治療adamts－5相關疾病的方法

2023-12-08 23:18:41 4

專利名稱：治療adamts－5相關疾病的方法
技術領域：
本發明涉及治療ADAMTS-5相關疾病、具體地說治療骨關節炎的方法。本文中使用的術語「ADAMTS」意指帶有I型血小板反應蛋白基元的解聯蛋白和金屬蛋白酶。本文中使用的術語「KO」指攜帶引起基因產物(例如轉基因動物的細胞中ADAMTS-5基因產物)表達顯著減少或者缺乏的突變的動物。
背景技術：
骨關節炎為滑液關節病理症狀，其特徵為軟骨細胞外基質降解。軟骨細胞外基質的主要成分為蛋白聚糖聚集蛋白聚糖。聚集蛋白聚糖的病理性裂解發生在蛋白骨架的球間域中的兩個主要位點，它導致自細胞外基質的功能實體釋放。一個位點(N341-342F)通過基質金屬蛋白酶(MMP)裂解，而聚集蛋白聚糖中第二個非-MMP裂解位點為E373-374A。E373-374A裂解位點已鑑定為骨關節炎滑液流體樣品(Lohmander，Neame和Sandy，1993，Arthritis Rhuem 361214)和細胞因子刺激的軟骨培養物(Sandy等，1991，J.Biol.Chem.2668683)中降解的重要位點。已證實幾種ADAMTS酶可在E373-374A或「聚集蛋白聚糖酶(aggrecanase)」位點裂解聚集蛋白聚糖(Kuno等，2000，FEBS Letters478241；Rodriquez-Manzaneque等，2002，Biochem.Biophys.Res.Commun.293501；Somerville等，2003，Biol.Chem.2789503；美國專利第6451575號)。ADAMTS-4和ADAMTS-5或者聚集蛋白聚糖酶-1和聚集蛋白聚糖酶-2，分別似乎為能夠由關節軟骨合成的兩種酶，其具有最有效的「聚集蛋白聚糖酶」活性(＞1000倍)(Tortorella等，1999，Science 2841664和Abbaszade等，1999，J.Biol.Chem.27423443)。然而，不清楚是否這些酶共同或者獨立地引起骨關節炎中聚集蛋白聚糖降解。
ADAMTS-4在關節疾病中的證據被發現於在用炎性細胞因子刺激關節組織後增加ADAMTS-4表達的幾篇報導中。Bau等，Arthritis Rhuem 462648-2657；Curtis等，2000，J.Biol.Chem.275721-724；Tortorella等，2001，Osteoarthritis Cartilage 9539-552；Little等，2002，Arthritis Rhuem 46124-129；和Yamanashi等，2002，J.Immunol.1681405-1412。體外發現指明ADAMTS-4為在天然疾病的裂解部位可有效裂解聚集蛋白聚糖的少數酶之一。Tortorella等，2000，J.Biol.Chem.27518566-18573；Tortorella等，2002，Matrix Biol.21499-511。
另外，已知聚集蛋白聚糖酶在其中發生細胞外蛋白降解或者破壞的其它疾病中起作用，例如癌症、哮喘、慢性阻塞性肺疾病(「COPD」)、動脈粥樣硬化、與年齡有關的黃斑變性、心肌梗塞、角膜潰瘍和其它眼表面疾病、肝炎、主動脈瘤、腱炎、中樞神經系統疾病、異常傷口癒合、血管生成、再狹窄、肝硬變、多發性硬化症、腎小球腎炎、移植物抗宿主病、糖尿病、炎性腸病、休克、椎間盤變性、中風、骨質減少和牙周病。
先前已報導ADAMTS-4敲除(KO)的產生(Glasson等，2004，Arthritis and Rhuem，502547-2558)。雖然許多報導顯示ADAMTS-4參與骨關節炎發展的至少某些證據，令人驚訝的是該小鼠在骨關節炎發作上與野生型(WT)相比不顯示任何差異，並且在聚集蛋白聚糖酶活性上不呈現任何差異。迄今，儘管ADAMTS-4仍然可能在包括人的其它動物體內參與骨關節炎，尚未鑑定與聚集蛋白聚糖降解產物的病理聚集有關的聚集蛋白聚糖酶活性。
發明概述本發明提供治療ADAMTS-5相關疾病特別是骨關節炎的方法，該方法包括給予對象有效量的ADAMTS-5抑制劑。在一個實施方案中，ADAMTS-5抑制劑抑制ADAMTS-5的金屬蛋白酶活性。在另一個實施方案中，該抑制劑抑制ADAMTS-5的聚集蛋白聚糖酶活性。用於治療ADAMTS-5相關疾病特別是骨關節炎的特別優選的藥物包括聯芳基磺醯胺化合物和結合併抑制ADAMTS-5的抗體。
本發明的優選聯芳基磺醯胺化合物為式I的化合物 其中R1為H或者C1-C6烷基；R2為H、C1-C6烷基、(CH2)nR2′、苯基或者苄基；n為0-6；R2′為芳基、雜芳基、環烷基或者雜環烷基；R3每次出現時獨立為H、滷素、OC(滷素)3、C(滷素)3、烷氧基或者C1-C6烷基；X選自CH2O、OCH2、C(R3)＝C(R3)、C(R3)2-C(R3)2、CH2NHC(＝O)、O(C＝O)NH、O、C(＝O)CH2、SO2CH2C(＝O)NH、SO2NH、OC(＝O)、CH2S(O)和CH2S(O)2；Z為至少一個芳基或者雜芳基部分。
尤其優選的本發明聯芳基磺醯胺列於以下實施例4的表1中。
另外，本發明提供了採用本發明的轉基因動物及自其分離的細胞，鑑定用於治療骨關節炎的藥物的方法。在一個具體的實施方案中，所述方法包括給予本發明的ADAMTS-5轉基因動物和具有ADAMTS-5活性的動物潛在的治療藥物，並且測定所述潛在的治療藥物是否能夠消除在WT型動物中誘發的骨關節炎發作但不影響ADAMTS-5轉基因動物。在另一個實施方案中，所述方法包括使來自ADAMTS-5轉基因動物的細胞和來自具有ADAMTS-5活性的動物的細胞與潛在的治療藥物接觸，並且測定藥物是否抑制具有ADAMTS-5活性的細胞內金屬蛋白酶活性而不抑制ADAMTS-5轉基因動物細胞內的金屬蛋白酶活性。兩種方法可以還包括測定藥物是否抑制ADAMTS-5金屬蛋白酶活性和/或聚集蛋白聚糖酶活性。
在另一個實施方案中，用於治療ADAMTS-5相關疾病、具體地說為骨關節炎的潛在藥物的鑑定方法包括通過接觸ADAMTS-5並且測定所述藥物是否抑制ADAMTS-5，鑑定抑制ADAMTS-5的藥物。在一個優選的實施方案中，所述藥物抑制ADAMTS-5的金屬蛋白酶活性。在一個特別優選的實施方案中，所述藥物抑制ADAMTS-5的聚集蛋白聚糖酶活性。
附圖簡述通過參照以下例證性實施方案的詳述以及所附附圖，本發明的這些和其它方面將得到更清楚理解，其中

圖1圖示了鼠ADAMTS-5基因的靶向破壞，(A)顯示ADAMTS-5的胺基酸序列圖，(B)顯示ADAMTS-5KO動物的等位基因鑑定和用於生成PCR產物的引物定位，(C)顯示採用1B中顯示的引物1和2生成的PCR產物，及採用1B中顯示的引物3和4生成的PCR產物，(D)顯示用於逆轉錄酶(RT)PCR以鑑定WT和KO動物中mRNA的引物位點圖，(E)顯示採用引物4和5生成的RT-PCR產物，和(G)顯示採用引物4和6生成的RT-PCR產物；圖2顯示14-18周老齡WT動物(頂部)、ADAMTS-4KO動物(左底部)和ADAMTS-5KO動物(右底部)的生長面上聚集蛋白聚糖酶生成的TEGE373新表位的免疫組織化學定位；圖3圖示了在誘導外科關節不穩定性後4和8周來自WT、ADAMTS-5純合KO和ADAMTS-5雜合小鼠的關節組織分數，(A)顯示表示為各關節的平均最大分數的組織分數，(B)顯示表示為通過關節的各組織切片的總分數平均值的組織分數；圖4圖示了在誘導關節不穩定性後4和8周WT、純合ADAMTS-5KO和雜合ADAMTS-5KO動物的內側脛骨坪的平均最大組織分數；圖5圖示了自WT和ADAMTS-5KO動物的關節軟骨釋放的蛋白聚糖，(A)顯示自培養關節軟骨釋放的總蛋白聚糖百分數，(B)顯示自關節軟骨釋放的TEGE373新表位的蛋白質印跡分析，(C)顯示來自WT(頂部)、ADAMTS-4KO(中部)和ADAMTS-5KO(底部)關節軟骨的股骨頭關節軟骨的免疫染色。
發明詳述本發明涉及以下發現ADAMTS-5的表達與骨關節炎直接相關。當被刺激形成骨關節炎時，轉基因ADAMTS-5KO小鼠對骨關節炎的發作具有抗性。這些轉基因動物代表第一種動物模型，其中單一基因的破壞已導致對骨關節炎的抗性。因此，這一發現已導致確定ADAMTS-5為治療骨關節炎的藥物靶分子，並且抑制劑、優選為ADAMTS-5的聚集蛋白聚糖酶抑制劑可用於治療骨關節炎。
因此，本發明涉及預防和/或治療骨關節炎的方法，包括給予對象有效量的抑制ADAMTS-5的藥物。這種藥物包括但不限於反義RNA、藥物化合物、尤其是結合併抑制ADAMTS-5的金屬蛋白酶位點的化合物、肽和蛋白質以及能夠結合併抑制ADAMTS-5的抗體。
本文使用的術語「有效量」指當給予對象時有效至少部分緩解(在優選的實施方案中，預防和/或治癒)患者推測所患疾病的藥物量。
在一個優選的實施方案中，藥物為能夠抑制ADAMTS-5金屬蛋白酶活性和/或聚集蛋白聚糖酶活性的抗-ADAMTS-5抗體。在一個特別優選的實施方案中，所述抗體抑制ADAMTS-5。這種抗體在以下實施例5中進一步討論。
在另一個優選的實施方案中，藥物為已發現用作金屬蛋白酶抑制劑和/或聚集蛋白聚糖酶抑制劑的聯芳基磺醯胺化合物。在一個特別優選的實施方案中，藥物為已發現用作ADAMTS-5抑制劑並且能夠抑制ADAMTS-5的聚集蛋白聚糖酶活性的聯芳基磺醯胺化合物。
在一個優選的實施方案中，聯芳基磺醯胺化合物為式I 其中R1為H或者C1-C6烷基；R2為H、C1-C6烷基、(CH2)nR2′、苯基或者苄基；n為0-6；R2′為芳基、雜芳基、環烷基或者雜環烷基；R3每次出現時獨立為H、滷素、OC(滷素)3、C(滷素)3、烷氧基或者C1-C6烷基；X選自CH2O、OCH2、C(R3)＝C(R3)、C(R3)2-C(R3)2、CH2NHC(＝O)、O(C＝O)NH、O、C(＝O)CH2、SO2CH2C(C＝O)NH、SO2NH、OC(＝O)、CH2S(O)和CH2S(O)2；Z為至少一個芳基或者雜芳基部分。
應該理解上述定義包括這些化合物的藥物可接受鹽和前藥。
在一個實施方案中，Z為吡啶、嘧啶、哌嗪、噠嗪、苯基、萘、呋喃、噻吩、吡咯、吡唑、咪唑、唑、異唑、噻唑、苯並噻唑、喹啉或者異喹啉，或者 其中U選自S、O、C(R3)＝C(R3)、C(R3)＝N和N(R4)；W選自C(R3)和N；M選自C(R3)和N；L選自S、O、C(R3)＝C(R3)、C(R3)＝N和N(R4)；R4和R5每次出現時獨立為連接至其它的鍵(a bond to the other)、H、C1-C6烷基或者苯基；R7選自連接R3的鍵、H、滷素、C(滷素)3、NR4R5、N[(CH2)2]2O、N[(CH2)2]2NR4、NHSO2R4、NR4C(＝O)R5、NHC(＝O)OR4、NO2、SO2NR4R5、SO2R4、OR4、C(＝O)R4、COOR4、CONR4R5、CN、苯基、雜芳基、C1-C6烷基、C2-C6烯基或者C2-C6炔基；R8選自H、苯基、雜芳基和C1-C6烷基。
取代時，R7優選用NR4R5、N[(CH2)2]2O、N[(CH2)2]2NR4、NHSO2R4、NR4C(＝O)R5、NHC(＝O)OR4、NO2、SO2NR4R5、SO2R4、OR8、C(＝O)R4、COOR4、CONR4R5、CN、苯基或雜芳基取代。
取代時，R8優選用NR4R5、N[(CH2)2]2O、N[(CH2)2]2NR4、NR4SO2R5、NR4C(＝O)R5、NHC(＝O)OR4、NO2、SO2NR4R5、SO2R4、C(＝O)R4、COOR4、CONR4R5、CN、苯基或雜芳基取代。
以上提及的R1基團中優選H和支鏈烷基，更優選為異丙基。
以上提及的R3基團中優選滷素、CF3、OCH3和CH3。
以上提及的X基團中優選CH2O、OCH2、C(R3)＝C(R3)和CH2NHC(＝O)。
以上提及的R7基團中優選CH3、乙基、異丙基、CF3、CN和OCH3。
以上提及的R8基團中優選CH3、苯基和苄基。
在一個實施方案中，X為CH2O，並且Z為芳基或者雜芳基，優選為雙環。
優選的聯芳基磺醯胺顯示在以下式2中 其中R1為H或者C1-C6烷基；Rc為H、滷素或者C1-C6烷基；X為O、CH2O或者OCH2；Z為至少一個芳基或者雜芳基部分。
當Z為芳基時，優選的部分包括取代苯基。苯基的取代基優選包括OH、滷素、C1-C6烷氧基、苯甲醯基、C1-C6烷基或者C1-C6烷醯基。
當Z為雜芳基時，優選部分包括苯並呋喃基、吡啶基、吲哚基。
在另一個實施方案中，X為OCH2，並且Z為芳基或者雜芳基，優選為雙環。
在另一個實施方案中，X為C(R3)＝C(R3)，並且Z為芳基或者雜芳基，優選為雙環。X更優選為反式碳-碳雙鍵。
在再另一個實施方案中，X為C(R3)2-C(R3)2，Z為芳基或者雜芳基，優選為雙環。
在一個實施方案中，X為CH2NHCO，Z為芳基或者雜芳基，優選為雙環。
當X為氨基甲酸酯O-CO-NH時，Z優選為芳基或者雜芳基，優選為雙環。
在一個實施方案中，X為CO2，Z為芳基或者雜芳基，優選為雙環。
在另一個實施方案中，X為O，Z為芳基或者雜芳基，優選為雙環。
在另一個實施方案中，X為C(＝O)CH2，Z為芳基或者雜芳基，優選為雙環。
在一個實施方案中，X為SO2CH2，Z為芳基或者雜芳基，優選為雙環。
在一個實施方案中，X為OCH2，Z為芳基或者雜芳基，優選為雙環。如果取代，所述取代優選處於第二個苯環上。
在一個實施方案中，X為OCH2，Z為芳基或者雜芳基，優選為雙環。如果取代，所述取代優選處於第一個苯環上。
在一個實施方案中，X為CH2OCH2，Z為芳基或者雜芳基，優選為雙環。如果取代，所述取代優選處於第一個苯環上。
無論單獨使用或者作為另一個基團的部分，本文使用的術語「烷基」指取代或者未取代的脂族烴鏈，除非另外具體指明，包括但不限於含1-12個碳原子、優選為1-6個碳原子的直鏈和支鏈。例如，術語「烷基」包括甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基和叔丁基。C1-C6烷基包括1-6個碳原子的直鏈和支鏈脂族基團。具體包括在「烷基」定義中的為任選取代的脂族烴鏈。
本文定義中使用的碳數目指碳骨架和碳分支，但是不包括取代基的碳原子，例如烷氧基取代等。
無論單獨使用或者作為另一個基團的部分，本文使用的術語「烯基」指取代或者未取代的脂族烴鏈，並且包括但不限於具有2-8個碳原子並含至少一個雙鍵的直鏈和支鏈。烯基部分優選具有1或2個雙鍵。這種烯基部分可以以E或者Z構型存在，本發明的化合物包括兩種構型。C2-C6烯基包括具有至少一個碳-碳雙鍵的1-6個碳原子直鏈或支鏈。具體包括在「烯基」定義中的為任選取代的脂族烴鏈。雜原子例如連接於烯基的O、S或N-R1不應連接至連接雙鍵的碳原子。
術語「炔基」指含至少一個碳-碳叄鍵的烴部分。C2-C6炔基包括具有至少一個碳-碳叄鍵的1-6個碳的直鏈或支鏈。
術語「環烷基」指單環、雙環、三環、稠和、橋連或者螺接的單價飽和烴部分，其中碳原子位於所述環系統的內部或者外部。環烷基部分的任何合適環位置可共價結合於定義的化學結構。環烷基部分的實例包括但不限於化學基團，例如環丙基、環丙基甲基、環丁基、環戊基、環己基、環己基甲基、環己基乙基、環庚基、降冰片基、金剛烷基、螺[4.5]癸基和同系物、異構體等。C3-C6環烷基包括任選被R3取代的3-6個碳原子的單環飽和環或者螺不飽和烴部分。實例為環戊烷、環己烷和環己二烯。
術語「環烯基」指單環、雙環、三環、稠和、橋連或者螺接的單價飽和烴部分，其中碳原子位於所述環系統的內部或者外部。環烷基部分的任何合適環位置可共價結合於定義的化學結構。環烷基部分的實例包括但不限於化學基團，例如環丙基、環丙基甲基、環丁基、環戊基、環己基、環己基甲基、環己基乙基、環庚基、降冰片基、金剛烷基、螺[4.5]癸基和同系物、異構體等。C3-C6環烷基包括3-6個碳原子的單環飽和環，任選被R3取代。
「芳基」指具有一個或者多個環的不飽和環烴，可以與碳環或雜環在任何可能的位置稠合。芳基化合物一般具有帶有苯、萘等環結構特徵的分子。
「雜芳基」指5-6元芳基雜環，其在環中含有1-3個選自氧、氮和硫原子的雜原子，可與碳環或雜環在任何可能的位置稠合。包括不為芳族的不飽和雜環，例如噻吩基、呋喃基、吡咯基等。
「雜環烷基」指含碳原子和1-2個選自N、O和S的雜原子的5-7元飽和環。
無論單獨使用或者作為另一個基團的部分，本文使用的術語「苯基」指取代或未取代的苯基。
可用一個或多個取代基取代任選取代的部分。合適的任選取代基可獨立選自H、滷素、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、NR4R5、N[(CH2)2]2O、N[(CH2)2]2NR4、NHSO2R4、NR4C(＝O)R5、NHC(＝O)OR4、NO2、SO2NR4R5、SO2R4、OR4、C(＝O)R4、COOR4、CONR4R5和CN。
當這種部分被取代時，例如，它們通常可以被單-、二-、三-或者全取代。滷素取代基的實例包括1-溴乙烯基、1-氟乙烯基、1，2-二氟乙烯基、2，2-二氟乙烯基、1，2，2-三氟乙烯基、1，2-二溴乙烷、1，2-二氟乙烷、1-氟-2-溴乙烷、CF2CF3、CF2CF2CF3等。
術語滷素包括溴、氯、氟和碘。
為簡單化起見，連接點(「-」)未指明。當描述原子或者化合物以定義變量時，應理解打算以滿足原子或者化合物的化合價的方式替換變量。例如，當L為C(R3)＝C(R3)時，兩個碳原子形成環的部分以滿足它們各自的化合價。
本文使用的術語「藥物可接受鹽」指當本發明的化合物含鹼性部分時衍生自有機和無機酸的鹽，例如乙酸、丙酸、乳酸、枸櫞酸、酒石酸、琥珀酸、馬來酸、丙二酸、扁桃酸、蘋果酸、鄰苯二甲酸、鹽酸、氫溴酸、磷酸、硝酸、硫酸、甲磺酸、萘磺酸、苯磺酸、甲苯磺酸、樟腦磺酸以及類似已知的可接受的酸。當本發明的化合物含羧酸或者酚部分，或者能夠形成鹼加成鹽的類似部分時，鹽也可以由有機和無機鹼形成，優選為鹼金屬鹽，例如鈉、鋰或者鉀。
本文使用的術語「對象」指哺乳動物，優選為人。
本文使用的術語「給予」指直接給予患者化合物或者組合物，或者給予患者化合物的前藥衍生物或者類似物，它們在患者體內形成等量的活性化合物或者物質。
本文使用的術語「載體」應包括載體、賦形劑和稀釋劑。
本發明的化合物可以包含不對稱碳原子，本發明的某些化合物可以包含一個或多個不對稱中心並且可以因此產生光學異構體和非對映體。雖然式I中不顯示立體化學，本發明包括這種光學異構體和非對映體，以及外消旋和拆分的對映體純的R和S立體異構體，以及R和S立體異構體的其它混合物及其藥物可接受鹽。當優選立體異構體時，在某些實施方案中，其可以基本上不含相應的對映體。因此，基本上不含相應對映體的對映體指通過分離技術分離或者製備為不含相應的對映體的化合物。本文使用的術語「基本上不含」指化合物由明顯更大部分的一種立體異構體組成，優選相應對映體少於約50％，更優選少於約25％，甚至更優選少於約10％。
因此本發明提供包含至少一種聯芳基磺醯胺化合物和一種或多種藥物可接受載體、賦形劑或者稀釋劑的藥用組合物。
這種載體的實例對本領域技術人員是熟知的，按照可接受的藥學方法製備，例如那些在Remington′s Pharmaceutical Sciences，第17版，Alfonoso R.Gennaro編輯，Mack出版公司，Easton，PA(1985)中描述的方法，其通過引用整體結合到本文中。藥物可接受載體為與製劑中其它成分相容和生物可接受的載體。
本發明的化合物可以單獨或者與常規藥用載體組合，口服或者胃腸外給藥。可應用的固體載體包括一種或多種物質，它們也可用作矯味劑、潤滑劑、助溶劑、懸浮劑、填充劑、助流劑、壓制助劑、粘合劑或者片劑-崩解劑或者包囊材料。它們以常規方式配製，例如，以類似於用於已知的抗高血壓藥、利尿藥和β-阻滯劑的方式。含本發明活性化合物的口服製劑可包括任何常規使用的口服形式，包括片劑、膠囊劑、頰形式、含片、錠劑和口服液體、混懸劑或者溶液劑。在粉劑中，載體為微小分散的固體，其與微小分散的活性成分混合。在片劑中，活性成分以合適的比例與具有必要壓制性質的載體混合，並且壓制為要求的形狀和大小。粉劑和片劑優選含有最多達99％的活性成分。
膠囊劑可以包含活性化合物與惰性填充劑和/或稀釋劑例如藥物可接受澱粉(例如玉米、馬鈴薯或者木薯澱粉)、糖、人工甜味劑、粉末纖維素如結晶和微晶纖維素、著色劑、明膠、膠等的混合物。
有用的片劑製劑可通過常規壓制、溼法制粒或者幹法制粒方法製備，採用以下藥物可接受稀釋劑、粘合劑、潤滑劑、崩解劑、表面修飾劑(包括表面活性劑)、懸浮劑或者穩定劑，包括但不限於硬脂酸鎂、硬脂酸、十二烷基硫酸鈉、滑石粉、糖、乳糖、糊精、澱粉、明膠、纖維素、甲基纖維素、微晶纖維素、羧甲基纖維素鈉、羧甲基纖維素鈣、聚乙烯吡咯烷酮、藻酸、阿拉伯膠、黃蓍膠、枸櫞酸鈉、複合矽酸鹽、碳酸鈣、甘氨酸、蔗糖、山梨糖醇、磷酸二鈣、硫酸鈣、乳糖、高嶺土、甘露糖醇、氯化鈉、低熔點石蠟和離子交換樹脂。優選的表面修飾劑包括非離子和陰離子表面修飾劑。表面修飾劑的代表性實例包括但不限於POLOAXEMER 188，乙二醇和丙二醇的嵌段共聚物、苯扎氯銨、硬脂酸鈣、十六醇十八醇混合物、聚西託醇乳化蠟、脫水山梨糖醇酯、膠態二氧化矽、磷酸鹽、十二烷基磺酸鈉、矽酸鋁鎂和三乙醇胺。本文的口服製劑可以使用改變活性化合物吸收的標準延遲或者定時釋放製劑。口服製劑也可以包括在水中或者果汁中給予活性成分，按需要包含合適的穩定劑或者乳化劑。
液體載體可以用於製備溶液劑、混懸劑、乳劑、糖漿劑和酏劑。本發明的活性成分可被溶於或者懸浮於藥物可接受液體載體例如水、有機溶劑、兩者的混合物或者藥物可接受油或者脂肪中。液體載體可含其它合適的藥用添加劑例如增溶劑、乳化劑、緩衝劑、防腐劑、甜味劑、矯味劑、懸浮劑、增稠劑、著色劑、粘度調節劑、穩定劑或者滲透壓-調節劑。用於口服和胃腸外給藥的液體載體的合適的實例包括水(尤其包含以上添加劑，例如纖維素衍生物，優選為羧甲基纖維素鈉溶液)、醇(包括一元醇和多元醇例如乙二醇)、它們衍生物和油(例如分餾椰子油和花生油)。對胃腸外給藥，載體也可為油酯例如油酸乙酯和肉豆蔻酸異丙酯。滅菌液體載體用於胃腸外給藥的滅菌液體形式組合物。用於加壓組合物的液體載體可為滷代烴或者其它藥物可接受噴射劑。
液體藥用組合物為滅菌溶液或者混懸液，可用於例如肌內、腹膜內或者皮下注射。滅菌溶液也可靜脈給藥。用於口服給藥的組合物可為液體或者固體形式。
藥用組合物優選以單位劑量形式存在，例如片劑、膠囊劑、粉劑、溶液劑、混懸劑、乳劑、顆粒劑或者栓劑。以這種形式，組合物再分為含合適量的活性成分的單位劑量，單位劑量形式可為包裝的組合物，例如包裝的粉末、小瓶、安瓿、預裝注射器或者含液體的囊劑。單位劑量形式可為例如膠囊或者片劑本身，或者它可為合適數量的包裝形式的任何這種組合物。這種單位劑量形式可以含約1mg/kg至250mg/kg，可以以單一劑量或者以兩個或者更多個分劑量給藥。這種劑量可以以用於將本文的活性化合物給至接受者血流的任何方式，包括口服、通過植入、胃腸外(包括靜脈內、腹膜內和皮下注射)、直腸、陰道和透皮。可在洗劑、霜劑、泡沫劑、貼劑、混懸劑、溶液劑和栓劑(直腸和陰道)中採用本發明化合物或者其藥物可接受鹽，進行這種給藥。
當給藥用於治療或者抑制具體疾病狀態或者病症時，應理解有效劑量可以依採用的具體化合物、給藥方式、待治療疾病的情況及其嚴重程度以及與受治療個體有關的各種身體因素而變化。在治療應用中，以足以治癒或者至少部分緩解疾病症狀及其併發症的量向已患有疾病的患者提供本發明的化合物。足以實現該目的的量定義為「治療有效量」。用於治療具體病例的劑量必須由主治醫師主觀確定。涉及的變體包括患者的具體疾病和體積、年齡和應答模式。
在某些情況下，可期望以氣溶膠形式直接將化合物給予氣道。對通過鼻內或者支氣管內吸入給藥，本發明的化合物可以配製成水溶液或者部分水溶液。
本發明的化合物可胃腸外或者腹膜內給藥。這些活性化合物作為游離鹼或者藥物可接受鹽的溶液劑或者混懸劑可以製備在適合與表面活性劑例如羥基-丙基纖維素混合的水中。分散液也可以製備在甘油、液體聚乙二醇和它們在油中的混合物中。在儲存和使用的常規條件下，這些製劑含抑制微生物生長的防腐劑。
適於注射用途的藥用形式包括滅菌水溶液或者分散液和用於臨時製備滅菌水溶液或者分散液的滅菌粉末。在所有的情況下，所述形式必須是無菌的，並且必須為以易於注射的程度存在的流體。它在製備和貯存條件下必須是穩定的，並且必須防腐以防止微生物例如細菌和真菌的汙染。載體可為溶劑或者分散介質，包括例如水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇和液體聚乙二醇)、其合適的混合物和植物油。
可通過使用透皮貼劑透皮給予本發明的化合物。對本公開的目的，透皮給藥被理解為包括透過身體表面和身體通道內襯(包括上皮和黏膜組織)的所有給藥。可在洗劑、霜劑、泡沫劑、貼劑、混懸劑、溶液劑和栓劑(直腸和陰道)中使用本發明化合物或者其藥物可接受鹽，進行這種給藥。
通過使用含活性化合物和對活性化合物惰性、對皮膚無毒性、使藥物通過皮膚全身吸收進入血流的載體的透皮貼劑，可以實現透皮給藥。載體可以採用任何形式，例如霜劑和膏劑、糊劑、凝膠劑和包藏裝置。霜劑和膏劑可以為粘稠的液體或者水包油或者油包水型的半固體乳劑。包含活性成分、分散於石油或者親水性石油中的吸收性粉末的糊劑也可以是合適的。各種包藏裝置可以用於釋放活性成分進入血流，例如覆蓋含活性成分(帶有或者不帶有載體)的貯器的半透膜、或者含活性成分的基質。其它包藏裝置在文獻中已知。
本發明的化合物可以以常規栓劑形式直腸或者陰道給藥。栓劑製劑可以由常規材料製備，包括可可豆脂(加入或者不加入蠟以改變栓劑熔點)和甘油。也可以使用水溶性栓劑基質，例如各種分子量的聚乙二醇。
在某些實施方案中，本發明涉及聯芳基磺醯胺化合物的前藥。各種形式的前藥是本領域已知的，例如以下中討論的例如Bundgaard(編輯)，前藥設計(Design of Prodrugs)，Elsevier(1985)；Widder等(編輯)，酶學方法(Methods in Enzymology)，第4卷，Academic Press(1985)；Krogsgaard-Larsen等(編輯)，「前藥設計與應用(Design and Application of Prodrugs)」，藥物設計和發展的教科書(Textbook of Drug Design and Development)，第5章，113-191(1991)，Bundgaard等，Journal of Drug Deliver reviews，81-38(1992)，Bundgaard，J.of Pharmaceutical Sciences，77285 et seq.(1988)；和Higuchi andStella(編輯)作為新藥傳遞系統的前藥(Prodrugs as Novel DrugDelivery Systems)，American Chemical Society(1975)，其各自通過引用整體結合到本文中。
應理解本發明的化合物的劑量、給藥方案和方式應根據所治療的疾病和個體而變化，並且由參與的醫療實踐者的判斷決定。優選一種或多種本文化合物的給藥在低劑量下開始，並且增加直到達到要求的作用。
按照以下一般合成流程，自市售可得到的起始原料、如文獻方法中的描述製備的材料、或者在所述流程和實驗方法中描述的新中間體製備本發明的化合物。該一般流程覆蓋大多數的實施例。對更詳細的信息，請參照以下實施例部分中的流程。
一般合成流程
這裡使用的鹼為三乙胺、碳酸鉀、NaH、Hunig鹼等。偶合通常通過Suzuki偶合或者Stille偶合進行。採用TFA、NaOH、LiOH、K2CO3等進行水解。
本發明許多化合物的更具體的合成途徑包括在以下流程中。本領域技術人員應理解，這些合成可要求未在流程中顯示的保護和脫保護步驟，並且步驟順序可以變化以符合靶分子的官能度。
在流程1中，用4個步驟製備本發明的化合物1。在Hunig鹼存在下用4-溴-苯磺醯氯進行纈氨酸甲酯的磺醯化，得到磺醯胺中間體1。在Suzuki偶合條件下，採用鈀催化劑使該4-溴-苯磺醯胺進一步與硼酸酯偶合，獲得聯苯磺醯胺中間體2，然後用各種烷基化試劑使聯苯磺醯胺中間體2烷基化，提供聯苯磺醯胺酯(中間體3)。採用鹼例如NaOH或者LiOH進行中間體3的水解，形成最終產物1。
流程1
化合物1的另一條途徑顯示在流程2中。在鹼性條件下，於DMF中酚衍生物轉變成硼酸頻哪醇酯(中間體4)。然後在Suzuki偶合條件下，硼酸頻哪醇酯與4-溴-苯磺醯胺偶合，提供聯苯磺醯胺中間體5，後者在鹼性條件下水解為最終產物。
流程2 製備本發明化合物1的第三種選擇方案基於流程3進行。流程3中的合成順序類似於流程1中的方法，但採用不同的起始原料，纈氨酸叔丁酯。因此，通過採用TFA使中間體8的叔丁酯脫保護，進行形成產物1的最後步驟。
流程3 可進行流程3的稍微改進以產生本發明的化合物1。這圖示在流程4A中。在這種情況下，可自商業來源購買帶有合適醚部分的硼酸酯，用於Suzuki偶合以提供中間體8。自中間體8的叔丁酯脫保護產生要求的最終產物1。
流程4A 通過水解合適的酯例如中間體10也可製備本發明化合物1。
流程4B
流程4B有以下特徵烷基化、Suzuki偶合和脫保護步驟。
烷基化使苯酚衍生物(4.14mmol)溶於甲醇(6mL)中並且用氫氧化四丁基銨(4.14mmol)處理。攪拌混合物10分鐘，減壓除去溶劑。使殘餘物溶於THF(10mL)中並用苄基溴(4.14mmol)的THF溶液(5mL)處理。室溫下攪拌反應物過夜。減壓除去溶劑並重新溶於二氯甲烷(5mL)和乙醚(50mL)中。用水(4×50mL)和飽和氯化鈉溶液(50mL)洗滌有機溶液，經硫酸鎂乾燥。過濾有機溶液並且減壓濃縮。經快速矽膠層析法純化粗品物料，以53％收率得到純化產物，後者為中間體4硼酸酯。
Suzuki偶合使硼酸酯(1.07mmol)和芳基溴(1.07mmol)溶於乙二醇二甲醚(10mL)中，用四(三苯基膦)合鈀(0)(0.054mmol)處理生成的溶液。加入碳酸鉀(2.14mmol)的水溶液(3.5mL)，將反應物加熱至回流，反應1小時。冷卻反應物，過濾除去固體，用水(10mL)稀釋並且減壓濃縮。用二氯甲烷(3×25mL)提取殘餘物，用水(25mL)和飽和氯化鈉溶液(25mL)洗滌有機層。經硫酸鎂乾燥有機溶液，過濾並減壓濃縮。經快速矽膠層析法純化，以57％收率得到產物中間體10，要求的產物的(三甲基甲矽烷基)乙酯。在某些情況下，PdCl2(dppf)用作催化劑，替代四(三苯基膦)合鈀(0)。
用MgBr2脫保護使2-(三甲基甲矽烷基)乙酯(0.0621mmol)溶於二氯甲烷(58mL)中，用溴化鎂醚化物(0.186mmol)處理。劇烈攪拌混合物過夜或者直到反應完成，然後與10％HCl(2×25mL)和飽和氯化鈉溶液(25mL)一起振搖。然後經硫酸鎂乾燥有機溶液，過濾並減壓濃縮，以95％收率得到產物。需要時粗品產物可經HPLC純化。
如流程4C中所示，可用硼酸酯對游離酸進行Suzuki偶合。因此，避免酯的水解(如在中間體10中)。這導致直接製備化合物1。
流程4C 與游離酸的Suzuki偶合使硼酸酯(1.36mmol)和溴代酸(1.36mmol)溶於乙二醇二甲醚(13.8mL)中，用四(三苯基膦)合鈀(0)(0.068mmol)處理生成的溶液。室溫下攪拌10分鐘後，加入碳酸鉀(4.08mmol)的水溶液(4.8mL)。將溶液加熱至回流，反應2小時，然後冷卻至室溫過夜。減壓下將混合液濃縮為含水的殘餘物，加入乙酸乙酯(50mL)。用10％HCl(2×25mL)和飽和氯化鈉溶液(25mL)洗滌有機混合物。經硫酸鎂乾燥有機溶液，過濾並減壓濃縮為粗殘餘物，後者採用快速矽膠層析法純化，以64％收率得到產物。
在流程5中以3個步驟製備本發明的化合物2。通過鹼性條件下烷基化製備硼酸酯(中間體11)。由此得到的中間體11可易於與4-溴-苯磺醯胺衍生物偶合，提供聯苯磺醯胺類似物(中間體12)。
中間體12中的酯官能團可在各種條件下水解，得到要求的聯苯磺醯胺產物2。
流程5
在流程6中顯示提供化合物2的另一種方法。起始原料4-羥基聯苯磺醯胺衍生物易於通過Suzuki偶合得到。4-羥基聯苯磺醯胺在鹼性條件下烷基化，提供帶有醚連接基團的聯苯磺醯胺酯中間體13。採用NaOH水溶液使酯(中間體13)水解，提供要求的本發明產物2。
流程6 採用流程6A中顯示的途徑，可進行流程6中所示酯例如甲酯的脫保護。
流程6A甲酯的脫保護 使中間體13A甲酯(0.294mmol)溶於THF∶MeOH(2∶1)(2mL)中，加入1M LiOH(0.881mmol)。攪拌反應混合液3天。除去溶劑並使剩餘的白色固體溶於H2O中。用乙醚提取H2O。除去乙醚層並用HCl(濃)將水層酸化至pH 2，形成混濁的溶液。用CH2Cl2提取該溶液。除去生成的水層，用鹽水洗滌剩餘的有機層。除去溶劑，使剩餘的固體溶於少量CH2Cl2中，然後加入己烷，沉澱出白色固體。過濾固體並減壓乾燥，得到要求的產物。
基於合成流程7製備本發明的化合物3。4-乙烯基苯基硼酸和4-溴苯磺醯胺衍生物通過鈀催化劑催化的Suzuki偶合反應，提供中間體14。中間體14與芳基滷化物的Heck反應生成中間體15。中間體15為聯苯基磺醯胺衍生物，帶有作為連接基團連接至芳環的雙鍵。中間體15的叔丁酯的常規TFA脫保護以高收率獲得要求的產物13。
流程7 流程8顯示獲得本發明化合物4的多步驟合成。常規Suzuki偶合後用三氟甲磺酸酐烷基化，得到三氟甲磺酸酯中間體16。通過Sonagoshira反應，三氟甲磺酸酯中間體16被轉變成炔化產物17。通過TBAF除去17的TBDMS保護基，隨後進行另一個Sonagoshira反應，提供用叄鍵連接聯苯基與芳基部分的中間體18。然後通過氫化還原中間體18，隨後經TFA脫保護除去酯基，得到要求的產物4。
流程8
在流程9中顯示結構5化合物的途徑。4-氨基甲基苯基硼酸用於Suzuki偶合產生中間體19。用乙酸酐醯基化中間體19，隨後通過TFA脫保護，得到具有結構5的化合物。
流程9 在流程10中呈現製備結構5的另一種途徑。通過DMF中4-溴苯乙酸與苯胺的EDCL偶合，形成中間體21。中間體21與相應的錫試劑Stille偶合，隨後經TFA脫保護，得到產物5。
流程10
在流程11中，通過在三乙胺存在下使4-羥基聯苯磺醯胺衍生物與異氰酸酯反應，製備本發明的化合物6。用TFA處理由此得到的氨基甲酸酯(中間體24)，除去叔丁酯保護基，得到化合物6。
流程11 在流程12中顯示製備化合物6的另一種途徑，在三乙胺存在下採用4-羥基聯苯磺醯胺游離酸與異氰酸酯反應。直接得到化合物6而無須脫保護步驟。
流程12 在流程13中顯示結構7的化合物的途徑。採用DCC試劑，中間體23與羧酸偶合得到酯24。用TFA處理中間體24選擇性除去叔丁基，得到化合物7。
流程13 在流程14中，通過烷基化後用TFA脫保護(除去保護基叔丁基)，自中間體23製備本發明化合物8。
流程14 在流程15中，以多步驟合成製備本發明化合物9。基於已知的文獻方法製備中間體26。Stille偶合後TFA脫保護，得到要求的產物9。
流程15
在流程16中顯示結構10化合物的途徑。按照文獻方法製備中間體28([1，2，3]噻唑-4-基-苯酚)。用苄基溴衍生物烷基化後縮合，得到硫醚中間體29。29與4-溴苯磺醯胺的Suzuki偶合生成中間體30。用mCPBA氧化後經水解提供化合物10。
流程16 用TFA除去叔丁酯保護基流程17
使叔丁酯保護的聯苯磺醯胺(0.505mmol)溶於CH2Cl2(2.5mL)中。使TFA(2.5mL)溶於CH2Cl2(2.5mL)中，將其緩慢加入到溶解的酯中並攪拌1.5小時。減壓除去溶劑，使剩餘的油溶於甲苯中，除去甲苯。最後，使油溶於最少量的CH2Cl2中，加入己烷，沉澱出白色固體。減壓除去溶劑，在真空泵乾燥後，得到乾燥固體，收率98％。
本發明另外涉及鑑定用於治療骨關節炎的藥物的方法。所述鑑定用於治療骨關節炎的藥物的方法包括測定具體藥物是否具有ADAMTS-5特異性聚集蛋白聚糖酶抑制活性。所述方法也可包括使用ADAMTS-5轉基因動物測定用於治療骨關節炎的潛在藥物是否在具有ADAMTS-5活性的動物中有效但是在不顯示ADAMTS-5活性的動物中無效。
如在以下實施例中進一步所述，ADAMTS-5基因等位基因在細胞中是由所述等位基因與突變ADAMTS-5基因或其部分之間的純合重組引起的功能性破壞。所述細胞可為通常表達ADAMTS-5的分化細胞型，例如巨噬細胞或單核細胞或巨噬細胞樣或單核細胞樣細胞系。或者，所述細胞可為能夠發育成動物的多能祖細胞例如胚胎幹細胞。在一個優選的實施方案中，使用胚胎幹細胞。可將所述胚胎幹細胞引入到囊胚泡中，將所述囊胚泡引入到假孕動物中產生具有體細胞和生殖細胞的動物，其中ADAMTS-5基因等位基因被功能性破壞。這種動物是「同源重組」動物。本發明優選的同源重組動物是小鼠。小鼠是優選動物，因為它們更易於用於實驗室研究，還因為它們提供了技術公知的模型，如以下實施例中進一步的描述。然而，可使用任何動物，包括但不限於豬、牛、綿羊、山羊及其它動物。在一個尤其優選的實施方案中，所述動物為近交小鼠。
為了產生同源重組細胞或動物，可製備含有ADAMTS-5蛋白編碼DNA或其部分的靶向載體，其中具有引入的突變。所述靶向載體可包括非同源ADAMTS-5替代部分，其優選包含Cre/Lox-P位點，第一同源性區域位於與第一ADAMTS-5基因序列基本相同的非同源部分上遊；第二同源性區域位於與第二ADAMTS-5基因序列基本相同的非同源部分下遊。本文中使用的「基本相同」意在描述與ADAMTS-5基因具有足夠同源性以允許所述核苷酸序列與內源序列之間同源重組的核苷酸序列，以允許所述核苷酸序列與宿主細胞中內源ADAMTS序列之間的同源重組。通常，側翼同源區域的核苷酸序列與內源序列具有約80％-100％的同一性。在一個尤其優選的實施發方案中，它們100％相同。所述同源區域也具有足夠的長度以允許與宿主細胞中的內源基因同源重組，即至少1千鹼基長度，更優選為至少數千鹼基長度。
所述靶向載體可另外包括陽性和陰性選擇盒。這些盒包含編碼陽性和陰性選擇標記的核苷酸序列，其有效連接於控制選擇標記表達的調節元件。
為了功能性破壞宿主細胞中的內源ADAMTS-5基因等位基因，將靶向載體引入到所述宿主細胞例如分化細胞或者胚胎幹細胞中。所述靶向載體可通過任何本領域已知技術引入到所述細胞中，包括但不限於磷酸鈣沉澱、DEAE-葡聚糖轉染、微注射、脂質轉染、電穿孔等。向所述宿主細胞中引入載體後，培養細胞，其時間和條件足以允許所引入的靶向載體與內源ADAMTS-5基因之間的同源重組。選擇宿主細胞(例如通過陽性和/或陰性選擇)並通過本領域已知的標準技術(例如DNA雜交或使用區別正常內源等位基因與同源重組等位基因的探針/引物的PCR)篩選在內源ADAMTS-5基因座的同源重組。
為了產生同源重組動物，將具有至少一個功能性破壞的ADAMTS-5基因等位基因的胚細胞引入到囊胚泡中，所述囊胚泡被植入假孕的代孕母親體內，允許胚胎發育至足月。所得動物是具有胚胎幹細胞的細胞後代的嵌合體。其中所述胚胎幹細胞已經對動物生殖細胞產生影響的嵌合動物可與WT動物交配，產生在所有的體細胞和生殖細胞中ADAMTS-5基因破壞的雜合動物。然後所述雜合動物可交配產生ADAMTS-5基因破壞的純合動物(即具有兩個功能破壞的ADAMTS-5基因等位基因)。可將任何種類的突變引入到轉基因動物中，包括無效突變和點突變。點突變可導致ADAMTS-5基因產物的正常表達，但所述產物可具有異常活性，例如可沒有聚集蛋白聚糖酶活性。
另外，來自ADAMTS-5基因破壞的純合動物的細胞可分離自所述動物，並且體外培養用於各種研究，包括用於篩選實驗。
ADAMTS-5轉基因動物和從中得到的細胞用作陽性對照，以評價ADAMTS-5抑制劑的效力。所述純合與雜合動物提供這種標準。在鑑定和評價ADAMTS-5抑制劑效力的篩選實驗中，未用抑制劑處理的WT動物(或者從中得到的細胞)用作0％抑制標準，ADAMTS-5破壞的純合動物用作100％抑制標準，而ADAMTS-5基因破壞的雜合動物用作少於100％抑制但是多於0％抑制的標準。然後相對於這些標準評價用ADAMTS-5抑制劑處理的對象中ADAMTS-5活性的量。所述抑制作用可通過聚集蛋白聚糖酶活性的％抑制作用或者骨關節炎症狀的％減少來測量。
所述轉基因動物和從中得到的細胞也可用於篩選ADAMTS-5抑制劑的副作用或毒性，其由所述抑制劑對非ADAMTS-5靶點(例如ADAMTS-5同工型或ADAMTS-4)的作用引起。例如，可將ADAMTS-5抑制劑給予本發明的ADAMTS-5動物以評價所述抑制劑的副作用或毒性。因為所述ADAMTS-5轉基因動物缺乏抑制劑的正常靶點，在給予ADAMTS-5無效突變體抑制劑時，觀察到的作用可歸因於所述ADAMTS-5抑制劑對其它靶點的副作用。因此，ADAMTS-5轉基因動物用於區別這些副作用與所述抑制劑對ADAMTS-5活性的直接作用。
所述轉基因動物也可用於體內篩選實驗，以鑑定其中ADAMTS-5在所述疾病狀況的發病機理中起作用的疾病。這種篩選實驗進一步用於鑑定可用ADAMTS-5抑制劑治療的其它疾病。例如，所述轉基因動物可用於評價ADAMTS-5在其它疾病中的作用，所述疾病中發生細胞外蛋白降解或破壞，例如癌症、哮喘、慢性阻塞性肺疾病(「COPD」)、動脈粥樣硬化、與年齡有關的黃斑變性、心肌梗塞、角膜潰瘍和其它眼表面疾病、肝炎、主動脈瘤、腱炎、中樞神經系統疾病、異常傷口癒合、血管生成、再狹窄、肝硬變、多發性硬化症、腎小球腎炎、移植物抗宿主病、糖尿病、炎性腸病、休克、椎間盤變性、中風、骨質減少、類風溼性關節炎和其它形式的關節炎及牙周病。可給予本發明的轉基因動物刺激以引起疾病症狀，如在以下實施例中對骨關節炎的進一步描述。或者本發明轉基因動物可用遺傳易患具體疾病的動物繁殖。在ADAMTS-4或ADAMTS-5無效突變動物中誘導疾病後，測定所述動物對所述疾病的易感性或抗性。所述動物相對於WT對所述疾病的抗性表明所述疾病的病理學涉及ADAMTS-4或ADAMTS-5的作用，因此所述疾病可分別用ADAMTS-4或ADAMTS-5的抑制劑治療。作為該用途的實例，以下實施例1和附圖3A與附圖3B證實，純合與雜合ADAMTS-5轉基因動物對誘導的骨關節炎具有抗性。
ADAMTS-5無效突變的純合ADAMTS-5轉基因動物或從中得到的細胞可與人同等基因重構，產生表達人ADAMTS-5基因產物的非人細胞或動物。這些細胞和動物可用於篩選化合物，以鑑定所培養的細胞中或體內人ADAMTS-5活性的抑制藥物。這種動物和細胞可通過本領域技術人員熟知的技術製備。具有表達人ADAMTS-5多肽的細胞的非人動物和/或從中得到的細胞可用於篩選和鑑定可體內抑制人ADAMTS-5的藥物。
ADAMTS-5轉基因動物也用於確定具體物質是否是ADAMTS-5的底物。ADAMTS-5是具有聚集蛋白聚糖酶活性的金屬蛋白酶。為了評價假定底物的前體形式是否被ADAMTS-5裂解，可以評價在ADAMTS-5動物中存在或者不存在裂解產物。在所述轉基因動物中裂解產物將顯著減少或不存在。
提供以下實施例以舉例說明，但不限制本發明。
實施例實施例1材料和方法ADAMTS-5KO小鼠的生成自攜帶Cre/LoxP型條件KOADAMTS5等位基因的近交129SvEv-Brd小鼠(Lexicon Genetics，The Woodlands，TX)產生用於這些研究的ADAMTS-5KO小鼠。條件等位基因含外顯子3側翼的LoxP位點，使得Cre重組導致外顯子3的缺失，後者編碼大部分的酶活性位點，如圖1A中所示。
通過在ES細胞中同源重組，隨後通過囊胚泡注射以產生嵌合小鼠，產生攜帶ADAMTS-5條件KO等位基因的小鼠。通過使條件KO小鼠與魚精蛋白-Cre轉基因小鼠(由Lexicon Genetics提供)雜交，產生ADAMTS-5KO小鼠系，導致攜帶突變ADAMTS-5和Prot-Cre等位基因兩者的雄性後代精液中Cre介導的外顯子3缺失，如圖1B中所示。
ADAMTS-5WT、條件KO和KO等位基因的基因型分型使用得自尾部活體的粗品蛋白酶K消化液的DNA模板，通過PCR進行ADAMTS-5基因的等位基因的基因型分型。採用序列(5′TGTTCA CCC AAA GCA ACT AC3′)的正向引物(引物1)和序列(5′TAGAGG AGA GGA GAG GAG G3′)的反向引物(引物2)，通過PCR鑑定野生型和雜合KO等位基因。這些引物在(5′)LoxP位點的插入位點的側面，在WT和雜合動物中產生230bp擴增子，在KO動物沒有擴增子(圖1B，C)。採用正向引物(5′GTG AAC CAC ATG GAC TTTGG3′)(引物3)和反向引物(5′TCG TAG CAA ACA CCC ACC TG3′)(引物4)鑑定敲除等位基因，產生外顯子3缺失(KO)等位基因的500bpPCR產物(圖1B，C)。
用於RT-PCR的RNA的製備按照製造商的說明書，採用RNAeasy試劑盒(Qiagen，Valencia，CA)，自WT和KO小鼠脾臟製備總RNA。採用Bioanalyzer(AgilentTechnologies，Palo Alto，CA)在RNA 6000Nano試驗中證實RNA樣品的質量。如下設計併合成PCR引物(BioSource International，Camarillo，CA)引物5，5′CGACCCTCAAGAACTTTTGC3′，SEQ ID No4引物6，5′CTCAGGCCCAAATGTCAAGT3′，SEQ ID No5引物7，5′CGTCATGAGAAAGGCCAAGT3′，SEQ ID No6。
通過採用Qiagen OneStep RT-PCR試劑盒，600nM濃度的各種引物和200ng總RNA，在DNA Engine Dyad熱循環儀(MJ Research，Waltham，MA)中進行RT-PCR。所述RT-PCR於50℃下運行30分鐘，95℃下15分鐘，進行35個95℃下15秒、59℃下1分鐘和72℃下30秒的循環。在圖1D中顯示RT-PCR引物，在圖1E和1F中顯示所述RT-PCR產物。採用引物5和6，圖1E顯示WT的mRNA為506bp，KO為338bp。採用引物5、4和7，圖1F顯示WT的mRNA為258bp，並且正如期待的，在KO小鼠體內沒有產物，因為引物7位於在KO中被除去的外顯子3中。
幼年和老年小鼠的組織與病理評價對18周齡的22隻WT和20隻ADAMTS-5KO雄性小鼠進行完全的屍體剖檢。屍體剖檢包括顯微鏡觀察、身體和器官重量、血液學、全血清化學以及腦、關節、心臟、肺、胸腺、脾、肝、腎、唾液腺、下頜淋巴結、睪丸、附睪、眼、哈德淚腺、淚腺、胸骨和肱骨的顯微鏡檢查。所有的組織固定在10％中性緩衝福馬林中，如果礦物化須脫鈣，常規加工，石蠟包埋並且製備成常規蘇木精及伊紅染色切片。所有載玻片由委員會認證的獸醫病理學家(BS)評價是否存在病理性病變。
外科手術誘發骨關節炎經Wyeth Institutional Animal Care and Use委員會批准進行所有研究。小鼠中外科手術誘發骨關節炎是用於研究骨關節炎的技術公認模型。因此，用250mg/kg三溴乙醇(Sigma-Aldrich，St.Louis，MO)腹膜內麻醉10周齡小鼠，準備膝骨用於無菌手術。製備內側髕骨旁切口以暴露和橫切半月板韌帶(使內側半月板錨定於脛骨坪)，導致內側半月板的不穩定(DMM)。用8-0和9-0Vicryl(Ethicon公司，Somerville，NJ)分別縫合關節囊和皮下層，並用NexabandS/C組織粘合劑(Abbott Laboratories，North Chicago，IL)封閉皮膚。術前和術後以0.03mg/kg提供丁丙諾啡(Buprenex，Reckitt and Coleman Products，Hull，England)。DMM術後4周，用二氧化碳處死19隻WT和19隻KO小鼠。術後8周，處死33隻WT、20隻雜合和28隻純合KO小鼠。小部分動物經歷假手術以確定關節切開術對疾病進展的繼發炎症作用。假手術後4或8周動物的組織學評分與未經歷任何手術的動物無統計學差異。
骨關節炎的進展和嚴重性的評價將完整的膝關節放入4％低聚甲醛中24小時，然後在20％EDTA中脫鈣5天。在石蠟中包埋關節並且貫穿整個關節取6μm額向切片。用Safranin-O/牢固綠將載玻片染色，貫穿所述關節以70μm間隔由3盲的獨立評分者評定等級。半定量評分系統改進自Chambers等(Chambers等，2001，Arthritis Rheum 441455)，其中0表示正常軟骨，0.5為無結構變化的Safranin-O丟失；1表示粗糙的關節表面和小的原纖維形成；2表示原纖維形成向下到僅低於表層的層並且帶有某些表面板丟失；3為溫和(＜20％)，5為中度(20-80％)，6為嚴重(＞80％)丟失未鈣化的軟骨。關節的所有象限(內側脛骨坪(MTP)、股骨內側踝、外側脛骨坪和股骨外側踝)分開評分。每個膝關節評價為約12個水平，評分持續一直到任何象限下不再觀察到關節軟骨。如圖3A中所示，評分表示為整個關節的所有水平上發現的最大組織學分數。如圖3B中所示，將全部四個象限的所有水平的分數相加，得到總組織學分數，以反映OA病變的嚴重性以及受影響的表面積。
為將這些結果與在IL-1β、IL-1βr、INOS和ICE KO小鼠中檢測骨關節炎的進展(Clements等，2003，Arthritis Rheum 483452)的公開結果進行比較，也將這些結果表示為各實驗組的內側脛骨坪的平均分。圖4顯示這些評分也在ADAMTS-5純合和雜合動物中明顯減少。軟骨外植體的製備和培養收穫4周齡WT和KO小鼠的股骨頭，並將所述軟骨與下面的軟骨下骨分開。在含1％抗真菌-抗生素(Sigma，Aldrich)、2mM穀氨醯胺、10mM Hepes、50mg/ml抗壞血酸鹽和10％FBS的Dulbecco氏改良伊格爾氏培養基(DMEM)中，在5％CO2和95％空氣的潮溼氣氛中作為外植體37℃培養軟骨樣品48小時。然後將外植體衝洗3次，在無血清DMEM+10ng小鼠IL-1α/ml(Sigma，Aldrich)和10-5M維A酸(Sigma，Aldrich)中培養另外72小時。收集條件培養基，在培養階段結束時收穫軟骨。
蛋白聚糖的定量按照先前報導的方法(Farndale等，1986，Biochim Biophys Acta 883173)，採用二甲基亞甲基藍(DMMB)和得自鯊魚軟骨的硫酸軟骨素C(Sigma，Aldrich)作為標準品，通過比色法試驗，測量培養基中作為硫酸化的葡糖胺聚糖(GAG)的蛋白聚糖含量。用蛋白酶K(Sigma，Aldrich)消化收割的軟骨樣品16小時，離心並收集上清液。也測量消化軟骨中的蛋白聚糖含量，以提供軟骨中的總蛋白聚糖含量，並且能夠計算實驗期間蛋白聚糖的釋放百分比。
蛋白質分析採用設計為識別聚集蛋白聚糖酶產生的片段的新表位抗體，通過蛋白質分析法分析條件培養基中的聚集蛋白聚糖片段。條件培養基對50mM Tris-乙酸鹽(pH 6.5)透析，於37℃用軟骨素酶ABC(Sigma，1mU/μg的GAG)、角蛋白酶I(Seikagaku America，Falmouth，MA，1mU/μg GAG)和角蛋白酶II(Seikagaku，0.02mU/μg GAG)消化2小時。通過YM-10離心過濾裝置(Millipore Corp.，Bedford，MA)濃縮樣品，冷凍乾燥，以1mg/ml的GAG濃度(通過DMMB測量)重構在水中。減壓條件下在4-12％梯度Tris-甘氨酸凝膠上(Invitrogen，Carlsbad，CA)分離各樣品的等量GAG，轉移至硝酸纖維素膜上。採用識別聚集蛋白聚糖酶產生的C-末端球間新表位NITEGE373的單克隆抗體(MAb)AGG-C1(0.04μg/ml)(Collins-Racie等，2004，Matrix Biol.23219-230)，進行免疫印跡法。用初級和鹼性磷酸酶綴合的次級山羊抗小鼠IgG(Promega公司，Madison，WI，1∶7500)分別於4℃溫育過夜和在室溫下溫育1小時。室溫下用NBT/BCIP底物(Promega)溫育免疫印跡2-15分鐘，以獲得最佳顯色。
小鼠關節軟骨中TEGE373新表位的免疫組織化學鑑定通過標準多克隆抗體技術(Glasson等，2004，Arthritis Rheum.502547-2558.)合成多克隆抗體TEGE373。所述抗體與牛聚集蛋白聚糖的ADAMTS-4消化液生成的G1-TEGE373反應，但不與完整的(未消化的)聚集蛋白聚糖反應，證實其為「新表位」抗體。採用免疫肽通過親和層析純化陽性血清。
對於小鼠關節軟骨中TEGE373新表位的免疫染色，在10ng IL-1α/ml[是γ還是α](Sigma)和10-5M維A酸(Sigma)存在或者不存在時，組織培養3天後，收穫ADAMTS-4KO、ADAMTS-5KO和WT動物的股骨頭。在OCT中冷凍組織並切割成5微米的切片。用過氧化氫酶(DakoCytomation，Carpinteria，CA)阻斷內源性過氧化物酶活性，並且用0.1U軟骨素酶ABC/ml(Sigma)、0.1U角蛋白酶I/ml(Seikagaku公司，東京，日本)和0.1U角蛋白酶II/ml(Seikagaku公司，東京，日本)將切片於37℃去糖基化1小時，將初級抗體或者正常的兔血清加入到切片12小時，加入次級抗體(驢抗兔抗體，Rockland公司，Gilbertsville PA)，持續30分鐘。切片用ABC-過氧化物酶溫育後用DAB底物(Vector Laboratories，Burlingame，CA)溫育。用蘇木精將切片復染。
實施例2結果與討論產生ADAMT-4敲除(KO)(Glasson等，2004，Arthritis Rheum.502547-2558.)。如上詳述，通過Cre-Lox介導的重組產生外顯子3編碼的56個胺基酸缺失，包括鋅結合位點的破壞和「甲硫氨酸轉角」的缺失(圖1A)，產生ADAMTS-5KO。採用引物1和2從WT和雜合小鼠產生230bp的PCR產物。引物2位於包含外顯子3的缺失部分中，因此在純合KO動物體內不產生PCR產物。由於外顯子3缺失，在雜合和純合KO動物中引物3和4產生500bp產物。相對於反向引物(2和4)，最佳擴增需要使用兩種正向引物(1和3)。因為長和短擴增子之間擴增效力的差異，與使用從單引物對(即3和4)產生的一個短(缺失)擴增子和一個長(wt)擴增子相比，使用短的、等位基因-特異性擴增子提供更可靠的基因型分型。圖1E顯示脾總RNA的RT-PCR，通過跨外顯子3的引物製備的PCR產物證實KO中產生的mRNA大小減少。mRNA的存在表明該框內缺失不引起信息的不穩定。不能證實缺乏催化功能區的翻譯蛋白質的存在。
允許雄性和雌性WT及純合KO小鼠生長至14-18周齡。檢查動物的任何可見異常，抽取血液樣本用於全血計數和血清化學，收穫17種組織，由持有委員會認證的獸醫病理學家(BS)檢查。受檢查的組織包括心臟、肺、胸腺、脾、肝、腎、腦、唾液腺、下頜淋巴結、睪丸、附睪、眼、哈德淚腺、淚腺、胸骨、股骨和全爪。整體重無異常，已檢測的任何血液或者血清分析或者任何組織的組織學表現顯示，ADAMTS-5酶活性對正常發展和生長不是必須的。
聚集蛋白聚糖為生長板中軟骨以及關節的關節軟骨中的豐富成分。圖2顯示通過用產生為抗聚集蛋白聚糖酶裂解後聚集蛋白聚糖的新C末端G1-TEGE373的多克隆抗體，通過近側脛骨生長板的免疫染色法，對WT、ADAMTS-4和ADAMTS-5KO動物生長板的分析。
如圖2中所示，WT小鼠證實近側脛骨生長板中細胞內抗體的顯著雜交，並且該染色不再存在於ADAMTS-4KO動物中。相反，ADAMTS-5KO小鼠生長板中抗-TEGE373抗體的雜交與WT生長板的染色非常相似。這些結果提示生長板中聚集蛋白聚糖轉換是ADAMTS-4而不是ADAMTS-5的酶活性的結果。值得注意的是，兩種KO動物中動物的可見外觀、長骨長度和生長板的組織學表現與WT相同。因此，有可能在ADAMTS-4不存在時，生長板中ADAMTS-4的任何聚集蛋白聚糖降解活性可被其它酶適當補償。
如以上實施例1中的詳述，通過手術橫切前新月形-脛骨韌帶導致內側半月板(DMM)不穩定，產生單側關節不穩定，數據顯示在圖3A和圖3B中。術後4和8周處死小鼠，採用報導的評分系統(Chambers等，2001，Arthritis Rheum 441455)對貫穿關節的切片評分。評分報導為WT和ADAMTS-5純合KO和雜合KO的平均最大分數。另外，相加關節各切片的評分，以作為各治療組在各時間點上總分數的平均值表示的OA嚴重性。評分的第二種方法考慮病變嚴重性以及受影響關節的表面積。如圖3A和3B中所示，兩種方法的分析顯示，與WT小鼠相比ADAMTS-5純合和雜合KO的分數明顯減少(p＜0.05)(圖3)。ADAMTS-5KO動物的總分數減少到少於WT的50％，表明較小的嚴重性及影響表面積。值得注意的是，我們先前報導ADAMTS-4KO小鼠上進行的同一手術模型分數無差異。另外，描述在IL-1β、IL-1βr、INOS和ICE KO小鼠中誘導OA的文獻中類似研究報導，基因改造小鼠的病理學嚴重性增加(Clements等，2003，Arthritis Rheum483452)。為將這些結果與已公開的檢測骨關節炎在IL-1β、IL-1βr、INOS和ICE KO小鼠中進展的結果進行比較，結果也表示為各實驗組的內側脛骨坪的平均分。圖4顯示，在ADAMTS-5純合和雜合KO動物中這些分數也顯著減少。
自ADAMTS-4KO、ADAMTS-5KO和WT小鼠取出股骨頭的關節軟骨並放入組織培養基中。將炎性細胞因子(IL-1和維A酸)加入到培養系統中以誘導降解酶活性，並且通過定量蛋白多糖的總釋放和採用生成為抗「聚集蛋白聚糖酶」裂解後聚集蛋白聚糖新C末端(G1-TEGE373)的單克隆新表位抗體的蛋白質印跡，評價自軟骨釋放的聚集蛋白聚糖降解產物的分析(Collins-Racie等，2004，Matrix Biology23219-230)。在圖5A和5B中描述的結果證實，WT和ADAMTS-4KO小鼠關節軟骨中總蛋白多糖釋放相等，TEGE373新表位的生成相等，而沒有關於ADAMTS-5KO小鼠的關節軟骨的條件培養基中聚集蛋白聚糖酶生成片段的證據。圖5C顯示這些股骨頭採用產生為抗TEGE373新表位的多克隆抗體的免疫組織化學分析，證實與WT和ADAMTS-4KO小鼠關節軟骨中聚集蛋白聚糖酶生成的聚集蛋白聚糖新表位的顯著雜交，以及ADAMTS-5KO軟骨中的可忽略雜交。
這項工作檢測了ADAMTS-5(聚集蛋白聚糖酶-2)活性的缺失對正常小鼠發育、生長和生理學的影響。與先前檢測ADAMTS-4KO小鼠的報導類似，ADAMTS-5活性的缺失不負面影響任何這些功能。ADAMTS-5的活性缺失不影響生長板中聚集蛋白聚糖酶生成的聚集蛋白聚糖轉換。然而，令人驚奇地是，ADAMTS-5活性的缺失顯著阻止這些小鼠體內骨關節炎的進展，而ADAMTS-4活性的缺失沒有這種影響。通過ADAMTS-5敲除小鼠中體外細胞因子刺激關節軟骨後缺乏這些片斷的出現，進一步證實了在ADAMTS-5敲除在底物球間結構域中的「聚集蛋白聚糖酶」位點上不能裂解聚集蛋白聚糖。已報導幾種酶能夠在聚集蛋白聚糖球間結構域中的E373-374A位點上裂解聚集蛋白聚糖，包括ADAMTS-1、ADAMTS-4、ADAMTS-5和ADAMTS-9。本發明顯示ADAMTS-5為骨關節炎中引起關節軟骨細胞外基質降解的酶。這是能夠阻止動物模型中骨關節炎過程的單基因缺失的第一次報導。從這些結果可以清晰看出，ADAMTS-5為引起小鼠骨關節炎中聚集蛋白聚糖降解的主要「聚集蛋白聚糖酶」。
實施例3聯芳基磺醯胺類的製備基於流程1製備實施例3.1和3.2。
實施例3.1 3-甲基-2-[4′-(3-甲基-喹啉-2-基氧基甲基)-聯苯-4-磺醯氨基]-丁酸步驟1A[中間體1]向乾燥圓底燒瓶中加入4-溴-苯磺醯氯(12.2g，47.7mmol，1當量)、無水二氯甲烷(170mL)和H-D-Val-OMe(8.0g，47.7mmol，1當量)。使混合物在冰浴中冷卻至0℃，隨後加入Hunig鹼(19.11mL，109.7mmol，2.3當量)。使反應混合物升至室溫並攪拌過夜。經TLC確定反應完成。然後用二氯甲烷(100mL)稀釋反應混合物並用鹽水洗滌。經無水MgSO4乾燥有機層，蒸發溶劑，以96％收率得到2-(4-溴-苯磺醯氨基)-3-甲基-丁酸甲酯(16.0g)。
1H NMR(400MHz，CHLOROFORM-D)δppm 0.87(d，J＝6.82Hz，3H)0.96(d，J＝6.82Hz，3H)2.04(m，1H)3.49(s，3H)3.74(d，J＝14.40Hz，1H)5.10(d，J＝9.85Hz，1H)7.66(m，4H)。
步驟1B[中間體2]在N2氣氛下，使2-(4-溴-苯磺醯氨基)-3-甲基-丁酸甲酯(3.4g，9.71mmol)、4-羥基甲基苯基硼酸(1.48g，9.71mmol，1當量)、Pd(PPh3)4(561mg，0.48mmol，0.05當量)溶於乙二醇二甲醚(90mL)中並在室溫下攪拌30分鐘。然後向反應混合物中加入在H2O(30mL)中的K2CO3(2.68g，19.4mmol，2當量)，加熱至回流反應過夜。在TLC確定反應完成後，旋轉蒸發除去溶劑，在EtOAc與鹽水之間分配殘餘物，經MgSO4乾燥有機層，除去溶劑，用EtOAc研磨粗殘餘物，以67％收率得到2-(4′-羥基甲基-聯苯-4-磺醯氨基)-3-甲基-丁酸甲酯(2.46g)。
1H NMR(400MHz，CHLOROFORM-D)δppm 0.90(d，J＝7.07Hz，3H)0.97(d，J＝6.82 Hz，3H)1.57(s，1H)2.04(m，1H)3.43(s，3H)3.79(dd，J＝10.11，5.05Hz，1H)4.78(s，2H)5.11(d，J＝10.36Hz，1H)7.49(d，J＝8.34Hz，2H)7.60(d，J＝8.34Hz，2H)7.70(d，J＝8.84Hz，2H)7.88(d，J＝8.59Hz，2H)。
步驟1C[中間體3]使2-(4′-羥基甲基-聯苯-4-磺醯氨基)-3-甲基-丁酸甲酯(1.2g，3.2mmol，1.0當量)、2-氯-3-甲基喹啉(2.26g，12.7mmol，4當量)溶於DMF(30mL)中，隨後加入NaH(382mg，60％在油中，9.54mmol，3當量)。在100℃下攪拌混合物5小時，然後在室溫下攪拌過夜。然後將反應混合物傾入到冷水中，過濾收集從混合物中沉澱的固體，用水洗滌。常規柱層析(矽膠，1％MeOH/CH2Cl2)以12％收率得到203mg的3-甲基-2-[4′-(3-甲基-喹啉-2-基氧基甲基)-聯苯-4-磺醯氨基]-丁酸甲酯。
H NMR(400MHz，CHLOROFORM-D)δppm 0.89(d，J＝6.82Hz，3H)0.97(d，J＝6.82Hz，3H)2.04(m，1H)2.40(s，3H)3.43(s，3H)3.78(dd，J＝10.11，5.31Hz，1H)5.09(d，J＝10.11Hz，1H)5.64(s，2H)7.37(m，1H)7.64(m，8H)7.86(m，4H)。
步驟1D使3-甲基-2-[4′-(3-甲基-喹啉-2-基氧基甲基)-聯苯-4-磺醯氨基]-丁酸甲酯(203mg，0.39mmol，1當量)溶於THF(8mL)和MeOH(4mL)中，用1N NaOH(5.83mL，5.83mmol，13當量)水解。攪拌3天後，除去溶劑並使殘餘物溶於H2O中。然後用1N HCl將混合物酸化至pH 3。過濾收集從混合物中沉澱的固體，用水洗滌。在真空烘箱中乾燥後，以76.3％收率得到101mg的3-甲基-2-[4′-(3-甲基-喹啉-2-基氧基甲基)-聯苯-4-磺醯氨基]-丁酸。
1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.81(d，J＝6.57Hz，3H)0.84(d，J＝6.82Hz，3H)1.95(m，1H)2.36(s，3H)3.56(dd，J＝9.09，5.81Hz，1H)5.61(s，2H)7.42(t，J＝7.45Hz，1H)7.61(t，J＝7.71Hz，1H)7.67(d，J＝7.83Hz，2H)7.83(m，8H)8.08(d，J＝8.34Hz，2H)12.58(s，1H)。
實施例3.2
3-甲基-2-[4′-(5-三氟甲基-吡啶-2-基氧基甲基)-聯苯-4-磺醯氨基]-丁酸按照與實施例3.1中所述類似的方法製備標題化合物3-甲基-2-[4′-(5-三氟甲基-吡啶-2-基氧基甲基)-聯苯-4-磺醯氨基]-丁酸。
步驟1C使2-(4′-羥基甲基-聯苯-4-磺醯氨基)-3-甲基-丁酸甲酯(350mg，0.93mmol，1當量)、2-氯-5-三氟甲基吡啶(841mg，4.64mmol，5當量)溶於DMF(7mL)中，隨後在N2氣氛下加入NaH(111mg，2.78mmol，3當量)。將混合物加熱至100℃反應2小時，冷卻至室溫。將反應混合物傾入到冷水中，過濾收集生成的固體。經柱層析進一步純化(矽膠，20％EtOAc/己烷)，以54％收率得到259mg的G9058-182-2。
1H NMR(400MHz，CHLOROFORM-D)δppm 0.82(d，J＝6.82Hz，3H)0.90(d，J＝6.82Hz，3H)1.98(m，1H)3.36(s，3H)3.72(dd，J＝10.11，5.05Hz，1H)5.02(d，J＝10.11Hz，1H)5.43(s，2H)6.84(d，J＝8.84Hz，1H)7.52(m，4H)7.64(d，J＝6.82Hz，2H)7.74(d，J＝8.84Hz，1H)7.82(m，2H)8.40(s，1H)。
步驟1D按照實施例1A步驟1D的方法，使用3-甲基-2-[4′-(5-三氟甲基-吡啶-2-基氧基甲基)-聯苯-4-磺醯氨基]-丁酸甲酯(250mg)作為起始原料，製備3-甲基-2-[4′-(5-三氟甲基-吡啶-2-基氧基甲基)-聯苯-4-磺醯氨基]-丁酸(86.4％收率，210mg)。
1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.81(d，J＝6.82Hz，3H)0.84(d，J＝6.57Hz，3H)1.95(m，1H)3.56(m，1H)5.51(d，2H)7.12(d，J＝8.84Hz，1H)7.59(d，J＝8.34Hz，2H)7.77(d，J＝8.34Hz，2H)7.86(m，4H)8.11(m，2H)8.63(m，1H)12.57(s，1H)。
基於流程2製備實施例3.3和3.4。
實施例3.3
2-[4′-(2，8-雙-三氟甲基-喹啉-2-基氧基甲基)-聯苯-4-磺醯氨基]-3-甲基-丁酸步驟2A[中間體4，G9591-157-1]在N2氣氛下，向2，8-雙-三氟甲基-喹啉-4-醇(3.85g，13.7mmol，1.1當量)的DMF溶液(40mL)中加入2-(4-溴甲基苯基)-4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧雜硼雜環戊烷(3.7g，12.5mmol，1.0當量)和K2CO3(3.45g，24.92mmol，2.2當量)。在室溫下攪拌反應混合物過夜。經TLC確定反應完成。將反應混合物傾入到冷水中，過濾收集形成的白色沉澱，用水洗滌，真空乾燥，以73％收率得到4-[4-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧雜硼雜環戊烷-2-基)-苄氧基]-2，8-雙-三氟甲基-喹啉(4.95g)。
1H NMR(400MHz，CHLOROFORM-D)δppm 1.36(s，12H)5.38(s，2H)7.21(s，1H)7.51(d，J＝8.34Hz，2H)7.65(t，J＝7.83Hz，1H)7.90(d，J＝8.08Hz，2H)8.14(d，J＝7.33Hz，1H)8.50(d，J＝8.59Hz，1H)。
步驟2B[中間體5，G9591-162]在N2下，向在45mL乙二醇二甲醚中的4-[4-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧雜硼雜環戊烷-2-基)-苄氧基]-2，8-雙-三氟甲基-喹啉(1.5g，3.0mmol，1當量)中加入2-(4-溴-苯磺醯氨基)-3-甲基-丁酸甲酯(1.06g，3.0mmol，1.0當量)和Pd(PPh3)4(174mg，0.15mmol，0.05當量)。攪拌反應混合物0.5小時，然後加入K2CO3水溶液(834mg，6.0mmol，2當量)。將混合物加熱至回流反應過夜。冷卻至室溫後，真空除去溶劑。用EtOAc(100mL)稀釋殘餘物並用鹽水溶液洗滌。經無水MgSO4乾燥有機層，真空蒸發溶劑，將粗品產物在矽膠柱上(30％EtOAc/己烷)純化，以53％收率得到1.026g的2-[4′-(2，8-雙-三氟甲基-喹啉-4-基氧基甲基)-聯苯-4-磺醯氨基]-3-甲基-丁酸甲酯。
1H NMR(400MHz，CHLOROFORM-D)δppm 0.90(d，J＝6.82Hz，3H)0.98(d，J＝6.82Hz，3H)2.07(m，1H)3.45(s，3H)3.81(dd，J＝10.11，5.05Hz，1H)5.12(d，J＝10.11Hz，1H)5.44(s，2H)7.25(s，1H)7.70(m，7H)7.92(d，J＝8.84Hz，2H)8.16(d，J＝7.33Hz，1H)8.52(d，J＝8.59Hz，1H)。
步驟2C使2-[4′-(2，8-雙-三氟甲基-喹啉-4-基氧基甲基)-聯苯-4-磺醯氨基]-3-甲基-丁酸甲酯(1.026g，1.6mmol，1當量)溶於THF(15mL)和MeOH(6mL)中，加入1N NaOH(17.6mL，11當量)。通過TLC監測反應。反應在3天內完成。旋轉蒸發除去溶劑，使殘餘物溶於H2O中。然後用1N HCl將混合物酸化至pH 3。過濾收集生成的沉澱，用冷水洗滌並乾燥過夜，以46％收率得到460mg的白色固體。
1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.82(d，J＝6.82Hz，3H)0.85(d，J＝6.82Hz，3H)1.96(m，1H)3.57(dd，J＝9.35，6.32Hz，1H)5.66(s，2H)7.83(m，10H)8.11(d，J＝9.35Hz，1H)8.35(d，J＝7.33Hz，1H)8.58(d，J＝7.83Hz，1H)12.57(s，1H)。
實施例3.4 D-3-甲基-2-[4′-(2-甲基-喹啉-4-基氧基甲基)-聯苯-4-磺醯氨基]-丁酸按照與實施例3.3所述類似的方法製備D-3-甲基-2-[4′-(2-甲基-喹啉-4-基氧基甲基)-聯苯-4-磺醯氨基]-丁酸。
步驟2A按照實施例1C步驟2A的方法用2-(4-溴甲基-苯基)-4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧雜硼雜環戊烷進行2-甲基-喹啉-4-醇的烷基化，以28％收率得到2-甲基-4-[4-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧雜硼雜環戊烷-2-基)-苄氧基]-喹啉。
1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 1.3(s，12H)2.6(s，3H)5.4(s，2H)7.0(s，1H)7.5(m，1H)7.6(d，J＝8.1Hz，2H)7.7(m，1H)7.7(d，J＝8.1Hz，2H)7.9(d，J＝8.1Hz，1H)8.1(dd，J＝8.3，0.8Hz，1H)。
步驟2B按照實施例3.3的步驟2B中的方法，以80％收率進行D-2-(4-溴-苯磺醯氨基)-3-甲基-丁酸甲酯與2-甲基-4-[4-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧雜硼雜環戊烷-2-基)-苄氧基]-喹啉的Suzuki偶合。
1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.8(dd，J＝15.0，6.7Hz，6H)1.9(m，1H)2.6(s，3H)3.3(s，3H)3.6(dd，J＝9.3，7.1Hz，1H)5.5(s，2H)7.1(s，1H)7.5(t，J＝7.6Hz，1H)7.7(m，3H)7.8(d，J＝7.6Hz，4H)7.9(m，1H)7.9(m，2H)8.1(d，J＝8.3Hz，1H)8.3(d，J＝9.3Hz，1H)。
步驟2C按照實施例3.3的步驟2C中的方法，以定量收率進行D-3-甲基-2-[4′-(2-甲基-喹啉-4-基氧基甲基)-聯苯-4-磺醯氨基]-丁酸甲酯的水解。
1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm0.8(dd，J＝40.2，6.8Hz，6H)2.0(m，1H)2.6(s，3H)3.0(s，1H)5.4(s，2H)7.1(s，1H)7.5(t，J＝8.1Hz，1H)7.7(t，J＝7.7Hz，3H)7.8(m，7H)8.1(d，J＝9.3Hz，1H)。
基於流程3製備實施例3.5。
實施例3.5 步驟3A向圓底燒瓶中加入4-溴-苯磺醯氯(24.37g，95.4mmol，1當量)、無水二氯甲烷(350mL)和H-D-Val-OtBu(20g，95.4mmol，1當量)。使混合物冷卻至0℃，隨後加入Hunig鹼(38.2mL，219mmol，2.3當量)。然後除去冷卻浴，使反應混合物升至室溫並攪拌過夜。經TLC確定起始原料被消耗。然後用二氯甲烷(200mL)稀釋反應混合物並用H2O(500mL)、鹽水(250mL)洗滌。經無水MgSO4乾燥有機層，真空蒸發，以定量收率得到2-(4-溴-苯磺醯氨基)-3-甲基-丁酸叔丁酯(35.0g)。
1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.82(d，J＝6.82Hz，3H)0.84(d，J＝6.82Hz，3H)1.19(s，9H)1.93(m，1H)3.46(dd，J＝9.35，6.06Hz，1H)7.69(d，J＝8.59Hz，2H)7.79(m，2H)8.24(d，J＝9.60Hz，1H)。
步驟3B將2-(4-溴-苯磺醯氨基)-3-甲基-丁酸叔丁酯(11.96g，30.47mmol，1當量)、4-(羥基甲基苯)硼酸(4.63g，30.5mmol，1當量)和Pd(PPh3)4(1.76g，1.52mmol，0.05當量)加入到反應瓶中並加入乙二醇二甲醚(300mL)。在室溫下攪拌混合物10分鐘，然後加入K2CO3(8.43g，60.9mmol，2當量)溶於100mL H2O中的溶液。將反應混合物加熱至回流，反應過夜。冷卻至室溫後，旋轉蒸發除去溶劑並在EtOAc與鹽水之間分配殘餘物。分離有機層並經MgSO4乾燥。旋轉蒸發除去溶劑後，以65％收率得到8.3g白色固體2-(4′-羥基甲基-聯苯-4-磺醯氨基)-3-甲基-丁酸叔丁酯。
1H NMR(400MHz，MeOD)δppm 1.05(d，J＝6.82Hz，3H)1.12(d，J＝6.82Hz，3H)1.33(s，9H)2.16(m，1H)3.73(d，J＝5.56Hz，1H)4.81(s，2H)7.62(d，J＝8.59Hz，2H)7.78(d，J＝8.34Hz，2H)7.92(d，J＝8.84Hz，2H)8.04(m，2H)。
步驟3C使2-(4′-羥基甲基-聯苯-4-磺醯氨基)-3-甲基-丁酸叔丁酯(700mg，1.68mmol，1當量)、2-氯喹啉(1.1g，6.7mmol，4當量)溶於DMF(20mL)中並加入NaH(202mg，60％在油中，5.04mmol，3當量)。將混合物加熱至100℃反應2小時。冷卻至室溫後，用飽和NH4Cl(水溶液)猝滅反應混合物。攪拌0.5小時後，從混合物中沉澱出固體。過濾收集固體，用水洗滌並乾燥過夜，以87％收率得到793mg的2-[4′-(異喹啉-3-基氧基甲基)-聯苯-4-磺醯氨基]-3-甲基-丁酸叔丁酯。
1H NMR(400MHz，CHLOROFORM-D)δppm 0.87(d，J＝6.82Hz，3H)1.03(d，J＝6.82Hz，3H)1.19(s，9H)2.05(m，1H)3.66(dd，J＝9.85，4.55Hz，1H)5.14(d，J＝9.85Hz，1H)5.62(s，2H)6.98(d，J＝8.84Hz，1H)7.40(m，1H)7.66(m，9H)7.89(m，2H)8.03(d，J＝8.59Hz，1H)。
步驟3D使2-[4′-(異喹啉-3-基氧基甲基)-聯苯-4-磺醯氨基]-3-甲基-丁酸叔丁酯(480mg，0.88mmol)溶於15mL二氯甲烷中。使溶液冷卻至0℃，隨後加入5mL的TFA。在室溫下攪拌生成的混合物4小時。旋轉蒸發除去溶劑並用MeOH洗滌殘餘物。使因此得到的固體真空乾燥過夜，以14％收率得到60mg的2-[4′-(異喹啉-3-基氧基甲基)-聯苯-4-磺醯氨基]-3-甲基-丁酸。
1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.81(d，J＝6.82Hz，3H)0.84(d，J＝6.82Hz，3H)1.95(m，1H)3.56(dd，J＝9.35，6.06Hz，1H)5.58(s，2H)7.11(d，J＝8.84Hz，1H)7.46(dd，J＝7.58，6.32Hz，1H)7.79(m，11H)8.08(d，J＝9.35Hz，1H)8.29(d，J＝8.59Hz，1H)12.57(s，1H)。
基於流程4製備實施例3.6。
實施例3.6 2-[4′-(苯並噻唑-2-基氧基甲基)-聯苯-4-磺醯氨基]-3-甲基-丁酸向在9mL二甲氧基乙烷中的2-[4-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧雜硼雜環戊烷-2-基)-苄氧基]-苯並噻唑(300mg，0.604mmol，1當量)中加入2-(4-溴-苯磺醯氨基)-3-甲基-丁酸叔丁酯(237mg，0.604mmol，1當量)和Pd(PPh3)4(35mg，0.03mmol，0.05當量)。在室溫下攪拌混合物20分鐘，隨後加入在H2O(3mL)中的K2CO3(167mg，1.208mmol，2當量)。將混合物加熱至回流反應過夜。冷卻至室溫後，旋轉蒸發除去溶劑。使殘餘物溶於二氯甲烷中並用水、鹽水洗滌。經MgSO4乾燥有機層，真空除去溶劑，經柱層析(30％EtOAc/己烷)純化粗品混合物，以85％收率得到285mg。
1H NMR(400MHz，CHLOROFORM-D)δppm 1.07(d，J＝6.82Hz，3H)1.23(d，J＝6.82Hz，3H)1.39(s，9H)1.47(t，J＝7.20Hz，1H)3.86(dd，J＝9.85，4.55Hz，1H)5.42(s，2H)6.99(s，1H)7.22(d，J＝7.07Hz，1H)7.39(m，2H)7.61(d，J＝8.59Hz，2H)7.67(d，J＝6.32Hz，1H)7.72(m，2H)7.84(d，J＝8.84Hz，2H)8.09(d，J＝8.59Hz，2H)。
步驟4B使2-[4′-(苯並噻唑-2-基氧基甲基)-聯苯-4-磺醯氨基]-3-甲基-丁酸叔丁酯(140mg，0.25mmol)溶於6mL二氯甲烷中，隨後加入TFA(3mL)。經TLC確定在6小時內反應完成。除去溶劑並使殘餘物溶於EtOAc中。向溶液中加入正己烷並從混合物中沉澱出固體。收集沉澱並乾燥，以68％收率得到86mg。
1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.80(d，J＝6.82Hz，3H)0.83(d，J＝6.82Hz，3H)1.93(m，1H)3.54(dd，J＝9.35，6.06Hz，1H)5.26(s，2H)7.21(m，1H)7.33(m，2H)7.44(d，J＝8.59Hz，2H)7.71(t，J＝8.46Hz，3H)7.82(s，4H)8.07(d，J＝9.35Hz，1H)12.55(s，1H)。
基於流程4B製備實施例3.7、3.8、3.9、3.10、3.11、3.12、3.13、3.14、3.15、3.16、3.17、3.18。
實施例3.7 ES-480.1(M-H)-HRMS482.16311(M+Na)+；理論值482.16319。
實施例3.8 ES+544.2(M+H)+HRMS544.17694(M+H)；理論值544.17884。
實施例3.9 ES-480.2(M-H)-HRMS482.1635(M+H)+；理論值482.16319。
實施例3.10
ES-495.2(M-H)-HRMS497.17284(M+H)+；理論值497.17409。
實施例3.11 ES-468.2(M-H)-HRMS470.16231(M+H)+；理論值470.16319。
實施例3.12 ES-456.1(M-H)-HRMS458.14323(M+H)+；理論值458.1432。
實施例3.13 ES-551.2(M-H)-HRMS553.19849(M+H)+；理論值553.2003。
實施例3.14
ES-535.2(M-H)-HRMS537.20469(M+H)+；理論值537.20539。
實施例3.15 ES-456.1(M-H)-HRMS458.14389(M+H)+；理論值458.1432。
實施例3.16 ES-468.2(M-H)-HRMS470.16151(M+H)+；理論值470.16319。
實施例3.17 ES+539.1(M+H)+HRMS539.22021(M+H)+；理論值539.22104。
實施例3.18 ES-514.1(M-H)-HRMS516.18313(M+H)+；理論值516.18392。
基於流程4C製備實施例3.19、3.20、3.21、3.22、3.23、3.24、3.25、3.26、3.27、3.28、3.29、3.30、3.32。
實施例3.19
ES-495.1(M-H)-HRMS497.17429(M+H)+；理論值497.17409。
實施例3.20 ES-488.1(M-H)-HRMS490.16864(M+H)+；理論值490.16827。
實施例3.21 ES+m/z 452.1(M-H)-HRMS454.16745(M+H)+；理論值454.16827。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ0.82(d，3H，J＝6.8Hz)，0.94(d，3H，J＝6.8Hz)，2.06(m，1H)，2.31(s，3H)，3.80(dd，1H，J＝4.4，10Hz)，5.13(m，3H)，6.90(m，2H)，7.17(m，2H)，7.55(d，2H，J＝8Hz)，7.60(d，2H，J＝8Hz)，7.66(d，2H，J＝8Hz)，7.86(d，2H，J＝8Hz)。
實施例3.22
ES+m/z 481.2(M+H)+HRMS483.19410(M+H)+；理論值483.19482。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ0.90(d，3H，J＝6.8Hz)，0.99(d，3H，J＝6.8Hz)，2.06(m，1H)，2.92(s，6H)，3.42(s，3H)，3.70(d，1H，J＝5.6，10Hz)，5.14(s，2H)，6.41(m，3H)，7.11(m，1H)，7.57(d，2H，8Hz)，7.71(d，2H，J＝8Hz)，7.80(d，2H，J＝8Hz)，7.92(d，2H，J＝8Hz)。
實施例3.23 ES+m/z 544.1(M+H)+HRMS546.19448(M+H)+；理論值546.19449。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ0.93(d，3H，J＝6.8Hz)，0.99(d，3H，J＝6.8Hz)，2.07(m，1H)，3.70(d，1H，J＝5.6)，5.03(s，2H)，5.10(s，2H)，6.94(s，4H)，7.31(m，1H)，7.37(m，2H)，7.43(m，2H)，7.55(d，2H，8Hz)，7.71(d，2H，J＝8Hz)，7.80(d，2H，J＝8Hz)，7.92(d，2H，J＝8Hz)。
實施例3.24
ES+m/z 553.2(M-H)-HRMS577.19777(M+Na)+；理論值577.19789。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ0.91(d，3H，J＝6.8Hz)，0.97(d，3H，J＝6.8Hz)，1.50(s，9H)，2.04(m，1H)，3.68(d，1H，J＝5.6Hz)，5.10(s，2H)，6.92(s，2H)，7.28(d，2H，J＝8Hz)，7.54(d，2H，J＝8Hz)，7.70(d，2H，J＝8Hz)，7.79(d，2H，J＝8Hz)，7.91(d，2H，J＝8Hz)。
實施例3.25 ES+m/z 470.2(M+H)+HRMS470.16364(M+H)+；理論值470.16319。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ0.89(d，3H，J＝6.8Hz)，0.96(d，3H，J＝6.8Hz)，2.10(m，1H)，3.82(m，1H)，3.90(s，3H)，5.07(d，1H，J＝9.6Hz)，5.21(s，2H)，6.93(m，4H)，7.54(d，2H，J＝8Hz)，7.58(d，2H，J＝8Hz)，7.65(d，2H，J＝8Hz)，7.89(d，2H，J＝8Hz)。
實施例3.26
ES+m/z 466.2(M-H)-HRMS468.18540(M+H)+；理論值468.18392。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ0.83(d，3H，J＝6.8Hz)，0.95(d，3H，J＝6.8Hz)，2.05(m，1H)，2.33(s，6H)，3.82(dd，1H，J＝5.2，10Hz)，4.88(s，2H)，5.07(d，1H，J＝10Hz)，6.97(m，1H)，7.05(m，2H)，7.64(m，4H)，7.67(d，2H，J＝8Hz)，7.87(d，2H，J＝8Hz)。
實施例3.27 ES+m/z 454.1(M-H)-HRMS456.14707(M+H)+；理論值456.14754。
1H NMR(400MHz，丙酮(d6))δ0.92(d，3H，J＝6.8Hz)，0.98(d，3H，J＝6.8Hz)，2.10(m，1H)，3.16(m，1H)，5.16(s，2H)，6.45(d，1H，J＝8Hz)，6.53(m，2H)，7.10(t，1H，J＝8Hz)，7.61(d，2H，J＝8Hz)，7.76(d，2H，J＝8Hz)，7.86(d，2H，J＝8Hz)，7.94(d，2H，J＝8Hz)。
實施例3.28
ES+m/z 530.1(M-H)-HRMS532.17709(M+H)+；理論值532.17884。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ0.93(d，3H，J＝6.8Hz)，0.99(d，3H，J＝6.8Hz)，2.06(m，1H)，3.70(d，1H，J＝5.6，10Hz)，5.16(s，2H)，6.93(m，3H)，7.04(m，3H)，7.31(m，2H)，7.58(d，2H，J＝8Hz)，7.72(d，2H，J＝8Hz)，7.81(d，2H，J＝8Hz)，7.93(d，2H，J＝8Hz)。
實施例3.29 ES+m/z 531.1(M-H)-HRMS533.17293(M+H)+；理論值533.17409。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ0.88(d，3H，J＝6.8Hz)，1.00(d，3H，J＝6.8Hz)，2.13(m，1H)，3.83(m，1H)，5.13(m，3H)，6.82(m，1H)，7.02(m，5H)，7.56(m，4H)，7.67(m，3H)，7.89(m，2H)，8.16(m，1H)。
實施例3.30 ES+m/z 545.2(M-H)-HRMS547.19006(M+H)+；理論值547.18974。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ0.89(d，3H，J＝6.8Hz)，1.01(d，3H，J＝6.8Hz)，2.19(m，1H)，2.44(s，3H)，3.83(m，1H)，5.04(s，2H)，6.39(d，1H，J＝8Hz)，6.83(m，1H)，6.90(m，2H，J＝8Hz)，6.97(d，2H，J＝8Hz)，7.52(m，5H)，7.60(d，2H，J＝8Hz)，7.90(d，2H，J＝8Hz)。
實施例3.31 ES+m/z 506.2(M-H)-HRMS508.17782(M+H)+；理論值508.17884。
1H NMR(400MHz，DMSO)δ0.81(d，3H，J＝6.8Hz)，0.84(d，3H，J＝6.8Hz)，1.98(m，3H)，2.64(d，2H)，2.91(t，2H，J＝6Hz)，3.56(dd，1H，J＝6，9.2Hz)，5.27(s，2H)，6.99(d，2H，J＝8Hz)，7.59(d，2H，J＝8Hz)，7.78(d，2H，J＝8Hz)，7.85(m，4H)，8.08(d，1H，8Hz)。
基於流程5製備實施例3.32、3.33、3.34、3.35、3.36、3.37、3.38、3.39、3.40、3.41。
實施例3.32 D-3-甲基-2-[4′-(3-甲基-苯並呋喃-2-基甲氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-丁酸步驟5A將2-氯甲基-3-甲基-苯並呋喃(675.9mg，3.75mmol)、4-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧雜硼雜環戊烷-2-基)-苯酚(825mg，3.75mmol，1當量)、K2CO3(2.1g，15.2mmol，4當量)在20mL CN3CN中的混合物在氮氣氛下加熱至回流。12小時後反應完成。常規處理並柱純化(5％EtOAc/己烷)，以44％收率得到3-甲基-2-[4-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧雜硼雜環戊烷-2-基)-苯氧基甲基]-苯並呋喃(601mg)。
1H NMR(400MHz，CHLOROFORM-D)δppm 1.3(s，12H)2.3(s，3H)5.2(s，2H)7.0(d，J＝8.6Hz，2H)7.3(m，2H)7.5(dd，J＝21.6，7.7Hz，2H)7.8(d，J＝8.8Hz，2H)。
步驟5B將D-2-(4-溴-苯磺醯氨基)-3-甲基-丁酸甲酯(568.07mg，1.62mmol)、3-甲基-2-[4-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧雜硼雜環戊烷-2-基)-苯氧基甲基]-苯並呋喃(590.7mg，1.62mmol，1當量)、Pd(PPh3)4(93.7mg，0.08mmol，0.05當量)和K2CO3(448.35mg，3.24mmol，2當量)在5mL的DMF和5mL的H2O中的混合物加熱至回流，反應12小時。冷卻至室溫後，將混合物載荷到柱上用於純化。以75％收率得到616mg的產物G8475-146。
1H NMR(400MHz，MeOD)δppm 0.8(d，J＝6.8Hz，6H)1.9(m，1H)2.2(s，3H)3.2(s，3H)3.5(d，J＝6.6Hz，1H)5.1(s，2H)7.0(m，J＝9.1Hz，2H)7.1(m，1H)7.2(m，1H)7.3(m，1H)7.4(m，1H)7.5(d，J＝9.1Hz，2H)7.6(d，J＝8.8Hz，2H)7.7(m，2H)。
步驟5C使D-3-甲基-2-[4′-(3-甲基-苯並呋喃-2-基甲氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-丁酸甲酯(364mg)溶於THF(10mL)和MeOH(3mL)中。加入1N LiOH(3mL)，攪拌混合物過夜。常規處理並柱純化，定量得到D-3-甲基-2-[4′-(3-甲基-苯並呋喃-2-基甲氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-丁酸。
1H NMR(400MHz，MeOD)δppm0.8(dd，J＝30.3，6.8Hz，6H)2.0(m，1H)2.2(s，3H)3.5(d，J＝5.3Hz，1H)5.1(s，2H)7.1(d，J＝9.1Hz，2H)7.1(m，1H)7.2(m，1H)7.3(d，J＝8.3Hz，1H)7.5(d，J＝8.3Hz，1H)7.5(d，J＝9.1Hz，3H)7.6(d，J＝8.6Hz，2H)7.8(d，J＝8.8Hz，2H)。
實施例3.33 D-2-[4′-(苯並呋喃-2-基甲氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-3-甲基-丁酸按照與實施例3.32類似的方法製備標題化合物，D-2-[4′-(苯並呋喃-2-基甲氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-3-甲基-丁酸。
步驟5A在氬氣下使2-溴甲基-苯並呋喃(1.5g，7.1mmol，1當量)、4-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧雜硼雜環戊烷-2-基)-苯酚(1.56g，7.1mmol，1當量)、碳酸鉀(1.96g，14.2mmol，2當量)溶於乙腈(50mL)中並在70℃下加熱16小時。在處理和快速柱層析後，得到2-[4-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧雜硼雜環戊烷-2-基)-苯氧基甲基]-苯並呋喃。收率63％。
1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 1.3(s，12H)5.3(s，2H)7.1(m，3H)7.3(m，1H)7.3(m，1H)7.6(m，4H)。
步驟5B按照實施例3.32的步驟5B中的方法，進行2-[4-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧雜硼雜環戊烷-2-基)-苯氧基甲基]-苯並呋喃與D-2-(4-溴-苯磺醯氨基)-3-甲基-丁酸叔丁酯的偶合，得到D-2-[4′-(苯並呋喃-2-基甲氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-3-甲基-丁酸叔丁酯。收率33％。
1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.8(dd，J＝8.3，7.1Hz，6H)1.2(s，9H)1.9(m，1H)3.5(dd，J＝9.7，6.2Hz，1H)5.3(s，2H)7.1(s，1H)7.2(d，J＝8.6Hz，2H)7.3(m，1H)7.3(m，1H)7.6(dd，J＝8.2，0.6Hz，1H)7.7(m，3H)7.8(d，J＝3.3Hz，4H)8.1(d，J＝9.9Hz，1H)。
步驟5C將在乙腈(10mL)中的D-2-[4′-(苯並呋喃-2-基甲氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-3-甲基-丁酸叔丁酯(126mg，0.23mmol，1當量)、七水合氯化鈰(175mg，0.47mmol，2當量)、碘化鉀(51mg，0.30mmol，1.3當量)在70℃下加熱16小時。在處理和快速柱層析後，得到D-2-[4′-(苯並呋喃-2-基甲氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-3-甲基-丁酸。收率25％。NMR1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.8(dd，J＝12.5，6.7Hz，6H)2.0(m，1H)3.5(dd，J＝9.2，5.9Hz，1H)5.3(s，2H)7.1(s，1H)7.2(d，J＝8.8Hz，2H)7.3(dd，J＝8.1，0.8Hz，1H)7.3(m，1H)7.6(d，J＝8.1Hz，1H)7.7(m，1H)7.7(d，J＝8.8Hz，2H)7.8(d，4H)8.0(d，J＝9.3Hz，1H)。
實施例3.34
D-3-甲基-2-[4′-(萘-2-基甲氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-丁酸按照與實施例3.32類似的方法製備標題化合物，D-3-甲基-2-[4′-(萘-2-基甲氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-丁酸。
步驟5A按照實施例3.32步驟5A中的方法，用4-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧雜硼雜環戊烷-2-基)-苯酚進行2-溴甲基-萘的烷基化，以85％收率得到4，4，5，5-四甲基-2-[4-(萘-2-基甲氧基)-苯基]-[1，3，2]二氧雜硼雜環戊烷。
1H NMR(400MHz，CHLOROFORM-D)δppm 1.3(s，12H)5.3(s，2H)7.0(d，J＝8.6Hz，2H)7.5(m，2H)7.5dd，J＝8.3，1.8Hz，1H)7.8(d，J＝8.6Hz，2H)7.9(m，4H)。
步驟5B按照實施例3.32步驟5B中的方法，進行4，4，5，5-四甲基-2-[4-(萘-2-基甲氧基)-苯基]-[1，3，2]二氧雜硼雜環戊烷與D-2-(4-溴-苯磺醯氨基)-3-甲基-丁酸甲酯的Suzuki偶合，以44％收率得到D-3-甲基-2-[4′-(萘-2-基甲氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-丁酸甲酯。
1H NMR(400MHz，CHLOROFORM-D)δppm 0.9(dd，J＝32.1，6.8Hz，6H)2.0(m，1H)3.4(s，3H)3.8(dd，J＝10.2，5.2Hz，1H)5.1(d，J＝10.1Hz，1H)5.3(s，2H)7.1(d，J＝9.1Hz，2H)7.5(m，2H)7.6(m，3H)7.7(d，J＝8.6Hz，2H)7.9(m，6H)。
步驟5C按照實施例3.32步驟5C中的方法，以定量收率進行D-3-甲基-2-[4′-(萘-2-基甲氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-丁酸甲酯的水解。
1H NMR(400MHz，MeOD)δppm 0.8dd，J＝32.6，6.8Hz，6H)1.9(m，1H)3.5(d，J＝5.3Hz，1H)5.2(s，2H)7.1(d，J＝8.8Hz，2H)7.4(m，2H)7.5(dd，J＝8.6，1.8Hz，1H)7.5(d，J＝8.8Hz，2H)7.6(d，J＝8.8Hz，2H)7.8(m，5H)7.8(s，1H)。
實施例3.35
D-2-(4′-苄氧基-聯苯-4-磺醯氨基)-3-甲基-丁酸按照與實施例3.32類似的方法製備標題化合物，D-2-(4′-苄氧基-聯苯-4-磺醯氨基)-3-甲基-丁酸。
步驟5B按照實施例3.32步驟5B中的方法，進行4-苄氧基苯基硼酸與D-2-(4-溴-苯磺醯氨基)-3-甲基-丁酸叔丁酯的Suzuki偶合，以73％收率得到D-2-(4′-苄氧基-聯苯-4-磺醯氨基)-3-甲基-丁酸叔丁酯。1H NMR(400MHz，MeOD)δppm 0.8(dd，J＝29.7，6.7Hz，6H)1.1(s，9H)1.9(m，1H)3.5(d，J＝5.8Hz，1H)5.0(s，2H)7.0(d，J＝8.8Hz，2H)7.2(t，J＝7.3Hz，1H)7.3(m，2H)7.4(d，J＝6.8Hz，2H)7.5(d，J＝9.1Hz，2H)7.6(d，J＝8.6Hz，2H)7.8(d，J＝8.8Hz，2H)。
步驟5C按照實施例3.32步驟5C中的方法以定量收率製備D-2-(4′-苄氧基-聯苯-4-磺醯氨基)-3-甲基-丁酸。1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.8(dd，J＝12.3，6.7Hz，6H)1.9(m，1H)3.5(dd，J＝9.3，6.1Hz，1H)5.2(s，2H)7.1(d，J＝9.1Hz，2H)7.4(m，3H)7.5(m，2H)7.7(d，J＝8.8Hz，2H)7.8(s，4H)8.0(d，J＝9.3Hz，1H)。
實施例3.36 D-3-甲基-2-[4′-(喹啉-2-基甲氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-丁酸按照與實施例3.32類似的方法製備標題化合物，D-3-甲基-2-[4′-(喹啉-2-基甲氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-丁酸。
步驟5A按照實施例3.32步驟5A中的方法，用4-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧雜硼雜環戊烷-2-基)-苯酚進行2-氯甲基-喹啉的烷基化，以90％收率得到2-[4-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧雜硼雜環戊烷-2-基)-苯氧基甲基]-喹啉。
1H NMR(400MHz，MeOD)δppm 1.2(s，12H)5.3(s，2H)7.0(d，J＝8.6Hz，2H)7.5(m，1H)7.6(dd，J＝11.4，8.6Hz，3H)7.7(m，1H)7.8(dd，J＝8.1，1.5Hz，1H)7.9(d，J＝8.6Hz，1H)8.3(d，J＝8.6Hz，1H)。
步驟5B按照實施例3.32步驟5B中的方法，進行2-[4-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧雜硼雜環戊烷-2-基)-苯氧基甲基]-喹啉與D-2-(4-溴-苯磺醯氨基)-3-甲基-丁酸叔丁酯的Suzuki偶合，以70％收率得到D-3-甲基-2-[4′-(喹啉-2-基甲氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-丁酸叔丁酯。
1H NMR(400MHz，MeOD)δppm0.8(dd，J＝29.8，6.8Hz，6H)1.1(s，9H)1.9(m，1H)3.5(d，J＝5.6Hz，1H)5.3(s，2H)7.1(d，J＝8.8Hz，2H)7.5(m，3H)7.6(t，J＝8.6Hz，3H)7.7(m，1H)7.8(d，J＝8.8Hz，2H)7.9(dd，J＝8.2，0.9Hz，1H)8.0(m，1H)8.3(d，J＝8.8Hz，1H)。
步驟5C按照實施例3.32步驟5C中的方法，以定量收率除去叔丁酯。1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.8(dd，J＝12.5，6.7Hz，6H)1.9(m，1H)3.5(dd，J＝9.3，6.1Hz，1H)5.5(s，2H)7.2(d，J＝8.8Hz，2H)7.7(m，1H)7.7(dd，J＝8.7，1.9Hz，3H)7.8(s，5H)8.0(m，3H)8.5(d，J＝8.6Hz，1H)。
實施例3.37 D-3-甲基-2-[4′-(2-硝基-苄氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-丁酸按照與實施例3.32類似的方法製備標題化合物，D-3-甲基-2-[4′-(2-硝基-苄氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-丁酸。
步驟5A按照實施例3.32步驟5A中的方法，用4-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧雜硼雜環戊烷-2-基)-苯酚進行1-溴甲基-2-硝基-苯的烷基化，以62％收率得到4，4，5，5-四甲基-2-[4-(2-硝基-苄氧基)-苯基]-[1，3，2]二氧雜硼雜環戊烷。
1H NMR(400MHz，CHLOROFORM-D)δppm 1.3(s，12H)5.5(s，2H)7.0(d，J＝8.6Hz，2H)7.5(m，1H)7.7(m，1H)7.8(d，J＝8.6Hz，2H)7.9(dd，J＝7.8，1.0Hz，1H)8.2(dd，J＝8.1，1.3Hz，1H)。
步驟5B按照實施例3.32步驟5B中的方法進行4，4，5，5-四甲基-2-[4-(2-硝基-苄氧基)-苯基]-[1，3，2]二氧雜硼雜環戊烷與D-2-(4-溴-苯磺醯氨基)-3-甲基-丁酸叔丁酯的Suzuki偶合，以20％收率得到D-3-甲基-2-[4′-(2-硝基-苄氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-丁酸叔丁酯。
1H NMR(400MHz，MeOD)δppm 0.8(dd，J＝30.1，6.8Hz，6H)1.1(s，9H)1.9(m，1H)3.5(d，J＝5.6Hz，1H)5.4(s，2H)7.0(d，J＝8.8Hz，2H)7.5(m，1H)7.5(d，J＝8.8Hz，2H)7.6(m，3H)7.8(d，J＝8.6Hz，3H)8.1(dd，J＝8.1，1.3Hz，1H)。
步驟5C按照實施例3.32步驟5C中的方法以定量收率除去叔丁酯。1H NMR(400MHz，MeOD)δppm 0.8(dd，J＝24.3，6.8Hz，6H)2.0(m，1H)3.6(d，J＝5.8Hz，1H)5.4(s，2H)7.0(d，J＝8.6Hz，2H)7.5(t，J＝7.7Hz，1H)7.6(d，J＝8.8Hz，2H)7.7(m，3H)7.8(m，3H)8.1(d，J＝9.6Hz，1H)。
實施例3.38 D-2-[4′-(2-氯-苄氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-3-甲基-丁酸按照與實施例3.32類似的方法製備標題化合物，D-2-[4′-(2-氯-苄氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-3-甲基-丁酸。
步驟5A按照實施例2A的步驟5A中的方法，進行2-氯苄基溴與4-羥基苯基硼酸酯的偶合，得到2-[4-(2-氯-苄氧基)-苯基]-4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧雜硼雜環戊烷。收率85％。1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 1.3(s，12H)5.2(s，2H)7.0(d，J＝8.8Hz，2H)7.4(m，2H)7.5(m，1H)7.6(m，1H)7.6(d，J＝8.8Hz，2H)。
步驟5B按照實施例3.32步驟5B中的方法，進行2-[4-(2-氯-苄氧基)-苯基]-4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧雜硼雜環戊烷與D-2-(4-溴-苯磺醯氨基)-3-甲基-丁酸甲酯的偶合，得到D-2-[4′-(2-氯-苄氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-3-甲基-丁酸甲酯。收率73％。
1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.8(dd，J＝15.4，6.6Hz，6H)1.9(m，1H)3.3(s，3H)3.6(dd，J＝9.3，7.1Hz，1H)5.2(s，2H)7.2(d，J＝8.8Hz，2H)7.4(m，2H)7.5(m，1H)7.6(m，1H)7.7(d，J＝8.8Hz，2H)7.8(d，J＝8.6Hz，2H)7.8(m，2H)8.3(d，J＝9.3Hz，1H)。
步驟5C按照實施例3.32步驟5C中的方法，進行D-2-[4′-(2-氯-苄氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-3-甲基-丁酸甲酯水解為D-2-[4′-(2-氯-苄氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-3-甲基-丁酸。收率55％。
1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.8(dd，J＝12.6，6.8Hz，6H)1.9(m，1H)3.5(dd，J＝9.2，5.9Hz，1H)5.2(s，2H)7.2(d，J＝8.8Hz，2H)7.4(m，2H)7.5(m，1H)7.6(m，1H)7.7(d，J＝8.8Hz，2H)7.8(s，4H)8.0(d，J＝9.3Hz，1H)12.6(s，1H)。
實施例3.39 D-2-[4′-(2-氟-6-硝基-苄氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-3-甲基-丁酸按照與實施例3.32類似的方法製備標題化合物，D-2-[4′-(2-氟-6-硝基-苄氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-3-甲基-丁酸。
步驟5A按照實施例3.32的步驟5A中的方法進行2-氟-6-硝基苄基溴與4-羥基苯基硼酸酯的偶合，得到2-[4-(2-氟-6-硝基-苄氧基)-苯基]-4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧雜硼雜環戊烷。收率95％。
1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 1.3(s，12H)5.3(d，J＝1.3Hz，2H)7.0(d，J＝8.8Hz，2H)7.6(d，J＝8.8Hz，2H)7.7(m，2H)7.9(m，1H)。
步驟5B按照實施例3.32步驟5B中的方法進行2-[4-(2-氟-6-硝基-苄氧基)-苯基]-4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧雜硼雜環戊烷與D-2-(4-溴-苯磺醯氨基)-3-甲基-丁酸甲酯的偶合，得到D-2-[4′-(2-氟-6-硝基-苄氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-3-甲基-丁酸甲酯。收率49％。
1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.8(dd，J＝15.2，6.8Hz，6H)1.9(M，1H)3.3(s，3H)3.6(dd，J＝9.5，7.2Hz，1H)5.4(d，J＝1.3Hz，2H)7.1(d，J＝8.8Hz，2H)7.8(m，6H)7.8(m，2H)7.9(m，1H)8.3(m，J＝9.3Hz，1H)。
步驟5C除了通過製備型HPLC純化，按照實施例3.32步驟5C中的方法進行D-2-[4′-(2-氟-6-硝基-苄氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-3-甲基-丁酸甲酯水解為D-2-[4′-(2-氟-6-硝基-苄氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-3-甲基-丁酸。收率30％。1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.8(dd，J＝12.9，6.8Hz，6H)1.9(m，1H)3.5(dd，J＝9.2，5.9Hz，1H)5.4(d，J＝1.3Hz，2H)7.1(d，J＝8.8Hz，2H)7.7(m，4H)7.8(d，J＝0.8Hz，4H)7.9(m，2H)8.0(d，J＝9.1Hz，1H)。
實施例3.40 D-3-甲基-2-[4′-(喹啉-4-基甲氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-丁酸按照與實施例3.32類似的方法製備標題化合物，D-3-甲基-2-[4′-(喹啉-4-基甲氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-丁酸。
步驟5A按照實施例3.32的步驟5A中的方法進行4-氯甲基-喹啉與4-羥基苯基硼酸酯的偶合，得到4-[4-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧雜硼雜環戊烷-2-基)-苯氧基甲基]-喹啉。收率62％。1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 1.3(s，12H)5.7(d，J＝0.5Hz，2H)7.1(d，J＝8.8Hz，2H)7.7(m，4H)7.8(m，1H)8.1(dd，J＝8.5，0.9Hz，1H)8.2(d，J＝8.3Hz，1H)8.9(d，J＝4.5Hz，1H)。
步驟5B按照實施例3.32步驟5B中的方法，進行4-[4-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧雜硼雜環戊烷-2-基)-苯氧基甲基]-喹啉與D-2-(4-溴-苯磺醯氨基)-3-甲基-丁酸甲酯的偶合，得到D-3-甲基-2-[4′-(喹啉-4-基甲氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-丁酸甲酯。收率47％。
1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.8(dd，J＝15.2，6.8Hz，6H)1.9(m，1H)3.3(s，3H)3.6(dd，J＝9.3，7.1Hz，1H)5.8(s，2H)7.3(d，J＝8.8Hz，2H)7.8(m，9H)8.1(d，J＝8.6Hz，1H)8.2(d，J＝8.6Hz，1H)8.3(d，J＝9.3Hz，1H)8.9(d，J＝4.3Hz，1H)。
步驟5C按照實施例3.32步驟5C中的方法，進行D-3-甲基-2-[4′-(喹啉-4-基甲氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-丁酸甲酯水解為D-3-甲基-2-[4′-(喹啉-4-基甲氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-丁酸。收率54％。
1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.8(dd，J＝43.6，6.9Hz，6H)2.0(m，1H)3.0(d，J＝3.0Hz，1H)5.8(d，2H)7.3(d，J＝8.8Hz，2H)7.7(m，4H)7.8(m，5H)8.1(m，1H)8.2(dd，J＝8.3，0.8Hz，1H)8.9(d，J＝4.5Hz，1H)。
實施例3.41 D-2-[4′-(2-氰基甲基-苄氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-3-甲基-丁酸按照與實施例3.32類似的方法製備標題化合物，D-3-甲基-2-[4′-(喹啉-4-基甲氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-丁酸。
步驟5C按照實施例3.32步驟5C中的方法，進行D-2-[4′-(2-氰基甲基-苄氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-3-甲基-丁酸甲酯(按照步驟3製備)水解為D-2-[4′-(2-氰基甲基-苄氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-3-甲基-丁酸。製備型HPLC用於純化。收率75％。
1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.8(dd，J＝23.7，6.8Hz，6H)2.0(m，1H)2.8(d，J＝6.6Hz，1H)4.1(s，2H)5.2(s，2H)7.2(d，J＝9.1Hz，2H)7.4(m，2H)7.5(m，1H)7.6(m，1H)7.7(d，J＝8.8Hz，2H)7.8(d，J＝2.0Hz，4H)。
基於流程6製備實施例3.42、3.43、3.44、3.45、3.46、3.47、3.48、3.49。
實施例3.42 D-3-甲基-2-[4′-(2-甲基-喹啉-4-基甲氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-丁酸步驟A將4-氯甲基-2-甲基-喹啉(165mg，0.86mmol，1當量)、D-2-(4′-羥基-聯苯-4-磺醯氨基)-3-甲基-丁酸甲酯(314mg，0.86mmol，1當量)和K2CO3(270mg，1.13mmol，1.3當量)在8mL DMF中的混合物在氮氣下加熱至90℃，反應12小時。在處理和柱層析(30-60％EtOAc/己烷)後，以34％收率得到D-3-甲基-2-[4′-(2-甲基-喹啉-4-基甲氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-丁酸甲酯(150mg)。
1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.8(dd，J＝15.0，6.7Hz，6H)1.9(m，1H)2.7(s，3H)3.3(s，3H)3.6(dd，J＝9.2，7.2Hz，1H)5.7(s，2H)7.3(d，J＝8.8Hz，2H)7.6(m，2H)7.8(m，4H)7.8(m，2H)8.0(d，J＝9.3Hz，1H)8.1(d，J＝8.3Hz，1H)8.1(none，1H)8.3(d，J＝9.6Hz，1H)。
步驟6B使D-3-甲基-2-[4′-(2-甲基-喹啉-4-基甲氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-丁酸甲酯(150mg)溶於THF(8mL)和MeOH(4mL)中，加入1N LiOH(3mL，3mmol)。將生成的溶液在室溫下攪拌過夜。經TLC確定反應完成。除去溶劑並常規處理和柱層析化，以定量收率得到148mg。1HNMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.8(dd，J＝31.8，6.8Hz，6H)2.0(m，1H)2.7(s，3H)3.2(s，1H)5.7(s，2H)7.3(d，J＝8.8Hz，2H)7.6(m，2H)7.8(m，7H)8.0(d，J＝7.6Hz，1H)8.1(d，J＝6.8Hz，1H)。
實施例3.43 D-2-[4′-(3-氰基-苄氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-3-甲基-丁酸按照與實施例3.42類似的方法製備標題化合物，D-2-[4′-(3-氰基-苄氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-3-甲基-丁酸。
步驟6A按照實施例3.42的步驟6A中的方法，進行α-溴-間甲苯基氰與D-2-(4′-羥基-聯苯-4-磺醯氨基)-3-甲基-丁酸甲酯的偶合，得到D-2-[4′-(3-氰基-苄氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-3-甲基-丁酸甲酯。收率25％。1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.8(dd，J＝14.9，6.8Hz，6H)1.9(m，1H)3.3(s，3H)3.6(dd，J＝9.5，7.2Hz，1H)5.3(s，2H)7.2(d，J＝9.1Hz，2H)7.6(t，J＝8.0Hz，1H)7.7(m，4H)7.8(m，4H)8.0(s，1H)8.3(d，J＝9.3Hz，1H)。
步驟6B按照實施例3.42的步驟6B中的方法，進行D-2-[4′-(3-氰基-苄氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-3-甲基-丁酸甲酯的水解為D-2-[4′-(3-氰基-苄氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-3-甲基-丁酸。收率24％。
1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.8(dd，J＝26.0，6.8Hz，6H)2.0(m，1H)2.7(s，1H)5.2(s，2H)7.2(d，J＝8.8Hz，2H)7.6(d，J＝7.6Hz，1H)7.7(d，J＝8.8Hz，2H)7.8(m，6H)8.0(s，1H)。
實施例3.44 D-3-甲基-2-[4′-(萘-1-基甲氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-丁酸按照與實施例3.42類似的方法製備標題化合物，D-3-甲基-2-[4′-(萘-1-基甲氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-丁酸。
步驟6A按照實施例3.42的步驟6A中的方法，用D-2-(4′-羥基-聯苯-4-磺醯氨基)-3-甲基-丁酸甲酯進行1-氯甲基-萘的烷基化，以34％收率得到D-3-甲基-2-[4′-(萘-1-基甲氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-丁酸甲酯。1H NMR(400MHz，CHLOROFORM-D)δppm 0.9(dd，J＝32.3，6.8Hz，6H)2.0(m，1H)3.4(s，3H)3.8(dd，J＝10.1，5.1Hz，1H)5.1(d，J＝10.1Hz，1H)5.6(s，2H)7.2(d，J＝8.8Hz，2H)7.5(dd，J＝8.2，6.9Hz，1H)7.6(m，4H)7.6(d，J＝6.6Hz，1H)7.7(d，J＝8.6Hz，2H)7.9(m，4H)8.1(dd，J＝8.5，1.4Hz，1H)。
步驟6B按照實施例3.42的步驟6B中的方法，以定量收率進行D-3-甲基-2-[4′-(萘-1-基甲氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-丁酸甲酯的水解。1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.8(dd，J＝15.4，6.8Hz，6H)2.0(m，1H)3.5(s，1H)5.6(s，2H)7.2(d，J＝8.8Hz，2H)7.6(m，3H)7.7(m，3H)7.8(d，J＝2.8Hz，4H)8.0(m，3H)8.1(m，1H)。
實施例3.45 D-2-[4′-(2-氟-苄氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-3-甲基-丁酸按照與實施例3.42類似的方法製備標題化合物，D-2-[4′-(2-氟-苄氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-3-甲基-丁酸。
步驟6A按照實施例3.42的步驟6A中的方法，進行2-氟苄基溴與D-2-(4′-羥基-聯苯-4-磺醯氨基)-3-甲基-丁酸甲酯的偶合，得到D-2-[4′-(2-氟-苄氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-3-甲基-丁酸甲酯。收率47％。1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.8(dd，J＝15.2，6.8Hz，6H)1.9(dd，1H)3.3(s，3H)3.6(dd，J＝9.3，7.1Hz，1H)5.2(s，2H)7.2(d，J＝8.8Hz，2H)7.3(m，2H)7.4(m，1H)7.6(m，1H)7.7(m，4H)7.8(m，2H)8.3(d，J＝9.3Hz，1H)。
步驟6B按照實施例3.42的步驟6B中的方法，進行D-2-[4′-(2-氟-苄氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-3-甲基-丁酸甲酯水解為D-2-[4′-(2-氟-苄氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-3-甲基-丁酸。收率67％。
1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.8(dd，J＝43.7，6.8Hz，6H)2.0(m，1H)2.9(d，J＝2.8Hz，1H)5.2(s，2H)6.8(s，1H)7.2(d，J＝8.8Hz，2H)7.3(m，2H)7.4(m，1H)7.6(m，1H)7.7(d，J＝8.8Hz，2H)7.8(s，4H)。
實施例3.46 D-2-[4′-(2，3-二氟-苄氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-3-甲基-丁酸按照與實施例3.42類似的方法製備標題化合物，D-2-[4′-(2，3-二氟-苄氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-3-甲基-丁酸。
步驟6A除了在室溫下反應16小時，按照實施例3.42的步驟6A中的方法，進行2，3-二氟苄基溴與D-2-(4′-羥基-聯苯-4-磺醯氨基)-3-甲基-丁酸甲酯的偶合，得到D-2-[4′-(2，3-二氟-苄氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-3-甲基-丁酸甲酯。收率42％。
1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm(s，2H)7.2(d，J＝8.8Hz，2H)7.3(m，1H)7.5(m，2H)7.7(m，4H)7.8(m，2H)8.3(d，J＝9.3Hz，1H)。
步驟6B按照實施例3.42的步驟6B中的方法，進行D-2-[4′-(2，3-二氟-苄氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-3-甲基-丁酸甲酯水解為D-2-[4′-(2，3-二氟-苄氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-3-甲基-丁酸。收率63％。
1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.8(dd，J＝12.4，6.8Hz，6H)1.9(m，1H)3.5(dd，J＝9.3，6.1Hz，1H)5.3(s，2H)7.2(d，J＝9.1Hz，2H)7.3(m，1H)7.5(m，2H)7.7(d，J＝9.1Hz，2H)7.8(d，J＝1.8Hz，4H)8.0(d，J＝9.3Hz，1H)12.6(s，1H)。
實施例2P D-3-甲基-2-[4′-(2-甲基-3-硝基-苄氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-丁酸按照與實施例3.42類似的方法製備標題化合物，D-3-甲基-2-[4′-(2-甲基-3-硝基-苄氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-丁酸。
步驟6A除了在室溫下反應16小時，按照實施例3.42的步驟6A中的方法，進行2-甲基-3-硝基苄基溴與D-2-(4′-羥基-聯苯-4-磺醯氨基)-3-甲基-丁酸甲酯的偶合，得到D-3-甲基-2-[4′-(2-甲基-3-硝基-苄氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-丁酸甲酯。收率26％。1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.8(dd，J＝15.2，6.8Hz，6H)1.9(m，1H)2.4(s，3H)3.3(s，3H)3.6(m，1H)5.3(s，2H)7.2(d，J＝8.8Hz，2H)7.5(t，J＝7.8Hz，1H)7.8(m，8H)8.3(d，J＝9.3Hz，1H)。
步驟6B按照實施例3.42的步驟6B中的方法，進行D-3-甲基-2-[4′-(2-甲基-3-硝基-苄氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-丁酸甲酯水解為D-3-甲基-2-[4′-(2-甲基-3-硝基-苄氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-丁酸。收率33％。1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.8(dd，J＝12.4，6.8Hz，6H)1.9(dd，1H)3.5(dd，J＝9.3，6.1Hz，1H)5.3(s，2H)7.2(d，J＝9.1Hz，2H)7.3(m，1H)7.5(m，2H)7.7(d，J＝9.1Hz，2H)7.8(d，J＝1.8Hz，4H)8.0(d，J＝9.3Hz，1H)12.6(s，1H)。
實施例3.48 D-2-[4′-(2-碘-苄氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-3-甲基-丁酸按照與實施例3.42類似的方法製備標題化合物，D-2-[4′-(2-碘-苄氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-3-甲基-丁酸。
步驟6A按照實施例3.42的步驟6A中的方法，用D-2-(4′-羥基-聯苯-4-磺醯氨基)-3-甲基-丁酸甲酯進行1-氯甲基-2-碘-苯的烷基化，以55％收率得到D-2-[4′-(2-碘-苄氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-3-甲基-丁酸甲酯。1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.8(dd，J＝15.3，6.7Hz，6H)1.9(m，1H)3.3(s，3H)3.6(dd，J＝9.5，7.2Hz，1H)7.1(m，3H)7.5(m，1H)7.6(m，1H)7.7(m，4H)7.8(m，2H)7.9(dd，J＝8.0，1.1Hz，1H)8.3(d，J＝9.3Hz，1H)。
步驟6B按照實施例3.42的步驟6A中的方法，以定量收率進行D-2-[4′-(2-碘-苄氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-3-甲基-丁酸甲酯的水解。
1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.8(dd，J＝12.1，6.8Hz，6H)1.9(m，1H)3.5(dd，J＝9.3，6.1Hz，1H)5.1(s，2H)7.1(d，J＝8.8Hz，2H)7.5(m，1H)7.6(d，J＝7.6Hz，1H)7.7(d，J＝8.8Hz，2H)7.8(s，4H)7.9(dd，J＝7.8，1.3Hz，1H)8.0(d，J＝9.3Hz，1H)。
實施例3.49
D-2-[4′-(苯並噻唑-2-基甲氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-3-甲基-丁酸按照與實施例3.42類似的方法製備標題化合物，D-2-[4′-(苯並噻唑-2-基甲氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-3-甲基-丁酸。
步驟6A按照實施例3.42的步驟6A中的方法，用D-2-(4′-羥基-聯苯-4-磺醯氨基)-3-甲基-丁酸甲酯進行2-溴甲基-苯並噻唑的烷基化，以20％收率得到D-2-[4′-(苯並噻唑-2-基甲氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-3-甲基-丁酸甲酯。1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.8(dd，J＝15.0，6.7Hz，6H)1.9(m，1H)3.6(dd，J＝9.5，7.2Hz，1H)5.7(s，2H)7.2(m，J＝8.8Hz，2H)7.5(m，1H)7.6(m，1H)7.7(m，4H)7.8(m，2H)8.0(d，J＝7.3Hz，1H)8.1(d，J＝7.8Hz，1H)8.3(d，J＝9.6Hz，1H)。
步驟6B按照實施例3.42的步驟6B中的方法，以定量收率進行D-2-[4′-(苯並噻唑-2-基甲氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-3-甲基-丁酸甲酯的水解。1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.8(dd，J＝12.4，6.8Hz，6H)1.9(m，1H)3.5(dd，J＝9.3，5.8Hz，1H)5.7(s，2H)7.2(d，J＝8.8Hz，2H)7.5(m，1H)7.6(m，1H)7.7(d，J＝8.8Hz，2H)7.8(d，J＝2.3Hz，4H)8.0(dd，J＝9.1，4.5Hz，2H)8.1(d，J＝8.6Hz，1H)。97％。
基於流程6B製備實施例3.50、3.51、3.52、3.53、3.54、3.55、3.56。
實施例3.50 2-[4′-(2，3-二氫-苯並[1，4]二英-6-基甲氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-3-甲基-丁酸
1H NMR(400MHz，DMSO)δ0.778(d，3H)，0.845(d，3H)，1.99(dd，1H)，3.17(bs，1H)，4.24(s，4H)，5.04(s，2H)，6.91(m，3H)，7.10(d，2H)，7.68(d，2H)；ES+m/z 496.0(M-H)；HRMS(C26H27NO7S)理論值520.14004；實測值520.13995(M+Na)。
實施例3.51 3-甲基-2-[4′-(吡啶-2-基甲氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-丁酸。
1H NMR(400MHz ，DMSO)δ0.800(d，3H)，0.803(d，3H)，1.94(m，1H)，3.51(bs，1H)，5.25(s，2H)，7.15(d，2H)，7.36(m，1H)，7.54(d，2H)，7.71(d，2H)，7.83(m，3H)，8.59(d，2H)；ES+m/z441.2(M+H)；HRMS(C23H24N2O5S)理論值440.14004；實測值440.14037(M+H)。
實施例3.52 3-甲基-2-[4′-(吡啶-3-基甲氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-丁酸1H NMR(400MHz，DMSO)δ0.800(d，3H)，0.803(d，3H)，1.95(m，1H)，3.49(bs，1H)，5.23(s，2H)，7.16(d，2H)，7.45(m，1H)7.71(d，2H)，7.80(m，3H)，7.90(d，2H)，8.56(d，1H)，8.70(bs，1H)；ES+m/z441.1(M+H)；HRMS(C23H24N2O5S)理論值441.14787；實測值441.14617(M+H)。
實施例3.53 2-[4′-(1H-苯並咪唑-2-基甲氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-3-甲基-丁酸
1H NMR(400MHz，DMSO)δ0.802(d，3H)，0.833(d，3H)，1.94(m，1H)，3.54(m，1H)，5.51(s，2H)，6.88(d，2H)，7.24(d，1H)，7.34(m，1H)，7.58(d，2H)，7.66(m，1H)，7.78(m，4H)，8.03(d，1H)；ES+m/z 480.1(M+H)；HRMS(C25H25N3O5S)理論值480.15877；實測值480.15787(M+H)。
實施例3.54 2-[4′-(3-甲氧基-苄氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-3-甲基-丁酸。
1H NMR(400MHz，DMSO)δ0.804(d，3H)，0.835(d，3H)，1.95(m，1H)，3.54(m，1H)，3.7(s，3H)，5.15(s，2H)，6.89(m，2H)7.04(m，2H)，7.13(m，2H)，7.32(m，1H)，7.58(d，1H)，7.69(d，2H)，7.80(m，1H)，8.01(d，1H)；ES+m/z 470.1(M+H)；HRMS(C25H27NO6S)理論值470.16319；實測值470.16183(M+H)。
實施例3.55 2-[4′-(4-甲氧基-苄氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-3-甲基-丁酸。
1H NMR(400MHz，DMSO)δ0.805(d，3H)，0.836(d，3H)，1.94(m，1H)，3.54(m，1H)，3.76(s，3H)5.09(s，2H)，6.96(d，2H)，7.12(d，2H)，7.40(d，2H)，7.69(d，2H)，7.80(s，3H)，8.01(d，1H)；ES+m/z 468.2(M-H)；HRMS(C25H27NO6S)理論值470.16319；實測值470.16248(M+H)。
實施例3.56
2-[4′-(3，5-二甲氧基-苄氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-3-甲基-丁酸。
1H NMR(400MHz，DMSO)δ0.804(d，3H)，0.835(d，3H)，1.95(m，1H)，3.55(m，1H)，3.7(s，6H)，5.11(s，2H)，6.45(bs，1H)，6.62(bs，2H)，7.12(d，2H)，7.70(d，2H)，7.80(s，3H)，8.01(d，1H)；ES+m/z498.2(M-H)；HRMS(C26H29NO7S)理論值500.17375；實測值500.17223(M+H)。
基於流程7製備實施例3.57。
實施例3.57 3-甲基-2-(4′-乙烯基-聯苯-4-磺醯氨基)-丁酸叔丁酯。
步驟7A使4-乙烯基苯基硼酸(1.89g，12.7mmol，1當量)和2-(4-溴-苯磺醯氨基)-3-甲基-丁酸叔丁酯(5g，12.7mmol，1當量)溶於乙二醇二甲醚(180mL)中，加入Pd(Ph3)4(736.0mg，0.64mmol)並在室溫下攪拌20分鐘。然後向反應混合物中加入K2CO3水溶液(3.52g，25.5mmol，2當量)並加熱至回流反應過夜。冷卻至室溫後，蒸發溶劑並在EtOAc與H2O之間分配殘餘物。用鹽水洗滌有機層，經MgSO4乾燥並經柱層析(矽膠，10％EtOAc/己烷)純化，以15.2％收率得到808mg的G9058-169。
1H NMR(400MHz，CHLOROFORM-D)δppm 0.80(d，J＝6.82Hz，3H)0.95(d，J＝6.82Hz，3H)1.12(s，9H)1.99(m，1H)3.59(dd，J＝9.85，4.55Hz，1H)5.06(d，J＝10.11Hz，1H)5.25(d，J＝10.86Hz，1H)5.75(d，J＝16.93z，1H)6.70(m，1H)7.45(m，4H)7.61(d，J＝8.84Hz，2H)7.82(d，J＝8.84Hz，2H)。
步驟7B將3-甲基-2-(4′-乙烯基-聯苯-4-磺醯氨基)-丁酸叔丁酯(300mg，0.72mmol，1.2當量)、Pd2(dba)3(11mg，0.012mmol，0.02當量)、四氟硼酸三叔丁基(14mg，0.048mmol，0.08當量)和二烷(1.5mL)在N2下置於微波管中。注射2-溴-1-苯並呋喃(118mg，0.6mmol，1當量)和二環己基甲胺(0.15mL，0.72mmol，1.2當量)。然後用微波反應器在180℃下照射混合物30分鐘。在EtOAc和H2O之間分配混合物，經MgSO4乾燥有機層。經柱層析(矽膠，20％EtOAc/己烷)純化粗殘餘物，以25％收率得到80mg 2-[4′-(2-苯並呋喃-2-基-乙烯基)-聯苯-4-磺醯氨基]-3-甲基-丁酸叔丁酯(G9058-171)。
1H NMR(400MHz，CHLOROFORM-D)δppm 0.80(d，J＝6.82Hz，3H)0.96(d，J＝6.82Hz，3H)1.14(s，9H)2.01(m，1H)3.60(dd，J＝9.98，4.42Hz，1H)5.07(d，J＝9.85HZ，1H)6.66(s，1H)7.01(d，J＝15.92Hz，1H)7.14(m，1H)7.25(m，2H)7.42(d，J＝8.08Hz，1H)7.52(m，5H)7.64(d，J＝8.59Hz，2H)7.84(d，J＝8.59Hz，2H)。
步驟7C將在二氯乙烷(4.5mL)中的2-[4′-(2-苯並呋喃-2-基-乙烯基)-聯苯-4-磺醯氨基]-3-甲基-丁酸叔丁酯(80mg)加入到TFA(1.5mL)中並在室溫下攪拌。經TLC確定在3小時後反應完成。除去溶劑後，然後經柱層析(5-10％ MeOH/CH2Cl2)純化粗殘餘物，以30.7％收率得到22mg的2-[4′-(2-苯並呋喃-2-基-乙烯基)-聯苯-4-磺醯氨基]-3-甲基-丁酸G9058-172。
1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.79(d，J＝6.82Hz，3H)0.86(d，J＝6.82Hz，3H)1.23(s，2H)2.02(m，1H)3.18(m，1H)7.01(s，1H)7.25(t，J＝7.07Hz，1H)7.33(m，1H)7.38(d，J＝14.65Hz，1H)7.59(d，J＝8.08Hz，1H)7.64(d，J＝8.08Hz，1H)7.79(d，J＝6.57Hz，4H)7.83(d，J＝8.59Hz，2H)7.90(m，2H)。
基於流程8製備實施例3.58。
實施例3.58 N-({4′-[2-4-甲基異喹啉-3-基)乙基]-1，1′-聯苯-4-基}磺醯基)-D-纈氨酸步驟8A在N2氣氛下，使2-(4-溴-苯磺醯氨基)-3-甲基-丁酸叔丁酯(10.65g，27.1mmol，1當量)、4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環戊烷-2-基)苯酚(5.97g，27.1mmol，1當量)、Pd(PPh3)4(1.57g，1.4mmol，0.05當量)溶於乙二醇二甲醚(210mL)中，在室溫下攪拌30分鐘。然後向反應混合物中加入在H2O(70mL)中的K2CO3(7.5g，54.3mmol，2當量)並加熱至回流反應過夜。經TLC確定反應完成。旋轉蒸發除去溶劑並在二氯甲烷與鹽水之間分配殘餘物。經MgSO4乾燥有機層，除去溶劑，經柱層析(矽膠，30％EtOAc/正己烷)純化粗品，以65％收率得到7.1g的2-(4′-羥基-聯苯-4-磺醯氨基)-3-甲基-丁酸叔丁酯。
1H NMR(400MHz，CHLOROFORM-D)δppm 0.79(d，J＝6.82Hz，3H)0.95(d，J＝6.57Hz，3H)1.13(s，9H)1.51(s，1H)1.99(m，1H)3.59(dd，J＝10.11，4.55Hz，1H)5.06(d，J＝9.85Hz，1H)6.86(d，J＝8.84Hz，2H)7.38(d，J＝8.84Hz，2H)7.55(d，J＝8.59Hz，2H)7.79(d，J＝8.59Hz，2H)。
步驟8B使2-(4′-羥基-聯苯-4-磺醯氨基)-3-甲基-丁酸叔丁酯(330mg，0.81mmol)溶於20mL乾燥二氯甲烷中並冷卻至0℃。在N2下加入NaH(83mg，60％在油中，2.0mmol，2.5當量)並攪拌混合物15分鐘。注射三氟甲磺酸酐(251mg，0.89mmol，1.1當量)，使混合物升至室溫反應1小時。TLC顯示反應完成。用二氯甲烷稀釋反應混合物並用1N HCl中和。用水、鹽水洗滌混合物並經MgSO4乾燥。常規柱層析(40％EtOAc/己烷)以72％收率得到314mg要求的產物。
1H NMR(400MHz，CHLOROFORM-D)δppm 0.87(d，J＝6.82Hz，3H)1.03(d，J＝6.82Hz，3H)1.21(s，9H)2.01-2.20(m，1H)3.68(dd，J＝9.85，4.55Hz，1H)5.18(d，J＝10.11Hz，1H)7.39(d，J＝8.84Hz，2H)7.64(dd，J＝13.52，8.72Hz，4H)7.93(d，J＝8.59Hz，2H)。
步驟8C在氮氣下，用來自步驟8B的三氟甲磺酸酯(300mg，0.56mmol)、氯化鋰(24mg，0.56mmol，1當量)、CuI(11mg，0.05mmol，10％)和PdCl2(PPh3)2(19.6mg，0.028mmol，5％)填充反應管，隨後加入DMF(5mL)。注射叔丁基二甲基乙炔(235mg，1.68mmol，3當量)和二乙胺(409mg，5.6mmol，10當量)。用微波反應器在125℃下照射試管10分鐘。經TLC確定起始原料被消耗。在乙酸乙酯和水之間分配混合物。收集有機相併且常規處理和柱層析化，以92％收率得到270mg要求的炔類產品N-[(4′-{[叔丁基(二甲基)甲矽烷基]乙炔基}-1，1′-聯苯-4-基)磺醯基]-D-纈氨酸叔丁酯。1HNMR(400MHz，CHLOROFORM-D)δppm 0.00(s，6H)0.66(d，J＝6.82Hz，3H)0.81(s，9H)0.82(d，J＝6.82Hz，3H)0.98(s，9H)1.75-1.98(m，1H)3.46(dd，J＝9.85，4.55Hz，1H)4.93(d，J＝9.85Hz，1H)7.27-7.32(m，2H)7.33-7.39(m，2H)7.47(d，J＝8.84Hz，2H)7.70(d，J＝8.84Hz，2H)。
步驟8D使N-[(4′-{[叔丁基(二甲基)甲矽烷基]乙炔基}-1，1′-聯苯-4-基)磺醯基]-D-纈氨酸叔丁酯(600mg，1.14mmol)溶於THF(8mL)中，加入TBAF(1.7mL，1M，1.7mmol，1.5當量)。在室溫下攪拌溶液半小時，完成反應。除去溶劑並經柱層析(矽膠，20％EtOAc/己烷)純化殘餘物。以定量收率分離469mg的產物N-[(4′-乙炔基-1，1′-聯苯-4-基)磺醯基]-D-纈氨酸叔丁酯。1HNMR(400MHz，CHLOROFORM-D)δppm 0.86(d，J＝6.82Hz，2H)1.02(d，J＝6.82Hz，2H)1.20(s，9H)1.88-2.29(m，1H)3.17(s，1H)3.67(dd，J＝9.85，4.55Hz，1H)5.14(d，J＝10.11Hz，1H)7.52(d，J＝8.59Hz，2H)7.56-7.62(m，2H)7.67(d，J＝8.84Hz，2H)7.91(d，J＝8.59Hz，2H)。
步驟8E將N-[(4′-乙炔基-1，1′-聯苯-4-基)磺醯基]-D-纈氨酸叔丁酯(117mg，0.28mmol)、2-氯-3-甲基異喹啉(60mg，0.34mmol，1.2當量)、CuI(5.3mg，0.028mmol，10％)和PdCl2(PPh3)2(9.8mg，0.014mmol，5％)在N2下置於反應管中並加入DMF(4mL)和10當量的二乙胺。在125℃下照射混合物10分鐘。通過LCMS確定反應完成。用EtOAc稀釋混合物，用水洗滌3次，用鹽水洗滌1次，然後經MgSO4乾燥。柱層析(矽膠，30％EtOAc/己烷)以76％收率得到120mg要求的產物N-({4′-[(4-甲基異喹啉-3-基)乙炔基]-1，1′-聯苯-4-基}磺醯基)-D-纈氨酸叔丁酯。
1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.86(dd，J＝8.59，6.82Hz，6H)1.17(s，9H)1.94(m，1H)2.67(s，3H)3.50(dd，J＝10.61，7.33Hz，1H)7.62(t，J＝7.45Hz，1H)7.69-7.78(m，1H)7.80-7.85(m，4H)7.87(d，J＝8.59Hz，2H)7.90-7.97(m，2H)8.00(d，J＝8.59Hz，1H)8.20(d，J＝9.60Hz，1H)8.30(s，1H)。
步驟8F使N-({4′-[(4-甲基異喹啉-3-基)乙炔基]-1，1′-聯苯-4-基}磺醯基)-D-纈氨酸叔丁酯(46mg，0.08mmol)溶於25mL甲醇中並加入催化量的Pd/C(8.5mg，炭的10％重量，0.008mmol)。在H2(50PSI)下，於帕爾搖瓶中進行氫化。5小時後終止反應，LCMS顯示反應完成。通過硅藻土過濾混合物並以定量收率濃縮為要求的產物G8594-178(46mg)。
1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.77-0.93(m，，6H)1.15(s，9H)1.85-2.06(m，1H)2.51(s，3H)3.13-3.28(m，2H)3.25-3.39(m，2H)3.47(d，J＝8.84Hz，1H)7.47(d，J＝8.08Hz，2H)7.52(t，J＝7.45Hz，1H)7.59-7.71(m，3H)7.76-7.90(m，4H)7.97(d，J＝8.34Hz，1H)8.06(s，1H)8.15(s，1H)。
步驟8G使N-({4′-[2-(4-甲基異喹啉-3-基)乙基]-1，1′-聯苯-4-基}磺醯基-D-纈氨酸叔丁酯(46mg，0.08mmol)溶於5mL乾燥二氯甲烷中，隨後加入2.5mL TFA。在室溫下攪拌混合物3小時，TLC顯示反應完成。旋轉蒸發除去溶劑並在真空烘箱中乾燥產物過夜。以95％收率得到44mg產物N-({4′-[2-(4-甲基異喹啉-3-基)乙基]-1，1′-聯苯-4-基}磺醯基-D-纈氨酸。
1H NMR(400MHz，MeOD)δppm 0.83(d，J＝6.82Hz，3H)0.88(d，J＝6.82Hz，3H)1.80-2.13(m，1H)2.57(s，3H)3.15(t，J＝7.83Hz，2H)3.45-3.55(m，2H)3.60(d，J＝5.56Hz，1H)7.25(d，J＝8.08Hz，2H)7.53(d，J＝8.08Hz，2H)7.65(d，J＝8.34Hz，2H)7.81(d，J＝8.59Hz，3H)7.98(t，J＝7.58Hz，1H)8.02-8.09(m，1H)8.13(d，J＝8.08Hz，1H)8.83(s，1H)。
基於流程9製備實施例3.59。
實施例3.59
D-2-[4′-(乙醯氨基-甲基)-聯苯-4-磺醯氨基]-3-甲基-丁酸步驟9A使4-氨基甲基苯基硼酸(143mg，0.77mmol，1當量)、D-2-(4-溴-苯磺醯氨基)-3-甲基-丁酸叔丁酯(300mg，0.77mmol，1當量)、鈀四(44mg，0.038mmol，0.05當量)在二甲氧基乙烷(10mL)中合併，在室溫下攪拌10分鐘。向反應混合物中加入在4mL水中的碳酸鉀(212mg，1.53mmol，2當量)並在88℃下加熱4小時。然後使反應物冷卻至室溫並用乙酸乙酯稀釋，用鹽水洗滌，經硫酸鎂乾燥並除去至幹。經矽膠上的快速層析法純化殘餘物，用在含2％Et3N的二氯甲烷中的4-10％MeOH洗脫，得到200mg D-2-(4′-氨基甲基-聯苯-4-磺醯氨基)-3-甲基-丁酸叔丁酯。收率63％。
1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.9(dd，J＝8.1，7.1Hz，6H)1.1(s，9H)1.9(m，1H)3.5(d，J＝6.3Hz，2H)3.8(s，2H)7.5(d，J＝8.3Hz，2H)7.6(d，J＝8.3Hz，2H)7.8(d，J＝2.0Hz，4H)。
步驟9B在氬氣下，向在CH2Cl2(5mL)中的乙酸酐(71μL，0.75mmol，1.05當量)中加入吡啶(70μL，0.86mmol，1.2當量)並攪拌5分鐘，然後加入D-2-(4′-氨基甲基-聯苯-4-磺醯氨基)-3-甲基-丁酸叔丁酯(300mg，0.72mmol，1當量)並攪拌16小時。在處理和快速柱層析後，得到D-2-[4′-(乙醯氨基-甲基)-聯苯-4-磺醯氨基]-3-甲基-丁酸叔丁酯。收率32％。1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.8(dd，J＝9.1，6.8Hz，6H)0.9(t，J＝7.3Hz，3H)1.2(s，9H)1.3(m，2H)1.5(m，2H)1.9(m，1H)2.5(m，2H)3.4(dd，J＝9.6，6.3Hz，1H)7.0(dd，4H)7.1(m，2H)7.5(d，J＝8.8Hz，2H)7.7(d，J＝9.6Hz，1H)8.6(s，1H)。
步驟9C向D-2-[4′-(乙醯氨基-甲基)-聯苯-4-磺醯氨基]-3-甲基-丁酸叔丁酯(300mg，0.65mmol)的6mL二氯乙烷溶液中加入3mL三氟乙酸。在室溫下攪拌反應混合物4小時，通過TLC確定反應完成。除去溶劑並經真空烘箱乾燥殘餘物，得到250mg的D-2-[4′-(乙醯氨基-甲基)-聯苯-4-磺醯氨基]-3-甲基-丁酸。收率94％。
1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.8(dd，J＝12.5，6.7Hz，6H)1.9(s，3H)2.0(m，1H)3.6(dd，J＝9.3，5.8Hz，1H)4.3(d，J＝5.8Hz，2H)7.4(d，J＝8.1Hz，2H)7.7(d，J＝8.3Hz，2H)7.8(s，4H)8.1(d，J＝9.3Hz，1H)8.4(t，J＝5.8Hz，1H)12.6(s，1H)。
基於流程10製備實施例3.60和3.61。
實施例3.60 D-3-甲基-2-(4′-苯基氨基甲醯基甲基-聯苯-4-磺醯氨基)-丁酸步驟10A將4-溴苯基乙酸(1.5g，7.0mmol，1當量)、EDC(2.67g，14.0mmol，2當量)、DMAP(846mg，7.0mmol，1當量)和苯基胺(0.765mL，8.4mmol，1.2當量)在15mL DMF中的混合物在氮氣下，於室溫下攪拌3.5小時。在水處理和重結晶後，以69％收率得到2-(4-溴苯基)-N-苯基-乙醯胺(1.4g)。
1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 3.6(s，2H)7.0(m，1H)7.3(m，4H)7.5(m，2H)7.6(dd，J＝8.7，1.1Hz，2H)10.2(s，1H)。
步驟10B將2-(4-溴苯基)-N-苯基-乙醯胺(107mg，0.37mmol，1.1當量)、D-3-甲基-2-(4-三丁基錫烷基-苯磺醯氨基)-丁酸叔丁酯(202mg，0.34mmol，1當量)和Pd(PPh3)4(38.5mg，0.033mmol，0.1當量)在5mL甲苯中的混合物在氮氣下加熱至回流。5小時後反應完成。常規處理和柱純化，以34％收率得到D-3-甲基-2-(4′-苯基氨基甲醯基甲基-聯苯-4-磺醯氨基)-丁酸叔丁酯(60mg)。
1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.9(dd，J＝8.3，6.8Hz，6H)1.1(s，9H)1.9(m，1H)3.5(dd，J＝9.6，6.3Hz，1H)3.7(s，2H)7.0(t，J＝7.3Hz，1H)7.3(m，，2H)7.5(d，J＝8.3Hz，2H)7.6(dd，J＝8.6，1.0Hz，2H)7.7(d，J＝8.3Hz，2H)7.8(d，J＝2.5Hz，4H)8.1(d，J＝9.6Hz，1H)10.2(s，1H)。
步驟10C使用二氯乙烷中的TFA(1∶1)，除去D-3-甲基-2-(4′-苯基氨基甲醯基甲基-聯苯-4-磺醯氨基)-丁酸叔丁酯的叔丁酯。蒸發溶劑後，以定量收率得到D-3-甲基-2-(4′-苯基氨基甲醯基甲基-聯苯-4-磺醯氨基)-丁酸。
1H NMR(400MHz，MeOD)δppm 0.8(dd，J＝27.0，6.8Hz，6H)2.0(m，1H)3.6(d，J＝5.6Hz，1H)3.6(s，2H)7.0(m，1H)7.2(m，2H)7.4(d，J＝8.3Hz，2H)7.5(dd，J＝8.7，1.1Hz，2H)7.6(d，J＝8.3Hz，2H)7.7(dd，J＝48.0，8.6Hz，4H)。
實施例3.61 D-2-[4′-(苄基氨基甲醯基-甲基)-聯苯-4-磺醯氨基]-3-甲基-丁酸步驟10A按照實施例3.60的步驟10A中的方法，進行4-溴苯基乙酸與苄基胺的醯胺偶合，以82％收率得到N-苄基-2-(4-溴-苯基)-乙醯胺。1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 3.5(s，2H)4.3(d，J＝5.8Hz，2H)7.2(dd，J＝7.8，5.6Hz，5H)7.3(m，2H)7.5(d，J＝8.3Hz，2H)8.6(t，J＝5.9Hz，1H)。
步驟10B按照實施例3.60的步驟10B中的方法，進行N-苄基-2-(4-溴-苯基)-乙醯胺與D-3-甲基-2-(4-三丁基錫烷基-苯磺醯氨基)-丁酸叔丁酯的Stille偶合，以31％收率得到D-2-[4′-(苄基氨基甲醯基-甲基)-聯苯-4-磺醯氨基]-3-甲基-丁酸叔丁酯。
1H NMR(400MHz，CHLOROFORM-D)δppm 0.9(d，J＝6.8Hz，3H)1.0(d，J＝6.6Hz，3H)1.2(s，9H)2.1(m，1H)3.7(m，3H)4.5(d，J＝5.8Hz，2H)5.1(d，J＝9.9Hz，1H)5.7(s，1H)7.3(m，5H)7.4(d，J＝8.1Hz，2H)7.5(d，J＝8.3Hz，2H)7.7(d，J＝8.3Hz，2H)7.9(d，J＝8.3Hz，2H)。
步驟10C按照實施例3.60的步驟10C中的方法，除去叔丁酯。
1H NMR(400MHz，MeOD)δppm 0.8(dd，J＝26.3，6.8Hz，6H)2.0(m，1H)3.5(s，2H)3.6(d，J＝5.6Hz，1H)4.3(d，J＝5.6Hz，2H)7.2(m，5H)7.3(d，J＝8.3Hz，2H)7.5(d，J＝8.3Hz，2H)7.7(d，J＝8.8Hz，2H)7.8(d，J＝8.8Hz，2H)8.5(s，1H).
基於流程11製備實施例3.62、3.63、3.64、3.65、3.66、3.67、3.68、3.69、3.70、3.71、3.72、3.73、3.74、3.75、3.76、3.77、3.78、3.79、3.80。
實施例3.62 2-[4′-(4-氟-苯基氨基甲醯基氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-3-甲基-丁酸步驟11A使2-(4′-羥基-聯苯-4-磺醯氨基)-3-甲基-丁酸叔丁酯(300mg，0.74mmol，1當量)溶於乙醚(7.5mL)中，隨後加入異氰酸4-氟苯基酯(101mg，0.74mmol，1當量)和Et3N(1mL)。在室溫下攪拌反應混合物50分鐘。從反應混合物沉澱出固體。過濾收集固體並用乙醚洗滌，以57％收率得到2-[4′-(4-氟-苯基氨基甲醯基氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-3-甲基-丁酸叔丁酯(228mg)。
1H NMR(400MHz，CHLOROFORM-D)δppm 0.87(d，J＝6.82Hz，3H)1.03(d，J＝6.82Hz，3H)1.20(s，9H)2.05(m，1H)3.67(dd，J＝9.98，4.42Hz，1H)5.13(d，J＝9.85Hz，1H)6.95(s，1H)7.05(d，J＝9.09Hz，2H)7.30(d，J＝8.59Hz，2H)7.43(m，2H)7.57(d，J＝8.59Hz，2H)7.67(s，2H)7.90(d，J＝8.34Hz，2H)。
步驟11B使2-[4′-(4-氟-苯基氨基甲醯基氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-3-甲基-丁酸叔丁酯(223mg)溶於二氯乙烷(7.5mL)中並加入TFA(2.5mL)。在室溫下攪拌混合物5小時，TLC表明反應完成。常規處理和柱層析以89％收率得到2-[4′-(4-氟-苯基氨基甲醯基氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-3-甲基-丁酸(178mg)。
1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.81(d，J＝6.57Hz，3H)0.84(d，J＝6.82Hz，3H)1.96(m，1H)3.56(dd，J＝9.35，6.06Hz，1H)7.19(t，J＝8.84Hz，2H)7.37(d，J＝8.59Hz，2H)7.54(dd，J＝9.09，4.80Hz，2H)7.79(d，J＝8.84Hz，2H)7.86(d，J＝4.29Hz，4H)8.08(d，J＝9.35Hz，1H)10.34(s，1H)。
實施例3.63
D-3-甲基-2-[4′-(4-苯氧基-苯基氨基甲醯基氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-丁酸按照與實施例3.62類似的方法製備標題化合物D-3-甲基-2-[4′-(4-苯氧基-苯基氨基甲醯基氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-丁酸。
步驟11A按照實施例3.62步驟11A中的方法，進行異氰酸4-苯氧基苯基酯與D-2-(4′-羥基-聯苯-4-磺醯氨基)-3-甲基-丁酸叔丁酯的反應，得到D-3-甲基-2-[4′-(4-苯氧基-苯基氨基甲醯基氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-丁酸叔丁酯。收率36％。1H NMR(400MHz，DMSO-D6)□ppm 0.9(dd，J＝8.2，6.9Hz，6H)1.2(s，9H)1.9(m，1H)3.5(dd，J＝9.6，6.3Hz，1H)7.0(dd，J＝8.6，1.0Hz，2H)7.0(d，J＝9.1Hz，2H)7.1(m，1H)7.4(m，4H)7.5(d，J＝8.8Hz，2H)7.7(d，J＝8.8Hz，2H)7.9(m，4H)8.2(d，J＝9.6Hz，1H)10.3(s，1H)。
步驟11B按照實施例3.62步驟11B中的方法，進行D-3-甲基-2-[4′-(4-苯氧基-苯基氨基甲醯基氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-丁酸叔丁酯轉化為D-3-甲基-2-[4′-(4-苯氧基-苯基氨基甲醯基氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-丁酸。收率87％。1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.8(dd，J＝12.1，6.8Hz，6H)1.9(m，1H)3.6(dd，J＝9.3，6.1Hz，1H)7.0(m，2H)7.0(d，J＝9.1Hz，2H)7.1(t，J＝7.3Hz，1H)7.4(m，4H)7.5(d，J＝8.8Hz，2H)7.8(d，J＝8.8Hz，2H)7.9(d，J＝4.8Hz，4H)8.1(d，J＝9.3Hz，1H)10.3(s，1H)。
實施例3.64
D-3-甲基-2-[4′-(萘-2-基氨基甲醯基氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-丁酸按照與實施例3.62類似的方法製備標題化合物D-3-甲基-2-[4′-(萘-2-基氨基甲醯基氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-丁酸。
步驟11A按照實施例3.62步驟11A中的方法，進行異氰酸2-萘基酯與D-2-(4′-羥基-聯苯-4-磺醯氨基)-3-甲基-丁酸叔丁酯的反應，得到D-3-甲基-2-[4′-(萘-2-基氨基甲醯基氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-丁酸叔丁酯。收率16％。1H NMR(400MHz，DMSO-D6)□ppm 0.9(dd，J＝8.2，6.9Hz，6H)1.2(s，9H)1.9(m，1H)3.5(dd，J＝9.9，6.3Hz，1H)7.4(m，3H)7.5(m，1H)7.6(dd，J＝8.8，2.3Hz，1H)7.8(d，J＝8.8Hz，2H)7.9(m，7H)8.1(s，1H)8.2(d，J＝9.9Hz，1H)10.5(s，1H)。
步驟11B按照實施例3.62步驟11B中的方法，進行D-3-甲基-2-[4′-(萘-2-基氨基甲醯基氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-丁酸叔丁酯轉化為D-3-甲基-2-[4′-(萘-2-基氨基甲醯基氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-丁酸。收率40％。1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.8(dd，J＝12.5，6.7Hz，6H)2.0(m，1H)3.6(dd，J＝9.1，5.8Hz，1H)7.4(m，3H)7.5(m，1H)7.6(dd，J＝8.8，2.3Hz，1H)7.9(m，9H)8.1(m，2H)10.5(s，1H)12.6(s，1H)。
實施例3.65 D-2-[4′-(4-苄氧基-苯基氨基甲醯基氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-3-甲基-丁酸按照與實施例3.62類似的方法製備標題化合物D-2-[4′-(4-苄氧基-苯基氨基甲醯基氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-3-甲基-丁酸。
步驟11A按照實施例3.62步驟11A中的方法，進行異氰酸4-苄氧基苯基酯與D-2-(4′-羥基-聯苯-4-磺醯氨基)-3-甲基-丁酸叔丁酯的反應，得到D-2-[4′-(4-苄氧基-苯基氨基甲醯基氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-3-甲基-丁酸叔丁酯。收率37％。NMRG8701-142.1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.9(dd，J＝8.1，6.8Hz，6H)1.2(s，9H)1.9(m，1H)3.5(dd，J＝9.9，6.3Hz，1H)5.1(s，2H)7.0(d，J＝9.1Hz，2H)7.4(m，9H)7.7(d，J＝8.8Hz，2H)7.9(m，4H)8.2(d，J＝9.6Hz，1H)10.1(s，1H)。
步驟11B按照實施例3.62步驟11B中的方法，進行D-2-[4′-(4-苄氧基-苯基氨基甲醯基氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-3-甲基-丁酸叔丁酯轉化為D-2-[4′-(4-苄氧基-苯基氨基甲醯基氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-3-甲基-丁酸。收率60％。NMRG8701-151.1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.8(dd，J＝12.1，6.8Hz，6H)1.9(m，1H)3.6(dd，J＝9.3，6.1Hz.1H)5.1(s，2H)7.0(d，J＝9.1Hz，2H)7.4(m，9H)7.8(d，J＝8.8Hz，2H)7.9)(m，4H)8.1(d，J＝9.3Hz，1H)10.1(s，1H)。
實施例3.66 D-2-(4′-環戊基氨基甲醯基氧基-聯苯-4-磺醯氨基)-3-甲基-丁酸按照與實施例3.62類似的方法製備標題化合物D-2-(4′-環戊基氨基甲醯基氧基-聯苯-4-磺醯氨基)-3-甲基-丁酸。
步驟11A按照實施例3.62步驟11A中的方法，進行異氰酸環戊酯與D-2-(4′-羥基-聯苯-4-磺醯氨基)-3-甲基-丁酸叔丁酯的反應，得到D-2-(4′-環戊基氨基甲醯基氧基-聯苯-4-磺醯氨基)-3-甲基-丁酸叔丁酯。收率70％。1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.9(dd，J＝8.1，7.1Hz，6H)1.2(s，9H)1.5(m，4H)1.7(m，2H)1.8(m，2H)1.9(m，1H)3.5(dd，J＝9.6，6.3Hz，1H)3.9(m，1H)7.2(d，J＝8.6Hz，2H)7.7(d，J＝8.6Hz，2H)7.8(m，5H)8.2(d，J＝9.6Hz，1H)。
步驟11B按照實施例3.62步驟11B中的方法，進行D-2-(4′-環戊基氨基甲醯基氧基-聯苯-4-磺醯氨基)-3-甲基-丁酸叔丁酯轉化為D-2-(4′-環戊基氨基甲醯基氧基-聯苯-4-磺醯氨基)-3-甲基-丁酸。收率91％。1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.8(m，6H)1.5(m，4H)1.7(d，J＝4.5Hz，2H)1.8(m，2H)1.9(m，1H)3.6(dd，J＝9.3，6.1Hz，1H)3.9(m，1H)7.2(d，J＝8.6Hz，2H)7.7(d，J＝8.8Hz，2H)7.8(s，5H)8.1(d，J＝9.3Hz，1H)12.6(s，1H)。
實施例3.67 D-2-[4′-(4-二甲基氨基-苯基氨基甲醯基氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-3-甲基-丁酸按照與實施例3.62類似的方法製備標題化合物D-2-[4′-(4-二甲基氨基-苯基氨基甲醯基氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-3-甲基-丁酸。
步驟11A按照實施例3.62步驟11A中的方法，進行異氰酸4-(二甲基氨基)苯基酯與D-2-(4′-羥基-聯苯-4-磺醯氨基)-3-甲基-丁酸叔丁酯的反應，得到D-2-[4′-(4-二甲基氨基-苯基氨基甲醯基氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-3-甲基-丁酸叔丁酯。收率28％。1HNMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.9(dd，J＝8.1，6.8Hz，6H)1.2(s，9H)1.9(m，1H)2.8(s，6H)3.5(dd，J＝9.6，6.3Hz，1H)6.7(d，J＝9.1Hz，2H)7.3(d，J＝8.6Hz，4H)7.7(d，J＝8.6Hz，2H)7.8(m，4H)8.2(d，J＝9.9Hz，1H)9.9(s，1H)。
步驟11B按照實施例3.62步驟11B中的方法，進行D-2-[4′-(4-二甲基氨基-苯基氨基甲醯基氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-3-甲基-丁酸叔丁酯轉化為D-2-[4′-(4-二甲基氨基-苯基氨基甲醯基氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-3-甲基-丁酸。收率99％。NMRG8701-161.1H NMR(400MHz，MeOD)δppm 0.8(dd，J＝23.7，6.8Hz，6H)2.0(m，1H)3.1(s，6H)3.6(d，J＝5.6Hz，1H)7.2(d，J＝8.8Hz，2H)7.4(d，J＝9.1Hz，3H)7.6(m，6H)7.8(d，J＝8.8Hz，2H)。
實施例3.68
D-2-[4′-(4-異丙基-苯基氨基甲醯基氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-3-甲基-丁酸按照與實施例3.62類似的方法製備標題化合物D-2-[4′-(4-異丙基-苯基氨基甲醯基氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-3-甲基-丁酸。
步驟11A按照實施例3.62步驟11A中的方法，進行異氰酸4-異丙基苯基酯與D-2-(4′-羥基-聯苯-4-磺醯氨基)-3-甲基-丁酸叔丁酯的反應，得到D-2-[4′-(4-異丙基-苯基氨基甲醯基氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-3-甲基-丁酸叔丁酯。收率38％。NMRG8701-158.1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.9(dd，J＝8.3，6.8Hz，6H)1.2(m，15H)1.9(m，1H)2.8(m，1H)3.5(dd，J＝9.9，6.3Hz，1H)7.2(d，J＝8.6Hz，2H)7.4(d，J＝8.6Hz，2H)7.4(d，J＝8.6Hz，2H)7.7(d，J＝8.6Hz，2H)7.9(m，4H)8.2(d，J＝9.9Hz，1H)10.2(s，1H)。
步驟11B按照實施例3.62步驟11B中的方法，進行D-2-[4′-(4-異丙基-苯基氨基甲醯基氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-3-甲基-丁酸叔丁酯轉化為D-2-[4′-(4-異丙基-苯基氨基甲醯基氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-3-甲基-丁酸。收率34％。NMRG8701-165.1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.8(dd，J＝12.4，6.8Hz，6H)1.2(d，J＝6.8Hz，6H)2.0(m，1H)2.8(m，1H)3.6(dd，J＝9.3，6.1Hz，1H)7.2(d，J＝8.6Hz，2H)7.4(d，J＝8.8Hz，2H)7.4(d，J＝8.6Hz，2H)7.8(d，J＝8.8Hz，2H)7.9(m，4H)8.1(d，J＝9.3Hz，1H)10.2(s，1H)12.6(s，1H)。
實施例3.69
D-3-甲基-2-[4′-(2-噻吩-2-基-乙基氨基甲醯基氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-丁酸按照與實施例3.62類似的方法製備標題化合物D-3-甲基-2-[4′-(2-噻吩-2-基-乙基氨基甲醯基氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-丁酸。
步驟11A按照實施例3.62步驟11A中的方法，進行異氰酸2-(2-噻吩基)乙酯與D-2-(4′-羥基-聯苯-4-磺醯氨基)-3-甲基-丁酸叔丁酯的反應，得到D-3-甲基-2-[4′-(2-噻吩-2-基-乙基氨基甲醯基氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-丁酸叔丁酯。收率63％。NMRG8701-169.1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.9(dd，J＝8.3，7.1Hz，6H)1.2(s，9H)1.9(m，1H)3.0(t，J＝7.1Hz，2H)3.3(m，2H)3.5(dd，J＝9.6，6.3Hz，1H)7.0(m，2H)7.2(d，J＝8.8Hz，2H)7.4(dd，J＝5.1，1.3Hz，1H)7.7(d，J＝8.6Hz，2H)7.8(d，J＝2.3Hz，4H)8.0(t，J＝5.7Hz，1H)8.2(d，J＝9.9Hz，1H)。
步驟11B按照實施例3.62步驟11B中的方法，進行D-3-甲基-2-[4′-(2-噻吩-2-基-乙基氨基甲醯基氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-丁酸叔丁酯轉化為D-3-甲基-2-[4′-(2-噻吩-2-基-乙基氨基甲醯基氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-丁酸。收率43％。NMRG8701-175.1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm0.8(dd，J＝12.4，6.8Hz，6H)2.0(m，1H)3.0(t，J＝7.1Hz，2H)3.3(m，2H)3.6(dd，J＝9.2，5.9Hz，1H)6.9(d，J＝3.3Hz，1H)7.0(dd，J＝5.1，3.3Hz，1H)7.2(d，J＝8.8Hz，2H)7.4(dd，J＝5.1，1.3Hz，1H)7.7(d，J＝8.6Hz，2H)7.8(s，4H)8.0(t，J＝5.8Hz，1H)8.1(d，J＝9.3Hz，1H)。
實施例3.70 D-3-甲基-2-[4′-(4-三氟甲氧基-苯基氨基甲醯基氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-丁酸按照與實施例3.62類似的方法製備標題化合物D-3-甲基-2-[4′-(4-三氟甲氧基-苯基氨基甲醯基氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-丁酸。
步驟11A按照實施例3.62步驟11A中的方法，進行異氰酸4-甲氧基苯基酯與D-2-(4′-羥基-聯苯-4-磺醯氨基)-3-甲基-丁酸叔丁酯的反應，得到D-2-[4′-(4-甲氧基-苯基氨基甲醯基氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-3-甲基-丁酸叔丁酯。收率49％。NMRG8701-199.1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.9(dd，J＝8.3，6.8Hz，6H)1.2(s，9H)1.9(m，1H)3.5(dd，J＝9.9，6.3Hz，1H)3.7(s，3H)6.9(d，J＝9.1Hz，2H)7.4(d，J＝8.8Hz，2H)7.4(d，J＝8.8Hz，2H)7.7(d，J＝8.6Hz，2H)7.9(m，4H)8.2(d，J＝9.9Hz，1H)10.1(s，1H)。
步驟11B按照實施例3.62步驟11B中的方法，進行D-2-[4′-(4-甲氧基-苯基氨基甲醯基氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-3-甲基-丁酸叔丁酯轉化為D-3-甲基-2-[4′-(4-三氟甲氧基-苯基氨基甲醯基氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-丁酸。收率91％。NMRG9241-4.1HNMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.8(dd，J＝12.6，6.8Hz，6H)1.9(m，1H)3.6(dd，J＝9.3，5.8Hz，1H)3.7(s，3H)6.9(d，J＝9.1Hz，2H)7.4(d，J＝8.8Hz，2H)7.4(d，J＝8.8Hz，2H)7.8(d，J＝8.6Hz，2H)7.9(m，4H)8.1(d，J＝9.3Hz，1H)10.1(s，1H)12.6(s，1H)。
實施例3.71 D-3-甲基-2-[4′-(4-三氟甲氧基-苯基氨基甲醯基氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-丁酸按照與實施例3.62類似的方法製備標題化合物D-3-甲基-2-[4′-(4-三氟甲氧基-苯基氨基甲醯基氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-丁酸。
步驟11A在氬氣下，向D-2-(4′-羥基-聯苯-4-磺醯氨基)-3-甲基-丁酸叔丁酯(300mg，0.74mmol，1當量)的乙醚(10mL)溶液中加入異氰酸4-(三氟甲氧基)苯酯(123μL，0.81mmol，1.1當量)和三乙胺(124μL，0.89mmol，1.2當量)並在室溫下攪拌。反應完成後，常規處理和快速柱層析以37％收率得到D-3-甲基-2-[4′-(4-三氟甲氧基-苯基氨基甲醯基氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-丁酸叔丁酯。
1H NMR(400MHz，DMSO-D6)□ppm 0.9(dd，J＝8.1，6.8Hz，6H)1.2(s，9H)1.9(m，1H)3.5(dd，J＝9.9，6.3Hz，1 NMRG8701-200.1HNMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.9(dd，J＝8.1，6.8Hz，6H)1.2(s，9H)1.9(m，1H)3.5(dd，J＝9.9，6.3Hz，1H)7.4(m，4H)7.6(d，J＝9.3Hz，2H)7.8(d，J＝8.8Hz，2H)7.9(m，4H)8.2(d，J＝9.6Hz，1H)10.5(s，1H)。
步驟11B按照實施例3.62步驟11B中的方法，進行D-3-甲基-2-[4′-(4-三氟甲氧基-苯基氨基甲醯基氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-丁酸叔丁酯轉化為D-3-甲基-2-[4′-(4-三氟甲氧基-苯基氨基甲醯基氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-丁酸。收率76％。NMRG9241-5.1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.8(dd，J＝12.4，6.8Hz，6H)2.0(m，1H)3.6(dd，J＝9.3，5.8Hz，1H)7.4(m，4H)7.6(d，J＝9.1Hz，2H)7.8(d，J＝8.6Hz，2H)7.9(m，4H)8.1(d，J＝9.3Hz，1H)10.5(s，1H)。
實施例3.72 D-2-(4′-氨基甲醯基氧基-聯苯-4-磺醯氨基)-3-甲基-丁酸按照與實施例3.62類似的方法製備標題化合物D-2-(4′-氨基甲醯基氧基-聯苯-4-磺醯氨基)-3-甲基-丁酸。
步驟11A在氬氣下，向D-2-(4′-羥基-聯苯-4-磺醯氨基)-3-甲基-丁酸叔丁酯(500mg，1.23mmol，1當量)的CH2Cl2溶液(2mL)中加入氯磺醯異氰酸酯(107μL，1.23mmol，1當量)並在室溫下攪拌16小時。經TLC確定反應完成。在處理和快速柱層析後得到D-2-(4′-氨基甲醯基氧基-聯苯-4-磺醯氨基)-3-甲基-丁酸叔丁酯。收率45％。
NMRG9241-38.1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.9(dd，J＝8.3，6.8Hz，6H)1.1(s，9H)1.9(m，1H)3.5(dd，J＝9.9，6.3Hz，1H)7.2(d，J＝8.8Hz，2H)7.7(d，J＝8.8Hz，2H)7.8(d，J＝1.0Hz，4H)8.2(d，J＝9.6Hz，1H)。
步驟11B按照實施例3.62步驟11B中的方法，進行D-2-(4′-氨基甲醯基氧基-聯苯-4-磺醯氨基)-3-甲基-丁酸叔丁酯轉化為D-2-(4′-氨基甲醯基氧基-聯苯-4-磺醯氨基)-3-甲基-丁酸。收率85％。
NMRG9241-46.1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.8(dd，J＝12.4，6.8Hz，6H)2.0(m，1H)3.6(dd，J＝9.3，5.8Hz，1H)7.0(s，1H)7.2(m，3H)7.7(d，J＝8.8Hz，2H)7.8(s，4H)8.1(d，J＝9.3Hz，1H)。
實施例3.73 3-甲基-2-(4′-苯基氨基甲醯基氧基-聯苯-4-磺醯氨基)-丁酸叔丁酯按照與實施例3.62類似的方法製備標題化合物3-甲基-2-(4′-苯基氨基甲醯基氧基-聯苯-4-磺醯氨基)-丁酸叔丁酯。
步驟11A使2-(4′-羥基-聯苯-4-磺醯氨基)-3-甲基-丁酸叔丁酯(300mg，0.74mmol，1當量)溶於乙醚(7.5mL)中，先後加入異氰酸苯酯(0.08mL，0.74mmol，1當量)和Et3N(1mL)。攪拌反應混合物4小時。過濾收集從反應混合物中沉澱的固體，用乙醚洗滌，得到76％收率(295mg)。
1H NMR(400MHz，CHLOROFORM-D)δppm 0.87(d，J＝7.07Hz，3H)1.03(d，J＝6.82Hz，3H)1.20(s，9H)2.07(m，1H)3.67(dd，J＝9.98，4.42Hz，1H)5.13(d，J＝9.85Hz，1H)6.96(s，1H)7.14(m，1H)7.31(d，J＝8.59Hz，2H)7.36(m，2H)7.47(d，J＝8.34Hz，2H)7.58(d，J＝8.59Hz，2H)7.66(d，J＝8.34Hz，2H)7.91(m，2H)。
步驟11B按照實施例3.62步驟11B中的方法，水解3-甲基-2-(4′-苯基氨基甲醯基氧基-聯苯-4-磺醯氨基)-丁酸叔丁酯(200mg)，以88％收率得到3-甲基-2-(4′-苯基氨基甲醯基氧基-聯苯-4-磺醯氨基)-丁酸(158mg)。
1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.82(d，J＝6.82Hz，3H)0.85(d，J＝6.57Hz，3H)1.95(m，1H)3.56(dd，J＝9.22，5.94Hz，1H)3.90(s，1H)7.07(m，1H)7.35(m，4H)7.53(d，J＝7.83Hz，2H)7.80(d，J＝8.59Hz，2H)7.86(d，J＝22.23Hz，4H)8.08(d，J＝9.35Hz，1H)10.29(s，1H)。
實施例3.74 2-[4′-(苯並[b]噻吩-3-基氨基甲醯基氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-3-甲基-丁酸叔丁酯按照與實施例3.62類似的方法製備標題化合物2-[4′-(苯並[b]噻吩-3-基氨基甲醯基氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-3-甲基-丁酸叔丁酯。
步驟11A使2-(4′-羥基-聯苯-4-磺醯氨基)-3-甲基-丁酸叔丁酯(300mg，0.74mmol，1.0當量)溶於乙醚(7.5mL)中，先後加入異氰酸1-苯並噻吩-3-基酯(129.6mg，0.74mmol，1.0當量)和0.5mL Et3N。在5分鐘內從反應混合物中沉澱出固體。在室溫下繼續攪拌混合物2小時並過濾收集沉澱，用乙醚洗滌，得到43％收率(187mg)。
1H NMR(400MHz，CHLOROFORM-D)δppm 0.87(d，J＝6.82Hz，3H)1.03(d，J＝6.82Hz，3H)1.20(s，9H)2.08(m，1H)3.68(m，1H)5.15(d，J＝10.11Hz，1H)7.35(d，J＝8.34Hz，2H)7.43(m，2H)7.60(d，J＝8.59Hz，2H)7.67(d，J＝8.34Hz，3H)7.74(s，1H)7.90(t，J＝9.09Hz，3H)。
步驟11B在N2氣氛下，使2-[4′-(苯並[b]噻吩-3-基氨基甲醯基氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-3-甲基-丁酸叔丁酯(180mg，0.31mmol)溶於二氯甲烷中，在0℃下加入TFA(2mL)並攪拌4小時。蒸發溶劑並在高真空下乾燥產物，以66％收率得到2-[4′-(苯並[b]噻吩-3-基氨基甲醯基氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-3-甲基-丁酸(108mg)。
1H NMR(400MHz，MeOD)δppm 0.82(d，J＝6.82Hz，3H)0.89(d，J＝6.82Hz，3H)1.20(s，1H)3.54(d，J＝5.05Hz，1H)7.30(m，2H)7.35(m，2H)7.58(s，1H)7.66(d，J＝8.59Hz，2H)7.71(d，J＝8.59Hz，2H)7.78(d，J＝7.83Hz，1H)7.84(d，J＝8.59Hz，2H)7.92(d，J＝8.08Hz，1H)實施例3.75 N-[(4′-{[2，3-二氫-1-苯並呋喃-5-基氨基]羰基}氧基]-1，1′-聯苯-4-基)磺醯基]-D-纈氨酸按照與實施例3.62類似的方法製備標題化合物N-[(4′-{[2，3-二氫-1-苯並呋喃-5-基氨基)羰基]氧基}-1，1′-聯苯-4-基)磺醯基]-D-纈氨酸。
步驟11A和11B收率40％。1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm0.80(d，J＝6.82Hz，3H)0.85(d，J＝6.82Hz，3H)1.98(m，1H)3.17(t，J＝8.97Hz，2H)3.39(s，1H)4.50(t，J＝8.59Hz，2H)6.72(d，J＝8.34Hz，1H)7.19(d，J＝8.84Hz，1H)7.34(d，J＝8.59Hz，2H)7.40(s，1H)7.78(d，J＝8.59Hz，2H)7.85(d，J＝1.77Hz，4H)10.05(s，1H)。
實施例3.76 N-[(4′-{[(2，3-二氫-1，4-苯並二烷-6-基氨基)羰基]氧基}-1，1′-聯苯-4-基)磺醯基]-D-纈氨酸按照與實施例3.62類似的方法製備標題化合物N-[(4′-{[(2，3-二氫-1，4-苯並二烷-6-基氨基)羰基]氧基}-1，1′-聯苯-4-基)磺醯基]-D-纈氨酸。
步驟11A收率62％。1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.80(d，J＝6.82Hz，3H)0.85(d，J＝6.82Hz，3H)1.98(m，1H)3.42(s，1H)4.21(m，4H)6.81(d，J＝8.84Hz，1H)6.94(d，J＝10.86Hz，1H)7.09(s，1H)7.34(d，J＝8.84Hz，2H)7.78(d，J＝8.84Hz，3H)7.85(d，J＝1.77Hz，4H)10.11(s，1H)。
實施例3.77 N-[(4′-{[(3，4-二氫-2H-1，5-苯並二氧雜環庚烷-7-基氨基)羰基]氧基}-1，1′-聯苯-4-基)磺醯基]-D-纈氨酸按照與實施例3.62類似的方法製備標題化合物N-[(4′-{[(3，4-二氫-2H-1，5-苯並二氧雜環庚烷-7-基氨基)羰基]氧基}-1，1′-聯苯-4-基)磺醯基]-D-纈氨酸。
步驟11A和11B收率55％。1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.80(d，J＝6.82Hz，3H)0.85(d，J＝6.82Hz，3H)1.97(m，1H)2.08(m，2H)3.45(s，1H)4.08(m，4H)6.94(d，J＝8.59Hz，1H)7.06(d，J＝2.53Hz，1H)7.18(d，J＝2.27Hz，1H)7.35(d，J＝8.59Hz，2H)7.79(d，J＝8.59Hz，2H)7.85(d，J＝3.79Hz，4H)7.88(s，1H)10.21(s，1H)。
實施例3.78 N-[(4′-{[(5-甲基-3-苯基異唑-4-基)氨基)羰基]氧基}-1，1′-聯苯-4-基)磺醯基]-D-纈氨酸按照與實施例3.62類似的方法製備標題化合物N-[(4′-{[(5-甲基-3-苯基異唑-4-基)氨基)羰基]氧基}-1，1′-聯苯-4-基)磺醯基]-D-纈氨酸。
步驟11B收率75％。1H NMR(400MHz，ACETONITRILE-D3)δppm 0.63(d，J＝6.82Hz，3H)0.74(d，J＝6.57Hz，3H)1.83-1.88(m，1H)2.20(s，1H)2.34(m，3H)3.81(s，1H)6.56(s，1H)6.66(s，1H)7.12(d，J＝7.83Hz，1H)7.45(d，J＝4.80Hz，4H)7.59(m，4H)7.68(d，J＝3.54Hz，2H)7.80(d，J＝8.08Hz，2H)。
實施例3.79 N-[(4′-{[(甲基氨基)羰基]氧基}-1，1′-聯苯-4-基)磺醯基]-D-纈氨酸按照與實施例3.62類似的方法製備標題化合物N-[(4′-{[(甲基氨基)羰基]氧基}-1，1′-聯苯-4-基)磺醯基]-D-纈氨酸。
步驟11B收率90％。
1H NMR(400MHz，MeOD)δppm 0.80(d，J＝8.34Hz，3H)0.87(d，J＝6.82Hz，3H)1.91-2.02(m，1H)2.71(s，3H)3.52(d，J＝5.05Hz，1H)7.11(d，J＝8.84Hz，2H)7.58(d，J＝8.84Hz，2H)7.66(d，J＝8.59Hz，2H)7.81(d，J＝8.59Hz，2H)。
實施例3.80 N-[(4′-{[(1-苯並呋喃-2-基氨基)羰基]氧基}-1，1′-聯苯-4-基)磺醯基]-D-纈氨酸步驟12A將溶解在二氯甲烷(10mL)和乙醚(20mL)中的2-(4′-羥基-聯苯-4-磺醯氨基)-3-甲基-丁酸(314mg，0.9mmol)加入異氰酸苯並呋喃酯(143mg，0.9mmol，1當量)和三乙胺(363mg，3.6mmol，4當量)。在室溫下攪拌混合物過夜。過濾收集從反應混合物中沉澱的固體，隨後經柱層析(矽膠，5％MeOH/CH2Cl2)。以16％收率得到76mg白色固體。
1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.74-1.00(m，6H)1.90-2.07(m，1H)3.22-3.48(m，1H)6.86(d，J＝8.59Hz，2H)7.10-7.28(m，2H)7.33-7.62(m，4H)7.69-7.83(m，4H)7.86(s，1H)。
基於流程13製備實施例81和82。
實施例81 D-3-甲基-苯並呋喃-2-甲酸4′-(1-羧基-2-甲基-丙基氨基磺醯基)-聯苯-4-基酯步驟13A在氮氣氛下，使D-2-(4′-羥基-聯苯-4-磺醯氨基)-3-甲基-丁酸叔丁酯(305mg，0.75mmol，1當量)、3-甲基-苯並呋喃-2-甲酸(131mg，0.74mmol，1當量)、4-二甲基氨基吡啶(DMAP，95mg，0.77mmol，1當量)和1，3-二環己基碳二亞胺(DCC，240mg，1.17mmol，1.6當量)溶解在5mL二氯甲烷中的混合物在室溫下反應3.5小時。常規處理和柱層析(10％EtOAc在己烷中)，以71％收率得到D-3-甲基-苯並呋喃-2-甲酸4′-(1-叔丁氧基羰基-2-甲基-丙基氨基磺醯基)-聯苯-4-基酯(300mg)。NMRG8475-101。1H NMR(400MHz，CHLOROFORM-D)δppm 0.9(d，J＝7.1Hz，3H)1.0(d，J＝6.8Hz，3H)1.2(s，9H)2.1(m，1H)2.7(s，3H)3.7(dd，J＝10.0，4.4Hz，1H)5.1(d，J＝9.9Hz，1H)7.4(m，3H)7.5(m，1H)7.6(t，J＝8.0Hz，3H)7.7(m，3H)7.9(d，J＝8.3Hz，2H)。
步驟13B按照實施例3.62步驟11B中的方法，以定量收率除去叔丁酯。1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.8(dd，J＝12.1，6.8Hz，6H)2.0(m，1H)2.7(s，3H)3.6(dd，J＝9.2，5.9Hz，1H)7.4(t，J＝7.6Hz，1H)7.5(d，J＝8.8Hz，2H)7.6(t，J＝8.2Hz，1H)7.8(d，J＝8.3Hz，1H)7.9(m，7H)8.1(d，J＝9.3Hz，1H)。
實施例3.82 苯並呋喃-2-甲酸4′-(1-叔丁氧基羰基-2-甲基-丙基氨基磺醯基)-聯苯-4-基酯按照與實施例3.81類似的方法製備標題化合物苯並呋喃-2-甲酸4′-(1-叔丁氧基羰基-2-甲基-丙基氨基磺醯基)-聯苯-4-基酯。
步驟13A向溶解在乾燥CH2Cl2(50mL)中的2-苯並呋喃甲酸(400.5mg，2.47mmol，1當量)中加入DCC(1.019g，4.94mmol，2當量)並在N2下攪拌15分鐘。然後向反應混合物中加入2-(4′-羥基-聯苯-4-磺醯氨基)-3-甲基-丁酸叔丁酯(1.0g，2.47mmol，1當量)，隨後加入DMAP(50mg，0.41mmol)。在室溫下攪拌混合物過夜。然後用CH2Cl2稀釋反應混合物，用H2O和鹽水洗滌。經MgSO4乾燥有機層並除去溶劑，得到粗品產物。使殘餘物溶於EtOAc中並經柱層析(矽膠，20％EtOAc/正己烷)純化，以30.5％收率得到G9058-53-1(325mg)。
1H NMR(400MHz，CHLOROFORM-D)δppm 0.87(d，J＝6.82Hz，3H)1.03(d，J＝6.82Hz，3H)1.21(s，9H)2.07(m，1H)3.68(dd，J＝9.85，4.55Hz，1H)5.15(d，J＝9.85Hz，1H)7.37(m，3H)7.53(t，J＝7.83Hz，1H)7.66(m，5H)7.77(m，2H)7.92(d，J＝8.34Hz，2H)。
步驟13B使苯並呋喃-2-甲酸4′-(1-叔丁氧基羰基-2-甲基-丙基氨基磺醯基)-聯苯-4-基酯(325mg)溶於二氯甲烷(15mL)中並加入TFA。在室溫下攪拌溶液7小時。旋轉蒸發除去溶劑並經柱層析(5-20％MeOH/EtOAc)純化粗品產物，以76％收率得到苯並呋喃-2-甲酸4′-(1-羧基-2-甲基-丙基氨基磺醯基)-聯苯-4-基酯(341mg)。
1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.80(d，J＝6.57Hz，3H)0.87(d，J＝6.82Hz，3H)2.04(m，1H)3.24(m，1H)7.43(t，J＝7.58Hz，1H)7.49(d，J＝8.84Hz，2H)7.60(t，J＝7.96Hz，1H)7.70(d，J＝9.85Hz，1H)7.85(m，7H)8.08(s，1H)。
基於流程14製備實施例3.83、3.84、3.85、3.86、3.87、3.88、3.89。
實施例3.83 3-甲基-2-[4′-(5-三氟甲基-吡啶-2-基氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-丁酸叔丁酯步驟14A使2-(4′-羥基-聯苯-4-磺醯氨基)-3-甲基-丁酸叔丁酯(100mg，0.25mmol，1.0當量)、2-氯-5-三氟甲基吡啶(45.4mg，0.25mmol，1當量)和K2CO3(86.4mg，0.63mmol，2.5當量)在DMF(8mL)中混合，加熱至110℃反應4.5小時。經TLC確定反應完成。然後使反應混合物冷卻至室溫，用EtOAc稀釋，用鹽水洗滌並經MgSO4乾燥。除去溶劑後，經柱層析(矽膠，20％EtOAc/正己烷)純化粗品產物，以74％收率得到G9058-109-1(100mg)。
1H NMR(400MHz，CHLOROFORM-D)δppm 0.80(d，J＝6.82Hz，3H)0.96(d，J＝6.82Hz，3H)1.14(s，9H)2.01(m，1H)3.61(m，1H)5.07(d，J＝9.85Hz，1H)7.03(d，J＝8.59Hz，1H)7.19(s，1H)7.21(s，1H)7.55(d，J＝8.59Hz，2H)7.62(d，J＝8.59Hz，2H)7.85(d，J＝2.02Hz，2H)7.88(d，J＝6.06Hz，1H)8.40(s，1H)。
步驟14B使3-甲基-2-[4′-(5-三氟甲基-吡啶-2-基氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-丁酸叔丁酯(97mg)溶於CH2Cl2(6mL)中並加入TFA(2mL)。經TLC確定在6小時內反應完成。除去溶劑後，經柱層析(10％MeOH/CH2Cl2)純化殘餘物，以66％收率得到3-甲基-2-[4′-(5-三氟甲基-吡啶-2-基氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-丁酸(54.5mg)。
1H NMR(400MHz，MeOD)δppm 0.81(d，J＝6.82Hz，3H)0.88(d，J＝6.82Hz，3H)1.97(m，1H)3.55(d，J＝5.31Hz，1H)7.09(d，J＝8.59Hz，1H)7.19(d，J＝8.59Hz，2H)7.68(dd，J＝14.65，8.59Hz，4H)7.83(d，J＝8.34Hz，2H)8.02(d，J＝11.37Hz，1H)8.35(d，J＝2.53Hz，1H)。
實施例3.84 3-甲基-2-[4′-(喹啉-2-基氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-丁酸叔丁酯按照與實施例3.83類似的方法製備標題化合物3-甲基-2-[4′-(喹啉-2-基氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-丁酸叔丁酯。
步驟14A[9058-120-1]使2-(4′-羥基-聯苯-4-磺醯氨基)-3-甲基-丁酸叔丁酯(200mg，0.49mmol，1當量)、2-氯喹啉(242mg，1.48mmol，3當量)和Cs2CO3(402mg，1.235mmol，2.5當量)在DMF(8mL)中混合併在100℃下攪拌7小時。使反應混合物冷卻至室溫，然後置於冰浴中並加入水。過濾收集從混合物中沉澱的固體，用水洗滌。乾燥後，以66％收率得到174mg黃色固體。
1H NMR(400MHz，CHLOROFORM-D)δppm 0.88(d，J＝6.82Hz，3H)1.03(d，J＝6.82Hz，3H)1.22(s，9H)2.07(m，1H)3.68(dd，J＝9.85，4.55Hz，1H)5.15(d，J＝9.85Hz，1H)7.15(d，J＝8.84Hz，1H)7.38(d，J＝8.84Hz，2H)7.45(m，1H)7.63(m，3H)7.71(d，J＝8.84Hz，2H)7.81(t，J＝8.72Hz，2H)7.91(d，J＝8.59Hz，2H)8.17(d，J＝8.34Hz，1H)。
步驟14B[9058-121-2]使3-甲基-2-[4′-(喹啉-2-基氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-丁酸叔丁酯(164mg)溶於二氯乙烷(12mL)中，在室溫下經4小時期間用TFA(4mL)水解。除去溶劑並經柱層析(洗脫劑10％MeOH/DCE)純化，以58％收率得到3-甲基-2-[4′-(喹啉-2-基氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-丁酸(84.8mg)。
1H NMR(400MHz，MeOD)δppm 0.82(d，J＝6.82Hz，3H)0.88(d，J＝6.82Hz，3H)1.97(m，1H)3.60(d，J＝5.56Hz，1H)7.10(d，J＝8.84Hz，1H)7.25(d，J＝8.84Hz，2H)7.39(t，J＝6.82Hz，1H)7.56(t，J＝7.71Hz，1H)7.63(d，J＝0.51Hz，1H)7.65(d，J＝1.26Hz，1H)7.68(m，1H)7.69(d，J＝2.27Hz，1H)7.72(m，1H)7.74(m，1H)7.79(dd，J＝7.83，1.26Hz，1H)7.82(m，1H)7.85(m，1H)8.23(d，J＝8.84Hz，1H)。
實施例3.85 N-({4′-[(5-硝基吡啶-2-基)氧基]-1，1′-聯苯-4-基}磺醯基)-D-纈氨酸按照與實施例3.83類似的方法製備標題化合物N-({4′-[(5-硝基吡啶-2-基)氧基]-1，1′-聯苯-4-基}磺醯基)-D-纈氨酸。
步驟14A和14B收率60％。
1H NMR(400MHz，MeOD)δppm 0.82(d，J＝6.82Hz，3H)0.88(d，J＝6.82Hz，3H)1.96(m，1H)3.58(d，J＝5.31Hz，1H)7.11(d，J＝9.09Hz，1H)7.22(d，J＝8.84Hz，2H)7.70(dd，J＝11.87，8.84Hz，4H)7.83(d，J＝8.59Hz，2H)8.52(dd，J＝9.09，2.78Hz，1H)8.91(d，J＝3.28Hz，1H)。
實施例3.86 N-({4′-[(2，6-二甲氧基嘧啶-4-基)氧基]-1，1′-聯苯-4-基}磺醯基)-D-纈氨酸按照與實施例3.83類似的方法製備標題化合物N-({4′-[(2，6-二甲氧基嘧啶-4-基)氧基]-1，1′-聯苯-4-基}磺醯基)-D-纈氨酸。
步驟14A和14B收率82％。
1H NMR(400MHz，MeOD)δppm 0.81(d，J＝6.82Hz，3H)0.88(d，J＝6.82Hz，3H)1.97(m，1H)3.56(d，J＝5.31Hz，1H)3.78(s，3H)3.85(s，3H)5.73(s，1H)7.18(d，J＝8.84Hz，2H)7.66(d，J＝8.84Hz，3H)7.70(d，J＝8.84Hz，3H)7.81(s，1H)7.83(s，1H)。
實施例3.87 N-({4′-[(4-氯嘧啶-2-基)氧基]-1，1′-聯苯-4-基}磺醯基)-D-纈氨酸按照與實施例3.83類似的方法製備標題化合物N-({4′-[(4-氯嘧啶-2-基)氧基]-1，1′-聯苯-4-基}磺醯基)-D-纈氨酸。
步驟14A和14B收率59％。
1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.80(d，J＝6.82Hz，3H)0.85(d，J＝6.82Hz，3H)1.97(m，1H)3.47(s，1H)7.24(d，J＝5.81Hz，1H)7.42(d，J＝8.84Hz，2H)7.87(d，7H)8.66(d，J＝5.56Hz，1H)。
實施例3.88 N-{[4′-(吡啶-2-基氧基)-1，1′-聯苯-4-基]磺醯基}-D-纈氨酸按照與實施例3.83類似的方法製備標題化合物N-{[4′-(吡啶-2-基氧基)-1，1′-聯苯-4-基]磺醯基}-D-纈氨酸。
步驟14A和14B收率83％。
1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.82(d，J＝6.82Hz，3H)0.85(d，J＝6.82Hz，3H)1.85-2.02(m，1H)3.57(dd，J＝10.48，4.67Hz，1H)7.10(d，J＝9.85Hz，1H)7.17(dd，J＝7.20，4.93Hz，1H)7.26(d，J＝8.84Hz，2H)7.79(d，J＝8.84Hz，2H)7.82-7.95(m，4H)8.09(d，J＝9.35Hz，1H)8.13-8.28(m，1H)。
實施例3.89 N-{[4′-(1，3-苯並唑-2-基氧基)-1，1′-聯苯-4-基]磺醯基}-D-纈氨酸按照與實施例3.83類似的方法製備標題化合物N-{[4′-(1，3-苯並唑-2-基氧基)-1，1′-聯苯-4-基]磺醯基}-D-纈氨酸。
步驟14A和14B收率85％。
1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.82(d，J＝6.82Hz，3H)0.85(d，J＝6.82Hz，3H)1.86-2.05(m，1H)3.58(dd，J＝9.22，5.94Hz，1H)7.32(d，J＝9.35Hz，1H)7.53(d，J＝7.33Hz，1H)7.61-7.73(m，3H)7.81-7.99(m，6H)8.10(d，J＝9.35Hz，1H)。
基於流程15製備實施例3.90。
實施例3.90 N-({4′-[2-(1-苯並呋喃-2-基)-2-氧代乙基]-1，1′-聯苯-4-基}磺醯基)-D-纈氨酸步驟15A在氮氣氛下，使(4-溴苯基)-乙酸(5.0g，23.2mmol，1當量)溶於亞硫醯氯(50mL)中並加熱至回流反應1小時。使溶液冷卻至室溫並蒸發溶劑。使因此得到的殘餘物溶於無水二氯甲烷中，用於步驟15B。
步驟15B使苯並呋喃-2-基-三甲基-甲矽烷(3.4g，17.86mmol)溶於二氯甲烷(40mL)中並冷卻至-78℃。在該溫度下加入4-溴苯基-乙醯氯(19.65mmol，1.1當量)。劇烈攪拌下，滴加TiCl4(23mL，1M，23.2mmol，1.3當量)在CH2Cl2中的溶液並繼續攪拌20分鐘。然後用H2O(100mL)猝滅反應物，除去冷卻浴並使混合物升至室溫。然後用H2O(100mL)稀釋並用CH2Cl2(3X)提取。合併有機層，用鹽水洗滌，經MgSO4乾燥，蒸發溶劑。使因此得到的粗品產物經柱純化(矽膠，10％EtOAc/己烷)。以17％收率得到980mg 1-苯並呋喃-2-基-2-(4-溴-苯基)-乙酮。
1H NMR(400MHz，CHLOROFORM-D)δppm 4.34(s，2H)7.34(d，J＝8.59Hz，2H)7.44(d，1H)7.58(d，J＝8.59Hz，2H)7.62(d，J＝5.81Hz，1H)7.67(s，1H)7.71(m，1H)7.84(t，J＝6.19Hz，1H)。
步驟15C將3-甲基-2-(4-三丁基錫烷基-苯磺醯氨基)-丁酸叔丁酯(347.5mg，0.58mmol，1.0當量)、1-苯並呋喃-2-基-2-(4-溴-苯基)-乙酮(200mg，0.64mmol，1.1當量)和Pd(PPh3)4(66mg，0.06mmol，10％)在無水甲苯(10mL)中的溶液加熱至回流反應7小時。經TLC確定反應完成。旋轉蒸發除去溶劑並經柱層析(矽膠，20％EtOAc/正己烷)純化粗品產物，以20％收率得到2-[4′-(2-苯並呋喃-2-基-2-氧代-乙基)-聯苯-4-磺醯氨基]-3-甲基-丁酸叔丁酯(62mg)。
1H NMR(400MHz，CHLOROFORM-D)δppm 0.79(d，J＝6.82Hz，3H)0.95(d，J＝6.82Hz，3H)1.11(s，9H)3.58(dd，J＝9.85，4.55Hz，1H)4.26(s，2H)5.05(d，J＝9.85Hz，1H)7.26(t，J＝7.07Hz，1H)7.43(m，5H)7.56(m，4H)7.65(d，J＝7.83Hz，1H)7.81(d，J＝8.59Hz，2H)。
步驟15D使2-[4′-(2-苯並呋喃-2-基-2-氧代-乙基)-聯苯-4-磺醯氨基]-3-甲基-丁酸叔丁酯(62mg)溶於無水CH2Cl2(6mL)中並加入TFA(2mL)。在室溫下攪拌反應混合物3小時。除去溶劑，經柱層析(10％MeOH/CH2Cl2)純化粗品產物，以19％收率得到2-[4′-(2-苯並呋喃-2-基-2-氧代-乙基)-聯苯-4-磺醯氨基]-3-甲基-丁酸(10.7mg)。
1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.79(d，J＝6.82Hz，3H)0.84(m，J＝6.82Hz，3H)1.97(m，1H)3.33(s，1H)4.42(s，2H)7.39(t，J＝7.07Hz，1H)7.47(d，J＝8.34Hz，2H)7.57(t，J＝8.59Hz，1H)7.73(m，3H)7.83(d，4H)7.88(d，J＝8.84Hz，1H)8.13(s，1H)10.08(s，1H)。
基於流程16製備實施例3.91。
實施例3.91 D-2-[4′-(苯並呋喃-2-磺醯基甲基)-聯苯-4-磺醯氨基]-3-甲基-丁酸步驟16A按照文獻方法(M.A.Abramov，W.Dehean，B.D′hooge，M.L.Petrov，S.Smeets，S.Toppet和M.Voets Tetrahedron，2000，56，3933-3940)製備起始原料2-[1，2，3]噻二唑-4-基-苯酚。在氮氣氛下，使2-[1，2，3]噻二唑-4-基-苯酚(241mg，1.35mmol)、2-(4-溴甲基-苯基)-4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧雜硼雜環戊烷(406mg，1.37mmol，1當量)和K2CO3(396mg，2.87mmol，1.9當量)在8mL的CH3CN中混合併加熱至90℃。經TLC確定反應完成後，使混合物冷卻至室溫並蒸發溶劑。使生成的粗品物質經柱層析(20％EtOAc/己烷)，以40％收率得到2-[4-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧雜硼雜環戊烷-2-基)-苄基硫基]-苯並呋喃(198mg)。NMRG8475-125。
1H NMR(400MHz，CHLOROFORM-D)δppm 1.3(s，12H)4.1(s，2H)6.6(d，J＝1.0Hz，1H)7.2(m，4H)7.4(d，J＝7.8Hz，2H)7.7(d，J＝8.1Hz，2H)。
步驟16B按照實施例2A步驟5B中的方法進行D-2-(4-溴-苯磺醯氨基)-3-甲基-丁酸甲酯與2-[4-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧雜硼雜環戊烷-2-基)-苄基硫基]-苯並呋喃的Suzuki偶合，以54％收率得到D-2-[4′-(苯並呋喃-2-基硫基甲基)-聯苯-4-磺醯氨基]-3-甲基-丁酸甲酯。MRG8475-165.1H NMR(400MHz，BENZENE-D6)δppm 0.7(d，J＝6.8Hz，3H)0.9(d，J＝6.8Hz，3H)1.9(m，1H)3.0(s，3H)4.0(m，3H)5.0(d，J＝10.1Hz，1H)6.6(d，J＝1.0Hz，1H)7.1(m，4H)7.3(m，6H)7.3(s，1H)7.4(m，1H)。
步驟16C將D-2-[4′-(苯並呋喃-2-基硫基甲基)-聯苯-4-磺醯氨基]-3-甲基-丁酸甲酯(75mg，0.15mmol，1當量)的4mL THF溶液置於冰浴中。滴加在3mL THF中的125mg MCPBA(77％，0.55mmol，3.7當量)。加入完成後，除去冰浴，使反應物升至室溫並攪拌12小時。TLC表明反應完成。常規處理和柱層析(20％EtOAc/己烷)以70％收率得到D-2-[4′-(苯並呋喃-2-基磺醯基甲基)-聯苯-4-磺醯氨基]-3-甲基-丁酸甲酯(56mg)。
1H NMR(400MHz，CHLOROFORM-D)□ppm 0.9(dd，J＝33.3，6.8Hz，6H)2.0(m，1H)3.4(s，3H)3.8(dd，J＝10.1，5.3Hz，1H)4.6(s，2H)5.1(d，J＝10.1Hz，1H)7.4(m，4H)7.5(m，3H)7.6(m，1H)7.7(m，3H)7.9(d，J＝8.8Hz，2H)。
步驟16D按照實施例1A步驟1D中的方法以定量收率進行D-2-[4′-(苯並呋喃-2-基磺醯基甲基)-聯苯-4-磺醯氨基]-3-甲基-丁酸甲酯的水解。1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.8(dd，J＝12.1，6.8Hz，6H)1.9(m，1H)3.5(dd，J＝9.3，6.1Hz，1H)5.0(s，2H)7.4(d，J＝8.3Hz，2H)7.4(m，1H)7.6(m，1H)7.7(d，J＝1.0Hz，1H)7.7(d，J＝8.3Hz，2H)7.8(m，6H)8.1(d，J＝9.1Hz，1H)。
按照流程6.63製備以下化合物(3.92和3.93)。
實施例3.92 3-甲基-2-[4′-(萘-2-基甲氧基)-3′-甲氧基-聯苯-4-磺醯氨基]-丁酸。
1H NMR(400MHz，DMSO)δ0.806(d，3H)，0.837(d，3H)，1.94(m，1H)，3.53(t，1H)，3.90(s，3H)，5.33(s，2H)，7.20(d，1H)，7.27(m，1H)，7.34(s，1H)，7.54(d，2H)，7.61(d，1H)，7.89(m，8H)；ES+m/z 518.2(M-H)；HRMS(C29H29NO6S)理論值；520.17884；實測值；520.17839(M+H)。
實施例3.93 2-[4′-(3，5-二甲氧基-苄氧基)-3′-甲氧基-聯苯-4-磺醯氨基]-3-甲基-丁酸。
1H NMR(400MHz，DMSO)δ0.808(d，3H)，0.838(d，3H)，1.94(m，1H)，3.74(s，6H)，3.89(s，3H)，5.09(s，2H)，6.45(t，1H)，6.62(d，2H)，7.11(d，1H)，7.25(d，1H)，7.32(d，1H)，7.79(d，2H)，7.85(d，2H)，8.02(d，1H)；ES+m/z 528.2(M-H)；HRMS(C27H31NO8S)理論值；530.18432；實測值；530.18367(M+H)。
採用在流程17中描述的方法製備以下化合物(3.94-3.111)。
實施例3.94 2-(4′-羥基-3-三氟甲氧基-聯苯-4-磺醯氨基)-3-甲基-丁酸。
1H NMR(400MHz，DMSO)δ0.825(d，3H)，0.875(d，3H)，2.04(m，1H)，3.70(m，1H)，6.89(d，2H)，7.59(m，2H)，7.75(dd，1H)，7.94(d，1H)，8.16(d，1H)；ES+m/z 432.1(M-H)；HRMS(C18H18F3NO6S)理論值；451.11451；實測值；451.11461(M+NH4)。
實施例3.95 2-(4′-羥基-3-三氟甲基-聯苯-4-磺醯氨基)-3-甲基-丁酸。
1H NMR(400MHz，DMSO)δ0.850(m，6H)，2.02(m，1H)，3.60(m，1H)，6.90(d，2H)，7.67(d，2H)，8.10(m，3H)；ES+m/z416.0(M-H)；HRMS(C18H18F3NO5S)理論值；435.11960；實測值；435.11966(M+NH4)。
實施例3.96 2-(4′-羥基-3-甲基-聯苯-4-磺醯氨基)-3-甲基-丁酸。
1H NMR(400MHz，DMSO)δ0.810(t，6H)，1.93(m，1H)，2.64(s，3H)，3.39(m，1H)，6.87(m，2H)，7.56(m，3H)，7.81(d，1H)，8.00(d，1H)；ES+m/z 362.1(M-H)；HRMS(C18H21NO5S)理論值；381.14786；實測值；381.14808(M+NH4)。
實施例3.97 2-(3-氟-4′-羥基-聯苯-4-磺醯氨基)-3-甲基-丁酸。
1H NMR(400MHz，DMSO)δ0.850(m，6H)，2.02(m，1H) 3.63(m，1H)，6.87(d，2H)，7.61(m，3H)，7.76(t，1H)，8.22(d，1H)；ES+m/z 366.0(M-H)；HRMS(C17H18FNO5S)理論值；385.12279；實測值；385.12276(M+NH4)。
實施例3.98 2-(2，5-二氟-4′-羥基-聯苯-4-磺醯氨基)-3-甲基-丁酸。
1H NMR(400MHz，DMSO)δ0.880(m，6H)，2.04(m，1H)，3.69(m，1H)，6.89(d，1H)，7.45(m，2H)，7.58(m，2H)，8.45(d，1H)；ES+m/z 384.1(M-H)；HRMS(C17H17F2NO5S)理論值；403.1137；實測值；403.11328(M+NH4)。
實施例3.99 3-甲基-2-[4′-(萘-2-基甲氧基)-3-三氟甲基-聯苯-4-磺醯氨基]-丁酸。
1H NMR(400MHz，DMSO)δ0.900(d，3H)，0.960(d，3H)，2.06(m，1H)，3.70(d，1H)，4.19(s，2H)，6.95(d，1H)，7.43(m，6H)，7.69(s，1H)，7.75(m，3H)，7.88(m，1H)，7.97(s，1H)，8.15(d，1H)；ES+m/z 556.1(M-H)；HRMS(C29H26F3NO5S)理論值；558.15566；實測值；558.15484(M+H)。
實施例3.100
2-[3-氟-4′-(萘-2-基甲氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-3-甲基-丁酸。
1H NMR(400MHz，MeOH)δ0.920(d，3H)，0.980(d，3H)，2.10(m，1H)，3.76(d，1H)，4.19(s，2H)，6.94(d，1H)，7.43(m，7H)，7.70(s，1H)，7.78(m，4H)；ES+m/z 506.1(M-H)；HRMS(C28H26FNO5S)理論值；508.15885；實測值；508.15818(M+H)。
實施例3.101 2-[2，5-二氟-4′-(萘-2-基甲氧基)-聯苯-4-磺醯氨基]-3-甲基-丁酸。
1H NMR(400MHz，MeOH)δ0.910(d，3H)，0.980(d，3H)，2.09(m，1H)，3.78(d，1H)，4.16(s，2H)，6.92(d，1H)，7.37(m，6H)，7.56(m，1H)，7.67(s，1H)，7.75(m，4H)；ES+m/z 524.1(M-H)；HRMS(C28H25F2NO5S)理論值；526.14943；實測值；526.14881(M+H)。
實施例3.102 ES+m/z 614.1(M-H)-HRMS616.16053(M+H)+；理論值616.16114。
H NMR(400MHz，DMSO)δ0.83(d，3H，J＝6.8Hz)，0.88(d，3H，J＝6.8Hz)，2.06(m，1H)，3.74(dd，1H，J＝5.6，10Hz)，5.18(s，2H)，5.35(d，1H，J＝10Hz)，6.92(d，2H，J＝8Hz)，7.00(d，2H，J＝8Hz)，7.07(d，2H，J＝8Hz)，7.34(d，2H，J＝8Hz)，7.61(d，2H，J＝8Hz)，7.69(s，1H)，7.79(d，2H，J＝8Hz)，7.88(m，1H)，8.02(d，1H，J＝8Hz)，8.24(m，1H)，12.70(s，1H)。
實施例3.103
ES+m/z 598.1(M-H)-HRMS600.16554(M+H)+；理論值600.16622。
H NMR(400MHz，DMSO)δ0.85(d，3H，J＝6.8Hz)，0.86(d，3H，J＝6.8Hz)，2.05(m，實施例3.104 ES+m/z 564.1(M-H)-HRMS566.13860(M+H)+；理論值566.13978。
H NMR(400MHz，DMSO)δ0.84(d，3H，J＝6.8Hz)，0.86(d，3H，J＝6.8Hz)，2.02(m，1H)，3.57(dd，1H，J＝6，9.2Hz)，5.17(s，2H)，6.92(d，2H，J＝8Hz)，6.99(d，2H，J＝8Hz)，7.07(m，3H)，7.33(m，2H)，7.59(d，2H，J＝8Hz)，7.83(m，5H)，7.95(d，1H，J＝1.6Hz)，8.03(d，1H，J＝8Hz)，8.21(m，1H)，12.65(s，1H)。
實施例3.105 ES+m/z 590.1(M-H)-HRMS592.16098(M+H)+；理論值592.16114。
1H NMR(400MHz，DMSO)δ0.83(d，3H，J＝6.8Hz)，0.88(d，3H，J＝6.8Hz)，2.05(m，3H)，2.53(t，2H，J＝6Hz)，2.91(t，2H，J＝6Hz)，3.74(dd，1H，J＝5.6，10Hz)，5.28(s，2H)，6.98(m，2H)，7.60(d，2H，J＝8Hz)，7.69(s，1H)，7.85(m，4H)，8.02(d，1H，J＝8Hz)，8.25(d，1H，J＝8Hz)，12.70(s，1H)。
實施例3.106 ES+m/z 574.1(M-H)-HRMS576.16522(M+H)+；理論值576.16622。
1H NMR(400MHz，DMSO)δ0.85(d，3H，J＝6.8Hz)，0.86(d，3H，J＝6.8Hz)，2.04(m，3H)，2.53(t，2H，J＝6Hz)，2.91(t，2H，J＝6Hz)，3.63(dd，1H，J＝6，10Hz)，5.29(s，2H)，6.98(m，2H)，7.61(d，2H，J＝8Hz)，7.85(m，3H)，8.20(m，4H)，12.70(s，1H)。
實施例3.107 ES+m/z 524.1(M-H)-HRMS526.16859(M+H)+；理論值526.16942。
1H NMR(400MHz，DMSO)δ0.84(d，3H，J＝6.8Hz)，0.87(d，3H，J＝6.8Hz)，2.02(m，3H)，2.53(t，2H，J＝6Hz)，2.91(t，2H，J＝6Hz)，3.66(dd，1H，J＝6，9.2Hz)，5.27(s，2H)，6.98(m，2H)，7.58(d，2H，J＝8Hz)，7.70(m，1H)，7.83(m，5H)，8.30(d，1H，J＝10Hz)，12.65(s，1H)。
實施例3.108 ES+m/z 629.2(M-H)-HRMS631.17159(M+H)+；理論值631.17204。
1H NMR(400MHz，DMSO)δ0.83(d，3H，J＝6.8Hz)，0.88(d，3H，J＝6.8Hz)，2.07(m，1H)，2.30(s，3H)，3.74(dd，1H，J＝5.6，9.6Hz)，5.20(s，2H)，6.68(d，1H，J＝8Hz)，6.95(d，1H，J＝8Hz)，7.06(m，4H)，7.62(d，2H，J＝8Hz)，7.69(m，2H)，7.80(d，2H，J＝8Hz)，7.87(dd，1H，J＝1.6，8Hz)，8.03(d，1H，J＝8Hz)，8.25(d，2H，J＝9.2Hz)，12.70(s，1H).
實施例3.109 ES+m/z 613.2(M-H)-HRMS615.17639(M+H)+；理論值615.17712。
1H NMR(400MHz，DMSO)δ0.85(d，3H，J＝6.8Hz)，0.87(d，3H，J＝6.8Hz)，2.05(m，1H)，2.30(s，3H)，3.63(dd，1H，J＝6，9.6Hz)，5.20(s，2H)，6.68(d，1H，J＝8Hz)，6.95(d，1H，J＝8Hz)，7.06(m，4H)，7.63(d，2H，J＝8Hz)，7.69(t，1H，J＝8Hz)，7.87(d，2H，J＝8Hz)，8.21(m，4H)，12.70(s，1H).
實施例3.110
ES+m/z 563.2(M-H)-HRMS565.18038(M+H)+；理論值565.18032。
1H NMR(400MHz，DMSO)δ0.84(d，3H，J＝6.8Hz)，0.87(d，3H，J＝6.8Hz)，2.04(m，1H)，2.30(s，3H)，3.66(dd，1H，J＝6，9.6Hz)，5.19(s，2H)，6.68(d，1H，J＝8Hz)，6.95(d，1H，J＝8Hz)，7.06(s，4H)，7.60(d，2H，J＝8Hz)，7.70(m，2H)，7.83(m，4H)，8.31(d，1H，J＝9.2Hz)，12.70(s，1H)。
實施例3.111 ES+m/z 579.1(M-H)-HRMS581.15050(M+H)+；理論值581.15077。
1H NMR(400MHz，DMSO)δ0.84(d，3H，J＝6.8Hz)，0.86(d，3H，J＝6.8Hz)，2.02(m，1H)，2.30(s，3H)，3.58(dd，1H，J＝6.4，9.6Hz)，5.20(s，2H)，6.68(d，1H，J＝8Hz)，6.95(d，1H，J＝8Hz)，7.06(s，4H)，7.60(d，2H，J＝8Hz)，7.62(d，2H，J＝8Hz)，7.83(m，3H)，7.95(d，1H，J＝1.6)，8.03(d，1H，J＝8Hz)，8.22(d，1H，J＝9.6Hz)，12.70(s，1H)。
基於流程5製備實施例112、113、114。
實施例3.112
3-甲基-2-[4′-(吡啶-3-基甲氧基甲基)-聯苯-4-磺醯氨基]-丁酸1H NMR(400MHz，MeOD)δ；ES+m/z(M+H)455.1；HRMS(M+H)m/z理論值455.16352；實測值；455.16317；(C24H26N2O5S)。
實施例3.113 3-甲基-2-[4′-(萘-2-基甲氧基甲基)-聯苯-4-磺醯氨基]-丁酸1H NMR(400MHz，CDCl3)δ0.85(d，3H)，0.95(d，3H)，2.10(m，1H)，3.83(m，1H)，4.63(s，2H)，4.74(s，2H)，5.25(bs，1H)，7.44-7.55(m，7H)，7.65(d，2H)，7.82-7.90(m，6H)；ES+m/z(M-H)502.1；HRMS(M+H)m/z理論值504.18392；實測值；504.18503；(C29H29NO5S)。
實施例3.114 3-甲基-2-[4′-(吡啶-3-基甲氧基甲基)-聯苯-4-磺醯氨基]-丁酸1H NMR(400MHz，DMSO)δ0.81(d，3H)，0.84(d，3H)，1.95(m，1H)，3.55(dd，1H)，4.56(s，2H)，4.63(d，2H)，7.44(d，2H)，7.50(d，1H)，7.70(d，2H)，7.74(d，1H)，7.84(m，4H)，8.08(m，2H)；ES+m/z(M+H)455.1；HRMS(M+H)m/z理論值455.16352；實測值；455.16290；(C24H26N2O5S)。
實施例4使用本發明的聯芳基磺醯胺化合物抑制ADAMTS-5聚集蛋白聚糖酶的活性測試本發明聯芳基磺醯胺化合物抑制ADAMTS-4(Agg-1)和ADAMTS-5(Agg-2)的聚集蛋白聚糖酶活性的能力。結果顯示在以下表1中，其顯示了以μM表示的抑制所述酶50％聚集蛋白聚糖酶活性的化合物濃度(IC50)。這些化合物從對ADAMTS-5的效力由低至高列表，最後的是最有效的。
表1




採用連續實驗，其中Agg-1和Agg-1作用的底物為含有被能量傳遞猝滅的螢光基團的合成肽。所述肽被聚集蛋白聚糖酶的裂解導致螢光大幅度增加。比較所述反應的初始速率與含有聯芳基磺醯胺化合物的反應初始速率，以評價所述化合物的抑制效力。
在所述實驗中的酶源為純化的重組人聚集蛋白聚糖酶-2。更具體地講，所採用的形式為Ag2t-Phe628-Strep(MW＝41,737)。該形式相對於所述全長酶被截短，並含有親和標記。該酶的等分試樣在-80℃下保存於25mM Tris(pH8.0)、100mM NaCl、5mM CaCl2、10μMZnCl2、10％甘油中。
所述實驗中的底物按照聚集蛋白聚糖酶-2的一種天然底物短小蛋白聚糖的部分設計。該肽，稱為WAKB-5，含有螢光基團2-氨基苯甲醯基(Abz)，其通過將能量傳遞至2，4-二硝基苯基(Dnp)基而猝滅。WAKB-5(質量＝1740)由AnaSpec，Inc.(San Jose，CA)委託合成，基於HPLC分析純度＞95％。WAKB-5具有序列Abz-TESESRGAIY-Dap(Dnp)-KK-NH2。所述底物的儲備液用MilliQ水製備，在-80℃下貯藏等分試樣。該底物儲備液的濃度在354nm下採用消光係數測定的分光光度為18，172M-1cm-1。測定出該酶/底物反應的Vmax和Km對最高達至少10％(v/v)的DMSO不敏感。
所述實驗緩衝液(pH7.4)由50mM Hepes、100mM NaCl、5mMCaCl2、0.1％CHAPS、5％甘油組成。黑聚苯乙烯96-孔或38-孔板的每孔中包含由實驗緩衝液、純化Agg-2(用實驗緩衝液稀釋)和各種濃度的抑制劑(通過在96-孔聚丙烯板中用DMSO連續稀釋製備)組成的反應物。然後將所述板在室溫下溫育10分鐘。通過加入底物至25μM終濃度並通過用移液管上下吸取混合，引發酶促反應。在加入底物後立即用螢光板讀出器測定室溫下所述裂解反應的初始速率。
對於96-孔板中具有4％最終DMSO濃度和0.5μg/ml最終酶濃度(在大多數情況下合適的濃度)的100μl反應，詳細方法如下(1)在實驗中所述化合物在96-孔聚丙烯板中用100％DMSO稀釋至25X最終濃度，(2)Agg-2用實驗緩衝液稀釋至2.083X最終濃度(即1.04μg/ml)，(3)然後向孔中加入48.0μl的2.083X Agg-2，(4)將4.0μl的25X化合物轉移至實驗板並將這些試劑混合，(5)於室溫下將板溫育10分鐘，(6)用實驗緩衝液將底物稀釋至52.075μM(2.083X最終濃度)，(7)預溫育10分鐘後，加入48.0μl的2.083X底物並充分混合這些試劑，(8)室溫下在激發為316nm、帶寬12nm和發射為432nm，帶寬12nm的Tecan Safire上用螢光板讀出器立即監測反應。
通過產生各樣品RFU對時間的圖進行結果分析。這用作反應的「漸進曲線」。然後測定漸進曲線最線性部分的斜率。該斜率(RFU/分鐘)用作反應的初始速率。然後抑制劑濃度對初始裂解速率的圖擬合於以下方程y＝Vmax*(1-(xn/(Kn+xn)))，其中x＝抑制劑濃度，y＝初始速率，Vmax＝不存在抑制劑時的初始速率，n＝斜率因子，K＝抑制曲線的IC50。因此測定在表1中顯示的IC50計算結果。
實施例5使用本發明抗-ADAMTS-5抗體抑制ADAMTS-5聚集蛋白聚糖酶的活性測試本發明的抗-ADAMTS-5抗體抑制ADAMTS-4(Agg-1)和ADAMTS-5(Agg-2)的聚集蛋白聚糖酶活性的能力。結果顯示在表2中，其顯示了針對重組人ADAMTS-5產生的四種單克隆抗體的性質，它們在ELISA中顯示與ADAMTS-5具有反應性，但與ADAMTS-4或牛血清蛋白(BSA)沒有。通過蛋白質印跡分析鑑定，所有抗體識別rhADAMTS-5。
表2
雖然已經描述了認為的本發明優選實施方案，本領域技術人員將認識到，可對其作出其它和進一步的改進，例如以適合各種條件或其它要求，而不背離以下權利要求定義的本發明精神。
權利要求
1.一種治療疾病困擾對象中的ADAMTS-5相關疾病的方法，所述方法包括給予所述對象抑制ADAMTS-5的藥物。
2.權利要求1的方法，其中所述藥物抑制ADAMTS-5的金屬蛋白酶活性。
3.權利要求1的方法，其中所述藥物抑制ADAMTS-5的聚集蛋白聚糖酶活性。
4.權利要求1的方法，其中ADAMTS-5相關疾病選自骨關節炎、癌症、哮喘、慢性阻塞性肺疾病(「COPD」)、動脈粥樣硬化、與年齡有關的黃斑變性、心肌梗塞、角膜潰瘍和其它眼表面疾病、肝炎、主動脈瘤、腱炎、中樞神經系統疾病、異常傷口癒合、血管生成、再狹窄、肝硬變、多發性硬化症、腎小球腎炎、移植物抗宿主病、糖尿病、炎性腸病、休克、椎間盤變性、中風、骨質減少、類風溼性關節炎和其它形式的關節炎及牙周病。
5.權利要求3或4的方法，其中所述疾病為骨關節炎。
6.權利要求5的方法，其中所述藥物選自抗ADAMTS-5抗體和聯芳基磺醯胺化合物。
7.權利要求6的方法，其中所述聯芳基磺醯胺化合物為式I的化合物 其中R1為H或者C1-C6烷基；R2為H、C1-C6烷基、(CH2)nR2′、苯基或者苄基；n為0-6；R2′為芳基、雜芳基、環烷基或者雜環烷基；R3每次出現時獨立為H、滷素、OC(滷素)3、C(滷素)3、烷氧基或者C1-C6烷基；X選自CH2O、OCH2、C(R3)＝C(R3)、C(R3)2-C(R3)2、CH2NHC(＝O)、O(C＝O)NH、O、C(＝O)CH2、SO2CH2C(＝O)NH、SO2NH、OC(＝O)、CH2S(O)和CH2S(O)2；Z為至少一個芳基或者雜芳基部分。
8.權利要求7的方法，其中Z為吡啶、嘧啶、哌嗪、噠嗪、苯基、萘、呋喃、噻吩、吡咯、吡唑、咪唑、唑、異唑、噻唑、苯並噻唑、喹啉或者異喹啉，或者 其中U選自S、O、C(R3)＝C(R3)、C(R3)＝N和N(R4)；W選自C(R3)和N；M選自C(R3)和N；L選自S、O、C(R3)＝C(R3)、C(R3)＝N和N(R4)；R4和R5每次出現時獨立為連接至其它的鍵、H、C1-C6烷基或者苯基；R7選自連接R3的鍵、H、滷素、C(滷素)3、NR4R5、N[(CH2)2]2O、N[(CH2)2]2NR4、NHSO2R4、NR4C(＝O)R5、NHC(＝O)OR4、NO2、SO2NR4R5、SO2R4、OR4、C(＝O)R4、COOR4、CONR4R5、CN、苯基、雜芳基、C1-C6烷基、C2-C6烯基或者C2-C6炔基；R8選自H、苯基、雜芳基和C1-C6烷基。
9.權利要求8的方法，其中R7被NR4R5、N[(CH2)2]2O、N[(CH2)2]2NR4、NHSO2R4、NR4C(＝O)R5、NHC(＝O)OR4、NO2、SO2NR4R5、SO2R4、OR8、C(＝O)R4、COOR4、CONR4R5、CN、苯基或雜芳基取代。
10.權利要求8的方法，其中R8被NR4R5、N[(CH2)2]2O、N[(CH2)2]2NR4、NR4SO2R5、NR4C(＝O)R5、NHC(＝O)OR4、NO2、SO2NR4R5、SO2R4、C(＝O)R4、COOR4、CONR4R5、CN、苯基或雜芳基取代。
11.權利要求7的方法，其中R1為H或者支鏈烷基。
12.權利要求7的方法，其中R1為異丙基。
13.權利要求7的方法，其中R3為滷素、CF3、OCH3或者CH3。
14.權利要求7的方法，其中X為CH2O、OCH2、C(R3)＝C(R3)或者CH2NHC(＝O)。
15.權利要求7的方法，其中R7為CH3、乙基、異丙基、CF3、CN或者OCH3。
16.權利要求7的方法，其中R8為CH3、苯基和苄基。
17.權利要求7的方法，其中Z為雙環。
18.一種鑑定用於治療ADAMTS-5相關疾病的潛在藥物的方法，所述方法包括使ADAMTS-5與所述潛在藥物接觸並測定所述潛在藥物存在時的ADAMTS-5活性，其中活性減少表明所述潛在藥物對治療所述疾病有用。
19.權利要求18的方法，其中所述活性選自金屬蛋白酶活性和聚集蛋白聚糖酶活性。
20.權利要求18或19的方法，其中ADAMTS-5在細胞中，所述活性在細胞中測量。
21.權利要求20的方法，所述方法進一步包括使缺乏ADAMTS-5的細胞與所述潛在藥物接觸，測量缺乏ADAMTS-5的細胞中的活性，並將所述活性與具有ADAMTS-5的細胞的活性比較。
22.權利要求18的方法，其中ADAMTS-5相關疾病選自骨關節炎、癌症、哮喘、慢性阻塞性肺疾病(「COPD」)、動脈粥樣硬化、與年齡有關的黃斑變性、心肌梗塞、角膜潰瘍和其它眼表面疾病、肝炎、主動脈瘤、腱炎、中樞神經系統疾病、異常傷口癒合、血管生成、再狹窄、肝硬變、多發性硬化症、腎小球腎炎、移植物抗宿主病、糖尿病、炎性腸病、休克、椎間盤變性、中風、骨質減少和牙周病。
23.權利要求18的方法，其中ADAMTS-5相關疾病為骨關節炎。
24.一種調節ADAMTS-5活性的方法，所述方法包括使ADAMTS-5與式I化合物接觸 其中R1為H或者C1-C6烷基；R2為H、C1-C6烷基、(CH2)nR2′、苯基或者苄基；n為0-6；R2′為芳基、雜芳基、環烷基或者雜環烷基；R3每次出現時獨立為H、滷素、OC(滷素)3、C(滷素)3、烷氧基或者C1-C6烷基；X選自CH2O、OCH2、C(R3)＝C(R3)、C(R3)2-C(R3)2、CH2NHC(＝O)、O(C＝O)NH、O、C(＝O)CH2、SO2CH2C(＝O)NH、SO2NH、OC(＝O)、CH2S(O)和CH2S(O)2；Z為至少一個芳基或者雜芳基部分。
25.權利要求24的方法，其中Z為吡啶、嘧啶、哌嗪、噠嗪、苯基、萘、呋喃、噻吩、吡咯、吡唑、咪唑、唑、異唑、噻唑、苯並噻唑、喹啉或者異喹啉，或者 其中U選自S、O、C(R3)＝C(R3)、C(R3)＝N和N(R4)；W選自C(R3)和N；M選自C(R3)和N；L選自S、O、C(R3)＝C(R3)、C(R3)＝N和N(R4)；R4和R5每次出現時獨立為連接至其它的鍵、H、C1-C6烷基或者苯基；R7選自連接R3的鍵、H、滷素、C(滷素)3、NR4R5、N[(CH2)2]2O、N[(CH2)2]2NR4、NHSO2R4、NR4C(＝O)R5、NHC(＝O)OR4、NO2、SO2NR4R5、SO2R4、OR4、C(＝O)R4、COOR4、CONR4R5、CN、苯基、雜芳基、C1-C6烷基、C2-C6烯基或者C2-C6炔基；R8選自H、苯基、雜芳基和C1-C6烷基。
26.權利要求25的方法，其中R7被NR4R5、N[(CH2)2]2O、N[(CH2)2]2NR4、NHSO2R4、NR4C(＝O)R5、NHC(＝O)OR4、NO2、SO2NR4R5、SO2R4、OR8、C(＝O)R4、COOR4、CONR4R5、CN、苯基或雜芳基取代。
27.權利要求25的方法，其中R8被NR4R5、N[(CH2)2]2O、N[(CH2)2]2NR4、NR4SO2R5、NR4C(＝O)R5、NHC(＝O)OR4、NO2、SO2NR4R5、SO2R4、C(＝O)R4、COOR4、CONR4R5、CN、苯基或雜芳基取代。
28.權利要求24的方法，其中R1為H或者支鏈烷基。
29.權利要求24的方法，其中R1為異丙基。
30.權利要求24的方法，其中R3為滷素、CF3、OCH3或者CH3。
31.權利要求24的方法，其中X為CH2O、OCH2、C(R3)＝C(R3)或者CH2NHC(＝O)。
32.權利要求24的方法，其中R7為CH3、乙基、異丙基、CF3、CN或者OCH3。
33.權利要求24的方法，其中R8為CH3、苯基和苄基。
34.權利要求24的方法，其中Z為雙環。
35.權利要求24的方法，其中所述活性為金屬蛋白酶活性。
36.權利要求35的方法，其中所述活性為聚集蛋白聚糖酶活性。
37.權利要求7或24的方法，其中所述化合物選自表1中列出的化合物。
38.權利要求1或18的方法，其中所述藥物為抗ADAMTS-5抗體。
39.權利要求38的方法，其中所述抗體具有金屬蛋白酶抑制活性。
40.權利要求39的方法，其中所述抗體具有聚集蛋白聚糖酶抑制活性。
全文摘要
本發明涉及治療ADAMTS－5相關疾病、特別是骨關節炎的方法，該方法包括給予疾病困擾對象能夠調節ADAMTS－5活性的藥物。所述藥物優選為聯芳基磺醯胺化合物。本發明部分以下發現不表達功能性ADAMTS－5的轉基因動物與WT動物相比在誘導骨關節炎後顯示一定程度的骨關節炎減少。另外，所述ADAMTS－5轉基因動物與WT動物相比在關節組織具有較低的聚集蛋白聚糖酶活性。這些動物是ADAMTS－5相關疾病的良好模型，用於篩選治療和/或預防這些疾病的藥物。不存在其中單個基因活性缺失能夠阻礙骨關節炎過程的其它動物模型。因此，這些動物也顯示，骨關節炎可通過給予對象ADAMTS－5抑制劑、尤其是能夠抑制ADAMTS－5的聚集蛋白聚糖酶活性的藥物而得到預防和/或治療。
文檔編號C07D215/22GK1913880SQ200480041193
公開日2007年2月14日 申請日期2004年11月8日 優先權日2003年12月4日
發明者E·A·莫裡斯, S·S·格拉森, 向少雲 申請人:惠氏公司