一種治療愛滋病的藥物組合物及其製備方法、質量控制方法和用途的製作方法

2023-12-05 13:20:51 1

專利名稱：一種治療愛滋病的藥物組合物及其製備方法、質量控制方法和用途的製作方法
技術領域：
本發明涉及ー種藥物組合物，特別涉及一種用於治療治療愛滋病的藥物組合物。本發明還涉及該組合物的質量控制方法和用途。
背景技術：
愛滋病是HIV感染引起的獲得性免疫缺陷症候群，HIV感染進程和發病的不同階段臨床表現複雜多祥，包括在後期發生的致命性惡性腫瘤和各類機會性感染。人感染HIV-I後一般經7-12年進入發病期。照現行的診療標準，對於無症狀且CD+T細胞數尚未大幅度降低(例如，仍處於300個每微升以上)的HIV病毒攜帯者，不建議給 予抗病毒療法，否則會使病人和社會承擔誘發嚴重抗藥性的巨大風險。根據近十年的臨床實踐，對於進入發病期特別是發病早、中期的愛滋病患者，在實施HAART主流療法的同吋，同時加服中藥進行輔助治療，已見到在改善乏力、腹瀉、惡寒等併發症狀、減少西藥引起的毒副作用、提高患者治療依從性、提高患者生存質量等方面的效果。中藥應該能夠成為愛滋病治療的選項。天然有機化合物Euphorbiasteroid是本發明人發現具有抗HIV作用的一種續隨子烷型ニ萜化合物，単獨使用顯示具有一定的抗HIV作用。經美國國家腫瘤研究所(NCI)測定，在體外對愛滋病病毒(HIV-I)的複製具有較強的抑制作用，治療指數(半數細胞毒濃度/半數病毒複製抑制濃度)為600。本發明人在CN 201210119628. 4公開了ー種藥物組合物，該藥物組合物具有一定的抗HIV活性，但是有待進ー步提高其活性。

發明內容
本發明的ー個目的在於提供ー種治療愛滋病的藥物組合物。本發明的另ー個目的在於提供上述藥物組合物的質量控制方法。本發明的再ー個目的在於提供上述藥物組合物的在治療愛滋病中的應用。本發明所採取的技術方案是
ー種藥物組合物，其原料藥由以下質量份的
熟附子20 30份；
淫羊藿、乾薑、甘草各I0 15份；
人參、丹參、虎杖、茯苓各6 12份；
黃柏2 5份；
黃芩2 4份；
Euphorbiasteroid O. I O. 2 份組成。特別的，原料藥由以下質量份的
熟附子25份；淫羊藿、乾薑、甘草各12. 5份；
紅參7. 82份、茯苓7. 81份、虎杖7. 81份、丹參7. 81份；
黃柏3. 75份；
黃芩2. 5份；
Euphorbiasteroid O. 18 份組成。優選的，除Euphorbiasteroidタト,原料藥的有效成分經水提,之後醇提得到。上述藥物組合物的製備方法，包括如下步驟
1)取原料藥，用水煎煮，過濾，取濾液；、
2)將濾液離心，取上清液，濃縮，得水提濃液；
3)在水提濃液中加入こ醇，攪拌，靜置，之後離心，取上清液，去除こ醇，得到醇提
物；
4)將醇提物、Euphorbiasteroid與其他可接受的藥用輔料,製備得到藥物製劑。製備步驟包括如下操作
1)取原料藥,加水煎煮3次，每次加入20倍量的水，煎煮2h，放冷，濾過，合併濾液；
2)將濾液離心，取上清液並濃縮至原料藥重，得水提濃液；
3)在水提濃液加入兩倍體積濃度為95%(v/v)的こ醇，攪拌均勻，靜置6至10小時，之後離心，取上清液，去除こ醇，濃縮乾燥，得到醇提物。上述藥物組合物的質量控制方法，包括定性鑑定和指標化合物的定量測定，包括如下步驟
1)按照中國藥典薄層色譜法項下規定的方法，組合物中的烏頭鹼限量，不得多於規定限度；
2)按照中國藥典薄層色譜法項下規定的方法，組合物中應至少檢測出存在有淫羊藿、甘草、虎杖、乾薑、人參、黃岑和Euphorbiasteroid ；
3)按照中國藥典一部高效液相色譜法項下規定的方法，組合物中的雙酯型生物鹼烏頭鹼、新烏頭鹼和次烏頭鹼的總量不得超過規定限度；
4)按照中國藥典一部高效液相色譜法項下規定的方法，組合物中的淫羊藿苷、甘草酸、虎杖苷、黃岑苷和Euphorbiasteroid的含量不低於規定限度。組合物為ロ服製劑，優選為膠囊劑、片劑、顆粒劑、衝劑、ロ服液、水滴丸或蜜丸。本發明的有益效果是
通過國際學術界公認的實驗評價愛滋病藥物體內作用的最佳愛滋病猴模型技術，證實了本發明特定的藥物組合物對猴愛滋病病毒感染恆河猴所致愛滋病模型猴具有治療作用。使用本發明的藥物組合物ロ服治療愛滋病猴模型，與病毒對照組比較，可提高CD4+T細胞比率達73%，提高⑶4+T/⑶8+T比值達80%。可見，本發明藥物組合物擁有延長生存期、提高生存質量、改善和恢復T3、Cor水平、改善⑶4+Τ細胞比率、改善⑶4+/⑶8+比值、抑制病毒的綜合療效指標中的全部或部分療效指標，其效果好於CN 201210119628. 4公開的組合物和Euphorbiasteroid0基於對愛滋病猴模型這種適宜愛滋病動物模型的療效，可以預見本發明藥物組合物製劑具有治療人類愛滋病的用途，給予HIV感染者和愛滋病患者本發明藥物組合物制齊U，能夠緩解病症，包括穩定或者提升HIV病毒感染者和愛滋病病人的CD4+T淋巴細胞計數水平，緩解臨床症狀體徵、改善生存質量。
具體實施例方式發明人觀察研究了猴愛滋病病毒(SIV)感染的愛滋病猴模型的中醫證型分布與演變規律，總結歸納出疾病的證型分布和演變規律由感染初期階段出現的煩躁等「實證」演變為中期階段的攝食量減少、腹瀉、活動減少，毛髮脫落，體重增長緩慢等「脾虛證」，再發展成為晩期的肌肉萎縮、蜷縮、畏寒、精神萎靡不振、機體消瘦、體重急速下降、肢體蜷縮顫抖，甚至眼瞼、臉部水腫等中醫「脾腎陽虛證」表現。對於愛滋病模型患猴，特別是能夠反映和評價中醫證特點的病症複合猴愛滋病模型患猴的實驗治療結果，辨證治療優於非辨證治療；溫補腎陽法的療效明顯優於清熱解毒法的療效。溫補腎陽法採用的中藥應立「溫補腎陽」原則為君(首要治則)，「補益元氣、補益脾陽」原則為臣(次要治則)，以是否能夠延長生存期，提高生存質量為目的，以能否改善和恢復T3、Cor水平、改善⑶4+Τ細胞比率、改善⑶4+/⑶8+比值作為療效指標。 ー種藥物組合物，其原料藥由以下質量份的
熟附子20 30份；
淫羊藿、乾薑、甘草各I0 15份；
人參、丹參、虎杖、茯苓各6 12份；
黃柏2 5份；
黃芩2 4份；
Euphorbiasteroid O. I O. 2 份組成。特別的，原料藥由以下質量份的
熟附子25份；
淫羊藿、乾薑、甘草各12. 5份；
紅參7. 82份、茯苓7. 81份、虎杖7. 81份、丹參7. 81份；
黃柏3. 75份；
黃芩2. 5份；
Euphorbiasteroid O. 18 份組成。優選的，除Euphorbiasteroidタト,原料藥的有效成分經水提,之後醇提得到。上述藥物組合物的製備方法，包括如下步驟
1)取原料藥，用水煎煮，過濾，取濾液；
2)將濾液離心，取上清液，濃縮，得水提濃液；
3)在水提濃液中加入こ醇，攪拌，靜置，之後離心，取上清液，去除こ醇，得到醇提
物；
4)將醇提物、Euphorbiasteroid與其他可接受的藥用輔料,製備得到藥物製劑。製備步驟包括如下操作
1)取原料藥,加水煎煮3次，每次加入20倍量的水，煎煮2h，放冷，濾過，合併濾液；
2)將濾液離心，取上清液並濃縮至原料藥重，得水提濃液；
3)在水提濃液加入兩倍體積濃度為95%(v/v)的こ醇，攪拌均勻，靜置6至10小時，之後離心，取上清液，去除こ醇，濃縮乾燥，得到醇提物。
上述藥物組合物的質量控制方法，包括定性鑑定和指標化合物的定量測定，包括如下步驟
1)按照中國藥典薄層色譜法項下規定的方法，組合物中的烏頭鹼限量，不得多於規定限度；
2)按照中國藥典薄層色譜法項下規定的方法，組合 物中應至少檢測出存在有淫羊藿、甘草、虎杖、乾薑、人參、黃岑和Euphorbiasteroid ；
3)按照中國藥典一部高效液相色譜法項下規定的方法，組合物中的雙酯型生物鹼烏頭鹼、新烏頭鹼和次烏頭鹼的總量不得超過規定限度；
4)按照中國藥典一部高效液相色譜法項下規定的方法，組合物中的淫羊藿苷、甘草酸、虎杖苷、黃岑苷和Euphorbiasteroid的含量不低於規定限度。組合物為ロ服製劑，優選為膠囊劑、片劑、顆粒劑、衝劑、ロ服液、水滴丸或蜜丸。本發明藥物組合物使用的藥材如下，均應符合中國藥典對藥材的質量要求。附子是毛茛科植物烏頭carmichaeli Debx.的子根的加工品。包括黑順片和白附片。淫羊藿是小檗科植物淫羊藿Epimedium brevicornum Maxim.、箭葉淫羊藿Epimedi um sagi ttatum{SieO. et. Zucc. ) Maxim.、採毛耗辛霍 Epimeclium pubescensMaxim.、巫山淫羊藿 Epimedium wushanense T. S. Ying 或車月鮮淫羊藿 Epimediumkoreanum Nakai的地上部分。乾薑是姜科植物姜officinale Rose.的乾燥根莖。甘草是豆科植物甘草uralensis Fisch.、脹果甘草inf lata Bat.或光果甘草67ァcjrrAiza glabra L.的乾燥根及根莖。人參是五加科植物人參ginseng C. A. Mey.的乾燥根及根莖。包括生曬參和紅參,優選紅參。丹參是唇形科植物丹參miotiorrhiza Bge.的乾燥根及根莖。虎杖是寥科植物虎杖cuspidatum Sieb. et Zucc.的乾燥根及根莖。獲茶是多孔菌科真菌獲茶/bria cocos (Schw. ) Wolf.的乾燥菌核。黃柏是芸香科植物黃柏/iAeWoofefliiro/ chinensis Schneid.的乾燥樹皮。黃岑是唇形科植物黃岑baicalensis Georgi的乾燥根。下面結合實施例，進ー步說明本發明。以下實施例中，如無特別說明，份數均指質量份，こ醇的濃度以體積濃度計。實施例I硬膠囊的製備 原料藥組成
熟附子25份、淫羊藿12. 5份、乾薑12. 5份、甘草12. 5份、紅參7. 82份、茯苓7. 81份、虎杖7. 81份、丹參7. 81份、黃柏3. 75份、黃芩2. 5份、Euphorbiasteroid O. 18份。實施例2
熟附子20份、淫羊藿12份、乾薑12份、甘草10份、紅參10份、茯苓10份、虎杖8份、丹參10份、黃柏5份、黃岑3份、Euphorbiasteroid O. 15份。實施例3 原料藥組成熟附子30份、淫羊藿10份、乾薑12份、甘草12份、紅參8份、獲考^份、虎杖7份、丹參8份、黃柏2份、黃岑3份、Euphorbiasteroid O. 20份。實施例4 原料藥組成
熟附子27份、淫羊藿10份、乾薑12份、甘草12份、紅參6份、茯苓9份、虎杖12份、丹參6份、黃柏4份、黃岑2份、Euphorbiasteroid O. 12份。實施例5 原料藥組成
熟附子20份、淫羊藿15份、乾薑10份、甘草15份、紅參12份、茯苓6份、虎杖6份、丹參12份、黃柏4份、黃岑2份、Euphorbiasteroid O. 10份。 實施例6 原料藥組成
熟附子27份、淫羊藿10份、乾薑12份、甘草12份、紅參6份、茯苓9份、虎杖12份、丹參6份、黃柏4份、黃岑2份、Euphorbiasteroid O. 16份。原料藥中藥材有效成分的提取
1)照處方比例稱取原料藥中的各種中藥材，加純水煎煮3次，毎次加入20倍量的純水，煎煮2h，放冷，濾過，合併濾液；
2)將濾液以15000rpm的轉速離心10分鐘，取上清液，將上清液濃縮至藥液體積以升計等於藥材總質量以千克計(約與原中藥材等量)；
3)加入兩倍藥液體積的含體積分數為95%的藥用こ醇，攪拌均勻，靜置6至10小吋，以15000 rpm的轉速離心，取上清液，減壓下回收こ醇並減壓下濃縮成稠膏，噴霧乾燥，或在80°C以下真空乾燥、粉碎，即得中藥材有效成分的提取物。藥物製劑的製備
硬膠囊按上述方法，使用實施例I的原料藥配比，提取得到原料藥中藥材的有效成分，記為藥物組合物GZY提取物，提取物的得率為13. 2%。將GZY提取物、Euphorbiasteroid與輔料混合均勻，過80目篩，制粒，加入硬脂酸鎂混合均勻，裝填得到硬膠囊，規格O. 5 g提取物/粒。製得的硬膠囊記為GZE硬膠囊。經檢驗，測得本品含淫羊藿苷2. O mg/g、含烏頭鹼為O、Euphorbiasteroid(C32H40O8) 14. 2 mg/g ο片劑按上述方法，使用實施例I的原料藥配比，提取得到原料藥的有效成分，將提取物粉碎，過100目篩,與Euphorbiasteroid和輔料混合均勻，過80目篩,制粒,加硬脂酸鎂，經60目篩整粒，壓片，即得。顆粒劑按上述方法，使用實施例I的原料藥配比，提取得到原料藥的有效成分，加入Euphorbiasteroid、適量糖粉、苯甲酸鈉和其他輔料，加純水，加熱至沸，攪拌下於80°C保溫2h，冷卻至室溫，過濾，取濾液分裝，即得。質量控制方法
取實施例I的方法製得的藥物組合物膠囊內容物進行檢驗。(I)按照中國藥典薄層色譜法項下規定的方法，本發明所說的中藥製劑中熟附子的指標化合物的烏頭鹼限量，不得多於規定限度。具體方法如下取膠囊內容物10.0 g，加氨試液10 mL，拌勻，放置2小時，加こ醚100 mL，分兩次提取，每次振搖O. 5小時，放置分層，取こ醚層蒸乾，殘渣用無水こ醇溶解使成I mL，作為供試品溶液。取烏頭鹼對照品適量，カロ無水こ醇製成每I mL含I. O mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液10 μ L、對照品5 μ L，分別點於用O. 1%氫氧化鈉溶液處理過的乾燥矽膠G板上，以環己烷こ酸こ酯甲醇(6. 4:3. 6:1)為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以稀碘化鉍鉀試液。供試品色譜中，在與對照品色譜相應位置上出現的斑點應小於對照品斑點，或不出現斑點。表示按照此方法，每10 g內容物中的烏頭鹼可以不被檢出；如果被檢出，其中的烏頭鹼限度不得多於O. 5 mg O(2)按照中國藥典薄層色譜法項下規定的方法，本發明所說的中藥製劑中至少應該檢查出如下藥材的存在淫羊藿、甘草、虎杖、乾薑、人參、黃芩。本實施例以淫羊藿和甘草為例說明如下。其他藥材參照藥典質量檢查標準，按照本領域專業人員能夠理解的方法進行檢測。其中，淫羊藿的檢測方法為取膠囊內容物5 g，加水20 mL，加熱使溶解，放冷，カロニ氯甲烷脫脂，振搖2次，毎次20mL ;水層加正丁醇振搖提取3次，毎次20 mL，合併正丁醇 液，減壓蒸乾，殘渣加甲醇5 mL使溶解，作為供試品溶液。取淫羊藿苷對照品，加甲醇製成每I mL含I mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典一部附錄VI B)試驗，吸取供試品溶液及對照品溶液各5 yL，分別點於同一塊矽膠G薄層板上，以こ酸こ酷-甲醇-稀氨水(8. 5 : 1.5 : I. 5)的上層為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以5%香草醛高氯酸こ醇溶液，在105°C加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與淫羊藿苷對照品色譜相應的位置上,顯相同顏色的斑點。其中，甘草的檢測方法為取膠囊內容物5 g，加水20 mL加熱使溶解，放冷，加入氨水調PH9 10,放置,濾過,濾液加稀鹽酸調pH 2 3，放置，濾過，留取固體不溶物，加正丁醇20 mL溶解，用正丁醇飽和水溶液萃取3次，每次20 mL，合併正丁醇液，蒸乾，加甲醇2 mL溶解，作為供試品溶液。另取甘草酸單銨鹽對照品，加甲醇製成每ImL含2 mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典一部附錄)試驗，吸取上述溶液各5 μ L，分別點於同一塊矽膠G薄層板上，以正丁醇ー 95%こ醇ー氨水(5:1:2)為展開齊U，展開，取出，晾乾，噴以10%硫酸こ醇，在105°C加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顔色的斑點。(3)按照中國藥典高效液相色譜法項下規定的方法，本發明所說的中藥製劑中熟附子中的雙酯型生物鹼烏頭鹼、新烏頭鹼和次烏頭鹼總量，不得超過規定限度。以烏頭鹼為例，其測定方法如下
色譜條件與系統適用性試驗以十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑；以甲醇-O. 04 mol/L醋酸銨(53:47)為流動相，檢測波長為235 nm。理論板數按烏頭鹼峰計算應不低於3000。對照品溶液的製備取烏頭鹼對照品適量，精密稱定，加甲醇溶液製成每I mL含20 μ g的溶液，即得。供試品溶液的製備取本品粉末，研細粉，取約5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加濃氨液4 mL，混勻，加入こ醚30 mL，密塞，超聲處理15分鐘，放置過夜，攪拌，分取こ醚液，殘渣加入こ醚提取3次(毎次10 mL)，合併こ醚液，減壓蒸乾，殘渣加甲醇溶液溶解，定容至10 mL，搖勻，即得。測定法分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10 μ L，注入液相色譜儀，測定，即得。
(4)按照中國藥典薄層色譜法項下規定的方法，製劑中應該檢查出Euphorbiasteroid的存在。具體方法如下取膠囊內容物O. 2 g,加ニ氯甲燒20 mL,分兩次提取，毎次超聲處理10分鐘，濾過，取濾液濃縮至I mL，作為供試品溶液。取本發明Euphorbiasteroid對照品適量,加ニ氯甲燒製成姆I mL含I. O mg的溶液,作為對照品溶液。照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液10 μ L、對照品10 μ L，分別點於用矽膠G板上，以石油醚(沸程60-90°C):丙酮(7:3)為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以10%硫酸こ醇試液，熱風吹乾，105°C烘烤至顯色。供試品色譜中，在與對照品色譜相應位置上出現顏色相同的斑點。 (2)按照中國藥典一部高效液相色譜法項下規定的方法分析，製劑中Euphorbiasteroid的含量不得少於規定限度。具體方法如下
色譜條件與系統適用性試驗以十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑；以甲醇-水(8: 2)為流動相；檢測波長為270 nm,流速I mL .mirT1,柱溫25°C。理論板數按Euphorbiasteroid峰計算應不低於3000。對照品液的製備取Euphorbiasteroid對照品適量,精密稱定,加甲醇製成姆ImL含I mg的溶液，即得。供試品液的製備取本品，研細，取約I g，精密稱定，置50 mL量瓶中，加甲醇40mL，超聲處理(功率250W，頻率25 kHz)30分鐘，放冷，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得。測定分別精密吸取對照品液與供試品液各10 μ L，注入液相色譜儀，測定，即得。本品含Euphorbiasteroid (C32H4tlO8)的量，不得少於 10 mg/g。(5)按照中國藥典高效液相色譜法項下規定的方法，本發明所說的中藥製劑中其他ー些中藥材的指標化合物，不得少於規定限度，特別地，淫羊藿以淫羊藿苷計、甘草以甘草酸計、虎杖以虎杖苷計、黃芩以黃芩苷計，分別不得少於規定限度。以淫羊藿為例，其測定方法如下
色譜條件與系統適用性試驗以十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑；以こ臆-水(27:73)為流動相；檢測波長為270 nm。理論板數按淫羊藿苷峰計算應不低於4000。對照品溶液的製備取淫羊藿苷對照品適量，精密稱定，加甲醇製成每I mL含0. Img的溶液，即得。供試品溶液的製備取本品，研細，取約0. 5 g，精密稱定，置50 mL量瓶中，加稀こ醇45 mL,超聲處理(功率250W，頻率25 kHz)30分鐘，放冷，加稀こ醇至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得。測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10 μ L，注入液相色譜儀，測定，即得。其他藥材參照藥典質量檢查標準，按照本領域專業人員能夠理解的方法進行檢測。本發明藥物組合物的質量標準主要要求如下
按照高效液相色譜法(中國藥典一部附錄)試驗,本品含Euphorbiasteroid (C32H40O8)的量，不得少於10 mg/g ;含附子雙酯型生物鹼以烏頭鹼(C34H47NO11),新烏頭鹼(C33H45NO11),次烏頭鹼(C33H45NOltl)等的總量計，不得過0. 10 mg/g ;含淫羊藿以淫羊藿苷(C33H4tlO15)計，不得少於I. 5 mg/g O在猴愛滋病病毒(SIV)感染的愛滋病猴模型上的療效試驗結果 I、實驗材料
1.1實驗動物、場地及其等相關方面
實驗動物選擇恆河猴，排除TB感染(pro試驗陰性和胸片X光片正常)、沙門氏菌、志賀氏菌和體內外寄生蟲、血清SRV、血清STLV-I、血清SIV等項目檢測陰性，外觀健康，經體檢無淺表淋巴結腫大的3-6歲齡,體重4 7Kg健康恆河猴35隻。實驗場地生物安全2級實驗室。動物的飼養和管理動物單籠飼養在不鏽鋼籠具中，攝食專用的飼料及自由飲水。室溫20-25 °C，相対溼度50-70%。按照有關規定給予動物福利。 I. 2猴愛滋病病毒感染
I. 2. I猴愛滋病病韋株SIVmac239
1.2. 2感染劑量及感染途徑接種劑量1:3000，使用1640稀釋液進行稀釋，靜脈注射感染，注射量I mL。1.3實驗動物分組與給藥量
雄性恆河猴隨機分組。①組健康空白對照組5隻；②組病毒感染模型對照組4隻；③-④組GZY提取物的低、高劑量組各4隻，高劑量2. O g/kg. d，低劑量I. O g/kg. d 』⑤組Euphorbiasteroid組4隻，齊[J量15 mg/kg. d ;⑥組GZE硬膠囊內容物組4隻，齊[J量I. Og/kg. d02、觀察及檢測指標
2.I SIV病毒感染相關檢測指標
病毒載量、血常規、淋巴細胞亞群(⑶3+、⑶4+、⑶8+、⑶4+/⑶8+)。2. 2 病理檢測1、無菌手術取淋巴結，固定於10%中性甲醛液，石蠟包埋，H. E染色後光鏡觀察病理形態學。2、部分組織器官免疫組化檢查。2. 3死亡動物處理試驗期間死亡動物做屍檢。3、實驗方案
(I)實驗動物檢疫合格後移入實驗室適應環境，期間進行觀察，測量基本數據，確定感染前各恆河猴臨床基線特徵。分組。(2)分組完成後用SIVmac 239株靜脈注射進行SIV病毒感染，於感染後14天左右抽血測病毒載量判定感染情況，確認感染病毒。待感染後血漿病毒載量降至調定點(setpoint),即平臺期時實施給藥治療8周。期間定期檢測SIV病毒載量和其他指標。4、實驗結果
(I)一般情況，見表I。表I結果說明本發明藥物組合物有助於治療，在治療期間不治療的SIV病毒模型組有I只患猴死亡(死亡率為1/4)，健康對照組和給藥治療組均無患猴死亡。
權利要求
1.一種藥物組合物，其原料藥由以下質量份的 熟附子20 30份； 淫羊藿、乾薑、甘草各I0 15份； 人參、丹參、虎杖、茯苓各6 12份； 黃柏2 5份； 黃芩2 4份； Euphorbiasteroid O. I O. 2 份組成。
2.根據權利要求I所述的一種藥物組合物，其原料藥由以下質量份的 熟附子25份； 淫羊藿、乾薑、甘草各12. 5份； 紅參7. 82份、茯苓7. 81份、虎杖7. 81份、丹參7. 81份； 黃柏3. 75份； 黃芩2. 5份； Euphorbiasteroid O. 18 份組成。
3.根據權利要求I或2所述的一種藥物組合物,其特徵在於除Euphorbiasteroid外，原料藥的有效成分經水提，之後醇提得到。
4.權利要求I或2所述藥物組合物的製備方法，包括如下步驟 1)取原料藥，用水煎煮，過濾，取濾液； 2)將濾液離心，取上清液，濃縮，得水提濃液； 3)在水提濃液中加入乙醇，攪拌，靜置，之後離心，取上清液，去除乙醇，得到醇提物； 4)將醇提物、Euphorbiasteroid與其他可接受的藥用輔料,製備得到藥物製劑。
5.根據權利要求4所述的製備方法，其特徵在於所述製備步驟包括如下操作 1)取原料藥,加水煎煮3次，每次加入20倍量的水，煎煮2h，放冷，濾過，合併濾液； 2)將濾液離心，取上清液並濃縮至原料藥重，得水提濃液； 3)在水提濃液加入兩倍體積濃度為95%(v/v)的乙醇，攪拌均勻，靜置6至10小時，之後離心，取上清液，去除乙醇，濃縮乾燥，得到醇提物。
6.權利要求I或2所述藥物組合物的質量控制方法，包括定性鑑定和指標化合物的定量測定，包括如下步驟 1)按照中國藥典薄層色譜法項下規定的方法，組合物中的烏頭鹼限量，不得多於規定限度； 2)按照中國藥典薄層色譜法項下規定的方法，組合物中應至少檢測出存在有淫羊藿、甘草、虎杖、乾薑、人參、黃岑和Euphorbiasteroid ； 3)按照中國藥典一部高效液相色譜法項下規定的方法，組合物中的雙酯型生物鹼烏頭鹼、新烏頭鹼和次烏頭鹼的總量不得超過規定限度； 4)按照中國藥典一部高效液相色譜法項下規定的方法，組合物中的淫羊藿苷、甘草酸、虎杖苷、黃岑苷和Euphorbiasteroid的含量不低於規定限度。
7.權利要求I或2所述藥物組合物在製備治療愛滋病藥物中的應用。
8.根據權利要求I或2所述藥物組合物，其特徵在於所述組合物為口服製劑。
9.根據權利要求8所述藥物組合物，其特徵在於口服製劑為膠囊劑、片劑、顆粒劑、衝劑、口服液、水滴丸或蜜丸。
全文摘要
本發明公開了治療愛滋病的藥物組合物及其製備方法、質量控制方法和用途。組合物的原料藥由熟附子、淫羊藿、乾薑、甘草、人參、丹參、虎杖、茯苓、黃柏、黃芩及Euphorbiasteroid組成。實驗數據表明，本發明藥物組合物製劑對猴愛滋病病毒感染恆河猴所致愛滋病模型猴具有顯著的治療效果，基於對愛滋病猴模型這種適宜愛滋病動物模型的療效，本發明藥物組合物製劑具有治療人類愛滋病的用途。給予HIV感染者或愛滋病患者本發明藥物組合物製劑，能夠緩解病症，包括穩定或者提升HIV病毒感染者和愛滋病病人的CD4+T淋巴細胞計數、改善CD4+/CD8+比值水平，緩解臨床症狀體徵、改善生存質量。
文檔編號G01N30/90GK102727850SQ20121021001
公開日2012年10月17日 申請日期2012年6月25日 優先權日2012年6月25日
發明者符林春, 胡英傑, 邱聲祥, 鄭永唐 申請人:中國科學院華南植物園, 中國科學院昆明動物研究所, 廣州中醫藥大學