發現適於肥胖症治療和/或預防的化合物的方法

2023-12-11 23:56:32 4

專利名稱：發現適於肥胖症治療和/或預防的化合物的方法
技術領域：
本發明涉及一種發現適於肥胖症治療和/或預防的化合物的方法。本發明進一步涉及具有能力抑制哺乳動物起始脂肪合成並且基本上不對中樞神經系統(＝ZNS)產生影響的化合物製備用於肥胖症治療和/或預防藥物的應用。
肥胖症(＝Fettleibigkeit)是當今特別在發達的工業國家中居民健康的上升中的嚴肅問題，其大部分是通過不均衡的和過分油膩的飲食引起的。隨著超重人口比例的增加，肥胖症的副作用也日漸增多，從個人的不滿意到心血管循環疾病或者還有某些形式的糖尿病。因此已經存在有幾種針對肥胖症治療或預防的治療配方。例如有抑制脂肪酶的化合物，其減少腸管道的脂肪分解並以此方式降低攝入食物的能量產率。通過這種治療配方使食物脂肪至少部分地以未分解的形式排出。然而，其它可以補充先前已知治療方式的用於肥胖症治療和/或預防的新治療配方也是受歡迎的。
目前令人驚奇的發現，可以抑制哺乳動物，尤其是人類起始脂肪合成的化合物，以有利的方式適於很有效地治療和/或預防肥胖症。如果較長時期服用上述的化合物，例如數周的治療期，能達到特別好的效果。
本發明的主題是發現適於肥胖症治療和/或預防的化合物的方法，其中人們挑選具有能力抑制哺乳動物，尤其是人類起始脂肪合成的化合物。另外本發明的主題是，具有能力抑制哺乳動物起始脂肪合成並且基本上不對ZNS產生影響(如抗痙攣作用)的化合物製備用於肥胖症治療和/或預防藥物的應用。
對於起始脂肪合成(在下文中以DNL縮寫表示)的理解是，在哺乳動物的器官內由碳水化合物合成自身的脂肪酸。所述合成反應以所謂的檸檬酸循環或三羧酸循環(Krebs-Martius-Zyklus)為基礎發生在體細胞的細胞質中。在自身的生化反應中，此循環來自兩種結構單元來源於碳水化合物的丙酮酸和碳酸氫根經歷不同中間產物-包括馬來酸、延胡索酸和α-酮戊二酸-最後合成檸檬酸。要是檸檬酸被過量合成，就可以通過中間產物乙醯輔酶A轉變為自由脂肪酸(＝油脂終產物)，其可以合成脂肪並隨後在脂肪細胞(＝Adipozyten)中沉積。在體細胞中過量地沉積由脂肪酸合成的脂肪一般就可以導致肥胖症。在檸檬酸循環中參與了不同的酶。檸檬酸循環的物質轉換基本取決於所提供的碳酸氫根的量。所提供的碳酸氫根的量在此又取決於其可以由二氧化碳合成的速度。所述提供碳酸氫根的平衡反應是通過所謂的碳酸酐酶(Carboanhydrase)催化的。從至今已知的碳酸酐酶及其同功酶中，在哺乳動物體內主要是亞型II(CA II)及亞型V的碳酸酐酶同功酶(＝CA V)參與反應的催化，它們將碳酸氫根提供給檸檬酸循環。特別是亞型V的碳酸酐酶起了重要的作用，因為其存在於線粒體中。檸檬酸循環也發生在線粒體中。
有多種抑制哺乳動物細胞中的DNL的可能性可以考慮，它們的目的都是，減少檸檬酸循環中出現的物質轉換。以此可以降低用於合成脂肪酸的過量生產的檸檬酸濃度。相應於本發明，可以通過抑制碳酸酐酶優選抑制DNL，碳酸酐酶催化給檸檬酸循環提供碳酸氫根的反應。根據本發明的目的可以優選抑制碳酸酐酶亞型II和/或V，尤其優選抑制CA V。
可以非特異性地抑制碳酸酐酶的化合物(＝非特異性或經典CA-抑制劑)是已知的並且已經長期應用於不同的治療領域，主要是作為利尿劑或用於眼科。例如C.T.Supuran，醫療專利的專家見解(Expert Opinionon Therapeutic Patents)，10(5)(2000)575-600中對於這種經典CA-抑制劑的應用領域有總覽。對於「特異性CA-抑制劑」的理解應該是，其很大程度上只抑制一種CA-亞型(例如CA V)或CA-亞型中一種確定的類型。至今沒公開過經典CA-抑制劑有目的的用於肥胖症的治療和/或預防。
一般認為，絕大多數已知的肥胖症案例歸因於在攝取的食物中按比例過高份額的異體脂肪。在高度發展的國家如USA，肥胖者進食的食物中高達30％是以脂肪的形式。根據現今的認識，導致肥胖的脂肪沉積主要來自於過量攝入的食物脂肪，其不會受到抑制碳水化合物代謝DNL的影響。
儘管通過抑制DNL也可以達到減少脂肪酸在脂肪細胞中的沉積，因其對於脂肪酸在體細胞中的沉積起極小的作用，至今認為抑制DNL不適宜作為人類肥胖症治療和/或預防的出發點。在專業領域中持有這種見解方向的總結參見例如M.K.Hellerstein，臨床營養學歐洲期刊(European Journal of Clinical Nutrition)53(1)(1999)53-65。這種在專業領域中處於主導地位的觀點至今阻礙了有目的地發現以抑制DNL為原則的用於肥胖症治療和/或預防的藥物及其發展。
在本發明的範圍內如今驚人地發現，具有能力抑制哺乳動物，尤其是人類DNL的化合物，可以很有效地用於肥胖症的治療和/或預防，特別是當相關的患者較長時期地(例如六個星期)服用所述化合物時。依據此發現，儘管DNL本身對在脂肪細胞中沉積的身體脂肪只有極小的貢獻，在較長時期通過抑制DNL可以達到顯著減輕肥胖者體重的效果。通過在較長時期內對DNL的抑制可以將本身極小的效果如此積累起來，使它總計對於體重的減輕產生一種顯著的貢獻作用。
以化合物託吡酯(Topiramat)為例展示，根據本發明的方法的確適於有目的地發現適於肥胖症治療和/或預防的化合物。託吡酯是一種由EP0 138 441 A2公開的抗癲瘋藥物。關於託吡酯還已知其顯示有多因素的藥理學作用型譜。託吡酯可以阻斷電壓依賴性的鈉離子通道並因此穩定細胞的膜電位，它激活GABA-受體並以此增強GABA-傳遞的抑制作用，它作為碳酸酐酶抑制劑作用並最終能抑制一種穀氨酸受體的亞型，即Kainat/AMPA-受體，經此抑制由AMPA引發的物流的出現。託吡酯由此對ZNS顯示有明顯作用。不知道的是，是否託吡酯抗癲瘋的特性是歸因於上述藥理學的相關因素。
從WO 98/00130得知，託吡酯也具有顯現適於肥胖治療的藥理學特性。這些特性作為副作用在對癲瘋患者的長期研究中被偶然發現。至今未知的是，在癲瘋患者身上觀察到的體重損失是歸因於哪些託吡酯的藥理學特性。託吡酯落入WO 98/00130的範圍內，作為列出的適於肥胖治療的有抗痙攣效果的通式I的化合物。
根據本發明的方法現在可以指出，託吡酯是一種有效的CA-抑制劑，特別是哺乳動物體內存在的碳酸酐酶亞型II和V的有效抑制劑，並且託吡酯能很有效地抑制哺乳動物細胞的DNL。因此藉助根據本發明的方法首次可以證明至今不能解釋的，致使癲瘋患者體重損失的託吡酯藥理學副作用歸因於它很有效地抑制哺乳動物DNL的能力。所以可以期待，藉助本發明的方法可以在今後發現適於肥胖症治療和/或預防的化合物。以本發明的方法首次開創了可能性，相對快速簡便地發現具有藥理學潛力、以抑制DNL的原則為依據作用的化合物。得利於本發明，現今挑選根據上述原則作用的適於肥胖症治療和/或預防的化合物，可以至少在第一定向選擇方法中不再需要費時和昂貴地進行體內測試，如實驗動物的餵食實驗。
這種結果令人驚異，因為在以往對託吡酯藥理學特性的研究中，它的CA-抑制效果始終不能引起注意或者甚至認定只是極小的和在藥理學上是沒有意義的(參見例如B.E.Maryanoff等人，Journal of MedicinalChemistry30(1987)880-887；B.E.Maryanoff等人，Journal ofMedicinal Chemistry41(1998)1315-1343；S.J.Dodgson等人，Epilepsia41(1)(2000)S 35-S 39)。在上述以往的研究中，在確定託吡酯的CA-抑制活性時，分別使用包括不同種哺乳動物CA的測試溶液，其尚且帶有不同的身體組分如血液或器官。
使用根據本發明的第一個實施方案去發現適於肥胖症治療和/或預防的化合物，通過此方法將具有能力抑制至少一種哺乳動物體內存在的碳酸酐酶的化合物作為適宜的化合物挑選出來。例如可以至少將一種用於檢驗的化合物和至少一種碳酸酐酶接觸，然後可以用本身已知的方式鑑定出那種至少抑制一種碳酸酐酶活性的化合物。優選在此實施方案中使用哺乳動物如人類或齧齒動物(例如大鼠、小鼠、豚鼠)體內存在的碳酸酐酶，特別是碳酸酐酶亞型II和/或V。特別優選的是使用人體內存在的碳酸酐酶。適宜的碳酸酐酶可以例如從上述哺乳動物體內分離出來並如需要加以提純，或可以優選以本身已知的化學或生物技術方法製備。
一種優選改動了的第一實施方案，在所檢驗的化合物的影響下可以用本身已知的體外酶活性測試來確定碳酸酐酶活性的變化，其中碳酸酐酶以分離出來的並至少很大程度上擺脫了伴隨物質的酶的形式存在。優選使用依據化學或生物技術方法製備的碳酸酐酶，因為它們可以以特別純淨的形式使用。用於確定碳酸酐酶活性的體外活性測試是本身已知的。在本發明的範圍內適於確定碳酸酐酶活性變化的體外酶活性測試，包括例如測試在碳酸酐酶影響下pH-值的變化(參見K.M.Wilbur，N.G.Andersen，Journal of Biological Chemistry176(1948)147-154；G.Sanyal，T.H.Maren，Journal of Biological Chemistry256(1981)608-612)，停流測試法(參見R.G.Khalifah，Journal of BiologicalChemistry246(1971)2561 -2573)或4-硝基苯乙酸-酯酶-方法(4-Nitrophenylacetat-Esterase-Methode)(參見Y.Pocker，J.T.Stone，Journal of the American Chemical Society87(1965)5497-5498)。在最後所述的測試中利用了碳酸酐酶也能作為酯酶作用的特性，確定在所研究的碳酸酐酶的影響下4-硝基苯乙酸的水解速度。
在此相互關係中根據本發明優選一種用於確定化合物CA-抑制特性的測試方法，其在C.T.Supuran等人，European Journal of MedicinalChemistry33(1998)577-594(參見特別是第592頁；下文中以「Supuran等人」註明)或在A.Scozzafava等人，Journal of MedicinalChemistry42(1999)3690-3700(參見特別是第3697頁；下文中以「Scozzafava等人」註明)中有描述。就此在本發明的公開範圍內明確參照引入上述Supuran等人和Scozzafava等人描述的測試方法。在一種上述依據Supuran等人或Scozzafava等人的體外-標準活性測試中顯示至少10μmol/l或更低(＝更高的效果)的IC50-濃度值的化合物，就本發明來說可以作為適宜的有CA-抑制效果的化合物(＝CA-抑制劑)被挑選出來。如果確定人類CA-亞型的活性，4-硝基苯乙酸-酯酶-方法之外還可以有更適宜的方法。特別適宜的方法是允許跟蹤相對快速的反應過程。
在一種依據Scozzafava等人(vide supra)所描述的4-硝基苯乙酸-酯酶-方法操作的酶活性測試中(出自Y.Pocker和J.T.Stone，Biochemistry6(1967)668-678的描述)在本發明的範圍內證明，託吡酯對於以生物技術的方法獲取的人類碳酸酐酶亞型II具有明顯的抑制效果(IC50＝5nmol/l)，並且這種抑制效果明顯地比作為對照物質測試的經典CA-抑制劑乙醯唑磺胺或甲醯唑磺胺各自引起的抑制效果強。人類碳酸酐酶亞型II是依據Scozzafava等人給出的方法獲取的。
在同一測試中證明，託吡酯對於以生物技術的方法獲取的小鼠碳酸酐酶亞型Va(＝mCA Va)也具有明顯的抑制效果(IC50＝74nmol/l)。不同於Scozzafava等人給出的試驗規則，mCA Va酶在此測試中使用了120 nM的濃度。mCA Va是依據H.R.Heck等人，Journal of BiologicalChemistry269(1994)24742-24746中給出的方法以本身已知的方式獲取的。在此使用埃希氏菌屬大腸桿菌菌種BL 21(DE3)，在通過異丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)可誘導的T7-啟動子的控制下使用一種含有編譯mCA Va序列的質粒載體。細菌培養物在37℃攪拌下注入到含有氨比西林(100μg/ml)的Luria-Bertani-流體培養基中並且用600nm分光光度法追蹤它的生長。當細菌培養物進入指數生長期時，加入最後濃度為1mmol/l的IPTG。在3小時的保溫培養期後(37℃攪拌下)，將細菌培養物以7000×g離心15分鐘並除去上清液。將0.1體積兩次蒸餾的水置入得到的沉澱塊中，並加入溶解酶(100μg/ml)。在超聲波處理下溶解細胞。對此將10ml獲取的細菌懸浮物中部分加到上端開口的玻璃容器中並用超聲波處理每個樣品4次各3分鐘。在每次超聲波脈衝後確定樣品在600nm的吸收率，為此每100μl的樣品用900μl兩次蒸餾的水稀釋。當樣品在600nm的吸收率大約在初始值的1/10時，達到了終點。在成功的細胞溶解之後加入CaCl2-結合緩衝溶劑(Fa.Stratagene)，並將獲得的細胞溶解產物加置在鈣調蛋白-親和性-樹脂柱上提純。提純是依據在樹脂上聯結的鈣調蛋白區與結合鈣調蛋白的肽標記之間有高親和性，肽標記存在於試驗的mCA Va-蛋白N-末端上。提純是以本身已知的方式完成的(參見Fa.Stratagene的手冊「AffinityLIC Cloning and Protein Purification Kit Manual」)。
使用根據本發明的第二實施方案去發現適於肥胖症治療和/或預防的化合物，通過此方法將具有能力使分離出來的哺乳動物活細胞檸檬酸循環中合成的物質代謝產物或檸檬酸循環的脂肪終產物的生成量減少的化合物挑選出來。作為檸檬酸循環的物質代謝產物，其生成量在所檢驗的化合物影響下的減少是可測量的，適宜的是酸溶性物質代謝產物如檸檬酸、馬來酸、延胡索酸和/或α-酮戊二酸，優選檸檬酸。進一步適宜作為物質代謝產物的有檸檬酸循環的油脂終產物，如自由脂肪酸。在這第二實施方案中同樣確定了所檢驗的化合物抑制至少一種哺乳動物體內存在的碳酸酐酶的能力，然而所使用的測試模式卻不同於第一種實施方案的設置。第二實施方案的方法以這樣的原則為依據，以本身已知的方式確定分離出來的哺乳動物活細胞檸檬酸循環的代謝中間產物或終產物中來自14C-同位素標記的檸檬酸循環底物的放射性，並且將所獲取的結果和在相同條件下受CA-抑制作用的化合物影響所達到結果作對比。優選在這種改動的方法中使用分離出來的齧齒動物如大鼠、小鼠或豚鼠，或人類的活細胞，優選人類細胞。要是使用齧齒動物的細胞，考慮脂肪細胞或肝細胞。優選齧齒動物的脂肪細胞。要是使用人類的細胞，可以使用脂肪細胞或肝細胞。優選人類肝細胞。在此改動的方法中使用的哺乳動物細胞可以按照通常的飼養和/或培養方法獲得。可以使用天然的或經生物技術改變的哺乳動物細胞。如果應該確定檸檬酸循環的酸溶性中間產物的放射性吸收，優選使用14C-碳酸氫根(＝NaH[14C]O3)作為14C-標記的底物。如果應該確定檸檬酸循環的油脂終產物的放射性吸收，優選使用[U-14C]葡萄糖作為14C-標記的底物。
S.A.Hazen等人在FASEB Journal10(4)(1996)481-490(下文中以「Hazen等人」註明)中給出一種優選經改動的第二實施方案，用於確定具有能力抑制哺乳動物體內DNL的化合物。在此，在本發明的公開範圍內明確參考引入上述Hazen等人描述的測試方法。在一種上述依據Hazen等人的測試中顯著抑制了經構入放射性14C-標記物質的可作為檸檬酸循環的前體(例如往檸檬酸、馬來酸、延胡索酸和/或α-酮戊二酸中構入14C-碳酸氫根)的化合物，其IC50-值至少是10μmol/l或以下(＝更高的效能)，根據本發明可以作為適宜的化合物被挑選出來。
在本發明的範圍內實施的一種與Hazen等人所描述的測試模式相符的測試模式顯示託吡酯對於以生物技術方式獲取的大鼠脂肪細胞(細胞種3T3-F442A)的檸檬酸循環的酸溶性物質代謝產物的生成具有明顯的抑制作用。這種託吡酯的抑制作用(IC50＝348nmol/l)無疑地比作為對照物質測量的經典CA-抑制劑依索唑胺(Ethoxzolamid)的作用更明顯。
使用一種特別優選的根據本發明方法的改動方案去發現適於肥胖症治療和/或預防的化合物，使這樣的化合物被挑選出來，其在上述本方法的第一實施方案中，特別在上述的體外酶活性測試中，作為適於抑制至少一種哺乳動物體內存在的碳酸酐酶被挑選出來的，並且附加地也在上述本方法的第二實施方案中作為適宜的被挑選出來的，造成分離出來的哺乳動物活細胞檸檬酸循環中形成的物質代謝產物生成量減少的化合物。本方法的第一實施方案可以快速有效地檢驗化合物抑制哺乳動物體內存在的碳酸酐酶的能力。本方法的第二實施方案此外還提供依據，是否所檢驗的化合物還具有能力進入CA V所在的哺乳動物活細胞的線粒體中。為了挑選適宜的化合物可以將上述第一和第二實施方案並列或以任意的順序先後實施。
根據本發明具有能力抑制哺乳動物DNL的化合物適於製備治療和/或預防肥胖症的藥物。在此將具有能力抑制至少一種哺乳動物體內存在的碳酸酐酶的化合物挑選出來。所挑選出的化合物理所當然地必須是生理耐受的並滿足通常對藥物作用物質所提出的要求，例如安全性和耐受性。優選應用能夠抑制哺乳動物體內存在的碳酸酐酶亞型II和/或V的化合物。特別優選能夠特異地抑制CA II和/或CA V，特別是CA V的化合物。
具有CA-抑制作用的先前已知的化合物，其在較長地服用後有減輕患者體重的成效，例如託吡酯，還表現有明顯的針對ZNS的作用如抗痙攣作用。對於以肥胖症治療和/或預防為目的較長時間服用的化合物，往往不希望有針對ZNS的副作用。依據上述本發明的方法作為適於肥胖症治療和/或預防而挑選出的化合物，可以因此附加地檢驗其針對ZNS的作用。例如，可以檢驗化合物可能具有的抗痙攣的特性。用於檢驗化合物抗痙攣的特性，適宜的方法有例如根據G.Chen等人，Proceedings of theSociety for Experimental Biology and Medicine，87(1954) 334-339(下文中以「Chen等人」註明)和J.E.P.Toman等人，Journalof Neurophysiology9(1946)231(下文中以「Toman等人」註明)所謂的「超大的電擊測試」(＝SES-Test，有時也稱作「最大的-電擊測試MES-Test)。在本發明的公開範圍內明確參考引入上述Chen等人和Toman等人描述的測試方法。以肥胖症治療和/或預防為目的對患者經過較長的時間服用的化合物應該是這樣的，其在上述依據Chen等人和Toman等人的SES-測試中基本上是無效應的，並且應該優選在使用至少100mg/kg p.o.的較高劑量時也不會顯示依據對於此測試通常標準看作是顯著的作用(例如依據Chen等人的「保護的劑量」PD50≥100mg/kg p.o.；由Chen等人給出的PD50-值基本上相應於通常作為「最小效應的劑量」給出的劑量，MED)。在上述發現化合物的方法中挑選出來的作為適宜的並附加地在上述依據Chen等人的MES-測試中基本上無效應的化合物，是特別適於製備用於肥胖症治療和/或預防的藥物。上述SES-(及MES-)測試是藥理學的標準測試並且可以在相應的服務提供處(例如「Panlabs」公司)作為常規方法實施的。
根據本發明的方法作為適於肥胖症治療和/或預防被發現的化合物可以通常作為藥物用通常的調藥輔助劑按處方調製，例如包括片劑、膠囊、栓劑或溶液。這種按處方的調製可以使用通常的固體或流體的載體物質根據本身已知的方法製備，例如乳糖、澱粉或滑石或液體石蠟和/或在使用通常的調藥輔助劑，例如藥片崩解劑、溶液調節劑或防腐劑。根據本發明，適宜的調藥製劑例如在EP 0 138 441 A2及WO 98/00130中是公開的。
權利要求
1.發現適於肥胖症治療和/或預防的化合物的方法，其特徵在於，選擇具有能力抑制哺乳動物的，特別是人的起始脂肪合成的化合物。
2.根據權利要求1的方法，其中這樣的化合物作為適宜的而被挑選出來，其具有能力抑制至少一種在哺乳動物體內存在的碳酸酐酶。
3.根據權利要求2的方法，其中使用至少一種化合物與至少一種碳酸酐酶接觸並隨即鑑定出抑制至少一種碳酸酐酶活性的化合物。
4.根據權利要求2的方法，其中使用齧齒動物或人類體內存在的碳酸酐酶。
5.根據權利要求4的方法，其中使用人類體內存在的碳酸酐酶。
6.根據權利要求2的方法，其中使用哺乳動物，特別是人類體內存在的碳酸酐酶亞型II和/或V。
7.根據權利要求6的方法，其中使用哺乳動物，特別是人類體內存在的碳酸酐酶亞型V。
8.根據權利要求3的方法，其中碳酸酐酶是作為依據化學或生物技術的方法獲取的分離出來的酶存在，並且在化合物的影響下碳酸酐酶的活性變化是通過體外酶活性測試確定的。
9.根據權利要求1的方法，其中這樣的化合物作為適宜的而被挑選出來，其具有能力減少分離出來的哺乳動物活細胞的檸檬酸循環物質代謝產物生成量。
10.根據權利要求9的方法，其中確定在化合物的影響下細胞檸檬酸循環中生成的檸檬酸、馬來酸、延胡索酸、α-酮戊二酸生成量的減少和/或對檸檬酸循環中油脂終產物生成量的減少。
11.根據權利要求9的方法，其中使用分離出來的齧齒動物或人類的活細胞。
12.根據權利要求11的方法，其中使用脂肪細胞或肝細胞。
13.發現適於肥胖症治療和/或預防的化合物的方法，其特徵在於，選擇一種根據權利要求8和附加根據權利要求9的方法中分別被鑑定為適宜的化合物。
14.發現適於肥胖症治療和/或預防的化合物的方法，其中選擇化合物，其在一種根據權利要求1的方法中被鑑定為適宜的化合物並附加地在用於確定抗痙攣特性的標準測試中被鑑定為基本無效的。
15.具有能力抑制哺乳動物體內起始脂肪合成的化合物的應用，用於製備肥胖症治療和/或預防的藥物。
16.根據權利要求15的化合物的應用，其具有能力抑制至少一種在哺乳動物體內存在的碳酸酐酶。
17.根據權利要求15或16的化合物的應用，其具有能力抑制哺乳動物體內存在的碳酸酐酶亞型II和/或亞型V。
18.根據權利要求15的化合物的應用，其基本上沒有抗痙攣的特性。
19.依照一種根據權利要求1的方法第一次被鑑定為是適於肥胖症治療和/或預防的化合物的應用，用於製備肥胖症治療和/或預防的藥物。
全文摘要
描述了一種發現適於肥胖症治療和/或預防的化合物的方法，通過該方法人們確定所檢驗的化合物抑制哺乳動物和/或人的起始脂肪合成的能力。另外描述具有能力抑制哺乳動物體內起始脂肪合成的化合物應用於製備肥胖症治療和/或預防的藥物的用途。
文檔編號G01N33/15GK1443085SQ01812973
公開日2003年9月17日 申請日期2001年7月12日 優先權日2000年7月20日
發明者J·赫博布蘭特, J·安特爾, U·布魯斯霍夫, S·戴維, H·賽恩, M·韋斯克 申請人:索爾瓦藥物有限公司