磷氮黴素的生物合成基因簇的製作方法

2023-12-04 16:02:46 1

專利名稱：磷氮黴素的生物合成基因簇的製作方法
技術領域：
本發明屬於微生物基因資源和基因工程領域，具體涉及抗真菌、抗腫瘤抗生素磷 氮黴素的生物合成基因簇的克隆、分析、功能研究及其應用。
背景技術：
磷氮黴素(phoslactomycins)，其結構如圖1所示，是上世紀80年代中期由我國 沈寅初院士及其他日本學者從鏈黴菌Streptomyces RK-803發酵液中分離得到的一種聚 酮類抗生素，其對多種植物病原菌具有顯著抗菌活性。後來在其它鏈黴菌如S. platensis SAM-0654、S. SPRI-82715和S. platensis SANK 6091中陸續發現了同屬於磷氮黴素家族的 一系列化合物，各發酵組分的結構與來源與Mi^ptomyces RK-803的磷氮黴素基本一致[J Antibiot(1989) 42，1019-1025 J Antibiot(1989)42，1026-1036]。1985年首先報導了磷氮黴素類化合物具有抗植物真菌的活性，其中磷氮黴素A-D 表現出相同的抗真菌活性。通過製備型HPLC純化得到的磷氮黴素A可以引起真菌菌絲體 漲水，從而導致菌體生長受到抑制。通過傳統瓊脂稀釋平板法發現純化的phosphazomycin C具有很強的抗真菌活性。此後發現的其它磷氮黴素家族抗生素，僅在C-18取代基團有 差別，也具有相同的抗真菌譜，這也進一步說明此處取代基的差異並不影響其生物學活 性[J Antibiot (1985) 38，665-668 J Antibiot (1989) 42，1331-1338]。除了抗真菌活 性，另有報導磷氮黴素還具有抗腫瘤活性，其作用機理也已研究得比較清楚。體外研究表 明磷氮黴素是蛋白磷酸化酶2A(PP2A)的高效選擇性抑制劑，扣50值變化範圍從3.7到 5. 8 μ M(磷氮黴素為PPl的弱抑制劑，IC50 > ImM)，這一活性構成了磷氮黴素類化合物 的其它生物學活性的基礎，如NK細胞的先天及獲得性免疫力對於腫瘤發展都具有重要作 用，選擇性增強NK細胞活性可以抑制腫瘤轉移，在小鼠體內磷氮黴素A和磷氮黴素H能 增強NK細胞活性，抑制肺轉移，這一現象支持了此類化合物在NK細胞裡具有抑制ΡΡ2Α 的功能[J Biochem(1999)125,960-965 ;Curr Med Chem(2002)9,2005-2032 JAm Chem Soc (2003) 125，15694-15695]。近年來Teruya et al.利用化學遺傳學方法描述了 PP2A的 催化亞基和其抑制劑磷氮黴素A之間的直接作用[FEBS Lett (2005) 579，2463-2468]。鑑於磷氮黴素良好的生物活性，已有通過化學全合成方法獲得磷氮黴素及其類似 物的研究。D. L. Boger等於2001年通過49步反應完成了對i^ostriecin的化學全合成，其產 率不足3% [J Am Chem Soc (2001) 123，4161-4167]。2003年iTohru Fukuyama課題組通過48 步反應完成了對 Leustroducsin B 的化學全合成[J Am Chem Soc (2003) 125,4048-4049] 2006 年 Yuichi Kobayashi 等完成了對 Phoslactomycin B 的化學全合成[Angew Chem Int Ed (2006) 45，3320-3323]，總產率為 0. 61 %，2008 年 Susumi Hatakeyama 等以洸步反應，總 成率 1. 3%再次完成了 Phoslactomycin B 的化學全合成[Org Lett (2008) 10，2139-2142]。 全合成方法得到的大量結構類似物可以用於構效關係的研究等，對藥物發展具有重要意 義。然而由於這些合成路線非常複雜，產率不高，因此還不能真正應用到藥物生產中。而 通過基因工程改造，利用微生物發酵的方法在提高磷氮黴素的產量以及獲得新的類似物方面都具有優勢。據研究，天然的磷氮黴素的生物合成主要包括以下步驟起始單元環己甲 醯輔酶A的合成，特殊延伸單元乙基丙二酸單醯輔酶A的合成，I型線性聚酮合成酶(HiS) 負責催化的大環骨架的合成，然後經過一系列的後修飾酶的作用形成磷氮黴素[J Biol Chem(2003)278，35552-35557]。我們以鏈黴菌來源的磷氮黴素為目標分子，從克隆其在S. platensis SAM-0654(購自日本微生物保藏中心，保藏號碼為FERM BP-1668)中的生物合成基因簇出 發，採用微生物學、分子生物學、生物化學及有機化學相結合的方法研究其生物合成，通過 體內基因操作的方法，提高其發酵產量，併合理修飾磷氮黴素的生物合成途徑，探索結構穩 定、活性更好、並能通過微生物發酵大量生產的新型磷氮黴素類化合物。

發明內容
本發明涉及一種由鏈黴菌Mi^ptomyces platensis SAM-06M產生的具有抗真 菌、抗腫瘤活性的聚酮類抗生素一磷氮黴素的生物合成基因簇的克隆、測序、分析、功能研 究及其應用。本發明中整個基因簇共包含22個基因的核苷酸序列或互補序列(序列1)，其中7 個基因(pnl，pn2-3，pn4，pn5，pn6，pn7，pn8)用於編碼I型線性聚酮合成酶(PKS)，共包含8 個模塊，35個功能域，負責催化磷氮黴素聚酮鏈的生物合成；2個基因(pnP5，pnP6)編碼的 蛋白負責催化乙基丙二酸單醯輔酶A的生物合成；4個基因(pnPl，pnP2, pnP3, pnP4)編碼 環己甲醯輔酶A合成酶；6個基因(ρηΤ1，ρηΤ2，ρηΤ3，ρηΤ4，ρηΤ5，ρηΤ6)編碼的蛋白負責對 聚酮鏈分子骨架的進一步修飾；還包括2個調節基因(pnRl，pnR2) ；1個抗性基因(pnR3)。本發明還提供了一個編碼包含AT ACP KS AT DH KR ACP功能域的聚酮合成酶的 核苷酸序列，其編碼的胺基酸序列位於序列2中，命名為Pnl，其基因的核苷酸序列位於序 列1中第43626-50951個鹼基處。本發明還提供了一個編碼包含KS AT DH KR ACP KS AT KR ACP功能域的聚酮合 成酶的核苷酸序列，其編碼的胺基酸序列位於序列3中，命名為Pn2-3，其基因的核苷酸序 列位於序列1中第51069-61151個鹼基處。本發明還提供了一個編碼包含KS AT KRACP功能域的聚酮合成酶的核苷酸序 列，其編碼的胺基酸序列位於序列4中，命名為Pn4，其基因的核苷酸序列位於序列1中第 11283-16271個鹼基處。本發明還提供了一個編碼包含KS AT DH KR ACP功能域的聚酮合成酶的核苷酸序 列，其編碼的胺基酸序列位於序列5中，命名為Pn5，其基因的核苷酸序列位於序列1中第 16314-219081 個鹼基處。本發明還提供了一個編碼包含KS AT KRACP功能域的聚酮合成酶的核苷酸序 列，其編碼的胺基酸序列位於序列6中，命名為Pn6，其基因的核苷酸序列位於序列1中第 21965-26908個鹼基處。本發明還提供了一個編碼包含KS AT KR ACP TE功能域的聚酮合成酶的核苷酸序 列，其編碼的胺基酸序列位於序列7中，命名為Pn7，其基因的核苷酸序列位於序列1中第 26973-32414個鹼基處。本發明還提供了一個編碼游離硫酯酶的核苷酸序列，其編碼的胺基酸序列位於序列8中，命名為Pn8，其基因的核苷酸序列位於序列1中第10314-11084個鹼基處。本發明還提供了一個編碼酮基合成酶的核苷酸序列，其編碼的胺基酸序列位於序 列9中，命名為PnP5，其基因的核苷酸序列位於序列1中第3觀35-33邪4個鹼基處。本發明還提供了一個編碼巴豆醯輔酶A還原酶的核苷酸序列，其編碼的胺基酸序 列位於序列10中，命名為PnP6，其基因的核苷酸序列位於序列1中第35699-37051個鹼基 處。本發明還提供了 一個編碼環己基羧酸-輔酶A連接酶的核苷酸序列，其編碼的氨 基酸序列位於序列11中，命名為PnPl，其基因的核苷酸序列位於序列1中第61281-64283 個鹼基處。本發明還提供了一個編碼短鏈輔酶A脫氫酶的核苷酸序列，其編碼的胺基酸序列 位於序列12中，命名為PnP2，其基因的核苷酸序列位於序列1中第64307-65473個鹼基處。本發明還提供了 一個編碼環己甲醯輔酶A還原酶的核苷酸序列，其編碼的胺基酸 序列位於序列13中，命名為PnP3，其基因的核苷酸序列位於序列1中第65470-66312個鹼基處。本發明還提供了一個編碼FAD依賴的氧化還原酶的核苷酸序列，其編碼的胺基酸 序列位於序列14中，命名為PnP4，其基因的核苷酸序列位於序列1中第66332-68410個鹼基處。本發明還提供了一個編碼氨基轉移酶的核苷酸序列，其編碼的胺基酸序列位於序 列15中，命名為PnTl，其基因的核苷酸序列位於序列1中第42131-432 個鹼基處。本發明還提供了一個編碼NAD依賴的差向異構酶/脫水酶的核苷酸序列，其 編碼的胺基酸序列位於序列16中，命名為PnT2，其基因的核苷酸序列位於序列1中第 41400-42047個鹼基處。本發明還提供了一個編碼Ρ450氧化酶的核苷酸序列，其編碼的胺基酸序列位於 序列17中，命名為ΡηΤ3，其基因的核苷酸序列位於序列1中第38540-39751個鹼基處。本發明還提供了一個編碼磷酸基轉移酶/激酶的核苷酸序列，其編碼的胺基酸序 列位於序列18中，命名為ΡηΤ4，其基因的核苷酸序列位於序列1中第37691-38482個鹼基 處。本發明還提供了一個編碼鐵氧還蛋白的核苷酸序列，其編碼的胺基酸序列位於序 列19中，命名為ΡηΤ5，其基因的核苷酸序列位於序列1中第37098-373 個鹼基處。本發明還提供了一個編碼氧化還原酶的核苷酸序列，其編碼的胺基酸序列位於序 列20中，命名為PnT6，其基因的核苷酸序列位於序列1中第33919-35634個鹼基處。本發明還提供了一個編碼轉錄調節因子的核苷酸序列，其編碼的胺基酸序列位於 序列21中，命名為PnRl，其基因的核苷酸序列位於序列1中第68480-71296個鹼基處。本發明還提供了一個編碼轉錄調節因子的核苷酸序列，其編碼的胺基酸序列位於 序列22中，命名為PnR2，其基因的核苷酸序列位於序列1中第72166-75813個鹼基處。本發明還提供了一個編碼轉運蛋白的核苷酸序列，其編碼的胺基酸序列位於序列 23中，命名為PnR3，其基因的核苷酸序列位於序列1中第39940-41151個鹼基處。序列1的互補序列可根據DNA鹼基互補原則隨時得到。序列1的核苷酸序列或部 分核苷酸序列可以通過聚合酶鏈式反應(PCR)或用合適的限制性內切酶酶切相應的DNA或使用其他合適的技術得到。本發明提供了得到至少包含部分序列1中DNA序列的重組DNA 質粒的途徑。本發明還提供了產生磷氮黴素生物合成基因被中斷或加倍的微生物體的途徑，至 少其中之一的基因包含有序列1中的核苷酸序列。本發明所提供的核苷酸序列或部分核苷酸序列，可利用聚合酶鏈式反應(PCR)的 方法或包含本發明序列的DNA作為探針以Southern雜交等方法從其他生物體中得到與磷 氮黴素生物合成基因相似的基因。包含本發明所提供的核苷酸序列或至少部分核苷酸序列的克隆DNA可用於從鏈 黴菌Mi^ptomyces platensis SAM-06M基因組文庫中定位更多的文庫質粒。這些文庫質 粒至少包含本發明中的部分序列，也包含有Mi^ptomyces platensis SAM-06M基因組中 以前鄰近區域未克隆的DNA。包含本發明所提供的核苷酸序列或至少部分核苷酸序列可以被修飾或突變。這 些途徑包括插入、置換或缺失，聚合酶鏈式反應，錯誤介導聚合酶鏈式反應，位點特異性突 變，不同序列的重新連接，序列的不同部分或與其他來源的同源序列進行定向進化(DNA shuffling)，或通過紫外線或化學試劑誘變等。包含本發明所提供的核苷酸序列或至少部分核苷酸序列的克隆基因可以通過合 適的表達體系在外源宿主中表達以得到相應的酶或得到其他致力於得到的產物。這些外 源宿主包括鏈黴菌、小單孢菌、糖多飽菌、假單孢菌、大腸桿菌、芽孢桿菌、酵母、植物和動物寸。本發明所提供的胺基酸序列可以用來分離所需要的蛋白並可用於抗體的製備。包含本發明所提供的胺基酸序列或至少部分序列的多肽可能在去除或替代某些 胺基酸之後仍有生物活性甚至有新的生物學活性，或者提高了產量或優化了蛋白動力學特 徵或其他致力於得到的性質。包含本發明所提供的核苷酸序列或至少部分核苷酸序列的基因或基因簇可以在 異源宿主中表達並通過DNA晶片技術了解它們在宿主代謝鏈中的功能。包含本發明所提供的核苷酸序列編碼的蛋白可以催化合成乙基丙二酸單醯輔酶A 和環己甲醯輔酶A及磷氮黴素聚酮骨架，進一步催化合成抗生素磷氮黴素。包含本發明所提供的核苷酸序列或至少部分核苷酸序列的基因或基因簇可以通 過遺傳重組來構建重組質粒以獲得新型生物合成途徑，也可以通過插入、置換、缺失或失活 進而獲得新型生物合成途徑。包含本發明所提供的核苷酸序列或至少部分核苷酸序列的克隆基因或DNA片段 可以通過中斷磷氮黴素生物合成的一個或幾個步驟而得到新的磷氮黴素結構類似物或前 體。包含DNA片段或基因可以用來提高磷氮黴素或其衍生物的產量。包含本發明所提供的I型線性聚酮合成酶可以通過缺失、插入或失活來自於相同 或不同的I型線性聚酮合成酶系統的一個或多個I型線性聚酮合成酶結構域、模塊或基因 而產生新的聚酮化合物。本發明所提供的乙基丙二酸單醯輔酶A合成酶基因和環己甲醯輔酶A合成酶基因 可用於導入外源宿主菌產生具有相應結構單元或相似結構單元的化合物，或其他致力於得 到的產物。這些外源宿主包括鏈黴菌、小單孢菌、糖多飽菌、假單孢菌、大腸桿菌、芽孢桿菌、酵母、植物和動物等。包含本發明所提供的核苷酸序列或至少部分核苷酸序列的片段或基因可以用來 構建I型線性聚酮合成酶庫或I型線性聚酮合成酶衍生庫或組合庫。本發明所提供的磷氮黴素骨架的後修飾基因可用於通過遺傳修飾得到磷氮黴素 類似物。總之，本發明所提供的包含磷氮黴素生物合成相關的所有基因和蛋白信息可以幫 助人們理解磷氮黴素類天然產物的生物合成機制，為進一步遺傳改造提供材料和知識。本 發明所提供的基因及其蛋白質也可以用來尋找和發現可用於醫藥、工業或農業的化合物或 基因、蛋白。


圖 1 磷氮黴素(Phoslactomycins，PLMs)的化學結構。圖2 磷氮黴素生物合成基因簇的基因結構和限制性內切酶酶切譜。仏)3個交疊的粘粒包含了鏈黴菌5力13丨6118丨8 SAM-06M基因組中901Λ的DNA區 域，字母B代表限制性內切酶BamHI，黑實體表示磷氮黴素生物合成基因簇部分；(B)磷氮黴 素生物合成基因簇的基因組成。圖3 磷氮黴素在鏈黴菌S. platensis SAM-0654中的生物合成途徑。圖4 :S. platensis SAM-0654野生型菌株發酵產物的液相色譜-質譜(LC-MS)分 析。圖5 :S. platensis SAM-0654野生型菌株及pnl基因置換突變菌株發酵產物的高 效液相色譜(HPLC)分析(A)野生型菌株；⑶pnl基因置換突變體(Δ pnl)。圖6 :S. platensis SAM-0654野生型菌株及pnT4和ρηΡ3基因置換突變菌株發酵 產物的HPLC分析(A)野生型菌株；(Β)ρηΤ4基因置換突變體(ΔρηΤ4) ； (C)pnP3基因置換突變體。圖7 :S. platensis SAM-0654野生型菌株及pnRl基因置換突變菌株發酵產物的 HPLC分析(A)野生型菌株；⑶pnRl基因置換突變體(Δ pnRl)。圖8 :S. platensis SAM-0654野生型菌株及pnR2基因置換突變菌株發酵產物的 HPLC分析(A)野生型菌株；(B)pnR2基因置換突變體(ApnR2) ； (C)pnR2基因回補突變株。符號說明圖 1Phoslactomycin 磷氮黴素。圖 2PKS -.MMa-^ ；postpolyketide modification -.MMJnfMt^ ；transporter MJ^ 蛋白；precursor CHC-CoA 前體環己甲酉先輔酶 A !precursor ethylmalonyl-CoA 前體乙基 丙二酸單醯輔酶A regulation 調節基因。圖 3
7
LD 起始模塊；Ml，M2，M3，M4，M5，M6，M7 模塊1，模塊2，模塊3，模塊4，模塊5，模 塊6，模塊7 ；AT 醯基轉移酶；ACP 醯基載體蛋白；KS 酮基合酶；DH 脫水酶；KR 酮基還原 酶；TE 硫酯酶；CHC-CoA :環己甲醯輔酶A ;m-CoA 丙二酸單醯輔酶A ;Em-CoA 乙基丙二酸 單醯輔酶A;PLMs:磷氮黴素。圖 4PLM A 磷氮黴素A ；PLM B 磷氮黴素B ；PLM C 磷氮黴素C ；PLM D 磷氮黴素D ；PLM E 磷氮黴素E ；PLM F 磷氮黴素F。圖 5WT 野生型；Δ pnl =PKS基因pnl置換的突變株。圖 6WT 野生型；Δ ρηΤ4 後修飾基因pnl^置換的突變株；Δ pnP3 前體合成基因ρηΡ3 置換的突變株。圖 7WT 野生型；Δ pnRl 調節基因pnRl置換的突變株。圖 8WT 野生型；Δ pnR2 調節基因pnR2置換的突變株；Δ pnR2,+pnR2 :pnR2置換的突 變株經pnR2基因互補的突變株。
具體實施例方式以下結合圖1-圖8對本發明進一步詳細說明。1.磷氮黴素基因簇中環己甲醯輔酶A還原酶基因片斷的克隆根據發酵產物分析，S. platensis SAM-06M發酵產物中的磷氮黴素組分與鏈 黴菌Mi^ptomyces sp. HK-803發酵產生的Phoslactomycin的組分基本一致(圖1，圖 4)，屬於同一類化合物，其中都含有獨特的六元環單元[J. Antibiot. (Tokyo) (1993)46, 1512-1519 J. Antibiot. (Tokyo) (1993)46，1503-1511]。安莎三烯(Ansatrienin)由鏈 黴菌Mi^ptomyces collinus產生，是另一個與磷氮黴素具有相同六元環單元的化合物。 Reynolds等從S. collinus中克隆得到了環己甲醯輔酶A還原酶基因，並在體內做了基因 中斷實驗，阻斷了安莎三烯的產生；表達的環己甲醯輔酶A還原酶蛋白經體外測活證實，能 夠催化環己甲酸生物合成中三步還原反應[J. Bacteriol. (1996) 178,6873-6881] Osada 等人於2003年進行的同位素標記實驗表明，磷內酯黴素生物合成中的六元環起始單元是 環己甲酸來源[iTetrahedronQO(^)Sg, 7465-7471]。在同時進行的其生物合成研究中， Reynolds等利用來源於S. collinus中的環己甲醯輔酶A還原酶基因作為異源探針，克隆得 到了 Phoslactomycin 的生物合成基因簇[J. Biol. Chem. (2003)278,35552-35557]。利用該 基因簇中相關基因序列將有助於我們從磷氮黴素產生菌S. platensis SAM-0654中克隆其 基因簇。本發明人基於己有的 Sti^ptomyces collinus 禾口 Sti^ptomyces sp. HK—803 中 的環己甲醯輔酶A還原酶胺基酸序列，設計了兼併性引物，希望從S. platensis SAM-0654 中克隆得到目標基因片段，從而可以作為探針用於基因簇的克隆。採用兼併性引物 (ChcA-For 5' -C TCC CTC ATC ACM GGS GCY TCG C-3'禾口 ChcA-Rev 5' -CCGTC G AC GACSAG GGT CTG MCC-3，)，從 S. platensis SAM-0654 基因組 DNA 中 PCR 擴增得到 750bp 序列， 克隆入pGEM-T Easy載體，經DNA序列分析表明與Mi^ptomyces sp. HK803的chcA基因片 段具有很高同源性。2.磷氮黴素的生物合成基因簇的克隆，序列分析及功能分析將上述克隆得到的基因片段進行地高辛標記，用於文庫篩選。將篩選得到的粘粒 用BamHI酶切分組並對其相對位置進行關聯，選取fCYL_2端基1. 9kb BamHI片段作為探針 進行染色體步移，得到粘粒fCYL-T1-3、fCYL-T3-10，繼續選取fCTL-Tl-3端基的620bp PCR 片段作為探針進行第二次染色體步移，得到粘粒fCYL-VIII-14。這樣經過3次文庫篩選得 到的粘粒fCYL-2、fCYL-T3-10和fCYL-VII1-14涵蓋了染色體約90kb的區域。分別用PKS 引物等對幾個粘粒進行PCR檢測，都擴增得到了特異性條帶，證實該基因簇包括我們預期 的基因。選擇粘粒fCYL-2、fCYL-T3_10和fCYL-VIII-14進行全測序，本發明人得到了 92，440bp連續核苷酸序列，生物信息學分析表明其中包含了 40個開放式讀碼框(open reading frame, 0RF)，推測其中至少有22個ORF與磷氮黴素生物合成相關。各基因功能的 分析結果見表1。表1磷氮黴素生物合成基因簇功能分析
權利要求
1.一種磷氮黴素的生物合成基因簇，該基因簇核苷酸序列如SEQ ID NO. 1所示，其中編 碼磷氮黴素生物合成所涉及的22個基因，包括I型線性聚酮合成酶基因pnl，pn2-3, pn4, pn5,pn6,pn7,pn8共7個基因、乙基丙二酸單醯輔酶A合成酶基因pnP5和pnP62兩個基因、 環己甲醯輔酶A合成酶基因pnP 1，pnP2，pnP3，pnP4共4個基因、後修飾酶基因pnT 1，ρηΤ2， ρηΤ3, ρηΤ4, ρηΤ5, ρηΤ6共6個基因、2個調節基因pnRl和pnR2以及1個抗性基因pnR3。
2.根據權利要求1所述的磷氮黴素的生物合成基因簇中的I型線性聚酮合成酶，其特 徵在於包含下述模塊或結構域酮基縮合結構域KS，醯基轉移結構域AT，醯基載體 蛋白結 構域ACP，脫水結構域DH，酮基還原結構域KR，硫酯酶結構域TE。
3.一種根據權利要求1所述的磷氮黴素的生物合成基因簇的用途，其編碼蛋白用於催 化合成磷氮黴素及其類似物或者用於調節磷氮黴素及其類似物的產量。
4.根據權利要求3所述的磷氮黴素的生物合成基因簇的用途，其編碼蛋白催化合成乙 基丙二酸單醯輔酶A。
5.根據權利要求3所述的磷氮黴素的生物合成基因簇的用途，其編碼蛋白催化合成環 己甲醯輔酶A。
6.根據權利要求3所述的磷氮黴素的生物合成基因簇的用途，其中的調節基因經基因 敲除後可以阻斷磷氮黴素的合成，其中的調節基因經回補到該調節基因敲除突變株中可以 恢復磷氮黴素的合成。
7.根據權利要求3所述的磷氮黴素的生物合成基因簇的用途，其中的調節基因經基因 倍增後可以用於提高磷氮黴素的產量。
全文摘要
本發明公開了一種由鏈黴菌Streptomyces platensis SAM-0654產生的磷氮黴素的生物合成基因簇。整個基因簇共包含22個基因7個I型線性聚酮合成酶(PKS)基因；2個乙基丙二酸單醯輔酶A合成酶基因；4個環己甲醯輔酶A合成酶基因；6個後修飾酶基因；2個調節基因；1個抗性基因。通過對上述生物合成基因簇的遺傳操作可阻斷磷氮黴素的合成。本發明所提供的基因簇可用於磷氮黴素的產量改變，聚酮類化合物的組合生物合成等，也可用於尋找和發現用於醫藥、工業或農業的化合物或基因。
文檔編號C12N15/52GK102061299SQ201010547279
公開日2011年5月18日 申請日期2010年11月17日 優先權日2010年11月17日
發明者劉偉, 唐功利, 潘海學, 趙娟, 陳允亮 申請人:中國科學院上海有機化學研究所