長效配製品的製作方法

2024-04-14 22:53:05

1.本發明涉及用於經由肌內或皮下注射施用的藥物組合物，該藥物組合物包含懸浮在藥學上可接受的水性載體中的atp合酶抑制劑化合物貝達喹啉(以商品名銷售，其中貝達喹啉是其富馬酸鹽形式)的微米或納米顆粒；還涉及此類藥物組合物在治療細菌感染，如結核病等中的用途。


背景技術：

2.貝達喹啉是一種已知的抗結核病藥物，以多種組合使用。貝達喹啉可以以藥學上可接受的鹽的形式配製，如以富馬酸貝達喹啉的形式，以商品名銷售。貝達喹啉被認為起著atp合酶抑制劑的作用，具有對分枝桿菌atp合酶與真核線粒體atp合酶超過20000的選擇性指數。
3.貝達喹啉已被報導可用於治療分枝桿菌感染，還可用於殺死休眠的、潛伏的、持久的分枝桿菌，特別是結核分枝桿菌(mycobacterium tuberculosis)，因此可用於治療潛伏的tb。在包括國際專利文件wo 2004/011436和wo 2006/067048的幾個出版物中已經描述了貝達喹啉的此類用途。還已知貝達喹啉具有對麻風分枝桿菌(mycobacterium leprae)的殺菌作用，例如，如「bacterial activities of r207910and other antimicrobial agents against mycobacterium leprae in mice[r207910和其他抗菌劑對小鼠中麻風分枝桿菌的細菌活性]」,antimicrobial agents and chemotherapy[抗菌劑和化學療法],2006年4月,第1558頁、以及「the diarylquinolone r207910is bactericidal against mycobacterium leprae in mice and at low dose administered intermittently[低劑量間歇施用二芳基喹諾酮r207910對小鼠中麻風分枝桿菌具有殺菌作用]」,antimicrobial agents and chemotherapy[抗菌劑和化學療法],2009年9月,第3989頁中描述的。
[0004]
長效配製品的目的可以是減少藥物負荷(burden)。這對於可能持續幾個月的治療方案特別有用。
[0005]
需要施用的劑型的次數和/或體積通常稱為「藥丸負荷」。出於很多原因，如攝入頻率，高藥丸負荷是不希望的，高藥丸負荷通常具有以下不便：必須吞咽大劑型，連同需要儲存或運輸大量的或大體積的藥丸。高藥丸負荷增加了患者不服用他們的完整劑量的風險，由此不能遵守規定的劑量方案。同樣地，減小了治療的有效性，這還導致出現耐藥性(例如貝達喹啉情況下的細菌耐藥性)。
[0006]
由此提供涉及以長時間間隔(如一周或更長、或甚至一個月或更長)施用劑型的治療將是有吸引力的。
[0007]
本領域已知多種配製品，包括長效配製品。例如，已知微米和納米懸浮技術在抗hiv藥物領域中實現了長效製劑，例如國際專利申請wo 2007/147882和wo 2012/140220中所描述的。另外，例如在ep-a-0499 299中已經描述了現有技術中已知的納米顆粒。此類顆粒具有亞微米範圍內的平均粒度並且由結晶的原料藥的顆粒組成，這些顆粒在其表面吸附有表面改性劑。納米顆粒也已經被用於配製難溶於水的活性成分。
[0008]
抗結核病藥物貝達喹啉的長效配製品還描述於國際專利申請wo 2019/012100中。
[0009]
長效配製品的重要性涉及以一周或更長的時間間隔間歇地施用這些微米或納米顆粒配製品，其產生足以抑制分枝桿菌感染的增長的血漿水平。這允許減少施用次數，由此就患者的藥丸負荷和藥物依從性而言是有益的。因此，貝達喹啉的微米或納米顆粒配製品可用於長期治療分枝桿菌感染(例如結核病(包括潛伏性結核病)和麻風病)。
[0010]
以一周或更長的時間間隔間歇地施用貝達喹啉的微米或納米顆粒配製品還導致可能足以提供對分枝桿菌感染傳播的預防的血漿水平。而且在這種情況下，需要減少施用的次數，這就具有感染風險的個體的藥丸負荷或藥物依從性而言也是有利的。
[0011]
與此類長效配製品的製造和適用性相關的挑戰涉及以下事實：即必須對它們進行滅菌(這對注射劑是重要的，例如，如果旨在將它們進行靜脈內、肌內或皮下施用)。有多種不同的方式對此類長效配製品進行滅菌，包括通過加熱滅菌、高壓滅菌和γ-輻射。一些方法的實例描述於，例如美國專利/申請us 5,298,262、us 5,346,702和us 2010/255102中。對於加熱滅菌和高壓滅菌，重要的是能夠選擇可高壓滅菌的(例如，不降解的)賦形劑(例如，表面改性劑或表面活性劑)。在此類滅菌後出現進一步的挑戰，這些挑戰與長效配製品的希望的穩定性、該配製品內活性藥物成分(api)顆粒的不希望的聚集以及配製品的希望的重懸性(re-suspendability)相關聯(滅菌(例如高壓滅菌)後)。美國專利us 5,298,262和us 5,346,702披露了使用濁點改性劑來防止滅菌期間的顆粒聚集。濁點是如下的溫度，高於該溫度時，表面活性劑(或表面改性劑)發生相分離並從溶液中沉澱出。懸浮液的加熱滅菌或高壓滅菌必須在表面活性劑/表面改性劑的濁點以下進行，因為否則，當加熱高於它們濁點溫度時，由於溶解度變化，它們會發生相分離並沉澱。這將使顆粒(活性藥物成分的顆粒)從表面游離(free)並且顆粒將由此聚集。濁點改性劑(或增效劑)的想法是使得滅菌或高壓滅菌過程的溫度更高並且由此防止或限制顆粒聚集。us 5,298,262和us 5,346,702中提及的濁點改性劑包括離子型濁點改性劑和非離子型濁點改性劑，如十二烷基硫酸鈉、十二烷基三甲基溴化銨、聚乙二醇和丙二醇。作為濁點改性劑提及的聚乙二醇包括peg300、peg400、peg1000和peg2000，其中說明了peg400是優選的，並且在實例中，特別是peg400和peg1000示出能使濁點(tetronic 908的濁點)升高。其他濁點改性劑或增效劑還描述於多種其他文獻中。
[0012]
現在描述另外的可替代的和/或改善的長效配製品，並且本發明涉及此類配製品。


技術實現要素：

[0013]
本發明涉及用於通過肌內或皮下注射施用的藥物組合物，其包含治療有效量的微米或納米顆粒的懸浮液形式的貝達喹啉或其藥學上可接受的鹽，該藥物組合物包含：
[0014]
(a)微米或納米顆粒形式的貝達喹啉或其藥學上可接受的鹽，和表面改性劑；以及
[0015]
(b)藥學上可接受的水性載體，
[0016]
該藥物組合物的特徵在於表面改性劑包含peg4000等，其中這種組合物在本文中可以稱為「本發明的一種或多種組合物」。
[0017]
peg4000(或聚乙二醇4000)是已知的高分子量聚合物，其中4000是指以道爾頓計的近似平均分子量。peg4000可從比如西格瑪奧德裡奇公司(sigma-aldrich)的來源商購，因此照這樣使用peg4000。然而，包含在本發明範圍(例如，當使用術語「peg4000」或「peg4000等」時)內的是其他高分子量聚乙二醇，例如高於1000以及高達8000的那些(例如，peg1000至peg8000，例如peg2000至peg6000)，即使在特定實施例中，當本文在本發明的上下文中提及時，peg基團是peg3000至peg5000(例如，peg3500至peg4500)。如本文所指示，peg旁邊的數字代表以道爾頓計的平均分子量，正如應當理解的，大多數peg包括具有分子量分布的分子，即它們是多分散的。
[0018]
本發明的組合物是懸浮液，通過該懸浮液我們意指將貝達喹啉活性成分懸浮在藥學上可接受的水性載體中。
[0019]
本發明的組合物(即，懸浮液)含有表面改性劑，其可以被吸附到活性成分貝達喹啉的表面上。如所指示的，表面改性劑包含peg4000等(並且還可以含有其他表面改性劑，比如下文描述的那些)。
[0020]
因此在實施例中，本發明可涉及用於通過肌內或皮下注射施用的藥物組合物，其包含治療有效量的微米或納米顆粒的懸浮液形式的貝達喹啉或其藥學上可接受的鹽，該藥物組合物包含：
[0021]
(a)微米或納米顆粒形式的貝達喹啉或其藥學上可接受的鹽，在其表面吸附有表面改性劑；以及
[0022]
(b)藥學上可接受的水性載體；其中貝達喹啉活性成分是懸浮的，
[0023]
並且其中表面改性劑包含peg4000等。
[0024]
本發明進一步涉及治療感染了病原性分枝桿菌例如結核分枝桿菌、牛分枝桿菌(m.bovis)、麻風分枝桿菌、鳥分枝桿菌(m.avium)和海分枝桿菌(m.marinum)的受試者的方法。在實施例中，分枝桿菌是結核分枝桿菌(包括潛伏或休眠形式)或麻風分枝桿菌。本發明的組合物可以特別適合於治療麻風分枝桿菌和潛伏或休眠的形式的結核分枝桿菌。這是因為對於這些特定感染的治療，血漿中較低濃度的貝達喹啉可能有效地抵抗了這種感染，例如，robert gelber、koen andries等人在antimicrobial agents and chemotherapy[抗菌劑和化學療法],2009年9月,第3989-3991頁中所述(其內容通過引用併入本文)，並且其中，基本上據報導，貝達喹啉的低劑量和間歇性給藥對麻風病患者帶來了希望；然而殺死結核分枝桿菌的99％細菌的最低劑量為30mg/kg/wk，對於麻風分枝桿菌最低劑量為《5.0mg/kg/wk，因此每月一次給藥與一周5天同樣有效；貝達喹啉對小鼠麻風分枝桿菌的影響的其他出版物包括baohong ji、koen andries等人的antimicrobial agents and chemotherapy[抗菌劑和化學療法],2006年4月，第1558-1560頁
–
其內容也通過引用併入本文。因此，本發明的組合物可以特別適合於治療感染了麻風分枝桿菌或潛伏/休眠形式的結核分枝桿菌的受試者的方法。此類治療感染了病原性分枝桿菌的受試者的方法包括通過肌內或皮下注射施用治療有效量的如上文或下文詳細說明的藥物組合物。或可替代地，本發明涉及如上文或下文詳細說明的藥物組合物的用途，用於製造用於治療病原性分枝桿菌感染的藥物(或用於在如本文所述的特別治療方案中使用此類藥物)。在一個實施例中，組合物用於病原性分枝桿菌感染的長期治療。在實施例中，病原性分枝桿菌感染可以如上文或下文所描述，如需要長期治療的感染(在另外的實施例中，可以進一步用貝達喹啉或其活性代謝物的相對低血漿濃度水平治療例如潛伏/休眠結核分枝桿菌感染，或在特定實施例中，治療麻風分枝桿菌感染)。
[0025]
本發明進一步涉及治療感染了病原性分枝桿菌比如結核分枝桿菌的受試者的方
法，並且由此我們還包括了多重耐藥結核病。術語「耐藥」(dr)是微生物學的技術人員很好理解的術語。耐藥的分枝桿菌是以下分枝桿菌，該分枝桿菌不再易受至少一種先前有效的藥物影響；該分枝桿菌已經發展了抵抗被至少一種先前有效的藥物的抗生素攻擊的能力。耐藥菌株可以將抵抗能力傳遞給其子代。所述耐受性可以歸因於細菌細胞中改變其對單一藥物或對不同藥物的敏感性的隨機遺傳突變。多重耐藥(mdr)結核病是歸因於至少耐受異煙肼和利福平的細菌(耐受或不耐受其他藥物)的耐藥結核病的一種特定形式，異煙肼和利福平是目前兩種最強大的抗tb藥物。因此，無論何時在上文或下文中使用，「耐藥」包括多重耐藥。本發明的組合物還可用於治療mdr-tb。
[0026]
在另一個方面，提供了長期治療感染了病原性分枝桿菌(如結核分枝桿菌、牛分枝桿菌、麻風分枝桿菌、鳥分枝桿菌和海分枝桿菌)的受試者的方法，所述方法包括通過肌內或皮下注射施用有效量的如上文或下文詳細說明的藥物組合物；其中間歇施用或將要間歇施用該組合物，時間間隔的範圍是一周至一年、或一周至兩年。或可替代地，本發明涉及如上文或下文詳細說明的藥物組合物的用途，用於製造用於通過肌內或皮下注射施用長期治療感染了病原性分枝桿菌(如結核分枝桿菌、牛分枝桿菌、麻風分枝桿菌、鳥分枝桿菌和海分枝桿菌)的受試者的藥物，其中間歇施用或將要間歇施用該組合物，時間間隔的範圍是一周至一年、或一周至兩年。因此，應理解，術語「長期治療」是指其中一次給藥或一次施用(例如通過肌內或皮下注射)將在如本文所述的一段時間內具有持續治療效果的治療，例如在幾個小時、幾個周或幾個月(例如，在實施例中，在至少或長達一個月、三個月或六個月的時期)內的持續治療效果；參見實例。換言之，長期治療可以是指在超過一次給藥/施用的情況下，在給藥/施用之間的(如本文所述的)長時間段(即，間隔)為如本文所述的長時間段。
[0027]
在另一個方面，如本文(例如上文)所述，本文提供了一種用於長期治療感染了病原性分枝桿菌(例如，如本文所述的任何類型的病原性分枝桿菌)的受試者的方法，其中提供了/需要(例如本文、如下文所述的量的)一次給藥/施用(並且一次給藥/施用具有持續效果，例如在本文所述的時間段內)。在另一個方面，本文提供了如下長期治療方案，其中提供/需要兩次這樣的給藥或施用，此給藥/施用間隔給予，其中間隔時間段如本文所述，例如至少或長達一個月、三個月或六個月的時期-例如在持續治療效果持續的時間內。在另外的實施例中，提供了如下長期治療方案，其中以如本文所述的這種間隔提供/需要三次這樣的給藥或施用。在又一個實施例中，提供了本文所述的長期治療方案，但是其在引入治療期(這不是長期治療方案，例如每天一次的施用過程，持續一周、兩周、三周或一個月)之前進行。
[0028]
本發明進一步涉及用於在具有感染病原性分枝桿菌感染風險的受試者中預防病原性分枝桿菌感染的方法，所述方法包括向所述受試者施用有效預防病原性分枝桿菌感染的量的如上文詳細說明或下文進一步詳細說明的藥物組合物。或可替代地，本發明涉及如上文詳細說明或下文進一步詳細說明的藥物組合物的用途，用於製造用於在具有感染病原性分枝桿菌感染風險的受試者中預防病原性分枝桿菌感染的藥物。
[0029]
在另一個方面，本發明涉及用於在具有感染病原性分枝桿菌感染風險的受試者中長期預防病原性分枝桿菌感染的方法，所述方法包括向所述受試者施用有效量的如上文詳細說明或下文進一步詳細說明的藥物組合物，其中間歇施用或將要間歇施用該組合物，時間間隔的範圍是一周至一年、或一周至兩年。
[0030]
本發明還涉及如上文詳細說明或下文詳細說明的藥物組合物的用途，用於製造用於在具有感染病原性分枝桿菌感染風險的受試者中長期預防病原性分枝桿菌感染的藥物，其中間歇施用或將要間歇施用該組合物，時間間隔的範圍是一周至一年、或一周至兩年。
[0031]
在一個實施例中，本發明涉及用於如本文詳細說明的用途或方法，其中間歇施用或將要施用該藥物組合物，時間間隔的範圍是一周至一個月、或範圍是一個月至三個月、或範圍是三個月至六個月、或範圍是六個月至十二個月、或範圍是12個月至24個月。
[0032]
在另一個實施例中，本發明涉及用於如本文詳細說明的用途或方法，其中每兩周一次、或每個月一次、或每三個月一次施用或將要施用該藥物組合物。
[0033]
另外的藥物組合物、治療或預防方法，以及用於生產基於這些組合物的藥物的用途將在下文描述並且意在作為本發明的部分。
[0034]
還參考以下附圖描述本發明：
[0035]
圖1：在時間零時以及1個月時參考實例a的psd測量值，其中「概念(concept)7」是指參考實例a
[0036]
圖2：在多種條件(包括高壓滅菌後)下針對參考實例b和c的psd測量值，並且其中概念3是指參考實例b，概念4是指參考實例c
[0037]
圖3：高壓滅菌前和後實例1微米懸浮液的psd
[0038]
圖4：在多種條件下(包括高壓滅菌後和另外的時間後(並且在不同的溫度下))實例1微米懸浮液的psd
[0039]
圖5：在多種其他條件(包括在60℃下長達3個月)下實例1微米懸浮液的psd
[0040]
圖6：「當以40mg/kg的劑量以200mg/ml微米配製品(參見實例1，配製品1b即微米懸浮液)im或sc施用時，雄性大鼠中tmc207的血漿動力學」和「當以40mg/kg的劑量以200mg/ml納米配製品(參見實例1，配製品1a即納米懸浮液)im或sc施用時，雄性大鼠中tmc207的血漿動力學」[0041]
圖7：在大鼠中皮下施用含有不同表面活性劑(peg 4000與tpgs組合，以及tpgs)的貝達喹啉lai微米懸浮液的血漿濃度相對於時間的曲線；數據代表具有sd的平均值
[0042]
圖8：在大鼠中皮下施用含有不同表面活性劑(peg 4000與tpgs組合，以及tpgs)的bdq lai微米懸浮液後貝達喹啉(bdq)代謝物的血漿濃度相對於時間的曲線；數據代表具有sd的平均值
[0043]
圖9：在大鼠中肌內施用含有不同表面活性劑(peg 4000與tpgs組合，以及tpgs)的貝達喹啉lai微米懸浮液的血漿濃度相對於時間的曲線；數據代表具有sd的平均值
[0044]
圖10：在大鼠中肌內施用含有不同表面活性劑(peg 4000與tpgs組合，以及tpgs)的bdq lai微米懸浮液後貝達喹啉(bdq)代謝物的血漿濃度相對於時間的曲線；數據代表具有sd的平均值
具體實施方式
[0045]
用於本發明的化合物是化合物tmc207，也稱為貝達喹啉。
[0046]
貝達喹啉可以以其非鹽形式使用或以合適的藥學上可接受的鹽形式使用，如酸加成鹽形式或鹼加成鹽形式。在實施例中，在本發明的組合物中，貝達喹啉是其非鹽形式。
[0047]
藥學上可接受的酸加成鹽被定義為包含貝達喹啉能夠形成的具有治療活性的無
毒酸加成鹽形式。所述酸加成鹽可以通過用適當的酸處理貝達喹啉的游離形式而獲得，所述酸例如為無機酸，例如氫滷酸，特別是鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸和磷酸；有機酸，例如乙酸、羥基乙酸、丙酸、乳酸、丙酮酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、馬來酸、富馬酸、蘋果酸、酒石酸、檸檬酸、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、對甲苯磺酸、環拉酸(cyclamic acid)、水楊酸、對氨基水楊酸和雙羥萘酸(pamoic acid)。特別地，考慮了富馬酸鹽，因為這是已在市場上銷售的產品中使用的形式。
[0048]
可能的治療活性無毒鹼加成鹽形式可以通過用適當的有機和無機鹼處理來製備。適當的鹼鹽形式包括例如銨鹽、鹼金屬鹽和鹼土金屬鹽(特別是鋰鹽、鈉鹽、鉀鹽、鎂鹽和鈣鹽)；與有機鹼(例如苄星青黴素、n-甲基-d-葡糖胺、海巴胺(hydrabamine)鹽)的鹽；以及與胺基酸例如精氨酸和賴氨酸的鹽。
[0049]
相反地，所述酸或鹼加成鹽形式可以通過用適當鹼或酸處理而轉化為游離形式。
[0050]
在本技術的框架中使用的術語加成鹽還包括能夠形成貝達喹啉及其鹽的溶劑化物。此類溶劑化物是例如，水合物和醇化物。
[0051]
每當在本文中提及使用貝達喹啉(或tmc207)時，我們是指在市售產品中使用且在wo 2004/011436中披露為抗分枝桿菌劑的單一立體異構體形式。
[0052]
已經發現，貝達喹啉的物理-化學特性允許製造具有獨特藥代動力學特性的微米或納米顆粒懸浮液，其中該微米或納米顆粒懸浮液可以用於長期治療病原性分枝桿菌感染連同用於長期預防病原性分枝桿菌感染，並且為此目的，僅需要有限次數的藥物施用。這在就藥丸負荷連同患者對規定的劑量方案的依從性而言都是有益的。
[0053]
如本文所用，術語「治療病原性分枝桿菌感染」涉及治療感染了病原性分枝桿菌感染的受試者。這種分支桿菌感染可以是分枝桿菌結核病或多重耐藥分枝桿菌結核病。
[0054]
術語「預防病原性分枝桿菌感染」涉及防止或避免受試者感染病原性分枝桿菌感染。感染源可以是多種多樣的，例如含有病原性分枝桿菌感染的材料。
[0055]
術語「治療有效量」、「有效預防病原性分枝桿菌感染的量」和類似術語是指產生有效的血漿水平的、本發明組合物的量或濃度(或此類組合物中活性成分貝達喹啉的量/濃度)。「有效的血漿水平」是指貝達喹啉的那些血漿水平，該水平提供病原性分枝桿菌感染的有效治療或有效預防。這是因為給予的量/劑量/施用可以與有效治療/預防所需的暴露水平或所需的血漿水平相關聯，例如如本文所述(參見例如實例)。
[0056]
術語「受試者」特別涉及人類。
[0057]
術語「微米或納米顆粒」是指微米或納米範圍內的顆粒。顆粒的大小應該低於最大尺寸，超過該最大尺寸，通過皮下或肌內注射施用變得受損或甚至不再可能。所述最大尺寸取決於例如針頭直徑或身體對大顆粒的不利反應所施加的限制，或兩者。在一個實施例中，本發明的藥物組合物包含微米顆粒形式的貝達喹啉。在另一個實施例中，本發明的藥物組合物包含納米顆粒形式的貝達喹啉。本發明的微米或納米顆粒的平均有效粒度可以低於約50μm、或低於約20μm、或低於約10μm、或低於約1000nm、或低於約500nm、或低於約400nm、或低於約300nm、或低於約200nm。平均有效粒度的下限可以是低的，例如，低至約100nm或低至約50nm。在一個實施例中，平均有效粒度範圍為約50nm至約50μm，或約50nm至約20μm、或約50nm至約10μm、或約50nm至約1000nm、約50nm至約500nm、或約50nm至約400nm、或約50nm至約300nm、或約50nm至約250nm、或約100nm至約250nm、或約150nm至約220nm、或100至200nm、
或約150nm至約200nm、例如約130nm、或約150nm。例如，在製備之後和長達3個月的時間段(例如當在約5℃、25℃和40℃的溫度下儲存時)之後通常：
[0058]-在實施例中，微米懸浮液可以具有約3與10μm之間(例如約3.5、4或5μm)的d90和約2與4μm之間(例如約3μm)的d50
[0059]-在實施例中，納米懸浮液可以具有約0.5與1.5μm之間(例如約或小於1μm，或約或小於1000nm)的d90和約0.1與0.5μm之間(例如約或小於約0.3μm，或小於約300nm)的d50。
[0060]
在實施例中，使用微米顆粒，其中如通過d10、d50和/或d90測量的(在實施例中如通過d50測量的)平均有效粒度小於約50μm、或小於約20μm，且大於約0.1μm(100nm)。在實施例中，用於本發明的組合物中的此類微米顆粒的範圍在約20μm與約0.1μm之間(在另外的實施例中，在約15μm與高於約0.2μm(200nm)之間以及在另外的實施例中，在約10μm與高於0.5μm(500nm)之間，例如在約10μm與高於1μm之間或高於約1000nm、或高於約500nm、或高於約400nm、或高於約300nm、或高於約200nm。上述值是指製備後的測量值。然而，在實施例中，所述值也可以指在長達3個月的時間段之後(例如5天、一周、兩周、一個月、兩個月或三個月之後)並在多種溫度(例如在約5℃、25℃和40℃的溫度)下儲存之後的測量值。
[0061]
如本文所用，術語平均有效粒度具有其如本領域普通技術人員已知的常規含義，並且可以通過本領域已知的粒度測量技術，例如像沉降場流動分級分離、光子相關譜、雷射衍射或圓盤離心對其進行測量。本文提到的平均有效粒度可以涉及顆粒的體積分布。在那種情況中，「小於約50μm的有效粒度」是指至少50％體積的顆粒具有小於50μm的有效平均粒度，並且同樣應用於提到的其他有效粒度。以類似方式，平均有效粒度可以涉及這些顆粒的重量分布，但是通常這將導致對於平均有效粒度的相同或大約相同的值。
[0062]
本發明的藥物組合物提供了活性成分貝達喹啉隨延長時間段的釋放，並且因此還可以稱為持續或緩慢釋放組合物。施用後，本發明的組合物留在體內並且穩定地釋放貝達喹啉，在患者系統內保持該活性成分的此類水平持續一個延長的時間段，由此在所述時間段提供了病原性分枝桿菌感染的適當治療或預防。因為以下事實：本發明的藥物組合物留在體內並且緩慢釋放貝達喹啉(及其活性代謝物，本文稱為m2；參見下文，甲基取代的代謝物)，所以可以將它們稱為適合於作為長效(或貯庫)配製品的藥物組合物。
[0063]
如本文所用，其中術語「延長的時間段」是指期限(或時間段)，範圍可以是一周上至一年或上至兩年，或一個期限，範圍是一至兩周，或兩至三周，或三至四周，或一個期限，範圍是一至兩個月，或兩至三個月，或三至四個月，或三至六個月，或六個月至12個月，或12個月至24個月，或一個期限，範圍是幾天，例如7、10或12天，或幾周，例如2、3或4周，或一個月，或幾個月，例如2、3、4、5或六個月或甚至更長，例如7、8、9或12個月。
[0064]
本發明的藥物組合物可以應用於病原性分枝桿菌感染的長期治療或長期預防，或換言之，本發明的藥物組合物可以用於在一個延長的時間段內治療病原性分枝桿菌感染，或預防病原性分枝桿菌感染。在病原性分枝桿菌感染的治療或預防中，本發明的組合物持續一個延長的時間段有效，例如持續至少約一周或更長時間，或持續約1個月或更長時間。表述「持續至少約一周或更長時間有效」是指活性成分貝達喹啉(和/或其活性代謝物m2)的血漿水平將高於閾值。在治療應用的情況下，所述閾值是貝達喹啉(和/或其活性代謝物m2)提供病原性分枝桿菌感染的有效治療的最低血漿水平。在病原性分枝桿菌感染的預防應用的情況下，所述閾值是貝達喹啉(和/或其活性代謝物m2)可有效預防病原性分枝桿菌感染
傳播的最低血漿水平。
[0065]
其中「長期」，例如涉及「長期預防病原性分枝桿菌感染」或「長期治療病原性分枝桿菌感染」、或類似術語時使用，是指多個期限，範圍可以是一周上至一年或上至兩年，或更長，如五或10年。特別是在治療病原性分枝桿菌感染的情況下，此類期限將會很長，大約為一至幾個月、一年或更長時間。此類期限還可以較短，特別是在預防的情況下。更短期限是幾天的那些，例如7、10或12天，或幾周，例如2、3或4周，或一個月，或幾個月，例如2、3、4、5或六個月或甚至更長，例如7、8、9或12個月。在一個實施例中，根據本發明的方法和用途被用於在一個月、或幾個月，例如2、3、4、5或六個月或甚至更長、例如7、8、9或12個月期間預防病原性分枝桿菌感染。
[0066]
可以按多種時間間隔施用本發明的藥物組合物。當用於預防病原性分枝桿菌感染時，可以僅一次或有限次，例如兩次、三次、四次、五次或六次、或更多次施用本發明的藥物組合物。在有限時間段(例如其中存在感染風險的時間段)期間需要預防的情況下，這可以是可推薦的。
[0067]
可以按上述時間間隔，例如按範圍是一周至一個月、或範圍是一個月至三個月、或範圍是三個月至六個月、或範圍是六個月至十二個月的時間間隔施用本發明的藥物組合物。在一個實施例中，可以每兩周一次、或每個月一次、或每三個月一次施用藥物組合物。在另一個實施例中，時間間隔範圍是一至兩周、或兩至三周、或三至四周，或時間間隔範圍是一至兩個月、或兩至三個月、或三至四個月、或三至六個月、或六個月至12個月、或12個月至24個月。時間間隔可以是至少一周，但是還可以是幾周，例如2、3、4、5或6周，或時間間隔是一個月，或是幾個月，例如2、3、4、5或6個月或甚至更長，例如7、8、9或12個月。在一個實施例中，本發明的藥物組合物是按一個、兩個或三個月的時間間隔施用。本發明的藥物組合物的每次施用之間的這些更長時期提供了就藥丸負荷和依從性而言的進一步改進。為了進一步改善依從性，患者可以被指令服用他們的藥物，其中按每周計劃在周中的某一天，或在每月計劃的情況下在月中的某一天施用該組合物。
[0068]
本發明的組合物的每次施用之間的時間間隔長度可以變化。例如，可以按照血漿水平選擇所述時間間隔。在認為貝達喹啉(和/或其活性代謝物m2)的血漿水平太低的情況下，例如，當這些水平接近下文詳細說明的最小血漿水平時，間隔可以更短。在認為貝達喹啉(和/或其活性代謝物m2)的血漿水平過高的情況下，間隔可以更長。在一個實施例中，按相等時間間隔施用本發明的組合物。可以施用組合物而沒有任何中間額外施用，或換言之，可以在由變化的或相等長度的時間段(例如至少一周的時間段，或在此詳細說明的任何其他時段)彼此間隔開的具體時間點施用組合物，在此期間不另外施用貝達喹啉。具有相同長度時間間隔具有以下優點，即施用計劃簡單，例如施用發生在周中的同一天，或月中的同一天。因此此類施用計劃涉及有限的「藥丸負荷」，從而有益地促進患者對規定的給藥方案的依從性。
[0069]
用其治療的受試者的血漿中的貝達喹啉(和/或其活性代謝物m2)的濃度(或「c」)通常表示為每單位體積的質量，典型地是每毫升的納克數(ng/ml)。為了方便，該濃度在本文可以稱為「血漿藥物濃度」或「血漿濃度」。
[0070]
施用的貝達喹啉的劑量(或量)取決於本發明的藥物組合物中貝達喹啉的量，或取決於施用的給定組合物的量。在希望更高血漿水平的情況下，可以施用更高貝達喹啉濃度
的組合物或更多給定組合物中的任一個或二者。如果希望更低血漿水平，那麼這反過來也一樣也可以應用。而且可以選擇變化的時間間隔和變化的給藥的組合，以達到某一希望的血漿水平。
[0071]
施用的貝達喹啉的劑量(或量)還取決於施用頻率(即每次施用之間的時間間隔)。通常，在給予更不頻繁的情況下劑量將更高。所有這些參數可以用於指引血漿水平至希望的值。
[0072]
給藥方案還取決於設想的是病原性分枝桿菌感染的預防還是治療。在治療的情況下，選擇施用的貝達喹啉的劑量或者給藥頻率或者兩者，使得貝達喹啉的血漿濃度被保持在高於最小血漿水平。在這一上下文中，術語「最小血漿水平」(或c
min
)是指貝達喹啉(和/或其活性代謝物m2)提供病原性分枝桿菌感染的有效治療的血漿水平。特別地，貝達喹啉(和/或其活性代謝物m2)的血漿水平被保持在高於約10ng/ml、或高於約15ng/ml、或高於約20ng/ml、或高於約40ng/ml的最小血漿水平的水平上。貝達喹啉(和/或其活性代謝物m2)的血漿水平可以被保持在高於更高最小血漿水平，所述更高最小血漿水平是例如高於約50ng/ml、或高於約90ng/ml、或高於約270ng/ml、或高於約540ng/ml。在一個實施例中，貝達喹啉(和/或其活性代謝物m2)的血漿水平被保持在高於約13.5ng/ml的水平，或被保持在高於約20ng/ml的水平。或貝達喹啉(和/或其活性代謝物m2)的血漿水平可以保持在某一範圍內，特別是以下範圍：起始自選自上述那些的最小血漿水平並且終止在選自上述那些的更高血漿水平，並且選自500ng/ml和1000ng/ml(例如從10至15、10至20、10至40等，或從15至20、或15至40、或15至90等，或20至40、20至90、或20至270等，或40至90、40至270、或40-540等，每次從約按ng/ml計的指示值至約按ng/ml計的指示值)。在一個實施例中，所述範圍是從約10至約20、從約20至約90、從90至270、從270至540、從540至1000，每次從約按ng/ml計的指示值至約按ng/ml計的指示值。
[0073]
貝達喹啉(和/或其活性代謝物m2)的血漿水平應保持高於上述最小血漿水平，因為在較低水平細菌不再被充分抑制，從而它可以增殖，帶來出現突變的額外風險。
[0074]
在預防的情況下，術語「最小血漿水平」(或c
min
)是指貝達喹啉(和/或其活性代謝物m2)提供對感染的有效治療/預防的最低血漿水平。
[0075]
特別地，在預防的情況下，貝達喹啉(和/或其活性代謝物m2)的血漿水平可以保持在高於涉及治療的上述最小血漿水平的水平上。然而，在預防中，貝達喹啉(和/或其活性代謝物m2)的血漿水平可以保持在更低水平，例如在高於約4ng/ml、或約5ng/ml、或約8ng/ml的水平。貝達喹啉(和/或其活性代謝物m2)的血漿水平應優選地保持高於這些最小血漿水平，因為在較低水平藥物會不再有效，由此增加感染轉移的風險。貝達喹啉(和/或其活性代謝物m2)的血漿水平可以保持在略微更高的水平，以具有安全界限。此類更高水平起始自約50ng/ml或更高。貝達喹啉(和/或其活性代謝物m2)的血漿水平可以保持在涉及治療的上述範圍內的水平，但是其中下限包括約4ng/ml、或約5ng/ml、或約8ng/ml的血漿水平。
[0076]
貝達喹啉(和/或其活性代謝物m2)的優點是其可以被以相對較高的血漿水平使用而無任何顯著的副作用。貝達喹啉(和/或其活性代謝物m2)的血漿濃度可能達到相對較高的水平，但與任何藥物一樣，不應超過最大血漿水平(或c
max
)，即貝達喹啉(和/或其活性代謝物m2)引起顯著副作用的血漿水平。另外，還應考慮化合物從組織中的釋放，這未在血漿水平內考慮。如本文所用，術語「顯著副作用」是指存在於相關患者群中的副作用達到以下
程度：副作用影響患者的正常功能。在實施例中，選擇將要施用的貝達喹啉(和/或其活性代謝物m2)的施用的量和頻率，使得血漿濃度長期保持在一個水平，該水平包括在最大血漿水平(或如上文詳細說明的c
max
)和最小血漿水平(或如上文詳細說明的c
min
)之間。
[0077]
在某些情況下，可能希望將貝達喹啉(和/或其活性代謝物m2)的血漿水平保持在較低水平，例如儘可能接近本文詳細說明的最小血漿水平。這將允許減小施用頻率和/或每次給藥所施用的貝達喹啉(和/或其活性代謝物m2)的量。還將允許避免不希望的副作用，這將有助於在多數目標人群組中劑型的接受性，所述目標人群組是具有感染風險並且因此更不傾向於耐受副作用的健康人。在預防的情況下，貝達喹啉(和/或其活性代謝物m2)的血漿水平可以被保持在相對較低的水平。如上文或下文詳細說明，涉及用於預防感染的用途或方法的一個實施例中，其中貝達喹啉(和/或其活性代謝物m2)的最小血漿水平如在此詳細說明，並且最大血漿水平約等於引起活性成分發揮治療作用的最低血漿水平，這也如文本詳細說明。
[0078]
在其他實施例中，貝達喹啉(和/或其活性代謝物m2)的血漿水平保持在低於較低的最大血漿水平的水平上，所述較低的最大血漿水平為約10ng/ml、更特別地約15ng/ml、進一步特別地約20ng/ml、仍更特別地約40ng/ml。在特定實施例中，貝達喹啉(和/或其活性代謝物m2)的血漿水平被保持在低於約13.5ng/ml的水平。在一個實施例中，貝達喹啉(和/或其活性代謝物m2)的血漿水平保持在上文詳細說明的較低最大血漿水平和涉及預防時提到的最小血漿水平的區間。例如，貝達喹啉(和/或其活性代謝物m2)的血漿水平保持低於約10ng/ml並且高於約4ng/ml的最低水平。
[0079]
在其他情況下，可能希望保持貝達喹啉(和/或其活性代謝物m2)的血漿水平在相對較高水平上，例如，當存在高感染風險並且更頻繁和/或更高劑量不是問題時。在這些情況下，最小血漿水平可以等於貝達喹啉(和/或其活性代謝物m2)提供病原性分枝桿菌感染的有效治療的最低血漿水平，如本文提到的特定水平。
[0080]
在預防的情況下，應該基於約0.2mg/天至約50mg/天、或0.5mg/天至約50mg/天、或約1mg/天至約10mg/天、或約2mg/天至約5mg/天、例如約3mg/天來計算將要施用的劑量。這對應於以下的每周劑量：約1.5mg至約350mg、特別地約3.5mg至約350mg、特別地約7mg至約70mg、或約14mg至約35mg，例如約35mg，或對應於以下的每月劑量：6mg至約3000mg、特別地約15mg至約1,500mg、更特別地約30mg至約300mg、或約60mg至約150mg，例如約150mg。通過將日劑量與每次施用之間的天數相乘可以容易地計算出其他給藥方案的劑量。
[0081]
在治療的情況下，將要施用的劑量應該在某種程度上較高並且應該基於約1mg/天至約150mg/天、或約2mg/天至約100mg/天、或約5mg/天至約50mg/天、或約10mg/天至約25mg/天，例如約15mg/天來進行計算。可以如上文所述計算對應的每周或每月劑量。對於在預防中應用，劑量可以較低，儘管也可以使用與治療應用相同的劑量。在實施例中，以每月間隔或每三個月或每六個月間隔給予一次給藥/施用，總治療持續時間為三個、六個月或12個月。在給藥/施用為每月、每三個月或每六個月的情況下，在實施例中，給予的劑量(例如在人類受試者中)是基於給予2周的400mg日劑量計算的。因此，每次給藥給予的貝達喹啉的總量可能約為5600mg(例如，在3000至8000mg範圍之間)，但可以達此類量的五分之一(例如，在500至2000mg範圍之間，例如在約1000與1500mg之間)。
[0082]
在另一個實施例中，在預防或特別是治療的情況下，劑量也可以以mg/kg表示。例
如，在實例中，可以基於體重(例如哺乳動物的，並且如本文的實例所示，在小鼠中)施用某些劑量，因此可以採用1mg/kg至1000mg/kg之間的劑量(例如可以使用40mg/kg、80mg/kg、160mg/kg、320mg/kg或480mg/kg)，並且此類劑量可以保持4周、8周或12周的時期(例如如實例中所示)有效。例如，可以每4周服用一個劑量(有效地視為12周治療方案，即總共三個劑量)，或可以服用有效地提供足夠的治療的單一劑量(例如，通過cfu的減少來定義，參見實例)，所述足夠的治療可以通過經12周的時段進行監測證明。因此，在一方面，為了治療細菌感染，可以服用一個劑量(例如在1mg/kg與1000mg/kg之間，例如在2mg/kg與500mg/kg之間)或每4周服用一個此類劑量(例如可以服用二個或三個此類劑量)。此類劑量取決於待治療的細菌感染。例如，在潛伏性結核病或麻風病的治療中，由於控制細菌所需的貝達喹啉的含量較低，因此可能需要給予較低的劑量(與例如多重耐藥結核病相比)。可以在下文描述這樣的一個實例，其中表明在小鼠中的小鼠潛伏性結核病感染模型中，160mg/kg的一個劑量足以降低cfu
–
還可以看到160mg/kg的兩個或三個劑量(分別在第4和第8周施用的第二和第三個劑量)在該模型中也有效。
[0083]
已經發現，一旦施用，貝達喹啉(和/或其活性代謝物m2)的血漿水平幾乎穩定，即在有限界限內波動。已經發現，在延長的時間段期間，血漿水平接近幾乎穩定狀態模式，或發現近似幾乎零數量級釋放速度。「穩定狀態」是指在延長時間段，其中存在於受試者血漿內的藥物的量保持在幾乎相同水平的情況。貝達喹啉(和/或其活性代謝物m2)的血漿水平通常不示出任何下降到低於藥物有效的最小血漿水平的情況。術語「保持在幾乎相同水平」並不排除可以存在在可接受範圍內的血漿濃度的小波動，例如在約
±
30％、或約
±
20％、或約
±
10％、或約
±
10％的範圍內的波動。
[0084]
在一些情況下，在施用後可以存在初始血漿濃度峰，此後血漿水平達到「穩定狀態」，如下文所述。
[0085]
本發明的組合物示出良好的局部耐受並且易於施用。良好的局部耐受涉及在注射部位的最小刺激和炎症；易於施用是指施用具體藥物配製品所需的針的尺寸和時間的長度。此外，本發明的組合物還示出好的穩定性並且具有可接受的貨架期。
[0086]
本發明的微米或納米顆粒具有吸附到其表面的表面改性劑。表面改性劑的功能是作為潤溼劑以及膠態懸浮液的穩定劑。
[0087]
在一個實施例中，本發明組合物中的微米或納米顆粒主要包含結晶的貝達喹啉或其鹽；以及表面改性劑，其組合的量可以至少包含約50％、或者至少約80％、或者至少約90％、或至少約95％、或至少約99％的微米或納米顆粒。如本文所指示，在實施例中，貝達喹啉呈其非鹽形式(或呈其「游離形式」)，並且在另外的實施例中，其呈結晶非鹽(或呈游離)形式。在此方面，如本文所提及，可以使用國際專利申請wo 2004/011436(或wo 2006/125769，其描述了一種用手性試劑進行的光學拆分)中描述的程序照原樣地製備貝達喹啉。按照此類程序，通過從甲苯/乙醇中沉澱獲得貝達喹啉，並表明產物發生了結晶。貝達喹啉的此類形式可以用於製備本發明的組合物，另外，此類形式可以是具有以下特徵的單一多晶型：
[0088]
(i)在181.5℃(吸熱開始)下的熔融吸熱和dsc曲線表明產物在約182.5℃下的熔融(隨後立即分解；通過差示掃描量熱法(dsc)進行測量，通過將約3mg的化合物轉移到標準的鋁ta儀器(ta-instrument)樣品盤中，用適當的閉環(coer)關閉樣品盤，並在配備有rcs
ot
tm
(aot)下銷售的產品；十二烷基硫酸鈉(duponol
tm p)；烷基芳基聚醚磺酸鹽，商品名triton
tm x-200下可得；聚氧乙烯脫水山梨糖醇脂肪酸酯(tweens
tm 20、40、60和80)；脂肪酸的脫水山梨糖醇酯(span
tm 20、40、60和80或arlacel
tm
20、40、60和80)；蔗糖硬脂酸酯和蔗糖二硬脂酸酯混合物，如在商品名crodesta
tm f110或crodesta
tm sl-40下可得到的產品；己基癸基三甲基氯化銨(ctac)；聚乙烯吡咯烷酮(pvp)。如果需要，可以組合(與peg4000等)使用兩種或更多種表面改性劑。
[0098]
可以與peg4000(等)組合使用的特定表面改性劑選自泊洛沙姆、α-生育酚聚乙二醇琥珀酸酯、聚氧乙烯脫水山梨糖醇脂肪酸酯和帶負電荷的磷脂的鹽或者其酸形式。更特別地，表面改性劑選自pluronic
tm f108、維生素e tgps、tween
tm 80和lipoid
tm epg(並且在特定實施例中，其是維生素e tpgs)。可以使用這些表面改性劑中的一種或多種。pluronic
tm f108對應於泊洛沙姆338並且是聚氧乙烯、聚氧丙烯嵌段共聚物，其通常符合式ho-[ch2ch2o]
x-[ch(ch3)ch2o]
y-[ch2ch2o]
z-h，其中x、y和z的平均值分別是128、54和128。泊洛沙姆338的其他商品名為hodag nonionic
tm 1108-f和synperonic
tm pe/f108。在一個實施例中，表面改性劑包含聚氧乙烯脫水山梨糖醇脂肪酸酯和磷脂醯甘油鹽(特別是卵的磷脂醯甘油鈉)的組合。
[0099]
貝達喹啉關於表面改性劑的最佳相對量取決於所選的表面改性劑、貝達喹啉懸浮液的比表面積(其由平均有效粒度和貝達喹啉濃度決定)、表面改性劑的臨界微團濃度(如果形成微團)等。貝達喹啉與表面改性劑的相對量(w/w)優選地在以下範圍內：1:2至約20:1，特別地在以下範圍內：1:1至約10:1，例如在以下範圍內：2:1至約10:1，例如約4:1。
[0100]
如所指示的，表面改性劑含有peg4000，但還可以含有另外的表面改性劑(例如，上文提及的表面改性劑)。在本發明的多個實施例中，本發明的組合物包含表面改性劑，該表面改性劑含有以下w/w比率的peg4000和一種或多種其他表面改性劑：
[0101]-至少1:10的peg4000:一種或多種其他表面改性劑
[0102]-在1:10與100:1之間(例如，在約1:10與20:1之間)的peg4000:一種或多種其他表面改性劑
[0103]-約10:1的peg4000:一種或多種其他表面改性劑
[0104]
因此，當本發明的組合物的表面改性劑包含至少1:10w/w的比率的peg4000(等)：一種或多種其他表面改性劑時，那麼其可以含有5mg/ml的peg4000和50mg/ml的一種或多種其他的表面改性劑(例如，維生素e tpgs，本文中也簡稱為「tpgs」)。在實施例中，鑑於貝達喹啉與表面改性劑的相對量可以為在1:1與10:1之間(例如，約4:1)，則在此類情況下貝達喹啉可以以約200mg/ml存在(其可以形成特定的可注射配製品或劑量)。雖然本發明的組合物因含有peg4000(等)而被區分，並且它可能是一個相對較小的量，但在實施例中，表面改性劑包含按重量計至少25％、例如按重量計至少50％的peg4000等(並且，剩餘部分為如本文所述的一種或多種其他合適的表面改性劑，例如維生素e tpgs)。例如，在實施例中，本發明的組合物的表面改性劑包含至少1:1w/w的比率的peg4000等:一種或多種其他合適的表面改性劑。在另外的實施例中，表面改性劑包含按重量計至少75％的peg4000等(並且，剩餘部分為如本文所述的一種或多種的其他合適的表面改性劑，例如維生素e tpgs)。因此，在實施例中，本發明的組合物的表面改性劑包含至少3:1w/w的比率的peg4000等:一種或多種其他合適的表面改性劑。在仍另外的實施例中，本發明的組合物的表面改性劑包含按重量
計至少85％的peg4000等、或在約85％與約95％之間的peg4000等(並且，在每種情況下，剩餘部分為如本文所述的一種或多種其他合適的表面改性劑，例如，維生素e tpgs)。因此，在實施例中，本發明的組合物的表面改性劑包含至少8:1w/w的比率的peg4000等:一種或多種其他合適的表面改性劑(例如，在8:1與12:1w/w之間的比率的peg4000等:一種或多種其他合適的表面改性劑)。
[0105]
peg4000(等)與一種或多種其他表面改性劑的比率還可以取決於所使用的其他表面改性劑；例如當一種或多種其他表面改性劑包含維生素e tpgs和/或吐溫(聚氧乙烯聚醚磺酸鹽)時，上文的比率可以適用，並且例如，表面改性劑包含按重量計至少60％的peg4000，並且在實施例中，包含按重量計至少75％的peg4000；在一種或多種其他表面改性劑包含泊洛沙姆的情況下，則比率可以為在1:10至10:1之間(的peg:一種或多種其他表面改性劑)，例如在1:5與5:1之間，並且在實施例中為在1:2與2:1之間，並且在實施例中，在此情況下表面改性劑包含至少30％的peg4000，例如，至少40％(並且，在特別的實施例中約50％)。在某些情況下，需要至少10％的peg4000，但是上限可以為60％(例如，當一種或多種其他表面改性劑是泊洛沙姆時)。
[0106]
如所指示的，本發明的組合物包含含有peg4000等的表面改性劑。在實施例中，表面改性劑可以基本上由peg4000等組成。然而，在替代性實施例中，表面改性劑還含有另一種如本文所述的合適的表面改性劑。
[0107]
在本發明的組合物中使用一種或多種其他表面改性劑的情況下，那麼在特定實施例中，那些其他的表面改性劑可以選自維生素e tpgs或泊洛沙姆。例如，其他的表面改性劑可以是維生素e tpgs。因此，如本文所指示，貝達喹啉與表面改性劑的w/w比率可以在2:1至10:1的範圍內(例如，約4:1)，並且因此，當使用200mg/ml的貝達喹啉(例如，對於單次可注射劑量)時，那麼組合物可以含有在100mg/ml與20mg/ml之間的表面改性劑。在這種情況下，並且再次如所指示的，表面改性劑的量可以含有例如至少3:1的比率的peg4000(等)和一種或多種其他合適的表面改性劑(或按重量計至少75％的peg4000)。因此，當存在100mg/ml的表面改性劑存在時，則表面改性劑可以由至少75mg/ml的peg4000等組成，並且任何剩餘部分都由一種或多種其他合適的表面改性劑(例如，維生素e tpgs)組成，並且當存在20mg/ml的表面改性劑時，則表面改性劑可以由至少15mg/ml的peg4000等組成，並且任何剩餘部分都由一種或多種其他合適的表面改性劑組成。由於上文指示貝達喹啉與表面改性劑的比率可以為約4:1，那麼當有200mg/ml的貝達喹啉(例如，作為一個可注射劑量)時，則表面改性劑的量可以為在約35mg/ml與60mg/ml之間(例如，約55mg/ml，在該情況下，表面改性劑可以含有約50mg/ml的peg4000等以及約5mg/ml的一種或多種其他表面改性劑，例如維生素e tpgs)。
[0108]
本發明的組合物可能需要是無菌的，以便可以將它們施用於患者。可以以多種方式(包括在無菌工藝或無菌環境中製造此類組合物)實現無菌組合物。然而，這種方法具有多種缺點、挑戰並且涉及較高的成本。優選的替代方案是進行滅菌而不必遵循整個無菌工藝，並且加熱滅菌、高壓滅菌和γ輻射是可以實現滅菌的滅菌步驟。有利地，本發明的組合物可以被高壓滅菌(即，是可高壓滅菌的)，並且高壓滅菌可以在不使組合物發生實質性降解或分解的情況下完成。
[0109]
在滅菌後出現與以下相關聯的進一步的挑戰：長效配製品的希望的穩定性、此配
製品內活性藥物成分(api)顆粒的不希望的聚集以及配製品的希望的重懸性(滅菌(例如高壓滅菌)後)。
[0110]
在這種情況下，本發明的組合物可以被滅菌，例如通過加熱滅菌、高壓滅菌或γ輻射(在實施例中，通過高壓滅菌進行滅菌)，即使濁點可能低於進行高壓滅菌的溫度。有利地，本發明的組合物在滅菌後可以容易地重懸(即使在滅菌過程(特別是高壓滅菌過程)期間超過濁點)。
[0111]
因此，在本發明另外的方面，提供了：
[0112]
(a)用於對本發明的組合物進行滅菌(例如，對組合物進行高壓滅菌)的方法；
[0113]
(b)隨後將本發明的此類組合物重懸，該方法可以稱為「本發明的方法」。實例表明peg4000可能是重懸的關鍵。將理解的是，滅菌(例如加熱滅菌或高壓滅菌)後，例如由於相分離，可能有一些顆粒聚集(尤其是如果在高於濁點的溫度下進行滅菌過程)。鑑於本發明的組合物基本上應該是懸浮液，那麼重懸步驟可能是必需的(這樣的懸浮步驟也可以在較晚的時間點處進行，例如正在製備懸浮液以用於其最終用途時)。本發明的組合物一開始作為懸浮液(貝達喹啉顆粒懸浮於藥學上可接受的載體中)，並且表面改性劑(即，如上文定義的含有peg4000的表面改性劑)可能被吸附在貝達喹啉的表面上
–
高壓滅菌後，表面改性劑(本文還稱為潤溼劑)與貝達喹啉和/或貝達喹啉顆粒聚集之間可能發生解離。因此，重懸回初始懸浮液是必需的並且可以通過將本發明的組合物的渦旋或振蕩來實現(滅菌(例如高壓滅菌)後)。可以通過使表面改性劑(即，peg4000和一種或多種其他合適的表面改性劑)吸附在貝達喹啉的表面上來使(載體中的貝達喹啉的)重懸發生。
[0114]
如所指示的，滅菌(例如高壓滅菌)後的重懸性可能與peg4000的存在相關聯。另外地或可替代地，使用peg4000作為表面改性劑可能是有利的，因為peg4000可以替代如下的表面改性劑，這種表面改性劑可能同樣有效(例如，具有允許滅菌後懸浮和/或重懸性的相似特性)，但在高於一定的劑量或量(例如作為注射劑)時，被替代的表面改性劑可能是不耐受的(例如在人類中)。例如，其他表面改性劑(比如維生素e tpgs)在人類中作為注射劑在高於一定的劑量時可能是不耐受的，並且因此需要被完全替代或降低劑量/量。
[0115]
可以通過高壓滅菌對微米或納米懸浮液(不含有peg4000)進行滅菌並且可以將其充分重懸(例如，在本文定義的條件下重懸，尤其是通過渦旋小於40秒)，在這種情況下可以不需要peg4000。然而，在重懸性不足(例如，花費超過40秒)的實施例中，例如在高壓滅菌後，在這種微米或納米懸浮液中使用peg4000等可有助於改善重懸性(即，通過使重懸更容易，包括通過將花費的時間減少至小於40秒)。美國藥典(us pharmacopoeia)表明懸浮液應該是可再分散的，以防它們在儲存等時沉降，並且目標是總體上具有懸浮液，其中重懸花費的時間儘可能短；因此在此方面，以及在本發明的方面，peg4000(等)可以起到輔助作用。
[0116]
因此，鑑於以上情況，在本發明的另外的實施例中提供了：
[0117]-peg4000等，其在用於通過肌內或皮下注射施用的藥物組合物中用作表面改性劑，其中所述組合物包含微米或納米顆粒的懸浮液形式的活性藥物成分(例如貝達喹啉)或其藥學上可接受的鹽，其特徵在於例如在滅菌(例如高壓滅菌)後，該peg4000有助於使所述組合物重懸
[0118]-peg4000等，其用於在使包含微米或納米顆粒的懸浮液形式的活性藥物成分(例如貝達喹啉)或其藥學上可接受的鹽的藥物組合物重懸中使用，例如其中所述組合物已經
進行滅菌(例如高壓滅菌)
[0119]-peg4000等，其在包含微米或納米顆粒的懸浮液形式的活性藥物成分(例如貝達喹啉)或其藥學上可接受的鹽的藥物組合物中用作重懸性助劑，例如其中所述組合物已經進行滅菌(例如高壓滅菌)
[0120]-peg4000等，其用於提高(或改善)包含微米或納米顆粒的懸浮液形式的活性藥物成分(例如貝達喹啉)或其藥學上可接受的鹽的藥物組合物的重懸性，例如其中所述組合物已經進行滅菌(例如高壓滅菌)
[0121]
在以上所有情況下，peg4000等可以在本文所述的藥物組合物中用於此類用途。在某些情況下，重懸性可以與沒有peg4000的藥物組合物進行比較。
[0122]
在另外的替代性實施例中，提供了：
[0123]-peg4000等在包含微米或納米顆粒的懸浮液形式的活性藥物成分(例如貝達喹啉)或其藥學上可接受的鹽的藥物組合物中作為表面改性劑的用途，其中例如在滅菌(例如高壓滅菌)後，該peg4000有助於使所述組合物重懸
[0124]-peg4000等在使包含微米或納米顆粒的懸浮液形式的活性藥物成分(例如貝達喹啉)或其藥學上可接受的鹽的藥物組合物重懸中的用途，例如其中所述組合物已經進行滅菌(例如高壓滅菌)
[0125]-peg4000等在包含微米或納米顆粒的懸浮液形式的活性藥物成分(例如貝達喹啉)或其藥學上可接受的鹽的藥物組合物中作為重懸性助劑的用途，例如其中所述組合物已經進行滅菌(例如高壓滅菌)
[0126]-peg4000等用於提高(或改善)包含微米或納米顆粒的懸浮液形式的活性藥物成分(例如貝達喹啉)或其藥學上可接受的鹽的藥物組合物的重懸性的用途，例如其中所述組合物已經進行滅菌(例如高壓滅菌)
[0127]
在以上所有情況下，可以在本文所述的藥物組合物中使用peg4000等。再次，在某些情況下，重懸性可以與沒有peg4000的藥物組合物進行比較。
[0128]
通過機械手段微粉化/粒度減小/納米化和通過從過飽和溶液受控地沉澱，或者通過使用如gas技術(「氣體抗溶劑」)中的超臨界流體，或者此類技術的任一組合，可以製備本發明的顆粒。在一個實施例中，使用一種方法，其包括將貝達喹啉分散在液體分離介質中並在碾磨介質存在下應用機械手段將貝達喹啉的粒度減小至小於約50μm、特別是小於約1,000nm的平均有效粒度的步驟。可以在表面改性劑存在下減小粒度。
[0129]
製備本發明顆粒的一般程序包括：
[0130]
(a)以微粉化形式獲得貝達喹啉；
[0131]
(b)向液體介質中添加微粉化的貝達喹啉以形成預混合物/預分散體；以及
[0132]
(c)將該預混合物在碾磨介質存在下進行機械處理，以減小平均有效粒度。
[0133]
在特定實施例中，提供了用於製備藥物組合物的方法，該方法包括：
[0134]
(a)以微粉化形式獲得活性藥物成分(例如貝達喹啉)或其藥學上可接受的鹽；
[0135]
(b)向液體介質中添加該微粉化的活性成分(例如貝達喹啉)或其藥學上可接受的鹽，以形成預混合物/預分散體，其特徵在於該液體介質含有如權利要求1、2、3或4中任一項所述的包含peg4000等的表面改性劑；
[0136]
(c)將該預混合物在碾磨介質存在下進行機械處理，以減小平均有效粒度；
[0137]
(d)滅菌(例如高壓滅菌)；以及
[0138]
(e)重懸(例如，如果需要)。
[0139]
在此類情況下，重懸可以通過渦旋小於40秒進行。在特定實施例中，提供了peg4000在這種方法或此類方法中的用途。
[0140]
使用本領域已知的技術以微粉化形式製備貝達喹啉。預分散體中貝達喹啉活性劑的平均有效粒度優選小於約100μm(如通過篩析測定)。當微粉化的貝達喹啉的平均有效粒度大於約100μm時，貝達喹啉化合物的粒度優選被減小至小於100μm(例如如本文所述的粒度或粒度範圍)。
[0141]
然後可以將微粉化的貝達喹啉添加到液體介質中，其中微粉化的貝達喹啉基本上不可溶而形成預分散體。液體介質中貝達喹啉的濃度(重量比重量百分數)可以變化很大並且取決於所選的表面改性劑和其他因素。組合物中貝達喹啉的合適濃度在約0.1％至約60％之間，或約1％至約60％之間，或約10％至約50％之間，或約10％至約30％之間，例如約10％、20％或30％(在該段落中每個％是關於w/v的)。
[0142]
可以通過使預混合物接受機械手段處理而直接使用以將分散體中有效平均有效粒度減小至小於2,000nm。當將球磨機用於研磨時，優選直接使用預混合物。可替代地，使用合適的攪拌，如軋制機，可以將貝達喹啉和任選的表面改性劑分散在液體介質中，直到實現均勻分散。
[0143]
用於減小貝達喹啉的有效平均有效粒度的機械手段可以方便地採用分散磨機的形式。合適的分散磨機包括球磨機研磨機、磨碎機/碾磨機、振動磨機、平面磨機、介質磨機，如砂磨機和珠粒研磨機。介質磨機是優選的，因為需要相對較短的碾磨時間來提供所希望的粒度的減小。珠粒優選是zro2珠粒。例如，對於納米顆粒，理想的珠粒尺寸為約0.5mm，並且對於微米顆粒，理想的珠粒尺寸為約2mm。
[0144]
用於粒度減小步驟的碾磨介質可以選自剛性介質，優選球形或者微粒形，具有小於3mm，更優選小於1mm的平均粒度(低至200μm珠粒)。這種介質可如所希望的以較短的處理時間提供本發明的顆粒並且對碾磨設備造成較小的磨損。碾磨介質的實例是zro2，如用氧化鎂穩定化或用釔穩定化的95％zro2、矽酸鋯、玻璃碾磨介質、聚合珠粒、不鏽鋼、二氧化鈦、氧化鋁等。優選的碾磨介質具有大於2.5g/cm3的密度並且包括95％的用氧化鎂穩定化的zro2、和聚合珠粒。
[0145]
研磨時間可以變化很大並且主要取決於特定機械裝置和所選的加工條件而定。對於軋制機，可能需要長達2天或更長的加工時間。
[0146]
應該在不會顯著降解貝達喹啉化合物的溫度下減小顆粒的尺寸。通常優選小於30℃至40℃的加工溫度。如果需要，可以用常規冷卻設備冷卻加工設備。方便地在環境溫度和對於碾磨過程是安全和有效的加工壓力的條件下進行該方法。
[0147]
根據本發明，藥物組合物含有優選藥學上可接受的水性載體。所述水性載體包括任選地與其他藥學上可接受的成分混合的無菌水。後者包含用於可注射配製品的任何成分。此類成分是可選的。這些成分可以選自以下中的一種或多種：助懸劑、緩衝液、ph調節劑、防腐劑、等滲劑等成分。在一個實施例中，所述成分選自以下中的一種或多種：助懸劑、緩衝液、ph調節劑，以及任選地，防腐劑和等滲劑。特定成分可以同時作為這些試劑中的兩種或更多種發揮功能，例如像防腐劑和緩衝液，或像緩衝液和等滲劑起作用。
[0148]
合適的任選的緩衝劑和ph調節劑應按足以使分散體中和至非常輕微的鹼性(高達ph 8.5)的量使用，優選在7至7.5的ph範圍內。具體緩衝劑是弱酸鹽。可以添加的緩衝劑和ph調節劑可以選自酒石酸、馬來酸、甘氨酸、乳酸鈉/乳酸、抗壞血酸、檸檬酸鈉/檸檬酸、乙酸鈉/乙酸、碳酸氫鈉/碳酸、琥珀酸鈉/琥珀酸、苯甲酸鈉/苯甲酸、磷酸鈉、三羥甲基甲胺、碳酸氫鈉/碳酸鈉、氫氧化銨、苯磺酸、苯甲酸鈉/苯甲酸、二乙醇胺、葡萄糖酸δ內酯、鹽酸、氫溴酸、賴氨酸、甲磺酸、單乙醇胺、氫氧化鈉、氨丁三醇、葡糖酸、甘油酸、戊二酸(gluratic)、穀氨酸、乙二胺四乙酸(edta)、三乙醇胺，包括其混合物。在實施例中，本發明的組合物不含緩衝劑。在實施例中，尤其是當ph降低時，本發明的組合物確實含有緩衝液，例如檸檬酸鹽-磷酸鹽緩衝液。
[0149]
合適的任選的防腐劑包括可以選自下組的抗微菌劑和抗氧化劑，該組由以下組成：苯甲酸、苯甲醇、丁基化羥基苯甲醚(bha)、丁羥甲苯(bht)、三氯叔丁醇、五倍子酸鹽、羥苯酸鹽、edta、苯酚、氯甲酚、間甲酚、苄索氯銨、肉豆寇基-γ-皮考啉氯(piccolinium chloride)、醋酸苯汞和硫柳汞。自由基清除劑包括bha、bht、維生素e和抗壞血酸棕櫚酸酯，以及它們的混合物。氧清除劑包括抗壞血酸鈉、亞硫酸鈉、l-半胱氨酸、乙醯半胱氨酸、蛋氨酸、硫代甘油、丙酮合亞硫酸氫鈉、異抗壞血酸、羥丙基環糊精。螯合劑包括檸檬酸鈉、edta鈉和蘋果酸。在本發明的實施例中，本發明的組合物不含防腐劑。
[0150]
可以存在等滲劑(isotonizing agent)或等張劑(isotonifier)以確保本發明的藥物組合物的等滲性，並且包括糖，例如葡萄糖、右旋糖、蔗糖、果糖、海藻糖、乳糖；多元糖醇，優選三元或更高級的糖醇，例如甘油、赤蘚醇、阿拉伯糖醇、木糖醇、山梨糖醇和甘露醇。可替代地，氯化鈉、硫酸鈉、或其他適當無機鹽可以用於使溶液等滲。這些等張劑可以單獨使用或組合使用。懸浮液方便地包括從0至10％(w/v)、特別是0至6％的等滲性。令人關注的是非離子等張劑，例如葡萄糖，因為電解質可能會影響膠體穩定性。在本發明的實施例中，本發明的組合物含有等滲劑或等張劑，其在另外的實施例中是非離子等張劑，例如合適的糖如甘露醇。等滲劑的量如上文所述，但也可以以一定的與貝達喹啉相比的比率添加，例如貝達喹啉和等滲劑(例如甘露醇)的w/w比率可以為在1:1與10:1之間，例如在約2:1與8:1之間，尤其是在約3:1與6:1之間(例如約4:1)。
[0151]
本發明的藥物組合物的希望特徵涉及易於施用。本發明的藥物組合物的黏度應該足夠低以允許通過注射施用。特別是它們應如此設計，使得它們可以容易地吸入注射器中(例如從小瓶)，在不太長的時間跨度注射穿過細針(例如20g 11/2、21g 11/2、22g 2或22g 11/4的針)。在一個實施例中，本發明的組合物的黏度低於約75mpa
·
s，或低於60mpa
·
s。此類黏度或更低黏度的水性懸浮液通常符合上述標準。
[0152]
理想地，根據本發明的水性懸浮液將包含可被耐受的儘可能多的貝達喹啉(或其藥學上可接受的鹽)以便保持注射體積最小，特別是從3％至70％(w/v)，或從3％至60％(w/v)，或從3％至40％(w/v)，或從10％至40％(w/v)的貝達喹啉(或其藥學上可接受的鹽)。在一個實施例中，本發明的水性懸浮液含有約50％-70％(w/v)的貝達喹啉(或其藥學上可接受的鹽)，或約40％-60％(w/v)的貝達喹啉(或其藥學上可接受的鹽)，或約30％-50％(w/v)的貝達喹啉(或其藥學上可接受的鹽)。
[0153]
在一個實施例中，基於組合物的總體積，水性懸浮液可以包含按重量計：
[0154]
(a)從10％至70％(w/v)、或從20％至60％(w/v)、或從20％至50％(w/v)、或從20％
至40％(w/v)的貝達喹啉(或其藥學上可接受的鹽)；
[0155]
(b)從0.5％至20％(w/v)、或從2％至15％或20％(w/v)、或從5％至15％(w/v)的潤溼劑(本文中還稱為表面改性劑)；
[0156]
(c)從0％至10％(w/v)、或從0％至5％(w/v)、或從0％至2％(w/v)、或從0％至1％(w/v)的一種或多種緩衝劑；
[0157]
(d)從0％至20％(w/v)、或從2％至15％或20％(w/v)、或從5％至15％(w/v)的等滲劑
[0158]
(e)從0％至2％(w/v)的防腐劑；以及
[0159]
(f)注射用水，適量添加至100％。
[0160]
在一個實施例中，基於組合物的總體積，水性懸浮液可以包含按重量計：
[0161]
(a)從3％至50％(w/v)、或從10％至40％(w/v)、或從10％至30％(w/v)的貝達喹啉(或其藥學上可接受的鹽)；
[0162]
(b)從0.5％至10％(w/v)、或從0.5％至2％(w/v)的潤溼劑；
[0163]
(c)從0％至10％(w/v)、或從0％至5％(w/v)、或從0％至2％(w/v)、或從0％至1％(w/v)的一種或多種緩衝劑；
[0164]
(d)從0％至10％(w/v)、或0％至6％(w/v)的等滲劑
[0165]
(e)從0％至2％(w/v)的防腐劑；以及
[0166]
(f)注射用水，適量添加至100％。
[0167]
可以向這些懸浮液中任選地添加一個量的酸或鹼，以使ph至約ph 7的值。合適的酸或鹼是生理學上可接受的任何那些中的任一種，例如hcl、hbr、硫酸、鹼金屬氫氧化物(例如naoh)。在實施例中，不需要將這種酸或鹼添加至本發明的組合物中。
[0168]
本發明中貝達喹啉(或其藥學上可接受的鹽)的施用可以足夠治療病原性分枝桿菌感染，儘管在許多情況中，可推薦共同施用其他抗-tb藥物。
[0169]
在某些情況中，病原性分枝桿菌感染的治療可以局限於僅僅施用根據本發明的貝達喹啉(和/或其代謝物)的組合物，即作為單一療法，不共同施用另外的抗-tb藥物。例如對於某些分枝桿菌感染(其中低濃度的活性成分可以治療細菌(例如潛伏/休眠tb或麻風分枝桿菌))，可能推薦使用此選項。
[0170]
在另外的方面，本發明涉及藥物組合物的用途，該藥物組合物包括有效量的根據本發明的貝達喹啉或其藥學上可接受的鹽，用於製造用於感染了病原性分枝桿菌感染的受試者的維持療法的藥物，其中間歇施用或將要間歇施用該組合物，時間間隔範圍是一周至一年、或一周至兩年。
[0171]
因此在另外的方面，本發明提供了用於長期治療感染了病原性分枝桿菌感染(例如，耐藥或潛伏/休眠分枝桿菌)的患者的方法，所述方法包括
[0172]
(i)用抗-tb藥物的組合治療所述患者；隨後
[0173]
(ii)間歇地施用根據本發明的包含有效量的貝達喹啉或其藥學上可接受的鹽的藥物組合物，其中以至少一周的時間間隔施用該組合物。
[0174]
如果治療是針對麻風分枝桿菌的，那麼可以再次採用單一療法或與可用於治療麻風分枝桿菌的現有藥物(例如利福噴汀)組合的治療方案。例如作為每月間隔，本發明的組合物可以通過注射一次或最多三次施用。優勢與依從性相關，通過避免使用氨苯碸避免產
生抗藥性，通過避免使用氯法齊明避免產生病恥感(stigma)。
[0175]
本發明還涉及如上文所述的藥物組合物，其用作治療或預防病原性分枝桿菌感染的藥物。
[0176]
此外，本發明涉及如本文所述的藥物組合物的用途，用於製備預防或治療病原性分枝桿菌感染的藥物。
[0177]
本發明還涉及治療感染了病原性分枝桿菌感染的受試者的方法，所述方法包括施用治療有效量的如本文所述的藥物組合物。
[0178]
如本文所用，詞語「基本上」並不排除「完全」，例如「基本上無」y的組合物可以完全不含y。必要時，詞語「基本上」可以從本發明的定義中省略。與數值相連的術語「約」是指具有在數值的上下文中它的通常含義。必要時，詞語「約」可以被
±
10％、或
±
5％、或
±
2％、或
±
1％的數值替代。所有在此引用的文件都通過引用以其全文結合。
[0179]
以下實例旨在說明本發明並且不應理解為將本發明限制於此。
[0180]
實例
[0181]
方法實例：微米和納米懸浮液的製備
[0182]
活性成分貝達喹啉可以原樣使用或可以轉化為其藥學上可接受的鹽，如富馬酸鹽(例如市售產品中使用的形式)。除非另有說明，否則本文所指貝達喹啉以其非鹽形式使用。
[0183]
貝達喹啉配製品的原形藥物如下：
[0184]
200和100mg/ml的納米和微米懸浮液的製備。
[0185]
使用材料：
[0186]
鋯珠粒0.5mm(以輔助加工)
[0187]
無菌注射用水(viaflo)
[0188]
貝達喹啉(沒有研磨/碾磨)
[0189]
表面改性劑，包括peg4000(等)和一種或多種其他合適的表面改性劑(例如，生育酚peg 1000琥珀酸酯)
–
一種或多種賦形劑
[0190]
鋯珠粒2mm(以輔助加工)
[0191]
甘露醇(腸胃外)
–
賦形劑
[0192]
緩衝液(如果需要)，例如檸檬酸鹽-磷酸鹽緩衝液
[0193]
將玻璃瓶和用作碾磨介質的zro2珠粒(0.5mm或2mm，取決於所需的納米或微米懸浮液)在高壓釜中滅菌。將原料藥(量取決於要製備的配製品；參見例如以下配製品/懸浮液)以及在注射用水(量取決於需要/希望的濃度；參見例如以下配製品/懸浮液)中的表面改性劑(例如peg 4000和生育酚peg 1000琥珀酸酯)的溶液放入玻璃瓶中。添加500μm或2mm(取決於需要/希望的是微米懸浮液還是納米懸浮液)的平均粒度的zro2珠粒。將瓶置於軋制機上。將懸浮液在100rpm下微粉化/納米化長達72小時的時間段。例如，微粉化可以以100rpm進行3小時(或長達3小時)，納米化可以以100rpm進行長達46小時的時期(例如約40小時)。在碾磨過程結束時，用注射器除去濃縮的微米或納米懸浮液並填充至小瓶中。下表中描述了所得配製品(基於納米懸浮液和微米懸浮液)。通過hplc/uv進行濃度的測定。如果需要，製造活性成分貝達喹啉的最終濃度為200mg/ml的稀釋液。將所得的懸浮液避光保持。還進行了其他濃度的製造和測試，包括300mg/ml和100mg/ml的納米和微米配製品。
[0194]
將此類配製品已經(以及將要)在動物的肌內和皮下給藥以進行pk研究，以調查可能的長效作用(例如在麻風病的治療中)。懸浮液的物理穩定性將通過在不同的儲存條件下測量粒度來跟蹤。
[0195]
配製品的某些實施例具有以下特徵：
[0196]-微米懸浮液通過使用2mm zr珠粒
[0197]-以200mg/ml碾磨(否則濃度可能太高，例如300mg/ml)
[0198]-更長的碾磨時間，得到納米懸浮液
[0199]-合適的表面改性劑，例如基於物理穩定性選擇的表面改性劑，例如，如本文所述的表面改性劑或潤溼劑。
[0200]
貝達喹啉微米懸浮液的參考實例
[0201]
本文中將200mg/ml微米懸浮液稱為參考實例a(沒有緩衝液)以及參考實例b和c(有緩衝液)
[0202]
參考實例a
[0203] mg/ml貝達喹啉200tpgs50甘露醇50無菌注射用水適量
[0204]
粒度分布(psd)
[0205]
儲存時間儲存溫度(℃)d10(μm)d50(μm)d90(μm)0 0.8201.994.961個月25℃0.7041.593.64
[0206]
1個月後的psd測量值表明配製品仍然相對穩定，並且體積密度％也描繪於圖1(其中「概念7」是指參考實例a)中。
[0207]
使用hplc進行的穩定性測試：
[0208]
使用hplc測試法來確定參考實例a的長效可注射配製品的穩定性。目的是測量貝達喹啉在室溫下一定時間段後相對於兩種已知的降解物的量。
[0209]
hplc程序：柱
–
prontosil 120-3-c18 sh，100mm長x 3.0mm內徑，3μm粒度，或等效物；柱溫35℃；自動採樣器溫度5℃；流速0.5ml/min；檢測uv；波長230nm；數據收集時間50分鐘；分析運行時間60分鐘；注射體積10μl；流動相a是在水中0.03m鹽酸；流動相b是甲醇/乙腈/2-丙醇
–
45/45/10(v/v/v)。
[0210]
gmbh)提供。peg4000是親水劑，其可用於增加懸浮媒介物的黏度並且可充當助懸劑。
[0220]
實例1配製品：
[0221] mg/ml貝達喹啉200peg400050tpgs5緩衝液
–
檸檬酸鹽-磷酸鹽0.01n(ph 6)甘露醇50無菌注射用水適量
[0222]
在這種情況下，添加緩衝液以避免ph降低。
[0223]
粒度分布(psd)
[0224]
條件d10(μm)d50(μm)d90(μm)高壓滅菌前1.273.2910.4高壓滅菌後1.222.746.72
[0225]
實例1微米懸浮液的psd表明高壓滅菌後配製品保持相對穩定。這在圖3中示出。
[0226]
實例1配製品的近似濁點計算為約105℃至110℃。
[0227]
在systec高壓釜(vx/ve系列)中對實例1微米懸浮液進行高壓滅菌，其中當前的參數是：
[0228]
滅菌溫度：121℃(高於計算的濁點)
[0229]
滅菌時間：15分鐘
[0230]
卸載溫度：80℃
[0231]
典型的高壓滅菌循環
–
蒸汽產生器積累需要的蒸汽壓，蒸汽流入滅菌室內，在達到滅菌溫度後，在滅菌時間段期間溫度保持恆定，並且在該時間段過去後，具有任選的內置冷卻裝置的循環被冷卻直到達到卸載溫度。
[0232]
鑑於高壓滅菌溫度高於測量的濁點，所以可以預期，例如由於相分離，會看到顆粒聚集。
[0233]
實例1微米懸浮液的另外的數據
[0234]
懸浮液經歷某些條件後的粒度分布(psd)
[0235]
[0236]
以上關於psd的數據也表明實例1微米懸浮液在高壓滅菌後和另外的時間(並且在不同的溫度下)後保持相對穩定，這也在圖4中進行了概述。
[0237]
重懸性：高壓滅菌後，在容器底部可以看到顆粒，因此必須振蕩容器。有利地，可見在測試處，振蕩後可以容易地使實例1的配製品重懸。
[0238]
實例1微米懸浮液的另外的數據
[0239]
懸浮液經歷某些另外的條件後的粒度分布(psd)
[0240]
條件d10(μm)d50(μm)d90(μm)碾磨4小時後、高壓滅菌前1.103.4010.6高壓滅菌後，在5℃下18天1.132.45.51在25℃下1個月1.122.415.7025℃下3個月1.122.405.55在60℃下3個月1.202.525.82
[0241]
可見甚至在高壓滅菌後，psd在60℃下可以穩定甚至長達3個月，這在圖5中進行了概述。
[0242]
使用上述hplc測試法來確定實例1的長效可注射配製品的穩定性。再次，目的是測量貝達喹啉在室溫下某些時間段後相對於已知的降解物/雜質的量，並且給出以下結果：
[0243]
[0244][0245]
結論
[0246]
關鍵結論是，如通過psd和在hplc測試法中的純度測定所確定，甚至在高壓滅菌後，在高溫下儲存一定量的時間後，參考實例和實例1的懸浮液是穩定的。
[0247]
另外的關鍵結論是，在高壓滅菌後，甚至在高溫下儲存一定量的時間後，實例1的懸浮液容易地重懸。
[0248]
另外的重懸性數據
[0249][0250]
在上述實例中高壓滅菌後，通過渦旋相關組合物客觀地測量了上述組合物的重懸性。發現沒有peg4000的組合物難以重懸(在此，重懸花費超過40秒，並且需要渦旋和振蕩)，而具有peg4000的組合物能相對容易地重懸(在此，重懸需要小於40秒的溫和渦旋)。
[0251]
實例1a(微米懸浮液)
[0252][0253]
粒度分布(psd)和重懸性(實例1a)
[0254][0255]
實例1b(微米懸浮液)
[0256][0257]
粒度分布(psd)和重懸性(實例1b)
[0258][0259]
實例1c(微米懸浮液)
[0260][0261]
粒度分布(psd)和重懸性(實例1c)
[0262][0263]
實例1d(微米懸浮液)
[0264][0265]
粒度分布(psd)和重懸性(實例1d)
[0266][0267]
實例1e(微米懸浮液)
[0268][0269]
粒度分布(psd)和重懸性(實例1e)
[0270]
[0271][0272]
參考實例1f(微米懸浮液)
[0273][0274]
粒度分布(psd)和重懸性(實例1f)
[0275]
[0276][0277]
實例2：藥代動力學研究
[0278]
小鼠、大鼠和比格犬中的藥代動力學研究
[0279]
小鼠、大鼠和比格犬中的多個研究描述於國際專利申請wo 2019/012100中，這些研究總體上表明使用例如參考實例a的配製品，觀察到了貝達喹啉和/或其活性代謝物m2在某些時間段(包括1個月、3個月和6個月)內的持續血漿濃度。
[0280]
大鼠中的藥代動力學曲線
[0281]
在此研究中使用了200mg/ml濃度的配製品，並使用了參考實例a的微米懸浮液，即，除了200mg/ml濃度的(活性貝達喹啉的)微米顆粒之外，還使用tpgs(4:1貝達喹啉:tpgs)和在wfi(注射用水)中的50mg/ml甘露醇，沒有緩衝液。貝達喹啉也稱為tmc207。
[0282]
這些研究表明當皮下(sc)和肌內(im)施用時，參考實例a在雄性大鼠中在延長的時間段內產生了穩定的血漿水平。
[0283]
雄性大鼠
[0284]
第一次實驗是在雄性大鼠中進行的，其中以40mg/kg(0.2ml/kg)的濃度皮下(sc)和肌內(im)施用上文提及的每種相關的200mg/ml納米懸浮液和微米懸浮液。在3個月時進行中期分析，並在6個月時隨訪結果。在該研究中使用了十二隻大鼠。用200mg/ml微米懸浮液(參見參考實例a)對三隻大鼠進行肌內(im)給藥。用200mg/ml微米懸浮液(參見參考實例a)對三隻大鼠進行皮下(sc)給藥。
[0285]
第1階段結果
–
長達2200小時
[0286]
圖6「當以40mg/kg的劑量以200mg/ml微米配製品(參見參考實例a)im或sc施用時，雄性大鼠中tmc207的血漿動力學」[0287]
對於tmc207計算出以下參數(參見圖)：
[0288][0289]
在適用情況下給出平均值(括號內為最小值(min)
→
最大值(max))
[0290]
第2階段結果
–
長達4400小時
[0291]
在所有情況下，將bdq或m2的血漿濃度計算為相關研究中三隻大鼠的平均值。
[0292]
大鼠研究：對於參考實例a的配製品(即200mg/ml濃度的微米懸浮液)，以40mg/kg sc給藥(stdev＝標準偏差)和以40mg/kg im給藥
[0293]
[0294][0295]
參考實例a和實例1的血漿濃度相對於時間曲線
[0296]
在下圖中示出了，sc注射40mg/kg後，在大鼠中研究了參考實例a(用f4標記)和實例1(用f1標記)的血漿濃度相對於時間的曲線。測量了貝達喹啉及其活性代謝物m2的濃度。
[0297]
在研究的持續時間裡，在所有組的所有動物中觀察到了母體化合物的高於lloq(定量下限)的持續血漿濃度。sc施用後的前28天內，對於配製品f1和f4二者，觀察到了母體化合物的2個血漿濃度峰(c
max
)。28天後，兩種配製品的藥物血漿濃度隨著時間的推移總體會聚到相似的曲線和濃度。
[0298]
圖7示出了在大鼠中皮下施用含有不同表面活性劑(peg 4000與tpgs組合，以及tpgs)的貝達喹啉lai微米懸浮液的血漿濃度相對於時間的曲線。
[0299]
關於m2代謝物的血漿濃度-時間曲線，對f1和f4二者，在所有動物中再次觀察到m2
的高於lloq的持續血漿濃度。
[0300]
圖8示出了在大鼠中皮下施用含有不同表面活性劑(peg 4000與tpgs組合，以及tpgs)的bdq lai微米懸浮液後貝達喹啉(bdq)代謝物的血漿濃度相對於時間的曲線。
[0301]
在肌內施用後，在研究的持續時間裡，對於f1和f4配製品二者，在所有動物中再次觀察到了上述母體的高於lloq的持續血漿濃度。
[0302]
圖9示出了在大鼠中肌內施用含有不同表面活性劑(peg 4000與tpgs組合，以及tpgs)的貝達喹啉lai微米懸浮液的血漿濃度相對於時間的曲線。
[0303]
類似地，在肌內施用後代謝物實現了持續的血漿濃度。
[0304]
圖10示出了在大鼠中肌內施用含有不同表面活性劑(peg 4000與tpgs組合，以及tpgs)的bdq lai微米懸浮液後貝達喹啉(bdq)代謝物的血漿濃度相對於時間的曲線。
[0305]
結論：參考實例a(f4)和實例1(f1)二者的配製品以它們自己的方式能有效實現兩種藥物和活性代謝物(m2)的持續釋放，並且因此認為二者均適用於這種目的。
[0306]
實例3
[0307]
在潛伏性結核感染的少菌小鼠模型中評估可注射的長效貝達喹啉配製品
[0308]
這項研究的目的是使用潛伏性結核感染(ltbi)的少菌小鼠模型比較長效貝達喹啉(b
la
)配製品(該配製品每4周施用一次，共1、2或3個劑量)的殺菌活性與標準25mg/kg劑量或與b
la
施用總藥物劑量相匹配的更低劑量的每日口服(每周5天)給藥的b的活性。表1提出了初期研究方案。用於此研究的b
la
是上文參考實例a中所述的，即濃度為200mg/ml的微米懸浮液。主要結果是治療期間結核分枝桿菌肺cfu計數下降。
[0309]
表1.初期研究方案用於評估b
la
在少菌ltbi小鼠模型中的殺菌活性。
[0310][0311]
*r，利福平；p，利福噴汀；h，異煙肼；b，貝達喹啉；b
la
，長效貝達喹啉配製品。所有藥物劑量(以mg/kg計)均由下標指示。括號中的分數表示給藥頻率，以天計。b
la
是經肌內注射施用；所有其他藥物均通過管飼法施用。na，不適用。
[0312]
方案的合理性
[0313]
ο未處理的小鼠用於確定少菌感染的水平和穩定性。
[0314]
οr
10
(5/7)是在美國和加拿大進行的ltbi治療的替代方案，施用4個月。此處用作證明模型合格的對照。
[0315]
οp
15h50
(1/7)是在美國進行的ltbi治療的替代方案，每周一次施用3個月(12個劑量)。它被證明至少與9個月的異煙肼一樣有效。這是目前推薦的方案中間歇最大的方案，且
用作第二對照。
[0316]
οb
25
(5/7)是先前在少菌模型中研究的人等同劑量的每日b。每28天提供500mg/kg的總劑量。
[0317]
οb8(5/7)是每日b，其劑量減少以提供與每28天
×
3個劑量施用b
la
配製品劑量(即160mg/kg)相同的總劑量(480mg/kg)。
[0318]
οb
5.33
(5/7)是每日b，其劑量減少以提供與每28天
×
2個劑量施用b
la
配製品劑量(即160mg/kg)相同的總劑量(320mg/kg)。
[0319]
οb
2.67
(5/7)是每日b，其劑量減少以提供與施用一次b
la
配製品劑量(即160mg/kg)相同的總劑量(160mg/kg)。
[0320]
οb
la-160
(1/28)
×
3是每28天以160mg/kg，共3個劑量施用b
la
配製品。因此，在每個28天的間隔內，總b劑量將與b8(5/7)組的匹配。
[0321]
οb
la-160
(1/28)
×
2是從第0天開始每28天以160mg/kg，共2個劑量施用b
la
配製品。因此，到第12周，施用的總b劑量(320mg/kg)將與b
5.33
(5/7)組的相同。
[0322]
οb
la-160
(1/28)
×
1是b
la
配製品僅在第0天以160mg/kg的劑量施用一次。因此，到第12周，施用的總b劑量(160mg/kg)將與b
2.67
(5/7)組的相同。
[0323]
最終結果
[0324]
所有cfu計數數據均已最終確定，並在下表2中示出。由於最終機構協議和獲得b
la
供應的延遲，直到結核分枝桿菌攻擊感染後大約13周才開始治療，並且表2中的時間線已作相應調整。為了在不同的治療組之間進行比較，使用經邦費羅尼(bonferroni)多重比較檢驗調整的單向anova評估統計學顯著性。
[0325]
表2.最終結核分枝桿菌肺cfu計數數據。
[0326][0327][0328]
*r，利福平；p，利福噴汀；h，異煙肼；b，貝達喹啉，b
la
，長效貝達喹啉配製品。所有藥物劑量(以mg/kg計)均由下標指示。括號中的分數表示給藥頻率，以天計。sd，標準偏差。na，不適用。
[0329]
bcg免疫。一百五十隻雌性balb/c小鼠被牛分枝桿菌rbcg30噴霧感染。將od
600
為1.03的培養物懸浮液稀釋10倍，然後用於噴霧感染。細菌懸浮液的濃度為6.88log
10 cfu/ml，導致平均植入3.05(sd 0.10)log
10 cfu/肺。六周後，在結核分枝桿菌攻擊感染時，小鼠肺部的平均bcg負荷為4.95(sd 0.11)log
10 cfu。到第0天，bcg負荷已降低並穩定在3.27(sd 0.45)log
10 cfu/肺，在第4、8和12周的未處理小鼠中觀察到了相似的肺負荷。因此，如預期
的，在這些小鼠的肺中建立了低水平、穩定的bcg感染。
[0330]
結核分枝桿菌攻擊。bcg免疫後六周，小鼠被噴霧感染了結核分枝桿菌h37rv。將od
600
為0.850的培養物懸浮液稀釋約100倍，然後用於噴霧感染。細菌懸浮液的濃度為4.73log
10 cfu/ml，導致平均植入2.11(sd 0.09)log
10 cfu/肺。該植入比預期的植入高大約1log
10 cfu。到第0天，結核分枝桿菌負荷已穩定在4.8log
10 cfu/肺左右，在第4、8和12周的未處理小鼠中觀察到了相似的肺負荷。因此，儘管植入較高，在這些小鼠的肺中仍建立了穩定的結核分枝桿菌感染，穩定的肺cfu負荷相應地比先前實驗(1-3)中觀察到的高了近1log
10 cfu。
[0331]
殺菌活性評估(表2)。與未處理的小鼠肺中的結核分枝桿菌cfu計數相比，r
10
(5/7)對照方案在治療4、8和12周後，平均cfu計數分別降低了大約1、2和3log
10 cfu/肺。p
15h50
(1/7)對照方案在治療4、8和12周後分別降低了約2、3和4.5log
10 cfu。如預期的兩種對照方案的肺cfu計數下降的相對幅度均基於先前的研究(1,2)。在治療4、8和12周後，b
25
(5/7)導致約1.7、4.0和4.9log
10 cfu/肺的降低，這是基於先前的研究(1-2)也預期到的結果。因此，較高的植入和第0天cfu計數不影響藥物對小鼠肺中這種穩定的細菌群的相對活性。
[0332]
對於所有b測試方案，在第4、8和12周觀察到活性隨劑量增加而增加。對於接受一個劑量或兩個劑量的b
la-160
(1/28)的小鼠，肺cfu計數相對於未處理的小鼠的減少與接受了相同總劑量的、分別施用為每日口服方案b8(5/7)連續4周或8周的小鼠中的減少(兩個時間點的p》0.05)相等。一個劑量的b
la-160
在第0天的遞送160mg/kg，導致約1.3log
10 cfu/肺的降低，而四周的b8(5/7)導致約1.5log
10 cfu/肺的降低。兩個劑量的b
la-160
(1/28)或8周b8(5/7)後，接受這些方案中任一種的小鼠的肺cfu計數又降低了額外的1log
10
。治療12周後，接受一個劑量的b
la-160
的小鼠肺中cfu計數低於經由每日給藥b
2.67
(5/7)(p＝0.0002)接受相同總劑量貝達喹啉(160mg/kg)的小鼠，與未處理的對照小鼠的肺計數相比，前者的方案導致約3log
10
cfu/肺的降低，後者的方案導致1.7log
10 cfu/肺的降低。在通過兩個劑量的b
la-160
或通過每日給藥b
5.33
(5/7)接受320mg/kg的總貝達喹啉劑量的小鼠中，肺cfu計數的下降相同，為約3log
10 cfu/肺(p》0.05)。對於經由三個劑量的b
la-160
(1/28)接受480mg/kg的貝達喹啉總劑量的小鼠而言，肺cfu計數高於通過每日給藥b8(5/7)而獲得相等總劑量的小鼠，儘管差異在統計上並不顯著。
[0333]
在治療12周後，幾乎所有測試方案都具有與r
10
(5/7)對照方案相當的殺菌活性，只有b
2.67
(5/7)方案的殺菌活性顯著低於該對照(p《0.0001)。測試方案b8(5/7)表現出與p
15h50
(1/7)和b
25
(5/7)對照方案相當的殺菌活性，而所有其他測試方案在第12周的殺菌活性均顯著低於這些對照方案中的任一種。但是，在第12周的時間點記錄的cfu數據可能無法反映長效貝達喹啉方案的整體療效。在第0天接受單一劑量的b
la-160
的小鼠中，施用後12周仍觀察到細菌殺滅。因此，可以想像，在接受最後一個劑量後(如果不再服用)至少12周後，接受2和3劑b
la-160
的小鼠肺部的細菌負荷仍將進一步降低。同樣令人關注的是，與施用後5至8周相比，單一劑量的b
la-160
似乎在1至4周和9至12周表現出更大的殺菌活性，這表明長效媒介物具有雙相b釋放動力學的可能性。
[0334]
結論
[0335]
ο儘管細菌植入的數量比預期的要多，但在balb/c小鼠中仍建立了穩定的結核分枝桿菌感染，適合評估ltbi治療方案。
[0336]
ο治療12周後，對於貝達喹啉總劑量分別為160或320和480mg/kg，與每日劑量相比，每月一次給藥b
la-160
顯示出優越的或相當的殺菌活性。
[0337]
ο從單一劑量的b
la-160
觀察到的殺菌活性在施用後至少12周明顯，並且在接受2和3個劑量的小鼠的肺中，cfu計數可能會繼續降低。結合本實驗中高於預期基線的細菌負荷，這些發現表明注射2或3次後治癒是可能的。因此，至關重要的是評估這些b
la
方案在更長時間內的滅菌活性，以真正了解其在ltbi治療中的潛力。
[0338]
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