一種採用複合微生物菌劑用於高羊茅抗低溫的方法
2024-04-11 00:19:05
一種採用複合微生物菌劑用於高羊茅抗低溫的方法
【專利摘要】本發明公開了一種風乾汙泥菌劑應用於高羊茅抗低溫的方法。它包括施氏假單胞菌+裡氏木黴+黃鏈黴菌100倍稀釋液或施氏假單胞菌+裡氏木黴+黃鏈黴菌200倍稀釋液。本發明的研製結果表明，施加施氏假單胞菌、裡氏木黴和灰黃鏈黴菌的複合菌劑能夠顯著提高高羊茅株高、地上生物量和葉綠素含量，提高其抗寒性。施加微生物菌劑後的高羊茅返青要比空白對照早5天左右，並且返青後的草坪外觀綜合指標也顯著高於空白對照。這充分顯示了該複合微生物菌劑在實際中的應用潛力。
【專利說明】一種採用複合微生物菌劑用於高羊茅抗低溫的方法
【技術領域】
[0001]本發明屬於環境保護【技術領域】，涉及風乾汙泥菌劑應用於高羊茅抗低溫的方法。【背景技術】
[0002]草坪作為城市園林綠化的重要組成部分，其發揮的生態效益和存在的經濟效益已逐漸被人們所熟知。首先，草坪作為一個生態系統，它是一個龐大的碳源貯存庫，草坪植被可以同化大氣中的CO2,而草坪土壤同樣可以吸大氣中的CO2。Lal研究表明，世界上草地土壤每年可以吸收沉積0.01-0.3Gt碳。因此減少了空氣中CO2，在一定程度上減輕溫室效應。其次，草坪所形成的緻密的地表覆蓋層和草根層具有良好的防治土壤侵蝕的作用。第三，草坪具有吸附空氣中SO2及NO2等有毒害的氣體同時釋放出供人類呼吸的氧氣。第四，草坪能減緩地表的日光輻射，太陽射到地面的熱量50%左右可以被綠色植物的蒸騰作用所吸收。第五，草坪還具有降低噪聲的作用。一塊20m寬的草坪，能減弱噪聲2分貝左右。最後，城市草坪是人類 文明的產物，它既可以美化環境，又可以不為人們提供休息、娛樂和競技的場所等重要功能。
[0003]草坪建植體系構建是現代城市生態建設中必須考慮的重要內容之一，是現代城市社會發展與經濟實力的一個有力體現，草坪建植體系的構建對於改善城市投資環境、吸引外資、促進旅遊等各個方面都起著不可忽略的作用，而城市中草坪綠化質量及面積也已成為評價城市環境質量的重要客觀標準。草坪綠化也日益受到人們的重視。
[0004]草坪對人類賴以生存的環境起著美化、保護和改善的良好作用。但是草坪草是生存於自然界的開放植物體系，雖然其地理分布範圍廣泛，如在高溫、乾旱到寒冷潮溼環境中都有分布，但其生命周期中也常遭受不良環境的影響。其中水分是制約草坪草成坪、生長及維持顏色青綠的主要環境因子。
[0005]草坪的數量和質量是城市綠化水平的重要標誌。目前，國內草坪建植的方式多種多樣，鋪設草皮雖然建坪成本高，但見效快，易操作，適用於所有草坪草，被廣大綠化工作者普遍接受。北京市園林綠化局曾在2007年的首屆京津地區草皮卷產業論壇上表示，到2020年，北京城市綠地率將達到44%至48%。天津泰達生態園林有限公司也在此介紹，濱海新區要建成宜居生態城區，規劃2010年綠化率達額到40%，綠地覆蓋率達到35%。因此，草皮卷市場空間非常大。冷季型草最適宜的播種時間是夏末初秋和早春，暖季型草坪草在春末夏初。在播種後40~50d後，草皮上的草坪草的覆蓋率達95%以上時即可移坪。所以一般在五、六月份第一批草皮卷才可上市。如果能夠縮短草皮生產的年周期，提早草皮上市時間，可大幅提高草皮卷的市場競爭力，提高人們的經濟收入。而低溫是限制草皮生產周期的主要因素。冬季低溫還影響草坪草的綠期應用範圍，降低其觀賞價值。因此，要提早草皮卷上市時間以及建植高質量的草坪就必須深入細緻地研究其抗寒性以便更好地在園林綠化中發揮其作用。
[0006]針對以上問題，目前研究集中於選取抗逆性強的草坪植物、應用保水劑、施加化學改良劑、施肥等措施。而微生物菌劑作為一種高效、環保的生物肥料已得到認可，其抗逆作用方面也有一定研究。
[0007]複合微生物菌劑由兩種或兩種以上且互不拮抗的微生物菌種按合適比例共同培養，充分發揮群體的聯合作用優勢，取得較佳應用效果的一種微生物製劑，此類菌劑一般具有有種類全、配伍合理、見效快、投資少、操作簡單、不造成二次汙染等優點，現已廣泛應用於農業、工業、醫藥和環保等各個領域。
[0008]施肥是農業生產及草坪養護管理中很重要的措施之一。在目前大部分選用的是無機肥。無機肥雖然能夠及時補充土壤養分，但是大量使用卻能對地表水、地下水以及空氣造成汙染，對環境構成威脅。施加微生物肥料是在較低的生態影響條件下維持較高產量的更加和諧的一種施肥方式.比如最經典的菌根真菌、根瘤菌、根際促生細菌等。它的優點主要表現在:1.創造良好的根際生態環境。2.提高土壤以及空氣造成汙染的供肥能力3.對環境資源的有效利用。4.降低作物對化肥的依賴。5.抑制病蟲害的發生。其原因一是有益細菌的大量繁殖大植物根隙區域形成優勢種群，抑制了病原微生物生長繁殖，降低了植物酶、多酚氧化酶等，參與植物的防禦反應，提高植物的抗病蟲害能力。。6.減少農藥汙染等具有重要作用。同時，以城鄉有機廢棄物為基質，採用現代化的工業技術，製造成具有多種功能(如固氮、解磷、活鉀等)再生型複合生物肥料，將對資源的循環利用，實現生態經濟、社會效益一體化同樣具有重要意義。
[0009]自20世紀70年代以來，歐美日本等國家或地區都相繼研製成功了一些複合菌劑，很多已經開始進行大規模的生產，並形成了系列化的產品，主要用於處理生活汙水，工農業廢水以及其他一些化合物汙染的治理。我國國內微生物發展狀況經歷了從50年代到90年代，從理論到實踐，從單一菌種的利用到多個的混合應用，產品也從根瘤菌劑發展到複合微生物菌劑，相繼取得了一些成果。
[0010]目前多數研究已表明，微生物製劑應用於農業生產，能促進植物生長，且無毒、無公害、無汙染，能持久均衡地供給農作物氮磷鉀元素的，被廣泛開發用作生物肥料。目前研發的生物菌肥的熱點產品主要包括:有機物料腐熟菌劑(也稱發酵菌劑)、土壤修復菌劑、根瘤菌劑和溶磷菌劑、菸草等經濟作物專用的功能菌劑、生物有機肥、抗旱菌劑等。美國哥斯大黎加大學應用EM技術來種植香蕉，有效減小了香蕉葉斑病的發生和線蟲類的侵襲，大大提高了其營養價值和生產效率。
[0011]另外，複合微生物菌劑在畜禽養殖和水產養殖方面也有很明顯的作用。複合微生物菌劑能防病抗病，提高成活率，提高生產性能，降低飼養成本，增加經濟效，改善產品品質，生產綠色食品。倪永珍等對雞進行400d的EM飼餵結果表明，與對照組比較雞的死亡率平均下降了 35.5%。據石專林報導，在飼糧中添加5%的EM發酵飼料，可使肉仔雞增重提高
10.3%，料肉比下降7.8%。劉華周等試驗也表明，蛋雞日糧中EM發酵飼料佔20%時，蛋殼厚度增加6.99%，蛋白哈氏單位提高10.31%，蛋黃顏色提高1.5羅氏級。
[0012]目前，給草坪草施加微生物菌劑已有報導。王曉潔，真菌可以改良高羊茅、黑麥草等草坪植物的抗逆作用，提高了其抗寒性、抗旱性、抗水分脅迫以及抵抗生物危害的影響。有研究發現接種菌根真菌可使多年生黑麥草根系受到侵染，並可明顯增加多年生黑麥草葉片中葉綠素含量，VA菌根可促進黑麥草對P、F e、Cu、M g、K、B、S 1、S和N等礦質養分的吸收，但卻使黑麥草組織中M η的濃度降低。還研究表明，在乾旱的條件下，叢枝菌根的侵染、菌絲的發育均良好，接種從枝菌根後，增強了白三葉草的抗旱能力。有也對五種押寶桿菌進行了研究，結果發現施加過微生物菌劑的黑麥草與沒有施加菌劑的對照相t匕，其株高、乾重、葉綠素含量、根系體積和總表面積、根系活力等都顯著升高。
[0013]城市汙泥是城市汙水處理廠在各級汙水處理淨化後所產生的含水量75%_99%的固體或者流體狀物質。它包括汙水中的泥砂、纖維、動植物殘體等固體顆粒及其凝結的絮狀物，各種膠體、有機物及吸附的金屬元素、微生物、病菌、蟲卵、雜草種子等綜合固體物質。城市汙泥中出現的微生物主要由細菌、放線菌、真菌以及原生動物和後生動物等，其中細菌是最主要成分，細菌主要有菌膠團細菌和絲狀菌，數量可佔汙泥中微生物總量的90%~95%左右。
[0014]20世紀80年代之前，活性汙泥菌群的研究主要以傳統分離培養法為主。該方法從活性汙泥中發現的主要優勢菌群有:動膠桿菌屬、叢毛單胞菌屬、不動桿菌屬、螺菌屬、產鹼桿菌屬、短桿菌屬、黃桿菌屬和假單胞菌屬等。但是後來大量研究發現，在活性汙泥中經典純培養方法能夠培養的細菌數 量只佔活性汙泥微生物總數的1%~15%。
[0015]20世紀80年代後期，隨著以16 S r RNA為主要基石的細菌分子分類學的發展，PCR技術、電泳技術、克隆庫技術、螢光原位雜交和流式細胞術逐漸成為研究活性汙泥菌群的主要手段，活性汙泥中菌群的複雜性和多樣性也以驚人的速度被人們認識，大量傳統檢測方法未能發現卻在活性汙泥中起關鍵作用的微生物陸續被發現，如具有除磷作用的類紅環菌、小月菌、類Tetr asphaera的棒狀菌、俊片菌等；具有脫氮作用的反硝化生絲微菌屬、固氮弧菌屬相關菌、類硝化螺菌等；與汙泥泡沫有關的諾卡氏菌形放線菌、絲狀菌和等。
[0016]近期的相關文獻及實際生產表明:微生物菌劑在促進植物生長的同時就還能夠明顯提高植物的抗病、抗旱能力，降低土壤PH和含鹽量，提高植物的抗凍能力。儘管植物接種微生物的效應研究報導較多，但大部分研究工作涉及的微生物菌劑只限於從土壤或垃圾堆肥中提取。有關汙泥內部微生物菌種之間共生及相互影響關係，以及汙泥微生物菌劑應用對植物生長和生理特性的影響方面的研究較少；而在草坪植物抗逆中的應用則更是尚無文獻報導。
[0017]城市汙泥含有豐富的微生物種類，雖然有些是條件致病菌，但是也含有很多對植物有益菌種。例如假單胞菌的生防促生作用應經得到公認，這方面的研究報導也很多。固氮弧菌屬有著高效的固氮作用，他能夠侵入水稻、小麥和高粱根內，並提高了幼苗含氮量。並且汙泥為微生物提供了一個天然的馴化場所，其微生物具有潛在利用價值。因此篩選汙泥中微生物種，群篩選出合適的有益微生物菌株，配製成複合微生物菌劑，研究其對植物的促生作用已經植物在寒冷條件下的影響是完全可行的。
[0018]前面已經探討了室內條件下，施加汙泥複合微生物菌劑對高羊茅生理生態的影響，包括正常條件下汙泥微生物菌劑對高羊茅生理生態的影響以及水分脅迫和鹽鹼脅迫條件下，汙泥微生物菌劑對高羊茅抗逆性作用的提高。目前關於微生物菌劑對植物抗逆性方面的研究主要是測定其生理指標，如生物量、保護酶、丙二醛、可溶性糖等指標。但有關汙泥微生物菌劑對草坪返青情況以及返青後草坪外觀綜合評定的研究的報導非常少見。為增強汙泥微生物菌劑能提高草坪植物抗逆性的依據，同時也更為貼近實際應用，本技術在寒冷脅迫條件下，施加汙泥微生物菌劑，在測定高羊茅生理指標的基礎上，同時對高羊茅返青情況以及返青後草坪外觀綜合指標進行了測定。為汙泥微生物在低溫條件下應用草坪提供技術。
【發明內容】
[0019]本發明的目的在於提供一種採用複合微生物菌劑用於高羊茅抗低溫的方法。本發明研製結果表明，施加施氏假單胞菌、裡氏木黴和灰黃鏈黴菌的複合菌劑能夠顯著提高高羊茅株高、地上生物量和葉綠素含量，提高其抗寒性。為實現此目的，本發明提供如下的技術方案:
一種複合微生物菌劑，其特徵在於它是由下述成分組成:
施氏假單胞菌+裡氏木黴+黃鏈黴菌100倍稀釋液或 施氏假單胞菌+裡氏木黴+黃鏈黴菌200倍稀釋液；
其中施氏假單胞菌:裡氏木黴:黃鏈黴菌的體積份數比為1:1:1 所述的原料為:施氏假單胞菌+裡氏木黴+黃鏈黴菌100倍稀釋液。
[0020]本發明進一步公開了一種採用複合微生物菌劑用於高羊茅抗低溫的方法，其特徵在於按如下的步驟進行:
(1)材料的選擇:
選取挑選籽粒飽滿、均勻一致的高羊茅(Festuca arundinacea L.)種子為試驗材料；供試土壤為 普通園土；
(2)試驗方法
複合微生物菌劑製備:選取施氏假單胞菌、裡氏木黴和灰黃鏈黴菌，將分離出的菌種純化培養2代，取活化菌種，接入裝有200 mL液體培養基的三角瓶中，180 r/min適溫培養，選用600 nm波長進行比濁測定，以菌懸液的0D600 nm值為縱坐標，培養時間為橫坐標，繪製微生物的生長曲線；選取對數生長期的菌種，按照下面要求配製複合微生物菌劑；
施氏假單胞菌+裡氏木黴+黃鏈黴菌100倍稀釋液或 施氏假單胞菌+裡氏木黴+黃鏈黴菌200倍稀釋液；
其中施氏假單胞菌:裡氏木黴:黃鏈黴菌的體積份數比為1:1:1 ;3菌種的菌落數在(2.15±0.03) X 109/ml~(2.07±0.07) X 109/ml 之間，假單胞菌的 0D600 nm 值為 0.592 ；
(3)實驗設計
試驗採取室內盆栽的方法，在直徑為9 cm的培養皿中加入100 g滅菌土壤，均勻撒入
0.5 g飽滿的高羊茅種子。溫室種植，每天早晚各澆I次水。待植物生長到15 d後，分別加入施氏假單胞菌、裡氏木黴及灰黃鏈黴菌的複合微生物菌劑的100倍稀釋液(CM1)和200倍稀釋液(CM2)各15ml (菌液用無菌水稀釋)，各處理菌液均按體積比為1:1:1的比例混合後用無菌水稀釋。對照組(CK)加入相同量的無菌培養基，實驗設4次重複。草坪植物培養期間，溫度為12~20°C，相對溼度為25~45%，光照為透入室內的自然光，持續處理20 d後測定各指標。測定高羊茅的株高、單株生物量以及葉綠素。
[0021]在測定完上述指標後再次加入複合微生物菌劑15ml，然後將植物進行低溫過度，過度期的溫度為5~12°C。過度持續一周。然後按照普通草坪過冬準備來去掉高羊茅中的乾草、爛草、枯草，然後將高羊茅剪至4cm左右，澆足越冬水，最後將高羊茅連帶培養容器一起放到留有小孔的封口紙箱內，放到陰面無暖氣的屋子裡過冬。過冬期間溫度為_8°(T10°C。持續40天後將植物移到溫室培養，進行返青處理，測定其返青情況。
[0022]I材料與方法1.1試驗材料
選取挑選籽粒飽滿、均勻一致的高羊茅(Festuca arundinacea L.)種子為試驗材料。供試土壤為天津師範大學校內園土，pH 7.44，飽和含水量0.58 ml/g，有機質4.68%，全氮 0.21%，有效磷 22.03 mg/kg，全鉀 45.61g/kg ；
(1)汙泥的選擇:
城市汙泥取自汙水處理廠；供試土壤取自5-15 cm表層土壤,土壤質地為砂質粘土，ρΗ7.44，容重0.87 g/cm,有機質含量4.68%，全氮0.21%，全磷0.15%，全鉀0.65%，有效磷22.03 mg/kg，飽和含水量 0.58 mL/g ；
(2)菌株的培養
稱取新鮮汙泥，採用稀釋分離法製備10_3、10_4、10_5、10_6的汙泥懸浮液。根據所分離的微生物，取不同濃度的汙泥懸浮液(真菌取10_3、10_4，放線菌取10_4、10_5，細菌取10_5、10_6)，搖勻後吸取0.2 mL加入到預先制好的平板中。真菌用馬丁氏瓊脂平板；放線菌用高氏一號瓊脂平板；細菌用牛肉膏蛋白腖平板。用滅菌的塗布器塗抹均勻，每處理重複3次，28°C培養。根據平板 內菌落的形態、大小、色澤和生長速度等特點，從每個樣品儘可能多的挑取單菌落劃線純化。依據菌落培養性狀和形態特徵對菌株進行歸類並統計數量。確定優勢菌株，進行編號保存，待進一步鑑定。
[0023](3)菌種的鑑定
鏡檢:細菌的鑑定採用革蘭氏染色法，放線菌採用印片法，絲狀真菌直接鏡下觀察。
[0024]PCR鑑定:直接挑取單菌體溶於100 UL高純水中，沸水中煮10 min裂解菌體，使DNA釋放出來，直接作為PCR反應的模版。細菌和放線菌採用通用引物27f (5』 一AGAGTTTGATCCTGGCTCAG—3，)和 1492R(5』一GGTTACCTTGTTACGACTT — 3，)進行PCR擴增 16SrRNA基因。真菌採用真菌核糖體18S rDNA的通用引物ITSl (5，一TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3』)和 ITS4 (5，— TCCTCCGCTTATTGATATGC 一3，)進行 PCR 擴增。PCR 反應程序如下:940C 2 min, 940C I min,57°C I min,72°C I min，25 個循環；72°C 10 min。擴增產物送至上海美吉基因公司測序。測序結果在NCBI網站上用BLAST軟體與GenBank核酸資料庫中相關種屬的16S rDNA和18S rDNA序列進行同源性比較。
[0025](4)菌劑的配製
選取對植物生長有利的細菌、真菌、放線菌各I種，分別為假單胞菌、木黴和鏈黴菌，將分離出的菌種純化培養2代，取活化菌種，接入裝有200 mL液體培養基的三角瓶中，180 r/min適溫培養，選用600 nm波長進行比濁測定，以菌懸液的0D600 nm值為縱坐標，培養時間為橫坐標，繪製微生物的生長曲線。選取對數生長期的菌種，配製成菌劑:
1.2試驗方法
複合微生物菌劑製備:選取對植物生長有利的細菌、真菌、放線菌各I種，分別為施氏假單胞菌、裡氏木黴和灰黃鏈黴菌，將分離出的菌種純化培養2代，取活化菌種，接入裝有200 mL液體培養基的三角瓶中，180 r/min適溫培養，選用600 nm波長進行比濁測定，以菌懸液的0D600 nm值為縱坐標,培養時間為橫坐標,繪製微生物的生長曲線。選取對數生長期的菌種，按照下面要求配製複合微生物菌劑。
[0026]施氏假單胞菌+裡氏木黴+黃鏈黴菌100倍稀釋液或 施氏假單胞菌+裡氏木黴+黃鏈黴菌200倍稀釋液；其中施氏假單胞菌:裡氏木黴:黃鏈黴菌的體積份數比為1:1:1。
[0027]1.3實驗設計
試驗採取室內盆栽的方法，在直徑為9 cm的培養皿中加入100 g滅菌土壤，均勻撒入
0.5 g飽滿的高羊茅種子。溫室種植，每天早晚各澆I次水。待植物生長到15 d後，分別加入施氏假單胞菌、裡氏木黴及灰黃鏈黴菌的複合微生物菌劑的100倍稀釋液(CM1)和200倍稀釋液(CM2)各15ml，對照組(CK)加入相同量的無菌培養基，實驗設4次重複。草坪植物培養期間，溫度為12~20°C，相對溼度為25~45%，光照為透入室內的自然光，持續處理20d後測定各指標。測定聞羊矛的株聞、單株生物量以及葉綠素。
[0028]在測定完上述指標後再次加入複合微生物菌劑15ml，然後將植物進行低溫過度，過度期的溫度為5~12°C。過度持續一周。然後按照普通草坪過冬準備來去掉高羊茅中的乾草、爛草、枯草，然後將高羊茅剪至4cm左右，澆足越冬水，最後將高羊茅連帶培養容器一起放到留有小孔的封口紙箱內，放到陰面無暖氣的屋子裡過冬。過冬期間溫度為_8°C~10°C。持續40天後將植物移到溫室培養，進行返青處理，測定其返青情況。
[0029]1.4測定指標
1.4.1低溫脅迫條件下高羊茅動態株高變化
高羊茅培植15d後，施加菌劑，10 d第一次測量株高，後每5d測量一次，共3次。
[0030]1.4.2高羊茅單株生物量
施加菌劑20d後，從個處理中隨機選取10株高羊茅植株，稱量，記錄鮮重及乾重。以其平均做為該處理的單株生物量。
[0031]1.4.3葉綠素含量的測定
葉綠素含量的測定:取0.1 g葉片，剪成1-2 mm碎片，浸泡於丙酮:乙醇(V:V=1:1)溶液中24小時,浸泡液為待測液。用分光光度計于波長633 nm和645 nm下測量吸光值,並根據公式計算葉綠素含量；計算公式結果計算:
【權利要求】
1.一種複合微生物菌劑，其特徵在於它是由下述成分組成: 施氏假單胞菌+裡氏木黴+黃鏈黴菌100倍稀釋液或 施氏假單胞菌+裡氏木黴+黃鏈黴菌200倍稀釋液； 其中施氏假單胞菌:裡氏木黴:黃鏈黴菌的體積份數比為1:1:1。
2.權利要求1所述的複合微生物菌劑，其中所述的原料為:施氏假單胞菌+裡氏木黴+黃鏈黴菌100倍稀釋液。
3.一種採用複合微生物菌劑用於高羊茅抗低溫的方法，其特徵在於按如下的步驟進行: (1)材料的選擇: 選取挑選籽粒飽滿、均勻一致的高羊茅(Festuca arundinacea L.)種子為試驗材料；供試土壤為普通園土； (2)試驗方法 複合微生物菌劑製備:選取施氏假單胞菌、裡氏木黴和灰黃鏈黴菌，將分離出的菌種純化培養2代，取活化菌種，接入裝有200 mL液體培養基的三角瓶中，180 r/min適溫培養，選用600 nm波長進行比濁測定，以菌懸液的0D600 nm值為縱坐標，培養時間為橫坐標，繪製微生物的生長曲線；選取對數生長期的菌種，按照下面要求配製複合微生物菌劑； 施氏假單胞菌+裡氏木黴+黃鏈黴菌100倍稀釋液或 施氏假單胞菌+裡氏木黴+黃鏈黴菌200倍稀釋液； 其中施氏假單胞菌:裡氏木黴:黃鏈黴菌的體積份數比為1:1:1; 3菌種的菌落數在(2.15±0.03) XlO9Ail~(2.07±0.07) X 109/ml之間，假單胞菌的0D600 nm 值為 0.592 ； (3)實驗設計 試驗採取室內盆栽的方法，在直徑為9 cm的培養皿中加入100 g滅菌土壤，均勻撒入0.5 g飽滿的高羊茅種子，溫室種植，每天早晚各澆I次水，待植物生長到15 d後，分別加入施氏假單胞菌、裡氏木黴及灰黃鏈黴菌的複合微生物菌劑的100倍稀釋液和200倍稀釋液各15ml，草坪植物培養期間，溫度為12~20°C，相對溼度為25~45%，光照為透入室內的自然光，持續處理20 d後測定各指標,測定聞羊矛的株聞、單株生物量以及葉綠素； 在測定完上述指標後再次加入複合微生物菌劑15ml，然後將植物進行低溫過度，過度期的溫度為5~12°C，過度持續一周，然後按照普通草坪過冬準備來去掉高羊茅中的乾草、爛草、枯草，然後將高羊茅剪至4-5 cm，澆足越冬水，最後將高羊茅連帶培養容器一起放到留有小孔的封口紙箱內，放到陰面無暖氣的屋子裡過冬，過冬期間溫度為-8-10°C，持續40天後將植物移到溫室培養，進行返青處理，測定其返青情況。
4.複合微生物菌劑在促進高羊茅株高、地上生物量和葉綠素含量提高其抗寒性方面的應用。
5.複合微生物菌劑在 促進高羊茅低溫條件下株高、乾鮮重提高方面的應用。
6.複合微生物菌劑在顯著提高低溫條件下高羊茅葉綠素含量，提高其抗寒性方面的應用。
【文檔編號】A01N63/00GK103931664SQ201410191237
【公開日】2014年7月23日 申請日期:2014年5月8日 優先權日:2014年5月8日
【發明者】趙樹蘭, 多立安, 王志旭 申請人:天津師範大學