因子；成纖維細胞生長因子；催乳素；胎盤催乳素；腫瘤壞死因子α和β ;米勒管抑制物質；小鼠促性腺激素相關肽；抑制素；活化素；血管內皮生長因子；整聯蛋白；血小板生成素(TPO);神經生長因子例如NGF-α ;血小板生長因子；轉化生長因子(TGF)例如TGF-α和TGF-β ;胰島素樣生長因子I和II ;紅細胞生長素(EPO);骨誘導因子；幹擾素例如幹擾素a、β和Y ;集落刺激因子(CSF)例如巨噬細胞-CSF (M-CSF)、粒細胞-巨噬細胞-CSF (GM-CSF)和粒細胞CSF(G-CSF);白細胞介素(IL)例如 IL-1、IL-1 a、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-10、IL-1U IL-12 ;腫瘤壞死因子例如TNF-a或TNF-β以及其他多肽因子包括LIF和kit配基(KL)。如本文所用的，術語細胞因子包括來自天然來源或來自重組細胞培養物的蛋白質和天然序列細胞因子的生物活性等價物。如本申請中所用的術語「前藥」是指藥學上活性物質的前體或衍生物形式，其與母體藥物相比對腫瘤細胞的細胞毒性較小並且能夠被酶促地活化或轉化成更有活性的母體形式。參見，例如Wilman, 「Prodrugs in Cancer Chemotherapy (癌化學療法中的前藥)」 Biochemical Society Transactions, 14,第 375-382 頁，第 615 期 MeetingBelfast(1986)和 Ste lla 等人，「Prodrugs:A Chemical Approach to Targeted DrugDeliVery (前藥:祀向藥物遞送的化學方法)」，Directed Drug Delivery, Borchardt 等人(編輯)，第247-267頁，Humana Press (1985)。本發明的前藥包括但不限於含磷酸酯前藥、含硫代磷酸酯前藥、含硫酸酯前藥、含肽前藥、D-胺基酸修飾的前藥、糖基化的前藥、含β -內醯胺前藥、含任選地取代的苯氧基乙醯胺的前藥或含任選地取代的苯基乙醯胺的前藥、5-氟胞嘧啶和其他可轉化為更有活性的無細胞毒性的藥物的5-氟尿苷前藥。可被衍生為前藥形式以便用於本發明的細胞毒性藥物的實例包括但不限於上文描述過的那些化學治療劑。所謂的「放射療法」意指使用定向的Y射線或β射線以產生對細胞的足夠的損害以便限制其正常地起作用的能力或完全毀壞細胞。應當理解的是有許多本領域已知的方法來確定治療的劑量和持續時間。典型的治療是作為一次施用提供的並且典型的劑量從10單位變化至200單位(戈瑞)每天。所謂的「減少或抑制」意指導致優選地20%或更多，更優選地50%或更多並且最優選地75%、85%、90%、95%或更多的總體下降的能力。減少或抑制可指正被治療的病症的症狀、轉移或微轉移的存在或大小、原發腫瘤的大小、休眠腫瘤的存在或大小或者在血管生成病症中血管的大小或數目。所謂的「反義核鹼基寡聚體」意指無論長度，與基因的編碼鏈或mRNA的至少一部分互補的核鹼基寡聚體。所謂的「核鹼基寡聚體」意指含有通過連接基團連在一起的至少八個核鹼基，優選地至少十二個並且最優選地至少十六個鹼基的鏈的化合物。這一定義中包括天然的和非天然的寡核苷酸(修飾的和未修飾的)，以及寡核苷酸模擬物例如蛋白核酸、鎖定核酸和阿拉伯糖核酸(arabinonucleic acid)。許多的核鹼基和連接基團可被用於本發明的核鹼基寡聚體，包括通過引用併入本文的美國專利公開第20030114412號(參見例如公布文本的第27-45段)和第20030114407號(參見例如公布文本的第35-52段)中描述的那些。核鹼基寡聚體還可被靶向至翻譯起始和終止位點。在某些實施方案中，反義核鹼基寡聚體包含從約8至30個核苷酸。反義核鹼基寡聚體還可包含至少40、60、85、120或更多個與VEGFmRNA或DNA互補的連續的核苷酸，並可以與全長mRNA或基因一樣長。所謂的「小RNA」意指長度為至少15個核苷酸，優選地17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34或35個核苷酸並且長度甚至多達50或100 (包括之間的所有整數)個核苷酸的任何RNA分子(單鏈或雙鏈的)。在某些實施方案中，小RNA能夠介導RNAi。如本文所用的，詞組「介導RNAi」是指辨別哪個RNA將被通過RNAi機理(machinery)或過程降解的能力。術語小RNA中包括「小幹擾RNA」和「微小RNA」。通常，微小RNA(miRNA)是通過切酶(Dicer)從約70個核苷酸的髮夾前體RNA加工來的小的(例如17-26個核苷酸)、單鏈非編碼的RNA。小幹擾RNA(SiRNA)具有相似的大小並且也是非編碼的；但是siRNA是從長的dsRNA加工來的並且通常是雙鏈的。siRNA還可包括短的髮夾RNA，其中siRNA雙鏈體的兩條鏈都包含於單一的RNA分子中。小RNA可被用於描述兩種類型的RNA。這些術語包括雙鏈RNA、單鏈RNA、分離的RNA(部分純化的RNA、本質上純的RNA、合成RNA、重組產生的RNA)以及通過添加、缺失、取代和/或改變一個或多個核苷酸而與天然存在的RNA不同的改變的RNA。這種改變可包括添加非核苷酸物質，例如在小RNA的末端或內部(在RNA的一個或多個核苷酸處)。本發明的RNA分子中的核苷酸還可包括非標準的核苷酸，包括非天然存在的核苷酸或脫氧核糖核苷酸。對核酸分子的其它修飾參見上文的「核鹼基寡聚體」。在一個實施方案中，RNA分子包含3』羥基基團。術語「靜脈內輸注」是指在大於約5分鐘，優選地在約30至90分鐘之間的一段時間內將藥物引入動物或人類患者的靜脈中，但是依照本發明，可選擇地將靜脈內輸注施用10小時或更短。術語「靜脈內團注」或「靜脈內推注」是指將藥物施用於動物或人類的靜脈中以便身體在約15分鐘或更短，優選地5分鐘或更短的時間內接受藥物。術語「皮下施用」是指通過從 藥物貯器相對緩慢地持續地遞送而將藥物引入動物或人類患者的皮膚下，優選地在皮膚和下面的組織之間的囊(pocket)中。可通過向上捏或拉起皮膚並離開下面的組織來產生囊。術語「皮下輸注」是指通過從藥物貯器相對緩慢地持續地遞送一段時間，包括但不限於30分鐘或更短，或者90分鐘或更短，而將藥物引入動物或人類患者的皮膚下，優選地在皮膚和下面的組織之間的囊中。任選地，可通過在動物或人類患者的皮膚下植入的藥物遞送泵的皮下植入來進行輸注，其中泵在預定的時間段例如30分鐘、90分鐘或跨越治療方案的長度的時間段內遞送預定量的藥物。術語「皮下團注」是指在動物或人類患者的皮膚下方施用藥物，其中團注藥物遞送優選少於約15分鐘，更優選少於5分鐘並且最優選少於60秒。優選地在皮膚和下面的組織之間的囊中施用，其中通過例如向上捏或拉起皮膚並離開下面的組織來產生囊。詞語「標記」在本文使用時是指直接或間接地與多肽軛合的可檢測的化合物或組合物。標記可是本身可被檢測的(例如放射性同位素標記或螢光標記)，或者在酶標記的情況下，可催化可被檢測的底物化合物或組合物的化學變化。I1.使用VEGF特異性拮抗劑進行早期腫瘤治療以及新輔助療法和輔助療法本發明以使用VEGF特異性拮抗劑治療患有良性的、癌前的或非轉移性的腫瘤的受治療者；治療患有休眠腫瘤或微轉移的受治療者；或者治療患有發展中的癌的受治療者或治療具有發展癌的風險的受治療者為特徵。例如，使用兩種獨立的方法抑制VEGF，即使用靶向VEGF-A的單克隆抗體(mAb)的單一療法和VEGF-A的遺傳缺失，使用早期腸腺瘤形成的Apcmin7+小鼠模型我們已經證明了，VEGF信號轉導的抑制足以停止腫瘤生長並且在腸腺瘤模型中提供了長期的生存益處。使用靶向VEGF-A的單克隆抗體(mAb)，我們也已經證明了，VEGF-A的抑制足以在I型多發性內分泌腺瘤(MENl)的小鼠模型中抑制垂體腺瘤的生長並降低過量的激素分泌。而且，使用小鼠胰島腫瘤模型(RIP-TPAg)和靶向VEGF-A的單克隆抗體(mAb)，我們已經證明了 VEGF的抑制導致腫瘤血管生成顯著減少，並且當被用作使用手術或化學治療劑的細胞減少後的療法時，阻止了腫瘤的再生長。本發明還以在新輔助療法和輔助情況中VEGF拮抗劑的使用為特徵。II1.VEGF特異性拮抗劑VEGF特異性拮抗劑是指能夠與VEGF結合，減小VEGF表達水平，或中和、阻斷、抑制、取消、減小或幹擾VEGF生物活性(包括VEGF與一種或多種VEGF受體結合和VEGF介導的血管生成以及內皮細胞存活或增殖)的分子(肽或非肽的)。優選地，VEGF特異性拮抗劑減小或抑制至少10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%或更多的VEGF的表達水平或生物活性。優選地，通過VEGF特異性拮抗劑抑制的VEGF是VEGF同種型或多種VEGF 同種型，例如 VEGF (8-109)、VEGF (1-109)、VEGF165、VEGF121、VEGF145、VEGF189 或 VEGF2Q6。在本發明的方法中有用的VEGF特異性拮抗劑包括特異性結合VEGF的肽或非肽的化合物，例如抗VEGF抗體和其抗原結合片段，與VEGF特異性結合的VEGF多肽的拮抗劑變體或其片段，以及與VEGF 特異性結合由此隔絕其與一種或多種受體結合的受體分子和衍生物(例如可溶的VEGF受體蛋白或其VEGF結合片段，或嵌合的VEGF受體蛋白)，融合蛋白(MiI^nVEGF-Trap(Regeneron))和 VEGF121-白樹毒素(Peregrine)。VEGF 特異性拮抗劑還包括與編碼VEGF多肽的核酸分子的至少一個片段互補的反義核鹼基寡聚體；與編碼VEGF多肽的核酸分子的至少一個片段互補的小RNA ;靶向VEGF的核酶；VEGF的肽體；以及VEGF適體。A.抗 VEGF 抗體在本發明的方法中有用的抗VEGF抗體包括以足夠的親和力和特異性與VEGF結合併可減少或抑制VEGF的生物活性的任何抗體或其抗原結合片段。抗VEGF抗體通常不會與其他的VEGF同源物例如VEGF-B或VEGF-C結合，也不與其它生長因子例如P1GF、PDGF或bFGF結合。在本發明的某些實施方案中，抗VEGF抗體包括但不限於，與通過雜交瘤ATCC HB10709生產的單克隆抗VEGF抗體A4.6.1相同的表位結合的單克隆抗體；依照Presta等人(1997) Cancer Res.57:4593-4599產生的重組的人源化抗VEGF單克隆抗體，包括但不限於被稱為貝伐單抗(BV;Avastin )的抗體。貝伐單抗包括突變的人類IgGl框架區和來自阻斷人類VEGF與其受體結合的鼠抗hVEGF單克隆抗體A.4.6.1的抗原結合互補性決定區。貝伐單抗的約93%的胺基酸序列(包括大部分的框架區)衍生自人類IgGl，而約7%的序列衍生自鼠抗體A.4.6.10貝伐單抗具有約149，OOO道爾頓的分子量並且是糖基化的。貝伐單抗和其他人源化抗VEGF抗體被進一步描述於2005年2月26日發布的美國專利第6，884，879號中。抗體的更多的實例包括但不限於如PCT申請公開第TO2005/012359號中描述的G6或B20系列抗體(例如G6-31，B20-4.1)。更多的抗體參見美國專利第7，060，269,6, 582，959,6, 703，020 號；第 6，342，219 號；第 6，054，297 號；W098/45332 ；WO96/30046 ；W094/10202 ；EP 0666868B1 ;美國專利申請公開第 2006009360,20050186208,20030206899、20030190317、20030203409和 20050112126 號;以及Popkov 等人，Journal ofImmunological Methods 288:149-164(2004)。可在本發明中使用的抗體的其他實例包括與包含殘基F17、M18、D19、Y21、Y25、Q89、191、K101、E103和C104的或可選擇地包含殘基F17、Y21、Q22、Y25、D63、183和Q89的人類VEGF上的功能表位結合的那些抗體。依照本發明的G6系列抗體是一種抗VEGF抗體，其衍生自依照PCT申請公開第W02005/012359號的圖7、24-26和34-35中任何一個的G6抗體或G6衍生抗體的序列。在一個實施方案中，G6系列抗體與包含殘基F17、Y21、Q22、Y25、D63、183和Q89的人類VEGF上的功能表位結合。依照本發明的B20系列抗體是一種抗VEGF抗體，其衍生自依照PCT申請公開第W02005/012359號的圖27-29中任何一個的B20抗體或B20衍生抗體的序列。在一個實施方案中，B20 系列抗體與包含殘基 F17、M18、D19、Y21、Y25、Q89、191、K101、E103 和 C104 的人類VEGF上的功能表位結合。依照本發明「功能表位」是指對抗體結合起積極作用的抗原的胺基酸殘基。抗原中起積極作用的殘基中任何一個的突變(例如，野生型VEGF的丙氨酸突變或同系物突變)將擾亂抗體的結合以致抗體的相對親和力比率(IC50突變型VEGF/IC50野生型VEGF)將大於5(參見W02005/012359的實施例2)。在一個實施方案中，通過溶液結合噬菌體展示ELISA確定相對親和力比率。簡單的說，將96孔 Maxisorp免疫板(NUNC)於4°C用待測抗體的Fab形式以溶於PBS中2ug/ml的濃度包被過夜，並用PBS、0.5% BSA和0.05%吐溫20 (PBT)於室溫封閉2h。將噬菌體展示hVEGF丙氨酸點突變體(殘基8-109形式)或野生型hVEGF (8-109)於PBT中的系列稀釋液首先在Fab包被的板上於室溫孵育15分鐘並將板用PBS、0.05%吐溫20 (PBST)清洗。用在PBT中1:5000稀釋的抗M13單克隆抗體辣根過氧化物酶(Amersham Pharmacia)軛合物檢測結合的曬菌體,用3,3' ,5,5'-四甲基聯苯胺(TMB, Kirkegaard & Perry Labs, Gaithersburg, MD)底物顯色約 5 分鐘，用 1.0M 的 H3PO4淬滅反應並在450nm用分光光度法讀數。IC50值的比率(IC50，ala/IC50，wt)代表結合親和力(相對結合親和力)減小的倍數。B.VEGF受體分子兩種最完全表徵的VEGF受體是VEGFRl (也稱為Flt-1)和VEGFR2 (也稱為KDR和鼠科同系物的FLK-1)。每個受體對每個VEGF家族成員的特異性不同但VEGF-A與Flt-1和KDR都結合。全長Flt-1受體包括具有七個Ig結構域的胞外結構域、跨膜結構域和具有酪氨酸激酶活性的胞內結構域。胞外結構域涉及VEGF的結合而胞內結構域涉及信號傳導。與VEGF特異性結合的VEGF受體分子或其片段可被用於本發明的方法中以結合VEGF蛋白並使VEGF蛋白掩蔽，由此使其不能進行信號轉導。在某些實施方案中，VEGF受體分子或其VEGF結合片段是可溶的形式例如Flt-1。受體的可溶形式通過與VEGF結合而對VEGF蛋白的生物活性施加抑制性作用，由此使其不能與存在於目標細胞表面上的其天然受體結合。還包括VEGF受體融合蛋白，其實例描述於下文。嵌合VEGF受體蛋白是具有衍生自至少兩種不同蛋白質(其中至少一種是VEGF受體蛋白(例如fIt-1或KDR受體))的胺基酸序列的能夠與VEGF結合併抑制VEGF生物活性的受體分子。在某些實施方案中，本發明的嵌合VEGF受體蛋白由衍生自僅兩種不同的VEGF受體分子的胺基酸序列構成；但是可將包含來自flt-1和/或KDR受體胞外配體結合區的一個、兩個、三個、四個、五個、六個或所有七個的Ig樣結構域的胺基酸序列與來自其他無關蛋白質的胺基酸序列(例如免疫球蛋白序列)連接。與Ig樣結構域結合的其他胺基酸序列對於本領域的技術人員來說是明顯的。嵌合VEGF受體蛋白的實例包括例如可溶的Flt-1/Fc、KDR/Fc或FLt-1/KDR/Fc (也被稱為VEGF Trap)(參見，例如PCT申請公開第W097/44453 號)。本發明的可溶的VEGF受體蛋白或嵌合VEGF受體蛋白包括未經由跨膜結構域而固定在細胞表面的VEGF受體蛋白。像這樣，VEGF受體的可溶形式，包括嵌合受體蛋白，儘管能夠與VEGF結合併使VEGF失活，但並不包含跨膜結構域並因此通常不會變得與表達分子的細胞的細胞膜有關聯。C.核酶核酶是能夠催化RNA的特異性切割的酶RNA分子。核酶通過對互補的目標RNA進行序列特異性雜交，之後進行核酸內切而起作用。可通過已知的技術識別可能的RNA目標中的特異性核酶切割位點。進一步的細節參見，例如Rossi, Current Biology,4:469-471(1994)和PCT申請公開第WO 97/33551號。以VEGF表達為目標的一種示例性核酶是Angiozyme (參見，例如美國專利申請公開第20060035278號)。D.適體適體是形成與目標分子例如VEGF多肽特異性結合的三級結構的核酸分子。適體的產生和治療使用在本領域中已廣泛建立。參見例如美國專利第5，475，096號。VEGF適體是聚乙二醇化修飾的寡核苷酸，其採用使其能夠與胞外VEGF結合的三維構象。治療上有效的以VEGF為目標來治療年齡相關的黃斑變性的適體的一個實例是哌加他尼(pegaptanib)(Macugen , Eyetech, New York)。關於適體的更多的信息可在美國專利申請公開第20060148748 中找到。E.肽體肽體是與編碼免疫球蛋白分子的一個片段或一部分的胺基酸序列相連接的肽序列。多肽可衍生自隨機的序列，其通過用於特異性結合的任何方法(包括但不限於噬菌體展示技術)來選擇。在一個實施方案中，所選擇的多肽可被連接於編碼免疫球蛋白Fe部分的胺基酸序列。與VEGF特異性結合併拮抗VEGF的肽體在本發明的方法中也是有用的。F.VEGF特異性拮抗性核酸分子本發明的方法還以VEGF特異性拮抗性核酸分子(包括反義核鹼基寡聚體和小RNA)的使用為特徵。 在一個實施方案中，本發明以針對VEGF RNA的反義核鹼基寡聚體的使用為特徵。通過與互補核酸序列(有義或編碼鏈)結合，反義核鹼基寡聚體能夠大概通過經由RNA酶H的RNA鏈的酶切割抑制蛋白質表達。在本發明的方法和組合物中尤其有用的反義核鹼基寡聚體的一個實例是嗎啉代寡聚體。嗎啉代物質(morpholinos)被用於阻斷其他分子對核酸分子中特異性序列的接近。它們可阻斷其他分子對核糖核酸(RNA)的小( 25鹼基)區域的接近。嗎啉代物質有時被稱作ΡΜ0,憐酸二胺嗎啉代寡核苷酸(phosphorodiamidate morpholino oligo)的首字母縮寫。嗎啉代物質被用於通過阻止細胞製造目標蛋白質或通過修飾mRNA前體的剪接而敲低基因功能。嗎啉代物質是通過標準的核酸鹼基配對與RNA的互補序列結合的合成分子。儘管嗎啉代物質具有標準的核酸鹼基，但那些鹼基是與嗎啉環而不是脫氧核糖環結合的並通過磷醯二胺基團而不是磷酸鹽連接。用無電荷的磷醯二胺基團取代陰離子的磷酸鹽消除了在通常生理pH範圍內的離子化，因此，有機體或細胞中的嗎啉代物質是無電荷分子。嗎啉代物質通過「空間阻斷」或與RNA中的目標序列結合併阻斷可與RNA以其他方式相互作用的分子來起作用。由於嗎啉代物質的完全非天然的骨架，細胞蛋白質無法識別嗎啉代物質。核酸酶不降解嗎啉代物質而嗎啉代物質不會活化toll樣受體並且因此它們不會活化固有的免疫響應例如幹擾素系統或NF- K B介導的炎症響應。還未知嗎啉代物質修飾DNA的甲基化。因此，針對VEGF的任何部分的可減少或抑制VEGF的表達水平或生物活性的嗎啉代物質在本發明的方法和組合物中是尤其有用的。本發明還以使用RNA幹擾(RNAi)抑制VEGF的表達為特徵。RNAi是通過引入雙鏈RNA(dsRNA)而起始的轉錄後基因沉默的形式。短的15至32個核苷酸的雙鏈RNA(通常被稱為「siRNA」、「小RNA」或「微小RNA」)在線蟲(Zamor等人，Cell 101:25-33)和哺乳動物組織培養細胞系(Elbashir等人，Nature 411:494_498，2001，據此通過引用併入)中在下調基因表達方面有效。在哺乳動物中這一方法的進一步的治療效力由McCaffrey等人(Nature 418:38-39.2002)在體內證實。小RNA在長度上至少是15個核苷酸，優選地17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35 個核苷酸，並且甚至在長度上多達50或100 (包括之間的所有整數)個核苷酸。這種與VEGF的任何區域基本上一致或互補的小RNA被包括為本發明的VEGF特異性拮抗劑。小RNA的特殊要求和修飾是本領域已知的並被描述於例如PCT申請公開第W001/75164 號和美國申請公開第 20060134787、20050153918、20050058982、20050037988和20040203145號中，其相關的部分通過引用併入本文。在特定的實施方案中，可合成siRNA或通過例如在酶切酶存在的情況下在dsRNA被加工為約17至約26個核苷酸的RNA分子的條件下加工較長的雙鏈RNA而產生siRNA。還可通過相應的DNA片段(例如髮夾DNA構建體)的表達產生siRNA。通常，siRNA具有特有的2-至3-核苷酸的3』懸垂末端，優選地這些是(2』 -脫氧)胸苷或尿嘧啶。siRNA通常含有3』羥基基團。在某些實施方案中，使用單鏈siRNA或平端dsRNA。為了進一步加強RNA的穩定性，使3』懸垂對降解穩定。在一個實施方案中，通過含有嘌呤核苷酸例如腺苷或鳥苷使RNA穩定。可選擇地，通過修飾的類似物取代嘧啶核苷酸，例如通過(2』 -脫氧)胸苷(thymide)取代尿苷2_核苷酸懸垂是可耐受的並且不影響RNAi的效力。2』羥基基團的缺乏顯著增強了組織培養基中懸垂的核酸酶抵抗力。
可通過包括化學合成或使用果蠅體外系統的重組生產的多種方案獲得siRNA分子。可從公司例如Dharmacon Research Inc.或Xeragon Inc.商業地獲得它們或者可使用商業上可得的試劑盒例如來自Ambion的Silencer siRNA構建試劑盒(目錄編號1620)或來自New England BioLabs的HiScribe RNAi轉錄試劑盒(目錄編號E2000S)合成它們。可選擇地，可使用RNA體外轉錄的標準程序和dsRNA退火程序來製備siRNA，所述程序例如 Elbashir 等人(Genes & Dev.15: 188-200, 2001), Girard 等人(Nature 442:199-202(2006)) ,Aravin 等人(Nature 442:203-207 (2006))，Grivna等人(Genes Dev.20:1709-1714(2006)))和 Lau 等人(Science 313:363-367(2006))中描述的那些。如Yu 等人(Proc.Natl.Acad.Sci USA, 99:6047-6052,2002)或 Paddison 等人(Genes & Dev, 16 =948-958,2002)中描述的短髮夾RNA(shRNA)，還可用於本發明的方法。設計shRNA以便將有義和反義鏈包含於一個RNA分子中並通過核苷酸(3個或更多)環連接。可使用如前文和Yu等人如上中所描述的標準體外T7轉錄合成來合成並純化shRNA。還可將shRNA亞克隆進具有小鼠U6啟動子序列的之後可被轉染進細胞中並用於shRNA的體內表達的表達載體中。可獲得用於將dsRNA轉染或引入哺乳動物細胞中的多種方法。例如，有若干商業上可獲得的對siRNA的基於脂質的轉染有用的轉染試劑，包括但不限於TransIT-TKO (Mirus,目錄號 MIR 2150) > Transmessenger (Qiagen,目錄號 301525)、Oligofectamine 和 Lipofectamine (Invitrogen,目錄號 MIR12252-011 和目錄號13778-075), si PO RT (Amb ion,目錄號 1631)、DharmaFECT (Fisher Scientific,目錄號T-2001-01)。還可商業獲得用於基於電穿孔的siRNA轉染的方法的試劑，例如siPORTer (Ambion Inc.目錄號1629)。還可使用顯微注射技術。還可從被引入細胞的表達構建體轉錄小RNA，其中表達構建體包括用於轉錄可操作地與一種或多種轉錄調節序列連接的小RNA的編碼序列。當需要時，質粒、載體或病毒載體還可被用於遞送dsRNA或siRNA並且這種載體是本領域已知的。每種轉染試劑的方案可從製造商獲得。IV.治療使用儘管已知關於VEGF在血管生成中的作用的大量信息，但關於VEGF在良性的、癌前的或非轉移性的癌中或在輔助或新輔助情況中的作用相對地所知甚少。我們已經發現VEGF特異性拮抗劑可被用於治療良性的、癌前的或非轉移性的癌；用於治療休眠腫瘤或微轉移；用於預防腫瘤復發或再生長；或用於在處於發展癌的風險的受治療者中治療或預防癌。VEGF特異性拮抗劑還可被用於在確定性手術之後治療患有非轉移性癌的受治療者的輔助療法；或用於治療患有可手術的癌的受治療者的新輔助療法，其中在手術去除受治療者中可手術的癌之前提供所述療法。儘管下文中治療應用被分為療法、預防、新輔助療法和輔助療法，但本領域技術人員應當理解的是這些種類不必互相排斥。A.腫瘤的分類術語癌包含增殖病症的集合，包括但不限於癌前的生長、良性腫瘤、惡性腫瘤和休眠腫瘤。良性腫瘤保持局限於起始的部位並且不具有向遠處部位浸潤、侵入或轉移的能力。惡性腫瘤會侵入並損害它們周圍的其他組織。它們還可獲得從起初的部位脫離並通常通過血流或通過淋巴結所在的淋巴系統向身體的其他部分擴散(轉移)的能力。休眠腫瘤是靜止的腫瘤，其中腫瘤細胞存在但腫瘤發展不是臨床上明顯的。將原發腫瘤按其發生的組織類型分類；將轉移性的腫瘤按癌細胞來自於的組織類型分類。久而久之，惡性腫瘤的細胞變得更加不正常並顯得更不像正常細胞。癌細胞外觀上的這一變化被稱為腫瘤分級，並且癌細胞被描述為良好分化的(低級別)、中度分化的、低分化的或未分化的(高級別)。良好分化的細胞表現相當正常並且類似於它們起源於的正常細胞。未分化的細胞是已經變得如此不正常以致不可能再確定細胞的來源的細胞。癌分期系統描述了在解剖學上癌已經擴散了多遠並嘗試將具有相似預後和治療的患者放入同樣的分期組。可進行幾個檢驗以幫助將癌分期，包括活組織檢查和某些成像檢驗例如胸部X射線、乳房X線照片、骨掃描、CT掃描和MRI掃描。血液檢驗和臨床評估也被用來評估患者的總體健康並檢測癌是否已經擴散至某些器官。為將癌分期，American Joint Committee on Cancer(美國癌症聯合委員會)使用 !分類系統首次將癌，尤其是實體瘤，以字母類別形式分類。將癌標明字母T (腫瘤大小)、N(可觸診的結節)和/或M(轉移)。T1、T2、T3和T4描述原發病變的不斷增加的大小；Ν0、N1、Ν2、Ν3指明漸進的晚期結節的複雜情況；以及MO和Ml反映了遠處轉移的不存在或存在。在第二種分期方法，也被稱為總體時期分組或羅馬數字分期法中，結合原發病變的大小以及結節擴散和遠處轉移 的存在，將癌分為O至IV期。在這一系統中，病例被分為由羅馬數字I至IV表示的四個時期，或被分類為「復發」。對於某些癌，O期被稱作「原位」或「Tis」，例如乳腺癌的導管原位癌或小葉原位癌。高級別腺瘤也可被分類為O期。通常I期癌是小的局部的通常可治癒的癌，而IV期癌通常代表不可手術的或轉移性的癌。II和III期癌通常是局部晚期的和/或表現出局部淋巴結的參與。通常，較高分期數字表示更廣泛的疾病，包括較大的腫瘤大小和/或癌向附近的淋巴結和/或原發腫瘤的相鄰器官的擴散。這些時期被精確地定義，但定義對於每種癌來說是不同的並且是本領域技術人員已知的。許多癌檔案(registry)，例如NCI 的 Surveillance, Epidemiology, and EndResults Program(監測、流行病學和最終結果項目)(SEER)使用了總結分期。這一系統被用於所有類型的癌。它將癌病例分為五個主要的類別:原位的是早期癌，其僅存在於其開始的細胞層。局部的是限於其開始的器官，沒有擴散跡象的癌。區域的是已經超出初始的(原發)部位向鄰近的淋巴結或器官和組織擴散的癌。遠處的是已經從原發部位向遠處器官或遠處淋巴結擴散的癌。未知的被用來描述沒有足夠的信息以表明時期的病例。此外，對於癌來說在已經去除原發腫瘤後幾個月或幾年復發是常見的。在所有可見的腫瘤已經被根除後重現的癌被稱為復發疾病。在原發腫瘤的區域中重現的疾病是原處復發，而作為轉移重現的疾病被稱為遠處復發。休眠腫瘤是以存在腫瘤細胞但腫瘤發展不是臨床上明顯的靜止狀態存在的腫瘤。微轉移是已經從原發腫瘤向身體其他部分擴散的小轉移或許多細胞。在篩查或診斷試驗中微轉移可或不可被檢測。本發明的方法對預防休眠腫瘤或微轉移的發生或者腫瘤的復發是有用的，例如在休眠腫瘤或微轉移存在但可或不可被臨床檢測的情況下。本發明的方法還對早期癌的治療是有用的，包括但不限於良性的、癌前的或非轉移性的腫瘤。這包括任何O、I或II期的腫瘤；任何非轉移性的II期腫瘤；任何通常先於癌或發展為癌的疾患，包括但不限於發育異常；以及任何保持局限於起始的部位並且沒有向遠處部位浸潤、侵入或轉移的腫瘤。良性的、癌前的或非轉移性的腫瘤的實例包括息肉、腺瘤、纖維瘤、脂肪瘤、胃泌素瘤、胰島素瘤、軟骨瘤、骨瘤、血管瘤、淋巴管瘤、腦脊膜瘤、平滑肌瘤、橫紋肌瘤、鱗狀細胞乳頭狀瘤、聽神經瘤、神經纖維瘤、膽管囊腺瘤、平滑肌瘤、間皮瘤、畸胎瘤、粘液瘤、沙眼、肉芽瘤、錯構瘤、移行細胞乳頭狀瘤、唾液腺的多形性腺瘤、硬纖維瘤、皮樣囊乳頭狀瘤、囊腺瘤、局灶性結節狀增生和結節狀再生性增生。由於在原發腫瘤生長和轉移中都涉及血管生成，因此本發明提供的抗血管生成治療能夠抑制腫瘤在原發部位的腫瘤性生長以及預防腫瘤在繼發部位的轉移，由此允許通過其他治療劑攻擊腫瘤。本文有待治療的癌的實例包括實體和非實體或軟組織的腫瘤。實例包括但不限於癌、淋巴瘤、胚細胞瘤、肉瘤和白血病。這種癌的更具體的實例包括鱗狀細胞癌；肺癌(包括小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺的腺癌和肺的鱗狀癌)；腹膜癌，肝細胞癌，胃(gastric)或胃(stomach)癌(包括胃腸癌)；胰腺癌；成膠質細胞瘤；子宮頸癌；卵巢癌；肝癌(liver cancer);膀胱癌；肝細胞瘤；乳腺癌；結腸癌；結腸直腸癌；子宮內膜或子宮癌、唾液腺癌 』腎(kidney)或腎(renal)癌；肝癌(liver cancer);前列腺癌；外陰癌；甲狀腺癌；肝癌(hepati·c carcinoma);和不同類型的頭頸癌，以及B細胞淋巴瘤(包括低級別/濾泡性非霍奇金淋巴瘤(NHL);小淋巴細胞性(SL)NHL ;中等級別/濾泡性NHL ;中等級別瀰漫性NHL ;高級別免疫母細胞性NHL ;高級別淋巴母細胞性NHL ;高級別小無核裂細胞性NHL ;腫塊性疾病NHL ;套細胞淋巴瘤；AIDS相關的淋巴瘤；以及瓦爾登斯特倫巨球蛋白血症)；慢性淋巴細胞性白血病(CLL);急性成淋巴細胞性白血病(ALL);毛細胞性白血病；慢性原始粒細胞性白血病和移植後淋巴增生性疾病(PTLD)，以及與母斑細胞病、水腫(例如與腦瘤相關的)和梅格斯症候群相關的非正常血管增生。更具體地，可通過本發明的VEGF特異性拮抗劑治療的癌包括乳腺癌、結腸直腸癌、直腸癌、非小細胞肺癌、非霍奇金淋巴瘤(NHL)、腎細胞癌、前列腺癌；肝癌；胰腺癌；軟組織肉瘤，卡波西肉瘤、類癌、頭頸癌、腦瘤、神經膠質瘤(例如間變性星形細胞瘤、間變性少突星形細胞瘤、間變性少突神經膠質瘤、多形性膠質母細胞瘤)、黑素瘤、卵巢癌、間皮瘤和多發性骨髓瘤。更優選地，本發明的方法被用於治療人類患者中的結腸直腸癌。B.腺瘤在一個實施方案中，將本發明的方法用於治療被稱為腺瘤的良性上皮細胞腫瘤。腺瘤是具有腺性起源的良性腫瘤。腺瘤通常起源於用於分泌的上皮細胞。上皮細胞遍布身體但僅僅是一部分這種細胞用於分泌。被用於分泌的上皮細胞構成了被稱為腺的身體特殊部分。腺承擔形成身體中許多物質的職責，所述物質包括但不限於汗、唾液、母乳、黏液和激素。腺瘤可從身體中大多數腺的細胞形成。腺瘤可以與惡性或癌性腫瘤相似的方式形成。腺瘤是良性的並因此不會向其他器官或組織轉移或擴散。儘管大多數腺瘤保持良性，但一些腺瘤可發展為惡性腫瘤，並且如果其發生，新的惡性腺瘤被稱為腺癌。例如，結腸和直腸癌開始時可作為腺瘤或息肉但後來發展為腺癌；支氣管腺瘤可發展為肺癌。常常，腺瘤對它們發展於其中的器官或腺組織具有顯著影響。腺瘤經常分泌過量水平的激素。當這發生時，對於受到影響的個體來說該作用可能是相當不舒服的。在有些情況，這種作用可為致命的。然而，有些腺瘤發展而沒有任何可證實的作用。有某些類型的腺瘤在女性中更加常見，例如肝的腺瘤。其他的例如結腸腺瘤是在高齡例如超過五十歲的成人中最常見的。此外，有使患者容易發展腺瘤的因素。例如，使用口服避孕藥的女性可能具有增加的發展肝腺瘤的風險。某些類型的腺瘤，例如結腸腺瘤，可能是可遺傳的。與腺瘤相關的症狀變化很大。例如，稱作纖維腺瘤的乳腺腺瘤，通常不產生症狀並且可以很小以致受影響的個體不能發覺它。但是其他的乳腺腺瘤可大到足以通過觸摸而注意到。相比之下，肺腺瘤可產生發熱、寒戰、呼吸短促和咳血(bloody cough)。使用多種技術診斷腺瘤，包括採集血液和尿樣品、超聲成像、計算機斷層(CT)掃描和磁共振成像(MRI)。活體組織檢查通常被用於確定腫瘤是良性的還是惡性的。本發明的方法對於腺瘤的治療、腺瘤復發的治療或預防(例如在具有休眠腫瘤或微轉移的受治療者中)或者對於具有與腺瘤有關的任何危險因素的受治療者中腺瘤的預防尤其有用。C.胃腸腫瘤在另一個實施方案中，本發明的方法被用於良性的、癌前的、非轉移性的或休眠的胃腸腫瘤或來自胃腸腫瘤的微轉移的治療。這包括任何O、I或II期腫瘤；通常先於胃腸癌或發展為胃腸癌的任何腫瘤或疾患；以及保持局限於起始的部位並且沒有向遠處部位浸潤、侵入或轉移的任何胃腸腫瘤。胃腸腫瘤中包括消化系統尤其是食管、胃、肝、膽道(膽囊、膽管、肝胰管壺腹(ampulla of vater))、腸、胰腺、結腸、直腸和肛門的任何息肉、腺瘤、腫瘤或癌。這些在以下詳述。⑴肛門癌肛門癌是肛管或痔環的惡性腫瘤。肛門癌經常開始為肛門發育異常。肛門發育異常由具有不正常變化 ，但沒有顯示出向周圍組織侵入的跡象的肛門細胞構成。肛門發育異常的最嚴重的形式被稱為原位癌，其中細胞的表現像癌細胞，但沒有侵入到正常細胞所在的一邊。隨時間過去，肛門發育異常最終變化至細胞變成擴散性並獲得轉移或脫離身體其他部分的能力的點。肛門發育異常有時被稱為肛門上皮內瘤樣病變(AIN)。當肛門癌開始擴散，它通常是通過直接侵入至周圍組織中或通過淋巴系統而擴散。儘管可能發生，但通過血液的肛門癌的擴散比較不常見。已經將幾種因素與肛門癌相關。最重要地，人類乳頭瘤病毒(HPV)的感染已經顯不出與肛門癌相關並與幾種其他的癌(包括子宮頸癌和頭頸癌)相關。另一種性傳播病毒人類免疫缺陷病毒(HIV)已經與肛門癌相關聯，感染HIV的個體具有增加的感染HPV的風險。由於肛門癌在發展為肛門癌之前首先開始表現為肛門發育異常，因此有AIN史的患者具有增加的發展肛門癌的風險。此外，在患有良性肛門病症例如肛門瘻、肛裂、肛周膿腫或痔瘡的患者中表現出增加的肛門癌比率。本發明的方法對於早期肛門癌的治療，肛門癌復發的治療或預防(例如在患有休眠腫瘤或微轉移的受治療者中)或具有任何與肛門癌相關的風險因素的受治療者中肛門癌的預防是尤其有用的。⑴結腸直腸和直腸癌結腸是大腸((large intestine),也被稱為大腸(large bowel))中最長的部分。在西方世界的男性和女性中，結腸癌都是第三類最常見的癌。在非洲裔美國人中發病率是最高的，他們也更可能死於這種疾病。結腸癌的風險在50歲之後大大升高，但是每年在較年輕的人群中也有大量病例被報告。通常，結腸和直腸癌被劃分在一起並具有與它們相關的相同的風險因素。具有結腸癌、息肉或遺傳性結腸癌症候群(例如FAP和HNPCC)的個人或家族史的個體，以及患有潰瘍性結腸炎或克隆病的患者都處於較高的風險中並可能在比一般人群更早的年齡就需要篩查。患有結腸癌的具有一級親屬關係(父母、兄弟姐妹或子女)的個體發展癌的可能性是沒有受感染的親屬的人的2至3倍。可用臨床醫生已知的多種技術診斷結腸癌。由於這些時期常常不與任何症狀相關，篩查測試是診斷處於早期的結腸癌(例如息肉或腺瘤)的最有效的方法。通常當息肉長成腫瘤時，其會出血或堵塞結腸而產生症狀。這些症狀包括從直腸出血、排便後大便或廁所中的血、大便形狀的改變(即變稀)、腹部絞痛以及在不需要排便時感覺到需要排便。由於腫瘤和息肉可間歇地出血，通過稱為大便潛血試驗(FOBT)的試驗可檢測大便樣品中的血液。FOBT單獨只能發現約24%的癌。可彎曲的乙狀結腸鏡檢查或結腸鏡檢查也可被用於診斷結腸直腸癌。通常，將結腸直腸癌如下分期:O期(也稱作原位癌)_癌局限於結腸壁最外面的部分。I期-癌已經擴散至結腸壁的第二和第三層，但沒有到結腸壁的外部或超出結腸壁。這也被稱為杜克斯A期結腸癌。II期-癌已經擴散穿過結腸壁，但是沒有侵入任何淋巴結(這些是幫助對抗感染和疾病的小結構)。這也被稱為杜克斯B期結腸癌。III期-癌已經擴散穿過結腸壁並且到淋巴結中，但是沒有擴散至身體其他區域。這也被稱為杜克斯C期結腸癌。IV期-癌已經 擴散至身體其他區域(即肝和肺)。這也被稱為杜克斯D期結腸癌。本發明的方法對於早期結腸直腸癌的治療，結腸直腸癌復發的治療或預防(例如在患有休眠腫瘤或微轉移的受治療者中)或具有任何與結腸直腸癌相關的風險因素(例如上文所描述的那些)的受治療者中結腸直腸癌的預防是尤其有用的。(iii)食管癌食管是連接咽喉與胃的肌肉質管。絕大多數的食管癌是從食管的內部膜(黏膜)而不是從構成食管其餘部分的肌肉或軟骨細胞發展的。食管的膜有些獨特因為其在從咽喉向胃伸展時是變化的。在上端(近端)食管中，食管的膜與咽喉的膜類似，由鱗狀細胞構成。因此當癌在這一區發展時，它們通常是鱗狀細胞癌。在低端(末端)食管中，更常見的類型的癌被稱為腺癌。除了擴散性的癌，患者有時被診斷為癌前病變，稱作原位癌。這些癌前病變可在發展為鱗狀細胞癌或腺癌之前被發現。當食管的膜經歷與癌的變化相似的變化但沒有任何向更深組織中侵入時發生原位癌。因此，儘管細胞本身具有癌樣特性，但由於沒有侵入發生，因此沒有擴散的風險。被認為是癌的前兆的另一種類型的病變本身被稱為巴雷特食管，其在下文中被深入地講解。每年食管癌發生於約13，500個美國人中，導致約12，500例死亡。大多數患者在他們50多歲或60多歲的時候被診斷出，並且被診斷出的男性是女性的大約四倍。過去，絕大多數( 85% )被診斷的食管癌是在上端食管中發生的鱗狀細胞癌。這種類型的癌的風險因素包括抽菸和飲酒(alcohol use)。儘管它們都被認為是獨立的風險因素(抽菸為更強的)，但在食管癌發展中這兩種因素之間似乎有協同作用。食管鱗狀細胞癌發展的其他潛在的致癌原是亞硝胺、石棉纖維和石油產品。有腺癌(通常為低端食管的)風險的患者群體與這截然不同。當與鱗狀細胞癌相t匕，腺癌之前是不太常見的疾病。但近來它已變得甚至比鱗狀細胞癌更普遍。通常腺癌被認為是產生於巴雷特食管的環境中，所述巴雷特食管是食管的正常膜被與胃相似的膜所替代的一種病症。通過內窺鏡檢查診斷巴雷特食管，其中使用纖維光學照相機以俯視進入食管中並活體組織檢查任何可疑區域。巴雷特食管被認為是低端食管長期暴露於胃酸所導致的。這種暴露發生於患有胃食管反流疾病(GERD)的患者中，其導致患者胃灼熱、胃氣脹、喪失食慾或隨著食物或晚上睡覺時胃痛的症狀。患有慢性GERD的患者具有發展巴雷特食管的風險並且因此具有較高的發展食管腺癌的風險。儘管通過定義，巴雷特食管在食管的膜不正常時發生，但是可有不同水平的不正常程度。將其從發育異常的方面來分級，其被用於確定巴雷特食管將有多大可能發展至癌。由於這些被認為是具有發展至癌的高可能性的癌變前變化，具有高級別發育異常的巴雷特食管的患者應當每三個月接受一次內窺鏡檢查或實際地接受治療。對於證明局部食管癌或發育異常的最靈敏的檢測是內窺鏡檢查。用內窺鏡檢查，可用纖維光學照相機直接觀察食管中所關心的位置，並且將不正常的位置，存或不存在流血，以及梗阻的量可視化。取決於食管癌的位置和程度，可能還需要進行喉鏡檢查(查看咽喉)或支氣管鏡檢查(查看氣管和氣道)。如今的標準醫護還包括在內窺鏡檢查期間進行超聲波，稱作內窺鏡超聲檢查(EUS)。為正確的診斷癌並將癌分期，通常進行CT掃描、吞鋇測試、X-射線以及其他更多的常規測試(包括血液篩查測試)。本發明的方法對於早期食管癌的治療，食管癌復發的治療或預防(例如在患有休眠腫瘤或微轉移的受治療者中)或具有任何與食管癌相關的風險因素(例如上文所描述的那些)的受治療者中 食管癌的預防是尤其有用的。(iv)膽囊癌膽囊是貯存並濃縮膽汁的小的梨形器官。膽囊和肝通過肝管相連。在美國膽囊的原發癌每年感染約6000名成人。這些癌的大部分是腺癌，具有亞型例如乳頭狀的、結節狀的、管狀的，這取決於顯微鏡下腫瘤細胞的外觀。比較不常見的亞型包括鱗狀細胞、印戒細胞和腺鱗癌(腺棘皮癌)。膽囊癌在老年患者中最常見，診斷時年齡中值為62-66歲。它在女性中更常見，女性比男性比率為約3: I。儘管已經將膽囊癌與膽結石、高的雌激素水平、吸菸、酒精、肥胖和女性性別相關聯，但膽囊癌的病因是未知的。而且患有炎性腸疾病(潰瘍性結腸炎和克隆病)的患者發展肝外膽道癌的可能性是10倍。通常，通過(thorough)病史和身體檢查以及實驗室工作(其包括代謝化學和肝功能組以尋找作為一般肝膽疾病的提示的血液中不同物質的不正常水平)來診斷膽囊癌。通常還進行尿分析以評估這些物質中的一些的尿中水平。還可使用其它的技術例如超聲、MR1、膽管造影和CT掃描。本發明的方法對於早期膽囊癌的治療，膽囊癌復發的治療或預防(例如在患有休眠腫瘤或微轉移的受治療者中)或具有任何與膽囊癌相關的風險因素(例如上文所描述的那些)的受治療者中膽囊癌的預防是尤其有用的。(V)胃癌胃癌是胃的癌。在美國，胃癌目前列為第14大最普遍的癌。40歲前很少發生胃癌，但之後其發病率隨年齡而增加。超過90%的胃癌產生於胃的膜。由於這種膜具有腺，因此從其而來的癌被稱為腺瘤或對於更晚期的形式來說稱為腺癌。儘管有其他可從胃中產生的癌(淋巴瘤-來自淋巴組織、平滑肌肉瘤-來自肌肉組織、鱗狀細胞癌-來自沒有腺的膜)，但絕大部分是腺癌。研究也已將幽門螺旋桿菌(Helicobacterpylori)感染與胃癌相關聯。幽門螺旋桿菌與胃潰瘍和慢性萎縮性胃炎有關，這可解釋幽門螺旋桿菌感染的患者中胃癌的高發病率。然而，幽門螺旋桿菌在胃癌的發展中的確切作用還不清楚。可用多種檢測精確地識別胃癌，包括鋇射線雙重比對(double contrast bariumradiograph)(所謂的「上端胃腸道」或「吞鋇(barium swallow)」)和上端內窺鏡檢查術。包括CT掃描、PET掃描和腹腔鏡檢查的其他程序被用於胃癌的診斷。本發明的方法對於早期胃癌的治療，胃癌復發的治療或預防(例如在患有休眠腫瘤或微轉移的受治療者中)或具有任何與胃癌相關的風險因素(例如上文所描述的那些)的受治療者中胃癌的預防是尤其有用的。(vi)肝癌有許多良性的肝腫瘤。血管瘤是最常見的肝良性腫瘤並且當在肝中形成良性的充血的腫瘤時發生。其他良性腫瘤包括腺瘤和局灶性結節狀增生。儘管這些腫瘤沒有侵入周圍的組織或轉移，但放射攝影 成像時常常很難分辨良性和惡性腫瘤之間的差別。肝細胞癌(HCC)是產生於肝細胞的癌，是最常見類型的原發肝癌並佔所有肝癌的70%左右。產生於肝中的膽管的癌被稱為膽管癌並佔所有肝癌的10-20%。這些癌可產生於肝中的膽管(稱為肝內膽管癌)或產生於從肝導出的膽管中(稱為肝外膽管癌)。其他類型的罕見的癌可在肝中發生。這包括血管肉瘤(惡性充血腫瘤)和肝胚細胞瘤(一種在非常小的兒童中發展的罕見癌)。有許多和肝癌相關的風險因素。在美國，肝癌的最常見的風險因素是肝硬化。在美國慢性C型肝炎病毒(HCV)感染也是肝癌常見的病因。世界範圍內，其他的風險因素例如慢性B型肝炎病毒(HBV)感染和黃麴黴毒素BI食品汙染更加常見。有幾種被用於檢測肝癌的篩查測試。一種可能的篩查測試涉及α-胎蛋白(AFP)的血液水平的檢測。發現AFP在胎兒血液中是以高水平存在的蛋白質，但正常地在出生後消失。在HCC存在的情況下AFP水平升高並且可是肝癌發展的標誌物。儘管對一些具有發展肝癌的高風險的患者常規地測試AFP水平，但不是所有肝癌都產生血液中高水平的AFP，而且到大多數患者被發現具有高AFP水平時，腫瘤已經處於晚期了。其他的血液蛋白有可能被用作肝癌的篩查工具。幾項研究已顯示蛋白質例如去-Y-羧基凝血酶原(DCP)和扁豆凝集素反應性部分(AFP-L3)的使用也可被用作肝癌形成的標誌物；然而，事實上很少使用這些蛋白質。此外，當懷疑是肝癌時，進行超聲、CT掃描、MR1、血管造影、氟脫氧葡萄糖(f Iuorodexoyglucose) _正電子發射斷層攝影(FDG-PET)、活體組織檢查和剖腹探查(exploratory laporatomy)以進一步診斷並將肝癌分期。本發明的方法對於早期肝癌的治療，肝癌復發的治療或預防(例如在患有休眠腫瘤或微轉移的受治療者中)或具有任何與肝癌相關的風險因素(例如上文所描述的那些)的受治療者中肝癌的預防是尤其有用的。(vii)胰腺癌胰腺是長約六英寸的梨形腺，位於腹部深處，在胃和脊椎之間。需指出的是胰腺被分為三個部分:最寬的部分被稱為頭部，中間的部分是本體而細末端被稱為尾部。胰腺負責製造激素(包括幫助調節血糖水平的胰島素)和經由腸用於消化食物的酶。通過胰腺中的導管運輸這些酶，這些酶流入通常的膽管，所述膽管將酶運進腸。胰腺癌的發病率在60和80歲之間是最高的，而在低於40歲的人群中非常少見。男性和女性中的發病率大致相當，儘管近年來女性的發病率升高，這可能是因為女性更高的吸菸率。吸菸者發展胰腺癌的可能性是二至三倍。如果一個人的母親、父親或兄弟姐妹已經患有所述疾病，那麼他的風險增至三倍。乳腺癌或結腸癌的家族史也增加風險。這一增加的風險是由於致癌基因上的遺傳突變。這種疾病實際上的病因還不知道，但是被認為是遺傳的遺傳上的變化和由環境暴露導致的變化聯合的結果。當醫生懷疑患者可能患有胰腺癌時，超聲、CT掃描和內窺鏡檢查被用來診斷並將癌分期。某些患有胰腺癌的患者可能具有升高的糖抗原19-9 (CA 19-9)水平。在具有升高的水平的患者中，所述水平在與其他測試聯合確認診斷上以及對在治療期間監測所述疾病是有用的。可在治療期間周期性的檢查所述水平以觀察癌是穩定的還是惡化的。本發明的方法對於早期胰腺癌的治療，胰腺癌復發的治療或預防(例如在患有休眠腫瘤或微轉移的受治療者中)或具有任何與胰腺癌相關的風險因素(例如上文所描述的那些)的受治療者中胰腺癌的預防是尤其有用的。(viii)小腸癌小腸(small bowel),也被稱為小腸(small intestine),是連接胃和大腸(也稱作結腸)的消化道部分。小腸有三個不同的部分:1)十二指腸，2)空腸以及3)迴腸。令人驚訝的是，儘管與消化道的其餘部分相比小腸長度驚人地長，小腸的癌卻非常少見。這包括在腸中開始的癌或從另一個身體部位擴散到那裡的癌。尤其是，在美國小腸癌佔所有腸癌的不到5%佔已診斷的所有癌的約0.5%。大多數小腸癌的病因是未知的。然而有一些可增加發展小腸癌的機會的可能的風險因素。一些實例包括克隆病、乳糜 寫病、peutz-jegher氏症候群和腸息肉病。取決於顯微鏡下的外觀和起源的細胞，有四種主要類型的小腸癌。腺癌是最常見的類型。它通常在腸的膜或內層中開始，並通常在十二指腸中發生。另一種類型是肉瘤並且典型的亞型是平滑肌肉瘤，其在小腸的肌肉壁中開始並通常在迴腸中發生。第三種類型是類癌，其在小腸的特殊的產生激素的細胞中開始並通常發生在迴腸中，有時在闌尾(其是大腸的第一部分)中。第四種類型是淋巴瘤，其在小腸的淋巴組織中開始並通常在空腸中發生。淋巴瘤的最典型的亞型是非霍奇金淋巴瘤。小腸癌的一種不常見的亞型是胃腸道間質腫瘤，其可在小腸三個部分的任何一個中發生。通常使用完整病史、身體檢查和大便樣品、內窺鏡檢查或結腸鏡檢查、鋇C射線、CT掃描、超聲或其他X射線診 斷小腸癌。
本發明的方法對於早期小腸癌的治療，小腸癌復發的治療或預防(例如在患有休眠腫瘤或微轉移的受治療者中)或具有任何與小腸癌相關的風險因素(例如上文所描述的那些)的受治療者中小腸癌的預防是尤其有用的。V.預防在本發明的另一個方面，我們已經發現VEGF特異性拮抗劑可被用於良性的、癌前的或早期癌的治療，或者腫瘤復發的治療或預防。可使用所述方法治療癌本身或預防癌向轉移性或擴散期或者向更高級別或時期的發展。例如，可使用本發明的方法治療患有O期癌或息肉的受治療者以便預防向I期或更高期腫瘤發展。同樣，在患有II期癌的患者中，可使用所述方法預防癌向III期或IV期癌發展。還可使用VEGF特異性拮抗劑預防腫瘤的復發。例如，如果腫瘤已經被識別並治療(例如用化學療法或手術去除)，可使用VEGF特異性拮抗劑預防結腸直腸腫瘤原處的復發或結腸直腸腫瘤的轉移。為預防腫瘤的復發，可使用VEGF特異性拮抗劑，例如治療休眠腫瘤或微轉移或者預防休眠腫瘤或微轉移的生長或再生長，其可是或可不是臨床上可檢測的。我們還已經發現VEGF特異性拮抗劑可被用於從未患過癌或具有發展癌的風險的受治療者中癌的預防。有多種已知的風險因素與癌相關並且上文中描述了它們中的許多。示例性的風險因素包括高齡(即超過50歲)、癌的家族史、HPV、HIV、HBV和HCV的病毒感染、使用口服避孕藥、肝硬化、潰瘍性結腸炎、巴雷特食管、幽門螺旋桿菌感染以及息肉或發育異常的存在。此外，認為已知患有遺傳性癌症候群的受治療者具有發展癌的風險。這種症候群的非限制性實例包括APC、HNPCC、加德納症候群和MEN1。發展癌的另外的風險因素可根據臨床評估確定並包括升高水平的激素或血液蛋白例如PSA(前列腺癌)、CA-125(卵巢癌)、AFP (肝癌)、DCP (肝癌)和CA 19-9 (胰腺癌)。

V1.新輔助療法本發明提供在受治療者，例如人類患者中在手術去除可手術的癌之前的新輔助療法的方法，其包括對患者(例如，其中患者已經被確診為腫瘤和/或癌)施用有效量的VEGF特異性拮抗劑，例如VEGF抗體。任選地，將VEGF特異性拮抗劑與至少一種化學治療劑聯合施用。在手術後對受治療者施用有效量的VEGF特異性拮抗劑以預防癌復發的其它的步驟也可與本文描述的新輔助療法一起使用。對於包括在手術後對受治療者施用有效量的VEGF特異性拮抗劑的其它步驟的方法來說，可使用任何本文描述的輔助方法。例如，一種方法包括在受治療者中治療癌，該方法包括下列步驟:a)包括多個治療周期的第一階段，其中每個周期包括以預定的間隔對受治療者施用有效量的VEGF特異性拮抗劑例如貝伐單抗，以及任選地至少一種化學治療劑山)確定性手術，藉以去除癌；以及任選地，c)包括多個維持周期的第二階段，其中每個周期包括以預定的間隔對受治療者施用有效量的VEGF特異性拮抗劑例如貝伐單抗，以及有或沒有任何化學治療劑。對於新輔助療法來說，可將VEGF特異性拮抗劑以一定量或一定時間(例如特定的治療方案的全部時間)施用以減少(例如20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、100%或更多的)腫瘤中癌細胞的數目；以減小腫瘤的大小(例如以允許切除)；以減少腫瘤負荷；以抑制(即降低至某種程度和/或終止)癌細胞浸潤入外周器官中；以減小腫瘤中血管密度；以抑制腫瘤轉移；以減少或抑制腫瘤生長或腫瘤細胞增殖；以減少或預防休眠腫瘤的生長；以減少或預防微轉移的生長或增殖；以增加或延長易患或被診斷為患有良性的、癌前的或非轉移性的腫瘤的受治療者的DFS或OS ;和/或以將與癌相關的一種或多種症狀緩解至某種程度。在一個實例中，施用新輔助療法以延長DFS或OS，其中在開始施用抗體後約2至5年評估DFS或OS。在某些實施方案中，在治療開始後或最初的診斷後約3-5年、約4-5年，或至少約4年或至少約5年評估受治療者的DFS或OS。通常，VEGF特異性拮抗劑是VEGF抗體例如貝伐單抗。在另一個實例中，與單獨用化學療法(例如紫杉烷，諸如紫杉醇)治療的受治療者相比，抗體和/或化學療法的施用可在受治療者群體中3年時降低約50% (其中此處「約50包括從約45%至約70%的 範圍)的疾病復發(在原發器官中的癌復發和/或遠處復發)，例如3年時降低約52%的在原發器官中的復發，和/或3年時降低約53%的遠處復發。可按照已知的方法對受治療者例如人類患者施用VEGF特異性拮抗劑例如VEGF抗體，已知方法為例如靜脈內施用(諸如為團注)或通過一段時間的持續輸注、通過肌肉內、腹膜內、腦脊髓內(intracerobrospinal)、皮下、關節內、滑膜內、鞘內、口服、局部或吸入途徑施用。抗體的靜脈內施用是優選的。儘管可將VEGF特異性拮抗劑例如VEGF抗體作為單一劑施用，但任選地用VEGF抗體和一種或多種化學治療劑的組合治療患者。在一個實施方案中，化學治療劑中的至少一種是紫杉烷。組合的施用包括使用分開的製劑或單一藥學製劑聯合施用或並行施用，以及以任一種順序的連續施用，其中優選地有一段時間兩種(或所有)活性劑同時發揮它們的生物活性。因此，可在VEGF特異性拮抗劑例如VEGF抗體的施用之前或之後施用化學治療齊U。在這一實施方案中，化學治療劑的至少一次施用和VEGF特異性拮抗劑例如VEGF抗體的至少一次施用之間的時間優選地為約I個月或更短，並最優選地為約2周或更短。可選擇地，將化學治療劑和VEGF特異性拮抗劑例如VEGF抗體以單一製劑或分開的製劑並行對患者施用。使用化學治療劑(例如紫杉烷)和VEGF抗體(例如貝伐單抗)組合的治療可對患者產生協同的或比加和更大的治療益處。為此通常將化學治療劑(如果施用)以已知的劑量或者由於藥物的組合作用或歸因於抗代謝化學治療劑的施用的消極副作用而任選地以降低的劑量施用。可依照製造商的使用說明書或由熟練醫師根據經驗來確定使用這種化學治療劑的製劑和給藥時間表。當所述化學治療劑是紫杉醇時，優選地將它每周(例如以80mg/m2)或每3周(例如以175mg/m2或135mg/m2)施用。適當的多西紫杉醇的劑量包括60mg/m2、70mg/m2、75mg/m2、100mg/m2(每3 周)；或 35mg/m2 或 40mg/m2 (每周)。上文公開了各種可組合的化學治療劑。在本發明的某些實施方案中，將與VEGF特異性拮抗劑例如VEGF抗體組合的化學治療劑包括但不限於，例如紫杉烷(包括多西紫杉醇和紫杉醇)、長春鹼類(vinca)(例如長春瑞濱或長春花鹼)、鉬化合物(例如碳鉬和順鉬)、芳香酶抑制劑(例如來曲唑、阿那曲唑或依西美坦)、抗雌激素藥(例如氟維司群和三苯氧胺)、依託泊苷、噻替派、環磷醯胺、甲氨蝶呤、多柔比星脂質體、聚乙二醇化的多柔比星脂質體、卡培他濱、吉西他濱、C0X-2抑制劑(例如塞來昔布)或蛋白體抑制劑(例如PS342)。當對受治療者施用蒽環類抗生素(例如阿黴素或表柔比星)時，優選地在施用VEGF特異性拮抗劑例如貝伐單抗之前和/或之後提供這一施用。然而，可將具有減小的心臟毒性的經修飾的蒽環類抗生素例如多柔比星脂質體(TLC D-99(MYOCET )、聚乙二醇化的多柔比星脂質體(CAELYX )或表柔比星與VEGF特異性拮抗劑例如貝伐單抗組
口 ο在施用時間表的一個實施方案中，本發明的新輔助療法包括第一步驟，其中在多個新輔助周期中對患者施用VEGF特異性拮抗劑例如貝伐單抗以及一種或多種的化學治療齊U，之後進行手術以確定性地去除腫瘤。每個新輔助周期取決於特定的治療計劃，由一至三周組成。例如，治療周期可是三周，其意味著患者每三周接受一劑量的化學療法和一劑量的貝伐單抗。治療周期也可是兩周，其意味著患者每隔一周接受一劑量的化學療法和一劑量的貝伐單抗。新輔助治療的整個第一階段可持續約4-8個周期。在本發明的某些實施方案中，新輔助療法在手術前持續不超過一年，在一個實施方案中不超過六個月。取決於疾病的類型和嚴重度，VEGF特異性拮抗劑例如貝伐單抗的優選的劑量是在從約I μ g/kg至約50mg/kg,最優選地在從約5mg/kg至約15mg/kg的範圍內，包括但不限於7.5mg/kg或IOmg/kg。在一些方面，化學療法方案涉及傳統的高劑量的間歇施用。在一些其他的方面，沒有預定間隔而使用較小但更頻繁的劑量來施用化學治療劑(「有節奏的化學療法」)。通過常規技術和測定很容易監測本發明的療法的進展。除了 VEGF抗體和化學治療劑之外，還可將其他的治療方案與之組合。例如，可施用第二(第三、第四等等)化學治療劑，其中第二化學治療劑或是另一種不同的紫杉烷化學治療劑或是非紫杉烷的化學治療劑。例如，第二化學治療劑可是紫杉烷(例如紫杉醇和多西紫杉醇)、長春鹼類(例如長春瑞濱)、鉬化合物(例如順鉬和碳鉬)、抗激素劑(例如芳香酶抑制劑或抗雌激素藥)、吉西他濱、卡培他濱等。示例性的組合包括紫杉烷/鉬化合物、 吉西他濱/紫杉烷、吉西他濱/長春瑞濱、長春瑞濱/紫杉烷、卡培他濱/紫杉烷等。可施用不同化學治療劑的「混合物」。可與VEGF抗體組合的其他治療劑包括以下任何一種或多種:另一種VEGF拮抗劑或VEGF受體拮抗劑例如第二抗VEGF抗體、VEGF變體、可溶的VEGF受體片段、能夠阻斷VEGF或VEGFR的適體、中和性抗VEGFR抗體、VEGFR酪氨酸激酶抑制劑及其任何組合。對使用本發明抗體的組合腫瘤療法有用的其他治療劑包括涉及腫瘤生長的其他因子例如EGFR、ErbB2 (也稱為Her2)、ErbB3、ErbB4或TNF的拮抗劑。在一個示例性實施方案中，VEGF特異性拮抗劑的組合物中不包括抗ErbB2抗體或者其片段或衍生物(例如Herceptin 抗體)。在本發明的某些實施方案中，可將抗VEGF抗體與以一種或多種酪氨酸激酶受體例如VEGF受體、FGF受體、EGF受體和TOGF受體為靶的小分子受體酪氨酸激酶抑制劑(RTKI)組合使用。許多治療性的小分子RTKI是本領域已知的，包括但不限於瓦他拉尼(vatalanib)(PTK787)、埃羅替尼(TARCEVA )、0S1-7904、ZD6474 (ZACTIMA )、ZD6126 (ANG453)、ZD1839、舒尼替尼(SUTENT )、司馬沙尼(semaxanib) (SU5416)、AMG706、AG013736、伊馬替尼(GLEEVEC )、MLN-518、CEP-701、PKC-412、拉帕替尼(Iapatinib) (GSK572016)、VELCADE 、AZD2171、索拉非尼(NEXAVAR )、XL880 和 CHIR-265。上文聯合施用的任何劑的適合的劑量是目前使用的那些並可由於該劑和VEGF抗體的組合作用(協同)而被降低。
除了上文的治療方案，可使患者經受放射療法。在本發明的某些實施方案中，所施用的VEGF抗體是完整的無保護的抗體。但可將VEGF抗體與細胞毒性劑軛合。在某些實施方案中，軛合的抗體和/或與其結合的抗原被細胞內化，導致軛合物殺死其所結合的癌細胞的治療效力增加。在一個實施方案中，細胞毒性劑靶向或幹擾癌細胞中的核酸。這種細胞毒性劑的實例包括美登醇(maytansinoids)、加裡剎黴素、核糖核酸酶和DNA核酸內切酶。VI1.輔助療法本發明提供輔助療法的方法，其包括在確定性手術後對患有非轉移性的癌的受治療者施用VEGF特異性拮抗劑例如VEGF抗體。例如，方法可包括以下步驟:a)包括多個治療周期的第一階段，其中每個周期包括以預定的間隔對受治療者施用有效量的VEGF特異性拮抗劑例如貝伐單抗，以及任選地至少一種化學治療劑；以及b)包括多個維持周期的第二階段，其中每個周期包括以預定的間隔對受治療者施用有效量的VEGF特異性拮抗劑例如貝伐單抗，但沒有任何化學治療劑；其中組合的第一和第二階段在最初的手術後治療後持續至少一年。在一個實施方案中，第一階段包括第一個多個治療周期，其中施用VEGF特異性拮抗劑例如貝伐單抗以及第一化學療法方案，之後是第二個多個治療周期，其中施用VEGF特異性拮抗劑例如貝伐單抗以及第二化學療法方案。對於輔助療法來說，可將VEGF特異性拮抗劑以一定量或一定時間(例如特定的治療方案的全部時間)施用以減少(例如20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、100%或更多的)腫瘤中癌細胞的數目；以減小腫瘤的大小；以減少腫瘤負荷；以抑制(即降低至某種程度和/或終止)癌細胞浸潤入外周器官中；以減小腫瘤中血管密度；以抑制腫瘤轉移；以減少或抑制腫瘤 生長或腫瘤細胞增殖；以減少或預防休眠腫瘤的生長；以減少或預防微轉移的生長或增殖；以減少或預防治療或去除後腫瘤的再生長；和/或以將與癌相關的一種或多種症狀緩解至某 種程度。在一些其它的實施方案中，可使用VEGF特異性拮抗劑以預防受治療者中癌的發生或復發。在一個實例中，在約四年後在受治療者群體中評估癌復發的預防以證實在群體的至少約80%中無疾病復發發生。在另一個實例中，在約3年時評估疾病復發的預防，其中與僅用化學療法治療的受治療者相比，疾病復發下降了至少約50%。通常在受治療者從手術中復原一段時間後施用VEGF特異性拮抗劑。這段時間可包括傷口癒合或手術切口癒合所需要的時間段、降低傷口裂開的風險所需要的時間段或受治療者恢復至與手術前的健康水平基本相似或更好的健康水平所需要的時間段。確定性手術完成和VEGF特異性拮抗劑的首次施用之間的時間段還可包括藥物假期所需要的時間段，其中受治療者需要或要求在治療方案之間的一段時間。通常，確定性手術完成和VEGF特異性拮抗劑療法開始之間的時間段可包括少於一周、I周、2周、3周、4周(28天)、5周、6周、7周、8周、3個月、4個月、5個月、6個月、7個月、8個月、9個月、10個月、11個月、I年、2年、3年或更久。在一個實施方案中，確定性手術和施用VEGF特異性拮抗劑之間的時間段大於2周並小於I年。在一個實例中，以有效延長無病生存期(DFS)或總體生存期(OS)的量施用VEGF特異性拮抗劑例如VEGF抗體，其中在抗體最初施用後約2至5年評估DFS或OS。在某些實施方案中，在治療開始後或最初的診斷後約3-5年、約4-5年或至少約4年或至少約5年評估受治療者的DFS或OS。按照已知的方法對受治療者例如人類患者施用VEGF特異性拮抗劑例如VEGF抗體，已知方法為例如靜脈內施用(諸如為團注)或通過一段時間的持續輸注、通過肌肉內、腹膜內、腦脊髓內、皮下、關節內、滑膜內、鞘內、口服、局部或吸入途徑施用。抗體的靜脈內施用是優選的。可將VEGF特異性拮抗劑作為單一劑施用。在其他的實施方案中，用VEGF特異性拮抗劑和一種或多種化學治療劑的組合治療患者。在一些實施方案中，化學治療劑中的至少一種是紫杉烷。組合的施用包括使用分開的製劑或單一藥學製劑的聯合施用或並行施用，以及以任一種順序的連續施用，其中任選地有一段時間兩種(或所有)活性劑同時發揮它們的生物活性。因此，可在VEGF特異性拮抗劑例如VEGF抗體的施用之前或之後施用化學治療劑。在這一實施方案中，化學治療劑的至少一次施用和VEGF特異性拮抗劑例如VEGF抗體的至少一次施用之間的時間優選地為約I個月或更短，並最優選地為約2周或更短。可選擇地，將化學治療劑和VEGF抗體以單一製劑或分開的製劑並行對患者施用。使用化學治療劑(例如紫杉烷)和VEGF抗體(例如貝伐單抗)組合的治療可對患者產生協同的或比加和更大的治療益處。為此通常將化學治療劑(如果施用)以已知的劑量或者由於藥物的組合作用或歸因於抗代謝化學治療劑的施用的消極副作用而任選地以降低的劑量施用。可依照製造商的使用說明書或由熟練 醫師根據經驗來確定使用這種化學治療劑的製劑和給藥時間表。當所述化學治療劑是紫杉醇時，優選地將它每周(例如以80mg/m2)或每3周(例如以175mg/m2或135mg/m2)施用。適當的多西紫杉醇的劑量包括60mg/m2、70mg/m2、75mg/m2、100mg/m2(每3 周)；或 35mg/m2 或 40mg/m2 (每周)。上文公開了各種可組合的化學治療劑。將與VEGF抗體組合的化學治療劑的實例包括但不限於，例如紫杉烷(包括多西紫杉醇和紫杉醇)、長春鹼類(例如長春瑞濱或長春花鹼)、鉬化合物(例如碳鉬和順鉬)、芳香酶抑制劑(例如來曲唑、阿那曲唑或依西美坦)、抗雌激素藥(例如氟維司群和三苯氧胺)、依託泊苷、噻替派、環磷醯胺、甲氨蝶呤、多柔比星脂質體、聚乙二醇化的多柔比星脂質體、卡培他濱、吉西他濱、C0X-2抑制劑(例如塞來昔布)或蛋白體抑制劑(例如PS342)。當對受治療者施用蒽環類抗生素(例如阿黴素或表柔比星)時，優選地在施用VEGF抗體之前和/或之後提供這一施用，例如以在下文的實施例中公開的方案，其中在手術後但在VEGF抗體和紫杉烷的施用之前對受治療者施用蒽環類抗生素/環磷醯胺的組合。然而，可將具有減小的心臟毒性的經修飾的蒽環類抗生素例如多柔比星脂質體(TLCD-99 (MYOCET )、聚乙二醇化的多柔比星脂質體(CAELYX )或表柔比星與VEGF抗體組合。在一個施用時間表中，本發明的輔助療法包括第一階段，其中在多個治療周期中對患者施用VEGF特異性拮抗劑例如VEGF抗體以及一種或多種的化學治療劑；和第二階段，其中將VEGF特異性拮抗劑例如VEGF抗體作為單一劑在多個維持周期內使用。每個治療周期取決於特定的治療計劃，由一至三周組成。例如，治療周期可包括貝伐單抗作為VEGF特異性拮抗劑並且可為三周，其意味著患者每三周接受一劑量的化學療法和一劑量的貝伐單抗。治療周期也可是兩周，其意味著患者每隔一周接受一劑量的化學療法和一劑量的貝伐單抗。治療的整個第一階段可持續約4-8個周期。在第二個維持階段，取決於特定的周期的長度，可兩周一次或三周一次地提供貝伐單抗並持續約30-50個周期。在某些實施方案中，輔助療法從治療的開始持續至少一年，並且在此之後密切注意受治療者的進展。取決於疾病的類型和嚴重度，VEGF抗體的優選的劑量是在從約lug/kg至約50mg/kg，最優選地在從約5mg/kg至約15mg/kg的範圍內，包括但不限於7.5mg/kg或10mg/kg。在一些方面,化學療法方案涉及傳統的高劑量的間歇施用。在一些其他的方面，沒有預定間隔而使用較小但更頻繁的劑量來施用化學治療劑(「有節奏的化學療法」)。通過常規技術和測定很容易監測本發明的療法的進展。與單獨用化學療法(例如紫杉烷諸如紫杉醇)治療的受治療者相比，抗體和化學療法的施用可在受治療者群體中3年時降低約50% (其中此處「約50%」包括從約45%至約70%的範圍)的疾病復發(在原發器官中的癌復發和/或遠處復發)的可能性，例如在3年時降低約52%的在原發器官中的復發和/或3年時降低約53%的遠處復發。本發明在本文提供了治療患有非轉移性的癌的人類受治療者的群體中的非轉移性的癌的方法，其包括在確定性手術之後對受治療者施用有效量的VEGF特異性拮抗劑例如VEGF抗體和至少一種化學治療劑，並在四年或更多年後評估受治療者以證實在約4年後至少約80% (優選地至少約85%)的受治療者中沒有疾病復發發生。所述群體可包括3000例或更多人類受治療者。本發明進一步涉及在患有非轉移性的癌的人類受治療者的群體中降低疾病復發的可能性的方法，其包括在確定性手術之後對受治療者施用有效量的貝伐單抗和至少一種化學治療劑，其中與單獨用紫杉烷治療的受治療者相比，3年時疾病復發的可能性降低至少約 50%。除了 VEGF抗體和化學治療劑之外，還可將其他的治療方案與之組合。例如，可施用第二(第三、第四等等)化學治療劑， 其中第二化學治療劑或是另一種不同的紫杉烷化學治療劑或是非紫杉烷的化學治療劑。例如，第二化學治療劑可是紫杉烷(例如紫杉醇和多西紫杉醇)、長春鹼類(例如長春瑞濱)、鉬化合物(例如順鉬和碳鉬)、抗激素劑(例如芳香酶抑制劑或抗雌激素藥)、吉西他濱、卡培他濱等。示例性的組合包括紫杉烷/鉬化合物、吉西他濱/紫杉烷、吉西他濱/長春瑞濱、長春瑞濱/紫杉烷、卡培他濱/紫杉烷等。可施用不同化學治療劑的「混合物」。可與VEGF抗體組合的其他治療劑包括以下任何一種或多種:另一種VEGF拮抗劑或VEGF受體拮抗劑例如第二抗VEGF抗體、VEGF變體、可溶的VEGF受體片段、能夠阻斷VEGF或VEGFR的適體、中和性抗VEGFR抗體、VEGFR酪氨酸激酶抑制劑及其任何組合。對使用本發明抗體的組合腫瘤療法有用的其他治療劑包括涉及腫瘤生長的其他因子例如EGFR、ErbB2 (也稱為Her2)、ErbB3、ErbB4或TNF的拮抗劑。在一個示例性實施方案中，VEGF特異性拮抗劑的組合物中不包括抗ErbB2抗體或者其片段或衍生物(例如Herceptin 抗體)。在某些實施方案中，可將抗VEGF抗體與以一種或多種酪氨酸激酶受體例如VEGF受體、FGF受體、EGF受體和TOGF受體為靶的小分子受體酪氨酸激酶抑制劑(RTKI)組合使用。許多治療性的小分子RTKI是本領域已知的，包括但不限於瓦他拉尼(PTK787)、埃羅替尼(TARCEVA )、0S1-7904、ZD6474 (ZACTIMA )、ZD6126 (ANG453)、ZD1839、舒尼替尼(SUTENT )、司馬沙尼(SU5416)、AMG706、AG013736、伊馬替尼(GLEEVEC )、MLN-518、CEP-701、PKC-412、拉帕替尼(GSK572016)、VELCADE 、AZD2171、索拉非尼(NEXAVAR )、XL880 和 CHIR-265。上文聯合施用的任何劑的適合的劑量是目前使用的那些並可由於該劑和VEGF抗體的組合作用(協同)而被降低。除了上文的治療方案，可使患者經受放射療法。在某些實施方案中，所施用的VEGF抗體是完整的無保護的抗體。但可將VEGF抗體與細胞毒性劑軛合。在某些實施方案中，軛合的抗體和/或與其結合的抗原被細胞內化，導致軛合物殺死其所結合的癌細胞上的治療效力增加。在一個實施方案中，細胞毒性劑靶向或幹擾癌細胞中的核酸。這種細胞毒性劑的實例包括美登醇、加裡剎黴素、核糖核酸酶和DNA核酸內切酶。VII1.劑量、製劑和持續時間以與良好的醫療實踐相符合的方式配製、給藥和施用VEGF特異性拮抗劑組合物。以這個角度所考慮的因素包括所治療的特定的病症、所治療的特定的受治療者、患者個體的臨床症狀、病症的病因、劑的遞送部位、施用的方法、施用的時間表、和執業醫師已知的其他因素。待施用的VEGF特異性拮抗劑的「治療上有效的量」將由這些考慮因素決定並且對預防、改善、或治療或穩 定良性的、癌前的或早期癌；或治療或預防腫瘤、休眠腫瘤或微轉移的發生或復發(例如在新輔助或輔助情況中)來說為必需的最小的量。VEGF特異性拮抗劑不需要，但任選地與目前用以預防或治療癌或發展癌的風險的一種或多種劑配製在一起。這些其他劑的有效量取決於製劑中存在的VEGF特異性拮抗劑的量、病症或治療的類型以及上文所討論的其他因素。通常以如上文中所用的同樣的劑量和施用途徑使用這些或以迄今使用的劑量的約從1%至99%使用這些。取決於疾病的類型和嚴重度，約I μ g/kg至100mg/kg (例如0.l_20mg/kg)的VEGF特異性拮抗劑是對患者施用的最初的候選劑量，無論例如是通過一次或多次分開的施用還是通過連續輸注施用。取決於上文所提及的因素，典型的每日劑量可從約lyg/kg變化至約100mg/kg或更多。尤其理想的劑量包括例如7.5mg/kg、10mg/kg和15mg/kg。對於幾天或更長時間的重複施用來說，取決於疾患，將治療維持直到癌被治療，通過上文描述的或本領域已知的方法進行測量。但其他劑量方案可以是有用的。在一個實例中，如果VEGF特異性拮抗劑是抗體，那麼將本發明的抗體以從約5mg/kg到約15mg/kg的劑量範圍，包括但不限於7.5mg/kg或10mg/kg每周、每兩周或每三周施用一次。通過常規技術和測定很容易地監測本發明的療法的進展。在一個實例中，貝伐單抗是VEGF特異性拮抗劑。以IOOmg和400mg無防腐劑、一次性使用的小瓶為治療應用提供貝伐單抗以遞送4ml或16ml的貝伐單抗(25mg/ml)。在240mg脫水的α，α -海藻糖、23.2mg磷酸鈉(單鹼的、一水合物)、4.8mg磷酸鈉(雙鹼的、無水的)、1.6mg聚山梨醇酯20和注射用水(USP)中配製IOOmg產品。在960mg脫水的α，α -海藻糖、92.8mg磷酸鈉(單鹼的、一水合物)、19.2mg磷酸鈉(雙鹼的、無水的)、6.4mg聚山梨醇酯20和注射用水(USP)中配製400mg產品。療法的持續時間將持續至醫學上表明的長度或直到達到所需要的治療作用(例如本文所描述的那些)。在某些實施方案中，VEGF特異性拮抗劑療法持續2個月、4個月、6個月、8個月、10個月、I年、2年、3年、4年、5年、或直到受治療者終生的多年的時間。
通常良性的、癌前的或早期癌的緩解或治療或者癌(良性的或惡性的)的輔助或新輔助療法涉及減輕與癌有關的一種或多種症狀或醫療間題。治療上有效量的藥物可實現下列中的一種或組合:以減少(例如20%,30%,40%,50%,60%,70%,80%,90%,100%或更多的)腫瘤中癌細胞的數目；以減小腫瘤的大小；以減少腫瘤負荷；以抑制(即降低至某種程度和/或終止)癌細胞浸潤入外周器官中；以減小腫瘤中血管密度；以抑制腫瘤轉移；以減少或抑制腫瘤生長或腫瘤細胞增殖；以減少或預防休眠腫瘤的生長；以減少或預防微轉移的生長或增殖；以減少或預防治療或去除後腫瘤的再生長(例如在輔助療法中)；以增加或延長易患或被診斷為患有良性的、癌前的或非轉移性的腫瘤或惡性腫瘤的受治療者的DFS或OS ;以減小腫瘤大小以允許手術(例如在新輔助療法中)；和/或以將與癌相關的一種或多種症狀緩解至某種程度。在一些其它的實施方案中，可使用VEGF特異性拮抗劑以預防受治療者中癌的發生或復發。在一個實例中，在約四年後在受治療者群體中評估癌復發的預防以證實在群體的至少約80%中無疾病復發發生。在另一個實例中，在約3年時評估疾病復發的預防，其中與單獨用化學療法治療的受治療者相比，疾病復發下降了至少約 50%。在一個實例中，以有效延長DFS或OS的量施用VEGF特異性拮抗劑例如VEGF抗體，其中在抗體的最初施用後約2至5年評估DFS或OS。在某些實施方案中，在治療開始後或最初的診斷後約3-5年、約4-5年或至少約4年或至少約5年評估受治療者的DFS或OS。在一個實施方案中，本發明可被用於增加易患或被診斷為患有良性的、癌前的或非轉移性的腫瘤的受治療者的生存持續時間。生存持續時間被定義為從藥物的第一次施用到死亡的時間。還可通過代表患者在治療期間死亡的風險的治療組比對照組的分層的危害比(HR)來測量生存持續時間。在又一個實施方案中，本發明的治療顯著的增加了易患或被診斷為患有癌的用各種抗癌療法治療的一組受治療者例如人類患者中的響應率。響應率被定義為對治療有響應的受治療患者的百分比。在一個方面，與單獨用手術、放射療法或化學療法治療的組相比，使用VEGF特異性拮抗劑和手術、放射療法或一種或多種化學治療劑的本發明的組合治療顯著地增加了受治療的患者組中的響應率，所述增加具有小於0.005的卡方P值。腫瘤、休眠腫瘤或微轉移的發生或復發的治療或預防涉及通常在腫瘤最初的治療或去除(例如使用抗癌療法諸如手術、化學療法或放射療法)後預防腫瘤和微轉移形成。手術可留下殘留的腫瘤細胞或休眠的微轉移的小瘤，其具有重新活化「血管生成程序」並促進更多指數級的腫瘤生長的潛力。儘管休眠腫瘤或微轉移的存在未必是使用臨床的測量或篩查方法可檢測的，但治療上有效的量是足以預防或減小使用臨床醫生已知的技術檢測到休眠腫瘤、微轉移、轉移或腫瘤復發的量。在一個實例中，將通過手術去除腫瘤治療腫瘤的患者之後用VEGF特異性拮抗劑治療並隨著時間監測休眠腫瘤、微轉移或腫瘤復發的檢測。可將VEGF特異性拮抗劑與另一種抗癌療法(例如在VEGF特異性拮抗劑之前、同時、或之後)組合施用並且可將一種或所有兩種療法作為維持療法繼續。癌的治療中治療效力的其它的測量方法被描述於美國專利申請公開第20050186208 號中。使用本領域已知的常規方法，通過將具有所需要的純度的活性組分與任選的生理上可接受的載體、賦形劑或穩定劑混合而製備治療的製劑(Remington』 s PharmaceuticalSciences (雷明頓藥劑學)(第 20 版)，A.Gennaro 編輯，2000, Lippincott, Williams &Wilkins, Philadelphia, PA)。可接受的載體包括鹽水或緩衝劑例如磷酸鹽、朽1檬酸鹽和其他有機酸；抗氧化劑包括抗壞血酸；低分子量(少於約10個殘基)的多肽；蛋白質例如血清白蛋白、明膠或免疫球蛋白；親水的聚合物例如聚乙烯吡咯烷酮；胺基酸例如甘氨酸、穀氨酸、天冬醯胺、精氨酸或賴氨酸；單糖、二糖和其他碳水化合物包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合劑例如EDTA ;糖醇例如甘露醇和山梨糖醇；鹽形成平衡離子例如鈉；和/或非離子表面活性劑例如TWEEN 、PLUR0NICS 或PEG。任選地，但優選地，製劑優選地以大約生理濃度含有藥學上可接受的鹽，典型地，例如氯化鈉。任選地本發明的製劑可含有藥學上可接受的防腐劑。在一些實施方案中，防腐劑濃度從0.1%變化至2.0% (通常為v/v)。適當的防腐劑包括製藥領域中已知的那些。苯甲醇、苯酚、間甲酚、尼泊金甲酯和尼泊金丙酯是防腐劑的實例。任選地，本發明的製劑可以0.005%至0.02%的濃度包含藥學上可接受的表面活性劑。本文的製劑還可包含對正在治療的特定的適應症必需的一種以上的活性化合物，優選具有互補活性的彼此沒有不利影響的那些。這些分子以對所預期目的有效的量適當地存在於組合中。還可將活性組分包埋入例如通過凝聚技術或通過界面聚合法製備的微膠囊，例如分別地羥甲基纖維素或明膠-微膠囊和聚(異丁烯酸甲酯)微膠囊中，包埋入膠體藥物遞送系統(例如脂質體、白蛋白微球、微乳液、納米顆粒和納米膠囊)或粗乳液中。這些技術公開於Remington' sPharmaceutic Sciences (雷明頓藥劑學)，如上中。可製備持續釋放的製劑。持續釋放的製劑的適合的實例包括含有抗體的固體疏水聚合物的半透性基質，該基質是成形物品例如薄膜或微膠囊的形式。持續釋放的基質的實例包括聚酯、水凝膠(例如聚(2-羥乙基-異丁烯酸酯)或聚(乙烯醇))、聚交酯(美國專利第3，773，919 號)、L-穀氨酸和Y乙基-L-穀氨酸酯的共聚物、非可降解的乙烯-醋酸乙烯酯、可降解的乳酸-乙醇酸共聚物例如LUPRON DEPOT (由乳酸-乙醇酸共聚物和醋酸亮丙瑞林組成的可注射的微球)和聚-D-(-)-3-羥丁酸。雖然聚合物例如乙烯-醋酸乙烯酯和乳酸-乙醇酸能夠釋放分子超過100天，但某些水凝膠以較短的時間段釋放蛋白質。當膠囊包被的抗體留在體內很長時間時，作為在37°C暴露於水氣的結果它們可能變性或聚合，導致生物活性的喪失和免疫原性上的可能的變化。取決於所涉及的機制，可為穩定提出合理的策略。例如，如果發現聚合機制是通過硫-二硫化物互換分子間的S-S鍵形成，那麼可通過修飾巰基殘基、從酸性溶液凍幹、控制水分含量、使用適當的添加劑和開發特定的聚合物基質組合物來達到穩定。按照已知的方法對受治療者例如人類患者施用本發明的VEGF特異性拮抗劑，已知方法為例如靜脈內施用(諸如為團注)或通過一段時間的持續輸注、通過肌肉內、腹膜內、腦脊髓內、皮下、關節內、滑膜內、鞘內、口服、局部或吸入途徑施用。如果大量的副作用或毒性與VEGF拮抗作用有關，那麼局部施用是尤其需要的。離體策略也可被用於治療應用。離體策略涉及用編碼VEGF拮抗劑的多核苷酸轉染或轉化從受治療者獲得的細胞。之後將轉染或轉化的細胞返還給受治療者。細胞可是各種各樣類型中的任何一種，包括但不限於造血細胞(例如骨髓細胞、巨噬細胞、單核細胞、樹突細胞、T細胞或B細胞)、成纖維細胞、上皮細胞、內皮細胞、角質化細胞或肌細胞。例如，如果VEGF特異性拮抗劑是抗體，那麼可通過任何適合的方式來施用抗體，所述方式包括腸胃外的、皮下的、腹膜內的、肺內的和鼻內，以及如果需要局部免疫抑制治療，則在病變處施用。腸胃外輸注包括肌肉內、靜脈內、動脈內、腹膜內或皮下施用。此外，抗體適合通過脈衝式輸注，尤其是以逐漸減少的抗體劑量來施用。優選地，通過注射，最優選地通過靜脈內或皮下注射給藥，這部分地取決於施用是短期的還是長期的。在另一個實例中，當腫瘤的病症或位置允許時，可例如通過直接注射局部施用VEGF特異性拮抗劑化合物，並且可周期性重複注射。為了預防或減少局部復發或轉移，例如休眠腫瘤或微轉移的局部復發或轉移，還可對受治療者在手術切除腫瘤後對受治療者系統地遞送VEGF特異性拮抗劑或直接對腫瘤細胞例如對腫瘤或瘤床遞送VEGF特異性拮抗劑。可選擇地，可將抑制性核酸分子或含有編碼VEGF特異性拮抗劑的核酸序列的多核苷酸遞送至受治療者的適當的細胞。在某些實施方案中，核酸可遞送至腫瘤本身。可通過適於所使用的載體的任何方法將核酸引入細胞中。許多這種方法是本領域中熟知的(如上文Sambrook等人,和Watson等人Recombinant DNA(重組DNA)，第I2章，第2版，Scientific American Books, 1992)。基因遞送方法的實例包括脂質體介導的轉染、電穿孔、磷酸鈣/DEAE葡聚糖法、基因槍和微注射。IX.組合療法本發明還以使用本發明的兩種或更多的VEGF特異性拮抗劑的組合或至少一種VEGF特異性拮抗劑與一種或多種其它的抗癌療法的組合為特徵。抗癌療法的實例包括但不限於手術、放射療法(放射線療法)、生物療法、免疫療法、化學療法或這些療法的組合。此夕卜，可與VEGF特異性拮抗劑組合使用細胞毒性劑、抗血管生成劑和抗增殖劑。在一個實例中，VE GF特異性拮抗劑被用作確定性手術後非轉移性的癌的治療的輔助療法。在這個實例中，可與或不與至少一種其它的化學治療劑一起提供VEGF特異性拮抗劑。在另一個實例中，VEGF特異性拮抗劑被用作手術前可手術的癌的治療的新輔助療法。在這個實例中，可在手術前與或不與至少一種其它的化學治療劑一起提供VEGF特異性拮抗劑。在一個實例中，本發明以VEGF特異性拮抗劑和一種或多種化學治療劑(例如混合物)的一起使用為特徵。化學治療劑的非限制性實例包括依立替康、氟尿嘧啶、甲醯四氫葉酸或其任何組合。組合的施用包括使用分開的製劑或單一藥物製劑的同時施用，和以任一順序的連續施用，其中優選地有一段時間兩種(或所有)活性劑同時發揮它們的生物活性。可依照製造商的使用說明書或由熟練醫師根據經驗來確定使用這種化學治療劑的製劑和給藥時間表。化學療法的製劑和給藥時間表也描述於Chemotherapy Service (化學療法服務)，M.C.Perry 編輯,WiIIiams & Wilkins,Baltimore,Md.(1992)中。化學治療劑可在VEGF特異性拮抗劑的施用之前或之後，或與其同時提供。本文的製劑還可包含對正在治療的特定的適應症必需的一種以上的活性化合物，優選具有互補活性的彼此沒有不利影響的那些。例如可希望在一種製劑中進一步提供與EGFR、VEGF (例如與VEGF上不同的表位結合的抗體)、VEGFR和ErbB2 (例如Herceptin )結合的抗體。在一個示例性實施方案中，VEGF特異性拮抗劑的組合物不包括抗ErbB2抗體或者其片段或衍生物(例如Herceptin 抗體)。可選擇地，或此外，組合物可包含細胞毒性劑、細胞因子、生長抑制劑和/或小分子VEGFR拮抗劑。這些分子以對所預期的目的有效的量適當地存在於組合中。為了預防或治療疾病，VEGF特異性拮抗劑的適當的劑量將取決於待治療的疾病類型(如上文所定義的)、疾病的嚴重度和進程(無論是為了預防還是治療的目的而施用VEGF特異性拮抗劑)、之前的療法、患者的臨床史和對VEGF特異性拮抗劑的響應，以及主治醫師的判斷。適合一次性或經過一系列的治療對患者施用VEGF特異性拮抗劑。在組合療法方案中，將本發明的VEGF特異性拮抗劑和一種或多種抗癌治療劑以治療上有效或協同的量施用。如本文所使用的，治療上有效的量是VEGF特異性拮抗劑和一種或多種其他治療劑的聯合施用或本發明的組合物的施用導致如上文所描述的癌的減少或抑制的那些量。治療上協同的量是對協同地或顯著地減少或消除與特定疾病相關的狀況和症狀來說必需的VEGF特異性拮抗劑和一種或多種其他治療劑的量。可以足以減少或消除腫瘤、休眠腫瘤或微轉移的發生或復發的量和時間同時或依次施用VEGF特異性拮抗劑和一種或多種其他治療劑。可作為維持療法施用VEGF特異性拮抗劑和一種或多種其他治療劑以預防或減少腫瘤復發的可能性。可將VEGF特異性拮抗劑單獨包裝或與其他抗癌治療化合物組合包裝為藥盒。藥盒可包括幫助對患者施用單位劑量的任選的組件例如使粉末形式重新構成的小瓶、注射用的注射器、定製的IV遞送系統、吸入器等。此外，單位劑量藥盒可包括組合物的製備和施用的說明書。可將藥盒製造為一例患者一次使用的單位劑量、特定患者多次使用(以恆定的劑量或其中個別化合物可隨療法進展在效力上變化)；或者藥盒可包含適於對多例患者施用的多次劑量(「大包裝」)。可將藥盒組件集合在紙盒、泡罩包裝(blister pack)、瓶、管以及類似物中。X.製造品 在本發明的另一個實施方案中，提供了含有對上文描述的病症的治療有用的材料的製造品。製造品包括容器、標籤和包裝附頁(package insert)。適合的容器包括例如瓶、小瓶、注射器等。容器可由各種材料例如玻璃或塑料形成。容器裝有對治療疾患有效的組合物並可具有無菌的進入孔(access port)(例如容器可是靜脈內溶液包或具有可由皮下注射針刺穿的塞子的小瓶)。組合物中的至少一種活性劑是抗VEGF抗體。容器上或容器所帶的標籤指示組合物被用於治療特別的疾患。製造品可進一步包括第二個容器，該容器含有藥學上可接受的緩衝劑例如磷酸鹽緩衝鹽水、林格氏溶液和葡萄糖溶液。它可進一步包括其他出於商業和使用者立場所需要的材料，包括其他緩衝劑、稀釋劑、過濾器、針和注射器。此外，製造品包括具有使用說明書的包裝附頁，其包括例如關於不能將組合物與另一種組合物組合使用的警告；或指導組合物的使用者將抗VEGF抗體組合物單獨或與抗癌組合物組合對患者施用。術語「使用說明書」意指通過任何方式，例如以文件的形式諸如以包裝附頁或其他書面宣傳材料的形式提供對可使用的療法、藥物、治療、治療方案以及類似物的指導。X.材料的保藏下列雜交瘤細胞系已經根據布達佩斯條約的規定由美國典型培養物保藏中心(ATCC)，Manassas, VA, USA 保藏。
抗體標號ATCC編號保藏日期A4.6.1ATCCHB-107091991 年 3 月 29 日
實施例實施例1.VEGF-A的抑制導致腸腺瘤生長的遏止和Apcmin7+小鼠的長期生存家族性腺瘤性息肉病(FAP)的症候群和大部分偶發性結腸直腸癌是由APC基因中的突變所導致的。除了包括上端胃腸道的硬纖維瘤和腫瘤的結腸外腫瘤之外，FAP患者在他們的下端胃腸(GI)道中發育了上百至上千個腺瘤性息肉。具有密碼子850處的雜合性平截等位基因的Apcmin7+小鼠模擬了具有種系APC突變的FAP患者的息肉病的某些特徵(Moser等人，Science 247:322-324 (1990)，Su 等人，Science 256:668-670 (1992))。Apcniw+小鼠中腫瘤形成的開始是在成年早期並且動物在C57BL/6的遺傳背景下通常發育60-150個腸息肉。腫瘤發育導致小鼠壽命嚴重受損，通常在五個月的年齡左右由於貧血和/或血液蛋白不足導致死亡(Moser等人，Science 247:322-324(1990))。儘管患有FAP的人類通常發育結腸腺瘤，但是Apcmw+小鼠由於還未充分了解的原因而在小腸中發育絕大多數的息肉。這些息肉達到直徑1-2_的大小，而越大的息肉(直徑多達4_)以越低的頻率出現。只偶爾觀察到結腸腺瘤，通常每隻動物0-3個。已經報導Apc參與包括增殖、凋亡、細胞遷移、細胞粘附、微管組裝、信號傳導和染色體分離的細胞過程(在 Nathke，Annu.Rev.Cell.Dev.Biol.20:337-366 (2004)中綜述)。Apc的研究最徹底的功能是它作為Wnt信號通路上β-連環蛋白的調節子的作用(在Nathke, Mol.Pathol.52:169-173(1999)中綜述)。簡單地說，在缺少Wnt信號轉導的情況下，Apc與軸蛋白(axin)和GSK-3 β激酶結合以形成細胞質的連環蛋白的破壞性複合體，由此阻止其核轉位和轉錄因子的T細胞因子/淋巴增強因子(TCF/LEF)家族的隨後的活化。TCF/LEF的轉錄目標包括參與上文提到的細胞通路的分子。

研究異種移植物中腫瘤生長的機制有一些缺陷，因為這些模型不能再現自然環境下的腫瘤發育。為了檢驗抗血管生成療法對自然發生的遺傳上易患的非惡性腫瘤模型的作用，我們研究了腸腺瘤病的Apcmin/+模型。在下列實施例中，在用示例性的VEGF特異性拮抗劑即抗VEGF-AmAb進行短期和長期的處理後以及在腸上皮細胞中通過Cre-LoxP技術將VEGF-A遺傳缺失後分析Apcmin/+小鼠的腫瘤表型。為了下文所描述的實驗，從 The Jackson Laboratory (Bar Harbor, ME)獲得ApcniH (庫存編號002020,5)和12.4Kb VilCre小鼠(庫存編號004586，此後為VillinCre, Madison 等人，J.Biol.Chem.277:33275-33283 (2002))。之前已經公開了VEGFwiox 小鼠(以後為 VEGFlox) (Gerber 等人，Development 126:1149-1159 (1999))。將小鼠圈養在屏障設施中的微隔離器籠子(micix) isolator cage)中並隨意餵食。按照聯邦政府規章和Institutional Animal Care and Use Committee (實驗動物管理與使用委員會)所批准的進行動物的養護和實驗方案。Apcniw+腸腺瘤中VEGF-A的表達為了研究Apcmin7+小鼠的腸腫瘤中VEGF-A的表達模式，我們在來自14周大的小鼠的腺瘤上進行了原位雜交。對於這些實驗來說，如早前所描述的進行原位雜交(Ferrara等X, Am.J.Pathol.162:1881-1893 (2003))。簡單地說，將中性緩衝的福馬林固定的、脫水的、並且石蠟包埋的腸組織切片在於37°C 20μ g/ml蛋白酶K中脫蛋白15分鐘之前脫石蠟並水合。將[33P]UTP標記的有義和反義RNA探針(riboprobe)於55°C雜交過夜，之後於55°C在0.1X的標準檸檬酸鹽鹽水中高嚴緊性清洗2小時。將乾燥的載玻片於室溫暴露於KodakBioMax MR放射自顯影膠片(Eastman Kodak C0.，Rochester, NY) 3天,之後將膠片泡在NTB2核徑跡乳膠(Eastman Kodak C0.)中，於4°C在含有乾燥劑的密封的塑料載玻片盒中曝光28天,顯影,並用(蘇木素伊紅)H&E復染。如之前所描述的製備VEGF-A探針(Ferrara等A.Am.J.Pathol.162:1881-1893 (2003))。相應於 NM_031836 的核苷酸 297-645，VEGF-A探針長度為349個核苷酸。上遊引物序列為5』 -CAA CGT CAC TAT GCA GAT CAT GCG(SEQID NO:1);下遊引物序列為 5，-GGT CTA GTT CCC GAA ACC CTG AG(SEQ ID NO:2)。在這些原位雜交實驗中，與正常腸絨毛上皮細胞相比在上皮細胞中觀察到具有不同強度的VEGF-A表達，同時在腺瘤的基質細胞以及正常絨毛的基質中觀察到焦點突出的信號(圖1A-F)。VEGF-A的抑制降低Apcmin/+小鼠的腫瘤負荷為確定抗VEGF-A療法對降低小鼠中良性腸腫瘤的腫瘤負荷是否有效，我們用以小鼠-人類嵌合形式(以降低誘發免疫響應的可能性)的抗VEGF-A的mAb G6-31處理了 Ape—/+ 小鼠。抗 VEGF-A 的 mAbG6-31 來自如(Liang 等人.J.Biol.Chem.281:951-961 (2006))所描述的人類Fab曬菌體文庫。為產生適於在小鼠中長期施用的抗體,將可變結構域接枝到鼠科IgG2a恆定結構域中。將mAb G6-31 (Liang等人,J.Biol.Chem.281:951-961(2006))或同種型匹配的對照鼠科IgG2a(抗GP120)都以5mg/kg的劑量以溶於PBS中90-140 μ I的體積每周一次腹膜內施用。將處理持續3周、6周、直到一年，或直到發現小鼠瀕死。在91±3天大時開始每一組5-14隻小鼠的處理。我們選擇mAb G6-31是由於它強有力地阻斷小鼠和人類VEGF-A的能力(Liang等人，J.Biol.Chem.281 =951-961 (2006))。這與抑制人類但不抑制小鼠VEGF-A的良好表徵的抗 VEGF 的 mAb A.4.6.1 不同(Gerber 等人，Cancer Res.60:6253-6258 (2000)，Liang 等人，J.Biol.Chem.281:951-961 (2006))。為了評估mAb G6-31對腫瘤負荷的短期影響，在十三周大時開始每組10隻小鼠的處理並持續3或6周。為了確定處理開始時年齡的腫瘤表型，在十三周大(第O天)時分析未處理的對照組的十二隻小鼠。用抗VEGF-A的mAb處理3或6周顯著降低了 Apcmin/+小鼠中的總腫瘤負荷。第O天時，Apcmin7+小鼠的平均腫瘤負荷是39.3mm3 (從12.3mm3變化到97.0mm3)(圖2A)。用對照IgG處理三周的小鼠的平均腫瘤負荷為96.8mm3 (47.1-299.9mm3)，而用mAb G6-31處理3周的小鼠的平均腫瘤負荷是23.5mm3(4.5-58.2mm3)。當mAb G6-31處理時平均腫瘤負荷具有統計學上顯著的76%的減少·或減1/4，P < 0.008。用對照IgG施用6周後，腫瘤負荷達到198.6mm3的平均值(40.5-315.7mm3)，而用mAb G6-31處理的小鼠中的腫瘤負荷依舊低至28.4mm3(3.2-75.9mm3),表現出平均腫瘤負荷上的顯著的86%的減少或減至1/7, p
<5.3χ1(Γ5(圖 2Α)。相對於腺瘤數目下降，用mAb G6-31處理三和六周之後腫瘤負荷的顯著下降是由於腺瘤大小下降。用對照IgG處理三周後，平均腫瘤數目是116±9 (土SEM)，而mAb G6-31施用後平均腫瘤數目是107± 11 (P < 0.28)。用對照IgG處理六周後，平均腫瘤數目是120±11，而mAb G6-31施用後它是100±10(p < 0.09)。在第O天時，小鼠具有100±9個腫瘤的平均值。為了分析腫瘤大小和數目，將從腺胃至直腸的腸道縱向打開，漂洗並平展在濾紙上° 用 Notox Histo 固定劑(Scientific Design Laborator Inc., Des Plaines, IL)固定過夜並用亞甲基藍0.1 %的水溶液染色後，小腸和大腸的每個腸腺瘤的數目、位置和直徑由單一的對處理不知情的觀察者在Leica解剖顯微鏡上20X的放大倍數下通過目鏡比例尺計數。通過這一方法，可靠地記錄具有0.3_或更大的直徑的息肉。以半球計算腫瘤體積。將每隻小鼠的腫瘤負荷計算為其腫瘤體積的總和。用雙尾的Student’s t檢驗計算P值。作為抗體處理的小鼠的對照，在處理開始的年齡(13周)時分析非處理組的小鼠(第O天)。沒有在3或6周的處理期間腺瘤生長躲過抗VEGF-A處理的證據:與用對照IgG處理的小鼠的腫瘤的較寬的 大小分布(圖2B，從頂部起第二和第四個圖示)相比，用mAbG6-31處理的小鼠中的腫瘤具有更緊密的大小分布(圖2B，中間和下部圖示)。用對照IgG施用三周的小鼠中平均息肉直徑是1.28mm以及用mAb G6-31的是0.85mm (p < 9.2xl(T117)，而用對照IgG施用六周的小鼠中平均息肉直徑是1.64mm以及用mAb G6-31的是0.86mm(p
1.2mm)的腫瘤的頻率降低了(圖2C，頂部和中部圖示)。與第O天時腫瘤大小分布(圖2C，底部圖示)的比較表明在mAb G6-31的施用開始時腺瘤的生長已經基本上被遏止。而且，抗VEGF-A的mAb G6-31對抑制所有小腸區域內的腺瘤生長是有效的。在三和六周的治療後，與對照IgG處理相比在mAb G6-31處理時觀察到顯著降低的平均腫瘤直徑(圖2D)。此外，在用mAb G6-31處理的小鼠的第一腸四分之一區中的平均腺瘤直徑從第O天時的小鼠中觀察到的(圖2D中的雙星號)顯著降低。結腸腺瘤的平均腫瘤直徑的減少未達到統計顯著性(圖2D)。用mAb G6-31處理三周的小鼠中大腸息肉的平均直徑是
1.3±0.3mm (土 SEM)，而對照IgG處理的小鼠中的平均直徑是2.5±0.4mm，具有p < 0.064。mAb G6-31處理六周後的大腸腫瘤的平均直徑是2.2±0.3mm以及用對照IgG施用後的是
2.6±0.3mm,具有 p < 0.37。腸上皮細胞中VEGF-A的缺失減小平均腫瘤直徑我們接下來將會仔細研究在Apcmin7+模型中來自腸上皮細胞來源的VEGF-A對腺瘤發育的貢獻。為了這一目的，如上文所描述的，在13周大的Apcmin7+小鼠中評估了腫瘤直徑和數目，所述小鼠與其中在腸上皮細胞中用Cre/loxP技術有條件地缺失了 VEGF-A的小鼠(VEGF1qx;ViIIin-Cre 小鼠)雜交。在十三周大時分析 Apcmin/+;Villin Cre 和 Apcniin7+;VEGFlox ；ViIIin-Cre 小鼠。絨毛蛋白(肌動蛋白結合蛋白和專門的吸收細胞的刷狀緣的主要結構組分)的表達在腸的後腸內胚層中的胚胎發生期間開始，並之後延伸穿過小腸和大腸的內胚層(Braunstein 等人，Dev.Dyn.224:90-102 (2002), Ezzell 等人，Development 106:407-419(1989)，Maunoury 等人，EMBO J.7:3321-3329 (1988)以及 Maunoury 等人，Developmentl 15:717-728 (1992))。在成體中，絨毛蛋白分布隨著隱窩的未成熟的增殖的細胞中溫和頂端極化和襯在小腸絨毛裡的完全分化的細胞的刷狀緣中的強極化而變得瀰漫(Robine 等人，Proc.Natl.Acad.Sc1.82:8488-8492 (1985))。先前已經表徵了由絨毛蛋白啟動子驅動的Cre重組酶(Villin-Cre)的表達，再現了在從隱窩到絨毛尖端以及十二指腸至結腸的腸的上皮的每一個細胞中的絨毛蛋白基因的表達模式Madison等人，J.Biol.Chem.277:33275-33283(2002)。表型分析顯示對照Apcmin7+ ；Vi I Iin-Cre小鼠的平均腫瘤直徑是
1.02±0.3mm(土SEM)，而 Apcmin/+ ；VEGFlox ；ViIlin-Cre 小鼠的平均腫瘤直徑是
0.82 ±0.3mm (圖2E)，顯示了 19.8%的減少(p < 7.2x 10_5)。兩組間腫瘤數目沒有顯著的差異。當 Ape—/+ ；ViIIin-Cre 小鼠具有 137±11 個腸腺瘤時，Apcmin/+ ；VEGFlox ；ViIIin-Cre小鼠具有150 + 17個腺瘤(P < 0.27)。這些數據表明從十二指腸至結腸以及隱窩到絨毛尖端的所有腸上皮細胞中的VEGF-A的缺失導致腫瘤生長的顯著抑制，儘管與從抗VEGF-A抗體的系統施用得到的抑制相比程度下降。因此，這些數據暗示了上皮外來源的VE GF-A對Apcmin/+小鼠的腸腺瘤的生長有貢獻。VEGF-A的抑制延長了 Apcmin/+小鼠的中值生存期考慮到抗VEGF-A治療在腫瘤生長抑制中的效力，我們想要研究使用mAb G6-31的處理是否能為Apcmin/+小鼠產生長期益處。為了這一目的，將mAb G6-31或對照IgG的施用持續直到52周或直到觀察到小鼠瀕死。有趣的是，mAb G6-31處理將中值生存期從使用對照IgG的24.0周增加到使用mAb G6-31的33.6周，具有時序P < 2.4x 10_3(圖2F)。當在32、51、64或66周(分別地在用mAb G6-31處理19、38、51或53周後)的年齡安樂死後分析用mAb G6-31處理的四隻小鼠的腫瘤表型。如表I中所示，平均腫瘤直徑依舊在與在十九周大的小鼠中所見的水平接近的水平(用對照IgG處理六周的小鼠中為1.64mm)。同樣地，腫瘤數目依舊與十三周大的小鼠的腫瘤數目相當(第O天組小鼠具有59-161個腸腺瘤以及100的平均值)。組織分析中切片的平面上發現的十五個結腸腺瘤(小鼠1-4中鑑別的總數目)中的三個(表I的第2、3和4號小鼠各一個)顯示沒有惡性的轉變。表1.關於G6-31長期處理的小鼠的腫瘤數據
權利要求
1.有效量的VEGF特異性拮抗劑在製備降低受治療者中癌發生的風險或者延緩受治療者中癌的發生的藥物中的用途，其中所述受試者未患有癌。
2.根據權利要求1所述的用途，其中所述用途降低所述受治療者中所述癌發生的風險。
3.根據權利要求1所述的用途，其中所述用途延緩所述受治療者中癌的發生。
4.根據權利要求1所述的用途，其中所述用途降低所述受治療者中良性的或癌前的癌發生的風險，或者延緩所述受治療者中良性的或癌前的癌的發生。
5.根據權利要求1所述的用途，其中所述用途降低所述受治療者中非轉移性的癌發生的風險，或者延緩所述受治療者中非轉移性的癌的發生。
6.根據權利要求1所述的用途，其中所述用途降低所述受治療者中轉移性的癌發生的風險，或者延緩所述受治療者中轉移性的癌的發生。
7.根據權利要求1所述的用途，其中所述受治療者具有癌、息肉或遺傳性癌症候群的家族史。
8.根據權利要求1所述的用途，其中所述VEGF特異性拮抗劑是單一療法。
9.根據權利要求1所述的用途，其進一步包括監測所述受治療者的所述癌的發生。
10.根據權利要求1所述的用途，其中所述癌是胃腸癌、神經膠質瘤、結腸直腸癌、乳腺癌、卵巢癌、肺癌或腎癌。
11.根據權利要求1所述的用途，其進一步包括施用其他的抗癌療法。
12.根據權利要求1所述的用途，其中所述VEGF-特異性拮抗劑選自與VEGF特異性結合的多肽、核酶、肽體、反義核鹼基寡聚體、小RNA分子和適體。
13.根據權利要求12所述的用途，其中所述與VEGF特異性結合的多肽是可溶的VEGF受體蛋白或其VEGF結合片段或者嵌合的VEGF受體蛋白。
14.根據權利要求13所述的用途，其中所述嵌合的VEGF受體蛋白是Flt-l/Fc、KDR/Fc或 Flt/KDR/Fc。
15.根據權利要求12所述的用途，其中所述與VEGF特異性結合的多肽是抗VEGF抗體或其抗原結合片段。
16.根據權利要求15所述的用途，其中所述抗VEGF抗體是單克隆抗體。
17.根據權利要求16所述的用途，其中所述單克隆抗體是嵌合的、人源化的或完全人類抗體。
18.根據權利要求16所述的用途，其中所述單克隆抗體是貝伐單抗。
19.根據權利要求15所述的用途，其中所述抗VEGF抗體或其抗原結合片段與VEGF特異性結合，從而隔絕其與一個或多個受體結合。
20.根據權利要求15所述的用途，其中所述抗VEGF抗體是與單克隆抗VEGF抗體A4.6.1結合相同的表位的單克隆抗VEGF抗體。
21.根據權利要求15所述的用途，其中所述抗VEGF抗體或其抗原結合片段與人類VEGF上的功能表位結合，所述功能表位包含人類VEGF的殘基F17、M18、D19、Y21、Y25、Q89、I91、K101、E103 和 C104。
22.根據權利要求15所述的用途，其中所述抗VEGF抗體或其抗原結合片段與人類VEGF上的功能表位結合，所述功能表位包含殘基F17、Y21、Q22、Y25、D63、183和Q89。
全文摘要
本發明公開了使用抗VEGF特異性拮抗劑治療良性的、癌前的或非轉移性的腫瘤的方法。還公開了使用抗VEGF特異性拮抗劑治療處於發展良性的、癌前的或非轉移性的腫瘤風險的受治療者的方法。還公開了使用抗VEGF特異性拮抗劑治療或預防腫瘤復發的方法以及VEGF特異性拮抗劑在新輔助和輔助癌療法中的應用。
文檔編號A61K45/00GK103143017SQ20121009155
公開日2013年6月12日 申請日期2007年12月18日 優先權日2006年12月19日
發明者納波利昂·費雷拉, 尼娜·克斯薩裡, 羅伯特·D·麥斯 申請人:基因技術公司