一種精製銀杏黃酮的方法

2023-10-10 09:50:44

專利名稱：一種精製銀杏黃酮的方法
技術領域：
本發明涉及總黃酮的提取製備方法，尤其是使用環糊精包合和兩步超濾相結合從銀杏葉中提取得到總黃酮的方法。
背景技術：
銀杏(ginkgo biloba)又名白果，屬裸子植物，是世界上最為古老的樹種之一，被譽為「活化石」。銀杏是我國的特產之物，我國銀杏種質資源極其豐富，全國銀杏葉產量在2萬噸(以乾重計)以上，佔世界總量的70％左右。銀杏葉中含有黃酮化合物(flavonoids)、萜類化合物(terpenoids)等生物活性成分。這些成分具有相當強烈的抗氧化作用，能清除生物體內過剩的自由基、防止組織體內脂質過氧化、提高人體機體的免疫力等，是首選的治療心腦血管疾病的天然藥物。據報導，銀杏葉中主要的黃酮類化合物槲皮素、山奈素和異鼠李素等對於改善心、腦血液循環，降低血清膽固醇，鬆弛支氣管有很好的療效。上個世紀60年代初，德國Willamar Schwabe首次從銀杏葉中獲得銀杏葉提取物(EGb761)並用於治療心血管疾病以來，它已成為國際近代植物藥學研究開發的主要熱點之一。目前，中國、德國和法國等已將銀杏製劑列為治療藥物，而其他許多國家也將其列為保健食品或非處方用藥。美國開發出的銀杏保健食品已經獲得FDA的批准，使人們對銀杏葉的保健藥用價值更加重視。
現在銀杏葉黃酮苷生產工藝主要有溶劑萃取法、超臨界萃取法和樹脂吸附法。其中溶劑萃取法成本高，超臨界萃取法設備投入大，目前尚未工業化。國內銀杏葉提取物(GBE)的生產基本採用樹脂吸附法，但是該工藝過程同樣存在操作時間長，對有機溶劑消耗較多的缺點。
由於黃酮類物質的水溶性較差，採用乙醇等有機溶劑的消耗量大，產品中易殘留有機溶劑，以上問題都使得黃酮的生產和應用受到了很大的限制。因此，積極開發簡便易行、快速高效的新提取製備方法以生產高純度、高水溶性的銀杏黃酮產品顯得至關重要。
超濾膜分離技術也已用於研究銀杏黃酮的純化過程，其特點是可以有效地去除各種雜質，提高了產物的澄清度，儲存穩定性好；分離過程在常溫下進行，因而產物中有效成分的生物活性和理化性質穩定；生產工藝流程簡單，生產周期短；在密閉空間中操作，節省了有機溶劑，不會引入新的雜質。

發明內容
本發明的目的在於提供一種利用環糊精及其衍生物對銀杏黃酮進行包合，從而改變黃酮分子量的大小，實現超濾過程中的分子量差異，並通過兩步超濾過程提高產物中黃酮含量的方法。同時環糊精包合後也能夠有效的增加黃酮的水溶性及藥效。
本發明的技術方案如下一種精製銀杏黃酮的方法，它基本上由下列步驟組成步驟1.將1份質量的銀杏葉提取物(GBE)溶於200份質量的乙醇質量分數為60％的乙醇-水中；步驟2.將步驟1中的GBE溶液在0.05～0.3MPa壓力和10～50℃溫度下進行第一次超濾，超濾膜為截留分子量為5000，10000或30000dalton的超濾膜，收集透過液；步驟3.將步驟2收集的透過液減壓濃縮，再將1份質量的蒸乾後的殘留物溶於50份質量的無水乙醇；步驟4.在步驟3所得的溶液中加入β-環糊精或改性β-環糊精，使溶液中黃酮與β-環糊精或改性β-環糊精的物質的量之比為1∶9～1∶1，先在20～90℃水浴中反應15min～5h，再在常溫下反應30min～24h；步驟5.將步驟4中反應後的產物在0.05～0.3MPa壓力和10～50℃溫度下進行第二次超濾，超濾膜為截留分子量為5000，10000或30000dalton的超濾膜，收集截留的濃縮後的液體，即得到精製的銀杏黃酮乙醇溶液。
上述的精製銀杏黃酮的方法，步驟4中所述的改性β-環糊精可以是甲基化β-環糊精或羥丙基化β-環糊精。
本發明的優點是增加了銀杏黃酮的水溶性，其分子量也增大數倍，因此可以用更加經濟環保的溶劑來溶解，並且使超濾膜對銀杏黃酮具有更強的選擇性。該製備方法不僅可節省大量的有機和無機試劑，使得產物中銀杏黃酮的含量增高，品質穩定，工藝流程簡單，生產周期短，減小了傳統有機溶劑提取法中殘存的溶劑給產品質量帶來的危害，從而大大增加了經濟效益。
具體實施例方式
實施例1將20g銀杏葉提取物(GBE)溶於5000mL乙醇質量分數為60％的乙醇-水中。溶液在0.15MPa壓力和30℃溫度下進行第一次超濾。選擇截留分子量為10000dalton的聚偏氟乙烯(PVDF)超濾膜(上海市新亞淨化器件廠提供，下同)。收集透過液。將收集的透過液蒸乾，再將1份質量的蒸乾後的粉末溶於50份質量的無水乙醇中。逐漸加入甲基化β-環糊精，使溶液中黃酮與甲基化β-環糊精的物質的量之比為1∶3。先在60℃水浴中反應2h，再在常溫下反應4h。反應後的產物在0.15MPa壓力和30℃溫度下進行第二次超濾。選擇截留分子量為5000dalton的PVDF超濾膜。收集濃縮後的液體，即得到最終產品。經測定，最終產品中的黃酮百分含量從原來的24wt.％提高到38.4wt.％，回收率為63％。
實施例2將20g銀杏葉提取物(GBE)溶於5000mL乙醇質量分數為60％的乙醇-水中。溶液在0.15MPa壓力和30℃溫度下進行第一次超濾。選擇截留分子量為10000dalton的PVDF超濾膜。收集透過液。將收集的透過液蒸乾，再將蒸乾後的粉末溶於無水乙醇中。逐漸加入甲基化β-環糊精，使溶液中黃酮與甲基化β-環糊精的物質的量之比為1∶9。先在60℃水浴中反應2h，再在常溫下反應4h。反應後的產物在0.15MPa壓力和30℃溫度下進行第二次超濾。選擇截留分子量為5000dalton的PVDF超濾膜。收集濃縮後的液體，即得到最終產品。經測定，最終產品中的黃酮百分含量從原來的24wt.％提高到40wt.％，回收率為64％。
實施例3將20g銀杏葉提取物(GBE)溶於5000mL乙醇質量分數為60％的乙醇-水中。溶液在0.15MPa壓力和30℃溫度下進行第一次超濾。選擇截留分子量為10000dalton的PVDF超濾膜。收集透過液。將收集的透過液蒸乾，再將蒸乾後的粉末溶於無水乙醇中。逐漸加入甲基化β-環糊精，使溶液中黃酮與甲基化β-環糊精的物質的量之比為1∶6。先在60℃水浴中反應2h，再在常溫下反應4h。反應後的產物在0.15MPa壓力和30℃溫度下進行第二次超濾。選擇截留分子量為5000dalton的PVDF超濾膜。收集濃縮後的液體，即得到最終產品。經測定，最終產品中的黃酮百分含量從原來的24wt.％提高到39.4wt.％，回收率為63.2％。
實施例4將20g銀杏葉提取物(GBE)溶於5000mL乙醇質量分數為60％的乙醇-水中。溶液在0.15MPa壓力和30℃溫度下進行第一次超濾。選擇截留分子量為10000dalton的PVDF超濾膜。收集透過液。將收集的透過液蒸乾，再將蒸乾後的粉末溶於無水乙醇中。逐漸加入甲基化β-環糊精，使溶液中黃酮與甲基化β-環糊精的物質的量之比為1∶1。先在60℃水浴中反應2h，再在常溫下反應4h。反應後的產物在0.15MPa壓力和30℃溫度下進行第二次超濾。選擇截留分子量為5000dalton的PVDF超濾膜。收集濃縮後的液體，即得到最終產品。經測定，最終產品中的黃酮百分含量從原來的24wt.％提高到34.6wt.％，回收率為55％。
實施例5將20g銀杏葉提取物(GBE)溶於5000mL乙醇質量分數為60％的乙醇-水中。溶液在0.15MPa壓力和30℃溫度下進行第一次超濾。選擇截留分子量為10000dalton的PVDF超濾膜。收集透過液。將收集的透過液蒸乾，再將蒸乾後的粉末溶於無水乙醇中。逐漸加入甲基化β-環糊精，使溶液中黃酮與甲基化β-環糊精的物質的量之比為1∶3。先在20℃水浴中反應15min，再在常溫下反應30min。反應後的產物在0.15MPa壓力和30℃溫度下進行第二次超濾。選擇截留分子量為5000dalton的PVDF超濾膜。採集濃縮後的液體，即得到最終產品。經測定，最終產品中的黃酮百分含量從原來的24wt.％提高到32.5wt.％，回收率為53％。
實施例6將20g銀杏葉提取物(GBE)溶於5000mL乙醇質量分數為60％的乙醇-水中。溶液在0.15MPa壓力和30℃溫度下進行第一次超濾。選擇截留分子量為10000dalton的PVDF超濾膜。收集透過液。將收集的透過液蒸乾，再將蒸乾後的粉末溶於無水乙醇中。逐漸加入甲基化β-環糊精，使溶液中黃酮與甲基化β-環糊精的物質的量之比為1∶3。先在40℃水浴中反應30min，再在常溫下反應2h。反應後的產物在0.15MPa壓力和30℃溫度下進行第二次超濾。選擇截留分子量為5000dalton的PVDF超濾膜。收集濃縮後的液體，即得到最終產品。經測定，最終產品中的黃酮百分含量從原來的24wt.％提高到35.1wt.％，回收率為54％。
實施例7將20g銀杏葉提取物(GBE)溶於5000mL乙醇質量分數為60％的乙醇-水中。溶液在0.15MPa壓力和30℃溫度下進行第一次超濾。選擇截留分子量為10000dalton的PVDF超濾膜。收集透過液。將收集的透過液蒸乾，再將蒸乾後的粉末溶於無水乙醇中。逐漸加入甲基化β-環糊精，使溶液中黃酮與甲基化β-環糊精的物質的量之比為1∶3。先在90℃水浴中反應5h，再在常溫下反應24h。反應後的產物在0.15MPa壓力和30℃溫度下進行第二次超濾。選擇截留分子量為5000dalton的PVDF超濾膜。收集濃縮後的液體，即得到最終產品。經測定，最終產品中的黃酮百分含量從原來的24wt.％提高到39.1wt.％，回收率為65％。
實施例8將20g銀杏葉提取物(GBE)溶於5000mL乙醇質量分數為60％的乙醇-水中。溶液在0.15MPa壓力和30℃溫度下進行第一次超濾。選擇截留分子量為10000dalton的PVDF超濾膜。收集透過液。將收集的透過液蒸乾，再將蒸乾後的粉末溶於無水乙醇中。逐漸加入羥丙基化β-環糊精，使溶液中黃酮與羥丙基化β-環糊精的物質的量之比為1∶3。先在60℃水浴中反應2h，再在常溫下反應4h。反應後的產物在0.15MPa壓力和30℃溫度下進行第二次超濾。選擇截留分子量為5000dalton的PVDF超濾膜。收集濃縮後的液體，即得到最終產品。經測定，最終產品中的黃酮百分含量從原來的24wt.％提高到34.8wt.％，回收率為53％。
實施例9將20g銀杏葉提取物(GBE)溶於5000mL乙醇質量分數為60％的乙醇-水中。溶液在0.15MPa壓力和30℃溫度下進行第一次超濾。選擇截留分子量為10000dalton的PVDF超濾膜。收集透過液。將收集的透過液蒸乾，再將蒸乾後的粉末溶於無水乙醇中。逐漸加入β-環糊精，使溶液中黃酮與β-環糊精的物質的量之比為1∶3。先在60℃水浴中反應2h，再在常溫下反應4h。反應後的產物在0.15MPa壓力和30℃溫度下進行第二次超濾。選擇截留分子量為5000dalton的PVDF超濾膜。收集濃縮後的液體，即得到最終產品。經測定，最終產品中的黃酮百分含量從原來的24wt.％提高到32.6wt.％，回收率為50％。
實施例10將20g銀杏葉提取物(GBE)溶於5000mL乙醇質量分數為60％的乙醇-水中。溶液在0.05MPa壓力和30℃溫度下進行第一次超濾。選擇截留分子量為10000dalton的PVDF超濾膜。收集透過液。將收集的透過液蒸乾，再將蒸乾後的粉末溶於無水乙醇中。逐漸加入甲基化β-環糊精，使溶液中黃酮與甲基化β-環糊精的物質的量之比為1∶3。先在60℃水浴中反應2h，再在常溫下反應4h。反應後的產物在0.05MPa壓力和30℃溫度下進行第二次超濾。選擇截留分子量為5000dalton的PVDF超濾膜。收集濃縮後的液體，即得到最終產品。經測定，最終產品中的黃酮百分含量從原來的24wt.％提高到31.4wt.％，回收率為58％。
實施例11將20g銀杏葉提取物(GBE)溶於5000mL乙醇質量分數為60％的乙醇-水中。溶液在0.2MPa壓力和30℃溫度下進行第一次超濾。選擇截留分子量為10000dalton的PVDF超濾膜。收集透過液。將收集的透過液蒸乾，再將蒸乾後的粉末溶於無水乙醇中。逐漸加入甲基化β-環糊精，使溶液中黃酮與甲基化β-環糊精的物質的量之比為1∶3。先在60℃水浴中反應2h，再在常溫下反應4h。反應後的產物在0.2MPa壓力和30℃溫度下進行第二次超濾。選擇截留分子量為5000dalton的PVDF超濾膜。收集濃縮後的液體，即得到最終產品。經測定，最終產品中的黃酮百分含量從原來的24wt.％提高到39.2wt.％，回收率為65％。
實施例12將20g銀杏葉提取物(GBE)溶於5000mL乙醇質量分數為60％的乙醇-水中。溶液在0.3MPa壓力和30℃溫度下進行第一次超濾。選擇截留分子量為10000dalton的PVDF超濾膜。收採集透過液。將收集的透過液蒸乾，再將蒸乾後的粉末溶於無水乙醇中。逐漸加入甲基化β-環糊精，使溶液中黃酮與甲基化β-環糊精的物質的量之比為1∶3。先在60℃水浴中反應2h，再在常溫下反應4h。反應後的產物在0.3MPa壓力和30℃溫度下進行第二次超濾。選擇截留分子量為5000dalton的PVDF超濾膜。收集濃縮後的液體，即得到最終產品。經測定，最終產品中的黃酮百分含量從原來的24wt.％提高到40.1wt.％，回收率為66％。
實施例13將20g銀杏葉提取物(GBE)溶於5000mL乙醇質量分數為60％的乙醇-水中。溶液在0.05MPa壓力和10℃溫度下進行第一次超濾。選擇截留分子量為10000dalton的PVDF超濾膜。收集透過液。將收集的透過液蒸乾，再將蒸乾後的粉末溶於無水乙醇中。逐漸加入甲基化β-環糊精，使溶液中黃酮與甲基化β-環糊精的物質的量之比為1∶3。先在60℃水浴中反應2h，再在常溫下反應4h。反應後的產物在0.05MPa壓力和10℃溫度下進行第二次超濾。選擇截留分子量為5000dalton的PVDF超濾膜。收集濃縮後的液體，即得到最終產品。經測定，最終產品中的黃酮百分含量從原來的24wt.％提高到30.3wt.％，回收率為56％。
實施例14將20g銀杏葉提取物(GBE)溶於5000mL乙醇質量分數為60％的乙醇-水中。溶液在0.15MPa壓力和10℃溫度下進行第一次超濾。選擇截留分子量為10000dalton的PVDF超濾膜。收集透過液。將收集的透過液蒸乾，再將蒸乾後的粉末溶於無水乙醇中。逐漸加入甲基化β-環糊精，使溶液中黃酮與甲基化β-環糊精的物質的量之比為1∶3。先在60℃水浴中反應2h，再在常溫下反應4h。反應後的產物在0.15MPa壓力和10℃溫度下進行第二次超濾。選擇截留分子量為5000dalton的PVDF超濾膜。收集濃縮後的液體，即得到最終產品。經測定，最終產品中的黃酮百分含量從原來的24wt.％提高到37.7wt.％，回收率為62％。
實施例15將20g銀杏葉提取物(GBE)溶於5000mL乙醇質量分數為60％的乙醇-水中。溶液在0.2MPa壓力和10℃溫度下進行第一次超濾。選擇截留分子量為10000dalton的PVDF超濾膜。收集透過液。將收集的透過液蒸乾，再將蒸乾後的粉末溶於無水乙醇中。逐漸加入甲基化β-環糊精，使溶液中黃酮與甲基化β-環糊精的物質的量之比為1∶3。先在60℃水浴中反應2h，再在常溫下反應4h。反應後的產物在0.2MPa壓力和10℃溫度下進行第二次超濾。選擇截留分子量為5000dalton的PVDF超濾膜。收集濃縮後的液體，即得到最終產品。經測定，最終產品中的黃酮百分含量從原來的24wt.％提高到38.7wt.％，回收率為64％。
實施例16將20g銀杏葉提取物(GBE)溶於5000mL乙醇質量分數為60％的乙醇-水中。溶液在0.3MPa壓力和10℃溫度下進行第一次超濾。選擇截留分子量為10000dalton的PVDF超濾膜。收集透過液。將收集的透過液蒸乾，再將蒸乾後的粉末溶於無水乙醇中。逐漸加入甲基化β-環糊精，使溶液中黃酮與甲基化β-環糊精的物質的量之比為1∶3。先在60℃水浴中反應2h，再在常溫下反應4h。反應後的產物在0.3MPa壓力和10℃溫度下進行第二次超濾。選擇截留分子量為5000dalton的PVDF超濾膜。收集濃縮後的液體，即得到最終產品。經測定，最終產品中的黃酮百分含量從原來的24wt.％提高到39.5wt.％，回收率為65％。
實施例17將20g銀杏葉提取物(GBE)溶於5000mL乙醇質量分數為60％的乙醇-水中。溶液在0.05MPa壓力和20℃溫度下進行第一次超濾。選擇截留分子量為10000dalton的PVDF超濾膜。收集透過液。將收集的透過液蒸乾，再將蒸乾後的粉末溶於無水乙醇中。逐漸加入甲基化β-環糊精，使溶液中黃酮與甲基化β-環糊精的物質的量之比為1∶3。先在60℃水浴中反應2h，再在常溫下反應4h。反應後的產物在0.05MPa壓力和20℃溫度下進行第二次超濾。選擇截留分子量為5000dalton的PVDF超濾膜。收集濃縮後的液體，即得到最終產品。經測定，最終產品中的黃酮百分含量從原來的24wt.％提高到30.9wt.％，回收率為57％。
實施例18將20g銀杏葉提取物(GBE)溶於5000mL乙醇質量分數為60％的乙醇-水中。溶液在0.15MPa壓力和20℃溫度下進行第一次超濾。選擇截留分子量為10000dalton的PVDF超濾膜。收集透過液。將收集的透過液蒸乾，再將蒸乾後的粉末溶於無水乙醇中。逐漸加入甲基化β-環糊精，使溶液中黃酮與甲基化β-環糊精的物質的量之比為1∶3。先在60℃水浴中反應2h，再在常溫下反應4h。反應後的產物在0.15MPa壓力和20℃溫度下進行第二次超濾。選擇截留分子量為5000dalton的PVDF超濾膜。收集濃縮後的液體，即得到最終產品。經測定，最終產品中的黃酮百分含量從原來的24wt.％提高到37.9wt.％，回收率為62％。
實施例19將20g銀杏葉提取物(GBE)溶於5000mL乙醇質量分數為60％的乙醇-水中。溶液在0.2MPa壓力和20℃溫度下進行第一次超濾。選擇截留分子量為10000dalton的PVDF超濾膜。收集透過液。將收集的透過液蒸乾，再將蒸乾後的粉末溶於無水乙醇中。逐漸加入甲基化β-環糊精，使溶液中黃酮與甲基化β-環糊精的物質的量之比為1∶3。先在60℃水浴中反應2h，再在常溫下反應4h。反應後的產物在0.2MPa壓力和20℃溫度下進行第二次超濾。選擇截留分子量為5000dalton的PVDF超濾膜。收集濃縮後的液體，即得到最終產品。經測定，最終產品中的黃酮百分含量從原來的24wt.％提高到38.8wt.％，回收率為64％。
實施例20將20g銀杏葉提取物(GBE)溶於5000mL乙醇質量分數為60％的乙醇-水中。溶液在0.3MPa壓力和20℃溫度下進行第一次超濾。選擇截留分子量為10000dalton的PVDF超濾膜。收集透過液。將收集的透過液蒸乾，再將蒸乾後的粉末溶於無水乙醇中。逐漸加入甲基化β-環糊精，使溶液中黃酮與甲基化β-環糊精的物質的量之比為1∶3。先在60℃水浴中反應2h，再在常溫下反應4h。反應後的產物在0.3MPa壓力和20℃溫度下進行第二次超濾。選擇截留分子量為5000dalton的PVDF超濾膜。收集濃縮後的液體，即得到最終產品。經測定，最終產品中的黃酮百分含量從原來的24wt.％提高到39.8wt.％，回收率為65％。
實施例21將20g銀杏葉提取物(GBE)溶於5000mL乙醇質量分數為60％的乙醇-水中。溶液在0.05MPa壓力和40℃溫度下進行第一次超濾。選擇截留分子量為10000dalton的PVDF超濾膜。收集透過液。將收集的透過液蒸乾，再將蒸乾後的粉末溶於無水乙醇中。逐漸加入甲基化β-環糊精，使溶液中黃酮與甲基化β-環糊精的物質的量之比為1∶3。先在60℃水浴中反應2h，再在常溫下反應4h。反應後的產物在0.05MPa壓力和40℃溫度下進行第二次超濾。選擇截留分子量為5000dalton的PVDF超濾膜。收集濃縮後的液體，即得到最終產品。經測定，最終產品中的黃酮百分含量從原來的24wt.％提高到32.7wt.％，回收率為59％。
實施例22將20g銀杏葉提取物(GBE)溶於5000mL乙醇質量分數為60％的乙醇-水中。溶液在0.15MPa壓力和40℃溫度下進行第一次超濾。選擇截留分子量為10000dalton的PVDF超濾膜。收集透過液。將收集的透過液蒸乾，再將蒸乾後的粉末溶於無水乙醇中。逐漸加入甲基化β-環糊精，使溶液中黃酮與甲基化β-環糊精的物質的量之比為1∶3。先在60℃水浴中反應2h，再在常溫下反應4h。反應後的產物在0.15MPa壓力和40℃溫度下進行第二次超濾。選擇截留分子量為5000dalton的PVDF超濾膜。收集濃縮後的液體，即得到最終產品。經測定，最終產品中的黃酮百分含量從原來的24wt.％提高到38.8wt.％，回收率為63％。
實施例23將20g銀杏葉提取物(GBE)溶於5000mL乙醇質量分數為60％的乙醇-水中。溶液在0.2MPa壓力和40℃溫度下進行第一次超濾。選擇截留分子量為10000dalton的PVDF超濾膜。收集透過液。將收集的透過液蒸乾，再將蒸乾後的粉末溶於無水乙醇中。逐漸加入甲基化β-環糊精，使溶液中黃酮與甲基化β-環糊精的物質的量之比為1∶3。先在60℃水浴中反應2h，再在常溫下反應4h。反應後的產物在0.2MPa壓力和40℃溫度下進行第二次超濾。選擇截留分子量為5000dalton的PVDF超濾膜。收集濃縮後的液體，即得到最終產品。經測定，最終產品中的黃酮百分含量從原來的24wt.％提高到39.8wt.％，回收率為66％。
實施例24將20g銀杏葉提取物(GBE)溶於5000mL乙醇質量分數為60％的乙醇-水中。溶液在0.3MPa壓力和40℃溫度下進行第一次超濾。選擇截留分子量為10000dalton的PVDF超濾膜。收集透過液。將收集的透過液蒸乾，再將蒸乾後的粉末溶於無水乙醇中。逐漸加入甲基化β-環糊精，使溶液中黃酮與甲基化β-環糊精的物質的量之比為1∶3。先在60℃水浴中反應2h，再在常溫下反應4h。反應後的產物在0.3MPa壓力和40℃溫度下進行第二次超濾。選擇截留分子量為5000dalton的PVDF超濾膜。收集濃縮後的液體，即得到最終產品。經測定，最終產品中的黃酮百分含量從原來的24wt.％提高到40.7wt.％，回收率為67％。
實施例25將20g銀杏葉提取物(GBE)溶於5000mL乙醇質量分數為60％的乙醇-水中。溶液在0.05MPa壓力和50℃溫度下進行第一次超濾。選擇截留分子量為10000dalton的PVDF超濾膜。收集透過液。將收集的透過液蒸乾，再將蒸乾後的粉末溶於無水乙醇中。逐漸加入甲基化β-環糊精，使溶液中黃酮與甲基化β-環糊精的物質的量之比為1∶3。先在60℃水浴中反應2h，再在常溫下反應4h。反應後的產物在0.05MPa壓力和50℃溫度下進行第二次超濾。選擇截留分子量為5000dalton的PVDF超濾膜。收集濃縮後的液體，即得到最終產品。經測定，最終產品中的黃酮百分含量從原來的24wt.％提高到33.2wt.％，回收率為60％。
實施例26將20g銀杏葉提取物(GBE)溶於5000mL乙醇質量分數為60％的乙醇-水中。溶液在0.15MPa壓力和50℃溫度下進行第一次超濾。選擇截留分子量為10000dalton的PVDF超濾膜。收集透過液。將收集的透過液蒸乾，再將蒸乾後的粉末溶於無水乙醇中。逐漸加入甲基化β-環糊精，使溶液中黃酮與甲基化β-環糊精的物質的量之比為1∶3。先在60℃水浴中反應2h，再在常溫下反應4h。反應後的產物在0.15MPa壓力和50℃溫度下進行第二次超濾。選擇截留分子量為5000dalton的PVDF超濾膜。收集濃縮後的液體，即得到最終產品。經測定，最終產品中的黃酮百分含量從原來的24wt.％提高到39.1wt.％，回收率為65％。
實施例27將20g銀杏葉提取物(GBE)溶於5000mL乙醇質量分數為60％的乙醇-水中。溶液在0.2MPa壓力和50℃溫度下進行第一次超濾。選擇截留分子量為10000dalton的PVDF超濾膜。收集透過液。將收集的透過液蒸乾，再將蒸乾後的粉末溶於無水乙醇中。逐漸加入甲基化β-環糊精，使溶液中黃酮與甲基化β-環糊精的物質的量之比為1∶3。先在60℃水浴中反應2h，再在常溫下反應4h。反應後的產物在0.2MPa壓力和50℃溫度下進行第二次超濾。選擇截留分子量為5000dalton的PVDF超濾膜。收集濃縮後的液體，即得到最終產品。經測定，最終產品中的黃酮百分含量從原來的24wt.％提高到40.1wt.％，回收率為66％。
實施例28將20g銀杏葉提取物(GBE)溶於5000mL乙醇質量分數為60％的乙醇-水中。溶液在0.3MPa壓力和50℃溫度下進行第一次超濾。選擇截留分子量為10000dalton的PVDF超濾膜。收集透過液。將收集的透過液蒸乾，再將蒸乾後的粉末溶於無水乙醇中。逐漸加入甲基化β-環糊精，使溶液中黃酮與甲基化β-環糊精的物質的量之比為1∶3。先在60℃水浴中反應2h，再在常溫下反應4h。反應後的產物在0.3MPa壓力和50℃溫度下進行第二次超濾。選擇截留分子量為5000dalton的PVDF超濾膜。收集濃縮後的液體，即得到最終產品。經測定，最終產品中的黃酮百分含量從原來的24wt.％提高到41.3wt.％，回收率為68％。
實施例29將20g銀杏葉提取物(GBE)溶於5000mL乙醇質量分數為60％的乙醇-水中。溶液在0.15MPa壓力和30℃溫度下進行第一次超濾。選擇截留分子量為5000dalton的PVDF超濾膜。收集透過液。將收採集的透過液蒸乾，再將蒸乾後的粉末溶於無水乙醇中。逐漸加入甲基化β-環糊精，使溶液中黃酮與甲基化β-環糊精的物質的量之比為1∶3。先在60℃水浴中反應2h，再在常溫下反應4h。反應後的產物在0.15MPa壓力和30℃溫度下進行第二次超濾。選擇截留分子量為5000dalton的PVDF超濾膜。收集濃縮後的液體，即得到最終產品。經測定，最終產品中的黃酮百分含量從原來的24wt.％提高到32.4wt.％，回收率為36％。
實施例30將20g銀杏葉提取物(GBE)溶於5000mL乙醇質量分數為60％的乙醇-水中。溶液在0.15MPa壓力和30℃溫度下進行第一次超濾。選擇截留分子量為5000dalton的PVDF超濾膜。收集透過液。將收集的透過液蒸乾，再將蒸乾後的粉末溶於無水乙醇中。逐漸加入甲基化β-環糊精，使溶液中黃酮與甲基化β-環糊精的物質的量之比為1∶3。先在60℃水浴中反應2h，再在常溫下反應4h。反應後的產物在0.15MPa壓力和30℃溫度下進行第二次超濾。選擇截留分子量為10000dalton的PVDF超濾膜。收集濃縮後的液體，即得到最終產品。經測定，最終產品中的黃酮百分含量從原來的24wt.％提高到25.4wt.％，回收率為42％。
實施例31將20g銀杏葉提取物(GBE)溶於5000mL乙醇質量分數為60％的乙醇-水中。溶液在0.15MPa壓力和30℃溫度下進行第一次超濾。選擇截留分子量為10000dalton的PVDF超濾膜。收集透過液。將收集的透過液蒸乾，再將蒸乾後的粉末溶於無水乙醇中。逐漸加入甲基化β-環糊精，使溶液中黃酮與甲基化β-環糊精的物質的量之比為1∶3。先在60℃水浴中反應2h，再在常溫下反應4h。反應後的產物在0.15MPa壓力和30℃溫度下進行第二次超濾。選擇截留分子量為10000dalton的PVDF超濾膜。收集濃縮後的液體，即得到最終產品。經測定，最終產品中的黃酮百分含量從原來的24wt.％提高到32.8wt.％，回收率為53％。
實施例32將20g銀杏葉提取物(GBE)溶於5000mL乙醇質量分數為60％的乙醇-水中。溶液在0.15MPa壓力和30℃溫度下進行第一次超濾。選擇截留分子量為30000dalton的PVDF超濾膜。收集透過液。將收集的透過液蒸乾，再將蒸乾後的粉末溶於無水乙醇中。逐漸加入甲基化β-環糊精，使溶液中黃酮與甲基化β-環糊精的物質的量之比為1∶3。先在60℃水浴中反應2h，再在常溫下反應4h。反應後的產物在0.15MPa壓力和30℃溫度下進行第二次超濾。選擇截留分子量為5000dalton的PVDF超濾膜。收集濃縮後的液體，即得到最終產品。經測定，最終產品中的黃酮百分含量從原來的24wt.％提高到34.2wt.％，回收率為71％。
實施例33將20g銀杏葉提取物(GBE)溶於5000mL乙醇質量分數為60％的乙醇-水中。溶液在0.15MPa壓力和30℃溫度下進行第一次超濾。選擇截留分子量為30000dalton的PVDF超濾膜。收集透過液。將收採集的透過液蒸乾，再將蒸乾後的粉末溶於無水乙醇中。逐漸加入甲基化β-環糊精，使溶液中黃酮與甲基化β-環糊精的物質的量之比為1∶3。先在60℃水浴中反應2h，再在常溫下反應4h。反應後的產物在0.15MPa壓力和30℃溫度下進行第二次超濾。選擇截留分子量為10000dalton的PVDF超濾膜。收集濃縮後的液體，即得到最終產品。經測定，最終產品中的黃酮百分含量從原來的24wt.％提高到28wt.％，回收率為59％。
實施例34將20g銀杏葉提取物(GBE)溶於5000mL乙醇質量分數為60％的乙醇-水中。溶液在0.15MPa壓力和30℃溫度下進行第一次超濾。選擇截留分子量為10000dalton的聚碸(PS)超濾膜(杭州水處理中心提供，下同)。收集透過液。將收集的透過液蒸乾，再將蒸乾後的粉末溶於無水乙醇中。逐漸加入甲基化β-環糊精，使溶液中黃酮與甲基化β-環糊精的物質的量之比為1∶3。先在60℃水浴中反應2h，再在常溫下反應4h。反應後的產物在0.15MPa壓力和30℃溫度下進行第二次超濾。選擇截留分子量為5000dalton的PS超濾膜。收集濃縮後的液體，即得到最終產品。經測定，最終產品中的黃酮百分含量從原來的24wt.％提高到35.7wt.％，回收率為56％。
實施例35將20g銀杏葉提取物(GBE)溶於5000mL乙醇質量分數為60％的乙醇-水中。溶液在0.15MPa壓力和30℃溫度下進行第一次超濾。選擇截留分子量為10000dalton的聚丙烯腈(PAN)超濾膜(杭州水處理中心提供，下同)。收集透過液。將收集的透過液蒸乾，再將蒸乾後的粉末溶於無水乙醇中。逐漸加入甲基化β-環糊精，使溶液中黃酮與甲基化β-環糊精的物質的量之比為1∶3。先在60℃水浴中反應2h，再在常溫下反應4h。反應後的產物在0.15MPa壓力和30℃溫度下進行第二次超濾。選擇截留分子量為5000dalton的PAN超濾膜。收集濃縮後的液體，即得到最終產品。經測定，最終產品中的黃酮百分含量從原來的24wt.％提高到29.3wt.％，回收率為72％。
實施例36將20g銀杏葉提取物(GBE)溶於5000mL乙醇質量分數為60％的乙醇-水中。溶液在0.3MPa壓力和50℃溫度下進行第一次超濾。選擇截留分子量為30000dalton的PVDF超濾膜。收集透過液。將收集的透過液蒸乾，再將蒸乾後的粉末溶於無水乙醇中。逐漸加入甲基化β-環糊精，使溶液中黃酮與甲基化β-環糊精的物質的量之比為1∶9。先在90℃水浴中反應5h，再在常溫下反應24h。反應後的產物在0.3MPa壓力和50℃溫度下進行第二次超濾。選擇截留分子量為5000dalton的PVDF超濾膜。收集濃縮後的液體，即得到最終產品。經測定，最終產品中的黃酮百分含量從原來的24wt.％提高到44.2wt.％，回收率為69％。
實施例37將20g銀杏葉提取物(GBE)溶於5000mL乙醇質量分數為60％的乙醇-水中。溶液在0.2MPa壓力和40℃溫度下進行第一次超濾。選擇截留分子量為10000dalton的PVDF超濾膜。收集透過液。將收集的透過液蒸乾，再將蒸乾後的粉末溶於無水乙醇中。逐漸加入甲基化β-環糊精，使溶液中黃酮與甲基化β-環糊精的物質的量之比為1∶6。先在70℃水浴中反應3h，再在常溫下反應8h。反應後的產物在0.2MPa壓力和40℃溫度下進行第二次超濾。選擇截留分子量為5000dalton的PVDF超濾膜。收集濃縮後的液體，即得到最終產品。經測定，最終產品中的黃酮百分含量從原來的24wt.％提高到39wt.％，回收率為65％。
權利要求
1.一種精製銀杏黃酮的方法，其特徵是它基本上由下列步驟組成步驟1.將1份質量的銀杏葉提取物溶於200份質量的乙醇質量分數為60％的乙醇-水中；步驟2.將步驟1中的GBE溶液在0.05～0.3MPa壓力和10～50℃溫度下進行第一次超濾，超濾膜為截留分子量為5000，10000或30000dalton的超濾膜，收集透過液；步驟3.將步驟2收集的透過液減壓濃縮，再將1份質量的蒸乾後的殘留物溶於50份質量的無水乙醇；步驟4.在步驟3所得的溶液中加入β-環糊精或改性β-環糊精，使溶液中銀杏黃酮與β-環糊精或改性β-環糊精的物質的量之比為1∶9～1∶1，先在20～90℃水浴中反應15min～5h，再在常溫下反應30min～24h；步驟5.將步驟4中反應後的產物在0.05～0.3MPa壓力和10～50℃溫度下進行第二次超濾，超濾膜為截留分子量為5000，10000或30000dalton的超濾膜，收集截留的濃縮後的液體，即得到精製的銀杏黃酮乙醇溶液。
2.根據權利要求1所述的精製銀杏黃酮的方法，其特徵是步驟4中所述的改性β-環糊精是甲基化β-環糊精或羥丙基化β-環糊精。
全文摘要
一種精製銀杏黃酮的方法，它是將1份質量的銀杏葉提取物(GBE)溶於200份質量的乙醇質量分數為60％的乙醇—水中，GBE溶液在0.05～0.3MPa壓力和10～50℃溫度下進行第一次超濾，收集透過液，收集的透過液減壓濃縮，再將1份質量的蒸乾後的殘留物溶於50份質量的無水乙醇，在所得的溶液中加入β－環糊精或改性β－環糊精，使溶液中黃酮與β－環糊精或改性β－環糊精的物質的量之比為1∶9～1∶1，先在20～90℃水浴中反應15min～5h，再在常溫下反應30min～24h，將反應後的產物在0.05～0.3MPa壓力和10～50℃溫度下進行第二次超濾，收集截留的濃縮後的液體，即得到精製的銀杏黃酮乙醇溶液。本發明方法可節省大量的有機和無機試劑，產物中銀杏黃酮的含量增高，品質穩定，工藝流程簡單，生產周期短。
文檔編號C07H17/00GK1817875SQ20061003879
公開日2006年8月16日 申請日期2006年3月13日 優先權日2006年3月13日
發明者張志炳, 徐志紅, 李磊, 武法文, 譚淑娟, 楊奕 申請人:南京大學