水稻抗稻瘟病基因Pi-hk1(t)的分子標記方法

2024-03-26 05:46:05 2

專利名稱：水稻抗稻瘟病基因Pi-hk1(t)的分子標記方法
技術領域：
本發明屬於分子遺傳學領域，涉及水稻抗稻瘟病基因Pi-hkl(t)的分子標記方法，具體涉及黑殼子粳抗稻瘟病基因Pi-hkl(t)的分子標記方法，用於水稻抗稻瘟病品種分子標記輔助選擇育種與種質資源的利用。
背景技術：
水稻是我國的重要糧食作物。由稻瘟真菌引起的水稻稻瘟病，是對水稻生產威脅最大的病害之一，它在水稻生產地區都有發生。據估計，全球每年因稻瘟病危害造成約數十億美元的損失(Jeon et al，2003)。我國每年因稻瘟病危害損失稻穀數億公斤。在稻瘟病流行年份，造成的產量損失，一般在10-20%，嚴重的可達50%以上，局部田塊甚至顆粒無收，而且導致稻米品質下降。培育抗病品種是防治水稻稻瘟病最安全、有效、節本、環境友好的措施之一。遺傳研究表明，水稻對稻瘟病抗性主要受顯性主效基因位點控制，目前已在不同的抗性材料中定位了約50多個抗病位點，分布於染色體不同位置，有的成簇分布。這些抗病基因可以引入或聚合到現代品種，選育出高抗、廣譜的品種。但傳統育種方法費時、費力、 表型鑑定困難、育種效率低，由於抗病基因多為顯性、基因間往往存在上位性互作，抗病基因聚合更為困難。通過分子標記輔助育種可以有效解決這一問題。黑殼子粳為太湖流域粳稻地方品種，具有廣譜高抗稻瘟病的特徵，初步的定位結果表明，其主效抗病基因Pi-hkl(t)為一個新的抗病基因(李培富等，中國水稻科學，2007， 21 579 584)。在此基礎上，進一步篩選和開發緊密連鎖的分子標記，為分子標記輔助選擇育種和克隆Pi-hkl(t)基因服務。

發明內容
本發明的目的是提供水稻黑殼子粳抗稻瘟病基因Pi-hkl (t)的分子標記方法。 通過檢測與抗病基因Pi-hkl (t)緊密連鎖的分子標記，可以確定有無抗病基因Pi-hkl (t)， 並預測水稻植株的的稻瘟病抗性，加快抗稻瘟病水稻的的選擇進度。本發明的目的可通過如下技術方案實現水稻黑殼子粳抗稻瘟病基因Pi-hkl (t)的分子標記方法，其特徵在於操作步驟如下(1)取水稻樣品，提取水稻樣品基因組DNA ；(2)利用表1中的任意1對、2對或3對水稻黑殼子粳抗稻瘟病基因Pi-hkl (t)的分子標記引物對所述的水稻樣品基因組DNA進行PCR擴增，PCR擴增產物在8%非變性聚丙烯醯胺凝膠上進行電泳檢測，如果擴增出對應大小的分子標記DNA片段，標誌著Pi-hkl (t) 基因的存在表 權利要求
1.水稻黑殼子粳抗稻瘟病基因Pi-hkl(t)的分子標記方法，其特徵在於包括如下步驟(1)取水稻樣品，提取水稻樣品基因組DNA;(2)利用表1中的任意1對、2對或3對水稻黑殼子粳抗稻瘟病基因Pi-hkl(t)的分子標記引物對所述的水稻樣品基因組DNA進行PCR擴增，PCR擴增產物在8%非變性聚丙烯醯胺凝膠上進行電泳檢測，如果擴增出對應大小的分子標記片段，標誌著Pi-hkl (t)基因的存在，表1
2.根據權利要求1所述的水稻黑殼子粳抗稻瘟病基因Pi-hkl (t)的分子標記方法，其特徵在於所述的PCR擴增的反應體系為10 X buffer 1. 0微升，4pmol/微升的InDel或SSR 引物對1微升，2. 5mM dNTPs 0. 2微升，5單位/微升的Taq酶0. 1微升，10納克/微升的水稻樣品基因組模板DNA 1微升，加水至10微升；反應程序為DNA 94°C預變性5min後；94°C 變性30sec，55°C退火30sec，72°C延伸展lmin，循環；35次；最後72°C延伸10min。
全文摘要
本發明屬於分子遺傳學領域，公開了水稻抗稻瘟病基因Pi-hk1(t)的分子標記方法，包括如下步驟(1)取水稻樣品，提取水稻樣品基因組DNA；(2)利用s01、in5、in3中的任意1對、2對或3對分子標記引物，對水稻樣品基因組DNA進行PCR擴增，PCR擴增產物進行電泳檢測，如果擴增出對應大小的分子標記DNA片段，標誌著Pi-hk1(t)基因的存在。本發明單標記選擇效率均達到99.92％以上，任意雙標記選擇效率均達到100％。通過本發明提供的分子標記引物檢測水稻是否含有該基因，可預測其對稻瘟病的抗性水平，大大提高水稻抗稻瘟病的選擇效率，加快抗病育種進程。
文檔編號C12Q1/68GK102154470SQ20111000827
公開日2011年8月17日 申請日期2011年1月17日 優先權日2011年1月17日
發明者吳雲雨, 張曉軍, 張紅生, 王州飛, 王建飛, 謝留傑, 鮑永美, 黃驥 申請人:南京農業大學