1－糖代MAGn的合成、的製作方法

2023-12-01 22:49:21 1

專利名稱：1－糖代MAGn的合成、的製作方法
技術領域：
本發明涉及具有優良腫瘤顯像、腫瘤治療效果的1-糖代MAGn的99Tcm和186Re標記物的製備及其1-糖代MAGn分子的合成，因含放射性99Tcm和186Re標記物的結構不穩定，其結構難以通過波譜學確定，因此本發明涉分子和它們放射性99Tcm和186Re標記物。因此本發明還涉及1-糖代MAGn分子(1)的合成。186Re標記的硫唑嘌呤肽分子為腫瘤治療劑，199Tcm標記的硫唑嘌呤肽分子為腫瘤顯像劑，其腫瘤顯像能力強於目前非常有前景、正在臨床研究的的199Tcm標-ECDG腫瘤顯像劑。
背景技術：
腫瘤的早期診斷是提高患者治癒率的關鍵，然而目前的腫瘤診斷藥物缺陷很多，因此優良腫瘤顯像劑的研發勢在必行。糖是生命的物質基礎和結構基礎，是一切生命活動的根本，是理想的信息載體，控制細胞的分裂與分化，調節細胞的生長與衰老，參與細胞識別和分子識別。糖分子除了具有自身的生物活性外，還具有很強的靶向性，是一種理想的藥物載體。生物活性基團與糖相連，通過二者的協同作用，一方面提高藥物的靶向性，增加藥物的生物利用度，提高療效，降低藥物毒副作用，另一方面生物活性基團也激活了糖的生物活性，增強了糖的藥用價值。所以，糖可以修飾具有生物活性的物質，不僅可以選擇性地靶向給藥，解決藥物治療選擇性差的棘手問題，還可以緩慢釋放藥物作用基團，起到控制或緩釋的作用。近10多年來，分子肽不僅是四配位配體的雙功能連接劑，也是目前腫瘤顯像劑研究的熱點。將糖中間體引入到具有生物活性的化合物中已經成為藥物研究的重要措施，因為它們是治療藥物和基因的特殊載體[34]，是改造生物活性多肽骨架的重要的修飾方式之一[35]。因此我們設計合成了1-糖代MAGn分子，並進一步得到放射性99Tcm和186Re標記物，發現了具有優良腫瘤顯像能力的腫瘤顯像劑。

發明內容
本發明還提供含有本發明化合物作為配體，是能夠全面確定結構，且與結構式(2)[結構式(2)因含放射性核素而不穩定，難以通過譜圖測定]緊密相連的重要部分。

其中R1為H、OH、OAC，R2為OH、H、OAC、 R3為OH、OAC、NHAC，R4為OH、OAC，R5為H、Tr，m為0、1、2，n為0、1、2……20。
其中R1為H、OH、OAC，R2為OH、H、OAC、 R3為OH、OAC、NHAC，R4為OH、OAC，m為0、1、2，n為0、1、2……20，M為99Tcm、186Re。
本發明的化合物(1)是如下化合物，其中R2為H時，R1為H、OH、OAC，R3為OH、OAC、NHAC，R4為OH、OAC，R5為H、Tr，m為0、1、2，n為0、1、2……20。
本發明的化合物(1)是如下化合物，其中R2為OH時，R1為H、OH、OAC，R3為OH、OAC、NHAC，R4為OH、OAC，R5為H、Tr，m為0、1、2，n為0、1、2……20。
本發明的化合物(1)是如下化合物，其中R2為OAC時，R1為H、OH、OAC，R3為OH、OAC、NHAC，R4為OH、OAC，R5為H、Tr，m為0、1、2，n為0、1、2……20。
本發明的化合物(1)是如下化合物，其中R2為 時，R1為H、OH、OAC，R3為OH、OAC、NHAC，R4為OH、OAC，R5為H、Tr，m為0、1、2，n為0、1、2……20。
本發明的化合物(1)是如下化合物，其中R2為 時，R1為H、OH、OAC，R3為OH、OAC、NHAC，R4為OH、OAC，R5為H、Tr，m為0、1、2，n為0、1、2……20。
本發明的化合物(1)是如下化合物，其中R2為 時，R1為H、OH、OAC，R3為OH、OAC、NHAC，R4為OH、OAC，R5為H、Tr，m為0、1、2，n為0、1、2……20。
本發明的化合物(1)是如下化合物，其中R2為 時，R1為H、OH、OAC，R3為OH、OAC、NHAC，R4為OH、OAC，R5為H、Tr，m為0、1、2，n為0、1、2……20。
本發明的化合物(2)是如下化合物，其中M＝99Tcm時，R1為H、OH、OAC，R2為OH、H、OAC、 R3為OH、OAC、NHAC，R4為OH、OAC、m為0、1、2，n為0、1、2……20，本發明的化合物(2)是如下化合物，其中M＝186Re時，R1為H、OH、OAC，R2為OH、H、OAC、 R3為OH、OAC、NHAC，R4為OH、OAC、m為0、1、2，n為0、1、2……20，
本發明還提供製備式(1)、(2)化合物或其藥學上可接受的鹽、絡合物和相應藥理作用的應用。製備方法包括以下步驟反應(a) 上述反應(a)，通過先將化合物(a1)的-SH實施保護，再將羥基活化成活潑酯(a2)，再在鹼性條件下與胺基酸反應形成肽鏈(a3)，最後在與甘氨酸二肽反應形成小肽配體(a4)製備化合物(a2)的反應通常在有機溶劑(如二氯甲烷，氯仿)中，先將化合物(a1)與等摩爾的三苯基氯化物反應生成TrSCH2COOH，此反應優選在室溫進行一個小時。
生成TrSCH2COOH在常規的有機溶劑(如二氯甲烷，氯仿，四氫呋喃)及縮合劑(如DCC)中，與等摩爾的NHS反應得化合物(a2)。
此反應優選在無水四氫呋喃，於零度到室溫反應18個小時。
所得化合物(a2)在鹼性條件下(如氫氧化鈉，碳酸鉀，碳酸鈉)，與胺基酸反應得化合物(a3)。
此反應優選在氫氧化鈉水溶液中，控制反應溫度50-60度之間，回流兩個小時。
重複操作將化合物(a3)經羧基活化，最後與甘氨酸二肽反應形成小肽配體(a4)。
反應(b) 通過將糖類化合物(b1)進行羥基的保護形成化合物(b2)，然後轉為1位滷素取代的(b3)，再在有機溶劑中與疊氮化物反應轉為相應的疊氮糖(b4)，最後還原為氨基糖(b5)。
羥基的保護包括成酯保護(如醋酸酐，乙醯氯，碳酸酯，磺酸酯)，成醚保護(如苄醚，三苯甲醚，二氫吡喃)，縮醛縮酮保護(如丙酮)。
製得的化合物(b3)在有機溶劑中(如DMF，THF)與疊氮化物反應轉為相應的疊氮糖(b4)。
反應優選用1摩爾的化合物(b3)與1.5摩爾的疊氮化物在室溫下反應12個小時。
所得化合物(b4)還原為氨基糖(b5)。
還原包括Pd/C，Ph3P/H2反應優選在有機溶劑THF中，用Pd/C做還原劑，室溫反應3個小時。
反應(c) 通過將糖類化合物(c1)進行羥基的保護形成化合物(c2)，然後轉為1位滷素取代的糖(c3)，再在有機溶劑中與疊氮化物反應轉為相應的疊氮糖(c4)，最後催化氫化轉變位氨基糖(c5)。
羥基的保護包括成酯保護(如醋酸酐，乙醯氯，碳酸酯，磺酸酯)，成醚保護(如苄醚，三苯甲醚，二氫吡喃)，縮醛縮酮保護(如丙酮)。
製得的化合物(c3)在有機溶劑中(如DMF，THF)與疊氮化物反應轉為相應的疊氮糖(b4)。
反應優選用1摩爾的化合物(c3)與1.5摩爾的疊氮化物在室溫下反應12個小時。
所得化合物(b4)還原為氨基糖(b5)。
還原包括Pd/C，Ph3P/H2反應優選在有機溶劑THF中，用Pd/C做還原劑，室溫反應3個小時。
反應(d)
通過將糖類化合物(d1)進行羥基的保護形成化合物(d2)，然後轉為6位滷素取代的糖(d3)，再在有機溶劑中與疊氮化物反應轉為相應的疊氮糖(d4)，最後催化氫化轉變位氨基糖(d5)。
羥基的保護包括成酯保護(如醋酸酐，乙醯氯，碳酸酯，磺酸酯)，成醚保護(如苄醚，三苯甲醚，二氫吡喃)，縮醛縮酮保護(如丙酮)。
製得的化合物(d3)在有機溶劑中(如DMF，THF)與疊氮化物反應轉為相應的疊氮糖(d4)。
反應優選用1摩爾的化合物(d3)與1.5摩爾的疊氮化物在室溫下反應12個小時。
所得化合物(b4)還原為氨基糖(b5)。
還原包括Pd/C，Ph3P/H2反應優選在有機溶劑THF中，用Pd/C做還原劑，室溫反應3個小時。
反應(e) 反應(f)
反應(g) 反應(h) 上述反應(e)，(f)，(g)，(h)為在肽縮合劑存在下，氨基糖和小肽配體形成糖代MAGn。
肽縮合劑包括BOP和DIPEA，DCC和DMAP反應優選用縮合劑BOP和DIPEA，反應5個小時。
具體實施例方式
以下通過實施例進一步說明本發明，但並不限制本發明。
實施例1、Tr-MAG3-Glu和Tr-MAG3-Glu(Ace)4下列小肽配體簡稱為 (1)小肽配體的製備羧基的括化在20mL三口燒瓶，裝上配有乾燥管的冷凝管和溫度計，攪拌下加入TrCH2COOH(3mmol)和NHS(3mmol)的無水THF溶液(4mL)，冰鹽浴冷卻至-5～0℃，10min以後，逐漸加入DCC(3mL)的無水THF(3mL)溶液，然後維持-5-0℃反應2小時，有大量白色沉澱生成。繼續在室溫下攪拌16小時，停止反應。濾掉沉澱，用冷CH2Cl2充分洗滌，旋蒸掉溶劑，得粗產品。在乙酸乙酯中重結晶，得無色稜狀晶體1.10g，產率91％。m.p.177.5-178.3℃，IR(KBr，cm-1)3070(w)，1790，1745(活潑酯特徵峰)；1630，1580，1495，1445。
化合物Tr-MAG的合成在裝有冷凝管和攪拌裝置的500mL燒瓶中，加入活潑酯(0.012mol)和250mL乙腈，攪拌溶解後緩慢升高溫度。控制在50-60℃間，緩慢加入胺基酸(0.012mol)的0.2MNaOH水溶液，然後回流2h。TLC跟蹤反應，原料消失。停止反應，溶液成中性。冰浴後用稀H2SO4調節PH值約為1，得到白色沉澱。
化合物Tr-MAG3按合成通法，活潑酯5g(0.012mol)與過量的Gly進行反應。用乙酸乙酯重結晶，得白色晶體5.1g，產率91.0％。IR(KBr，cm-1)3350(s)，3100-2500(w)，1740，16401H NMR(500MHz，DMSO)，δ(ppm)12.15(1H，br，COOH)，8.27(1H，NH)，7.37-7.26(15H，m，Ar)，3.67(2H，d，J＝4.7Hz，CH2)，2.82(2H，s，CH2)羧基的再次活化在配備有溫度計，冷凝管(加乾燥管)和攪拌器的25mL三口燒瓶中，加入上一步產物0.002mol，NHS(0.002mol)和無水THF(7.0mL)，室溫下攪拌10min。冰浴降溫至0-5℃，加入DCC(0.002mol)的無水THF(4mL)溶液，出現白色沉澱，然後維持溫度0～5℃繼續反應2h，攪拌過夜，終止反應。過濾旋幹，用乙醚研製後，用大量水洗滌。然後烘乾。IR顯示1820cm-1，1780cm-1和1740cm-1有活潑酯的特徵酯吸收峰。
四齒配體的合成Tr-MAG3三苯基硫代乙醯-三甘氨酸在配備冷凝管和攪拌器的100mL燒瓶中，加入Tr-MAG的活潑酯(0.028mol)和60mL乙腈，然後升溫至50℃左右，緩慢加入等摩爾的甘氨酸二肽的0.2MNaOH水溶液。加熱回流2h，TLC跟蹤反應。原料消失，溶液呈鹼性，加入水稀釋，再用稀硫酸調節PH值至1左右，有大量白色沉澱產生，收集固體。產率70％。Tr-MAG3C27H27N3O5S FW505(2)糖胺的合成2，3，4，6-四-O-乙醯基-1-氨基葡萄糖在100mL的反應瓶中加入20mL醋酸酐，4℃下逐滴加入103μL高氯酸(70％)，恢復到室溫，分批加入5g(27.75mmol)1a，30～40℃下反應30min得到2a，將2a混合液降溫至20℃，加入1.55g紅磷，用滴液漏鬥緩緩加入2.9mL液溴，保持反應溫度不超過20℃，然後在大約30min內加入3.6mL蒸餾水，保持反應溫度低於20℃，加完後自然恢復至室溫反應2h，TLC檢測反應進程，反應結束後，用30mL二氯甲烷稀釋反應液，用沙濾漏鬥將不溶物過濾掉，用少量二氯甲烷衝洗反應器和漏鬥，合併濾液和洗液，用20mL×2冰水快速洗滌，然後將有機層轉入25mL攪拌著碳酸氫鈉冰水液中中和至不再產生氣泡為止，用分液漏鬥將水層分掉，有機層用無水硫酸鈉乾燥，過濾，旋蒸得到黃色油狀物，將油狀物轉入研缽用石油醚和乙醚[V/V＝1∶1]的混合液進行研磨直到白色固體粉末出現，將粉末過濾後用少許乙醚衝洗，乾燥，用乙醚-石油醚重結晶得3a(9.30g)，C14H19BrO9FW411收率81.5％，所得產物不穩定直接進行下一步反應。
將5.0g(12.16mmol)3a溶於10mL DMF中，加入1.00g(15.38mmol)疊氮化鈉，室溫下反應12h，TLC檢測反應進程，反應結束後，過濾，濾液到入大量中冰水中，出現大量白色沉澱，過濾得粗產品4a(3.43g)，C14H19N3O9FW373收率75.6％，用乙酸乙酯重結晶得稜狀晶體，m.p.129～130℃。
將500mg(1.34mmol)4a溶於43mL THF中，加入130mgPd/C，室溫下氫化反應3h，TLC檢測反應進程，反應結束後用沙濾漏鬥將Pd/C過濾掉，將溶劑蒸除得到白色固體，用無水乙醇重結晶得326mg白色針狀晶體5a收率70.0％C14H21NO9FW347，所得產物不穩定直接進行下一步反應。
IR(KBr，cm-1)3411.3(NH2)1754.9，1734.0，993.1；(3)糖肽小分子的合成通法在25ml反應瓶中加入乾燥處理的10ml DMF，加入小肽配體(10mmol)，攪拌5min溶解，加入BOP reagent(15mmol)，反應5min，，再加入(10mmol)糖胺和幾滴DIPEA，反應5h，然後把混合液加入到25ml冰水混合液中，攪拌5min，有大量白色沉澱生成，過濾，乾燥，柱層析(二氯甲烷∶甲醇＝10∶1)，得到目標產物。
β-N-三苯甲基硫代乙醯三甘氨醯基-2，3，4，6-四乙醯基葡萄糖(Tr-MAG3-Glu(Ace)4)β-N-triphenylmethylthioacetyl triglycyl-2，3，4，6-tetra-O-acetyl glucose
按反應通法，柱層析後(二氯甲烷∶甲醇＝10∶1)，收率53.2％C41H46N4O13S FW834，m.p.104.6～110℃。
MSm/z C11H48N4O13SNa[M+Na]+857 found 857.0[α]20D+10.0(c 1.2，CH3OH)IR(cm-1)3320.0(NH)，3059.7.(Ar-H)，2937.8(CH2)，1754.4(酯基)，1661.8(醯胺I帶)，1526.5(醯胺II帶)，907.81H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ8.614(d，1H，NH)，8.167(1H，m，NH)，8.11-8.09(2H，m，NH)，7.37-7.25(m，15H，Ar)，5.413-5.375(t，J＝9.5Hz，1H，H-1』)，5.368-5.330(t，J＝9.5Hz，1H，H-3』)，4.920-4.880(t，J＝9.4Hz，1H，H-4』)，4.874-4.836(t，J＝9.4Hz，1H，H-2』)，4.17-4.13(dd，J＝4.4，12.4Hz，1H，H-6』)，4.11-4.09(m，1H，H-5』)，3.98-3.96(d，J＝12.4，1H，H-6」)，3.71-3.64(br，6H，CH2)，2.87(s，2H，SCH2)，2.00-1.93(m，12H，CO(CH3))。
13C NMR(125MHz，DMSO-d6)δ170.5(1C＝O)，170.0-168.2(6C＝O)，168.1(1C＝O)，144.5(3C，Ar)，129.6(6C，Ar)，128.6(6C，Ar)，127.3(3C，Ar)，77.3(C1)，73.2(C3)，72.6(C5)，71.0(C2)，68.3(C4)，66.5(CPh3)，62.2(C6)，，42.8-42.3(3CH2)，36.3(SCH2)，21.0-20.8(4CO(CH3)。
β-N-三苯甲基硫代乙醯三甘氨醯基葡萄糖(Tr-MAG3-Glu)β-N-triphenylmethylthioacetyl triglycyl glucose1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ8.614(d，1H，NH)，8.167(1H，m，NH)，8.11-8.09(2H，m，NH)，7.37-7.25(m，15H，Ar)，5.413-5.375(t，J＝9.5Hz，1H，H-1』)，5.368-5.330(t，J＝9.5Hz，1H，H-3』)，4.920-4.880(t，J＝9.4Hz，1H，H-4』)，4.874-4.836(t，J＝9.4Hz，1H，H-2』)，4.17-4.13(dd，J＝4.4，12.4Hz，1H，H-6』)，4.11-4.09(m，1H，H-5』)，3.98-3.96(d，J＝12.4，1H，H-6」)，3.75-3.70(m，4H，OH)，3.71-3.64(br，6H，CH2)，2.87(s，2H，SCH2)，IR(cm-1)3400.0(OH)，3059.7(Ar-H)，2937.8(CH2)，1661.8(醯胺I帶)實施例2 Tr-MAG3-AceA-Gla和Tr-MAG3-AceA-Gla(Ace)3(1)小肽配體的製備按上述方法製備得到Tr-MAG3。
(2)糖胺的合成2，3，4，6-四-O-乙醯基-1-氨基半乳糖在100mL的反應瓶中加入20mL醋酸酐，4℃下逐滴加入103μL高氯酸(70％)，恢復到室溫，分批加入5g(27.75mmol)1b，30～40℃下反應30min得到2b，將2b混合液降溫至20℃，加入1.55g紅磷，用滴液漏鬥緩緩加入2.9mL液溴，保持反應溫度不超過20℃，然後在大約30min內加入3.6mL蒸餾水，保持反應溫度低於20℃，加完後自然恢復至室溫反應2h，TLC檢測反應進程，反應結束後，用30mL二氯甲烷稀釋反應液，用沙濾漏鬥將不溶物過濾掉，用少量二氯甲烷衝洗反應器和漏鬥，合併濾液和洗液，用20mL×2冰水快速洗滌，然後將有機層轉入25mL攪拌著碳酸氫鈉冰水液中中和至不再產生氣泡為止，用分液漏鬥將水層分掉，有機層用無水硫酸鈉乾燥，過濾，旋蒸得到黃色油狀物，將油狀物轉入研缽用石油醚和乙醚[V/V＝1∶1]的混合液進行研磨直到白色固體粉末出現，將粉末過濾後乾燥，得3b(9.10g)，C14H19BrO9FW411收率79.8％，所得產物不穩定直接進行下一步反應。
將5.0g(12.16mmol)3b溶於10mL DMF中，加入1.00g(15.38mmol)疊氮化鈉，室溫下反應12h，TLC檢測反應進程，反應結束後，過濾，濾液到入大量中冰水中，出現大量白色沉澱，過濾得粗產品4b(3.62g)，C14H19N3O9FW373收率79.8％，用乙酸乙酯重結晶得稜狀晶體，m.p.99～100℃。
IR(KBr，cm-1)2124.9(N3)，1750.81，1382.4，1224.4，1089.0將500mg(1.34mmol)4b溶於43mL THF中，加入130mgPd/C，室溫下氫化反應3h，TLC檢測反應進程，反應結束後用沙濾漏鬥將Pd/C過濾掉，將溶劑蒸除得到油狀物5b C14H21NO9FW347，所得產物不穩定直接進行下一步反應。
(3)糖肽小分子的合成β-N-三苯甲基硫代乙醯三甘氨醯基-2-乙醯氨基-3，4，6-三乙醯基半乳糖(Tr-MAG3-AceA-Gla(Ace)3)β-N-triphenylmethylthioacetyl triglycyl-2，3，4，6-tetra-O-acetyl glalacose按反應通法，柱層析後(二氯甲烷∶甲醇＝10∶1)，收率56.1％C41H46N4O13S FW834，m.p.102～110℃。
MSm/z C41H46N4O13SNa[M+Na]+857，found 857.0，[α]D20+18.0(c 1.4，CH3OH)IR(cm-1)3362.9(NH)，3060.5(Ar-H)，2933.4(CH2)，1751.1(酯基)，1658.9(醯胺I帶)，1533.1(醯胺II帶)，909.01H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ8.70-8.68(1H，d，NH)，8.18-8.16(1H，m，NH)，8.10-8.05(2H，m，NH)，7.35-7.25(m，15H，Ar)，5.369-5.325(t，J＝9.4，1H，H-1』)，5.294-5.275(m，2H，H-3』，H-4』)，5.06-5.04(t，J＝9.4Hz，1H，H-2』)，4.34-4.32(t，J＝6.0Hz，1H，H-5』)，4.06-4.03(dd，J＝6.1Hz，11.3Hz，1H，H-6』)，3.98-3.95(dd，J＝6.8Hz，11.3Hz，1H，H-6」)，3.71-3.65(br，6H，CH2)，2.87(s，2H，SCH2H)，2.10-1.91(m，12H，CO(CH3))。
13C NMR(125MHz，DMSO-d6)δ170.4(1C＝O)，169.9.0-169.3(6C＝O)，168.1(1C＝O)，144.5(3C，Ar)，129.6(6C，Ar)，128.5(6C，Ar)，127.3(3C，Ar)，77.7(C1)，71.8(C5)，71.3(C4)，68.7(C2)，68.0(C3)，66.5(CPh3)，61.9(C6)，42.7-42.2(3CH2)，36.3(SCH2)，21.0-20.8(4CO(CH3)。
β-N-三苯甲基硫代乙醯三甘氨醯基-2-乙醯氨基半乳糖(Tr-MAG3-AceA-Gla)β-N-triphenylmethylthioacetyl triglycyl glalacoseδ8.42-8.40(1H，d，NH)，8.19-8.15(1H，m，NH)，8.041-8.018(t，J＝58.1H，NH)，7.37-7.25(m，15H，Ar)，4.81-4.80(d，1H，H-1』)，4.76-4.75(d，1H，H-2』，)，4.70-4.66(t，1H，H-3』)，4.63-4.60(t，1H，J＝9.4HZ，H-4』)，4.47-4.46(d，1H，H-5』)，3.74-3.71(m，4H，OH)，3.68-3.36(br，6H，CH2)，2.87(s，2H，SCH2)IR(cm-1)3403.7(OH)，2925.7(CH2)，1653.3(醯胺I帶)，1539.4(醯胺II帶)實施例3 Tr-MAG3-AceA-Glu和Tr-MAG3-AceA-Glu(Ace)3(1)小肽配體的製備按上述方法製備得到Tr-MAG3。
(2)糖胺的合成
2-N-乙醯基-3，4，6-三-O-乙醯基-1-氨基葡萄糖在50mL的反應瓶中加入10mL乙醯氯，快速攪拌下在2～3min內加入5.0g(22.60mmol)1c室溫下反應16h，TLC檢測反應進程，反應結束後向反應體系中加入40mL氯仿進行稀釋，然後到入裝有40g冰和10mL水的燒杯中，劇烈攪拌，分液漏鬥分液，有機層迅速轉入到40mL飽和碳酸氫鈉溶液中進行中和，分液漏鬥分液，有機層用無水硫酸鈉乾燥，以上後處理要在15min內完成，乾燥完成後過濾，50℃下旋轉蒸發至剩餘約7.5mL溶劑，迅速加入無水乙醚，大約30後開始出現結晶，放置12h至結晶完全得3c(5.3g)C14H20ClNO8FW365.7，收率64.1％，所得產物不穩定直接進行下一部反應。
將4.6g(12.58mmol)3c溶於12.3mL DMF中，加入1.31g疊氮化鈉，室溫下反應12h，TLC檢測反應進程，反應結束後，過濾，在減壓下蒸除掉DMF，殘查溶於30mL氯仿，用2.5mL×3冰水洗滌，洗液用15mL×2氯仿反萃，合併氯仿層，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，旋轉蒸發得固體，用乙酸乙酯-乙醚混合溶劑進行重結晶得3.23g白色針狀晶體3c C14H20N4O8FW372收率69.0％，m.p.172～173℃。
將500mg(1.34mmol)4c溶於43mL THF中，加入130mgPd/C，室溫下氫化反應3h，TLC檢測反應進程，反應結束後用沙濾漏鬥將Pd/C過濾掉，將溶劑蒸除得到油狀物5c C14H22N2O8FW346，所得產物不穩定直接進行下一步反應。
(3)糖肽小分子的合成β-N-三苯甲基硫代乙醯三甘氨醯基-2-乙醯氨基-3，4，6-三乙醯基葡萄糖(Tr-MAG3-AceA-Glu(Ace)3)β-N-triphenylmethylthioacetyl triglycyl-2-N-acetylamino-3，4，6-tri-O-acetyl glucose按反應通法，柱層析後(二氯甲烷∶甲醇＝10∶1)，收率43.2％，C41H47N5O12S FW833，m.p.119.5～123.9℃。
MSm/z C41H47N5O12SNa，[M+Na]+856，found 856.1，[α]D20+7.8(c 1.0，CH3OH)IR(cm-1)3321.3(NH)，3059.6(Ar-H)，2932.7(CH2)，1751.1(酯基)，1655.6(醯胺I帶)，1528.1(醯胺II帶)，906.0；1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ8.34-8.32(1H，d，NH)，8.17-8.16(1H，m，NH)，8.10-8.08(2H，m，NH)，8.00-7.98(1H，m，NH)，7.35-7.25(m，15H，Ar)，5.15-5.11(m，2H，H-1』，H-3』)，4.85-4.81(t，J＝9.9Hz，1H，H-4』)，4.17-4.16(dd，J＝4.6，12.4，1H，H-6』)，3.97-3.94(d，J＝10.4，H-6」)，3.91-3.89(t，J＝9.8Hz，1H，H-2』)，3.87-3.84(m，1H，H-5』)，3.74-3.65(br，6H，CH2)，2.87(s，2H，SCH2)，2.10-1.91(m，9H，CO(CH3)，1.76(s，3H，NHCO(CH3))。
13C NMR(125MHz，DMSO-d6)δ170.5(1C＝O)，169.9.0-169.3(6C＝O)，168.0(1C＝O)，144.6(3C，Ar)，129.6(6C，Ar)，128.5(6C，Ar)，127.30(3C，Ar)，77.3(C1)，73.2(C3)，72.6(C5)，71.0(C2)，68.3(C4)，66.5(CPh3)，62.2(C6)，42.7-42.2(3CH2)，36.3(SCH2)，21.0-20.8(12H，4CO(CH3)β-N-三苯甲基硫代乙醯三甘氨醯基-2-乙醯氨基葡萄糖(Tr-MAG3-AceA-Glu)β-N-triphenylmethylthioacetyl triglycyl-2-N-acetylamino glucoseδ8.34-8.32(1H，d，NH)，8.17-8.16(1H，m，NH)，8.10-8.08(2H，m，NH)，8.00-7.98(1H，m，NH)，7.35-7.25(m，15H，Ar)，5.15-5.11(m，2H，H-1』，H-3』)，4.85-4.81(t，J＝9.9Hz，1H，H-4』)，4.17-4.16(dd，J＝4.6，12.4，1H，H-6』)，3.97-3.94(d，J＝10.4，H-6』)，3.91-3.89(t，J＝9.8Hz，1H，H-2』)，3.87-3.84(m，1H，H-5』)，3.78-3.75(m，3H，OH)，3.74-3.65(br，6H，CH2)，2.87(s，2H，SCH2)1.76(s，3H，NHCO(CH3))。
IR(cm-1)3320.0(OH)，3059.6(Ar-H)，2932.7(CH2)，1655.6(醯胺I帶)，1528.1(醯胺II帶)實施例4 Tr-MAG3-Lac(Ace)7(1)小肽配體的製備按上述方法製備得到Tr-MAG3。
(2)糖胺的合成七-O-乙醯基-1-氨基乳糖在100mL的反應瓶中加入20mL醋酸酐，4℃下逐滴加入103μL高氯酸(70％)，恢復到室溫，分批加入5g(15.15mmol)1d，30～40℃下反應30min得到2d，將2d混合液降溫至20℃，加入1.55g紅磷，用滴液漏鬥緩緩加入2.9mL液溴，保持反應溫度不超過20℃，然後在大約30min內加入3.6mL蒸餾水，保持反應溫度低於20℃，加完後自然恢復至室溫反應2h，TLC檢測反應進程，反應結束後，用30mL二氯甲烷稀釋反應液，用沙慮漏鬥將不溶物過濾掉，用少量二氯甲烷衝洗反應器和漏鬥，合併濾液和洗液，用20mL×2冰水快速洗滌，然後將有機層轉入25mL攪拌著碳酸氫鈉冰水液中中和至不再產生氣泡為止，用分液漏鬥將水層分掉，有機層用無水硫酸鈉乾燥，過濾，旋蒸得到油狀物，將油狀物轉入研缽用石油醚和乙醚[V/V＝1∶1]的混合液進行研磨直到白色固體粉末出現，乾燥得3d(7.90g)，C23H31BrO15FW627收率83.2％，所得產物不穩定直接進行下一步反應。
將5.0g(7.97mmol)3d溶於10mL DMF中，加入0.78g(12.00mmol)疊氮化鈉，室溫下反應12h，TLC檢測反應進程，反應結束後，過濾，濾液到入大量中冰水中，出現大量白色沉澱，過濾得粗產品4d(2.44g)，C23H31N3O15FW589.5收率52.1％，m.p.69～70℃。
將1.00g(1.70mmol)4a溶於43mL THF中，加入225mgPd/C，室溫下氫化反應3h，TLC檢測反應進程，反應結束後用沙濾漏鬥將Pd/C過濾掉，將溶劑蒸除得到白色固體C23H33NO15FW563.5，所得產物不穩定直接進行下一步反應。
(3)糖肽小分子的合成β-N-三苯甲基硫代乙醯三甘氨醯基-七乙醯基乳糖(Tr-MAG3-Lac(Ace)7)β-N-triphenylmethylthioacetyl triglycyl--sept-O-acetyl lactose按反應通法，柱層析後(二氯甲烷∶甲醇＝10∶1)，收率54.7％C53H62N4O21S FW1122 m.p.123.9～128.4℃。
MSm/z C53H62N4O21SNa，[M+Na]+1145，found 1145.1，[α]D20+7.3(c 1.1 CH3OH)IR(cm-1)3371.6(NH)，3057.8(Ar-H)，2934.6(CH2)，1753.1(酯基)，1667.5(醯胺I帶)，1532.6(醯胺II帶)，904.11H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ8.56-8.54(1H，d，NH)，8.17-8.16(1H，m，NH)，8.10-8.09(2H，m，NH)，7.35-7.25(m，15H，Ar)，5.29(t，1H，J＝9.5Hz，H-1』)，5.24-5.15(m，3H，H-4」，H-3』，H-3」)，4.86(dd，J＝8.0，10.1Hz，1H，H-2」)，4.77-4.76(m，2H，H-2』，H-1」)，4.28-4.24(m，2H，H-6」-1，H-5」)，4.03-4.00(m，3H，H-6」-2，H-6-5』，H-6-1』)，3.90-3.77(m，2H，H-6-2』，H-4』)，3.71-3.64(m，6H，3CH2)，2.87(s，2H，SCH2)，2.11-1.90(m，21H，7CO(CH3))。
13C NMR(125MHz，DMSO-d6)δ170.7(1C＝O)，170.4-169.5(9C＝O)，168.2(1C＝O)，144.5(3C，Ar)，129.5(6C，Ar)，128.5(6C，Ar)，127.3(3C，Ar)，100.2(C-1」)77.2(C-1』)，76.4(C-4』)，73.8(C-5』)，73.5(C-3』)，71.2(C-2』)，70.9(C-3」)，70.1(C-5」)，69.3(C-2」)，67.5(C-4」)，66.4(CPh3)，62.9(C-6」)，61.3(C-6』)，42.8-42.4(3CH2)，36.3(SCH2)，21.1-20.7(7CO(CH3)。
實施例5 Tr-MAG3-Mal(Ace)7(1)小肽配體的製備按上述方法製備得到Tr-MAG3。
(2)糖胺的合成七-O-乙醯基-1-氨基麥芽糖在100mL的反應瓶中加入20mL醋酸酐，4℃下逐滴加入103μL高氯酸(70％)，恢復到室溫，分批加入5g(15.15mmol)1e，30～40℃下反應30min得到2d，將2d混合液降溫至20℃，加入1.55g紅磷，用滴液漏鬥緩緩加入2.9mL液溴，保持反應溫度不超過20℃，然後在大約30min內加入3.6mL蒸餾水，保持反應溫度低於20℃，加完後自然恢復至室溫反應2h，TLC檢測反應進程，反應結束後，用30mL二氯甲烷稀釋反應液，用沙慮漏鬥將不溶物過濾掉，用少量二氯甲烷衝洗反應器和漏鬥，合併濾液和洗液，用20mL×2冰水快速洗滌，然後將有機層轉入25mL攪拌著碳酸氫鈉冰水液中中和至不再產生氣泡為止，用分液漏鬥將水層分調，有機層用無水硫酸鈉乾燥，過濾，旋蒸得到油狀物，將油狀物轉入研缽用石油醚和乙醚[V/V＝1∶1]的混合液進行研磨直到白色固體粉末出現，乾燥得3e(6.88g)，C23H31BrO15FW627收率72.5％，所得產物不穩定直接進行下一步反應。
將5.0g(7.97mmol)3d溶於10mL DMF中，加入0.78g(12.00mmol)疊氮化鈉，室溫下反應12h，TLC檢測反應進程，反應結束後，過濾，濾液到入大量中冰水中，出現大量白色沉澱，過濾得粗產品4d(2.63g)，C23H31N3O15FW589.5收率56％，m.p.68.5～71.7℃。
將1.00g(1.70mmol)4a溶於43mL THF中，加入225mgPd/C，室溫下氫化反應3h，TLC檢測反應進程，反應結束後用沙濾漏鬥將Pd/C過濾掉，將溶劑蒸除得到白色固體C23H33NO15FW563.5，所得產物不穩定直接進行下一步反應。
(3)糖肽小分子的合成β-N-三苯甲基硫代乙醯三甘氨醯基-七乙醯基麥芽糖(Tr-MAG3-Mal(Ace)7)β-N-triphenylmethylthioacetyl triglycyl--sept-O-acetyl maltose按反應通法，柱層析後(二氯甲烷∶甲醇＝10∶1)，收率51.2％C53H62N4O21S FW1122，m.p.117.9～120.5℃MSC53H62N4O21SNa [M+Na]+1145 found 1145.1[α]D20+36.5(c 1.5，CH3OH)IR(cm-1)3366.3(NH)，3059.8(Ar-H)，2937.3(CH2)，1751.7(酯基)，1662.6(醯胺I帶)，1522.1(醯胺II帶)，900.81H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ8.56-8.54(d，1H，NH)，8.16-8.15(m，1H，NH)，8.11-8.07(m，2H，2NH)，7.35-7.25(m，15H，Ar)，5.38-5.236(m，3H，H-1』H的J＝9.2Hz，H-4」，H-3』)，4.989(t，1H，H-3」)，4.897-4.876(dd，J＝8.0，10.1，1H，H-2」)，4.745(t，J＝9.5Hz，H-2』)，4.336(d，J＝9.5Hz，1H，H-1」)，4.17-4.15(m，2H，H-6」-1，H-5」)，4.04-3.90(m，5H，H-6」-2，H-6-5』，H-6-1』，H-6-2』，H-4』)，3.71-3.62(br，6H，3CH2)，2.87(s，2H，SCH2)，2.06-1.90(m，21H，7CO(CH3))。
13C NMR(125MHz，DMSO-d6)δ170.6(1C＝O)，170.5-169.5(9C＝O)，168.2(1C＝O)，144.6(3C，Ar)，129.5(6C，Ar)，128.5(6C，Ar)，127.3(3C，Ar)，95.8(C-1」)76.9(C-1』)，75.5(C-4』)，74.0C-5』)，73.2(C-3』)，71.6(C-2』)，69.9(C-3」)，69.4(C-5」)，69.3(C-2」)，69.2(C-4」)，66.4(CPh3)，63.4(C-6」)，61.9(C-6』)，42.8-42.3(3CH2)，36.3(SCH2)，21.1-20.7(7CO(CH3)。
利用上述合成方法可以合成其餘的目標化合物如結構(1)中的所有目標物 其中R1為H、OH、OAC，R2為OH、H、OAC、 R3為OH、OAC、NHAC，R4為OH、OAC，R5為H、Tr，m為0、1、2，n為0、1、2……20。
脫保護、標記及放化純度的檢驗
其中R1為H、OH、OAC，R2為OH、H、OAC、 R3為OH、OAC、NHAC，R4為OH、OAC，m為0、1、2，n為0、1、2……20，M為99Tcm、186Re。
脫保護在10mL燒瓶中加入樣品5.11×10-5mol和TFA(3mL)，攪拌5min後。再加入HSiEt3(1mL)，溶液立即澄清。繼續攪拌5min，旋蒸溶劑，加入4mL 0.1MNaOH水溶液，用CH2Cl2萃取除去三苯甲烷，拋去有機相，水相充氮氣保護。
配體的標記採用直接標記法製備。10mg葡萄糖酸鈣加入小青黴素瓶中，用100μL配體溶液(濃度10g.L-1)，然後加入50μL醋酸-醋酸鈉緩衝溶液，調節溶液的PH值為4～5，加入25μL酒石酸-SnCl2溶液(酒石酸∶SnCl2＝0.8mg/mL∶0.4mg/mL)，加入適量新鮮的99TcmO4-淋洗液，室溫下反應30min。反應即可完成。
標記物的層析鑑定及放化純度的檢驗用新華1號濾紙作為支持體，用生理鹽水作展開劑，鑑定測得標記物的放化純度均大於95％。
生物活性1)荷肉瘤S180小鼠體內γ顯像和體內分布實驗荷肉瘤S180小鼠體內γ顯像按上述方法製備的不同配合物溶液作為尾靜脈注射液。每隻荷肉瘤S180小鼠尾靜脈注射100μL標記液(0.56-0.74MBq)，昆明鼠體重為20-24g，分別在注射後不同時間利用GE MPRγcamera進行全身顯像。
體內分布荷肉瘤S180小鼠尾靜脈注射不同配合物溶液的標記液後不同時間斷頸處死，取血液和臟器進行放射性測量，血液的重量以體重的7％計，分別計算各組織的攝取率(ID/％·g-1)以及T與NT的比。
2)生物活性糖肽的99mTc標記目標物99mTc-MAG3-AceA-Gla在小鼠器官、血液及其腫瘤S180的分布見表1，現在臨床研究顯示比較好的9mTc標記物99mTc-ECDG的數據列於表2，表中數據顯示99mTc-MAG3-AceA-Gla在腫瘤中好於99mTc-ECDG的吸收，與相關文獻比較結果也是如此(DavidJ.Yang，Chang-Guhn Kim，Naomi R.Schechter，Imaging with 99mTc ECDC Targeted at theMulttfunctional Glucose Transport SystemFeasiility Study with Rodens，Radiology2003；226465-473)；在腫瘤中的吸收與其它組織吸收的比值，99mTc-MAG3-AceA-Gla和99mTc-ECDG相近，兩者都能夠使腫瘤清晰顯像，因此99mTc-MAGn-AceA-Gla的類標記物有成為新型腫瘤顯像劑的可能。
表199mTc-MAG3-AceA-Gla在給藥2h後荷有S180瘤的小鼠的分布(％ID/g)Tabl 1 Biodistribution of99mTc-MAG3-AceA-Gla in mice bearing S180 tumor.(％ID/g)

表2、99mTc-ECDG在在給藥2h後荷有S180瘤的小鼠的分布(％ID/g)Tabl 2 Biodistribution of9mTc-ECDG in mice bearing S180 tumor.(％ID/g

權利要求
1.具有式(1)結構的化合物是標記99Tcm和186Re的關鍵配體部分[是能夠全面確定結構、且與結構式(2)(結構式(2)因放射性不穩定難以通過譜圖測定)緊密相連的重要部分]。 其中R1為H、OH、OAC，R2為OH、H、OAC、 R3為OH、OAC、NHAC，R4為OH、OAC，R5為H、Tr，m為0、1、2，n為0、1、2……20。
2.權利要求(1)的化合物R2為H時，R1為H、OH、OAC，R3為OH、OAC、NHAC，R4為OH、OAC，m為0、1、2，n為0、1、2……20。R2為OH時，R1為H、OH、OAC，R3為OH、OAC、NHAC，R4為OH、OAC，m為0、1、2，n為0、1、2……20。R2為OAC時，R1為H、OH、OAC，R3為OH、OAC、NHAC，R4為OH、OAC，m為0、1、2，n為0、1、2……20。R2為 時，R1為H、OH、OAC，R3為OH、OAC、NHAC，R4為OH、OAC，m為0、1、2，n為0、1、2……20。R2為 時，R1為H、OH、OAC，R3為OH、OAC、NHAC，R4為OH、OAC，m為0、1、2，n為0、1、2……20。R2為 時，R1為H、OH、OAC，R3為OH、OAC、NHAC，R4OH、OAC，m為0、1、2，n為0、1、2……20。R2為 時，R1為H、OH、OAC，R3為OH、OAC、NHAC，R4為OH、OAC，m為0、1、2，n為0、1、2……20。
3.權利要求具有結構(2)的化合物，是由結構(1)的化合物經與99Tcm或186Re標記而得到的不穩定、難以通過波譜等確定其結構的標記物，它們具有優良腫瘤顯像能力。 其中R1為H、OH、OAC，R2為OH、H、OAC、 R3為OH、OAC、NHAC，R4為OH、OAC，m為0、1、2，n為0、1、2……20，M為99Tcm、186Re。
4.權利要求(2)的化合物本發明的化合物(2)是如下化合物，其中M＝99Tcm時，其中R1為H、OH、OACR2為OH、H、OAC、 R3為OH、OAC、NHAC，R4為OH、OAC、m為0、1、2，n為0、1、2……20，本發明的化合物(2)是如下化合物，其中M＝186Re時，其中R1為H、OH、OAC，R2為OH、H、OAC、 R3為OH、OAC、NHAC，R4為OH、OAC、m為0、1、2，n為0、1、2……20。
5.權利要求(2)的化合物M＝99Tcm標記物作為腫瘤顯像劑；M＝186Re標記物作為腫瘤治療劑。
全文摘要
本發明涉及具有優良腫瘤顯像效果的1－糖代MAGn的
文檔編號A61K51/00GK1831005SQ200510053429
公開日2006年9月13日 申請日期2005年3月10日 優先權日2005年3月10日
發明者齊傳民, 李慧芳潔, 孫彭利, 熊麗琴, 趙雲嶺, 張春麗 申請人:北京師範大學