一個水稻抗稻瘟病基因的分子標記方法

2024-03-26 04:37:05

專利名稱：一個水稻抗稻瘟病基因的分子標記方法
技術領域：
本發明屬於農作物分子遺傳育種學領域，涉及水稻抗稻瘟病基因的分子標記方法。
背景技術：
水稻是我國最重要的糧食作物之一，對保障我國糧食安全和國民經濟增長具有重要意義。稻瘟病是我國水稻生產上最嚴重的病害，具有傳播快、發生廣、危害重等特點(凌忠專等，1989，我國北方稻區稻瘟病菌生理小種研究衝國農業科學，22 (3) 7-13)。進一步發掘和利用我國抗稻瘟病基因資源，培育和種植抗病品種是控制稻瘟病發生和減少水稻產量損失最經濟有效的途徑。迄今，各國科學家從水稻中鑑定了 70多個抗稻瘟病基因，其中有17個抗病基因被成功克隆。這些抗病基因可以引入或聚合到現代品種，選育出高抗、廣譜的品種。但傳統育種方法費時、費力、表型鑑定困難、育種效率低，由於抗病基因多為顯性、基因間往往存在上位性互作，抗病基因聚合更為困難。通過分子標記輔助育種可以有效解決這一問題。我國太湖流域稻作歷史悠久，被認為是粳稻起源地之一，蘊藏有豐富的稻種資源， 李培富等(1999，兩個太湖流域粳稻地方品種抗稻瘟病的遺傳研究.中國水稻科學，13(1) 11-14)報導我國太湖流域粳稻地方品種薄稻對稻瘟病菌的抗性表現廣譜和高抗的特點。從我國特有的種質資源中鑑定和克隆抗稻瘟病基因，可以獲得具有自主智慧財產權的基因，對提高我國水稻抗稻瘟病育種水平，尤其是粳稻的抗稻瘟病育種有重大意義。

發明內容
本發明的目的是提供水稻品種薄稻抗稻瘟病基因Pi-bdl (t)的分子標記方法。 通過檢測與抗病基因Pi-bdl (t)緊密連鎖的分子標記，可以確定有無抗病基因Pi-bdl (t)， 並預測水稻植株的的稻瘟病抗性，加快抗稻瘟病水稻新品種的選育進度。本發明的目的可通過如下技術方案實現水稻薄稻抗稻瘟病基因Pi-bdl (t)的分子標記方法，包含如下操作步驟(1)取水稻樣品，提取水稻樣品基因組DNA ；(2)利用表1中的任意一對或兩對與水稻薄稻抗稻瘟病基因Pi-bdl (t)緊密連鎖的分子標記引物，對所述的水稻樣品基因組DNA進行PCR擴增，PCR擴增產物在8%非變性聚丙烯醯胺凝膠上進行電泳檢測，如果擴增出對應大小的分子標記DNA片段，標誌著 Pi-bdl⑴基因的存在表 權利要求
1.水稻薄稻抗稻瘟病基因Pi-bdl(t)的分子標記方法，其特徵在於包括如下步驟(1)取水稻樣品，提取水稻樣品基因組DNA;(2)利用表1中的任意一對或兩對與水稻品種薄稻抗稻瘟病基因Pi-bdl(t)緊密連鎖的分子標記引物，對所述的水稻樣品基因組DNA進行PCR擴增，PCR擴增產物在8%非變性聚丙烯醯胺凝膠上進行電泳檢測，如果擴增出對應大小的分子標記片段，標誌著Pi-bdl (t) 基因的存在；表1標記引物名稱分子標記引物特異性分子標記大小(bp)RM60916091LSEQ ID NO. 11956091RSEQ ID N0.2RM2663226632LSEQIDN0.320526632RSEQ ID N0.4
2.根據權利要求1所述的水稻薄稻抗稻瘟病基因Pi-bdl (t)的分子標記方法，其特徵在於所述的PCR擴增的反應體系為10X含Mg2+的緩衝液1. 0μ 1，4ρπι01/μ 1的所述分子標記引物對 1 μ 1，2. 5mM dNTPs 0. 2 μ 1，5U/ μ 1 的 Taq 酶 0. 1 μ 1，IOng/ μ 1 的水稻樣品基因組模板DNA 1 μ 1，加水至10 μ 1 ；反應程序為DNA 94°C預變性5分鐘後；94°C變性30秒， 55°C退火30秒，72°C延伸展1分鐘，循環35次；最後72°C延伸10分鐘。
全文摘要
本發明屬於作物分子遺傳育種學領域，公開了水稻抗稻瘟病基因的分子標記方法，包括如下步驟(1)取水稻樣品，提取水稻樣品基因組DNA；(2)利用RM6091和RM26632中的任意一對分子標記的引物，對水稻樣品基因組DNA進行PCR擴增，PCR擴增產物進行電泳檢測，如果擴增出對應大小的分子標記DNA片段，標誌著Pi-bd1(t)基因的存在。通過本發明提供的水稻抗稻瘟病基因Pi-bd1(t)的分子標記可以檢測水稻薄稻及其雜交、回交和復交後代是否含有該基因，可預測其對稻瘟病的抗性水平，大大提高水稻抗稻瘟病材料的選擇效率，加快抗病育種進程。
文檔編號C12Q1/68GK102162011SQ201110118819
公開日2011年8月24日 申請日期2011年5月9日 優先權日2011年5月9日
發明者張紅生, 王州飛, 王建飛, 環晶, 鮑永美, 黃驥 申請人:南京農業大學