一種耐鹽鹼榆樹組培繁殖技術的製作方法
2024-03-26 12:19:05 2
本發明涉及植物組織培養技術領域，具體是一種耐鹽鹼榆樹組培繁殖技術。
背景技術：
榆樹(學名：Ulmus pumila L.)：又名春榆、白榆等，素有「榆木疙瘩」之稱，為榆科落葉喬木，幼樹樹皮平滑，灰褐色或淺灰色，大樹之皮暗灰色，不規則深縱裂，粗糙；小枝無毛或有毛，無膨大的木栓層及凸起的木栓翅；冬芽近球形或卵圓形。葉橢圓狀卵形等，葉面平滑無毛，葉背幼時有短柔毛，後變無毛或部分脈腋有簇生毛，葉柄面有短柔毛。花先葉開放，在生枝的葉腋成簇生狀。翅果稀倒卵狀圓形。花果期3-6月(東北較晚)。榆樹分布於中國東北、華北、西北及西南各省區，朝鮮、前蘇聯、蒙古也有分布。生於海拔1000-2500米以下之山坡、山谷、川地、丘陵及沙崗等處；陽性樹種，喜光，耐旱，耐寒，耐瘠薄，不擇土壤，適應性很強。根系發達，抗風力、保土力強。萌芽力強耐修剪。生長快，壽命長。能耐乾冷氣候及中度鹽鹼，但不耐水溼(能耐雨季水澇)。具抗汙染性，葉面滯塵能力強。在土壤深厚、肥沃、排水良好之衝積土及黃土高原生長良好。可作西北荒漠、華北及淮北平原、丘陵及東北荒山、砂地及濱海鹽鹼地的造林或「四旁」綠化樹種。當前耐鹽鹼榆樹的組培繁殖技術存在操作複雜，繁殖周期長，成本較高等缺陷；因此耐鹽鹼榆樹組培繁殖技術的開發，是十分緊迫的任務。
技術實現要素：
本發明的目的在於提供一種耐鹽鹼榆樹組培繁殖技術，以解決上述背景技術中提出的問題。
為實現上述目的，本發明提供如下技術方案：
一種耐鹽鹼榆樹組培繁殖技術，包括以下步驟：
1)前處理
在耐鹽鹼榆木生長旺盛期，挑選健康無蟲害5cm長左右的新梢，去除雜葉和頂芽，使用無菌水清洗枝條表面的灰塵並裁剪成四個莖段；隨後置於2％濃度的二氧化氯溶液中浸泡10min，使用小蘇打水衝洗15-20min，並置於保鮮膜中噴水放置，放置時間不超過6h；
2)無菌組織建立
在無菌工作檯上，將步驟1)中採集到的莖段放入錐形瓶中，首先加入過氧化氫在搖床上進行搖晃浸泡2min，迅速倒出，然後加入次氯酸鈉溶液進行攪拌處理5min，處理後使用無菌水反覆衝洗，並使用熱風機吹乾莖段表面的水分；使用無菌刀沿著莖段的橫向位置將莖段剪開小斷口，隨後將含有小斷口的莖段接種在初代培養基中，並使其保持直立，初代培養條件為：黑暗，26℃-32℃，培養12天-16天；
3)愈傷組織分化培養及擴大培養
將在初代培養基中培養後的材料放置愈傷組織培養基中進行誘導分化，直至莖段中的小斷口產生淡黃色愈傷組織，愈傷組織培養條件為：1200Lx-2000Lx，30℃-35℃，光照時間8h-10h，黑暗時間16h-14h，培養10天-15天；愈傷組織培養結束後，將莖段放置擴大培養基中進行增殖培養，如此循環往復，直至得到所需數量的無根苗；
4)增長培養
將無根苗的基部切開產生小斷口，轉入到增長培養基中培養，直至小斷口處生芽長度為2cm以上時，並切下放置增長培養基中繼續培養10天，增長培養條件為500Lx，28℃-32℃，光照時間4h-8h，黑暗時間20h-16h；
5)分化出根
增長後的無根苗達到16cm-20cm時，將它們轉入生根誘導培養基中，生根誘導培養條件為：開始的2天-3天，黑暗，22℃培養；1000Lx光照，28℃培養15天；
6)移栽培養
待苗生根3-5條，根長3-5cm時，使用無菌水徹底洗淨苗根，並在0.8％濃度的高錳酸鉀溶液中浸泡7min，最後移栽到由細砂土、硅藻土和腐殖質組成並滅菌的基質中，套上塑料膜，保持相對溼度75％-80％，溫度25℃-28℃，2800Lx光照，18h，隨後按照一般試管苗方法進行管理。
作為本發明進一步的方案：所述初代培養基主要成份為MS+2mg/L維生素E+40mg/L蘋果汁+80mg/L肌醇+18g/L蔗糖+3g/L瓊脂，pH 5.8-6.3。
作為本發明進一步的方案：所述愈傷組織培養基主要成份為MS+2mg/L 6-BA+18mg/L EDTA+40mg/L甘露醇+24g/L蔗糖+4g/L瓊脂，pH 5.8-6.0。
作為本發明進一步的方案：所述擴大培養基培養基主要成份為MS+0.8mg/L NAA+2mg/L IBA+4mg/L硫酸亞鐵+20g/L蔗糖+4g/L瓊脂，pH 5.8-6.0。
作為本發明進一步的方案：所述增長培養基主要成份為MS+0.8mg/L NAA+1mg/L GA3+4mg/L維生素C+20g/L蔗糖+4g/L瓊脂，pH 5.8-6.0。
作為本發明進一步的方案：所述生根誘導培養基主要成份為MS+1.2mg/L NAA+2mg/L IBA+500mg/L活性炭+40g/L蔗糖+6g/L瓊脂，pH 6.0-6.5。
與現有技術相比，本發明的有益效果是：
本發明所提供的組培繁殖技術，具有繁殖係數高、生產周期短、程序簡單易於操作、成本低廉等優點，適於耐鹽鹼榆樹的快速繁殖。
具體實施方式
下面將結合本發明實施例，對本發明實施例中的技術方案進行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實施例僅僅是本發明一部分實施例，而不是全部的實施例。基於本發明中的實施例，本領域普通技術人員在沒有做出創造性勞動前提下所獲得的所有其他實施例，都屬於本發明保護的範圍。
實施例1
一種耐鹽鹼榆樹組培繁殖技術，包括以下步驟：
1)前處理
在耐鹽鹼榆木生長旺盛期，挑選健康無蟲害5cm長左右的新梢，去除雜葉和頂芽，使用無菌水清洗枝條表面的灰塵並裁剪成四個莖段；隨後置於2％濃度的二氧化氯溶液中浸泡10min，使用小蘇打水衝洗15min，並置於保鮮膜中噴水放置，放置時間不超過6h；
2)無菌組織建立
在無菌工作檯上，將步驟1)中採集到的莖段放入錐形瓶中，首先加入過氧化氫在搖床上進行搖晃浸泡2min，迅速倒出，然後加入次氯酸鈉溶液進行攪拌處理5min，處理後使用無菌水反覆衝洗，並使用熱風機吹乾莖段表面的水分；使用無菌刀沿著莖段的橫向位置將莖段剪開小斷口，隨後將含有小斷口的莖段接種在初代培養基中，並使其保持直立，初代培養條件為：黑暗，26℃，培養12天；
3)愈傷組織分化培養及擴大培養
將在初代培養基中培養後的材料放置愈傷組織培養基中進行誘導分化，直至莖段中的小斷口產生淡黃色愈傷組織，愈傷組織培養條件為：1200Lx，30℃，光照時間8h，黑暗時間16h，培養10天；愈傷組織培養結束後，將莖段放置擴大培養基中進行增殖培養，如此循環往復，直至得到所需數量的無根苗；
4)增長培養
將無根苗的基部切開產生小斷口，轉入到增長培養基中培養，直至小斷口處生芽長度為2cm以上時，並切下放置增長培養基中繼續培養10天，增長培養條件為500Lx，28℃，光照時間4h，黑暗時間20h；
5)分化出根
增長後的無根苗達到16cm時，將它們轉入生根誘導培養基中，生根誘導培養條件為：開始的2天，黑暗，22℃培養；1000Lx光照，28℃培養15天；
6)移栽培養
待苗生根3條，根長3cm時，使用無菌水徹底洗淨苗根，並在0.8％濃度的高錳酸鉀溶液中浸泡7min，最後移栽到由細砂土、硅藻土和腐殖質組成並滅菌的基質中，套上塑料膜，保持相對溼度75％，溫度25℃，2800Lx光照，18h，隨後按照一般試管苗方法進行管理。
其中：
所述初代培養基主要成份為MS+2mg/L維生素E+40mg/L蘋果汁+80mg/L肌醇+18g/L蔗糖+3g/L瓊脂，pH 5.8。
所述愈傷組織培養基主要成份為MS+2mg/L 6-BA+18mg/L EDTA+40mg/L甘露醇+24g/L蔗糖+4g/L瓊脂，pH 5.8。
所述擴大培養基培養基主要成份為MS+0.8mg/L NAA+2mg/L IBA+4mg/L硫酸亞鐵+20g/L蔗糖+4g/L瓊脂，pH 5.8。
所述增長培養基主要成份為MS+0.8mg/L NAA+1mg/L GA3+4mg/L維生素C+20g/L蔗糖+4g/L瓊脂，pH 5.8。
所述生根誘導培養基主要成份為MS+1.2mg/L NAA+2mg/L IBA+500mg/L活性炭+40g/L蔗糖+6g/L瓊脂，pH 6.0。
實施例2
一種耐鹽鹼榆樹組培繁殖技術，包括以下步驟：
1)前處理
在耐鹽鹼榆木生長旺盛期，挑選健康無蟲害5cm長左右的新梢，去除雜葉和頂芽，使用無菌水清洗枝條表面的灰塵並裁剪成四個莖段；隨後置於2％濃度的二氧化氯溶液中浸泡10min，使用小蘇打水衝洗18min，並置於保鮮膜中噴水放置，放置時間不超過6h；
2)無菌組織建立
在無菌工作檯上，將步驟1)中採集到的莖段放入錐形瓶中，首先加入過氧化氫在搖床上進行搖晃浸泡2min，迅速倒出，然後加入次氯酸鈉溶液進行攪拌處理5min，處理後使用無菌水反覆衝洗，並使用熱風機吹乾莖段表面的水分；使用無菌刀沿著莖段的橫向位置將莖段剪開小斷口，隨後將含有小斷口的莖段接種在初代培養基中，並使其保持直立，初代培養條件為：黑暗，29℃，培養14天；
3)愈傷組織分化培養及擴大培養
將在初代培養基中培養後的材料放置愈傷組織培養基中進行誘導分化，直至莖段中的小斷口產生淡黃色愈傷組織，愈傷組織培養條件為：1600Lx，33℃，光照時間9h，黑暗時間15h，培養13天；愈傷組織培養結束後，將莖段放置擴大培養基中進行增殖培養，如此循環往復，直至得到所需數量的無根苗；
4)增長培養
將無根苗的基部切開產生小斷口，轉入到增長培養基中培養，直至小斷口處生芽長度為2cm以上時，並切下放置增長培養基中繼續培養10天，增長培養條件為500Lx，29℃，光照時間6h，黑暗時間18h；
5)分化出根
增長後的無根苗達到18cm時，將它們轉入生根誘導培養基中，生根誘導培養條件為：開始的3天，黑暗，22℃培養；1000Lx光照，28℃培養15天；
6)移栽培養
待苗生根4條，根長4cm時，使用無菌水徹底洗淨苗根，並在0.8％濃度的高錳酸鉀溶液中浸泡7min，最後移栽到由細砂土、硅藻土和腐殖質組成並滅菌的基質中，套上塑料膜，保持相對溼度78％，溫度27℃，2800Lx光照，18h，隨後按照一般試管苗方法進行管理。
其中：
所述初代培養基主要成份為MS+2mg/L維生素E+40mg/L蘋果汁+80mg/L肌醇+18g/L蔗糖+3g/L瓊脂，pH 6.0。
所述愈傷組織培養基主要成份為MS+2mg/L 6-BA+18mg/L EDTA+40mg/L甘露醇+24g/L蔗糖+4g/L瓊脂，pH 5.9。
所述擴大培養基培養基主要成份為MS+0.8mg/L NAA+2mg/L IBA+4mg/L硫酸亞鐵+20g/L蔗糖+4g/L瓊脂，pH 5.9。
所述增長培養基主要成份為MS+0.8mg/L NAA+1mg/L GA3+4mg/L維生素C+20g/L蔗糖+4g/L瓊脂，pH 5.9。
所述生根誘導培養基主要成份為MS+1.2mg/L NAA+2mg/L IBA+500mg/L活性炭+40g/L蔗糖+6g/L瓊脂，pH 6.3。
實施例3
一種耐鹽鹼榆樹組培繁殖技術，包括以下步驟：
1)前處理
在耐鹽鹼榆木生長旺盛期，挑選健康無蟲害5cm長左右的新梢，去除雜葉和頂芽，使用無菌水清洗枝條表面的灰塵並裁剪成四個莖段；隨後置於2％濃度的二氧化氯溶液中浸泡10min，使用小蘇打水衝洗20min，並置於保鮮膜中噴水放置，放置時間不超過6h；
2)無菌組織建立
在無菌工作檯上，將步驟1)中採集到的莖段放入錐形瓶中，首先加入過氧化氫在搖床上進行搖晃浸泡2min，迅速倒出，然後加入次氯酸鈉溶液進行攪拌處理5min，處理後使用無菌水反覆衝洗，並使用熱風機吹乾莖段表面的水分；使用無菌刀沿著莖段的橫向位置將莖段剪開小斷口，隨後將含有小斷口的莖段接種在初代培養基中，並使其保持直立，初代培養條件為：黑暗，32℃，培養16天；
3)愈傷組織分化培養及擴大培養
將在初代培養基中培養後的材料放置愈傷組織培養基中進行誘導分化，直至莖段中的小斷口產生淡黃色愈傷組織，愈傷組織培養條件為：2000Lx，35℃，光照時間10h，黑暗時間14h，培養15天；愈傷組織培養結束後，將莖段放置擴大培養基中進行增殖培養，如此循環往復，直至得到所需數量的無根苗；
4)增長培養
將無根苗的基部切開產生小斷口，轉入到增長培養基中培養，直至小斷口處生芽長度為2cm以上時，並切下放置增長培養基中繼續培養10天，增長培養條件為500Lx，32℃，光照時間8h，黑暗時間16h；
5)分化出根
增長後的無根苗達到20cm時，將它們轉入生根誘導培養基中，生根誘導培養條件為：開始的3天，黑暗，22℃培養；1000Lx光照，28℃培養15天；
6)移栽培養
待苗生根5條，根長5cm時，使用無菌水徹底洗淨苗根，並在0.8％濃度的高錳酸鉀溶液中浸泡7min，最後移栽到由細砂土、硅藻土和腐殖質組成並滅菌的基質中，套上塑料膜，保持相對溼度80％，溫度28℃，2800Lx光照，18h，隨後按照一般試管苗方法進行管理。
其中：
所述初代培養基主要成份為MS+2mg/L維生素E+40mg/L蘋果汁+80mg/L肌醇+18g/L蔗糖+3g/L瓊脂，pH 6.3。
所述愈傷組織培養基主要成份為MS+2mg/L 6-BA+18mg/L EDTA+40mg/L甘露醇+24g/L蔗糖+4g/L瓊脂，pH 6.0。
所述擴大培養基培養基主要成份為MS+0.8mg/L NAA+2mg/L IBA+4mg/L硫酸亞鐵+20g/L蔗糖+4g/L瓊脂，pH 6.0。
所述增長培養基主要成份為MS+0.8mg/L NAA+1mg/L GA3+4mg/L維生素C+20g/L蔗糖+4g/L瓊脂，pH 6.0。
所述生根誘導培養基主要成份為MS+1.2mg/L NAA+2mg/L IBA+500mg/L活性炭+40g/L蔗糖+6g/L瓊脂，pH 6.5。
綜上所述，本發明採用上述組培繁殖技術後，生根率達98％以上，移栽成活率達95％以上。
對於本領域技術人員而言，顯然本發明不限於上述示範性實施例的細節，而且在不背離本發明的精神或基本特徵的情況下，能夠以其他的具體形式實現本發明。因此，無論從哪一點來看，均應將實施例看作是示範性的，而且是非限制性的，本發明的範圍由所附權利要求而不是上述說明限定，因此旨在將落在權利要求的等同要件的含義和範圍內的所有變化囊括在本發明內。
此外，應當理解，雖然本說明書按照實施方式加以描述，但並非每個實施方式僅包含一個獨立的技術方案，說明書的這種敘述方式僅僅是為清楚起見，本領域技術人員應當將說明書作為一個整體，各實施例中的技術方案也可以經適當組合，形成本領域技術人員可以理解的其他實施方式。