一種蛹蟲草液體培養基瓶栽出菇培養方法與流程
2023-12-08 18:06:21
本發明涉及蛹蟲草培養技術領域，尤其涉及一種蛹蟲草液體培養基瓶栽出菇培養方法。
背景技術：
蛹蟲草又稱北蟲草，隸屬於真菌科的子囊菌亞門、麥角菌科、蟲草屬。蛹蟲草是一種藥用真菌，含有糖、脂肪和蛋白質，此外，還含有多種胺基酸、微量元素和維生素。其提取物如蟲草素、蟲草酸、蟲草多糖等，具有極高的藥用價值，可用於治療系統失調、哮喘、支氣管炎等，同時，蛹蟲草中的多種生理活性成分具有抗腫瘤、抗菌、抗氧化、保護肝臟、增強免疫力等藥理作用。長期以來，人們在開發利用蛹蟲草過程中一直側重於其藥用價值，而忽略了其觀賞價值。
蛹蟲草生產中一般採用液體菌種、固體基質出菇的栽培方式，這種栽培方式可以提高生產效率，進而提高蛹蟲草產量，但是其觀賞價值較低，主要表現為：固體基質透氣性好，利於蟲草子座快速生長，導致觀賞期縮短；在生產後期培養基質嚴重失水，導致蟲草子座萎縮、失去光澤的現象，從而降低觀賞價值。
技術實現要素：
本發明針對現有技術的不足，提供了一種培養方法簡便、觀賞價值高的蛹蟲草液體培養基瓶栽出菇培養方法。
本發明的目的是通過如下技術方案實現的：
一種蛹蟲草液體培養基瓶栽出菇培養方法，是由以下步驟製備得到的：
1）培養基配製：將液體培養基分裝至培養瓶中，透氣封口膜封口，120℃條件下滅菌20-30min；
本發明的培養瓶選擇透明度高，可耐高溫高壓的培養瓶，大小選擇250-600mL之間。
2）接種：滅菌完畢，待培養基溫度冷卻至25℃左右，在無菌環境下，接入2-3塊0.4 cm *0.4 cm -0.6cm*0.6cm大小蛹蟲草斜面母種；
3）液體菌球培養：將接種後的培養瓶置于震蕩培養箱中，於轉速120r/min、溫度20℃條件下避光培養6-7d，液體培養基內生成大量的菌球；
4）氣生菌絲培養：將生成大量菌球的培養瓶置於培養箱中繼續培養，於溫度20-22℃黑暗條件下靜止培養10-15d，培養基表面生成氣生菌絲；
用手傾斜培養瓶，氣生菌絲層不隨液面晃動；
5）轉色：將生成氣生菌絲每天照射13-15h，光照強度為200-250Lx、溼度為55-60%和溫度為20-22℃條件下，培養4-5d，至白色氣生菌絲轉化為橘黃色；
6）促原基分化：在無菌環境下進行搔菌處理，白天控制溫度為20-21℃，夜晚控制溫度為10-15℃，給以溫差刺激，在光照強度100-200Lx條件下每天光照13-14h，5-10d後即有大量原基形成；
具體措施為：選擇頂端寬度為0.5-1mm的搔菌工具（如安裝了操作長柄的鐵釘或大號鋼針）進行搔菌處理。用酒精燈火焰反覆灼燒搔菌工具，在無菌環境中冷卻後，輕輕在氣生菌絲表面每間隔1cm劃1條平行線。要求線條長度橫貫培養瓶兩側，深度以不劃透氣生菌絲層為宜。
7）出菇管理：在透氣封口膜上刺6-8個直徑為1cm的小孔，光照強度為200-250Lx、溫度為20-22℃和溼度為75-85%條件下，全天給光，培養5d，即有子座幼體形成；待子座幼體長到1cm以上，溫度控制在18-20℃，溼度控制在80-90%，並逐步加強通風，可促使子座緩慢成長，即可。
子座幼體形成後逐步加強通風，可使子座顏色保持賞心悅目的金黃色，並適時調整光線方向，保證蟲草子座形態端正，增加觀賞價值；適當降低溫度可減緩蟲草子座生長速率，延長觀賞期。
所述步驟1）中，液體培養基的裝液量為培養瓶體積的30-50%。
所述液體培養基的配方為：馬鈴薯為100g/L，可溶性澱粉為10g/L，蛋白腖20g/L，KH2PO4為1.5g/L，MgSO4.7H2O為1.0g/L。
所述液體培養基是由以下步驟製得的：稱100g去皮馬鈴薯，切成長寬高均約為1cm的小塊，加1000mL水中，煮沸20-30min，用4層紗布過濾取濾液，加入10g可溶性澱粉、20g蛋白腖、1.5gKH2PO4和1.0g MgSO4.7H2O定容至1000mL。
本發明的蛋白腖可替換為同等質量的牛肉膏和酵母膏，牛肉膏和酵母膏的質量比為1：1。
注意可溶性澱粉在加入時，要邊緩慢加入邊用玻棒攪拌，切不可加入過快，防止溶解不完全。
本發明的有益效果：
1.本發明的液體培養基成分簡單易得，成本低廉，蛋白質含量高，質量好，萌發速度快。
2.本發明在蛹蟲草液體培養的基礎上，通過靜止避光培養生成大量氣生菌絲，並形成氣生菌絲層作為支撐蛹蟲草子座的基礎；採用液體培養基瓶栽出菇不需要接種到固體培養基上，減少了操作步驟，提高培養效率，延長觀賞期，避免了由液體培養基接種到固體培養基造成的汙染，同時避免了培養基質由於缺水而導致菇體乾枯的現象，使得蛹蟲草子座長時間保持新鮮狀態，顯著提高觀賞價值。
具體實施方式
為了進一步了解本發明，下面結合實施例對本發明的優選實施方案進行描述，但是應當理解，這些描述只是為進一步說明本發明的特點和優點而不是對本發明專利要求的限制。
實施例1
一種蛹蟲草液體培養基瓶栽出菇培養方法，是由以下步驟製備得到的：
1）培養基配製：將液體培養基分裝至培養瓶中，透氣封口膜封口，120℃條件下滅菌20min；
2）接種：滅菌完畢，待培養基溫度冷卻至25℃左右，在無菌環境下，接入3塊 0.4 cm *0.4 cm 大小蛹蟲草斜面母種；
3）液體菌球培養：將接種後的培養瓶置于震蕩培養箱中，於轉速120r/min、溫度20℃條件下避光培養6d，液體培養基內生成大量的菌球；
4）氣生菌絲培養：將生成大量菌球的培養瓶置於培養箱中繼續培養，於溫度22℃黑暗條件下靜止培養10d，培養基表面生成氣生菌絲；
5）轉色：將生成氣生菌絲每天照射15h，光照強度為200Lx、溼度為60%和溫度為20℃條件下，培養5d，至白色氣生菌絲轉化為橘黃色；
6）促原基分化：在無菌環境下進行搔菌處理，白天控制溫度為21℃，夜晚控制溫度為10℃，給以溫差刺激，在光照強度100Lx條件下每天光照14h， 10d後即有大量原基形成；
7）出菇管理：在透氣封口膜上刺6-8個直徑為1cm的小孔，光照強度為200Lx、溫度為20℃和溼度為85%條件下，全天給光，培養5d，即有子座幼體形成；待子座幼體長到1cm以上，溫度控制在18℃，溼度控制在90%，並逐步加強通風，可促使子座緩慢成長，即可。
所述步驟1）中，液體培養基的裝液量為培養瓶體積的30%。
所述液體培養基的配方為：馬鈴薯為100g/L，可溶性澱粉為10g/L，蛋白腖20g/L，KH2PO4為1.5g/L，MgSO4.7H2O為1.0g/L。
所述液體培養基是由以下步驟製得的：稱100g去皮馬鈴薯，切成長寬高均約為1cm的小塊，加1000mL水中，煮沸20-30min，用4層紗布過濾取濾液，加入10g可溶性澱粉、20g蛋白腖、1.5gKH2PO4和1.0g MgSO4.7H2O定容至1000mL。
實施例2
一種蛹蟲草液體培養基瓶栽出菇培養方法，是由以下步驟製備得到的：
1）培養基配製：將液體培養基分裝至培養瓶中，透氣封口膜封口，120℃條件下滅菌25min；
2）接種：滅菌完畢，待培養基溫度冷卻至25℃左右，在無菌環境下，接入2塊0.5 cm *0.5 cm大小蛹蟲草斜面母種；
3）液體菌球培養：將接種後的培養瓶置于震蕩培養箱中，於轉速120r/min、溫度20℃條件下避光培養7d，液體培養基內生成大量的菌球；
4）氣生菌絲培養：將生成大量菌球的培養瓶置於培養箱中繼續培養，於溫度21℃黑暗條件下靜止培養13d，培養基表面生成氣生菌絲；
5）轉色：將生成氣生菌絲每天照射14h，光照強度為230Lx、溼度為58%和溫度為21℃條件下，培養4d，至白色氣生菌絲轉化為橘黃色；
6）促原基分化：在無菌環境下進行搔菌處理，白天控制溫度為20℃，夜晚控制溫度為13℃，給以溫差刺激，在光照強度150Lx條件下每天光照13h，8d後即有大量原基形成；
7）出菇管理：在透氣封口膜上刺6-8個直徑為1cm的小孔，光照強度為230Lx、溫度為21℃和溼度為80%條件下，全天給光，培養5d，即有子座幼體形成；待子座幼體長到1cm以上，溫度控制在19℃，溼度控制在85%，並逐步加強通風，可促使子座緩慢成長，即可。
所述步驟1）中，液體培養基的裝液量為培養瓶體積的40%。
所述液體培養基的配方為：馬鈴薯為100g/L，可溶性澱粉為10g/L，蛋白腖20g/L，KH2PO4為1.5g/L，MgSO4.7H2O為1.0g/L。
所述液體培養基是由以下步驟製得的：稱100g去皮馬鈴薯，切成長寬高均約為1cm的小塊，加1000mL水中，煮沸20-30min，用4層紗布過濾取濾液，加入10g可溶性澱粉、20g蛋白腖、1.5gKH2PO4和1.0g MgSO4.7H2O定容至1000mL。
實施例3
一種蛹蟲草液體培養基瓶栽出菇培養方法，是由以下步驟製備得到的：
1）培養基配製：將液體培養基分裝至培養瓶中，透氣封口膜封口，120℃條件下滅菌30min；
2）接種：滅菌完畢，待培養基溫度冷卻至25℃左右，在無菌環境下，接入2塊0.6cm*0.6cm大小蛹蟲草斜面母種；
3）液體菌球培養：將接種後的培養瓶置于震蕩培養箱中，於轉速120r/min、溫度20℃條件下避光培養6d，液體培養基內生成大量的菌球；
4）氣生菌絲培養：將生成大量菌球的培養瓶置於培養箱中繼續培養，於溫度20℃黑暗條件下靜止培養15d，培養基表面生成氣生菌絲；
5）轉色：將生成氣生菌絲每天照射13h，光照強度為250Lx、溼度為55%和溫度為22℃條件下，培養5d，至白色氣生菌絲轉化為橘黃色；
6）促原基分化：在無菌環境下進行搔菌處理，白天控制溫度為21℃，夜晚控制溫度為15℃，給以溫差刺激，在光照強度200Lx條件下每天光照14h，5d後即有大量原基形成；
7）出菇管理：在透氣封口膜上刺6-8個直徑為1cm的小孔，光照強度為250Lx、溫度為22℃和溼度為75%條件下，全天給光，培養5d，即有子座幼體形成；待子座幼體長到1cm以上，溫度控制在20℃，溼度控制在80%，並逐步加強通風，可促使子座緩慢成長，即可。
所述步驟1）中，液體培養基的裝液量為培養瓶體積的50%。
所述液體培養基的配方為：馬鈴薯為100g/L，可溶性澱粉為10g/L，蛋白腖20g/L，KH2PO4為1.5g/L，MgSO4.7H2O為1.0g/L。
所述液體培養基是由以下步驟製得的：稱100g去皮馬鈴薯，切成長寬高均約為1cm的小塊，加1000mL水中，煮沸20-30min，用4層紗布過濾取濾液，加入10g可溶性澱粉、20g蛋白腖、1.5gKH2PO4和1.0g MgSO4.7H2O定容至1000mL。
對比例
1）液體培養基配製：將液體培養基分裝至250mL三角瓶中，透氣封口膜封口，120℃溫度下滅菌25min；
所述步驟1）中，液體培養基的裝液量為培養瓶體積的40%。
所述液體培養基的配方為：馬鈴薯為100g/L，可溶性澱粉為10g/L，蛋白腖20g/L，KH2PO4為1.5g/L，MgSO4.7H2O為1.0g/L。
所述液體培養基是由以下步驟製得的：稱100g去皮馬鈴薯，切成長寬高均約為1cm的小塊，加1000mL水中，煮沸20-30min，用4層紗布過濾取濾液，加入10g可溶性澱粉、20g蛋白腖、1.5gKH2PO4和1.0g MgSO4.7H2O定容至1000mL。
2）接種與液體菌種培養：滅菌完畢，待培養基溫度冷卻至25℃左右，在無菌環境下，接入2塊0.5 cm *0.5 cm大小蛹蟲草斜面母種，每瓶接2-3塊0.5cm*0.5 cm大小斜面固體母種；將接種後的培養瓶置于震蕩培養箱中，於轉速120r/min、溫度20℃條件下避光培養7d，液體培養基內生成大量的菌球；
3）固體培養基的配製：以500m L罐頭瓶為栽培容器，每瓶裝入30g大米和54 mL營養液（即固液比為1︰1.8），用聚丙烯塑料薄膜封口後121℃高壓蒸汽滅菌30min；
所述營養液的配方為：蛋白陳5 g/L，葡萄糖10 g/L，MgSO4.7H2O 0.5 g/L，KH2PO4 1 g/L，VB120mg/L；
4）接種：培養基冷卻至25℃左右後，於無菌環境下每瓶用移液槍接入5mL液體菌種；
5）發菌管理：接種後將培養瓶置於20℃溫度、 65%溼度條件下，避光培養20d左右，菌絲長滿固體培養基；
6）轉色與促原基分化：將步驟5）得到的培養瓶進行全天24 h光照，刺激菌絲轉色，保持溫度20℃、空氣溼度70%左右；轉色後，根據品種的特性決定是否採取搔菌處理，白天控制溫度為20℃，夜晚控制溫度為13℃，給以溫差刺激，在光照強度150Lx條件下每天光照13h，每天早、中、晚各通風20min左右， 10d左右料面出現米粒大小原基。
7）出菇管理：原基出現後，在聚丙烯塑料薄膜上刺6-8個直徑為1cm的小孔，光照強度為230Lx、溫度為21℃和相對溼度為80%條件下，每天進行12h以上光照；待子座長幼體到3-5 cm，將溫度調整到19℃、溼度控制在85%，並逐步加強通風透氣，確保空氣新鮮，期間保持光照即可。
性能測試
對實施例1-3和對比例1的培養方法進行對比，結果如表1所示。
表中所述的培養期為從液體菌種接種到子座幼體形成；所述的觀賞期為從子座幼體到子座乾枯。
表1 測試結果
以上對本發明的具體實施方式進行了描述，但本發明並不限於以上描述。對於本領域的技術人員而言，任何對一種蛹蟲草液體培養基瓶栽出菇培養方法進行的同等修改和替代都是在本發明的範圍之中。因此，在不脫離本發明的精神和範圍下所做出的均等變換和修改，都應涵蓋在本發明的範圍內。