用於在呼吸道中進行治療和預防的方法、化合物和組合物的製作方法

2023-07-13 23:56:21

專利名稱：用於在呼吸道中進行治療和預防的方法、化合物和組合物的製作方法
用於在呼吸道中進行治療和預防的方法、化合物和組合物聯邦贊助的研究或開發本發明得到由美國衛生和公共服務部，美國國立衛生研究院授予的合同號HHSN266200600015C的政府資助。美國政府擁有本發明的一些權利。優先權的聲明本申請要求於2009年11月6日提交的美國臨時專利申請第61/259,033號、和於2009年11月6日提交的美國臨時專利申請第61/259,055號、於2010年4月9日提交的美國臨時專利申請第61/322,813號、於2010年5月6日提交的美國臨時專利申請第61/322，063號和於2010年9月9日提交的美國臨時專利申請第61/381，420·號的權益，其每一項的全部內容通過引用併入。背景呼吸道感染(RTI)是最普遍的和可能最嚴重的傳染病類型其中之一。RTI的例子包括流感、副流感、RSV、鼻竇炎、耳炎、喉炎、支氣管炎和肺炎。諸如呼吸病原體菌的導致RTI的因子的一個共同特徵是它們在上呼吸道的黏膜表面上建立共棲定殖；該定殖先於感染並通常是感染的必要條件。新生兒中的細菌定殖發生在出生後不久。在人一生當中，上呼吸道，尤其是鼻咽和口咽，保持微生物物種的動態生態儲庫，其不斷地獲得、消除和再獲得細菌。在大多數情況下，咽中的菌群是無害的。然而，當宿主的狀況被改變時，一些微生物可能侵入鄰近的組織或血流而導致疾病。除作為細菌和病毒的黏膜感染和侵入性感染的入口之外，鼻咽和口咽還是在個體間傳播病原體微生物的主要來源以及在其中選擇抗生素抗性細菌的儲庫(Garcia-Rodriguez 和 Martinez, J Antimicrob Chemother, (2002)50 (增刊 S2),59-73 ;Soriano 和 Rodriguez-Cerrato, J Antimicrob Chemother, (2002)50 增刊 S2,51-58)。臨床上已非常確定易患RTI的個體往往是病原體菌的持續攜帶者和復發攜帶者(Garcia-Rodriguez 和 Martinez, J Antim icrob Chemother, (2002)50 (增刊 S2),59-73 ;Mbaki 等人，Tohoku J Exp. Med. , (1987) 153 (2)，111-121)。例如，幽門螺桿菌(Helicobacter pylori)是與胃炎和胃潰瘍有關的人類病原體。該細菌存在於人類胃中並與胃竇的上皮細胞結合。其他呼吸道的疾患(更為概括地稱作，RTD)可能非傳染原所導致，雖然它們可作為感染的結果而出現。RTD的例子包括多種阻塞性肺病諸如變應性哮喘和非變應性哮喘、C0PD、支氣管擴張、血管炎、粘液栓塞(mucus plugging)、韋格納氏肉芽腫病和囊性纖維化(CF)。RTD可具有遺傳基礎(例如，CF)，可由於免疫缺陷而發生，可由於其他缺陷而發生(例如，a I-抗胰蛋白酶缺陷可使人更易患支氣管擴張)，可由變應原和/或化學汙染物而導致，或可作為其他傳染病諸如以上所描述的RTI或炎性疾病諸如炎性腸病症候群或克羅恩病的併發症而出現。RTI和RTD的共同指徵包括炎症和呼吸道中增高的粘液水平。然而，用來治療RTI和RTD的目前可用的藥物通常不能夠改善這些伴隨的病症。例如，Releiiza 是流感熟知的療法，但對於患有下呼吸道疾病，諸如哮喘和COPD的患者是不推薦的。因此，除需要在呼吸道中減少炎症和減少粘液或限制其增加的藥物之外，還需要能夠治療呼吸道傳染病諸如流感、副流感和RSV而不加劇患者的潛在呼吸道病症諸如哮喘、支氣管炎、支氣管擴張和COPD的藥物。本發明認識到目前可用於醫學用途的藥物對於減少炎症和/或減少呼吸道中的粘液或限制其在呼吸道中的增高具有有限的效力，且可使用的那些藥物伴隨著副反應。本發明還認識到存在對用於在患有潛在呼吸道疾病諸如哮喘、支氣管炎、支氣管擴張和COPD的患者中治療呼吸道傳染病的藥物的需要。因此，存在對能夠減少炎症的新型藥物、和/或減少呼吸道中的粘液或限制其在呼吸道中的增高的藥物的需要。還存在對於能夠治療呼吸道傳染病同時減少炎症、和/或同時減少呼吸道中的粘液或限制其在呼吸道中的增高的藥物的需要。概述
以下提供的組合物、組合物的組分和方法通過多種組成成分、製備步驟和生物物理參數、物理參數、生物化學參數或化學參數來表徵。如將對於本領域中的技術人員明顯的，本文所提供的組合物和方法包括以下所描述的成分、步驟和/或參數的任何的和全部的排列與組合。本發明涉及在呼吸道中具有抗炎作用的治療性化合物和組合物的用途與治療呼吸道炎症和預防呼吸道炎症的方法。本發明還涉及可用來預防或治療由呼吸道炎症導致的、導致呼吸道炎症的或由於呼吸道炎症加重的疾病的治療性化合物和組合物，所述疾病包括但不限於，非由變態反應或變應性反應導致的炎症。本發明還涉及治療性化合物和組合物減少在其呼吸道中具有增高的粘液水平的受治療者的呼吸道中的粘液的量的用途，和相應的治療方法。本發明還涉及治療性化合物和組合物在受治療者的呼吸道中限制粘液的量增加超過其呼吸道中的粘液的基線水平的用途和相應的治療方法。本發明還涉及可用來預防或治療由呼吸道中的增加的粘液導致的、導致呼吸道中增加的粘液的或由於呼吸道中增加的粘液加重的病症和/或疾病的治療性化合物和組合物，所述病症和/或疾病比如，變應性哮喘和非變應性哮喘、慢性阻塞性肺病(COPD)、支氣管炎(急性的和非急性的兩者)、支氣管擴張、囊性纖維化(CF)、血管炎、粘液栓塞、韋格納氏肉芽腫病、肺炎、結核病、涉及肺或呼吸道的癌症、卡塔格納症候群、楊氏症候群(Young』 s syndrome)、慢性竇肺感染、a I-抗胰蛋白酶缺陷、原發性免疫缺陷、獲得性免疫缺陷症候群、機會感染、感染狀態和感染後狀態、感冒、運動誘發哮喘、運動誘發粘液分泌過多、炎性腸病、潰瘍性結腸炎、克羅恩病、對吸入的真菌孢子的變應性反應、呼吸道感染、呼吸道阻塞、氨和其他毒氣的吸入或吸氣(inhalation or aspiration)、肺吸入(pulmonary aspiration)或酒精中毒、多種變態反應、導致呼吸道中的增加的粘液產生的、或由於呼吸道中的增高的粘液產生所導致或加重的任何其他疾患。在一些實施方案中，受治療者患有前述病症和/或疾病中的一種以上。在另外的實施方案中，患有前述病症和/或疾病中的一種或多種的受治療者不患有伴發的傳染病(RTI)，比如流感、副流感或RSV。在另外的實施方案中，患有如述病症和/或疾病中的一種或多種的受治療者患有一種或多種伴發的傳染病，比如流感、副流感或RSV。因此，本文提供用於治療與RTI、RTD、或其組合相關的炎症應答和/或變應性應答的方法、化合物和組合物。本文提供的化合物和組合物可在呼吸道中減少粘液產生和/或減少導致變應性或非變應性類型的炎症的炎性細胞的水平，所述炎性細胞包括但不限於，單核細胞、巨噬細胞、樹突細胞、組織細胞、枯否細胞(Kuppfer cell)、肥大細胞和嗜中性粒細胞。本文提供的化合物和組合物包括唾液酸酶或其活性部分。不受任何理論約束地，唾液酸已參與與RTI和RTD相關的變應性應答和/或炎症應答。例如，siglec (唾液酸結合Ig樣凝集素)是與唾液酸結合的免疫球蛋白(Ig)超家族的成員，並主要由造血系統的細胞所表達。已發現至少11種siglec且其表現為專一地識別細胞表面唾液酸作為配體。據認為siglec與唾液酸的結合介導細胞-細胞粘附和相互作用(Crockerh和Varki,TrendsTmmun01 , (2001) 22 (6), 337-342 ;Angata和 Brinkman-Van der Linden, Biochim. Biophys.Acta, (2002) 1572 (2-3)，294-316)。Siglec-8 (SAF-2)是粘附分子，其嚴格限於嗜曙紅細胞、嗜鹼性粒細胞和肥大細胞的表面，它們是包括變應性鼻炎、哮喘和溼疹的變應性病症中的主要效應細胞。Siglec-8(與小鼠中的Siglec-F同源)被認為負責介導將3種變應性細胞類型募集到氣道、肺和其他變態反應位點。Siglec-I (唾液酸粘附素)和siglec-2(⑶22)是巨噬細胞和B細胞上的粘附分子，兩種細胞類型均在導致炎症的免疫反應中具有主要作用。Siglec-9主要表達於嗜中性粒細胞上，已知其是炎症中的重要效應細胞(von Gunten, Yousefi, Seitz, Jakob, Schaffner, Seger, Takala, Villiger,和 Simon(2005)Blood 106 1423-1431)。並且，不受任何特定的理論所約束地，唾液酸殘基已參與毒蕈鹼受體與激動劑的相互作用；因此，唾液酸酶可影響毒蕈鹼受體和其激動劑的相互作用。本發明提供減少受治療者的呼吸道中粘液的量的方法，所述受治療者在所述呼吸道中具有增高的粘液水平。該方法包括向受治療者施用包含治療有效量的融合蛋白的化合物或組合物，所述融合蛋白具有唾液酸酶或其活性部分和錨定結構域。治療有效量包括當與施用組合物之前存在的粘液的量相比較時在施用化合物或組合物之後導致呼吸道中粘液的量減少的融合蛋白的量。在另一個實施方案中，提供減少受治療者的呼吸道中粘液的量的另一方法，所述受治療者在所述呼吸道中具有增高的粘液水平。該方法包括向受治療者施用包含治療有效 量的融合蛋白的化合物或組合物。該融合蛋白具有至少一個唾液酸酶催化結構域和至少一個錨定結構域，其中所述唾液酸酶催化結構域包括從SEQ ID NO: 12的胺基酸274延伸至胺基酸666的胺基酸序列(包括端點)。錨定結構域可以是人類雙調蛋白的糖胺聚糖(GAG)結合結構域，其包括SEQ ID NO :7的胺基酸序列。治療有效量包括當與施用組合物之前存在的粘液的量相比較時在施用化合物或組合物之後導致呼吸道中粘液的量減少的融合蛋白的量。在另一實施方案中，提供減少受治療者的呼吸道中粘液的量的另一方法，所述受治療者在所述呼吸道中具有增高的粘液水平。該方法包括向受治療者施用包含治療有效量的具有唾液酸酶或其活性部分的蛋白或肽的化合物或組合物。治療有效量包括當與施用化合物或組合物之前存在的粘液的量相比較時在施用化合物或組合物之後導致呼吸道中粘液的量減少的蛋白或肽的量。在另一實施方案中，提供在在其呼吸道中具有增高的粘液水平的受治療者中治療或改善以下的影響的方法慢性阻塞性肺病(COPD)、支氣管炎、支氣管擴張、囊性纖維化(CF)、血管炎、粘液栓塞、韋格納氏肉芽腫病、肺炎、結核病、涉及肺或呼吸道的癌症、卡塔格納症候群、楊氏症候群、慢性竇肺感染、a I-抗胰蛋白酶缺陷、原發性免疫缺陷、獲得性免疫缺陷症候群、機會感染、感染狀態、感染後狀態、感冒、運動誘發粘液分泌過多、炎性腸病、潰瘍性結腸炎、克羅恩病、呼吸道感染、呼吸道阻塞、毒氣的吸入或吸氣、肺吸入或酒精中毒。該方法包括向受治療者施用包含治療有效量的融合蛋白的化合物或組合物。融合蛋白具有至少一個唾液酸酶催化結構域和至少一個錨定結構域，其中唾液酸酶催化結構域包括從SEQ ID NO 12的胺基酸274延伸至胺基酸666的胺基酸序列(包括端點)。錨定結構域可以是人類雙調蛋白的糖胺聚糖(GAG)結合結構域，其包括SEQ ID NO :7的胺基酸序列。治療有效量包括當與施用化合物或組合物之前存在的粘液的量相比較時在施用化合物或組合物之後導致呼吸道中粘液的量減少的融合蛋白的量。
在另一實施方案中，提供在在其呼吸道中具有增高的粘液水平的受治療者中治療或改善以下的影響的另一方法慢性阻塞性肺病(COPD)、支氣管炎、支氣管擴張、囊性纖維化(CF)、血管炎、粘液栓塞、韋格納氏肉芽腫病、肺炎、結核病、涉及肺或呼吸道的癌症、卡塔格納症候群、楊氏症候群、慢性竇肺感染、a I-抗胰蛋白酶缺陷、原發性免疫缺陷、獲得性免疫缺陷症候群、機會感染、感染狀態、感染後狀態、感冒、運動誘發粘液分泌過多、炎性腸病、潰瘍性結腸炎、克羅恩病、呼吸道感染、呼吸道阻塞、毒氣的吸入或吸氣、肺吸入或酒精中毒。該方法包括向受治療者施用包含治療有效量的融合蛋白的化合物或組合物。融合蛋白具有唾液酸酶或其活性部分和錨定結構域。治療有效量包括當與施用化合物或組合物之前存在的粘液的量相比較時在施用化合物或組合物之後導致呼吸道中粘液的量減少的融合蛋白的量。在另一實施方案中，提供在在其呼吸道中具有增高的粘液水平的受治療者中治療或改善以下的影響的另一方法慢性阻塞性肺病(COPD)、支氣管炎、支氣管擴張、囊性纖維化(CF)、血管炎、粘液栓塞、韋格納氏肉芽腫病、肺炎、結核病、涉及肺或呼吸道的癌症、卡塔格納症候群、楊氏症候群、慢性竇肺感染、a I-抗胰蛋白酶缺陷、原發性免疫缺陷、獲得性免疫缺陷症候群、機會感染、感染狀態、感染後狀態、感冒、運動誘發粘液分泌過多、炎性腸病、潰瘍性結腸炎、克羅恩病、呼吸道感染、呼吸道阻塞、毒氣的吸入或吸氣、肺吸入或酒精中毒。該方法包括向受治療者施用包含治療有效量的具有唾液酸酶或其活性部分的蛋白或肽的化合物或組合物。治療有效量包括當與施用化合物或組合物之前存在的粘液的量相比較時在施用化合物或組合物之後導致呼吸道中粘液的量減少的蛋白或肽的量。在另一實施方案中，提供在受治療者的呼吸道中限制粘液的量的增加超過所述受治療者的呼吸道中的粘液的基線水平的方法。該方法包括向受治療者施用包含治療有效量的融合蛋白的化合物或組合物。該融合蛋白具有至少一個唾液酸酶催化結構域和至少一個錨定結構域，其中所述唾液酸酶催化結構域包括從SEQ ID NO: 12的胺基酸274延伸至胺基酸666的胺基酸序列(包括端點)，其中錨定結構域是人類雙調蛋白的糖胺聚糖(GAG)結合結構域，其包括SEQ ID NO :7的胺基酸序列。治療有效量包括在施用化合物或組合物之後在所述受治療者的呼吸道中限制粘液的量的增加超過基線水平的融合蛋白的量。在另一實施方案中，提供在受治療者的呼吸道中限制粘液的量的增加超過所述受治療者的呼吸道中的粘液的基線水平的另一方法。該方法包括向受治療者施用包含治療有效量的具有唾液酸酶或其活性部分和錨定結構域的融合蛋白的化合物或組合物。治療有效量包括在施用化合物或組合物之後在所述受治療者的呼吸道中限制粘液的量的增加超過基線水平的融合蛋白的量。
在又一個另外的實施方案中，提供在受治療者的呼吸道中限制粘液的量的增加超過所述受治療者的呼吸道中的粘液的基線水平的另一方法。該方法包括向受治療者施用包含治療有效量的具有唾液酸酶或其活性部分的蛋白或肽的化合物或組合物。治療有效量包括在施用化合物或組合物之後在受治療者的呼吸道中限制粘液的量的增加超過基線水平的蛋白或肽的量。本文還考慮根據本文所提供的化合物或組合物鑑定唾液酸酶或其活性部分的方法，其中所述唾液酸或其活性部分在受治療者的呼吸道中有效減少粘液的量。粘液的減少可在本領域中的技術人員已知的標準測定中直接測量。例如，在一些實施方案中，向具有相關炎症應答的哮喘的動物模型諸如分別如在實施例I和實施例2中所描述的豚鼠和小鼠施用包括唾液酸酶和/或其催化活性部分的單一化合物或化合物或組合物的文庫或集合。在動物中引起了哮喘或其他炎性病症，藉此粘液在肺或呼吸道中的積累增加。然後定量粘液的水平並與利用唾液酸酶或其活性部分處理之後的水平相比較。如果存在唾液酸酶或其活性部分時存在粘液水平的減少，則將該唾液酸酶或其活性部分鑑定或選擇為可用於用來治療炎症、變態反應和/或相關的炎症應答/變應性應答諸如粘液的過度廣生的本文所提供·的方法中的一種唾液酸酶或其活性部分。在一些實施方案中，根據本文提供的化合物和組合物，根據本領域中的技術人員已知的標準方法通過測量其破壞毒蕈鹼受體-激動劑相互作用的能力，將唾液酸或其活性部分鑑定為適宜於治療炎症、變態反應或相關的應答。例如，本文提供評價包括唾液酸酶和/或其催化活性部分的化合物或組合物是否減少受治療者的呼吸道中粘液的量的方法，所述評價通過以下來進行(a)將動物受治療者的毒蕈鹼受體與包括唾液酸和/或其催化活性部分的化合物或組合物相接觸；(b)向所述受治療者施用毒蕈鹼受體激動劑；(C)定量所述受治療者中的氣道阻力；(d)將在(C)中測量的所述氣道阻力水平與不存在與所述化合物或組合物的接觸時的氣道阻力相比較；(e)相對於不存在與所述化合物或組合物的接觸時的氣道阻力，鑑定所述化合物或組合物是否減少氣道阻力；和(f)如在(e)中確定的，如果所述化合物或組合物減少氣道阻力，將所述化合物或組合物評價為減少受治療者的呼吸道中粘液的量的化合物或組合物。所述方法在實施例3中示出。除非另外定義，本文所用的所有技術術語和科學術語具有與本發明所屬領域中的普通技術人員之一所通常理解的相同的含義。本文描述了用於本發明的方法和材料；本領域中已知的其他的適宜的方法和材料也可使用。材料、方法和例子僅為示例性的並非意在限制。本文所提到的所有出版物、專利申請、專利、序列、資料庫項目和其他參考文獻以其整體通過引用併入。在衝突的情況下，以本說明書包括定義為準。本發明的其他特徵和優點從以下的詳細描述和圖，以及權利要求將是明顯的。附圖簡述圖I顯示4個人類基因的GAG結合序列PF4，人類血小板因子4 ;IL8，人類白介素8 ；AT III,人類抗凝血酶III ;ApoE,人類載脂蛋白(apoprotein)E ;AAMP,人類脈管關聯遷移細胞蛋白；人類雙調蛋白。圖2是人類唾液酸酶NEU2和NEU4 (SEQ ID NO 8和9)之間的序列比較。圖3是比較細菌和真菌唾液酸酶的底物特異性的表格。圖4描繪編碼His6_Av⑶的本發明的構建體的核苷酸和胺基酸序列(SEQ ID NO 28和29)。用於克隆到pTrc99a中的NcoI和HindIII位點以粗體顯示。圖5描繪編碼AR-Av⑶的本發明的另一構建體的核苷酸和胺基酸序列(SEQ IDNO 18和19)。用於克隆到pTrc99a中的NcoI和HindIII位點以粗體顯示。圖6描繪編碼AR—G4S-AV⑶的本發明的另一構建體的核苷酸和胺基酸序列(SEQID NO 36和37)。用於克隆到pTrc99a中的NcoI和HindIII位點以粗體顯示。圖7A-B是顯示重組AR-Av⑶唾液酸酶融合蛋白的局部施用減少甲型流感(HlNl)病毒感染的雪貂的炎症應答的圖。圖7A顯示在感染之後指定的時間獲自感染的動物的鼻洗液樣品中的炎性細胞的總數。確定了感染的雪貂的無細胞鼻洗液樣品中的蛋白濃度。感染的雪貂用運載體處理(方形)或用從構建體#2製備的重組AR-AvCD唾液酸酶融合蛋白處理(三角形)。未感染的動物也用重組AR-AvCD唾液酸酶融合蛋白處理(菱形)。統計學上顯著的數值以*(P < 0. 05)和#(p < 0. 01)來標記。圖8提供顯示增強的呼吸間歇(Enhanced Pause) (PENH)的式和解釋的圖,其為用於在清醒無拘束的動物中測量支氣管收縮的參數。圖9提供顯示響應於OVA-氣溶膠的早期哮喘反應的圖。結果表示為算術平均值+ SEM0 *p < 0. 05，***p < 0. 001，利用 student』 s t_ 檢驗。

圖10提供顯示在切片當天豚鼠中的細胞總數的圖。結果表示為算術平均值+ SEM0 **p < 0. 01，***p < 0. 001，利用 student』 s t_ 檢驗。圖11提供顯示在切片當天在豚鼠BAL液中回收的巨噬細胞總數的圖。結果表示為算術平均值+SEM0 **p < 0. 01。圖12提供顯示在切片當天在豚鼠BAL液中回收的淋巴細胞總數的圖。結果表示為算術平均值土 SEM。*p < 0. 05。圖13提供顯示在切片當天在豚鼠BAL液中回收的嗜中性粒細胞總數的圖。結果表示為算術平均值土 SEM。*p < 0. 05，***p < 0. 001。圖14提供顯示在切片當天在豚鼠BAL液中回收的嗜曙紅細胞總數的圖。結果表示為算術平均值 +SEM0 *p < 0. 05，***p < 0. 001。圖15提供顯示在豚鼠中在早期和晚期哮喘反應時在唾液酸酶處理的作用下在Mch 48mg/mL時Penh的變化百分比的圖。圖16提供顯示在豚鼠中在早期和晚期哮喘反應時在唾液酸酶處理的作用下在一
圖17提供顯示在豚鼠中在早期和晚期哮喘反應時在唾液酸酶處理的作用下的血液嗜曙紅細胞的圖。圖18提供顯示在豚鼠中在早期和晚期哮喘反應時在唾液酸酶處理的作用下肺粘液的PAS染色的圖。圖19A-F提供肺粘液的PAS染色。
圖20提供顯示在豚鼠中在早期和晚期哮喘反應時在唾液酸酶處理的作用下對於嗜曙紅細胞的MBP免疫染色的圖。圖21A-B提供顯示在利用低劑量的DAS181鼻內處理的初次接受試驗的小鼠中減少的氣道阻力的圖(醋甲膽鹼攻擊的)。圖22提供顯示在利用低劑量的DAS181鼻內處理的初次接受試驗的小鼠中減少的氣道阻力的圖(醋甲膽鹼攻擊的)。圖23提供顯示在利用DAS181鼻內處理的初次接受試驗的小鼠中減少的氣道阻力的圖(卡巴膽鹼攻擊的)。圖24提供顯示在利用低劑量的DAS185鼻內處理的初次接受試驗的小鼠中的氣道阻力的圖(醋甲膽鹼攻擊的)。·圖25提供顯示DAS185介導的氣道阻力的減少的時程的圖(醋甲膽鹼攻擊的)。圖26提供顯示利用極低劑量的DAS181鼻內處理的初次接受試驗的小鼠中減少的氣道阻力的圖(醋甲膽鹼攻擊的)。不同的圖中同樣的參考符號表不同樣的兀素。詳細描述本公開內容提供，尤其是，美國專利申請第10/718，986號和第10/939，262號(二者均以其整體通過引用併入)中描述的化合物減少粘液的用途的新穎方法，例如，在在其呼吸道中具有增高的粘液水平的受治療者減少呼吸道中的粘液。在一些實施方案中，本公開內容提供用於在需要減少的粘液水平且不患有流感(例如，在治療時未感染流感)或哮喘的受治療者減少粘液(例如，粘液水平)的組合物和方法。在一些實施方案中，化合物可包括由NexBio，Inc.以化合物名稱DAS181和商標Fludase 生產的化合物(本文中提供為seq id no 2i)。dasisi是包括唾液酸酶催化結構域和錨定結構域的融合蛋白。本文所描述的實施例中的一些使用DAS181或包含DAS181的組合物。定義除非另外定義，本文所用的所有技術和科學術語具有與本發明所屬領域中的普通技術人員之一所通常理解的相同的含義。一般，本文所用的命名法和以下所描述的生產程序或實驗室程序是本領域中熟知的和常用的。對這些程序使用常規方法，比如在本領域中和多個通用參考文獻中所提供的那些。在術語以單數提供時，本發明人還考慮該術語的複數。在通過引用併入的參考文獻中所用的術語和定義存在差異時，本申請中所用的術語應具有本文指定的定義。除非另外指明，如貫穿本公開內容所用的，以下的術語應理解為具有以下的含義如本文所用的，「受治療者」包括考慮對其診斷、篩查、監測或治療的任何動物。動物包括哺乳動物諸如靈長類動物和家養的動物。示例性的靈長類是人類。患者指受治療者諸如罹患疾病狀況或其疾病病症待確定或其疾病病症的風險待確定的哺乳動物、靈長類、人類或家畜受治療者。在一些實施方案中，本文公開的方法可包括選擇需要減少的粘液水平且其未感染流感、副流感和/或呼吸道合胞病毒(RSV)中的一種或多種的受治療者。在一些情形下，術語受感染或感染可包括受治療者中流感和/或副流感病毒和/或RSV的存在。在一些情形下，術語受感染或感染可包括受治療者中活性的或複製的流感和/或副流感病毒和/或RSV的存在。在一些實施方案中，基於受治療者中(例如，來自受治療者的樣品中)流感和/或副流感病毒脫落和/或RSV脫落的存在或檢測可選擇具有活性的或複製的流感和/或副流感病毒和/或RSV感染的受治療者。在一些實施方案中，本文公開的方法可包括選擇需要減少的粘液水平的受治療者，其中所述受治療者具有潛伏性的流感、副流感和/或RSV感染。如本文所用的「動物模型」意為在其解剖學、生理學或(例如，對病原體或過敏原的)應答方面充分地模擬、相似於或再現感興趣的疾病或病症，從而可用於可外推到所述感興趣的疾病或病症的醫學研究中(例如，篩查診斷劑或治療劑；測量化合物或組合物的治療效力，等)的動物。例如豚鼠和小鼠可作為動物模型以模擬與哮喘相關的炎症和/或變應性應答，如於實施例I和2中分別所示。小鼠也可作為動物模型以研究毒蕈鹼受體與其激動劑之間的相互作用，和諸如本文所提供的化合物或組合物的劑對其的破壞(參見實 施例3)。「病原體」可以是可感染細胞、組織或生物體的任何病毒或微生物。病原體可以是病毒、細菌或原生動物。「靶細胞」是可被病原體感染的任何細胞或可與炎性細胞相互作用的任何細胞，或是作為通過重組病毒轉移的外源基因的預期目的地的宿主細胞。「炎性細胞」是進行或參與免疫系統的炎症應答的細胞。炎性細胞包括B淋巴細胞、T淋巴細胞、巨噬細胞、嗜鹼性粒細胞、嗜曙紅細胞、肥大細胞、NK細胞、單核細胞和嗜中性粒細胞。「可抑制炎性細胞的粘附或功能的胞外活性」是可阻止炎性細胞接觸靶細胞並影響該靶細胞的正常生理狀況的任何活性。「可將所述至少一種治療性結構域錨定於靶細胞的膜的結構域」也稱作「胞外錨定結構域」或簡單地，「錨定結構域」指可穩定地結合在細胞表面的外部或其上的、或與細胞的表面非常接近的部分的化學實體。胞外錨定結構域可可逆地或不可逆地與一個或多個部分連接，比如一個或多個治療性結構域，並從而導致一個或多個連繫的治療性部分保留在真核細胞的外表面或與真核細胞的外表面非常接近。胞外錨定結構域可結合靶細胞的表面上的至少一種分子或可結合被發現與靶細胞的表面密切結合的至少一種分子。例如，胞外錨定結構域可結合與靶細胞的細胞膜共價地或非共價地締合的分子，或可結合存在於靶細胞周圍的胞外基質中的分子。胞外錨定結構域可以是肽、多肽、或蛋白，且還可包括任何其他類型的化學實體，包括一種或多種其他的蛋白、多肽、或肽、核酸、肽核酸、核酸類似物、核苷酸、核苷酸類似物、小有機分子、聚合物、脂質、類固醇、脂肪酸、碳水化合物或這些中任何的組合。如本文所用的，當蛋白序列或肽序列與參考序列相同，或包括一個或多個胺基酸缺失、一個或多個另外的胺基酸、或一個或多個保守性胺基酸置換，並保留與參考序列相同或基本上相同的活性時，其是與參考序列「基本上同源的」。保守性置換可定義為在以下5組其中之一中互換I.小的、脂肪族的、非極性的或微弱極性的殘基:Ala、Ser、Thr、Pro、GlyII.極性的、帶負電荷的殘基和其醯胺Asp、Asn、Glu、Gln
III.極性的、帶正電荷的殘基His、Arg、LysIV.大的、脂肪族的非極性殘基Met、Leu、lie、Val.CysV.大的芳香族殘基Phe、Try、Trp在上述各組中，認為以下的置換是「高度保守的」:Asp/Glu、His/Arg/Lys、Phe/Tyr/Trp和Met/Leu/Ile/Val。半保守性置換被定義為上述組(I)-(IV)中的兩個之間的互換，限定於包括以上的(I)、(II)和(III)的大組(A)，或限定於包括以上的(IV)和(V)的大組(B)。而且，本申請中具體指定疏水性胺基酸的地方，其指胺基酸Ala、Gly, Pro、Met、Leu、lie、Val、Cys> Phe 和 Trp,而親水性胺基酸指 Ser、Thr、Asp、Asn、Glu、Gin、His、Arg、Lys 和 Tyr。 「唾液酸酶」是可從底物分子上移除唾液酸殘基的酶。唾液酸酶(N-乙醯神經氨醯糖基水解酶，EC 3.2. I. 18)是從唾液酸-糖綴合物中水解移除唾液酸殘基的一組酶。唾液酸是具有9-碳骨架的a-酮酸，通常見於與糖蛋白和糖脂連繫的寡糖鏈的最外部位置。唾液酸的主要類型之一是N-乙醯神經氨酸(Neu5Ac)，其是大多數其他類型的生物合成前體。底物分子，作為非限制性例子，可以是寡糖、多糖、糖蛋白、神經節苷脂或合成的分子。例如，唾液酸酶可裂解在唾液酸殘基和底物分子的其餘部分之間具有a (2，3)_Gal、a (2,6)-Gal或a (2，8)-Gal連接的鍵。唾液酸酶還可裂解唾液酸殘基和底物分子的其餘部分之間的任何或所有的連接。自然界中存在Neu5Ac和碳水化合物側鏈的倒數第二個半乳糖殘基之間的兩種主要的連接，Neu5Ac a (2，3)-Gal 和 Neu5Ac a (2，6)-Gal。Neu5Ac a (2, 3)-Gal和Neu5Ac a (2,6) -Gal分子可被流感病毒識別為受體，雖然人類病毒表現為偏好Neu5Aca (2，6)-6&1，禽類和馬病毒主要識別他1154( a(2，3)_Gal。唾液酸酶可以是天然存在的唾液酸酶、工程化的唾液酸酶(比如，但不限於其胺基酸序列基於天然存在的唾液酸酶的序列的唾液酸酶，所述胺基酸序列包括與天然存在的唾液酸酶的序列基本上同源的序列)。如本文所用的，「唾液酸酶」還可以意為天然存在的唾液酸酶的活性部分、或包括基於天然存在的唾液酸酶的活性部分的序列的肽或蛋白。「融合蛋白」是包括來自至少兩種不同的來源的胺基酸序列的蛋白。融合蛋白可包括來源於天然存在的蛋白或與天然存在的蛋白的全部或部分基本上同源的胺基酸序列，且還可包括來源於不同的天然存在的蛋白或與不同的天然存在的蛋白的全部或部分基本上同源的I個至非常大的數目的胺基酸。可替代地，融合蛋白可包括來源於天然存在的蛋白或與天然存在的蛋白的全部或部分基本上同源的胺基酸序列，且還可包括作為合成序列的從I個到非常大的數目的胺基酸。「唾液酸酶催化結構域蛋白」是包括唾液酸酶催化結構域或包括與唾液酸酶催化結構域基本上同源的胺基酸序列，但不包括催化結構域所來源的唾液酸酶的完整的胺基酸序列的蛋白，其中所述唾液酸酶催化結構域蛋白保留與催化結構域所來源的完整的唾液酸酶基本上相同的活性。唾液酸酶催化結構域蛋白可包括非來源於唾液酸酶的胺基酸序列，但不是必須的。唾液酸酶催化結構域蛋白可包括來源於一種或多種其他已知蛋白的胺基酸序列或與一種或多種其他已知蛋白的胺基酸序列基本上同源的胺基酸序列，或可包括非來源於其他已知蛋白的胺基酸序列或與其他已知蛋白的胺基酸序列基本上同源的一個或多個胺基酸。「治療有效量」意為當以單一劑型向受治療者施用組合物或化合物時，期望的治療性、預防性或其他生物作用或應答所需的組合物或化合物的量。組合物或化合物的特定的量可根據諸如組合物或化合物的性質、所治療的病症的性質、受治療者的年齡和尺寸的條件而廣泛不同。「治療」意為病症、疾患或疾病中的一種或多種症狀在其中被改善或另外被有利地改變的任何方式。治療還包括本文的組合物或化合物的任何藥物用途，比如用於減少呼吸道中的粘液。
「呼吸道」意為從鼻到肺泡的空氣通道，包括鼻、咽喉、咽、喉、氣管和支氣管，且其還包括肺，且有時被醫師稱作呼吸系統。「吸入器」意為經過鼻或嘴以被吸入(被自然呼吸或機械力推動到肺中)的噴霧或乾粉的形式施用藥物的裝置，且包括但不限於，被動的或主動的通風器(機械的裝有或裝有氣管內插管)、噴霧器、乾粉吸入器、刻度劑量吸入器和加壓刻度劑量吸入器。「吸入劑」是經過鼻或嘴吸入的任何物質。「減少粘液的量」意為當與施用本文所描述的組合物或化合物之前的量相比較時，減少呼吸道中的粘液的量的全部或一些，一般減少多於所述粘液的量的5 %、10 %、20 %、30%,40%,50%,60%,70%,80%,85%,90%,91 %,92%,93%,94%,95%,96%,97%,98%或99%或更多。「減少粘液的量」還可意為以由醫療保健醫生利用可用於該觀察的任何醫療器具諸如例如通過聽診、通過MRI或其他射線照相研究、通過用支氣管鏡或其他可視化裝置直接觀察或通過測量隨時間推移的患者粘液可觀察到的量減少粘液的量。「減少粘液的量」還可意為以由患者或受治療者自身利用自我報告或自我觀察諸如，例如，監測隨時間推移咳出的或吞咽的粘液的量，或通過主觀地觀察隨時間推移其肺中的擁塞感而可觀察到的量減少粘液的量。「限制粘液的量的增加」意為在施用本文所描述的組合物和化合物之後呼吸道中的粘液的量不會增加超過當未施用其時的量。「限制粘液的量的增加」還意為施用本文所描述的組合物和化合物之後呼吸道中的粘液的量不會在所述組合物和化合物的施用之後增高。「限制粘液的量的增加」還可意為在施用化合物或組合物時以由醫療保健醫生利用可用於該觀察的任何醫療器具和分析系統諸如，例如，通過聽診、通過MRI或其他射線照相研究、通過用支氣管鏡或其他可視化裝置直接觀察或通過測量隨時間推移的患者痰液可觀察到或可確定的量限制增加超過患者的基線。「限制粘液的量的增加」還可意為在施用化合物或組合物時以由患者或受治療者自身利用自我報告或自我觀察諸如，例如，監測隨時間推移咳出的或吞咽的粘液的量，或通過主觀地觀察隨時間推移其肺中的擁塞感而可觀察到的量限制增加超過患者的基線。如本文所用的「賦形劑」意為單獨地或組合地用作藥物的活性成分的載體的一種或多種無活性的物質或化合物。如本文所用的「賦形劑」還可意為包括在藥物組合物中以提高其有利的作用或與活性成分具有協同作用的一種或多種物質或化合物。基於肽或蛋白的化合物本發明包括基於肽或蛋白的化合物，所述基於肽或蛋白的化合物包括可將所述化合物錨定於真核細胞的膜的至少一個結構域和作為治療性結構域的至少一個另外的結構域。「基於肽或蛋白的」化合物意為化合物的兩個主要的結構域具有胺基酸框架，其中胺基酸通過肽鍵連接。基於肽或蛋白的化合物還可具有與胺基酸框架或骨架連繫的其他化學化合物或基團，包括有助於錨定結構域的錨定活性的部分，或有助於治療性結構域的治療活性的部分。例如，本發明所用的基於蛋白的治療物可包括化合物和分子諸如但不限於，碳水化合物、脂肪酸、脂質、類固醇、核苷酸、核苷酸類似物、核酸分子、核酸類似物、肽核酸分子、小有機分子或甚至聚合物。本發明的基於蛋白的治療物還可包括修飾的或非天然存在的胺基酸。化合物的非胺基酸部分可用於任何目的，包括但不限於協助化合物的純化、改善化合物的(比如在治療性製劑中的)溶解度或分布，將化合物的結構域或化學部分與化合物連接，有助於化合物的二維結構或三維結構，增加化合物的總尺寸，增高化合物的穩定性和有助於化合物的錨定活性或治療活性。本發明的基於肽或蛋白的化合物還可包括除包括錨定結構域或治療性結構域的那些之外的蛋白或肽序列。另外的蛋白序列可用於任何目的，包括但不限於上述的任何目的(協助化合物的純化、改善化合物的溶解度或分布，將化合物的結構域或化學部分與化合物連接，有助於化合物的二維結構或三維結構，增加化合物的總尺寸，增高化合物的穩定性或有助於化合物的錨定活性或治療活性)。任何另外的蛋白序列或胺基酸序列可以作為包括一個或多個錨定結構域和一個或多個治療性結構域的單一多肽或蛋白鏈的部分，而蛋白序列的任何可實行的排列在本發明的範圍之中。 錨定結構域和治療性結構域可以允許化合物在靶細胞膜處或在靶細胞膜附近結合的任何適當的方式來排列。化合物可具有至少一個基於蛋白或肽的錨定結構域和至少一個基於肽或蛋白的治療性結構域。在該情況中，結構域可以任意順序沿肽骨架線性地排列。錨定結構域可以在治療性結構域的N末端，或可以在治療性結構域的C末端。還可能地是具有在每端以至少一個錨定結構域為側翼的一個或多個治療性結構域。可選地，一個或多個錨定結構域可在每端以至少一個治療性結構域為側翼。可任選地使用化學連接物或肽連接物來結合化合物的結構域中的一些或全部。還可能地是使結構域以非線性分支排列。例如，可將治療性結構域與作為多肽鏈的部分的胺基酸的衍生化的側鏈連繫，所述多肽鏈還包括錨定結構域或與錨定結構域相連接。本發明的化合物可具有一個以上的錨定結構域。在化合物具有一個以上的錨定結構域的情況中，錨定結構域可以是相同的或不同的。本發明中所用的化合物可具有一個以上的治療性結構域。在化合物具有一個以上的治療性結構域的情況中，治療性結構域可以是相同的或不同的。化合物包括多個錨定結構域時，錨定結構域可串聯排列(具有或沒有連接物)或在其他結構域諸如治療性結構域的交替側。化合物包括多個治療性結構域時，治療性結構域可串聯排列(具有或沒有連接物)或在其他結構域諸如但不限於錨定結構域的交替側。 本發明的基於肽或蛋白的化合物可通過任何適當的方式來生成，包括純化天然存在的蛋白，任選地蛋白水解裂解蛋白以獲得期望的功能結構域，和將功能結構域與其他功能結構域綴合。肽還可以是化學合成的，和任選地與其他肽或化學部分化學綴合。本發明的基於肽或蛋白的化合物可通過工程化核酸構建體以編碼共同在連續的多肽中的至少一個錨定結構域和至少一個治療性結構域(具有或沒有核酸連接物)來生成。在一些實施方案中，該核酸構建體具有適當的表達序列，可被轉染到原核細胞或真核細胞中，且可通過該細胞表達基於蛋白的治療性化合物並將其純化。純化之後，可任選地將任何期望的化學部分與基於肽或蛋白的化合物綴合。在一些情況中，可關於其進行期望的翻譯後修飾(比如，但不限於，糖基化)的能力選擇細胞系以表達基於蛋白的治療物。可設計大量構建體並檢驗其蛋白產物的期望的活性(比如，例如，錨定結構域的結合活性，或治療性結構域的結合、催化或抑制活性)。錨定結構域如本文所用的，「胞外錨定結構域」或「錨定結構域」是可穩定地結合靶細胞的外表面處的或靶細胞的外表面上的或與靶細胞的外表面非常接近的實體的任何部分。錨定結構域作用於將本發明所用的化合物保持在靶細胞的外表面處或靶細胞的外表面附近。胞外錨定結構域可結合I)表達於靶細胞的表面上的分子、或表達於靶細胞的表面上的分子的部分、結構域或表位，2)與表達於靶細胞的表面上的分子連繫的化學實體，或3)靶細胞周圍的胞外基質的分子。 錨定結構域可以是肽或蛋白結構域(包括修飾的或衍生化的肽或蛋白結構域)，或包括偶聯於肽或蛋白的部分。偶聯於肽或蛋白的部分可以是可有助於錨定結構域與靶細胞表面處或靶細胞表面附近的實體結合的任何類型的分子，和在一些實施方案中是有機分子，比如，例如，核酸、肽核酸、核酸類似物、核苷酸、核苷酸類似物、小有機分子、聚合物、月旨質、類固醇、脂肪酸、碳水化合物或這些中的任一的任何組合。錨定結構域所結合的分子、複合物、結構域或表位對於靶細胞可以是特異性的或可以是非特異性的。例如，錨定結構域可結合存在於靶細胞上的或與靶細胞非常接近的分子上的表位，並且結合也發生在除靶細胞的鄰近之外的位點。然而，在許多情況中，本發明的治療性化合物的局部遞送將使其發生主要限於靶細胞的表面。在其他情況中，錨定結構域所結合的分子、複合物、部分、結構域或表位對於靶組織或靶細胞類型可以是特異性的。靶組織或靶細胞類型包括動物體或人體中病原體侵入或在其中擴增的位點。例如，靶細胞可以是可被病原體感染的內皮細胞。本發明中所用的組合物可包括錨定結構域，所述錨定結構域可結合細胞表面表位，例如，對於內皮細胞類型特異性的表位。在另一實例中，靶細胞可以是上皮細胞且本發明的組合物可結合存在於許多上皮細胞類型的細胞表面上的或存在於不同類型的上皮細胞的胞外基質中的表位。在該情況中，組合物的局部遞送可將其定位限於作為病原體的靶標的上皮細胞的位點。本發明中所用的化合物可具有可在上皮細胞的表面處或在上皮細胞的表面附近結合的一個或多個錨定結構域。例如，與肝素密切相關的硫酸乙醯肝素，是普遍存在於包括呼吸道上皮表面的細胞膜上的糖胺聚糖(GAG)的類型。許多蛋白與肝素/硫酸乙醯肝素特異性地結合，且這些蛋白中的GAG結合序列已被鑑定(Meyer, FA, King, M和Gelman, RA. (1975) Biochimica et Biophysica Acta 392:223-232 ；Schauer, S.編，第 233頁.Sialic Acids Chemistry,Metabolism and Function. Springer-Verlag, 1982)。例如，已顯示以下對肝素具有非常高的親和力(在納摩爾範圍中)人類血小板因子4(PF4)的GAG結合序列(SEQ ID NO :2)、人類白介素8(IL8)的GAG結合序列(SEQ ID N0:3)、人類抗凝血酶III (AT III)的GAG結合序列(SEQ ID NO 4)、人類載脂蛋白E(ApoE)的GAG結合序列(SEQ ID NO :5)、人類脈管關聯遷移細胞蛋白(AAMP)的GAG結合序列(SEQ ID NO :6)、或人類雙調蛋白的 GAG 結合序列(SEQ ID NO 7)(圖 I) (Lee, MK 和 Lander, AD. (1991) ProNatl Acad Sci USA 88 :2768-2772 ；Goger,B,Halden,Y,Rek,A,Mosl,R,Pye,D. Gallagher,J 和 Kungl，AJ. (2002)Biochem. 41 :1640-1646 ；ffitt, DP 和 LanderAD (1994) Curr Bio 4 394-400 ；ffeisgraber, KH, Rail, SC, Mahley, Rff, Milne, Rff 和 Marcel， Y. (1986)J BioChem261 :2068-2076)。這些蛋白的GAG結合序列不同於其受體結合序列，因而其不會誘導與全長蛋白或受體結合結構域相關的生物活性。這些序列、或已鑑定的其他序列、或將來被鑑定為肝素/硫酸乙醯肝素結合序列的其他序列、或與被鑑定的具有肝素/硫酸乙醯肝素結合活性的肝素/硫酸乙醯肝素結合序列基本上同源的序列，可用作本發明中所用的化合物中的上皮-錨定結構域。錨定結構域可結合對特定的物種的靶細胞類型特異性的部分，或可結合發現於一種以上的物種的靶細胞類型中的部分。
治療性結構域本發明中所用的化合物包括至少一個治療性結構域或活性部分，那些術語在本文可互換使用。治療活性，可以是作為非限制性例子的結合活性、催化活性或抑制活性。治療性結構域可修飾或抑制靶細胞或靶生物體的功能。化合物的活性部分具有治療活性。例如，唾液酸酶催化結構域或活性部分可以是其治療性結構域。治療性結構域可在胞外起作用，意為其感染預防、炎症應答調節或轉導增強活性發生在靶細胞表面或發生在靶細胞周圍的最接近的區域，包括胞外基質、胞內空間或組織的內腔空間中的位點。治療性結構域可以是肽或蛋白結構域(包括修飾的或衍生化的肽或蛋白結構域)，或包括偶聯於肽或蛋白的部分。偶聯於肽或蛋白的部分可以是任何類型的分子，和在一些實施方案中是有機分子，比如，例如，核酸、肽核酸、核酸類似物、核苷酸、核苷酸類似物、小有機分子、聚合物、脂質、類固醇、脂肪酸、碳水化合物或這些中的任一的任何組合。治療性結構域可以是合成的肽或多肽，或可包括可與肽或多肽綴合的合成的分子，可以是天然存在的肽或蛋白，或天然存在的蛋白的結構域。治療性結構域還可以是與天然存在的肽或蛋白基本上同源的肽或蛋白。連接物本發明中所用的化合物可任選地包括可連接化合物的結構域的一種或多種連接物。連接物可用來提供化合物的結構域的最佳間隔或摺疊。通過連接物連接的化合物的結構域可以是治療性結構域、錨定結構域、或提供另外的功能諸如增強化合物穩定性、協助純化等的化合物的任何其他結構域或部分。用於連接本發明的化合物的結構域的連接物可以是化學連接物或胺基酸或肽連接物。化合物包括一個以上連接物時，連接物可以是相同的或不同的。化合物包括一個以上連接物時，連接物可以是相同或不同長度的。不同的組成、極性、反應性、長度、柔性和可裂性的許多化學連接物是有機化學領域中已知的。優選的連接物包括胺基酸連接物或肽連接物。肽連接物是本領域中熟知的。連接物的一些實施方案的長度在I個和約100個胺基酸之間，和長度在I個和約30個胺基酸之間，然而長度不是本發明的化合物的連接物的限制。可選擇連接物胺基酸序列而使其不幹擾本發明中所用的化合物和組合物的粘液減少和/或抗炎活性。連接物的一些實施方案是包括胺基酸甘氨酸的那些連接物。例如，具有以下序列的連接物(GGGGS(SEQ ID NO:10))n，其中n是I和20之間，或I和12之間的整數，其可用於連接本發明中所用的治療性化合物的結構域。
包括至少一個錨定結構域和至少一個催化活性的組合物在一些方面，本發明可使用具有具酶活性的治療性結構域的化合物。酶活性可以是移除、降解或修飾主分子或複合物的催化活性。在一些實施方案中，主分子或複合物可通過本發明的化合物的酶活性在靶細胞的表面上、表面處或表面附近被移除、降解或修飾。本發明中所用的化合物可具有，例如，以下結構之一(錨定結構域)n-[連接物]-(酶活性)n(n = I、2、3或更大)或(酶活性)n(n= 1、2、3或更大)_[連接物]_(錨定結構域)n,其中連接物是任選的。
·
酶活性可以是肽或多肽的單體形式，或可以是直接相連的或之間具有間隔序列的相同的多肽的多個拷貝。多肽或肽可以直接相連或經由包括肽連接物序列的間隔物相連。錨定結構域可以是可結合靶細胞的表面或在靶細胞的表面附近結合的任何肽或多肽。在一個實施方案中，治療性結構域包括可在上皮細胞的表面上消除或極大地減少唾液酸的水平的唾液酸酶。治療性結構域可包括完整的唾液酸酶蛋白或其活性部分，其中其活性部分保留了進行唾液酸酶蛋白的催化功能的能力(例如，裂解唾液酸殘基)。唾液酸介導炎性細胞和靶細胞之間的細胞粘附和相互作用。因此，利用唾液酸酶處理呼吸道上皮細胞的表面可阻止炎性細胞募集到氣道表面，且因此可治療包括哮喘和變應性鼻炎的變應性反應。其還非預期地導致減少在其呼吸道中具有增高的粘液水平的受治療者的呼吸道中的粘液的量，和在受治療者的呼吸道中限制粘液的量的增加超過那些受治療者的呼吸道中的粘液的基線。在考慮用於本文所描述的方法中的唾液酸酶之中為大的細菌唾液酸酶，其可降解受體唾液酸Neu5Ac a (2，6)_Gal和Neu5Ac a (2，3)-Gal。例如，可使用來自產氣莢膜梭菌(Clostridium perfringens) (Genbank 登錄號 X87369)、粘放線菌(Actinomycesviscosus)、產服節桿菌(Arthrobacter ureafaciens)或產綠小單胞菌(Micromonosporaviridifaciens) (Genbank登錄號D01045)的細菌唾液酸酶。本發明的化合物的治療性結構域可包括大的細菌唾液酸酶的胺基酸序列的全部或部分，或可包括與大的細菌唾液酸酶的胺基酸序列的全部或部分基本上同源的胺基酸序列。在一個優選的實施方案中，治療性結構域包括由粘放線菌編碼的唾液酸酶，比如SEQ ID NO 12的唾液酸酶，或比如與SEQ IDNO : 12基本上同源的唾液酸酶序列。在另一個優選的實施方案中，治療性結構域包括從SEQID NO 12的胺基酸274延伸至胺基酸667的粘放線菌唾液酸酶催化結構域，或基本上同源的序列。考慮用於本文所描述的方法中的其他唾液酸酶是人類唾液酸酶，諸如由基因NEU2 (SEQ ID NO 8 ;Genbank 登錄號 Y16535 ；Monti, E, Preti, Rossi, E.，Ballabio, A 和Borsani G. (1999) Genomics 57:137-143)所編碼的和由基因 NEU4 (SEQ ID NO 9 ；Genbank登錄號 NM080741 ；Monti, E, Preti, A, Venerando, B 和 Borsani, G. (2002)Neurochem Res27 =646-663)所編碼的那些人類唾液酸酶(圖2)。本發明中所用的化合物的治療性結構域可包括人類唾液酸酶的胺基酸序列的全部或部分，或可包括與人類唾液酸酶的胺基酸序列的全部或部分基本上同源的胺基酸序列。當治療性結構域包括天然存在的唾液酸酶的胺基酸序列的部分，或與天然存在的唾液酸酶的胺基酸序列的部分基本上同源的序列時，所述部分可具有與人類唾液酸酶基本上相同的活性。在一些實施方案中，用於在呼吸道中減少增高的粘液水平的化合物可具有在上皮細胞的表面處或在上皮 細胞的表面附近結合的一個或錨定結構域。在一些實施方案中，上皮錨定結構域是來自人類蛋白的GAG結合序列，比如，例如，人類血小板因子4 (PF4)的GAG結合胺基酸序列(SEQ ID N0:2)、人類白介素8(IL8)的GAG結合胺基酸序列(SEQ IDNO: 3)、人類抗血凝酶III (AT III)的GAG結合胺基酸序列(SEQ ID NO :4)、人類載脂蛋白E(ApoE)的GAG結合胺基酸序列(SEQ ID NO :5)、人類脈管關聯遷移細胞蛋白(AAMP)的GAG結合胺基酸序列(SEQ ID NO :6)、和人類雙調蛋白的GAG結合胺基酸序列(SEQ ID NO 7)(圖I)。上皮錨定結構域還可與天然存在的GAG結合序列比如圖I中所列的那些基本上同源。所述化合物可配製為鼻施用、氣管施用、支氣管施用、口腔施用或局部施用，或可配製為可注射的溶液或作為滴眼劑，或配製為溶液或乾粉並利用吸入器來吸入。包括所述化合物的藥物組合物可用於治療或預防變態反應或炎症應答。而且，本文已顯示所述化合物在在其呼吸道中具有增高的粘液水平的受治療者的呼吸道中減少粘液的量，和在受治療者的呼吸道中限制粘液的量的增加超過其呼吸道中的粘液的基線。因此，所述化合物可用作治療性處理以在在其呼吸道中具有增高的粘液水平的受治療者的呼吸道中減少粘液的量，或用作預防性處理以在受治療者的呼吸道中限制粘液的量的增加超過其呼吸道中的粘液的基線。由於其對呼吸道中粘液的作用，這些化合物還可用於在其呼吸道中具有增高的粘液水平或處於在其呼吸道中具有增高的粘液水平的風險的受治療者中預防、治療或改善以下的影響慢性阻塞性肺病(COPD)、支氣管炎、支氣管擴張、囊性纖維化(CF)、血管炎、粘液栓塞、韋格納氏肉芽腫病、肺炎、結核病、涉及肺或呼吸道的癌症、卡塔格納症候群、楊氏症候群、慢性竇肺感染、a I-抗胰蛋白酶缺陷、原發性免疫缺陷、獲得性免疫缺陷症候群、機會感染、感染狀態、感染後狀態、感冒、運動誘發粘液分泌過多、炎性腸病、潰瘍性結腸炎、克羅恩病、呼吸道感染、呼吸道阻塞、毒氣的吸入或吸氣、肺吸入或酒精中毒。還在本發明的範圍中的是在錨定結構域不存在的情況下，使用包括人類唾液酸酶的化合物或組合物，所述人類唾液酸酶比如本文所描述的那些人類唾液酸酶中的任一種、或其活性部分、或與唾液酸酶基本上同源的化合物，(a)以在呼吸道中治療或預防變應性應答和炎症應答，(b)以在在其呼吸道中具有增高的粘液水平的受治療者的呼吸道中減少粘液的量，(C)以在受治療者的呼吸道中限制粘液的量的增加超過其呼吸道中的粘液的基線，和/或(d)以在在其呼吸道中具有增高的粘液水平或處於在其呼吸道中具有增高的粘液水平的風險的受治療者中預防、治療或改善以下的影響慢性阻塞性肺病(COPD)、支氣管炎、支氣管擴張、囊性纖維化(CF)、血管炎、粘液栓塞、韋格納氏肉芽腫病、肺炎、結核病、涉及肺或呼吸道的癌症、卡塔格納症候群、楊氏症候群、慢性竇肺感染、a I-抗胰蛋白酶缺陷、原發性免疫缺陷、獲得性免疫缺陷症候群、機會感染、感染狀態、感染後狀態、感冒、運動誘發粘液分泌過多、炎性腸病、潰瘍性結腸炎、克羅恩病、呼吸道感染、呼吸道阻塞、毒氣的吸入或吸氣、肺吸入或酒精中毒。本發明認識到呼吸道中的增高的粘液水平可通過使用唾液酸酶或唾液酸酶的活性部分來減少，且所述唾液酸酶或其活性部分可任選地通過遺傳工程或化學工程或通過藥物配製來改變以改善其半衰期或在呼吸道上皮處的保留。這些化合物和藥物組合物可作為鼻噴霧遞送到上呼吸道，或作為吸入劑利用吸入器遞送到呼吸道。本文所描述的化合物可配製為包括單獨地或多種組合地多種另外的化合物的藥物組合物，所述另外的化合物比如Na2S04、MgSO4, CaCl2、組氨酸、組氨酸鹽酸鹽和海藻糖或它們的類似物。這些另外的化合物可包括在藥物組合物中以用作賦形劑或用作提供另外的有利作用的活性成分。包括至少一個唾液酸酶活性的治療性組合物本發明包括使用包括至少一種唾液酸酶活性的治療性化合物和組合物的方法。唾液酸酶活性可以是分離自任何來源的唾液酸酶，比如，例如，細菌或哺乳動物來源，或可以是與天然存在的唾液酸酶的至少一部分基本上同源的重組蛋白。在一些實施方案中，唾液酸酶是可降解受體唾液酸Neu5Ac a (2，6)_6&1和他11 540 a (2，3)-Gal的大的細菌唾液酸酶。例如，可使用來自產氣莢膜梭菌(Genbank登錄號X87369)、粘放線菌(Genbank登錄號L06898)、產脲節桿菌或產綠小單胞菌(Genbank登錄號D01045)的細菌唾液酸酶或基本上同源的蛋白。例如，本發明中所用的治療化合物和組合物可包括大的細菌唾液酸酶，或可包括具有大的細菌唾液酸酶的胺基酸序列的蛋白，或可包括與大的細菌唾液酸酶的胺基酸序列基本上同源的胺基酸序列。可用於本發明中的藥物組合物包括粘放線菌唾液酸酶(SEQ IDNO 12),或包括與粘放線菌唾液酸酶基本上同源的蛋白。可用於本文所描述的組合物、化合物和方法中的其他唾液酸酶是人類唾液酸酶，諸如由基因 NEU2(SEQ ID NO 8 ;Genbank 登錄號 Y16535 ；Monti, E, Preti, Rossi, E.，Ballabio，A 和 Borsani G. (1999)Genomics 57:137-143)和 NEU4(SEQ ID NO 9 ；Genbank登錄號 NM080741 ；Monti, E, Preti, A, Venerando, B 和 Borsani, G. (2002)Neurochem Res27 :646-663)所編碼的那些人類唾液酸酶(圖2)。本發明的化合物的治療性結構域可包括與人類唾液酸酶的胺基酸序列基本上同源的人類唾液酸酶蛋白，或可包括與人類唾液酸酶的胺基酸序列的全部或部分基本上同源的胺基酸序列。當治療性結構域包括天然存在的唾液酸酶的胺基酸序列的部分，或與天然存在的唾液酸酶的胺基酸序列的部分基本上同源的序列時，所述部分可具有與人類唾液酸酶，例如，唾液酸酶的活性部分，大體上相同的活性。一般,可使用可在呼吸道上皮細胞有效地降解受體唾液酸Neu5Ac a (2,6)_Gal和Neu5Ac a (2，3)-Gal兩者的唾液酸酶。唾液酸酶發現於較高級的真核生物以及一些主要是病原體微生物中，包括病毒、細菌和原生動物。病毒唾液酸酶和細菌唾液酸酶已被良好表徵，且已確定了它們中的一些的三維結構(CrennelI, SJ, Garman, E, Laver, G, Vimr, E和 Taylor, G. (1994) Structure 2 :535-544 ； Janakiraman, MN, White, CL, Laver, WG, Air,GM 和 Luo, M. (1994)Biochemistry 33 :8172-8179 ；Pshezhetsky, A, Richard, C, Michaud,L, Igdoura, S, Wang, S, Elsliger, M, Qu, J, Leclerc, D, Gravel, R, Dallaire, L 和 Potier,M. (1997)Nature Genet 15:316-320)。近年來也已克隆了一些人類唾液酸酶(Milner，CM, Smith, SV, Carrillo MB, Taylor, GL, Hollinshead, M 和 Campbell, RD. (1997)J BioChem 272 :4549-4558 ；Monti, E, Preti, A, Nesti, C, Ballabio, A 和 Borsani G.1999.Glycobiol 9 1313-1321 ；ffada, T, Yoshikawa, Y, Tokuyama, S, Kuwabara, M, Akita, H和Miyagi, T. (1999) Biochem Biophy Res Communi 261 :21-27 ；Monti, E, Bassi, MT, Papini,N, Riboni, M, Manzoni, M, Veneranodo, B, Croci, G, Preti, A, Ballabio, A, Tettamanti, G和Borsani，G. (2000)Bichem J 349:343-351)。還已克隆了含有唾液酸酶的活性部分的DAS181。所表徵的所有唾液酸酶在氨基末端部分共有4個胺基酸基序，隨後是Asp盒基序，其根據蛋白的不同重複 3 至 5 次。(Monti, E, Bassi, MT, Papini, N, Riboni, M, Manzoni,M, Veneranodo, B, Croci, G. Preti, A, Ballabio, A, Tettamanti, G 和 Borsani, G. (2000)Bichem J 349 :343-351 ；Copley, RR, Russell, RB 和 Ponting, CP. (2001)Protein Sci 10 285-292)。雖然唾液酸酶超家族的總體胺基酸同一性是相對低的，為約20-30%，分子的總體摺疊尤其是催化胺基酸，是顯著相似的(Wada, T, Yoshikawa, Y, Tokuyama, S, Kuwabara, M,Akita, H 和 Miyagi, T. (1999)Biochem Biophy Res Communi 261 :21-27 ；Monti, E, Bassi,MT, Papini, N, Riboni, M, Manzoni, M, Veneranodo, B, Croci, G, Preti, A, Ballabio, A,Tettamanti, G 和 Borsani, G. (2000)Bichem J349 :343-351 ；Copley, RR, Russell, RB 和Ponting, CP. (2001)Protein ScilO :285-292)。一般將唾液酸酶分成兩個種類「小」唾液酸酶具有約42kDa的分子量且最大活性不需要二價金屬離子；「大」唾液酸酶具有大於65kDa的分子量並且活性可能需要二價金 屬離子(Wada, T, Yoshikawa, Y, Tokuyama, S, Kuwabara, M, Akita, H 和 Miyagi, T. (1999)Biochem Biophy Res Communi261 :21-27 ；Monti, E, Bassi, MT, Papini, N, Riboni, M,Manzoni, M, Veneranodo, B, Croci, G, Preti, A, Ballabio, A, Tettamanti, G 和 Borsani,G. (2000)Bichem J 349 :343-351 ；Copley, RR, Russell, RB 和 Ponting, CP. (2001)ProteinSci 10 :285-292)。已純化了 15種以上的唾液酸酶蛋白，並且它們在底物特異性和酶動力學方面彼此差異很大。在大多數天然底物的情況中，大的細菌唾液酸酶可有效地在(a ,2-6)鍵和(a ,2-3)鍵裂解唾液酸(圖 4 ；Vimr,DR. (1994)Trends Microbiol 2 :271-277 ；Drzeniek,R. (1973)Histochem J 5 :271-290 ；Roggentin, P, Kleineidam, RG 和 Schauer, R. (1995)Biol Chem Hoppe-SeyIer376 :569-575 ；Roggentin, P, Schauer, R, Hoyer, LL 和 Vimr,ER. (1993)Mol Microb 9:915-921)。由於它們寬泛的底物特異性，大的細菌唾液酸酶成為良好的候選者。圖4顯示具有已知底物特異性的幾個大的細菌唾液酸酶。這些酶具有高的比活性(對於產氣莢膜梭菌唾液酸酶為600U/mg蛋白(Corfield，AP, Veh, Rff,, Wember,M, Michalski, JC 和 Schauer, R. (1981)Bichem J197 :293-299)和對於粘放線菌唾液酸酶為 680U/mg 蛋白(Teufel, M, Roggentin, P.和 Schauer, R. (1989)Biol Chem HoppeSeyler 370 :435-443)),在無二價金屬離子時具有完全的活性,且已被克隆並從大腸桿菌(E. coli)中純化為重組蛋白(Roggentin, P, Kleineidam, RG 和 Schauer, R. (1995)BiolChem Hoppe-Seyler 376 :569-575, Teufel, M, Roggentin, P.和 Schauer, R. (1989)BiolChem Hoppe Seyler 370 :435-443,Sakurada,K,Ohta,T 和 Hasegawa,M. (1992)JBacteriol174 :6896-6903) 0並且，產氣莢膜梭菌唾液酸酶在2_8 °C下在溶液中穩定持續幾周，且在4°C下在白蛋白存在時穩定持續兩年以上(Wang，FZ, Akula, SM，Pramod, NP，Zeng, L和Chandran, B. (2001) J Virol 75:7517-27)。粘放線菌唾液酸酶對於凍融是不穩定的，但在4°C下在0. IM醋酸鹽緩衝液,pH 5中是穩定的(Teufel, M, Roggentin, P.和Schauer,R. (1989)Biol Chem Hoppe Seyler 370 :435-443)。
包括唾液酸酶的藥物組合物可包括其他化合物，包括但不限於也可具有治療活性的其他蛋白。包括唾液酸酶的藥物組合物可包括可增強組合物的穩定性、溶解度、包裝、遞送、稠度、味道或香味的其他化合物。可將包括唾液酸酶的化合物配製為用於鼻施用、氣管施用、支氣管施用、口服施用或局部施用，或可配製為可注射溶液或滴眼劑，或配製為溶液或乾粉並利用吸入器吸入。可將本文所描述的唾液酸酶配製為藥物組合物，其包括多種另外的化合物諸如，MgS04、CaCl2、組氨酸、組氨酸鹽酸鹽、和海藻糖或它們的類似物。這些唾液酸酶或含有它們的藥物組合物可用於(a)治療或預防呼吸道中的變應性應答和炎症應答，(b)在在其呼吸道中具有增高的粘液水平的受治療者的呼吸道中減少粘液的量，(C)在受治療者的呼吸道中限制粘液的量的增加超過其呼吸道中的粘液的基線，和/或(d)在在其呼吸道中具有增高的粘液水平或處於在其呼吸道中具有增高的粘液水平的風險的受治療者中預防、治療或改善以下的影響慢性阻塞性肺病(COPD)、支氣管炎、支氣管擴張、囊性纖維化(CF)、血管炎、粘液栓塞、韋格納氏肉芽腫病、肺炎、結核病、涉及肺或呼吸道的癌症、卡塔格納症候群、楊氏症候群、慢性竇肺感染、a I-抗胰蛋白酶缺陷、原發性·免疫缺陷、獲得性免疫缺陷症候群、機會感染、感染狀態、感染後狀態、感冒、運動誘發粘液分泌過多、炎性腸病、潰瘍性結腸炎、克羅恩病、呼吸道感染、呼吸道阻塞、毒氣的吸入或吸氣、肺吸入或酒精中毒。在一些實施方案中，在其呼吸道中具有增高的粘液水平的受治療者不包括患有流感、副流感和/或呼吸道合胞病毒(RSV)中的一種或多種的受治療者。唾液酸酶催化結構域蛋白或肽如本文所用的「唾液酸酶催化結構域蛋白或肽」包括唾液酸酶催化結構域但不包括催化結構域所來源的唾液酸酶的所有胺基酸序列。唾液酸酶催化結構域蛋白或肽具有唾液酸酶活性。唾液酸酶催化結構域蛋白或肽可具有催化結構域序列所來源的唾液酸酶的活性的至少10%、至少20%、至少50%、至少70%。唾液酸酶催化結構域蛋白或肽可具有催化結構域序列所來源的唾液酸酶的活性的至少90%。唾液酸酶催化結構域蛋白或肽可包括其他胺基酸序列，比如但不限於另外的唾液酸酶序列、來源於其他蛋白的序列、或非來源於天然存在的蛋白的序列的序列。另外的胺基酸序列可執行多種功能中的任何一種，包括向催化結構域蛋白提供另外的活性，增強唾液酸酶催化結構域蛋白的表達、加工、摺疊或穩定性，或甚至提供蛋白或肽的期望的大小或間隔。優選的唾液酸酶催化結構域蛋白或肽是包括粘放線菌唾液酸酶催化結構域的蛋白。粘放線菌唾液酸酶催化結構域蛋白或肽可包括粘放線菌唾液酸酶序列(SEQ ID NO 12)的胺基酸270-667。粘放線菌唾液酸酶催化結構域蛋白或肽可包括起始於從粘放線菌唾液酸酶序列(SEQ ID NO 12)的胺基酸270到胺基酸290的胺基酸中的任何一個並終止於從所述粘放線菌唾液酸酶序列(SEQ ID NO 12)的胺基酸665到胺基酸901的胺基酸中的任何一個的胺基酸序列，且缺少從胺基酸I延伸到胺基酸269的任何粘放線菌唾液酸酶蛋白序列。(如本文所用的，「缺少從胺基酸I延伸到胺基酸269的任何粘放線菌唾液酸酶蛋白序列」意為缺少出現在指定的蛋白或胺基酸序列中的4個或更多個連續胺基酸的任何片段)。在一些實施方案中，粘放線菌唾液酸酶催化結構域蛋白或肽包括粘放線菌唾液酸酶序列(SEQ ID NO 12)的胺基酸274-681並缺少其他粘放線菌唾液酸酶序列。在另外的實施方案中，粘放線菌唾液酸酶催化結構域蛋白包括粘放線菌唾液酸酶序列(SEQ ID NO:12)的胺基酸290-666或290-667並缺少任何其他粘放線菌唾液酸酶序列。在又一些另外的實施方案中，粘放線菌唾液酸酶催化結構域蛋白或肽包括粘放線菌唾液酸酶序列(SEQ IDNO 12)的胺基酸274-666並缺少任何其他粘放線菌唾液酸酶序列。在又一些另外的實施方案中，粘放線菌唾液酸酶催化結構域蛋白或肽包括粘放線菌唾液酸酶序列(SEQ ID NO 12)的胺基酸290-666或290-667並缺少任何其他粘放線菌唾液酸酶序列。在又一些另外的實施方案中，粘放線菌唾液酸酶催化結構域蛋白或肽包括粘放線菌唾液酸酶序列(SEQ IDNO 12)的胺基酸290-68 1並缺少任何其他粘放線菌唾液酸酶序列。可將這種唾液酸酶催化結構域蛋白或肽配製為用於鼻施用、氣管施用、支氣管施用、口服施用或局部施用，或可配製為可注射溶液或滴眼劑，或配製為溶液或乾粉並利用吸入器吸入。可將本文所描述的唾液酸酶催化結構域蛋白或肽配製為包括多種另外的化合物的藥物組合物，所述多種另外的化合物諸如，MgS04、CaCl2、組氨酸、組氨酸鹽酸鹽、和海藻糖或它們的類似物。這些另外的化合物可單獨地或以不同的組合包括在藥物組合物中，比如Na2SO4, MgSO4, CaCl2、組氨酸、組氨酸鹽酸鹽和海藻糖或它們的類似物。這些另外的化合物可包括在藥物組合物中以用作賦形劑或用作提供另外的有利作用的活性成分。這種唾液酸酶催化結構域蛋白或肽或含有它們的藥物組合物可用來(a)在呼吸道中治療或預防變應性應答和炎症應答，(b)在在其呼吸道中具有增高的粘液水平的受治療者的呼吸道中減少粘液的量，(C)在受治療者的呼吸道中限制粘液的量的增加超過其呼吸道中的粘液的基線，和/或(d)在在其呼吸道中具有增高的粘液水平的受治療者或處於在其呼吸道中具有增高的水平的粘液的風險的受治療者中預防、治療或改善以下的影響慢性阻塞性肺病(COPD)、支氣管炎、支氣管擴張、囊性纖維化(CF)、血管炎、粘液栓塞、韋格納氏肉芽腫病、肺炎、結核病、涉及肺或呼吸道的癌症、卡塔格納症候群、楊氏症候群、慢性竇肺感染、a I-抗胰蛋白酶缺陷、原發性免疫缺陷、獲得性免疫缺陷症候群、機會感染、感染狀態、感染後狀態、感冒、運動誘發粘液分泌過多、炎性腸病、潰瘍性結腸炎、克羅恩病、呼吸道感染、呼吸道阻塞、毒氣的吸入或吸氣、肺吸入或酒精中毒。融合蛋白唾液酸酶催化結構域蛋白可以是融合蛋白，其中所述融合蛋白包括至少一個唾液酸酶催化結構域和至少一個另外的蛋白結構域，包括但不限於純化結構域、蛋白標籤、蛋白穩定性結構域、溶解度結構域、蛋白大小增加結構域、蛋白摺疊結構域、蛋白定位結構域、錨定結構域、N-末端結構域、C-末端結構域、催化活性結構域、結合結構域或催化活性增強結構域。至少一個另外的蛋白結構域可來源於另一來源，比如，但不限於，來自另一蛋白的序列。所述至少一個另外的蛋白結構域不必基於任何已知的蛋白序列，但可經工程化和經經驗檢驗以在融合蛋白中執彳丁任何功能。純化結構域可包括，作為非限制性實例的，以下中的一個或多個組氨酸標籤、鈣調蛋白結合結構域、麥芽糖結合蛋白結構域、鏈黴親和素結構域、鏈黴親和素結合結構域、內蛋白結構域或幾丁質結合結構域。蛋白標籤可包括可用於蛋白的抗體檢測的序列，比如，例如，myc標籤、血凝素標籤或FLAG標籤。增強蛋白表達、修飾、摺疊、穩定性、大小或定位的蛋白結構域可基於已知或經工程化的蛋白的序列。其他蛋白結構域可具有結合或催化活性或可增強唾液酸酶催化結構域的催化活性。
用於本發明的組合物、化合物和方法中的融合蛋白包括至少一個唾液酸酶催化結構域和至少一個錨定結構域。在一些實施方案中，錨定結構域包括GAG結合結構域，比如人類雙調蛋白的GAG結合結構域(SEQ ID NO 7)。用於本發明的融合蛋白的唾液酸酶催化結構域和其他結構域可任選地通過連接物來連接，比如但不限於肽連接物。多種肽連接物是本領域中已知的。在一個實施方案中，連接物可以是包括甘氨酸的肽連接物，比如G-G-G-G-S (SEQ ID N0:10)。可將這種融合蛋白配製為用於鼻施用、氣管施用、支氣管施用、口服施用或局部施用，或可配製為可注射溶液或滴眼劑，或配製為溶液或乾粉並利用吸入器吸入。可將這些融合蛋白配製為藥物組合物，其包括多種單獨的或以不同組合的另外的化合物，比如Na2S04、MgSO4XaCl2,組氨酸、組氨酸鹽酸鹽和海藻糖或它們的類似物。這些另外的化合物可包括在藥物組合物中以用作賦形劑或用作提供另外的有利作用的活性成分。這種融合蛋白或含有它們的藥物組合物可用來(a)在呼吸道中治療或預防變應 性應答和炎症應答，(b)在在其呼吸道中具有增高的粘液水平的受治療者的呼吸道中減少粘液的量，(C)在受治療者的呼吸道中限制粘液的量的增加超過其呼吸道中的粘液的基線，和/或(d)在在其呼吸道中具有增高的粘液水平的受治療者或處於在其呼吸道中具有增高的水平的粘液的風險的受治療者中預防、治療或改善以下的影響慢性阻塞性肺病(COPD)、支氣管炎、支氣管擴張、囊性纖維化(CF)、血管炎、粘液栓塞、韋格納氏肉芽腫病、肺炎、結核病、涉及肺或呼吸道的癌症、卡塔格納症候群、楊氏症候群、慢性竇肺感染、a I-抗胰蛋白酶缺陷、原發性免疫缺陷、獲得性免疫缺陷症候群、機會感染、感染狀態、感染後狀態、感冒、運動誘發粘液分泌過多、炎性腸病、潰瘍性結腸炎、克羅恩病、呼吸道感染、呼吸道阻塞、毒氣的吸入或吸氣、肺吸入或酒精中毒。融合蛋白的不同的構建體顯示於圖4-6以及本文所提供的序列表中提供的序列中。用於檢驗化合物和組合物和/或用於篩杳以鑑定唾液酸酶和/或其活件部分以治療炎症伴隨的疾病的方法利用本領域中的技術人員已知的標準測定可檢驗本文所提供的化合物和組合物減少炎症、變態反應或相關的應答比如粘液過度產生的活性。用於測量炎症或粘液過度產生的一些基於細胞的(例如，氣管細胞培養物)測定和基於動物的測定(小鼠模型、豚鼠模型)是已知的(參見，例如，Nakao 等人，J. TmmunoI.，180 :6262_6269 (2008) ；ffesterhof等人，Mediators Inflamm. ,10(3) 143-154 (2001) ；Miller 等人，J. Tmmuno I. , 170 3348-3356(2003) ；Nakanishi 等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 98 (9) :5175-5180(2001)；和DuBuske, Allergy Proc. ,16(2) :55-58 (1995)，其每一項的內容以其整體通過引用併入本文)。可在本領域中的技術人員已知的這些測定或其他標準測定的任何一種中檢驗本文所提供的化合物和組合物減少炎症或粘液過度產生的能力。而且，利用此類測定可對唾液酸酶或其活性部分關於其抗炎活性和/或減少相關的應答諸如粘液過度產生的能力進行鑑定和/或選擇。本文在實施例I和實施例2中描述了示例性的測定和方案。除測量炎症或相關的應答諸如粘液過度產生的測定之外，本文所提供的化合物和組合物可通過評價其在激動劑存在下破壞毒蕈鹼受體介導的信號轉導的能力來檢驗其活性。毒蕈鹼受體，或mAChR，是發現於某些神經元和其他細胞的質膜中的G蛋白偶聯的乙醯膽鹼受體。它們起一些作用，包括用作受從副交感神經系統中的神經節後纖維釋放的乙醯膽鹼刺激的主要終末受體。毒蕈鹼受體-激動劑相互作用，和所導致的信號轉導，被認為在具有相關的炎症應答和/或變應性應答的疾病諸如哮喘和COPD中具有作用(參見，例如，「MuscarinicReceptors in Airways Diseases,，，Birkhauser-Verlag publ. , Zangsma 等人，編輯)。更具體地，認為乙醯膽鹼能機制影響以下的正常呼吸功能和致病性呼吸功能I.粘液的分泌，2.跨越呼吸道上皮和在黏膜纖毛轉運過程中的離子的主動運輸，
3.氣道的平滑肌張力，4.氣道的免疫應答和炎症應答，5.氣道的反射性調節，6.在哮喘中和在呼吸道的其他超敏反應狀態中氣道的呼吸響應。因此，某些抗毒蕈鹼劑已對以下有效(a)乙醯膽鹼能誘導的支氣管收縮；(b) 阻滯劑誘導的醫原性氣道痙攣；和(C)精神性支氣管痙攣。抗毒蕈鹼劑的兩種主要的肺
部應用是慢性支氣管炎和支氣管哮喘(Pharmacology of Anti-Muscarinic Agents,LaszloGyermek (1998))。毒蕈鹼受體基於其生理功能存在5種寬泛的種類，且這些受體中的每一種的激動劑是本領域中的技術人員已知的Ml受體一示例性的激動劑包括乙醯膽鹼、氧化震顫素、毒蕈鹼、卡巴膽鹼和McNA343M2受體一示例性的激動劑包括乙醯膽鹼、醋甲膽鹼、卡巴膽鹼、氧化震顫素和毒蕈鹼M3受體一示例性的激動劑包括乙醯膽鹼、氨甲醯甲膽鹼、卡巴膽鹼、氧化震顫素和匹魯卡品M4受體一示例性的激動劑包括乙醯膽鹼、卡巴膽鹼和氧化震顫素M5受體一示例性的激動劑包括乙醯膽鹼、卡巴膽鹼和氧化震顫素在一些實施方案中，本文所提供的化合物和組合物減少與RTI或RTD相關的炎症和/或變應性應答，包括粘液過度產生的能力可通過評價其破壞毒蕈鹼受體-激動劑相互作用的能力來檢驗。並且，可通過評價其破壞毒蕈鹼受體-激動劑相互作用的能力來篩查、鑑定和選擇唾液酸酶和/或其活性部分關於減少炎症、變態反應和/或相關的應答諸如粘液過度產生的能力。這些檢驗和篩查可利用本領域中的技術人員已知的標準測定來進行(參見，例如，Armstrong 等人，Curr. Protocols in Pharmacol.，UNIT 12-13 (2010),其內容以其整體通過引用併入本文)。本文在實施例3中提供了示例性的測定和方案。藥物組合物本發明包括配製為藥物組合物的本發明的化合物。藥物組合物包括以備貯藏和隨後的施用的藥學上可接受的載體，所述藥物組合物在藥學上可接受的載體或稀釋劑中具有藥學上有效量的化合物。用於治療應用的可接受的載體或稀釋劑是藥學領域中熟知的，且描述於例如雷明頓藥物科學(Remington，s Pharmaceutical Sciences),第 18 版 ，MackPublishing Co. , Easton, PA(1990))。在藥物組合物中可提供防腐劑、穩定劑、染料和甚至調味劑。例如，苯甲酸鈉、山梨酸和對羥基苯甲酸酯可作為防腐劑來添加。此外，可使用抗氧化劑和懸浮劑。根據靶細胞不同，本發明的化合物可配製為並用作用於口服或吸入施用的片劑、膠囊或酏劑；用於局部應用(topical application)的藥膏(salve)或軟膏；用於直腸施用的栓劑；用作吸入劑或鼻噴霧的無菌溶液、懸浮液和包囊的粉末和類似物。還可將可注射物製備為常規形式的液體溶液或懸浮液，適宜於在注射前在液體中成溶液或懸浮液的固體形式，或製備為乳液。適宜的賦形劑為，例如，水、鹽水、葡聚糖、甘露醇、乳糖、卵磷脂、白蛋白、穀氨酸鈉、鹽酸半胱氨酸和類似的賦形劑。除那些賦形劑之外，可單獨地或以不同組合包括在本文所描述的藥物組合物中的另外的化合物包括Na2S04、MgSO4, CaCl2、組氨酸、組氨酸鹽酸鹽和海藻糖或它們的類似物或鎂鹽和/或鈣鹽。這些另外的化合物可包括在藥物組合物中以用作賦形劑或用作提供另外的有利作用的活性成分。此外，若需要，可注射藥物組合物可含有少量的無毒性輔助物質，比如溼潤劑、PH緩衝劑和類似物的無毒性輔助物質。作為一次劑量所需的檢驗化合物的藥學上有效的量將取決於施用途徑、被治療的動物或患者的類型和考慮中的特定動物的生理特徵。可定製劑量以獲得期望的效果，比如減少呼吸道中增高的粘液水平，但將取決於諸如重量、飲食、同時存在的藥物、和醫藥領域中的技術人員將認識的其他因素的因素。在實踐本發明的方法時，可單獨地或相互組合地、或與其他治療或診斷劑組合地使用藥物組合物。這些產物可體內應用於非人類動物受治療者、哺乳動物受治療者、人類受治療者中或體外應用。在體內應用它們時，可以多種方式應用多種劑型將藥物組合物施用於患者或受治療者，所述方式包括局部施用、胃腸外施用、靜脈內施用、皮下施用、肌內施用、結腸施用、直腸施用、鼻施用或腹膜內施用。此類方法還可用於在體內檢驗檢驗化合物的活性。在一些實施方案中，這些藥物組合物可以是以下的形式可口服施用的懸浮液、溶液、片劑或錠劑；鼻噴霧；吸入劑；可注射物、局部噴霧、軟膏、粉末或凝膠，或配製為溶液或乾粉並利用吸入器來吸入。當作為懸浮液口服施用時，本發明的組合物根據藥物製劑領域中熟知的技術來製備，並可含有用於賦予體積的微晶纖維素、作為懸浮劑的海藻酸或海藻酸鈉、作為粘度增強劑的甲基纖維素，和本領域中已知的增甜劑/調味劑。作為立即釋放的片劑，這些組合物可含有本領域中已知的微晶纖維素、磷酸二鈣、澱粉、硬脂酸鎂和乳酸和/或其他賦形劑、黏合劑、膨脹劑(extender)、崩解劑、稀釋劑和潤滑劑。漱口劑或衝洗劑的製劑中的組分包括抗菌劑、表面活性劑、輔助表面活性劑、油、水和本領域中已知的其他添加劑諸如增甜劑/ 調味劑。當通過飲用溶液來施用時,組合物包括與載體一起溶解於具有適當的pH調節的水中的本發明的化合物的一種或多種。化合物可溶解於蒸餾水、自來水、泉水和類似物中。在一些實施方案中，可將PH調節到約3. 5和約8. 5之間。可添加增甜劑，例如，1% (w/v)蔗糖。錠劑可根據美國專利第3，439，089號來製備，其通過應用併入以用於這些目的。當通過鼻氣霧劑或吸入施用時，藥物組合物根據藥物製劑領域中熟知的技術來製備，並可製備為鹽水中的溶液，應用苯甲醇或其他適宜的防腐劑、吸收促進劑以增強生物利用度、碳氟化合物和/或本領域中已知的其他增溶劑或分散劑。參見，例如，Ansel，H.C.等人，Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems,第 6 版(1995)。還可利用於美國專利申請第11/657,813號和第12/179，520號中描述的技術製備吸入的粉末，其二者以其整體通過引用併入本文。這些組合物和製劑一般可與適宜的無毒性的藥學上可接受的成分一起製備。這些成分是鼻用劑型的製備中的技術人員已知的，且這些成分中的一些可見於領域中的標準參考文獻--雷明頓藥物科學(Remington』 s PharmaceuticalSciences),第 18 版 ，Mack Publishing Co.，Easton, PA(1990)。適宜的載體的選擇嚴格取決於期望的鼻用劑型的確切性質，例如溶液、懸浮液、軟膏或凝膠。鼻用劑型除活性成分之外一般含有大量水。還可存在少量的其他成分諸如PH調節劑、乳化劑或分散劑、防腐劑、表面活性劑、膠凝劑或緩衝劑和其他穩定劑和增溶劑。一般，鼻用劑型可與鼻分泌物等滲。鼻用製劑可作為滴劑、噴霧、氣霧劑或通過任何其他鼻內劑型來施用。任選地，遞送系統可以是單位劑量遞送系統。每劑量遞送的溶液或懸浮液的體積可以是從約5微升到約2000微升、從約10微升到約1000微升、從約50微升到約500微升中的任何體積。用於這些不同的劑型的遞送系統可以是以單位劑量或多劑量包裝的滴瓶、塑料擠壓裝置、霧化器、噴霧器或藥物氣霧劑。本發明的製劑可以包括以下而各不相同(I)其他酸和鹼以調節pH; (2)其他張力賦予劑諸如山梨醇、甘油和葡聚糖；(3)其他抗菌防腐劑諸如其他對羥基苯甲酸酯、山梨酸酯、苯甲酸酯、丙酸酯、三氯叔丁醇、苯乙醇、苯扎氯銨和汞製劑；(4)其他粘度賦予劑諸如羧甲基纖維素鈉、微晶纖維素、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇和其他的膠；(5)適宜的吸收增強劑；(6)穩定劑諸如抗氧化劑，如亞硫酸氫鹽和抗壞血酸鹽，金屬螯合劑諸如依地酸鈉和藥物溶解度增強劑諸如聚乙二醇。本發明的一個實施方案包括在在其呼吸道中具有增高的粘液水平的受治療者的呼吸道中減少粘液的量，和/或在受治療者的呼吸道中限制粘液的量的增加超過其呼吸道中的粘液的基線的藥物組合物，所述藥物組合物處於不同的劑量水平，比如在約.Olmg和約IOOmg之間的劑量水平。此類劑量水平的實例包括約 05mg、. 06mg、0. lmg、0. 5mg、lmg、5mg、10mg、20mg、50mg或IOOmg的劑量。本發明的另一個實施方案包括減少呼吸道中的炎症或阻止呼吸道中的炎症惡化的藥物組合物，所述藥物組合物處於不同的劑量水平，比如在約.Olmg和約IOOmg之間的劑量水平。此類劑量水平的實例包括約.05mg、. 06mg、0. lmg、0. 5mg、lmg、5mg、10mg、20mg、50mg或IOOmg的劑量。前述的劑量可每天施用一次或多次，持續I天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天或14天或更多天。還可施用更高劑量或更低劑量。通常，劑量可以在約lng/kg和約10mg/kg之間、在約10ng/kg和約lmg/kg之間、和在約100ng/kg和約100微克/kg之間。在本文所描述的不同的實例中，小鼠用本文所描述的組合物的不同劑量來治療，包括.0008mg/kg、. 004mg/kg、. 02mg/kg、. 06mg/kg、0. lmg/kg、0. 3mg/kg、0. 6mg/kg 和 I. Ogm/kg 的劑量。在一個實施方案中，藥物組合物包括DAS181、MgS04l.446mg/ml、CaCl2O. 059mg/ml、組氨酸I. 427mg/ml、組氨酸鹽酸鹽I. 943mg/ml和海藻糖3. 000mg/ml。在另一個實施方案中，藥物組合物包括DAS181、MgS04、CaCl2、組氨酸、組氨酸鹽酸鹽和海藻糖。 在另一個實施方案中，藥物組合物包括DAS181、Na2SO4和CaCl2。
在另一個實施方案中，藥物組合物包括DAS181和以下中的一種或多種的任何組合Na2S04、MgSO4, CaCl2、組氨酸、組氨酸鹽酸鹽和海藻糖。在另一個實施方案中，藥物組合物包括(a)天然存在的唾液酸酶蛋白或肽或其活性部分，或與天然存在的唾液酸酶的至少一部分基本上同源的重組蛋白，(b)MgSO4L 446mg/ml, (C)CaCl2O. 059mg/ml, (d)組氨酸 I. 427mg/ml, (e)組氨酸鹽酸鹽1.943mg/ml和(f)海藻糖3. 000mg/ml。在一個實施方案中，蛋白或肽是與粘放線菌唾液酸酶(SEQ ID NO 12)具有基本同源性或與其活性部分具有基本同源性的唾液酸酶，所述其活性部分比如 SEQ ID NO 12 的胺基酸 274-666、274-667、270-667、274-681 或 290-681、或粘放線菌唾液酸酶的任何其他催化結構域。在另外的實施方案中，蛋白或肽來自可降解受體唾液酸Neu5Ac a (2，6)-Gal和Neu5Ac a (2，3)-Gal的大的細菌唾液酸酶之一。例如，來自產氣莢膜梭菌(Genbank登錄號X87369)、產脲節桿菌或產綠小單胞菌(Genba nk登錄號D01045)的細菌唾液酸酶，或與那些唾液酸酶或其活性部分基本上同源的蛋白或肽。在另外的實施方案中，蛋白或肽來自其他唾液酸酶，比如由基因NEU2 (SEQ ID NO :8 ;Genbank登錄號 Y16535 ；Monti, E, Preti, Rossi, E.，Ballabio, A 和 Borsani G. (1999)Genomics 57 137-143)和 NEU4(SEQ ID NO :9 ;Genbank 登錄號 NM080741 ；Monti, E, Preti, A, Venerando,B 和 Borsani，G. (2002)Neurochem Res 27 :646-663)所編碼的那些唾液酸酶(圖 2)，或那些唾液酸酶的活性部分。在另一個實施方案中，藥物組合物包括(a)天然存在的唾液酸酶蛋白或肽或其活性部分，或與天然存在的唾液酸酶的至少一部分基本上同源的重組蛋白，(b)MgS04，(c)CaCl2, (d)組氨酸，(e)組氨酸鹽酸鹽和(f)海藻糖。在一個實施方案中，蛋白或肽是與粘放線菌唾液酸酶(SEQ ID NO 12)具有基本同源性或與其活性部分具有基本同源性的唾液酸酶，所述其活性部分比如SEQ ID NO 12的胺基酸274-666、274-667、270-667、274-681或290-681、或粘放線菌唾液酸酶的任何其他催化結構域。在另外的實施方案中，蛋白或肽來自可降解受體唾液酸Neu5Ac a (2，6)_Gal和Neu5Ac a (2，3)-Gal的大的細菌唾液酸酶之一。例如，來自產氣莢膜梭菌(Genbank登錄號X87369)、產脲節桿菌或產綠小單胞菌(Genbank登錄號D01045)的細菌唾液酸酶，或與那些唾液酸酶或其活性部分基本上同源的蛋白或肽。在另外的實施方案中，蛋白或肽來自其他唾液酸酶，比如由基因NEU2(SEQID NO 8 ；Genbank 登錄號 Y16535 ；Monti, E, Preti, Rossi, E. , Ballabio, A 和 BorsaniG. (1999) Genomics 57 :137-143)和 NEU4(SEQ ID NO :9 ;Genbank 登錄號 NM080741 ；Monti,E, Preti, A, Venerando, B 和 Borsani, G. (2002)Neurochem Res 27 :646-663)所編碼的那些唾液酸酶(圖2)，或那些唾液酸酶的活性部分。在另一個實施方案中，藥物組合物包括(a)天然存在的唾液酸酶蛋白或肽或其活性部分，或與天然存在的唾液酸酶的至少一部分基本上同源的重組蛋白，(WNa2SO4，和(C)CaCl20在一個實施方案中，蛋白或肽是與粘放線菌唾液酸酶(SEQ ID NO : 12)具有基本同源性或與其活性部分具有基本同源性的唾液酸酶，所述其活性部分比如SEQ ID N0:12的胺基酸274-666、274-667、270-667、274-681或290-681、或粘放線菌唾液酸酶的任何其他催化結構域。在一個實施方案中，蛋白或肽是與粘放線菌唾液酸酶(SEQ ID NO 12)具有基本同源性或與其活性部分具有基本同源性的唾液酸酶，所述其活性部分比如SEQ ID N0:12的胺基酸274-666、274-667、270-667、274-681或290-681、或粘放線菌唾液酸酶的任何其他催化結構域。在另外的實施方案中，蛋白或肽來自可降解受體唾液酸Neu5Ac a (2,6)-Gal和Neu5Ac a (2, 3)-Gal的大的細菌唾液酸酶之一。例如，來自產氣莢膜梭菌(Genbank登錄號X87369)、產脲節桿菌或產綠小單胞菌(Genbank登錄號DO1045)的細菌唾液酸酶，或與那些唾液酸酶或其活性部分基本上同源的蛋白或肽。在另外的實施方案中，蛋白或肽來自其他唾液酸酶，比如由基因 NEU2 (SEQ ID NO 8 ;Genbank 登錄號 Y16535 ；Monti, E, Preti,Rossi，E.，Ballabio，A和Borsani G. (1999)Genomics 57 :137-143)和NEU4(SEQ ID NO :9 ;Genbank登錄號NM080741 ；Monti,E,Preti,A,Venerando,B和Borsani,G. (2002)NeurochemRes 27 :646-663)所編碼的那些唾液酸酶(圖2)，或那些唾液酸酶的活性部分。在另一個實施方案中，藥物組合物包括(a)天然存在的唾液酸酶蛋白或肽或其活性部分，或與天然存在的唾液酸酶的至少一部分基本上同源的重組蛋白，和以下中的一種或多種的任何組合Na2S04、MgS04、CaCl2、組氨酸、組氨酸鹽酸鹽和海藻糖。在一個實施方案中，蛋白或肽是與粘放線菌唾液酸酶(SEQ ID NO :12)具有基本同源性或與其活性部分具有基本同源性的唾液酸酶，所述其活性部分比如SEQ ID NO 12的胺基酸274-666、274-667、270-667,274-681或290-681、或粘放線菌唾液酸酶的任何其他催化結構域。在另外的實施方案中，蛋白或肽來自可降解受體唾液酸Neu5Ac a (2，6)_Gal和Neu5Ac a(2，3)_Gal的 大的細菌唾液酸酶之一。例如，來自產氣莢膜梭菌(Genbank登錄號X87369)、產脲節桿菌或產綠小單胞菌(Genbank登錄號D01045)的細菌唾液酸酶，或與那些唾液酸酶或其活性部分基本上同源的蛋白或肽。在另外的實施方案中，蛋白或肽來自其他唾液酸酶，比如由基因 NEU2 (SEQ ID NO 8 ;Genbank 登錄號 Y16535 ；Monti, E, Preti, Rossi, E. ,Ballabio，A 和Borsani G. (1999) Genomics57 :137-143)和 NEU4(SEQ ID NO :9 ;Genbank登錄號NM080741 ；Monti, E, Preti, A, Venerando, B 和 Borsani, G. (2002)Neurochem Res 27 :646-663)所編碼的那些唾液酸酶(圖2)，或那些唾液酸酶的活性部分。在另一個實施方案中，藥物組合物包括(a)具有至少一個唾液酸酶催化結構域和至少一個錨定結構域的融合蛋白，其中所述唾液酸酶催化結構域包括從SEQ ID N0:12的胺基酸 274 延伸至胺基酸 666 (可選地，SEQ ID NO :12 的 274-666、270-667、274-681、290_681、或粘放線菌唾液酸酶的任何其他催化結構域)的胺基酸序列(包括端點)，其中所述錨定結構域是人類雙調蛋白的糖胺聚糖(GAG)結合結構域，其包括SEQ ID NO :7的胺基酸序列，(b)MgSO4L 446mg/ml, (c)CaCl2O. 059mg/ml, (d)組氨酸 I. 427mg/ml, (e)組氨酸鹽酸鹽1.943mg/ml,和(f)海藻糖 3. 000mg/ml。在另一個實施方案中，藥物組合物包括(a)具有至少一個唾液酸酶催化結構域和至少一個錨定結構域的融合蛋白，其中所述唾液酸酶催化結構域包括從SEQ ID N0:12的胺基酸 274 延伸至胺基酸666 (可選地，SEQ ID NO :12 的 274-666、270-667、274-681、290_681、或粘放線菌唾液酸酶的任何其他催化結構域)的胺基酸序列(包括端點)，其中所述錨定結構域是人類雙調蛋白的糖胺聚糖(GAG)結合結構域，其包括SEQ ID NO :7的胺基酸序列，(b) MgSO4, (c)CaCl2，(d)組氨酸，(e)組氨酸鹽酸鹽，和(f)海藻糖。在另一個實施方案中，藥物組合物包括(a)具有至少一個唾液酸酶催化結構域和至少一個錨定結構域的融合蛋白，其中所述唾液酸酶催化結構域包括從SEQ ID N0:12的胺基酸 274 延伸至胺基酸666 (可選地，SEQ ID NO :12 的 274-666、270-667、274-681、290_681、或粘放線菌唾液酸酶的任何其他催化結構域)的胺基酸序列(包括端點)，其中所述錨定結構域是人類雙調蛋白的糖胺聚糖(GAG)結合結構域，其包括SEQ ID NO :7的胺基酸序列，(b) Na2SO4,和(c)CaCl2。在另一個實施方案中，藥物組合物包括(a)具有至少一個唾液酸酶催化結構域和至少一個錨定結構域的融合蛋白，其中所述唾液酸酶催化結構域包括從SEQ ID N0:12的胺基酸 274 延伸至胺基酸666 (可選地，SEQ ID NO :12 的 274-666、270-667、274-681、290_681、或粘放線菌唾液酸酶的任何其他催化結構域)的胺基酸序列(包括端點)，其中所述錨定結構域是人類雙調蛋白的糖胺聚糖(GAG)結合結構域，其包括SEQ ID NO :7的胺基酸序列，和(b)以下中的一種或多種的任何組合Na2S04、MgS04、CaCl2、組氨酸、組氨酸鹽酸鹽和海藻糖。 在另一個實施方案中，藥物組合物包括(a)具有唾液酸酶或其活性部分和錨定結構域的融合蛋白，(b)MgSO4L 446mg/ml, (c)CaCl2O. 059mg/ml, (d)組氨酸 I. 427mg/ml, (e)組氨酸鹽酸鹽I. 943mg/ml,和(f)海藻糖3. 000mg/ml。在另一個實施方案中，藥物組合物包括(a)具有唾液酸酶或其活性部分和錨定結構域的融合蛋白，(b)MgSO4, (C)CaCl2, (d)組氨酸，(e)組氨酸鹽酸鹽，和(f)海藻糖。在另一個實施方案中，藥物組合物包括(a)具有唾液酸酶或其活性部分和錨定結構域的融合蛋白，(b)Na2SO4,和(C)CaCl20在另一個實施方案中，藥物組合物包括(a)具有唾液酸酶或其活性部分和錨定結構域的融合蛋白，和(b)以下中的一種或多種的任何組合Na2S04、MgS04、CaCl2、組氨酸、組氨酸鹽酸鹽和海藻糖。本發明的藥物組合物的另一個代表性實例，且其可用於本文所描述的方法中，包括以下DAS181、組氨酸、硫酸鎂(或檸檬酸鹽)、氯化鈣、海藻糖、水、醋酸鈉和醋酸。本發明的藥物組合物的又一個代表性實例，且其可用於本文所描述的方法中，包括DAS181(在約0. 01%和約100%w/w之間、約I. 00%和約90. 0%w/w之間、約5. 00%和約80. 0% w/w 之間、約 10. 0%和約 70. 0% w/w 之間、約 20. 0%和約 70% w/w 之間、約 30. 0%和約70. 0 w/w之間、約40. 0 和約70. 0 w/w之間、約50. 0 和約70 w/w之間、約60. 0%和約70. 0% w/w之間的任何濃度)，其與以下中的任何相組合組氨酸或組氨酸鹽酸鹽(在約0. 00%和約90. 0% w/w之間、約0. 01%和約80. 0% w/w之間、約I. 00%和約75. 0% w/w 之間、約 2. 00%和約 70. 0% w/w 之間、約 3. 00%和約 60% w/w 之間、約 4. 00%和約50. 0 % w/w之間、約5. 00 和約40. 0 % w/w之間、約6. 00 %和約30 % w/w之間、約7. 00%和約20. 0% w/w之間的任何濃度)，硫酸鎂(或檸檬酸鹽或硫酸鈉)(在約0. 00%和約90. 0% w/w之間、約0. 01 和約80. 0% w/w之間、約I. 00%和約75. 0% w/w之間、約2. 00%和約70. 0% w/w之間、約3. 00%和約60% w/w之間、約4. 00%和約50. 0% w/w之間、約5. 00 %和約40. 0 % w/w之間、約6. 00 %和約30 % w/w之間、約7. 00 %和約20. 0 %w/w之間的任何濃度),氯化I丐(在約0. 00%和約90. 0% w/w之間、約0. 01 %和約80. 0%w/w之間、約0. 01 和約75. 0% w/w之間、約0. 01 和約70. 0% w/w之間、約0. 01 和約60% w/w 之間、約 0. 01%和約 50. 0% w/w 之間、約 0. 01%和約 40. 0% w/w 之間、約 0. 01 %和約30% w/w之間、約0. 10%和約20. 0% w/w之間的任何濃度)，海藻糖(在約0. 00%和約90. 0 % w/w之間、約0. 01 和約80. 0 w/w之間、約I. 00 和約75. 0 w/w之間、約2. 00%和約70. 0% w/w之間、約3. 00%和約60% w/w之間、約4. 00%和約50. 0% w/w之間、約5. OO%和約40. 0% w/w之間、約6. 00%和約30% w/w之間、約7. 00%和約20. 0% w/w之間的任何濃度)，水(在約0. 00%和約90. 0% w/w之間、約0. 01%和約80. 0% w/w之間、約I. 00%和約75. 0% w/w之間、約2. 00%和約70. 0% w/w之間、約3. 00%和約60% w/w之間、約4. 00%和約50. 0% w/w ^間、約5. 00%和約40. 0% w/w ^間、約6. 00%和約30%w/w之間、約7. 00 %和約20. 0 % w/w之間的任何濃度)，醋酸鈉(在約0. 00 %和約90. 0 %w/w之間、約0. 01 和約80. 0% w/w之間、約0. 01 和約75. 0% w/w之間、約0. 01 和約70. 0% w/w 之間、約 0. 01 和約 60% w/w 之間、約 0. 01 和約 50. 0% w/w 之間、約 0. 01 %和約40. 0% w/w之間、約0. 01 %和約30% w/w之間、約0. 10%和約20. 0% w/w之間的任何濃度)，和醋酸(在約0. 00%和約90. 0% w/w之間、約0. 01%和約80. 0% w/w之間、約
0.01%和約75. 0% w/w之間、約0. 01%和約70. 0% w/w之間、約0. 01%和約60% w/w之間、約0. 01%和約50. 0% w/w之間、約0. 01%和約40. 0% w/w之間、約0. 01%和約30% w/w之間、約0. 10%和約20. 0% w/w之間的任何濃度)。以上藥物組合物中的任何一種還可包括範圍從約0%到約75% w/w的不同濃度的·MgCl20減少呼吸道中的粘液和限制其增加呼吸氣道樹中粘液的積累或增高的水平可由所產生的粘液的體積增多，以及還由呼吸道中的纖毛清除裝置的缺陷導致的清除減少所引起。粘液的分泌過多可以是慢性的，但在COPD的加重中、哮喘的發作過程中以及在支氣管擴張和囊性纖維化患者中產生了增多的體積(W. D. Kim,Eur Respir. J. 1997，10 :1914-1917)。在伴隨粘液的分泌過多或其清除減少的氣道中管腔內的粘液積累(即，增高的粘液水平)在幾乎所有肺部疾病和具有對呼吸道的影響的疾病中產生臨床問題，所述疾病包括但不限於慢性阻塞性肺病(COPD)、支氣管炎、支氣管擴張、囊性纖維化(CF)、血管炎、粘液栓塞、韋格納氏肉芽腫病、肺炎、結核病、涉及肺或呼吸道的癌症、卡塔格納症候群、楊氏症候群、慢性竇肺感染、a I-抗胰蛋白酶缺陷、原發性免疫缺陷、獲得性免疫缺陷症候群、機會感染、感染狀態、感染後狀態、感冒、運動誘發粘液分泌過多、炎性腸病、潰瘍性結腸炎、克羅恩病、呼吸道感染、呼吸道阻塞、毒氣的吸入或吸氣、肺吸入或酒精中毒。呼吸道中增高的粘液水平是多種肺部疾病的預後和臨床特徵中重要的決定因素，所述肺部疾病比如除囊性纖維化和COPD之外還有慢性支氣管炎、支氣管擴張和支氣管哮喘(ff. D. Kim,Eur Respir. J. 1997,10:1914-1917)。因此，在一些實施方案中，本公開內容包括其中選擇患有這些病症或疾病中的一種或多種的受治療者用於治療的方法。在一些實施方案中，所述方法可包括選擇患有本文所提供的病症或疾病中的一種或多種的受治療者，且其未感染流感、副流感和/或呼吸道合胞病毒(RSV)中的一種或多種。選擇後，可通過施用本文所公開的組合物中的一種或多種來治療受治療者。本文提供了方法，所述方法包括施用本文所描述的和於美國申請第10/718,986號和第10/939，262號中所描述的化合物，或含有它們的組合物以在在其呼吸道中具有增聞的粘液水平的受:治療者的呼吸道中減少粘液的量，和在受:治療者的呼吸道中限制粘液的量的增加超過其呼吸道中的粘液的基線。從而，本發明涉及利用本文所描述的治療性化合物和/或組合物來預防或治療疾病的方法，所述疾病由呼吸道炎症或增高的粘液產生導致、導致呼吸道炎症或增高的粘液產生或由於呼吸道炎症或增高的粘液產生加重，比如，變應性哮喘和非變應性哮喘兩者、慢性阻塞性肺病(COPD)、支氣管炎(急性的和非急性的兩者)、支氣管擴張、囊性纖維化(CF)、血管炎、粘液栓塞、韋格納氏肉芽腫病、和導致呼吸道中的炎症或增高的粘液產生、或由於呼吸道中的炎症或增高的粘液產生所導致或加重的任何其他疾患。本發明還包括使用本文所描述的治療性化合物和/或組合物以在在其呼吸道中具有增高的粘液水平的受治療者的呼吸道中減少粘液的量，和在受治療者的呼吸道中限制粘液的量的增加超過其呼吸道中的粘液的基線的方法。
在一些實施方案中，方法包括向受治療者施用含有治療有效量的具有唾液酸酶或其活性部分的蛋白或肽的組合物或化合物。蛋白或肽可以是分離的天然存在的唾液酸酶蛋白，或與天然存在的唾液酸酶的至少一部分基本上同源的重組蛋白。在一個實施方案中，藥物組合物或化合物含有與粘放線菌唾液酸酶(SEQ ID NO 12)具有基本同源性或與其活性部分具有基本同源性的唾液酸酶，所述其活性部分比如SEQ ID NO 12的胺基酸274-666、274-667,270-667,274-681或290-681、或粘放線菌唾液酸酶的任何其他催化結構域。治療有效量包括當與施用組合物之前存在的粘液的量相比較時，在施用該組合物或化合物之後導致呼吸道中的粘液的量減少的蛋白或肽的量。在另外的實施方案中，方法包括施用含有治療有效量的融合蛋白的組合物或化合物，其中所述融合蛋白具有至少一個唾液酸酶催化結構域和至少一個錨定結構域，其中所述唾液酸酶催化結構域包括從SEQ ID NO : 12的胺基酸274延伸到胺基酸666 (可選地，SEQID NO 12的274-666、270-667、274-681、290-681、或粘放線菌唾液酸酶的任何其他催化結構域)的胺基酸序列(包括端點)，其中所述錨定結構域是人類雙調蛋白的糖胺聚糖(GAG)結合結構域，其包括SEQ ID NO :7的胺基酸序列。治療有效量包括當與施用組合物之前存在的粘液的量相比較時，在施用該組合物或化合物之後導致呼吸道中的粘液的量減少的融合蛋白的量。在又一些另外的實施方案中，方法包括含有治療有效量的具有唾液酸酶或其活性部分和錨定結構域的融合蛋白的組合物。治療有效量包括當與施用組合物之前存在的粘液的量相比較時，在施用該組合物或化合物之後導致呼吸道中的粘液的量減少的融合蛋白的量。其他實施方案包括在在其呼吸道中具有增高的粘液水平的受治療者中預防、治療或改善以下的影響的方法慢性阻塞性肺病(COPD)、支氣管炎、支氣管擴張、囊性纖維化(CF)、血管炎、粘液栓塞、韋格納氏肉芽腫病、肺炎、結核病、涉及肺或呼吸道的癌症、卡塔格納症候群、楊氏症候群、慢性竇肺感染、a I-抗胰蛋白酶缺陷、原發性免疫缺陷、獲得性免疫缺陷症候群、機會感染、感染狀態、感染後狀態、感冒、運動誘發粘液分泌過多、炎性腸病、潰瘍性結腸炎、克羅恩病、呼吸道感染、呼吸道阻塞、毒氣的吸入或吸氣、肺吸入或酒精中毒。該方法包括施用(a)含有治療有效量的具有唾液酸酶或其活性部分的蛋白或肽的組合物於受治療者，(b)含有治療有效量的融合蛋白的組合物，其中所述融合蛋白具有至少一個唾液酸酶催化結構域和至少一個錨定結構域，其中所述唾液酸酶催化結構域包括從SEQID NO :12的胺基酸274延伸至胺基酸666(可選地，SEQID NO :12的274_666、270_667、274-681、290-681、或粘放線菌唾液酸酶的任何其他催化結構域)的胺基酸序列(包括端點)，其中所述錨定結構域是人類雙調蛋白的糖胺聚糖(GAG)結合結構域，其包括SEQ IDNO 7的胺基酸序列，或(c)含有治療有效量的具有唾液酸酶或其活性部分和錨定結構域的融合蛋白的組合物或化合物。這些組合物或化合物的治療有效量包括當與施用組合物或化合物之前存在的粘液的量相比較時，在施用該組合物之後導致呼吸道中的粘液的量減少的量。又一些另外的實施方案包括在受治療者的呼吸道中限制粘液的量的增加超過所述受治療者的呼吸道中的粘液的基線的方法。該方法包括施用(a)含有治療有效量的具有唾液酸酶或其活性部分的蛋白或肽的組合物或化合物於受治療者，(b)含有治療有效量的融合蛋白的組合物或化合物，其中所述融合蛋白具有至少一個唾液酸酶催化結構域和至少一個錨定結構域，其中所述唾液酸酶催化結構域包括從SEQ ID NO : 12的胺基酸274延伸至胺基酸 666 (可選地，SEQ ID NO 12 的 274-666、270-667、274-681、290_681、或粘放線菌唾液酸酶的任何其他催化結構域)的胺基酸序列(包括端點)，其中所述錨定結構域是人類雙、調蛋白的糖胺聚糖(GAG)結合結構域，其包括SEQ ID NO :7的胺基酸序列，或(c)含有治療有效量的具有唾液酸酶或其活性部分和錨定結構域的融合蛋白的組合物或化合物。這些組合物或化合物的治療有效量包括在施用該組合物之後在受治療者的呼吸道中限制粘液的量的增加超過基線水平的量。在一些實施方案中，所用的組合物或化合物可包括單獨的或不同的組合的另外的化合物，所述另外的化合物包括但不限於以下的一種或多種Na2S04、MgSO4, CaCl2、組氨酸、組氨酸鹽酸鹽和海藻糖或它們的類似物、鎂鹽和/或鈣鹽。這些另外的化合物可包括在藥物組合物中以用作賦形劑或作為提供另外的有利作用的活性成分。待用前述的方法治療的受治療者可以是人類受治療者或非人類動物受治療者。本文所描述的化合物和組合物可通過多種施用途徑施用於受治療者的上皮細胞，所述多種施用途徑包括但不限於，通過利用吸入器以將化合物或組合物導入到受治療者的呼吸道中。在一些優選的實施方案中，本文所描述的化合物可作為吸入劑利用吸入器來遞送或作為鼻噴霧來遞送。還可將它們作為待應用於皮膚的滴眼劑、滴耳劑或噴霧、軟膏、洗劑或凝膠來施用。還可將它們靜脈內施用或作為局部注射(local injection)來施用。減少或阻I h呼吸道中的炎症本發明涉及意外的發現施用美國申請第10/718，986號和第10/939，262號中所描述的化合物或含有它們的組合物減少呼吸道中炎性細胞的量。從而，本發明涉及可用於減少呼吸道中的炎症或阻止呼吸道中的炎症惡化的治療性組合物或化合物。本發明還包括減少呼吸道中的炎症或阻止呼吸道中的炎症惡化的方法。而且，本發明涉及可用於預防或治療由呼吸道炎症導致、導致呼吸道炎症或由呼吸道炎症加重的疾病的治療性組合物或化合物，所述疾病比如，變應性哮喘和非變應性哮喘兩者、變應性鼻炎、溼疹、牛皮癬、對植物毒素或動物毒素的反應、自身免疫病、和導致呼吸道中的炎症或由呼吸道中的炎症所導致或加重的任何其他疾患、疾病或病症。在一些優選的實施方案中，方法包括向受治療者施用含有治療有效量的具有唾液酸酶或其活性部分的蛋白或肽的組合物或化合物。蛋白或肽可以是分離的天然存在的唾液酸酶蛋白，或與天然存在的唾液酸酶的至少一部分基本上同源的重組蛋白。優選的藥物組合物含有與粘放線菌唾液酸酶(SEQ ID NO 12)具有基本同源性或與其活性部分具有基本同源性的唾液酸酶，所述其活性部分比如SEQ ID NO 12的胺基酸274-666、274-667、270-667,274-681或290-681、或粘放線菌唾液酸酶的任何其他催化結構域。治療有效量包括在施用該組合物或化合物之後阻止或減少呼吸道中的變應性應答或炎症應答的蛋白或肽的量。在另外的實施方案中，方法包括施用含有治療有效量的融合蛋白的組合物或化合物，其中所述融合蛋白具有至少一個唾液酸酶催化結構域和至少一個錨定結構域，其中所述唾液酸酶催化結構域包括從SEQ ID NO : 12的胺基酸274延伸到胺基酸666 (可選地，SEQID NO 12的274-666、270-667、274-681、290-681、或粘放線菌唾液酸酶的任何其他催化結構域)的胺基酸序列(包括端點)，其中所述錨定結構域是人類雙調蛋白的糖胺聚糖(GAG)結合結構域，其包括SEQ ID NO :7的胺基酸序列。治療有效量包括在施用該組合物或化合物之後阻止或減少呼吸道中的變應性應答或炎症應答的融合蛋白的量。在又一些另外的實施方案中，方法包括施用含有治療有效量的具有唾液酸酶或其活性部分和錨定結構域的融合蛋白的組合物或化合物。治療有效量包括在施用該組合物或化合物之後阻止或減少呼吸道中的變應性應答或炎症應答的融合蛋白的量。在一些實施方案中，所用的組合物或化合物可包括單獨的或不同的組合的另外的化合物，所述另外的化合物包括但不限於以下的一種或多種Na2S04、MgSO4, CaCl2、組氨酸、 組氨酸鹽酸鹽和海藻糖或它們的類似物。這些另外的化合物可包括在藥物組合物中以用作賦形劑或作為提供另外的有利作用的活性成分。待用前述的方法治療的受治療者可以是人類受治療者或非人類動物受治療者。本文所描述的組合物和化合物可通過多種施用途徑施用於受治療者的上皮細胞，所述多種施用途徑包括但不限於，通過利用吸入器以將化合物或組合物導入到受治療者的呼吸道中。在一些優選的實施方案中，本文所描述的組合物或化合物可作為吸入劑利用吸入器來遞送或作為鼻噴霧來遞送。還可將它們作為待應用於皮膚的滴眼劑、滴耳劑或噴霧、軟膏、洗劑或凝膠來施用。還可將它們靜脈內施用或作為局部注射來施用。圖7A-B顯示使用圖5中所描繪的融合蛋白構建體之一對感染人類未適應流感(unadapted influenza)的雪紹的炎性細胞的作用的結果。在雖然用融合蛋白處理仍脫落病毒的雪貂中(n = 8)，炎症應答減少，並且與一直昏睡和發燒的未處理的雪貂相比較，動物表現得更機敏和有活力。對於該組的8隻感染的、融合蛋白處理的動物，與運載體處理的(磷酸鹽緩衝鹽水)感染的動物相比較，對於鼻蛋白濃度所計算的平均AUC(曲線下面積)值減少約40% (2. 68對比4. 48，任意單位)(圖7B)。在攻擊後第2天，在運載體處理的感染的動物中，鼻洗液中的炎性細胞的數量增高至比未感染的動物中的那些高約100倍。這些水平繼續持續4天。融合蛋白處理的動物表現出鼻洗液中的炎性細胞的數量的顯著減少。具體地，與運載體處理的感染的動物相比較，融合蛋白處理的動物中的細胞計數的AUC值減少約3倍(1965對比674，任意單位)(圖7B)。所觀察到的炎症應答的減少表明在感染早期抑制病毒複製的重要性。姐量如將容易對本領域中的技術人員明顯的，待施用的有用的體內劑量和施用的特定方式將根據被治療的患者的年齡、體重和類型、所應用的特定的藥物組合物和應用藥物組合物的特定用途而變化。有效的劑量水平即獲得期望的結果所需的劑量水平的確定，可由本領域中的技術人員利用如以上所討論的常規方法來實現。在非人類動物研究中，藥物組合物的應用起始於較高的劑量水平，然後降低劑量直至不再獲得期望的效果或副作用降低或消失。本發明的化合物的劑量可根據期望的作用、治療適應症、施用途徑、和化合物的純度和活性而寬泛地變動。通常，產物的人類臨床應用起始於較低的劑量水平，然後增高劑量水平直至獲得期望的效果。可選地，可使用可接受的體外研究來確定檢驗化合物的有用的劑量和施用途徑。通常，劑量可以在約lng/kg和約10mg/kg之間、約10ng/kg和約lmg/kg之間、約100ng/kg和約100微克/kg之間。在本文所描述的不同的實例中，小鼠用本文所描述的組合物的不同劑量來治療，包括 0008mg/kg>. 004mg/kg、. 02mg/kg、. 06mg/kg、0. lmg/kg、0. 3mg/kg、0. 6mg/kg和I. Ogm/kg的劑量。作為非限制性實例，本文所描述的組合物可以約.Olmg 和約 IOOmg 之間，比如約.05mg、. 06mg、0. lmg、0. 5mg、lmg、5mg、10mg、20mg、50mg 或IOOmg的劑量施用於人類,且可每天施用一次或多次，持續I天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天或14天或更多天。還可施用更高劑量或更低劑量。在一個實施方案中，如以下的實施例3中所示，.06mg/kg的唾液酸酶化合物的劑量足以使毒蕈鹼受體去唾液酸化(desialylate)，導致對毒蕈鹼受體激動劑減少的氣道反應性，且因此可能導致減少氣道狹窄、氣道超敏反應、炎症、變態反應或相關的應答，比如支氣管收縮、哮喘和粘液過度產生。諸如.06mg/kg(在成人中轉化為約4mg或5mg的劑量)或.02mg/kg (在成人中轉化為約Img或2mg的劑量)的低劑量的效力使本文所描述的基於唾液酸酶的化合物成為用於需要重複的長期施用的慢性疾病的良好的候選物。
治療方案可包括從每天I次到每天10次、從每天I次到每天6次、從每天I次到每天5次、從每天I次到每天4次、從每天I次到每天3次、從每天I次到每天2次、和僅每天I次施用本文所描述的化合物和組合物。治療可持續從僅I天到每天、每周、每月或其他周期性施用，持續預定的時間段或持續受治療者的剩餘壽命。確切的製劑、施用途徑和劑量可由個體醫師按照患者的狀況來選擇(參見，Fingle 等人，於 The Pharmacological Basis of Therapeutics (1975))。應注意主治醫師將根據毒性、器官功能障礙或其他副作用來知道如何及何時終止、中斷或調整施用。相反地，如果臨床響應不足，主治醫師還將知道調整治療至較高水平。在感興趣的疾患的治療中，施用的劑量的大小將隨待治療的病症的嚴重度和施用途徑而變化。病症的嚴重度可以，例如，通過標準的預後評價方法來部分地評價。並且，劑量和可能的給藥頻率，包括用於獸醫應用的那些，也將根據個體患者的年齡、體重和響應而變化。在一些優選的方案中，適當的劑量通過吸入器、鼻噴霧或通過局部應用施用於每個患者。然而，將理解的是，對於任何特定的患者的特定劑量水平和給藥頻率可以是不同的，且將取決於多種因素，包括所用的特定的鹽或其他形式的活性、該化合物的代謝穩定性和作用時間長度、年齡、體重、基本健康狀況、性別、飲食、施用的方式和時間、排洩速率、藥物組合、具體病症的嚴重度和經歷治療的宿主。在一些實施方案中，本公開內容提供使用本文所公開的組合物(以下表示為「X」)中的任何一種或多種的方法，在以下方法中物質X，其用作治療過量粘液或異常的(例如，當與一個或多個健康受治療者(例如，同一種族的和/或相同或相似的地理位置中的)相比較時或如通過保健醫生所指出的高於正常粘液水平)、增高的粘液產生、和/或本文所公開的疾病/病症中的任何一種或多種的藥物；(其每一種在以下的實施例中總稱為『V )。物質X用於生產用來治療Y的藥物的用途；和用於治療Y的物質X。實施例以下實施例中進一步描述本發明，其並不限制權利要求書中所描述的本發明的範圍。實施例I.唾液酸酶處理對豚鼠中早期和晚期哮喘反應的作用
I.概述在該研究中，在變應性哮喘的豚鼠模型中檢驗Fludase 。用卵白蛋白(OVA)或鹽水使豚鼠敏化，並在15天或20天之後用Hudasef)或硫酸鈉處理它們。在第21天，用ova攻擊所有動物以測量早期哮喘反應。確定氣道順應性/阻力並從左肺取得支氣管-肺泡灌洗(BAL)液以計數細胞的總數並區分它們。2 引言該研究的主要目的是為了獲得Fludase 對哮喘的豚鼠模型中的早期反應和晚期反應的作用的表徵。參與研究的豚鼠是初次接受試驗的，且因此未感染流感或作為實驗的部分的其他傳染原。在第0天通過利用OVA使豚鼠敏化而誘導哮喘。在15或20天之後，用Fludasc.凡(0. 3mg/kg)或硫酸鈉(0. 143mM, pH 5. 0)氣管內處理豚鼠。在第21天，豚鼠接受OVA氣溶膠並測量氣道反應性(PenH)。在第22天，確定肺阻力和順應性。以2分鐘的時間間隔通過靜脈內注射施用劑量從0. 2-2ug/kg的組胺。在實驗結束後，處死豚鼠並灌洗左肺並洗滌分離的BAL細胞，計數並區分為巨噬細胞、淋巴細胞、嗜中性粒細胞和嗜曙紅細胞。3.材料和方法動物無特定病原體品質的雄性Hartley系豚鼠(HSD Poc DH,重400-500)獲自Harlan-CPB (Zeist, The Netherlands)。在其對飼養條件適應I周后進行使用。無限制供應水和商業飼料。實驗經烏得勒支大學動物倫理委員會(Animal Ethics Committee of theUtrecht University) (Utrecht, The Netherlands)批准。敏化、預處理和攻擊用鹽水(含100mg/ml Al (OH) 3 的溶液)或 OVA (含 20 y g/ml OVA 和 IOOmg/ml Al(OH)3的溶液)使豚鼠敏化，腹膜內施用0.5ml且皮下施用5X0. 1ml，總注射體積lml。15或20天之後用0. 3mg/kg丨.Imhiset處理動物一次，並在第20天通過氣管滴注法用硫酸鈉(0. 143mM, pH 5.0)處理對照動物。使用喉鏡以協助定位會厭。然後利用IA-ICMicroSprayer (Penn Century, Inc,Philadelphia,USA)以液體氣溶膠提供丨'Unsc.'丨<■:或硫酸鈉。在氣管滴注法過程中豚鼠處於直立位。在該氣管滴注法過程中，用Kctaminc , XyIa/川凡、阿託品和鹽水
(3. 5 3 I 3)的150 ill的混合物肌內注射到後爪中來麻醉豚鼠。在第21天,通過暴露於氣溶膠OVA (0. I % wt/vol於無菌鹽水中)來攻擊豚鼠。將氣溶膠產生到其中放置豚鼠的3升有機玻璃室中。首先測量基礎支氣管收縮(PenH)。用OVA氣溶膠激發豚鼠10秒鐘。攻擊之後立即測量早期哮喘反應(PenH)。清醒無拘束豚鼠中變應原誘導的早期哮喘反應在暴露於氣溶膠化的OVA之後立即在通風偏流全身體積描記器(BuxcoElectronics, Sharon CT, USA)中測量動物的氣道功能。體積描記器由參考室和動物室組成。動物室經由體積描記器頂部中的呼吸速度描記儀與外部連接。通向動物室的氣溶膠入口位於動物室的頂的中心。當動物被置於動物室中並平靜呼吸時，呼吸過程中潮氣量和胸廓運動之間產生壓力。差壓傳感器測量動物室和參考室之間的壓力的變化並將這些數據傳遞至前置放大器。之後，數據被傳送至計算機，在那裡計算一些參數，其代表動物的肺功能。在全身體積描記器中對所用的所有豚鼠進行5分鐘的基礎測量，且在氣溶膠之後進行15分鐘的測量。除已知的肺功能參數如呼氣流速峰值(PEF)和潮氣量(TV)之外，還測量了增強的呼吸間歇(PenH)。PenH的式和解釋顯示於圖8中。在支氣管收縮過程中呼氣流速峰值和吸氣流速峰值是增加的，而放鬆時間(relaxation time)和呼氣時間是減少的。這導致了增高的PenH。來自清醒無拘束的豚鼠中的支氣管收縮的數據以PenH展示(圖8)。體內氣道反應性 在第22天，利用腹膜內施用2g/kg尿烷麻醉豚鼠。使動物自主呼吸。通過將動物置於加熱的室中來避免麻醉導致的體溫下降，所述加熱的室將體溫保持在37°C。為進行肺阻力(Rl)和順應性(C)的測量如下準備豚鼠。將小的聚乙烯導管(PE-50)置於右頸靜脈中以用於靜脈內施用漸增劑量的組胺(0.2-2i!g/kg)。首先測量基礎&和C 5分鐘。之後注射漸增劑量的組胺並測量&和C 2分鐘。通過插套管於氣管並利用Fleisch流量頭(nr000 ；Meijnhart, Bunnik, The Netherlands)將氣管連接到呼吸速度描記儀來確定氣流量和潮氣量。壓力傳感器(MP45-2 型；Validyne Engineering Corp.，Northridge, CA)通過確定氣管套管和插入到食道中的充有鹽水的套管之間的壓力差測量跨肺壓。利用呼吸分析儀確定每呼吸的&和(。通過用跨肺壓除以等體積點處的氣流量產生通過用體積除以等流量點處的跨肺壓確定C。數據表示為最大&和最小C，單位分別為cm H20/ml*秒―1和ml/cm H2O0支氣管-肺泡肺灌洗細胞的收集按如下獲得支氣管-肺泡灌洗細胞。修剪氣管使其無結締組織和血管並製作用於將套管插入到氣管中的小切口。束緊右肺以僅灌洗左肺。左肺在原位充入37°C的5ml鹽水(0.9% NaCl)0輕輕按摩後從肺中提取液體並收集到在冰上(4°C)的塑料管中。重複該過程3次(共15ml)並匯集從每個動物中回收的細胞懸浮液。之後，通過在4°C下以1500rpm離心5分鐘而沉澱細胞。棄去上清液並將沉澱物重新懸浮於Iml鹽水中。分離過程始終僅使用塑料管以使細胞對管壁的貼壁最小化。細胞計數和區分用Tiirk溶液染色細胞並在Biirker-Tiirk明線計數池中計數細胞(顯微鏡，放大倍數100 X)。為進行BAL細胞分類計數，製作了細胞離心塗片製備物並用DifT-Quick (Merz &Dade A. G. , Diidingen, Switzerland)染色。編碼後,通過一位觀察者利用油浸顯微術(放大倍數1000X)對所有細胞離心塗片製備物進行評價。通過標準形態學將細胞分為巨噬細胞、淋巴細胞、嗜中性粒細胞和嗜曙紅細胞。每細胞離心塗片製備物計數至少200個細胞，並且計算每個細胞類型的絕對數目。統計分析除非另外指明，數據表示為算術平均值土平均值的標準誤，並利用Student』 s t檢驗在組之間進行比較。認為概率值P < 0. 05是顯著的。
4.結果清醒無拘束豚鼠中的氣道反應性如圖9中所示，在第15天或第20天用硫酸鈉處理的或用DAS181處理的鹽水豚鼠之間的基礎氣道阻力無差異(PenH = 0.24±0.009鹽水-硫酸鈉處理的豚鼠，0. 25±0. 01鹽水-Flu第15天處理的豚鼠，0. 28±0. 01鹽水-Flu第20天處理的豚鼠)。在第15天或第20天用硫酸鈉或KludaseS處理的OVA豚鼠之間在基礎水平上也無差異(PenH = 0. 25±0. 010VA-硫酸鈉處理的豚鼠，0. 27±0. 020VA_Flu第15天處理的豚鼠，
0.31 ±0. 030VA-F1U第20天處理的豚鼠)。Ova攻擊在鹽水敏化的動物中稍微增高了基礎氣道阻力(S0D，Flul5和20，圖2)。然而，在OVA-硫酸鈉處理的豚鼠中響應於OVA氣溶膠的早期哮喘反應顯著增加了(PenH =·1.57 + 0. 45)。在第15天用Fh丨dnsW處理之後早期哮喘反應減少了近30%，但在第20天處理之後未發生減少。支氣管-肺泡灌洗液中的細胞計數如圖10中所示，]_'ludase::K減少鹽水豚鼠和OVA豚鼠兩者中的細胞總數。支氣管-肺泡灌洗液中的細胞分類計數如圖11中所示，與鹽水處理組相比較，OVA豚鼠中的巨噬細胞的數目增高(30%)。在第15天和第20天用Hmkisct處理之後鹽水處理的豚鼠和OVA處理的豚鼠兩者中的巨噬細胞的總數均顯著減少。如圖12中所示，關於淋巴細胞的數目觀察到了相似的模式。在Fhidase⑩處理之後淋巴細胞的數目減少。如圖13中所示，與歷史對照相比較，SOD誘導了流入肺中的嗜中性粒細胞的數目的顯著增加。有趣的是，在鹽水組和ova組二者中Fludase 均完全阻止了這種流入。如圖14中所示,與歷史對照相比較,SOD還誘導了嗜曙紅細胞流入到氣道中，所述流入通過OVA攻擊而進一步增高。有趣的是，Fludase 處理可恢復嗜曙紅細胞的數目至高達歷史對照水平。5.討論/結論如通過OVA攻擊後PENH的增加和BAL-液中的炎性細胞的數目的增加所測量的，OVA敏化和攻擊的動物表現早期和晚期哮喘反應。有趣的是，I huiMSC^ (Flul 5)減少了早期哮喘反應達近30% (圖9)，表明該化合物對肥大細胞刺激的作用。並且，Fludase 對由sod或ova導致的炎症具有極大作用。該化合物顯著減少了所有炎性細胞(巨噬細胞、淋巴細胞、嗜中性粒細胞和嗜曙紅細胞)的數目。總之,Fludase 在sod誘導的炎症和ova誘導的炎症二者中表現為有效。實施例2. Fludase在急性OVA誘導的哮喘的小鼠模型中的作用I 引言本研究的目的是研究Hudase (也稱作DASl 81)是否⑴在哮喘的急性OVA攻擊小鼠模型中抑制變應原誘導的氣道炎症和氣道高反應性。除研究單獨的DAS181作為幹預的作用之外，在小鼠哮喘模型中研究了 3種其他幹預，包括a)DAS181+賦形劑(用作乾粉製劑以在體內遞送DAS181)，b)單獨的賦形劑，和c)地塞米松(作為比較物)。
2.材料和方法小鼠12周齡的雌性BALB/c小鼠購自Charles River並飼養於UCSD動物飼養所。其在UCSD動物飼養所中適應約一周後進行使用。OVA敏化和OVA攻擊在第0天、第7天、第14天和第21天用200 生理鹽水中的吸附於Img明礬的25iig OVA皮下免疫小鼠以誘導顯著的Th2免疫應答。在第26天開始鼻內OVA攻擊(20 u g/50 u I)且然後在第28天和第30天進行重複。在無OVA組中，使小鼠對OVA敏化但並不用OVA進行鼻內攻擊。在第31天，在最後一次OVA攻擊之後24小時通過Penh進行測量，小鼠對醋甲膽鹼(Mch)具有氣道反應性。參與研究的小鼠是初次接受試驗的且因此未感染流感或作為實驗的部分的其他傳染原。然後立即處死小鼠。為獲得以下詳細的結果， 處理支氣管肺泡灌洗液(BAL)、血液和肺組織。向小鼠施用檢驗化合物I.受檢化合物在哮喘的小鼠模型中研究了以下的化合物a)DAS181 加賦形劑(0.6mg/kg 鼻內):在 PBS 中製備 DAS181-F02 (NexBio，Inc.分部#43-071，批#47-034)至20mg DAS/ml。對於平均體重2Ig的小鼠，在每次給藥之前，將其新鮮稀釋於PBS中至0. 6mgDAS181/kg，給藥體積為50 yl。b)DASl8I (0. 6mg/kg 鼻內)c)賦形劑(50 u L/小鼠)賦形劑(416TL022A)由NexBio, Inc.提供作為溶液，每種賦形劑組分的濃度與其在20mg DAS181/ml中的濃度相等(MgSO4L 446mg/ml、CaCl2O. 059mg/ml、組氨酸 I. 427mg/ml、組氨酸鹽酸鹽 I. 943mg/ml、和海藻糖 3. 000mg/ml)。如a)中一樣，將其新鮮稀釋於PBS中以用於給藥。對於平均體重21g的小鼠，50ii I中每種賦形劑組分的終濃度與其在0. 6mg DAS181/kg中的濃度相等。d)地塞米松(1.0mg/kg腹膜內)以如下方式製備賦形劑溶液。計算每種賦形劑的目標終濃度以達到與當DAS181-F02整裝乾粉以20mg蛋白/mL重構時的濃度相等的濃度。然後製備每種賦形劑的10X貯存液(對於氯化鈣為100X)(每種IOmL)。用於製備貯存液的材料列於表I中。所有材料均是USP級別或等同物。根據表2將適量的每種賦形劑稱重到15mL錐形管中，並添加水以使總重量至IOg並渦旋以徹底溶解物質。通過添加ImL的每種貯存溶液來製備最終IX賦形劑溶液，且然後利用水使體積至10mL。重量分析地進行所有樣品的製備，假定溶液密度為lg/mL。雖然在這些實例中稱作「賦形劑」或「賦形劑」溶液，這些另外的化合物可具有關於減少粘液和減少炎症和炎性細胞的另外的有利作用。這些賦形劑還可與DAS181具有協同作用。表I.物質信息
權利要求
1.一種減少受治療者的呼吸道中粘液的量或水平或阻止粘液的量或水平增高的方法，所述方法包括 向所述受治療者施用包括治療有效量的融合蛋白的化合物或組合物，其中所述融合蛋白包括至少一個唾液酸酶催化結構域和至少一個錨定結構域，其中所述唾液酸酶催化結構域包括從SEQ ID NO: 12的胺基酸274延伸至胺基酸666的胺基酸序列(包括端點)，其中所述錨定結構域是人類雙調蛋白的糖胺聚糖(GAG)結合結構域，包括SEQ IDNO 7的胺基酸序列；和 所述治療有效量包括當與施用所述化合物或組合物之前存在的粘液的量相比較時，在施用所述化合物或組合物之後導致所述呼吸道中的粘液的量減少的所述融合蛋白的量。
2.如權利要求I所述的方法，其中所述組合物還包括一種或多種另外的化合物。
3.如權利要求2所述的方法，其中所述一種或多種另外的化合物包括MgSO4或其類似物。
4.如權利要求2所述的方法，其中所述一種或多種另外的化合物包括CaCl2或其類似物。
5.如權利要求2所述的方法，其中所述一種或多種另外的化合物包括組氨酸或其類似物。
6.如權利要求2所述的方法，其中所述一種或多種另外的化合物包括組氨酸鹽酸鹽或其類似物。
7.如權利要求2所述的方法，其中所述一種或多種另外的化合物包括海藻糖或其類似物。
8.如權利要求2所述的方法，其中所述一種或多種另外的化合物包括MgS04、CaCl2、組氨酸、組氨酸鹽酸鹽和海藻糖。
9.如權利要求1-8所述的方法，其中所述化合物或組合物被配製為噴霧。
10.如權利要求1-8所述的方法，其中所述化合物或組合物被配製為吸入劑。
11.如權利要求1-8所述的方法，其中所述化合物或組合物被配製為用於注射的溶液。
12.如權利要求1-8所述的方法，其中所述化合物或組合物被配製為乳劑、藥膏、凝膠或軟膏。
13.如權利要求1-8所述的方法，其中所述化合物或組合物被配製為可被口服施用的丸劑、片劑、錠劑、懸浮液或溶液。
14.如權利要求1-8所述的方法，其中所述施用通過使用鼻噴霧來進行。
15.如權利要求1-8所述的方法，其中所述施用通過使用吸入器來進行。
16.如權利要求1-8所述的方法，其中從一天I次至一天4次來進行所述施用。
17.如權利要求1-8所述的方法，其中所述施用通過局部應用來進行。
18.如權利要求1-8所述的方法，其中所述施用通過口服施用來進行。
19.如權利要求1-8所述的方法，其中所述施用通過局部注射或靜脈內注射來進行。
20.如權利要求1-19所述的方法，其中所述受治療者是人類。
21.如權利要求1-19所述的方法，其中所述受治療者是非人類動物。
22.如權利要求1-20所述的方法，其中所述受治療者患有以下病症中的一種或多種慢性阻塞性肺病(COPD)、支氣管炎、支氣管擴張、囊性纖維化(CF)、血管炎、粘液栓塞、韋格納氏肉芽腫病、肺炎、結核病、涉及肺或呼吸道的癌症、卡塔格納症候群、楊氏症候群、慢性竇肺感染、a I-抗胰蛋白酶缺陷、原發性免疫缺陷、獲得性免疫缺陷症候群、機會感染、感染狀態、感染後狀態、感冒、運動誘發粘液分泌過多、炎性腸病、潰瘍性結腸炎、克羅恩病、呼吸道感染、呼吸道阻塞、毒氣的吸入或吸氣、肺吸入或酒精中毒。
23.如權利要求1-22所述的方法，其中所述融合蛋白具有SEQID NO :21中所列的序列。
24.一種減少受治療者的呼吸道中粘液的量的方法，所述受治療者在所述呼吸道中具有增高的粘液水平，所述方法包括 向所述受治療者施用包括治療有效量的肽的化合物或組合物，所述肽包括唾液酸酶或其活性部分和任選地錨定結構域，其中 所述治療有效量包括當與施用所述化合物或組合物之前存在的粘液的量相比較時，在施用所述化合物或組合物之後導致所述呼吸道中的粘液的量減少的所述肽的量。
25.如權利要求24所述的方法，其中所述唾液酸酶或其活性部分與產氣莢膜梭菌(Clostridium perfringens)唾液酸酶或其催化結構域基本上同源，與粘放線菌(Actinomyces viscosus)唾液酸酶或其催化結構域基本上同源，與產脲節桿菌(Arthrobacter ureafaciens)唾液酸酶或其催化結構域基本上同源，與產綠小單胞菌(Micromonospora viridifaciens)唾液酸酶或其催化結構域基本上同源，與人類Neu2唾液酸酶或其催化結構域基本上同源，或與人類Neu4唾液酸酶或其催化結構域基本上同源。
26.如權利要求25所述的方法，其中所述唾液酸酶或其活性部分與粘放線菌唾液酸酶或其催化結構域基本上同源。
27.如權利要求24所述的方法，其中所述肽包括錨定結構域，其中所述錨定結構域是糖胺聚糖(GAG)結合結構域。
28.如權利要求27所述的方法，其中所述GAG結合結構域與人類血小板因子4的GAG結合結構域基本上同源，與人類白介素8的GAG結合結構域基本上同源，與人類抗凝血酶III的GAG結合結構域基本上同源，與人類載脂蛋白E的GAG結合結構域基本上同源，與人類脈管關聯遷移細胞蛋白的GAG結合結構域基本上同源，或與人類雙調蛋白的GAG結合結構域基本上同源。
29.如權利要求28所述的方法，其中所述GAG結合結構域與人類雙調蛋白的GAG結合結構域基本上同源。
30.如權利要求24所述的方法，其中所述組合物還包括一種或多種另外的化合物。
31.如權利要求30所述的方法，其中所述一種或多種另外的化合物包括MgSO4或其類似物。
32.如權利要求30所述的方法，其中所述一種或多種另外的化合物包括CaCl2或其類似物。
33.如權利要求30所述的方法，其中所述一種或多種另外的化合物包括組氨酸或其類似物。
34.如權利要求30所述的方法，其中所述一種或多種另外的化合物包括組氨酸鹽酸鹽或其類似物。
35.如權利要求30所述的方法，其中所述一種或多種另外的化合物包括海藻糖或其類似物。
36.如權利要求30所述的方法，其中所述一種或多種另外的化合物包括MgS04、CaCl2,組氨酸、組氨酸鹽酸鹽和海藻糖。
37.如權利要求24-36所述的方法，其中所述化合物或組合物被配製為噴霧。
38.如權利要求24-36所述的方法，其中所述化合物或組合物被配製為吸入劑。
39.如權利要求24-36所述的方法，其中所述化合物或組合物被配製為用於注射的溶液。
40.如權利要求24-36所述的方法，其中所述化合物或組合物被配製為乳劑、藥膏、凝膠或軟膏。
41.如權利要求24-36所述的方法，其中所述化合物或組合物被配製為可被口服施用的丸劑、片劑、錠劑、懸浮液或溶液。
42.如權利要求24-36所述的方法，其中所述施用通過使用鼻噴霧來進行。
43.如權利要求24-36所述的方法，其中所述施用通過使用吸入器來進行。
44.如權利要求24-36所述的方法，其中從一天I次至一天4次來進行所述施用。
45.如權利要求24-36所述的方法，其中所述施用通過局部應用來進行。
46.如權利要求24-36所述的方法，其中所述施用通過口服施用來進行。
47.如權利要求24-36所述的方法，其中所述施用通過局部注射或靜脈內注射來進行。
48.如權利要求24-47所述的方法，其中所述受治療者是人類。
49.如權利要求24-47所述的方法，其中所述受治療者是非人類動物。
50.如權利要求24-48所述的方法，其中所述受治療者患有以下病症中的一種或多種慢性阻塞性肺病(COPD)、支氣管炎、支氣管擴張、囊性纖維化(CF)、血管炎、粘液栓塞、韋格納氏肉芽腫病、肺炎、結核病、涉及肺或呼吸道的癌症、卡塔格納症候群、楊氏症候群、慢性竇肺感染、a I-抗胰蛋白酶缺陷、原發性免疫缺陷、獲得性免疫缺陷症候群、機會感染、感染狀態、感染後狀態、感冒、運動誘發粘液分泌過多、炎性腸病、潰瘍性結腸炎、克羅恩病、呼吸道感染、呼吸道阻塞、毒氣的吸入或吸氣、肺吸入或酒精中毒。
51.如權利要求24-50所述的方法，其中所述融合蛋白具有SEQID NO :21中所列的序列。
52.一種在受治療者的呼吸道中限制粘液的量的增加超過所述受治療者的呼吸道中的粘液的基線水平的方法，所述方法包括 向所述受治療者施用包括治療有效量的融合蛋白的化合物或組合物，其中所述融合蛋白包括至少一個唾液酸酶催化結構域和至少一個錨定結構域，其中所述唾液酸酶催化結構域包括從SEQ ID NO : 12的胺基酸274延伸至胺基酸666的胺基酸序列(包括端點)，其中所述錨定結構域是人類雙調蛋白的糖胺聚糖(GAG)結合結構域，包括SEQ IDNO 7的胺基酸序列；和 所述治療有效量包括在施用所述化合物或組合物之後限制所述受治療者的呼吸道中的粘液的量的增加超過基線水平的所述融合蛋白的量。
53.如權利要求52所述的方法，其中所述組合物還包括一種或多種另外的化合物。
54.如權利要求53所述的方法，其中所述一種或多種另外的化合物包括MgSO4或其類似物。
55.如權利要求53所述的方法，其中所述一種或多種另外的化合物包括CaCl2或其類似物。
56.如權利要求53所述的方法，其中所述一種或多種另外的化合物包括組氨酸或其類似物。
57.如權利要求53所述的方法，其中所述一種或多種另外的化合物包括組氨酸鹽酸鹽或其類似物。
58.如權利要求53所述的方法，其中所述一種或多種另外的化合物包括海藻糖或其類似物。·
59.如權利要求53所述的方法，其中所述一種或多種另外的化合物包括MgS04、CaCl2,組氨酸、組氨酸鹽酸鹽和海藻糖。
60.如權利要求52-59所述的方法，其中所述化合物或組合物被配製為噴霧。
61.如權利要求52-59所述的方法，其中所述化合物或組合物被配製為吸入劑。
62.如權利要求52-59所述的方法，其中所述化合物或組合物被配製為用於注射的溶液。
63.如權利要求52-59所述的方法，其中所述化合物或組合物被配製為乳劑、藥膏、凝膠或軟膏。
64.如權利要求52-59所述的方法，其中所述化合物或組合物被配製為可被口服施用的丸劑、片劑、錠劑、懸浮液或溶液。
65.如權利要求52-59所述的方法，其中所述施用通過使用鼻噴霧來進行。
66.如權利要求52-59所述的方法，其中所述施用通過使用吸入器來進行。
67.如權利要求52-59所述的方法，其中從一天I次至一天4次來進行所述施用。
68.如權利要求52-59所述的方法，其中所述施用通過局部應用來進行。
69.如權利要求52-59所述的方法，其中所述施用通過口服施用來進行。
70.如權利要求52-59所述的方法，其中所述施用通過局部注射或靜脈內注射來進行。
71.如權利要求52-70所述的方法，其中所述受治療者是人類。
72.如權利要求52-70所述的方法，其中所述受治療者是非人類動物。
73.如權利要求52-72所述的方法，其中所述受治療者患有以下病症中的一種或多種慢性阻塞性肺病(COPD)、支氣管炎、支氣管擴張、囊性纖維化(CF)、血管炎、粘液栓塞、韋格納氏肉芽腫病、肺炎、結核病、涉及肺或呼吸道的癌症、卡塔格納症候群、楊氏症候群、慢性竇肺感染、a I-抗胰蛋白酶缺陷、原發性免疫缺陷、獲得性免疫缺陷症候群、機會感染、感染狀態、感染後狀態、感冒、運動誘發粘液分泌過多、炎性腸病、潰瘍性結腸炎、克羅恩病、呼吸道感染、呼吸道阻塞、毒氣的吸入或吸氣、肺吸入或酒精中毒。
74.如權利要求52-73所述的方法，其中所述融合蛋白具有SEQID NO :21中所列的序列。
75.一種在受治療者的呼吸道中限制粘液的量的增加超過所述受治療者的呼吸道中的粘液的基線水平的方法，所述方法包括 向所述受治療者施用含有治療有效量的肽的化合物或組合物，所述肽包括唾液酸酶或其活性部分和任選地錨定結構域，其中 所述治療有效量包括在施用所述化合物或組合物之後在所述受治療者的呼吸道中限制粘液的量的增加超過基線水平的所述肽的量。
76.如權利要求75所述的方法，其中所述唾液酸酶或其活性部分與產氣莢膜梭菌唾液酸酶或其催化結構域基本上同源，與粘放線菌唾液酸酶或其催化結構域基本上同源，與產脲節桿菌唾液酸酶或其催化結構域基本上同源，與產綠小單胞菌唾液酸酶或其催化結構域基本上同源，與人類Neu2唾液酸酶或其催化結構域基本上同源，或與人類Neu4唾液酸酶或其催化結構域基本上同源。
77.如權利要求76所述的方法，其中所述唾液酸酶或其活性部分與粘放線菌唾液酸酶或其催化結構域基本上同源。
78.如權利要求75所述的方法，其中所述肽包括錨定結構域，其中所述錨定結構域是糖胺聚糖(GAG)結合結構域。
79.如權利要求78所述的方法，其中所述GAG結合結構域與人類血小板因子4的GAG結合結構域基本上同源，與人類白介素8的GAG結合結構域基本上同源，與人類抗凝血酶III的GAG結合結構域基本上同源，與人類載脂蛋白E的GAG結合結構域基本上同源，與人類脈管關聯遷移細胞蛋白的GAG結合結構域基本上同源，或與人類雙調蛋白的GAG結合結構域基本上同源。
80.如權利要求78所述的方法，其中所述GAG結合結構域與人類雙調蛋白的GAG結合結構域基本上同源。
81.如權利要求75所述的方法，其中所述組合物還包括一種或多種另外的化合物。
82.如權利要求71所述的方法，其中所述一種或多種另外的化合物包括MgSO4或其類似物。
83.如權利要求71所述的方法，其中所述一種或多種另外的化合物包括CaCl2或其類似物。
84.如權利要求71所述的方法，其中所述一種或多種另外的化合物包括組氨酸或其類似物。
85.如權利要求71所述的方法，其中所述一種或多種另外的化合物包括組氨酸鹽酸鹽或其類似物。
86.如權利要求71所述的方法，其中所述一種或多種另外的化合物包括海藻糖或其類似物。
87.如權利要求71所述的方法，其中所述一種或多種另外的化合物包括MgS04、CaCl2,組氨酸、組氨酸鹽酸鹽和海藻糖。
88.如權利要求75-87所述的方法，其中所述化合物或組合物被配製為噴霧。
89.如權利要求75-87所述的方法，其中所述化合物或組合物被配製為吸入劑。
90.如權利要求75-87所述的方法，其中所述化合物或組合物被配製為用於注射的溶液。
91.如權利要求75-87所述的方法，其中所述化合物或組合物被配製為乳劑、藥膏、凝膠或軟膏。
92.如權利要求75-87所述的方法，其中所述化合物或組合物被配製為可被口服施用的丸劑、片劑、錠劑、懸浮液或溶液。
93.如權利要求75-87所述的方法，其中所述施用通過使用鼻噴霧來進行。
94.如權利要求75-87所述的方法，其中所述施用通過使用吸入器來進行。
95.如權利要求75-87所述的方法，其中從一天I次至一天4次來進行所述施用。
96.如權利要求75-87所述的方法，其中所述施用通過局部應用來進行。
97.如權利要求75-87所述的方法，其中所述施用通過口服施用來進行。
98.如權利要求75-87所述的方法，其中所述施用通過局部注射或靜脈內注射來進行。
99.如權利要求75-98所述的方法，其中所述受治療者是人類。
100.如權利要求75-98所述的方法，其中所述受治療者是非人類動物。
101.如權利要求75-100所述的方法，其中所述受治療者患有以下病症中的一種或多種慢性阻塞性肺病(COPD)、支氣管炎、支氣管擴張、囊性纖維化(CF)、血管炎、粘液栓塞、韋格納氏肉芽腫病、肺炎、結核病、涉及肺或呼吸道的癌症、卡塔格納症候群、楊氏症候群、慢性竇肺感染、a I-抗胰蛋白酶缺陷、原發性免疫缺陷、獲得性免疫缺陷症候群、機會感染、感染狀態、感染後狀態、感冒、運動誘發粘液分泌過多、炎性腸病、潰瘍性結腸炎、克羅恩病、呼吸道感染、呼吸道阻塞、毒氣的吸入或吸氣、肺吸入或酒精中毒。
102.如權利要求75-101所述的方法，其中所述融合蛋白具有SEQID NO :21中所列的序列。
103.如權利要求1、24、52和75中任一項所述的方法，所述方法還包括選擇治療的受治療者。
104.如權利要求103所述的方法，其中所述受治療者未感染流感病毒、副流感病毒和/或呼吸道合胞病毒(RSV)中的一種或多種。
105.如權利要求103所述的方法，其中所述受治療者未感染活性流感病毒、活性副流感病毒和/或活性RSV中的一種或多種。
106.如權利要求103所述的方法，其中所述受治療者未罹患哮喘。
107.如權利要求103所述的方法，其中所述受治療者未患有哮喘或不是哮喘病患者。
108.如權利要求1、24、52、75和103中任一項所述的方法，其中所述受治療者還患有流感或感染流感病毒。
109.如權利要求108所述的方法，其中所述化合物或組合物包括具有SEQID N0:21中所列的序列的蛋白或肽。
110.如權利要求52和75中任一項所述的方法，所述方法還包括在向受治療者施用所述化合物或組合物之前確定所述受治療者的呼吸道中的粘液的基線水平。
111.如權利要求110所述的方法，所述方法還包括在向所述受治療者施用所述化合物或組合物之後確定所述受治療者的呼吸道中的粘液的第二水平。
112.如權利要求112所述的方法，所述方法還包括繼續治療直到與所述受治療者的呼吸道中的粘液的基線水平相比較，在粘液的所述第二水平中所述受治療者的呼吸道中的粘液的水平下降或粘液水平的增加被限制。
113.—種方法，所述方法包括 (a)向哮喘的動物模型施用包括唾液酸酶和/或其催化活性部分的化合物或組合物的集合; (b)定量所述動物的肺中的粘液的水平； (C)將在(b)中測量的水平與在施用所述化合物或組合物的集合之前所述動物的肺中的粘液的水平相比較；和 (d)鑑定或選擇相對於不存在所述化合物或組合物時粘液的水平減少粘液的水平的化合物或組合物。
114.一種方法，所述方法包括 (a)向哮喘的動物模型施用包括唾液酸酶和/或其催化活性部分的化合物或組合物； (b)定量所述動物的肺中的粘液的水平； (C)將在(b)中測量的水平與在施用所述化合物或組合物的集合之前所述動物的肺中的粘液的水平相比較；和 (d)鑑定所述化合物或組合物是否相對於不存在所述化合物或組合物時粘液的水平減少粘液的水平。
115.一種評價包括唾液酸酶和/或其催化活性部分的化合物或組合物是否減少受治療者的呼吸道中粘液的量的方法，所述方法包括 (a)將動物受治療者的毒蕈鹼受體與包括唾液酸酶和/或其催化活性部分的化合物或組合物相接觸； (b)向所述受治療者施用毒蕈鹼受體激動劑； (C)定量所述受治療者中的氣道阻力； (d)將在(C)中測量的氣道阻力水平與不存在與所述化合物或組合物的接觸時的氣道阻力相比較； (e)鑑定所述化合物或組合物是否相對於不存在與所述化合物或組合物的接觸時的氣道阻力減少氣道阻力；和 (f)如(e)中所確定，如果所述化合物或組合物減少氣道阻力，將所述化合物或組合物評價為減少所述受治療者的呼吸道中粘液的量的化合物或組合物。
全文摘要
本發明提供減少受治療者的呼吸道中粘液的量的方法，所述受治療者在所述呼吸道中具有增高的粘液水平。該方法包括向受治療者施用包含治療有效量的融合蛋白的化合物或組合物，所述融合蛋白包括唾液酸酶或其活性部分和錨定結構域。治療有效量包括當與施用化合物或組合物之前存在的粘液的量相比較時在施用化合物或組合物之後導致呼吸道中粘液的量減少的融合蛋白的量。
文檔編號A61K38/47GK102711807SQ201080060670
公開日2012年10月3日 申請日期2010年11月5日 優先權日2009年11月6日
發明者大衛·沃特曼, 房·芳, 朗·莫斯, 麥可·馬拉科夫 申請人:耐百生物製藥有限公司