一種刺激隱核蟲病的生物防治方法與流程
2024-02-26 19:23:15
本發明涉及水產養殖業生物防治方法，特別涉及一種以生物法預防和治療刺激隱核蟲病的方法。
背景技術：
刺激隱核蟲病是海水魚寄生蟲病中危害尤為嚴重的一種。目前，對刺激隱核蟲的防治措施可以分為物理學方法和化學方法。物理學的方法主要包括淡水浸泡、溫度控制、乾燥、輪換養殖、長時間沉澱或使用紫外線和臭氧處理養殖水體等，化學法主要使用福馬林、亞甲基南藍、高錳酸鉀、次氯酸鈉、磺胺咪唑、硫酸銅、青黴素等單獨或聯合治療刺激隱核蟲病。這些方法可在一定程度上減緩刺激隱核蟲發病的進程，起到了一定的防治作用。但是這些方法在實際生產中，療效往往大打折扣。其一，實際生產中，開放式大水域用藥操作有局限。其二，同一種寄生蟲的生物學特性會隨著宿主和地域的不同而變化，對同一化學藥物的敏感性也會不同，而且隨著藥物長時間的應用，蟲體必定會對其產生耐藥。雖然，對刺激隱核蟲免疫防治的研究取得了一定進展，但是免疫效果並不穩定，而且疫苗的量產仍然存在諸多困難。此外，免疫方式也極大的限制了該方法的應用。
刺激隱核蟲的生活史可以劃分為滋養體(trophont)、包囊前體(protomont)、胞囊(tomont)和纖毛幼蟲(theront)。滋養體寄生在宿主上，以宿主的體液、組織碎片及細胞為食，生長3-7d後，脫離宿主，形成自由活動的包囊前體。包囊前體下沉到水底運動8-12h後粘附於水底壁上。經過一系列不對二分裂，形成很多子代纖毛幼蟲，最後纖毛幼蟲從包囊中釋放出來。纖毛幼蟲在水中快速遊動尋找感染宿主，是生活史中唯一具有感染宿主能力的階段，纖毛幼蟲感染能力在脫囊6-8h內最強，18h後完全喪失感染能力。魚體上寄生的滋養體較少時，一般不會引起魚的死亡。如果魚感染4周後不死亡，會產生獲得性免疫，可以在數月內不再感染刺激隱核蟲。滋養體和包囊難以殺死。纖毛幼蟲是其最脆弱的階段。消滅了纖毛幼蟲就能阻斷基本的發生和發展。
海綿、雙殼類、苔蘚蟲、藤壺、海鞘等濾食性動物，利用鰓絲或觸手纖毛的擺動激起水流，從而濾食或捕獲水流中的食物顆粒(主要為微藻、原生動物等)。這些濾食性動物具有強大的過濾能力，能夠過濾大量的海水，清除其中微藻和原生動物等。利用動物之間的攝食關係來控制被攝食者的數量，是一種非常環保高效的策略。利用濾食性動物的濾食能力來清除養殖水體中刺激隱核蟲纖毛幼蟲，控制纖毛幼蟲密度，從而實現對刺激隱核蟲病的防治。
在自然條件下，很少出現刺激隱核蟲病大量爆發的情況。因為在自然條件下，宿主聚集密度低，刺激隱核蟲不能大量繁殖。但是，水族箱等封閉水體或高密度養殖的網箱中，蟲體能在短時間內在魚體上大量繁殖而致病。因此控制蟲體密度是刺激隱核蟲病防治的有效手段。在2009年嚴重爆發刺激隱核蟲病時，養殖區邊上少數漁排向深海區及時遷移，得以倖免。近幾年，在刺激隱核蟲發病期間，遠離養殖密集區已成為防治刺激隱核蟲病非常有效的手段。這證明了減少蟲體密度，降低蟲體和宿主魚間的接觸機會是防止刺激隱核蟲病有效的措施之一。但是拖動網箱費時費力費用高，難以大規模在實際生產中應用。然而，通過濾食性動物降低纖毛幼蟲密度同樣可以減少蟲體和宿主魚間的接觸機會，降低發病機率。
技術實現要素：
本發明的目的在於提供一種可操作性強，成本低，安全無毒，可廣泛應用於海水養殖，對刺激隱核蟲病防治結合，有效期長且沒有蟲株和血清型差異的生物防治方法。
本發明的目的是通過以下技術方案實現的：
所述一種刺激隱核蟲病的生物防治方法，包括以下步驟：
(1)選用海綿、雙殼類、苔蘚蟲、藤壺、海鞘中的一種或幾種作為生物防治刺激隱核蟲病的濾食性動物；
確定濾食性動物的投放量：
(2)治療時濾食動物的投放量為Qt＝2Vs/1000CR，其中：Qt為治療時濾食動物的投放量(kg)，Vs為水體體積(L)，CR為清濾率L/(g﹒h)；
所述清濾率為CR＝[(lnC0-lnCt)-(lnC』0-lnC’t)]×V/(t×W)，
其中：
CR為清濾率L/(g﹒h)，C0為實驗組開始的微藻密度(mg/L)，
Ct為實驗組結束時微藻密度(mg/L)；C』0為相應對照組開始的微藻密度(mg/L)，
C’t為相應對照組結束時微藻密度(mg/L)，V為水體體積(L)，t為實驗進行的時間(h)，
W為濾食動物體重乾重(g)；
預防時濾食動物的投放量為Qp＝Qt/10，其中：Qp為預防時濾食動物的投放量(kg)；
(3)防治前，先將濾食性動物暫養一周，每天檢查並挑除死亡個體，防治時，採用吊籠的方式將濾食性動物均勻放置到防治水體中，每周檢查挑除死亡個體並補充數量。
在上述方案的基礎上，在防治前，先將濾食性動物暫養一周，每天檢查並挑除死亡個體，防治時，採用吊籠的方式將濾食性動物均勻放置到防治水體中，每周檢查挑除死亡個體並補充數量。
在上述方案的基礎上，所述濾食性動物為：溼重為20-50g的濾食性動物在6h內將20L水體中的刺激隱核蟲纖毛幼蟲密度由100個/mL降至30個/mL以下。
在上述方案的基礎上，所述濾食性動物為海綿、雙殼類、苔蘚蟲、藤壺和海鞘中的一種或幾種。
上述方法適用於封閉水體和淺海網箱的刺激隱核蟲病的生物防治
有益效果：利用濾食性動物對刺激隱核蟲病生物防治的方法可操作性強，且不會對環境產生任何負面影響，實施例結果顯示，該方法對刺激隱核蟲病不僅有治療作用，還具有預防作用，被治癒的魚類在數月內不會再患刺激隱核蟲病。本發明的關鍵是濾食性動物的選擇和投放量的確定，選擇恰當的濾食性動物和適宜的投放量可以加強該方法的防治效果。
附圖說明：
圖1為文蛤對纖毛幼蟲數量的影響。
具體實施方式
實施例1
採用文蛤對刺激隱核蟲進行生物防治
1文蛤選擇的依據
在5個20L的水槽中各放5個文蛤，其溼重分別為32.5g、36.2g、41.1g、33.6g和35.6g。另外5個20L水槽不放文蛤。將孵化2h內的纖毛幼蟲計數後，按照100個/mL的密度，放到10個水槽中。在放入纖毛幼蟲3h、6h、12h和24h，分別在每個水槽4角和中央的中間水層用移液管各取2mL水樣於50mL小燒杯中並用終濃度為10％的甲醛固定10min使其沉澱於小燒杯底部。然後，小心地將上層海水吸掉，將剩餘約5mL的海水連帶纖毛幼蟲全部轉移到觀察皿中。輕輕搖動，使纖毛幼蟲集中於觀察皿中央，在顯微鏡下計數。重複取樣計數3次，取平均值作為水槽中纖毛幼蟲的密度。結果如圖1所示。文蛤自3h後能夠顯著性降低纖毛幼蟲密度(p<0.05)。在6h時，文蛤組纖毛幼蟲的密度為28個/mL，低於30個/mL。達到了作為防治刺激隱核蟲病的要求。
2文蛤使用量的確定
表1部分雙殼類的清濾率
註：貝類鮮重(貝殼完整的活體體重)約為軟體部乾重25倍。
實施例2
根據表1，軟體部乾重1.38g文蛤的清濾率為3.0L/(g﹒h)。貝類軟體部乾重約為帶殼溼重的25倍，因此1.38g文蛤的溼重約為35g。因此，以鮮重計算的文蛤清濾率為0.12L/(g﹒h)。
根據Qt＝2Vs/1000CR可計算出40m3室內水泥池治療時文蛤的投放量＝2×40×103÷0.12L/(g﹒h)÷1000＝666kg。每20kg均勻裝在一個吊籠內，共33個吊籠均勻吊掛在水泥內。
40m3室內水泥池養殖1000尾100g左右斜帶石斑魚。發現魚進食不踴躍，活動力下降。隨機取10尾石斑魚。從每尾魚體表刮取粘液，在400倍顯微鏡視野下發現具有1-2個刺激隱核蟲。確認感染刺激隱核蟲。按上述方法在水泥池中均勻吊掛文蛤。此後，每天隨機取10尾石斑魚檢查其粘液中刺激隱核蟲數量。第3天每次刮取粘液中，刺激隱核蟲的數量明顯減少為0-1個。第4天後幾乎檢測不到刺激隱核蟲。第10天收回文蛤，治療結束。在整個治療過程只死亡2尾魚。
實施例3
根據表1，軟體部乾重0.98g的憎帽牡蠣的清濾率為74.8mL/(g﹒min)。軟體部乾重0.98g相當於25g鮮重。因此，以溼重計算的清濾率為2.9mL/(g﹒min)，即0.17L/(g﹒h)。
根據Qt＝2Vs/1000CR可計算出4×4×3的淺海養殖網箱治療時憎帽牡蠣的投放量＝2×4×4×3×103÷0.17L/(g﹒h)÷1000＝565kg。每20kg均勻裝在一個吊籠內，共28個吊籠均勻吊掛在網箱內。
4×4×3的淺海養殖網箱養殖500尾200g左右的斜帶石斑。魚進食和活動正常。夜間巡視時，手電筒照射魚體表明時偶爾會發現有些魚體帶有白點。取10尾魚刮取粘液顯微檢測。每條魚的粘液中在400倍視野中都存在5-10個刺激隱核蟲。表明魚已經感染刺激隱核蟲。按上述方法將牡蠣吊掛在網箱內。此後每天顯微鏡檢查魚體粘液刺激隱核蟲數量。第3天數量顯著降低，每個視野中有3個左右。第4天數量將為1個左右。第5天幾乎檢測不到。第6天到第10天沒有發現魚體表明存在刺激隱核蟲。第10天時收回牡蠣，治療結束。整個過程無魚死亡。
實施例4
根據Qp＝Qt/10可計算出40m3室內水泥池預防時文蛤的投放量＝666kg÷10＝66.6kg。每6kg均勻裝在一個吊籠內，共11個吊籠均勻吊掛在水泥內。
40m3室內水泥池養殖1000尾100g左右斜帶石斑魚。按照上述計算放置11個文蛤吊籠，每10天檢查文蛤死亡狀況，並及時補充。其它養殖管理同正常石斑魚養殖。刺激隱核蟲高發病率時期(5月1日至7月30日)沒有發生一次刺激隱核蟲感染。同一養殖場，養殖條件相同的兩個養殖池，分別發生了1次和3次刺激隱核蟲感染。
實施例5
根據Qp＝Qt/10可計算出4×4×3的淺海養殖網箱治療時憎帽牡蠣的投放量＝565kg/10＝56.5Kg。每5kg均勻裝在一個吊籠內，共11個吊籠均勻吊掛在網箱內。
4×4×3的淺海養殖網箱養殖500尾200g左右的斜帶石斑。按照上述計算放置11個憎帽牡蠣吊籠，每10天檢查憎帽牡蠣死亡狀況，並及時補充。其它養殖管理同正常石斑魚養殖。刺激隱核蟲高發病率時期(5月1日至7月30日)沒有發生一次刺激隱核蟲感染。而且與之緊鄰的3個養殖網箱也沒有發生刺激隱核蟲感染。100米外養殖條件相同的其它養殖網箱發生了1次刺激隱核蟲感染。