用作抗癌劑的5-(1，3-二芳基-1h-吡唑-4-基亞甲基)-噻唑烷-2，4-二酮衍生物的製作方法

2024-02-01 05:40:15

專利名稱：：用作抗癌劑的5-(1，3-二芳基-1h-吡唑-4-基亞甲基)-噻唑烷-2，4-二酮衍生物的製作方法
技術領域：
：本發明涉及5-(l，3-二芳基-lH-吡唑-4-基亞甲基)-多唑烷-2，4-二酮衍生物或其藥學上可接受的鹽，製備它的方法和用作抗癌劑的含有它作為活性成分的組合物。
背景技術：
：CDC25B是一種磷酸酶，其在細胞分裂期間在決定G2/M相轉變中發揮了重要作用。抑制CDC25B的活性阻礙了細胞分裂，因此導致了細胞死亡；即，這與抗癌作用有關。在多數腫瘤中都可見CDC25B過度表達，包括胃癌(Jpn.J.CancerRes.1997,88,9947)、結腸癌(ExpCellRes.1998,240,236，Lab.Invest.2001，81，465)、肺癌(CancerRes.1998，58，4082)、腦癌和喉癌(CancerRes.1997，57，2366)、乳腺癌(CancerStatisticsinJapan1997FoundationforPromotionofCancerResearch,Tokyo,Jpn.)等。在CDC25B過度表達的轉基因小鼠中觀察到乳腺的異常增殖(Oncogene1999,18，4561)。據才艮道，當用致癌物(9，10-二甲基-l，2-苯並蒽)治療轉基因小鼠時容易誘導乳腺癌。因此，CDC25B是開發抗癌劑的一個重要靶標。即，我們將期望開發能抑制CDC25B並對正常細胞有很小毒性的抗癌劑。EP379979Al公開了能用作腺苷拮抗劑的5-(取代-lH-吡唑-4-基亞曱基)-噻唑烷-2，4-二酮)衍生物，其中吡唑基團在漆唑5-位上有吡唑並吡咬結構。曰本專利No.55029804公開了5-(取代-lH-吡唑-4-基亞甲基)-噻唑烷-2，4-二酮)衍生物的卣化銀，其中吡唑基團在噻唑5-位上有吡唑酮結構，其被用作能抑制模糊和光敏劑中光電效應的染料。發明公開本發明人發現5-(l，3-二芳基-lH-吡唑-4-基亞甲基)-瘞唑烷-2，4-二酮衍生物對CDC25B具有選擇性的抑制活性，對類似的其他砩酸酶具有選擇性並且具有抗癌活性，從而完成了本發明。因此，在本發明的一個實施方案中，提供了5-(l，3-二芳基-lH-吡唑-4-基亞甲基)-噻唑烷-2，4-二酮衍生物或其藥學上可接受的鹽。在本發明的一個實施方案中，提供了製備5-(l，3-二芳基-lH-吡唑-4-基亞甲基)-噻唑烷-2，4-二酮衍生物或其藥學上可接受的鹽的方法。在本發明的另一個實施方案中，提供了用作抗癌劑的包含5-(1，3-二芳基-lH-吡唑-4-基亞曱基)-噻唑烷-2，4-二酮衍生物或其藥學上可接受的鹽的組合物。圖1顯示了使用人腫瘤模型測定幾種侯選抑制劑對抗CDC25B的體內抗癌作用。最佳方式本發明提供了下式1所示的5-(l，3-二芳基-lH-吡唑-4-基亞甲基)-盡唑烷-2，4-二酮衍生物或其藥學上可接受的鹽X是氫、d-C4烷基、CVC4卣代烷基、囟原子、未被取代或被d-C4烷基羧基取代的d-C4烷氧基、d-C4囟代烷氧基、C3-C4烯氧基、CrC4醯基、CVdo環烷基烷氧基、CVd。環烷氧基、羥基、氰基或硝基；Y是氫、d-C4烷基、囟原子、d-C4烷氧基、Q-C4烯氧基、C2-C4醯基、氰基或硝基；其中n是l-5的整數；和R是氫、d-C4烷基、C2-d烯基、C3-C4炔基、CVC4卣代烷基、CVC4烷氧基烷基或節基。在本發明的一個優選實施方案中，在式1中，X是d-C4烷基、d-C(卣代烷基、卣原子、未被取代或被d-C4烷基羧基取代的d-C4烷氧基、d-C4卣代烷氧基、C3-do環烷基烷氧基、Qrde環烷氧基、羥基、QrC4烯氧基或硝基；Y是氫、d-C4烷基、卣原子、d-C4烷氧基、CVC4烯氧基、C2C4醯基、氰基或硝基；n是l-3的整數；和R是氫、d-C4烷基、d-C4滷代烷基、CrC4烷氧基烷基或苄基。在本發明的另一個優選實施方案中，在式1中，X是異丙基、三氟甲基、叔丁基、溴、氯、碘、乙基、曱氧基、乙氧基、丙氧基、苄氧基、烯丙氧基、環丙基曱氧基、環戊氧基、羥基、氟甲氧基、被乙基羧基取代的甲氧基或硝基；Y是氫、曱基、乙基、氟、氯、溴、碘、甲氧基、乙氧基、氰基或硝基；n是l-3的整數；和R是氫、甲基、乙基、propano、丙基、丙烯基、丙炔基、d-C4氟烷基、爺基或千氧基。在本發明的又一個優選實施方案中，在式1中，X是曱氧基或硝基，其中2-位被溴、氯、甲氧基或硝基取代，4-位被三氟甲基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、丙炔氧基、氟曱氧基、碘、千氧基或烯丙氧基取代，3-位和5-位被異丙基、叔丁基、溴、碘、甲氧基、乙氧基、丙氧基、環丙基曱氧基、環戊氧基羥基或乙基羧基取代；Y是氫、曱基或乙基；n是1-3的整數；和R是氫、曱基、乙基、丙基、丙烯基、丙炔基、苄氧基、鈉、苄基或被乙基羧基取代的甲氧基。在式l中，X可以在苯基的1-位至5-位上，優選在2-位、3-位、4-位或5-位上。Y可以在1-位至5-位上，優選在l-位、2-位或3-位上。在本發明的最優選實施方案中，式1所示化合物是5-[3-(2-氯-苯基)-l-苯基-lH-吡唑-4-基亞甲基-噻唑烷-2，4-二酮、5-[3-(3-硝基)-l-苯基-lH-吡唑-4-基亞曱基-3-曱基-噻唑烷-2，4-二酮、5-[3-(3-三氟甲基)-l-苯基-lH-吡唑-4-基亞甲基-瘞唑烷-2，4-二酮、5-[3-(3-氯-4-乙氧基-苯基)-l-苯基-lH-吡唑-4-基亞甲基-3-甲基-噻唑烷-2，4-二酮、5-[3-(3-氯-4-丙氧基-苯基)-l-苯基-lH-吡唑-4-基亞曱基卜噢唑烷-2，4-二酮、5-3-(3-溴-4-乙氧基-苯基)-l-苯基-lH-吡唑-4-基亞甲基-3-甲基-噻唑烷-2,4-二酮、5-[3-(3-溴-4-丙氧基-苯基)-l-苯基-lH-吡唑-4-基亞甲基_3-曱基-瘞唑烷-2，4-二酮或其藥學上可接受的鹽。除非另有說明，在此術語"烷基"指的是直鏈或支鏈的具有l-4個碳原子的飽和烴基。除非另有說明，在此術語"卣素"或"滷，，指的是卣原子，其包括氟、氯、溴、碟和氟。除非另有說明，在此術語"烷氧基"指的是O-烷基("烷基，，的定義同上)。除非另有說明，在此術語"烯基，，指的是具有雙鍵並具有2-4個碳原子的不飽和烴基。除非另有說明，在此術語"炔基，，指的是具有三鍵並具有3或4個碳原子的不飽和烴基。除非另有說明，在此術語"醯基"指的是衍生自脂肪羧酸的芳醯基，例如乙醯基、丙醯基等。除非另有說明，在此術語"環烷基烷氧基"指的是具有3-10個碳原子的基團，其中烷氧基與飽和經環相連。除非另有說明，在此術語"環烷氧基"指的是具有3-IO個碳原子的基團，其中氧與飽和烴環相連。除非另有說明，在此術語"烯氧基"指的是具有3或4個碳原子的基團，其中氧與具有雙鍵的不飽和烴相連。除非另有說明，在此術語"卣代烷基，，指的是其中氫原子被卣原子取代的烷基(如上定義)。除非另有說明，在此術語"卣代烷氧基"指的是其中氫原子被卣原子取代的烷氧基(如上定義)。本發明還提供了式1所示化合物的藥學上可接受的鹽。上述鹽可以通過相關領域的已知方法製備。上述藥學上可接受的鹽可以是任何藥學上可接受的鹽，例如有機酸鹽或無機酸鹽，如鹽酸鹽、氫溴酸鹽、硫酸鹽、磷酸鹽、乙酸鹽、檸檬酸鹽、富馬酸鹽、乳酸鹽、馬來酸鹽、琥珀酸鹽和酒石酸鹽，鹼金屬鹽如鈉鹽和鉀鹽，或銨鹽。本發明還提供了製備式1所示化合物或其藥學上可接受的鹽的方法，所述方法包括使下式2所示化合物與下式3所示化合物反應，得到下式4所示化合物；由式4所示化合物的維爾斯邁爾-哈克(Vilsmeier-Haack)反應得到下式5所示化合物；並且使式5所示化合物與噻唑-2，4-二酮反應，得到式l所示化合物，其中R是H,或使產物與下式6化合物反應，得到式l所示化合物，其中R如下所述其中X、Y、n和R如上所定義；和Z是離去基團，其是卣原子，例如氯、溴和碘、甲苯磺醯氧基或甲烷磺醯氧基。本發明的製備方法可以通過以下方案1表示。[方案IINaOHaq.(d)formulaseeoriginaldocumentpage11a:乙酸或苯甲酸b:醇，例如甲醇和乙醇，水或有機溶劑c:無水二曱基甲醯胺(MMF)/三氯氧磷(POCl3)，亞硫醯氯或草醯氯d:氫氧化鈉溶液e:弱酸鹽，例如乙酸鹽和苯曱酸鹽，或弱鹼，例如吡啶、胺和苯胺f:有機溶劑，例如苯和甲苯g:無機鹼，例如碳酸鉀、碳酸鈉、氫氧化鈉、氫氧化鈣和碳酸銫，或有機鹼，例如三乙胺和p比咬h:二曱基甲醯胺(DMF)，四氫呋喃(THF)，丙酮，水或其他有機溶劑。首先，使式2的取代苯乙酮與式3的取代肼反應，得到式4的腙衍生物。醇例如甲醇或乙醇、水或其他有機溶劑可以在這個反應中用作溶劑。優選的是，使用醇例如甲醇或乙醇。對於催化劑，可以使用小量的弱酸如乙酸或苯甲酸。然後，使用無水二甲基甲醯胺(DMF)作為溶劑，三氯氧磷(POCl3)、亞硫醯氯或草醯氯，優選三氯氧磷作為催化劑，將式4的腙衍生物轉化為式5的3-芳基-吡啶基-吡唑-4-曱醛衍生物。接下來，使式5的吡唑甲醛與噻唑烷-2，4-二酮反應得到式1的化合物，其中R是H。在這個反應中可以使用苯、甲苯或其他有機溶劑。優選的是，使用苯或甲苯作為溶劑。對於催化劑，可以使用乙酸和哌咬的混合物，或可以單獨使用弱酸鹽例如乙酸鹽和苯曱酸鹽，或弱鹼例如吡啶、胺和苯胺。優選的是，使用乙酸和哌啶的混合物。產物可以與式的鹽化合物在鹼存在下反應，以便得到式1的化合物，其中R不是H。在這個反應中，可以使用二曱基甲醯胺(DMF)、四氫呋喃(THF)、丙酮、水或其他有機溶劑。優選的是，使用二曱基甲醯胺(DMF)或四氫呋喃(THF)作為溶劑。至於鹼，可以使用無機鹼如碳酸鉀、碳酸鈉、氫氧化鈉、氫氧化鉀和碳酸銫，或有機鹼如三乙胺和吡咬。優選的是，使用碳酸鉀或碳酸鈉。本發明還提供了含有式1所示的5-(l，3-二芳基-lH-吡唑-4-基亞曱基)-蓉唑烷-2，4-二酮衍生物或其藥學上可接受的鹽作為活性成分的抗癌劑。因為式1的5-(l，3-二芳基-lH-吡唑-4-基亞曱基)-噻唑烷-2，4-二酮衍生物具有抑制CDC25B磷酸酶的活性，其中該磷酸酶在細胞分裂期的G2/M相轉化中發揮了重要作用，所以其能有效抑制細胞分裂。同樣，其在人體內對其他磷酸酶有選擇性，並且已經證實在異種移植的棵鼠中能有效破壞人癌細胞。因此，含有式1所示化合物作為活性成分的抗癌劑或藥物組合物可以通過加入藥學上可接受的無毒載體、修飾劑、填充劑等而製成口服給藥的製劑，例如片劑、膠囊劑、錠劑、糖漿劑和乳劑。式1所示化合物的給藥劑量可以隨患者的年齡、體重、性別或健康狀況、給藥類型和疾病嚴重度而變化。10-400mg/天的劑量是體重為約70kg成人的正常可接受量。化合物可以一天給予一次或幾次，如醫師或藥劑師所開處方決定。以下，通過附加實施例對本發明進行進一步的詳細說明。然而以下實施例僅用於理解本發明，它們並不被解釋為對本發明範圍的限制。實施例l:製備5-3-(3，5-二氟-苯基)-l-苯基-lH-吡唑-4-基亞甲基1-塞唑烷-2，4-二酮(化合物編號58)(1)製備(3，，5'-二氟甲氧基)苯乙酮(式2)將(3'，5'-二羥基)苯乙酮(1.00g，6.57mmol)溶解在30mL無水二曱基曱醯胺中。加入碳酸鉀(2.00g，14.45mmol)和碘化鉀(10.91mg，6.57xio-2mmol)，並在80。C下回流1小時。冷卻到55-60。C後，緩慢逐滴加入氯二氟乙酸甲酯(1.75mL，16.43mmol)並將混合物攪拌30分鐘。在70-80。C下回流3小時後，將混合物緩慢冷卻到室溫。加入乙酸乙酯(30mL)並用水洗滌混合物(lOmLx2次)。有機層進一步用2N鹽酸溶液(IOmLx3次)和鹽水(IOmLx2次)洗滌。分離有機層，用無水疏酸鎂乾燥、過濾並在減壓下濃縮。剩餘物通過矽膠色i普(正己烷/乙酸乙酯=10:l)純化得到1.13g(68%)目標產物。iH匪R(200MHz，CDC13)62.61(s，3H)，6.58(t,2H,J=74Hz)，7.14(s，1H)，7.55(s,1H)。(2)製備(3'，5'-二氟曱氧基)苯乙酮的苯腙(式4)將(3'，5'-二氟甲氧基)苯乙酮(1.0g，3.97mmol)溶解在20mL無水乙醇中。力口入苯肼(0.39mL，3.97mmol)和催化劑冰醋酸(ll.OOjiL,0.20mmo1)，並在室溫下攪拌混合物3小時。加入乙酸乙酯(20mL)並用水(IOmLx3次)和鹽水(IOmLx2次)洗滌混合物。有才幾層用無水減<酸鎂乾燥、過濾並在減壓下濃縮得到1.29g(95。/。)目標產物。(3)製備3-(3'，5，-二氟曱氧基-苯基)-l-苯基-lH-吡唑-4-曱醛(式5)將三氯氧磷(0.45mL，7.02mol)加入到2mL的無水二甲基甲醯胺中並在0。C下攪拌混合物1小時。將溶解在5mL無水二曱基甲醯胺中的(3，，5'-二氟甲氧基)苯乙酮的苯腙(1.2g，3.51mmol)緩慢逐滴加入並在70-80。C下攪拌該混合物6小時。用水水冷卻到0。C後，緩慢逐滴加入30%氫氧化鈉溶液將pH調節到7-8。過濾得到的固體並用水洗滌(10mLx3次)。乾燥濾出的固體得到0.94g(70。/。)目標產物。，HNMR(200MHz,CDC13)36.63(t，2H，J=74Hz)，7.02(s，1H),7.44(d，1H，J=7.5Hz)，7.54(t，2H,J=7.8Hz)，7.63(s,2H),7.79(d,2H，J=8.1Hz)，8.55(s,1H)，10.06(s，1H)。(4)製備5-[3-(3，5-二氟-苯基)-l-苯基-lH-吡唑-4-基亞甲基I-噻唑烷-2，4-二酮(化合物編號58)將3-(3，5-二氟甲氧基-苯基)-l-苯基-lH-吡唑-4-羧基醛(0.50g，1.31mmol)和噢唑烷-2，4-二酮(153.00mg，1.31mmol)加入到20mL的無水曱苯中。加入冰醋酸(3.70nL，6.55xl(T2mmol)和哌。定(7.80jiL，7.86x1(^mmol)作為催化劑並回流12小時並且使用Dean-Stark捕獲器(trap)除去水。冷卻到室溫後，攪拌6小時。過濾得到的固體並用二乙基醚洗滌(IOmLx3次)。乾燥得到的過濾固體得到0.56g(89%)目標產物。iH匪R(200MHz,CDC13)37.24(t，2H，J=74Hz),7.37(s，III),7.41-7.55(m，2H)，7.61(t,2H，J=2.8Hz)，8.06(d，2H，J-7.2Hz)，8.79(s，1H)，12.61(br，1H，NH)。實施例2:製備5-3-(3,5-二氟-苯基)-l-苯基-lH-吡唑-4-基亞曱基-3-甲基-漆唑烷-2，4-二S同(化合物編號59)將5-[3-(3，5-二氟-苯基)-l-苯基-lH-吡唑-4-基亞甲基I-噻唑烷-2，4-二酮(化合物編號58，0.10g,0.21mmol)溶解在l.OmL無水二曱基甲醯胺中。在氮保護氣氛下加入碳酸鈉(26.50mg，0.25mmol)並在10分鐘後加入硤甲烷(20.00nL,0.32mmol)。在室溫下攪拌混合物2小時。反應完成後加入水。得到的固體用水洗滌(10mLx3次)。乾燥固體得到90.0mg(87%)目標產物。iH醒R(200MHz，CDCl3)63.26(s,3H)，6.61(t,2H，J=74Hz)，7.03(s，1H)，7.30(s，1H)，7.42(t,1H，J=7.4Hz)，7.54(t,2H，J=7.8Hz)，7.78(d，2H，J=8.1Hz),7.87(s，1H)，8.19(s，1H)。實施例3:製備5-[3-(3，5-二氟-苯基)-l-苯基-lH-吡唑-4-基亞曱基卜3-乙基-漆唑烷-2，4-二酮(化合物編號60)將5-[3-(3，5-二氟-苯基)-l-苯基-lH-吡唑-4-基亞甲基-噻唑烷-2，4-二酮(化合物編號58，0.10g，0.21mmol)溶解在1.0mL無水二甲基甲醯胺中。在氮保護氣氛下加入碳酸鈉(26.5mg，0.25mmol)並在10分鐘後加入溴乙烷(23.90nL,0.32mmo1)。在室溫下攪拌混合物4小時。反應完成後加入水。得到的固體用水洗滌(10mLx3次)。乾燥固體得到85.3mg(80%)目標產物。'HNMR(200MHz，CDC13)31.29(t,3H,J=7.5Hz),3.83(q，2H，J=7.0Hz)，6.61(t,2H，J-74Hz),7.03(s，1H)，7.31(s，1H)，7.42(t，1H，J=7.5Hz)，7.54(t,2H,J-7.5Hz)，7.79(d，2H，J=9.0Hz)，7.86(s，1H),8.19(s，1H)。實施例4:製備5-[3-(3-溴-4-乙氧基-苯基)-l-苯基-lH-吡唑-4-基亞曱基-噻唑烷-2，4-二酮(化合物編號77)(1)製備(3'-溴-4'-乙氧基)苯乙酮的苯腙(式4)將(3，-溴-4'-乙氧基)苯乙酮(4.00g，16.45mmol)溶解在100mL無水乙醇中。加入苯肼(2.14g，19.75mmol)和催化劑水醋酸(9.16jiL，0.16mmol)，並在室溫下攪拌該混合物5小時。當反應完成後，加入50mL乙酸乙酯並用2N鹽酸溶液萃取該溶液(30mLx3次)，並用鹽水洗滌(30mLx2次)。有機層用無水硫酸鎂乾燥得到3.9g(74.3%)白色固體狀目標產物。(2)製備3-(3-溴-4-乙氧基-苯基)-l-苯基-lH-吡唑-4-曱醛(式5)將三氯氧磷(3.13mL，33.6mmol)加入到2mL無水二曱基曱醯胺中並在0。C氮保護氣氛下攪拌該混合物1小時。緩慢逐滴加入溶解在5mL無水二曱基曱醯胺中的(3'-溴-4'-乙氧基)苯乙酮的苯腙(3.90g,11.7mmol)並在70-80。C下攪拌該混合物6小時。用冰水冷卻到0。C後，緩慢逐滴加入300/。氫氧化鈉溶液將pH調節到7-8。用水洗滌得到的固體(IOmLx3次)並乾燥得到2.10g(48.4%)目標產物。力醒R(300MHz，CDC13)".52(t,3H，J=6.92Hz)，4.19(q，2H，J=6.92Hz)，7.0(d,1H，J=8.55Hz)，7.4-8.15(m,7H),8.52(s，1H),10.04(s，1H)。(3)製備5-3-(3-溴-4-乙氧基-苯基)-l-苯基-lH-吡唑-4-基亞甲基卜漆唑烷-2，4-二酮(化合物編號77)將3-(3-溴-4-乙氧基-苯基)-l-苯基-lH-吡唑-4-甲醛(0.50g，1.35mmol)和噻唑烷-2,4-二酮(158.40mg，1.35mmol)加入到20mL無水甲苯中。力口入冰醋酸(3.81nL，6.75x10—2mmol)和派咬(8.04jiL，8.10x10-2mmol)作為催化劑並回流3小時並且使用Dean-Stark捕獲器除去水。冷卻到室溫後，攪拌該混合物6小時。所得固體用二乙基醚(10mLx3次)洗滌並乾燥得到0.52g(82%)目標產物。實施例5:製備5-[3-(3-溴-4-乙氧基-苯基)-l-苯基-lH-吡唑-4-基亞甲基-3-甲基-噻唑烷-2，4-二酮(化合物編號78)將5-[3-(3-溴-4-乙氧基-苯基)-l-苯基-lH-吡唑-4-基亞甲基-噻唑烷-2，4-二酮(化合物編號77,0,10g，0.21mmol)溶解在1.00mL無水二甲基甲醯胺中。在氮保護氣氛下加入氫化鈉(12.74mg，0.32mmol)並在5分鐘後加入碘甲烷(19.78nL，0.32mmol)。在室溫下攪拌該混合物2小時。當反應完成時，加入10mL水並用二氯甲烷萃取該溶液(10mLx2次)。有機層用鹽水洗塗並用無水硫酸鎂乾燥。減壓除去溶劑。產物用矽膠色譜純化(正己烷/乙酸乙酯=4:1)得到48mg(46.7%)黃色固體狀目標產物。，HNMR(300MHz,CDC13)".53(t，3H，J=7.2Hz),3.25(s,3H)，4.19(q，2H，J=7.0Hz)，7.0(d，1H,J=8.4Hz),739-7.55(m，4H)，7.78(d，2H,J=7.8Hz)，7.92(d，2H，J-2.1Hz)，8.17(s，1H)。實施例6:製備5-[3-(3-溴-4-乙氧基-苯基)-l-苯基-lH-吡唑-4-基亞曱基卜3-乙基-噻唑烷-2，4-二酮(化合物編號79)將5-[3-(3-溴-4-乙氧基-苯基)-l-苯基-lH-吡唑-4-基亞甲基-噻唑烷-2，4陽二酮(化合物編號77，0.10mg，0.21mmol)溶解在1.00mL無水二甲基甲醯胺中。在氮保護氣氛下加入氫化鈉(12.74mg，0.32mmol)並在5分鐘後加入溴乙烷(23.72jiL,0.32mmol)。室溫下攪拌該混合物2小時。當反應完成時，加入lOmL水並用二氯曱烷萃取該溶液(lOmLx2次)。有機層用鹽水洗滌並用無水硫酸鎂乾燥。減壓除去溶劑。產物經矽膠色鐠純化(正己烷/乙酸乙酯=4:1)得到52mg(49.2%)黃色固體狀目標產物。力匪R(300MHz,CDC13)51.28(t，3H，J=7.2Hz)，1.53(t，3H，J=7.1Hz)，3.82(q，2H，J=7.2Hz)，4.18(q，2H，J=6.9Hz)，7.00(d，1H，J=8.7Hz)，7.39(t,1H，J=7.4Hz)，7.49-7.55(m，3H)，7.78(d,2H，J=7.8Hz)，7.89(d，2H，J=16.8Hz)，8.16(s，1H)。下表la-lp給出的化合物以類似於實施例1-6的方法製備得到。tableseeoriginaldocumentpage17表lbtableseeoriginaldocumentpage18表lctableseeoriginaldocumentpage19表Idtableseeoriginaldocumentpage20表letableseeoriginaldocumentpage21表Iftableseeoriginaldocumentpage22tableseeoriginaldocumentpage23tableseeoriginaldocumentpage24tableseeoriginaldocumentpage25tableseeoriginaldocumentpage26tableseeoriginaldocumentpage27表11tableseeoriginaldocumentpage28tableseeoriginaldocumentpage29tableseeoriginaldocumentpage30表lotableseeoriginaldocumentpage31表IPtableseeoriginaldocumentpage32實施例7:製備含有式1所示化合物作為活性成分的劑型式1的化合物取決於用途能被製成各種劑型。下文給出了含有式1的化合物作為活性成分的劑型的實例，其並不限制本發明的範圍。劑型1:片劑(直接壓制)將5.0mg活性成分過篩並與14.1mg乳糖、0.8mg交聚維酮USNF和0.1mg硬脂酸鎂混合。將混合物壓製成片。劑型2:片劑(溼法制粒)將5.0mg活性成分過篩並與16.0mg乳糖和4.0mg澱粉混合。加入溶解在純水中的0.3mg聚山梨酯80並將混合物制粒。乾燥後，將顆粒過篩並與2.7mg二氧化矽膠體和2.0mg硬脂酸鎂混合。將顆粒壓成片。劑型3:粉末劑和膠嚢劑將5.0mg活性成分過篩並與14.8mg乳糖、10.0mg聚乙烯吡咯烷酮和0.2mg硬脂酸鎂混合。使用適當的裝置將混合物填充到5號明膠膠嚢中。實施例8:CDC25B酶測定表達CDC25B的催化區(aa378-566)並在大腸桿菌中誘導成為GST融合蛋白，其被用作酶原。酶測定在96孔板中進行，將每孔最終的反應體積調節到200nL。加入溶解在DMSO中的170fiL緩沖液(30mMTris緩沖液，pH8.5，75mMNaCl，0.67mMEDTA,1mMDTT)、20jiL(0.2pg)CDC25B酶和10jiL^皮測化合物，這樣終濃度就為ljig/mLCDC25B和20jimFDP。室溫下培養1小時後進行測定。臨測定前將FDP和DTT加入到緩沖溶液中，這樣就能保持新鮮的狀態。培養1小時後，在485nm(激發)和538nm(發射)處測定由酶反應產生的螢光。處理被測化合物使終濃度為10jim以便篩出顯示較高抑制活性的一個，從中測定ICs。值。對篩過的化合物進行處理使終濃度為1、2、5和10nm以便獲得。/。抑制值。如果抑制效果低(在20nm時小於50%)，那末就將化合物的濃度提高到20jim並獲得。/o抑制值和IC5。值。tableseeoriginaldocumentpage34實施例9:細J包毒性測定(1)培養癌細胞A549、HT29和MCF-7用於測定抗癌活性。癌細胞來自美國國立癌症研究所(NationalCancerInstitute(NCI))並通過韓國化學工藝研究所(KoreaResearchInstituteofChemicalTechnology(KRICT))培養，其來源於人腫瘤細胞系。細胞在5。/。C02孵育器中於37。C下進行恆溫恆溼培養，使用用5%胎牛血清加強的RPMI1640培養介質。3-4天接種一次。PBS(磷酸鹽緩沖鹽水)溶液，其中溶解了0.25%胰島素和3mm反-l，2-二氨基環己烷-N，N，N，N-四乙酸(CDTA),被用於分離細胞。(2)活性測定使用SRB(磺醯羅丹明B)測定法，其發展於1989年通過NCI測定藥物的體外抗癌活性。細胞用胰島素-CDTA溶液分離並置於96孔微量培養板(Falcon)中，每孔約2xl(^個細胞。細胞在<:02孵育器中培養24小時並被加入到培養板的底部。使用抽吸器除去培養介質後，在包含細胞的每個孔中加入在培養介質中被稀釋的化合物78、化合物79和對照藥物多柔比星，對數劑量(logdose)為6當量，3次，每次100mL。將細胞培養多於48小時。如果需要的話，使用二曱亞碸(DMSO)溶解化合物。在加入到細胞前，將稀釋的化合物溶液經0,22mL過濾器過濾。培養48小時後，從每個孔中除去培養介質，並加入lOOmLlO。/o三氯乙酸(TCA)。將培養板保持在4。C1小時從而將細胞固定在板中。然後，用水洗滌培養板5-6次，以便完全除去任何殘留的TCA,並在室溫下乾燥。向千燥的培養板中加入染色溶液，其中在每個孔內將0.4。/。SRB溶解於100mLl%乙酸溶液中。染色30分鐘後，用1%乙酸溶液洗滌培養板5-6次以除去沒有和細胞結合的SRB。染色的細胞培養板在室溫下進行千燥。然後，在每孔中加入100mL10mm不含緩衝劑的trisma鹼溶液，並用濃度滴定板振蕩器將培養板振搖10分鐘以洗脫染料。然後，使用酶標儀(microplatereader)在520nm下測定吸收率。為了對化合物的抗癌效果進行定量，我們計算了每種情況下的細胞數，這些情況是加入藥物(Tz)，細胞用不含藥物的培養介質培養48小時(C)，並且細胞在含有藥物的培養介質中培養48小時(T)。抗癌活性通過以下方程式1和2計算。方程式1formulaseeoriginaldocumentpage36方程式2T-Tz抗癌活性=-x100(如果Tz<T)藥物對抗癌細胞生長的抑制作用通過數據回歸獲得，使用了Lotus軟體，以％抑制表示。結果列於下表3中。表3tableseeoriginaldocumentpage36如表3所示，式1所示的5-(l，3-二芳基-lH-吡唑-4-基亞曱基)-噻唑烷-2，4-二酮衍生物對一些癌細胞有細胞毒性，包括A-549(非小細胞肺癌)、HT29(肝癌)和MCF-7(乳腺癌)。實施例IO:使用人肺瘤模型比較一些侯選CDC25B抑制劑的體內抗癌效果為了驗證本發明化合物的抗癌作用，我們在6-8周大的雄性棵鼠腹壁中皮下注射C33A人子宮癌細胞系。當腫瘤長到約50-80mm3大小時，分別將化合物78、作為陰性對照的0.2%吐溫80給予到腹腔中。使用順鉑(4mg/kg)作為陽性對照，其被廣泛地用作臨床實驗的抗癌劑。每次給予的劑量是0.25mL，每日一次，連續給予7天。肺瘤體積通過以下方程式3計算，通過測徑器測量長短軸。方程式3腫瘤體積-(短軸，mm)2x(長軸，mm)x0.523結果示於圖1中。如圖所示，化合物78顯示了可與順柏比擬的抗癌活性，但並沒有顯示任何負面反應，例如由順柏的毒性所導致的活動減少或缺乏食慾。因此，式1所示的5-(l，3-二芳基-lH-吡唑-4-基亞曱基)-噻唑烷-2，4-二酮衍生物能被用作低毒性的有較小副作用的抗癌劑。工業實用性從以上說明中能明顯地看出，式1所示的5-(l，3-二芳基-lH-吡唑-4-基亞曱基)-瘞唑烷-2，4-二酮衍生物及其藥學上可接受的鹽對CDC25B顯示了較好的抑制活性，其中CDC25B是一種磷酸酶，其在細胞分裂期間決定G2/M相轉變中發揮了重要作用。此外，鑑於其較小的副作用，例如活動減少和缺乏食慾，它們能被用作低毒性的抗癌劑。儘管參考了優選實施方案對本發明進行了詳細說明，但是本領域技術人員將能意識到由此產生的各種變形和替代都不背離本發明的精神和範圍，如所述權利要求所示的那樣。權利要求1.下式1所示化合物或其藥學上可接受的鹽:formulaseeoriginaldocumentpage2(1)其中X是氫、d-C4烷基、d-C4卣代烷基、卣原子、未被取代或被C廠C4烷基羧基取代的d-C4烷氧基、d-Ct卣代烷氧基、OC4烯氧基、CVC4醯基、C3-d。環烷基烷氧基、CVd。環烷氧基、羥基、氰基或硝基；Y是氫、d-C4烷基、卣原子、d-C4烷氧基、C3-C4烯氧基、C2-C4醯基、氰基或硝基；n是l-5的整數；和R是氫、d-C4烷基、CrC4烯基、CVC4炔基、C廣C4滷代烷基、CrC4烷氧基烷基或千基。2.根據權利要求1的式1所示化合物或其藥學上可接受的鹽，其中X是d-C4烷基、d-C4卣代烷基、卣原子、未被取代或被d-Ct烷基羧基取代的d-C4烷氧基、d-C4卣代烷氧基、Qrd。環烷基烷氧基、CVd。環烷氧基、羥基、CVC4烯氧基或硝基；Y是氫、C「C4烷基、g原子、C廣C4烷氧基、CVC4烯氧基、C2-C4醯基、氰基或硝基；n是l-3的整數；和R是氫、C廣C4烷基、d畫Ct滷代烷基、Q-C4烷氧基烷基或千基。3.製備下式1所示化合物或其藥學上可接受的鹽的方法，所述方法包括使下式2所示化合物與下式3所示化合物反應，得到下式4所示化合物；通過維爾斯邁爾-哈克反應使式4所示化合物轉化為下式5所示化合物；和使式5所示化合物與噻唑-2，4-二酮反應，得到式1所示化合物，其中R是H，或使產物與下式6所示化合物反應，得到式l所示化合物，其中R如下所述R—Z(6)其中X、Y、n和R如權利要求1中所定義；和Z是離去基團。4.抗癌組合物，其含有藥學有效量的下式1所示化合物或其藥學上可接受的鹽(l)其中X、Y、n和R如權利要求1中所定義。全文摘要本發明涉及5-(1，3-二芳基-1H-吡唑-4-基亞甲基)-噻唑烷-2，4-二酮衍生物或其藥學上可接受的鹽，製備它的方法和用作抗癌劑的含有它作為活性成分的組合物。文檔編號C07D417/06GK101146804SQ200680009465公開日2008年3月19日申請日期2006年2月3日優先權日2005年3月24日發明者千惠慶,盧載成,孫範碩,宋寶幹,徐珉庭,李啟炯,金亨來,金侊祿,金政基申請人:韓國化學研究院