抗-連接蛋白化合物及其治療應用的製作方法

2023-10-24 03:25:12

專利名稱：：抗-連接蛋白化合物及其治療應用的製作方法
技術領域：
：本披露內容涉及藥物，包括試劑、化合物、組合物、製劑，以及用於調節間隙連接和半通道的方法，它們在例如預防和治療各種疾病、紊亂(失調)以及病症，包括但不限於心血管、神經學和血管疾病、紊亂和病症中是有用的。
背景技術：
：以下包括對理解本發明有用的信息。這並不是承認本文提供的任何信息是現有技術或與現在描述或要求保護的發明相關，或者任何明確或含蓄引用的出版物或文獻是現有技術。在大多數西方國家，冠心病是死亡的主要原因。據報導，心血管疾病的死亡率在加拿大從每100,000人的29人(男性，女性為24人)到俄羅斯聯邦每100,000人的213人(男性，女性為154人)。在其它西方國家，該死亡率為每100,000人的31-55(43～26)。約半數可歸因於中風的死亡是醫學併發症導致的，例如肺炎和敗血症，而半數歸因於神經性併發症，如新的腦梗死和腦水腫。Brott，T.andBogousslavsky，J.，NewEngl.J.Med.343710-722(2000)。在發達國家，中風是死亡的第三大主要原因並且對公眾健康具有(全面)破壞性的影響。在美國每年大約有700,000例新增中風病例發生(美國中風協會(AmericanStrockAssociation))。大約25％的中風患者由於中風或其引起的併發症死亡。此外，大約50％的中風患者需要忍受嚴重的健康損害和長期的殘疾。儘管缺血性中風(發作)的發病率在過去20年有所降低，但是人口的平均年齡增加，導致了中風的絕對數量持續增加。最近的預測表明，到2050年，美國每年會發生多於一百萬的中風。中風通常是由多種潛在的降低大腦血流量的病症引起的，並且導致殘疾或死亡。大約85％的中風實際上是缺血(血栓或血管阻塞)。FoulkesMR，etal.，Stroke；19547-54(1988)。缺血性中風可以由形成於腦動脈內部的血栓引起(血栓形成性腦中風)，或由在身體的其它處形成並移動到腦中的凝塊引起(栓子性腦中風)，血栓形成性腦中風佔所有缺血性中風的約52％。血栓形成性中風通常是動脈粥樣硬化(血管隨著脂肪的沉積、鈣和血液凝固因子例如纖維蛋白素原(fibrinogen)和膽固醇的累積被阻塞)的結果。炎症是一種多因子作用的過程，並表現在很多具有巨大的累積健康後果的疾病、紊亂和病症中。在世界範圍內，包括風溼性關節炎、狼瘡、牛皮癬、多發性硬化和哮喘的炎性疾病仍然是死亡率和發病率的主要原因。自身免疫性疾病也與炎症相關，並且正在增長，據報導在美國影響多於50百萬人。在很多自身免疫性疾病中，細胞、組織、關節和器官的損傷都是由炎症通路上大量不可控的活化引起的。風溼性關節炎(RA)是一種這樣的慢性炎性疾病，其特徵為關節的炎症，導致腫脹、疼痛以及功能喪失。在美國RA影響至少約2.5百萬人，並且RA是由包括初發感染或損傷、異常免疫應答和遺傳因素的事件組合導致的。當免疫系統變得不受調節(無序)並攻擊健康組織時，導致至少80種不同自身免疫性疾病中的任何一種。連接蛋白也稱作間隙連接蛋白質，是一種具有細胞質C和N末端的四個跨膜蛋白。六個連接蛋白結合在一起形成一個稱為「連接子」的半通道。間隙連接是提供直接細胞間通訊的結構。該間隙連接由兩個相連的連接子組成，連接子通過相鄰細胞彼此對接形成功能性間隙連接。由於連接蛋白是由核糖體翻譯，連接蛋白插入到內質網膜內。BenncttMV，ZukinRS.ElectricalcouplingandneuronalsvnchronizationintheMammalianbrain.Neuron.2004Feb19；41(4)495-511。它們在內質網膜內聚集形成半通道(連接子)，然後在囊泡中被運輸到細胞膜並且通過細胞膜擴散，直至遇到其它細胞的半通道，它們便能夠與之對接形成通道。同樣，連接蛋白上的分子允許其「識別」在它們的半通道內的其它連接蛋白和其它細胞半通道內的連接蛋白，並導致通道的正確排列和形成。KandelER，SchwartzJH，JessellTM.PrinciplesofNeuralScience，4thed.，pp.178-180，McGraw-Hill，N.Y.(2000)。連接蛋白具有共有的跨膜拓補結構，具有四個α-螺旋的跨膜結構域，兩個胞外環，一個胞質環以及細胞質N-和C-末端結構域。跨膜和胞外結構域的序列最保守，而連接蛋白之間的許多關鍵功能差異都是由這些很大程度上保守的結構域中的胺基酸差異決定的。每個胞外環包括具有固定間距的三個半胱氨酸(形成一個同功異構型)，其對於通道功能是必需的。連接(結合)通道由兩個端對端的半通道組成，每個半通道都是連接蛋白亞單位的六聚體。在連接通道中，胞外環中的半胱氨酸在兩個環之間形成單體內的二硫鍵，而不是單體間或半通道間的鍵。半通道之間的端對端的同嗜性結合(同類分子間結合，homophilicbinding)是藉助於非共價相互作用的。誘變研究表明對接區域包含β結構，並且可能在某種程度上與孔蛋白通道的β-桶狀結構相似。組成連接通道的兩個半通道彼此相對旋轉交錯約30度，使得每個連接蛋白單體的α螺旋與並列半通道中的兩個相鄰單體的α螺旋軸向對齊。在正常情況下，膜上的每個連接子或半通道保持關閉，直到其與臨近細胞的連接子對接。然而，本發明的發明人認為當表達半通道的細胞受到壓力(如生理、機械等)時，半通道即使在未對接的情況下也能夠打開。胞外半通道通訊的抑制包括抑制小分子流動通過打開的半通道到胞外或周質空間以及從胞外或周質空間流入。儘管不受任何機制的束縛或限制，但作用模式包括半通道的阻斷(部分或全部)、觸發連接子的內化作用然後從膜上除去連接子、誘導連接蛋白內的構象改變以使連接子閉合、以及掩蔽或結合至在觸發通道打開中涉及的位點(如鈣結合位點)。已經描述了連接蛋白的反義(AS)核苷酸及其應用。參見Becker等人於2000年1月27日提交的WO00/44409，「FormulationsComprisingAntisenseNucleotidestoConnexins」。
發明內容本文描述的並要求保護的發明具有許多特性和具體實施方式，包括但不限於在本
發明內容部分列出的或描述的或提及的這些。本文描述的並要求保護的發明不限於本
發明內容中限定的特點或具體實施方式或者被本
發明內容中限定的特點或具體實施方式限制，使用這些特點和具體實施方式僅僅是為了說明的目的而非限制的目的。本文描述並要求保護的發明涉及抗-連接蛋白化合物，包括多肽(例如，擬肽和肽模擬物(peptiditomimetics)，抗體和抗體片段以及合成構建體)和多核苷酸(例如，反義多核苷酸)，用於調節在所選組織、細胞和患者(例如患有心血管病症、炎性病症、神經性病症、血管病症、創傷以及其它的病症和紊亂，及其併發症的病人或者是這些疾病的危險人群)中的連接蛋白、半通道和間隙連接。本發明提供了抗-連接蛋白化合物和組合物，對於多種疾病、病症和紊亂的治療有用，其中連接蛋白、半通道和間隙連接的調節對於治療例如心血管、神經性、血管和其它病症或紊亂，包括創傷的治療都是有益的。本發明還提供了例如使用這些化合物和組合物以及藥物製劑、試劑盒和醫療設備的方法。一方面，提供了用於治療患有血管紊亂的受治者的化合物、組合物以及方法。這樣的方法包括給予受治者一種抗-連接蛋白化合物，例如反義化合物、擬肽或其它的抗-連接蛋白化合物(包括本文提供的那些)，其能夠抑制連接蛋白、半通道或間隙連接的表達、形成或活性。另一方面，提供了用於治療患有炎性紊亂的受治者的抗-連接蛋白化合物、組合物以及方法。這樣的方法包括給予受治者一種反義化合物、擬肽或其它抗-連接蛋白化合物(包括本文提供的那些)，其能夠抑制連接蛋白、半通道或間隙連接的表達、形成或活性。另一方面，提供了用於治療患有創傷的受治者的抗-連接蛋白化合物、組合物以及方法。這樣的方法包括給予患者一種反義化合物、擬肽或其它抗-連接蛋白化合物(包括本文提供的那些)，其能夠抑制連接蛋白、半通道或間隙連接的表達、形成或活性。另一方面，提供了聯合移植或嫁接操作而用於治療受治者的抗-連接蛋白化合物、組合物以及方法。這樣的方法包括給予受治者一種反義化合物、擬肽或其它抗-連接蛋白化合物(包括本文提供的那些)，其能夠抑制連接蛋白、半通道或間隙連接的表達、形成或活性。這樣的方法也能夠抑制和/或預防與移植和嫁接操作相關的組織水腫。另一方面，提供了抗-連接蛋白結合蛋白質，包括擬肽、抗體、抗體片段等，其能夠結合或調節連接蛋白半通道的表達、形成、作用或活性。結合蛋白質作為間隙連接和半通道的調節子是有用的。在某些非限制性具體實施方式中，抗-連接蛋白化合物包括包含對應於連接蛋白的跨膜區域的胺基酸序列的肽。這樣的連接蛋白包括例如連接蛋白45、43、26、30、31.1和37。人連接蛋白是優選的種類。在非限制性但優選的具體實施方式中，抗-連接蛋白化合物包括包含對應於連接蛋白45的一部分跨膜區域的胺基酸序列的肽。在具體的非限制性具體實施方式中，例如，抗-連接蛋白化合物是一種具有包括SEQIDNO62的約3至約30個連續胺基酸的胺基酸序列的肽，是一種具有包括SEQIDNO62的約5至約20個連續胺基酸的胺基酸序列的肽，是一種具有包括SEQIDNO62的約8至約15個連續胺基酸的胺基酸序列的肽，或者是一種具有包括SEQIDNO62的約11、12或13個連續胺基酸的胺基酸序列的肽。其它非限制性具體實施方式包括一種抗-連接蛋白化合物，其是具有包括SEQIDNO62的至少約3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、20、25或30個連續胺基酸的胺基酸序列的肽。在本文提供的某些抗-連接蛋白化合物中，擬肽是基於對應於SEQIDNO62的在46-75和199-228位置的胺基酸的連接蛋白45的胞外結構域。因此，本文描述的某些肽具有對應於SEQIDNO62在46-75和199-228位置區域的胺基酸序列。該肽不需要具有與SEQIDNO62的那些部分相同的胺基酸序列，並且可以形成保守性胺基酸改變，以使肽在本文描述的和其它本領域已知的化驗中可保持結合活性或功能活性。在其它具體實施方式中，擬肽是基於連接蛋白內的肽靶區域，而不是胞外結構域(例如SEQIDNO62的不對應於位置46-75和199-228的部分)。在另一個非限制性但優選的具體實施方式中，抗-連接蛋白化合物包括包含對應於連接蛋白43的部分跨膜區域的胺基酸序列的肽。在具體的非限制性具體實施方式中，抗-連接蛋白化合物是具有這樣的胺基酸序列的肽，包括具有以下胺基酸序列的肽，該胺基酸序列包括SEQIDNO63的約3至約30個連續胺基酸，SEQIDNO63的約5至約20個連續胺基酸；具有包括SEQIDNO63的約8至約15個連續胺基酸的胺基酸序列的肽，或具有包括SEQIDNO63的約11、12或13個連續胺基酸的胺基酸序列的肽。其它的非限制性具體實施方式包括一種抗-連接蛋白化合物，其是具有包含SEQIDNO63的至少約5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、20、25或30個連續胺基酸的胺基酸序列的肽。在其它的抗-連接蛋白化合物中，擬肽是基於連接蛋白43的對應於SEQIDNO63的位置37-76和178-208的胺基酸的胞外結構域。因此，本文描述的某些肽具有對應於SEQIDNO63的位置37-76和178-208的區域的胺基酸序列。這些肽不需要具有與SEQIDNO63的那些部分相同的胺基酸序列，並且可以形成保守性胺基酸改變，以使肽在本文中描述的和其它本領域已知的試驗中保持結合活性和功能活性。在其它具體實施方式中，擬肽是基於連接蛋白內的肽靶向區域，而不是胞外結構域(例如SEQIDNO63的不與位置37-76和178-208對應的部分)。本文更加詳細地描述了其它具體化合物、製備這些化合物的方法以及檢測它們的活性的方法。可替換地，抗-連接蛋白化合物(包括在某些具體實施方式中提供和使用的那些)包含一種或多種反義化合物。合適的反義化合物可以例如選自由反義寡核苷酸、反義多核苷酸、脫氧核酶、嗎啉代寡核苷酸、RNAi分子、siRNA分子、PNA分子、DNA酶、以及5』端突變的U1小核RNA，以及前述物質的類似物組成的組。這些和其它化合物可以單獨使用或者聯合一種或多種其它結合肽使用。諸如反義化合物或擬肽的抗-連接蛋白化合物可以靶向例如連接蛋白45、43、26、37、30和/或31.1中的一種或多種。在某些非限制性但優選的具體實施方式中，反義化合物或擬肽靶向連接蛋白45或連接蛋白43。在某些非限制性但優選的具體實施方式中，抗-連接蛋白化合物如反義化合物靶向一個核酸分子的至少約8個核酸鹼基，該核酸分子編碼具有選自SEQIDNO12-31的核酸鹼基(nucleobase)序列的連接蛋白。反義化合物可以包括例如靶向一個核酸分子的至少約12個核酸鹼基的反義化合物，該核酸分子編碼具有選自SEQIDNO12-31的核酸鹼基序列的核酸鹼基。在某些其它具體實施方式中，反義化合物包括選自SEQIDNO1-11的核酸鹼基序列。反義化合物可以包括例如長度在約15至約35個核酸鹼基之間，例如約25-30或約30個核酸鹼基的反義寡核苷酸。反義化合物可以包括例如包含天然核酸鹼基和未修飾的核苷間鍵(例如至少一種修飾的核苷間鍵)的反義寡核苷酸。該修飾的核苷間鍵可以包括硫代磷酸酯鍵。其它的反義化合物可以例如包括具有至少一個修飾糖部分的寡核苷酸。還是其它的反義化合物也可以包括例如具有至少一個修飾的核酸鹼基的寡核苷酸。在某些具體實施方式中，抗-連接蛋白化合物如反義化合物或擬肽可以與對於減少組織損傷或促進癒合有用的第二化合物聯合使用。第二化合物例如可以是生長因子或細胞因子等。合適的聯合(輔助)給藥化合物包括例如FGF、NGF、NT3、PDGF、TGF、VEGF、BDGF、EGF、KGF、整聯蛋白、白細胞介素、纖溶酶和信號素(semaphorins)。對於人類療法，上面列出的那些聯合給藥的化合物是人類起源或人類起源的。本發明提供了將抗-連接蛋白化合物給予患者、靶器官、靶組織或靶細胞的方法，其中對半通道調節是有利的。本發明提供了將抗-連接蛋白化合物給予患者、靶器官、靶組織或靶細胞的方法。因此，在某些非限制性具體實施方式中，通過給予抗-連接蛋白化合物來治療受治者，該化合物能夠結合於或調節以下一種或多種疾病的半通道心血管疾病、冠心病、心力衰竭、心肌梗死、動脈粥樣硬化、缺血性心臟病、心臟麻痺或其它器官移植或存儲介質(storagemedium)、再灌注損傷、呼吸或代謝酸中毒、肺水腫(包括暴露於如二氧化氮之類的毒性氣體)、破壞內皮細胞的血管病理生理學(如由節食導致的高膽固醇血症病變)、血管疾病(微血管和大血管)、中風、腦血管疾病(大腦缺血)、血栓、由創傷導致的血管損傷(例如皮下創傷、支架植入、再狹窄(restenosis)或血管成形術)、由葡萄糖水平升高(糖尿病)導致的血管損傷、骨端血管疾病、器官缺血、視神經病變、發炎和風溼性關節炎(RA)、亞慢性或慢性炎症、癲癇(癲癇發作以及癲癇發作後損傷的擴散)、糖尿病性視網膜病、黃斑變性以及某些其它的症狀，其在Harrison’s，PrinciplesofInternalMedicine15thEdition(McGrawHill，Inc.，NewYork)中有更加詳細的描述，以引用的方式結合於此。在某些其它的非限制性具體實施方式中，通過給予抗-連接蛋白化合物來治療受治者，該化合物能夠結合於或調節以下一種或多種病症的半通道，例如(1)預防或治療例如由缺血或創傷後或其導致的脊髓水腫；(2)預防或治療例如由缺血或創傷(例如在大腦、視神經、脊髓和心臟中)後或其導致的組織中血管壁降解；(3)預防或治療發炎性關節炎和其它炎性疾病，其中，例如有水腫和/或炎症症狀，或其中，例如持續發炎導致的血管萎縮；(4)預防或治療亞急性或慢性創傷，例如眼角膜損傷，其中例如預防血管萎縮允許其從角膜緣缺血中恢復；(5)預防或治療亞急性或慢性創傷，例如眼角膜創傷，作為一種例如觸發上皮重新覆蓋的方法；(6)治療燒傷，例如眼睛的化學燒傷，例如為了觸發上皮恢復並使其從亞急性角膜緣缺血中恢復；(7)預防或治療亞急性或慢性皮膚損傷，包括例如糖尿病性潰瘍，其中，例如預防持續性血管萎縮允許其從組織缺血中恢復；(8)治療慢性損傷，包括例如糖尿病性潰瘍，其中，例如連接蛋白43的持續表達，例如在其前緣處阻礙了上皮的重新覆蓋；(9)利用連接蛋白擬肽來預防或治療圍產期缺血，其可以例如直接運送到腦室或通過脊柱和/或脊髓運送；(10)利用連接蛋白擬肽來抑制或預防由圍產期缺血導致的水腫，例如直接運送到腦室或通過脊柱和/或脊髓運送；(11)例如，利用系統遞送的連接蛋白擬肽來治療圍產期缺血；(12)例如，利用系統和/或直接遞送到腦室或經過脊柱和/或脊髓遞送的連接蛋白擬肽來治療中風或CNS缺血；(13)預防大腦中的癲癇樣活動(例如癲癇)，包括缺血後的癲癇樣活動；和/或，(14)預防病變擴散、器官移植後的再灌注造成的水腫(和排異反應)。提供了用於預防和/或治療的所述方法和適應症中的能夠結合或調節連接蛋白和間隙連接的抗-連接蛋白化合物。抗-連接蛋白化合物可以以各種預定次數給藥。在某些非限制性具體實施方式中，內皮細胞中的連接蛋白半通道活性、活動、表達或形成被抑制。在某些非限制性具體實施方式中，上皮細胞中的連接蛋白半通道活性、活動、表達或形成被抑制。在某些非限制性具體實施方式中，可以治療受治者的包括中風在內的血管紊亂。在某些非限制性具體實施方式中，可以治療受治者的包括缺血在內的血管紊亂。該缺血可以為例如組織缺血、心肌缺血或大腦缺血。在某些非限制性具體實施方式中，本文中治療的受治者處於由於缺血導致神經功能喪失的危險。在某些非限制性具體實施方式中，可以治療受治者的血管紊亂，這包括治療或改善可能由缺血引起的中樞或周圍神經系統中的細胞死亡或變性。在某些非限制性具體實施方式中，可以治療受治者的血管紊亂，其中抗-連接蛋白化合物，例如反義化合物、擬肽或其它的結合肽，連同對受治者進行的血管或冠脈操作(手術)加以給藥。在其它非限制性具體實施方式中，抗-連接蛋白化合物例如反義化合物，擬肽或其它的結合肽是在所述血管或冠脈的操作過程中給藥的。抗-連接蛋白化合物也可以在血管或冠脈操作之前或之後給藥，或二者兼而有之。在某些非限制性具體實施方式中，抗-連接蛋白化合物，包括反義化合物、擬肽或其它結合肽是在進行血管或冠脈操作之後約1小時內給予，或者，例如在血管或冠脈操作之後約2小時內給予。在其它的具體實施方式中，抗-連接蛋白化合物是在約24之內給藥。抗-連接蛋白化合物也可以根據需要或必要的情況超出這些時間範圍加以給予。在某些非限制性具體實施方式中，抗-連接蛋白化合物，包括反義化合物、擬肽或其它結合肽可以連同心臟操作，例如在患者身上進行的心臟手術加以給藥。在某些非限制性具體實施方式中，抗-連接蛋白化合物，包括反義化合物、擬肽或其它的結合肽可以連同為了進行血管或其它操作的醫療器械一起給藥。另一方面，提供了一種用於為受治者給藥的藥物製劑，該製劑包括藥用載體和能夠調節連接蛋白半通道和隨後的連接子形成(例如通過阻斷或改善半通道表達、形成、活動和/或活性)的試劑。圖1示出了在置於器官型培養基中24小時後的大鼠脊髓節段。在對照脊髓(圖1A)中，在切口末端(虛線標記了原始的切口)觀察到明顯的腫脹。連接蛋白43特異性反義ODN治療的節段(圖1B)則幾乎沒有表現出腫脹或水腫。圖2示出了在器官型培養基中24小時後，對照脊髓的樹脂切片的考馬斯藍染色。神經元有空泡並且水腫，伴有沿半通道打開並允許細胞外液進入細胞(箭頭)的膜的「起泡」現象。圖3示出了利用結合於胞外環(在圖3A中用綠色表示的Gap7M抗體)和結合於蛋白質的胞質羧基尾部的抗體(在圖3A中用紅色表示)的連接蛋白43的免疫組織化學標記。胞質抗體標記所有的連接蛋白43蛋白質(紅色)，而Gap7M只能標記暴露的半通道的胞外環(綠色)，因為其在空間上受結合於在細胞間形成緊密通道的對接連接子阻礙。圖3B示出了在壓傷後24小時利用脊髓中的兩個抗體的二元標記。大多數標記呈現黃色，在這裡兩種抗體共同定位，表明存在的蛋白質中很大部分沒有與相鄰細胞的連接子對接，並保持為半通道。連接蛋白43特異性反義ODN阻止蛋白質翻譯並且在治療後的脊髓中很少觀察到半通道(圖3C)。圖4示出了來自已在器官型培養基中培養五天的脊髓的組織切片的異凝集素(Isolectin)B4標記。該凝集素與小神經膠質細胞和血管內皮細胞結合。在該連接蛋白43特異性反義ODN治療的片段中的毛細血管在5天之後仍然是完整的(箭頭)。而在對照脊髓中，2天後很少有血管仍然是完全完整的；5天後，對照中主要標記的為激活的巨噬細胞表型的神經膠質細胞。圖5示出了壓傷的脊髓組織5mm喙側的切片。在擠壓該脊髓後4小時，FITC標記的BSA被注入動物的尾靜脈，然後取出該組織並切片。在對照脊髓(圖5A)中，染料大量地從血管中滲漏出來，達到距離損傷部位5mm，表明毛細血管壁破裂和血腦屏障破壞。在連接蛋白43特異性反義ODN治療的脊髓(圖5B)中，不包含在毛細管中的染料很少，表明血管完整性得以保持。圖6示出了在梗塞發生後24小時和在梗死中，在臨近缺血梗死組織的羊心室壁中的羊心臟組織的三重標記。該組織用異凝集素B4標記，示出了血管內皮細胞(藍色)，用針對連接蛋白43的抗體標記(紅色)以及用針對Gap7M的抗體標記(綠色)。Gap7M抗體識別連接蛋白的保守胞外環區域(不是連接蛋白同工型特異的)，但可以標記半通道(在完整的通道中，它們受空間阻礙而不能進入其表位)。圖6A是一組4個照片，其來自遠離梗塞區域的組織，示出了毛細血管的異凝集素B4標記(藍色-左上角)和在肌細胞閏盤中的連接蛋白43間隙連接(左下角-紅色)。實際上沒有GAP7M標記的半通道(右上角-綠色)。右下角的圖像是其它三個圖像的合併。血管仍然是完整的而且沒有肌細胞本身損傷的跡象。圖6B示出了一個仍然與梗塞部位分開但距離更近的部位。相同的三個標記與合併的圖像都體現在這個四部分的圖像中。大多數血管仍然是完整的，但血管壁某些區域被破壞。在這些區域，半通道標記與損傷的血管壁一起定位。四個圖像(圖6C)的最後一幅就在梗塞部位本身的內部。在大量半通道表達後，很少毛細血管仍然明顯地保持完整。連接蛋白43標記變得分散而且在閏盤(intercalateddisc)中不再含有，表明肌細胞現在已經嚴重損傷。在所有的情況下，Gap7M抗體標記都不與連接蛋白43標記共同定位(如在脊髓中一樣)，這表明它們是不同的連接蛋白同工型，最有可能是連接蛋白45。圖7示出了在缺血後24小時的梗死中，異凝集素B4(綠色)標記的毛細血管內皮細胞與肌間球蛋白(myomesin)抗體標記(紅色)的肌細胞肌節的M線共同定位。這個區域與圖6C示出的區域相同。毛細血管完全破壞並且正常的肌細胞肌節帶型(myocytesarcomericbandingpattern)被破壞，這表明肌肉細胞的死亡與血管壁的分解同時發生。圖片上方的圖像示出了異凝集素B4標記，中間的圖像表示肌間球蛋白(myomesin)標記，下方的圖像是上面兩幅圖像的結合。圖8示出了代表腫脹在總脊髓節段區域的百分數的柱狀圖。示出了對照(僅有培養基)節段，以用於阻斷半通道的染料攝取試驗(分別在圖8中由肽4和肽5表示)示出的肽VDCFLSRPTEKT(SEQIDNO35)和SRPTEKTIFII(SEQIDNO36)處理的節段，以及以不阻斷半通道的肽QQPGCENVCYDK(SEQIDNO39)(由圖8中的肽8示出)處理的切片。肽SRPTEKTIFII(SEQIDNO36，圖8中的肽5)(一種基於組織學研究的優良阻斷劑)已用5種不同的濃度使用，其中最低濃度對減少水腫最有效。圖9示出了利用識別連接蛋白胞外環區域的抗體的來自假對照(左側)和大腦缺血30分鐘後24小時(右側)的近分娩期胎羊大腦中的連接蛋白半通道標記。在對照大腦中，沒有觀察到連接蛋白半通道標記，而在缺血後，存在大量上調的半通道。在細胞體(水平箭頭)上和在血管內皮細胞中(垂直箭頭)的半通道表達尤其高。缺血後上調的主要連接蛋白為連接蛋白43。圖10示出了妊娠晚期胎羊大腦缺血30分鐘後，開始用人造CSF腦室內(i.c.v.)灌注或肽灌注90分鐘的實例。在這些動物中，灌注持續到缺血發生後的72小時。該賦形劑(人造CSF)灌注動物(左)表現出嚴重、持續發作的延遲發作(癲癇持續狀態；一個例子示於插入盒中，上)，隨後皮層阻抗持續上升(底部，細胞腫脹的測定)，在48小時之後達到最大。發作到約48小時被解決。肽模擬物(peptidomimetic)灌注(右)將持續的發作變成離散的、分開的推後發作。存在明顯延遲和減弱的大腦阻抗上升。圖11示出了對照、以及使用2.5、5和10μM濃度的連接蛋白43特異性AS-ODN對視神經(圖11A)組織腫脹和(圖11B)細胞死亡的劑量響應曲線。兩個參數表現出隨濃度的增長的下降趨勢。在10μM處，組織的腫脹在處理後最早6h減輕，與對照組相比，在24h時減小69％。用反義處理的情況下，視神經的前節段和中節段中的細胞死亡減少。圖12示出了對照和AS-ODN處理的視神經中腫脹的百分數(所有時間點，n＝6)。在對照組織中水腫更加明顯，並且在研究的所有時間點具有顯著的統計學差異。星號表示兩組之間的統計顯著性。圖13(上圖)在缺血誘導後2、6和24小時，對對照(A、B、C)和AS-ODN處理的(D、E、F)視神經切片中間的死細胞進行碘化丙啶染色。在所有3個時間點與對照相比，連接蛋白43特異性AS-ODN處理組很少顯示染色(下圖)。對照組中的細胞死亡開始增加，在6小時達到峰值然後下降(認為反映了組織水腫，每單位面積留下的細胞更少)。AS-ODN處理的組織即使在培養基中24小時之後僅有很少量的細胞死亡增加。星號表示處理之間的統計學顯著性。圖14示出了對照組(綠色)和連接蛋白43特異性反義處理的視神經(藍色)的平均血管節段的長度。在所有的時間點，經該反義處理的神經都具有較長的片段，表明由於連接蛋白的表達(可能是以半通道的形式或通過間隙連接介導的副作用)導致了血管崩解的減少。本文提到的所有顏色是在相應的黑白圖中的灰度上表示的。具體實施例方式本發明的實施可以包括或利用多種常規的分子生物學技術(包括重組技術)、微生物學、細胞生物學、生物化學、核酸化學和免疫學技術，這些都是本領域的現有技術。這些技術在文獻中已詳細解釋，包括但不限於，僅以舉例的方式列出，MolecularCloningALaboratoryManual，secondedition(Sambrooketal.，1989)和MolecularCloningALaboratoryManual，thirdedition(SambrookandRussel，2001)，在本文中一起和分別稱作「Sambrook」；OligonucleotideSynthesis(M.J.Gait，ed.，1984)；AnimalCellCulture(R.I.Freshney，ed.，1987)；HandbookofExperimentalImmunology(D.M.Weir&C.C.Blackwell，eds.)；GencTransferVectorsforMammalianCells(J.M.Miller&M.P.Calos，eds.，1987)；CurrentProtocolsinMolecularBiology(F.M.Ausubleetal.，eds.，1987，包括2001年的附錄)；PCRThePolymeraseChainReaction，(Mullisetal.，eds.，1994)；CurrentProtocolsinImmunology(J.E.Coliganetal.，eds.，1991)；TheImmunoassayHandbook(D.Wild，ed.，StocktonPressNY，1994)；BioconjugateTechniques(GregT.Hermanson，ed.，AcademicPress，1996)；MethodsofImmunologicalAnalysis(R.Masseyeff，W.H.Albert，andN.A.Staines，eds.，WeinheimVCHVerlagsgesellschaftmbH，1993)；HarlowandLane(1988)Antibodics，ALaboratoryManual，ColdSpringHarborPublications，NewYork，andHarlowandLane(1999)UsingAntibodiesALaboratoryManualColdSpringHarborLaboratoryPress，ColdSpringHarbor，NY(jointlyandindividuallyreferredtohereinasHarlowandLane)，Beaucageetal.eds.，CurrentProtocolsinNucleicAcidChemistryJohnWiley&Sons，Inc.，NewYork，2000)；和Agrawal，ed.，ProtocolsforOligonucleotidesandAnalogs，SynthesisandPropertiesHumanaPressInc.，NewJersey，1993)。定義在進一步全面地描述本發明和各種非限制性具體實施方式之前，闡明描述本發明的上下文中使用的某些術語。除非另外指出，下面的術語在本文和附加的權利要求中使用時具有下面的含義。沒有在下面或說明書的其它部分限定的那些術語應採用其所在領域中公認的含義。本文提供的化合物(例如肽和蛋白質)中使用的胺基酸可以是遺傳編碼胺基酸、天然非遺傳編碼胺基酸或合成胺基酸。上述的任何L-和D-對映異構體都可以用於所述化合物中。本文中使用下面的縮寫表示下面遺傳編碼胺基酸(及其殘基)丙氨酸(Ala，A)、精氨酸(Arg，R)、天冬醯胺(Asn，N)、天冬氨酸(Asp，D)、半胱氨酸(Cys，C)、甘氨酸(Gly，G)、穀氨酸(Glu，E)、穀氨醯胺(Gln，Q)、組氨酸(His，H)、異亮氨酸(Ile，I)、亮氨酸(Leu，L)、賴氨酸(Lys，K)、蛋氨酸(Met，M)、苯丙氨酸(Phe，F)、脯氨酸(Pro，P)、絲氨酸(Ser，S)、蘇氨酸(Thr，T)、色氨酸(Trp，W)、酪氨酸(Tyr，Y)和纈氨酸(Val，V)。不是遺傳編碼的並且可以存在於本發明的化合物中某些常見胺基酸包括但不限於，β-丙氨酸(b-Ala)和其它ω-胺基酸如3-氨基丙酸(Dap)、2，3-二氨基丙酸(Dpr，Z)、4-氨基丁酸等；α-氨基異丁酸(Aib)；ε-氨基己酸(Aha)；δ-氨基戊酸(Ava)；甲基甘氨酸(MeGly)；鳥氨酸(Orn)；瓜氨酸(Cit)；叔丁基丙氨酸(t-BuA)；叔丁基甘氨酸(t-BuG)；N-甲基異亮氨酸(Melle)；苯基甘氨酸(Phg)；環己基丙氨酸(Cha)；正亮氨酸(Nle，J)；2-萘基丙氨酸(2-Nal)；4-氯苯基丙氨酸(Phe(4-Cl))；2-氟苯基丙氨酸(Phe(2-F))；3-氟苯基丙氨酸(Phe(3-F))；4-氟苯基丙氨酸(Phe(4-F))；青黴胺(Pen)；1，2，3，4-四氫異喹啉-3-羧酸(Tic)；β-2-噻吩基丙氨酸(Thi)；蛋氨酸亞碸(MSO)；高精氨酸(hArg)；N-乙醯基賴氨酸(AcLys)；2，3-二氨基丁酸(Dab)；2，3-二氨基丁酸(Dbu)；對氨基苯丙氨酸(Phe(pNH2))；N-甲基纈氨酸(MeVal)；高半胱氨酸(hCys)；3-苯並噻唑-2-基-丙氨酸(BztAla，B)；以及高絲氨酸(hSer)。其它的胺基酸類似物包括磷酸絲氨酸、磷酸蘇氨酸、磷酸酪氨酸、羥脯氨酸、γ-羧基穀氨酸酯、馬尿酸、八氫吲哚-2-羧酸、斯他汀(statine)、α-甲基-丙氨酸、對苯甲醯-苯丙氨酸、炔丙甘氨酸以及肌氨酸。無論是現在還是將來，包含於本發明範圍內的肽可以具有任何前述的L-或D-構型的胺基酸，或任何本文描述的或本領域已知的其它胺基酸。可相互取代的胺基酸通常屬於相似類或亞類。正如本領域的技術人員知道的，胺基酸可以主要根據其胺基酸側鏈的化學和物理性質分成不同的種類。例如，某些胺基酸通常被認為是親水或極性胺基酸，其它的被認為是疏水或非極性胺基酸。極性胺基酸包括具有酸性、鹼性或親水側鏈的胺基酸，非極性胺基酸包括具有芳基或疏水側鏈的胺基酸。非極性胺基酸可被進一步細分，其中，包括脂肪族胺基酸。本文使用的胺基酸分類的定義如下「非極性胺基酸」是指在生理pH下具有不帶電荷的側鏈的胺基酸，其不具有極性而且一般被水溶液排斥。遺傳編碼的疏水性胺基酸的實例包括Ala、Ile、Leu、Met、Trp、Tyr和Val。遺傳編碼的非極性胺基酸的實例包括t-BuA、Cha和NIe。「芳香族胺基酸」是指側鏈上包含至少一個具有共軛π-電子體系(芳香基團)的非極性胺基酸。芳香基團可以進一步被取代基如烷基、烯基、炔基、羥基、磺醯基、硝基和氨基基團及其它基團取代。遺傳編碼的芳香族胺基酸的實例包括苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸。常見的非遺傳編碼的芳香族胺基酸包括苯基甘氨酸、2-萘基丙氨酸、β-2-噻吩基丙氨酸、3-苯並噻唑-2-基-丙氨酸、1，2，3，4-四氫異喹啉-3-羧酸、4-氯苯基丙氨酸、2-氟苯基丙氨酸、3-氟苯基丙氨酸和4-氟苯基丙氨酸。「脂肪族胺基酸」是指具有飽和或不飽和直鏈、支鏈或環狀烴側鏈的非極性胺基酸。遺傳編碼的脂肪族胺基酸的實例包括Ala、Leu、Val和Ile。非編碼的脂肪族胺基酸的實例包括Nle。「極性胺基酸」是指在生理pH下具有帶電荷側鏈或不帶電荷但通常具有一個鍵，其中兩個原子共用一個電子對並且該電子對更靠近其中一個原子的側鏈的疏水性胺基酸。極性胺基酸一般為親水性的，是指其具有被水溶液吸引的側鏈的胺基酸。遺傳編碼的極性胺基酸的實例包括天冬醯胺、半胱氨酸、穀氨醯胺、賴氨酸和絲氨酸。非遺傳編碼的極性胺基酸的實例包括瓜氨酸、高半胱氨酸、N-乙醯基賴氨酸和蛋氨酸亞碸。「酸性胺基酸」是指具有小於7的側鏈pK值的親水性胺基酸。酸性胺基酸在生理pH下通常由於失去氫離子而具有帶負電荷的側鏈。遺傳編碼的酸性胺基酸的實例包括天冬氨酸(天冬氨酸鹽)和穀氨酸(穀氨酸鹽)。「鹼性胺基酸」是指具有大於7的側鏈pK值的親水性胺基酸。鹼性胺基酸在生理pH下通常由於與水合氫離子結合而具有帶正電荷的側鏈。遺傳編碼的鹼性胺基酸的實例包括精氨酸、賴氨酸和組氨酸。非遺傳編碼的鹼性胺基酸的實例包括2，3-二氨基丙酸、2，4-二氨基丁酸和高精氨酸。「可電離胺基酸」是指在生理pH下可以帶電荷的胺基酸。該可電離的胺基酸包括酸性和鹼性胺基酸，例如，D-天冬氨酸、D-穀氨酸、D-組氨酸、D-精氨酸、D-賴氨酸、D-羥賴氨酸、D-鳥氨酸、L-天冬氨酸、L-穀氨酸、L-組氨酸、L-精氨酸、L-賴氨酸、L-羥賴氨酸和L-鳥氨酸。正如本領域技術人員理解的，上述的分類不是絕對的。某些胺基酸表現出多於一種的特性，因此其可能被包括在多於一種的分類中。例如，酪氨酸具有非極性芳香環又具有極性的羥基。因此，酪氨酸具有多個特性可以被描述為非極性的、芳香族的和極性的。然而，非極性環是佔優勢的，所以酪氨酸通常被認為是非極性的。相似地，除了能夠形成二硫鍵之外，半胱氨酸也具有非極性的特徵。因此，當半胱氨酸沒有被嚴格分類為疏水或非極性胺基酸時，很多情況下半胱氨酸可以被用於對肽賦予疏水性或非極性。在某些具體實施方式中，本發明考慮到的極性胺基酸包括，例如精氨酸、天冬醯胺、天冬氨酸、半胱氨酸、穀氨酸、穀氨醯胺、組氨酸、高半胱氨酸、賴氨酸、羥賴氨酸、鳥氨酸、絲氨酸、蘇氨酸和結構上相關的胺基酸。在一個具體實施方式中，極性胺基酸是可電離的胺基酸，例如精氨酸、天冬氨酸、穀氨酸、組氨酸、羥賴氨酸、賴氨酸或鳥氨酸。可以使用的極性或非極性胺基酸殘基的實例包括，例如，丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、蛋氨酸、異亮氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸等。「抗-連接蛋白化合物」包括影響或調控連接蛋白、連接蛋白半通道(連接子)或間隙連接的活性、表達或形成的那些化合物。抗-連接蛋白化合物包括但不限於反義化合物(例如，反義多核苷酸)、抗體及其結合片段，以及包括「肽模擬物」和「模擬」肽的肽和多肽。「反義化合物」包括不同類型的能夠抑制基因表達、翻譯或發揮功能的分子，包括那些用於治療應用的mRNA的通過序列特異性靶向起作用的分子。反義化合物包括反義DNA化合物和反義RNA化合物。雖然反義寡核苷酸是反義化合物的優選形式，但是本發明包括其它的寡聚反義化合物，包括但不限於寡核苷酸模擬物(oligonucleotidemimetics)。根據本發明的反義化合物優選含有約8至約50個核酸鹼基(即約8至約50個連接的核苷)。尤其優選的反義化合物為反義寡核苷酸，甚至更優選含有約12至約30個核酸鹼基的寡核苷酸。反義化合物包括核酶、外部引導序列(EGS)、寡核苷酸(寡酶(oligozyme))、及其它短的催化RNA或催化寡核苷酸，其與靶核酸雜交並調控其表達。它們還包括硫代磷酸寡脫氧核苷酸(S-ODN)。因此，反義化合物包括例如主要核酸基的基因沉默分子，例如化學修飾的反義寡脫氧核糖核酸(ODN)、核酶和siRNA(Scherer，L.J.andRossi，J.J.NatureBiotechnol.211457-1465(2003)。反義化合物還可以包括反義分子，例如肽核酸(PNA)(Braasch，D.A.andCorey，D.R.，Biochemistry41，4503-4510(2002))、嗎啉代磷酸二胺(Heasman，J.，Dev.Biol.，243，209-214(2002))、DNA酶(Schubert，S.etal.，NucleicAcidsRes.31，5982-5992(2003)。Chakraborti，S.andBanerjea，A.C.，Mol.Ther.7，817-826(2003)，Santoro，S.W.andJoyce，G.F.Proc.NatlAcad.Sci.USA94，4262-4266(1997)，以及最近開發的5』-末端突變的U1小核RNA(Fortes，P.etal.，Proc.NatlAcad.Sci.USA100，8264-8269(2003))。術語「反義序列」是指具有反義化合物活性的多核苷酸，包括但不限於，例如與一個RNA序列互補或部分互補或對應的序列。因此，反義序列包括，例如與mRNA或其部分結合以阻斷通過核糖體的mRNA轉錄的核酸序列。反義方法通常在本領域是熟知的。例如，參見PCT公開WO94/12633，和Nielsn等人，Science2541497(1991)；OligonucleotidesandAnalogues，APracticalApproach，editedbyF.Eckstein，IRLPressatOxfordUniversityPress(1991)；AntisenseResearchandApplications(1993，CRCPress)。選擇靶的反義序列可能會或也可能不會導致與非靶序列的非特異結合。優選與非靶序列以最少量、沒有或不可檢測到的非特異結合的反義序列。如本文使用的，「信使RNA」不僅包括用三聯體基因密碼來編碼蛋白質的序列信息，還包括形成5』-非翻譯區、3』-非翻譯區和5』-帽狀區的相關核糖核苷酸序列，以及形成各種二級結構的核糖核苷酸序列。寡核苷酸可以完全或部分靶向這些序列中的任何一個。通常，核酸(包括寡核苷酸)可以被描述為「DNA類」(即具有2』-脫氧糖基並且通常為T而不是U鹼基)或「RNA類」(即具有2』-羥基或2』-修飾糖基並且通常為U而不是T鹼基)。核酸螺旋結構可以採用多於一種類型的結構，最常見的是A型和B型。通常，認為具有B-型類結構的寡核苷酸是「DNA類」，而具有A-型類結構(A-form-like)的寡核苷酸是「RNA類」。術語「互補」通常是指通過鹼基配對的多核苷酸的自然結合，例如在允許的鹽和溫度條件下。例如，序列「A-G-T」與互補序列「T-C-A」結合。兩個單鏈分子之間的互補性可以是「部分的」，使得僅有部分核酸結合，或者可以是「完全的」，使得在這些單鏈分子之間存在完全的互補性。核酸分子之間的互補程度對於它們之間雜交效率和強度有重要影響。「可雜交的」和「互補的」是這樣的術語，用來表示互補性的充分程度，以使結合(優選穩定結合)足以實現預期的例如發生在靶DNA或靶RNA與寡核苷酸之間的行為。可以理解，寡核苷酸不需要100％與其靶核酸序列互補才是可雜交的，而且也可以理解該結合可以是靶特異性的，或可以結合於其它非靶分子，只要該非特異性結合不嚴重或不期望地阻礙治療或其它目的。寡核苷酸用來幹擾靶分子的正常功能以使其活性喪失或降低，優選在期望特異結合的條件下，即在體內試驗或治療性處理的生理條件，或在體外試驗該試驗進行的條件下，具有足夠的互補程度以避免非特異性的或不希望的與非靶標序列的結合。絕對的互補不是必需的。通常優選在生理條件下具有足夠的互補性以形成具有熔解溫度高於20℃、30℃或40℃的雙鏈的多核苷酸。「紊亂(障礙，disorder)」是可以從用本發明的分子或組合物的治療中受益的任何病症，包括本文描述的或要求保護的那些。包括慢性和急性紊亂或疾病，包括那些正在討論的哺乳動物易患的紊亂病理狀態。本文使用的「受治者(患者，subject)」是指任何哺乳類的動物，包括人、家畜和農場養殖動物，以及動物園動物、運動動物或寵物，如狗、馬、貓、羊、豬、牛等。優選的受治者為人類。將寡核苷酸「靶向」一種選定核酸靶可以是一個多步驟過程。該過程可以始於確定其功能待調控的核酸序列。這可以是例如細胞基因(或由基因形成的mRNA)，其表達與特定的疾病狀態相關。靶向過程也可以包括確定核酸序列中的一個或多個位點，用於寡核苷酸相互作用，以產生期望的效果，即抑制蛋白質表達、調節活性等。一旦一個或多個靶位點被鑑別，則選擇與靶足夠或期望程度互補的反義化合物，即充分雜交和具有適當或其它期望的特性以獲得期望活性(例如寡核苷酸)。在本發明中，靶包括編碼一個或多個連接蛋白的核酸分子。靶向過程也可以包括確定發生反義相互作用以獲得期望效果的一個或多個位點。優選的基因內位點為例如包括基因的開放讀框(ORF)的翻譯起始或終止密碼子的區域。翻譯起始密碼子通常為5』-AUG(在轉錄mRNA中；在相應的DNA分子中的5』-ATG)，也可以稱為「AUG密碼子」、「起始密碼子」或「AUG起始密碼子」。少數基因具有翻譯起始密碼子，其具有5』-GUG、5』-UUG或5』-CUG，以及5』-AUA、5』-ACG和5』-CUG的RNA序列，在體內發揮作用。因此，術語「翻譯起始密碼子」和「起始密碼子」可以包括許多密碼子序列，即使每種情況下引發胺基酸通常都是蛋氨酸(在真核生物中)或甲醯蛋氨酸(在原核生物中)。在本領域中還已知原核基因和真核基因可以具有兩個或兩個以上可替換的起始密碼子，其中任何一個起始密碼子在特定的細胞類型或組織、或特定的條件下都可以被優先用於起始翻譯。術語「寡核苷酸」包括由天然鹼基、糖和糖間(intersugar)(骨架)鍵連接組成的核苷酸或核苷單體的寡聚體或聚合體。術語「寡核苷酸」還包括功能相似的、包含非天然單體或其部分的寡聚體或聚合體。這樣的修飾或取代的寡核苷酸通常由於諸如細胞攝取增加、在核酶存在下穩定性增強或靶向親和力增強等的特性而比天然形式的更加優選。一些核苷酸或核苷的變體已經表現出使寡核苷酸比天然的寡脫氧核苷酸(ODN)對核酶消化更加耐受。核酶耐受性通過以下的方法常規地檢測將寡核苷酸與細胞提取物或分離的核酶溶液共孵育，並在一段時間後測定完整寡核苷酸剩餘的多少，通常是通過凝膠電泳的方法進行測定。經過修飾以增強核酶耐受力的寡核苷酸比未經修飾的寡核苷酸能夠更長時間地保持完整。某些變體也表現出增強寡核苷酸與靶的結合(親和力)。寡核苷酸與靶的親和力常規通過例如測定寡核苷酸和靶之間的Tm(熔融溫度)加以確定，Tm是寡核苷酸和靶解離的溫度。解離可以通過分光光度法檢測。Tm越高，寡核苷酸與靶的親和力越大。在某些情況下，增強靶結合親和力的寡核苷酸修飾也能夠增強核酶耐受性。「多核苷酸」是指多個核苷酸。因此，術語「核苷酸序列」或「核酸」或「多核苷酸」或「寡核苷酸」或「寡脫氧核苷酸」都是指核酸雜聚物或這些核酸序列。這些術語也指基因組或合成起源的DNA或RNA，其可以是單鏈或雙鏈的，並且可以代表肽核酸(PNA)或任何DNA類或RNA類物質的正義或反義鏈。編碼連接蛋白、連接蛋白片段或連接蛋白變體的多核苷酸包括編碼下列物質的多核苷酸在自然界中發現的連接蛋白的成熟形式(天然的及其物種變體)；在自然界中發現的連接蛋白的成熟形式和其它的編碼序列，例如，前導序列或信號序列或前蛋白序列(天然的及其物種變體)；前述序列和非編碼序列(例如，自然界中發現的成熟形式的多核苷酸編碼序列中的內含子或非編碼序列的5』端和/或3』端)；自然界中發現的連接蛋白成熟形式的片段；以及正如提到的自然界中發現的連接蛋白成熟形式的變體。因此，「編碼連接蛋白的多核苷酸」等具有僅編碼期望連接蛋白、片段或變體的序列的多核苷酸，以及包括其它的核苷酸例如附加的編碼和/或非編碼序列的多核苷酸。在本發明的上下文中，信使RNA不僅包括利用三聯體遺傳密碼來編碼蛋白質的信息，也包括形成5』-非翻譯區、3』-非翻譯區、5』-帽狀區以及內含子/外顯子連接核糖核苷酸的相關核糖核苷酸。因此，根據本發明的寡核苷酸可以完全或部分靶向這些相關的核糖核苷酸以及信息核糖核苷酸。因此，寡核苷酸可以特異地與轉錄起始位點區、翻譯起始密碼子區、5』帽狀區、內含子/外顯子連接、編碼序列、翻譯終止密碼子區或5』端或3』端非翻譯區的序列進行雜交。少數基因具有翻譯起始密碼子，其具有已被證實在體內起作用的RNA序列5』-GUG、5』-UUG或5』-CUG，以及5』-AUA、5』-ACG和5』CUG。因此，術語「翻譯起始密碼子」和「起始密碼子」可以包括許多密碼子序列，即使每種情況下的起始胺基酸通常都是蛋氨酸(在真核生物中)或甲醯蛋氨酸(在原核生物中)。在本領域中還已知真核和原核基因可以具有兩個或兩個以上可選替換的起始密碼子，在特定的細胞類型或組織中、或在特定的條件下，對於翻譯，其中的任何一個都可能被優先使用。在本發明的上下文中，「起始密碼子」和「翻譯起始密碼子」是指在體內用於啟動從編碼連接蛋白的基因轉錄得到的mRNA分子的翻譯的一個或多個密碼子，而不管這些密碼子的序列。在本領域中還已知，基因的翻譯終止密碼子(或「終止密碼子」)可以具有三個序列即5』-UAA、5』-UAG和5』-UGA(相應DNA序列分別是5』-TAA、5』-TAG和5』-TGA)中的一個。術語「起始密碼子區」、「AUG區」和「翻譯起始密碼子區」是指包括從翻譯起始密碼子在任一方向(即5』端或3』端)的約25至約50個連續核酸的mRNA或基因的一部分。這個區域是一個優選的靶區域。相似地，術語「終止密碼子」」和「翻譯終止密碼子區」是指包括從翻譯終止密碼子在任一方向(即5』端或3』端)的約25至約50個連續核苷酸的mRNA或基因的一部分。這個區域是優選的靶區域。本領域中公知的開放讀框(ORF)或「編碼區」是指在翻譯起始密碼子和翻譯終止密碼子之間的區域，也是一個有效的靶區域。其它優選的靶區域包括5』非翻譯區(5』UTR)，本領域中公知的是指翻譯起始密碼子的5』方向上的mRNA的部分，因此包括在5』端帽狀位點和mRNA的翻譯起始密碼子之間的核苷酸或基因上相應的核苷酸和3』非翻譯區域(3』UTR)，本領域中公知的是指從翻譯終止密碼子在3』方向上的mRNA的部分，因此包括位於翻譯終止密碼子和mRNA的3』端之間的核苷酸或基因上相應的核苷酸。mRNA的5』帽結構包含通過5』-5』三磷酸酯鍵連接到mRNA的5』端-最大(most)殘基的N7-甲基化鳥嘌呤核苷殘基。mRNA的5』帽狀區被認為包括5』帽狀結構本身以及臨近該帽狀結構的開始50個核苷酸。5』-帽區也可以是優選的靶區域。儘管某些真核生物mRNA轉錄體是直接翻譯的，許多都包含一個或多個被稱為「內含子」的區域，其是從前-mRNA轉錄體中切割而產生一個或多個成熟的mRNA。保留區域(由此被翻譯的區域)稱為「外顯子」，並被剪接在一起形成連續的mRNA序列。mRNA剪接位點，即外顯子-外顯子或內含子-外顯子連接，也可以是優選的靶區域，尤其是在疾病中暗示有異常拼接或在疾病中暗示特定的mRNA拼接產物過量產生的情況下非常有用。由於基因重排或缺失，異常的融合結合處也是優選的靶標。在可選的拼接mRNA中靶向特定的外顯子也可是優選的。還發現內含子也是有效的，例如，對於DNA或前-mRNA，因此是優選的用於反義化合物靶向的靶區域。術語「擬肽(peptidomimetic)」和「肽模擬物(mimetic)」包括天然和合成的化學化合物，其可以與它們模擬的蛋白質區域具有基本上相同的結構和功能特性。對於它們可能模擬的連接蛋白，例如，相對連接蛋白的胞外環涉及連接子間的對接和細胞間通道的形成。具有與模板肽類似性質的肽類似物可以是非肽藥物。「擬肽」或「肽模擬物」包括肽基(peptide-based)化合物，也包括這樣的非肽基化合物(Fauchere，J.Adv.DrugRes.1529(1986)；VeberandFreidinger；TINS；392(1985)；andEvansetal.，J.Med.Chem.301229(1987)；BeeleyN.，TrendsBiotechnol.Jun；12(6)213-6(1994)；Kieber-EmmonsT，etal.；CurrOpinBiotechnol.Aug；8(4)435-41(1997)。在結構上與治療上有用的肽相似的擬肽可用於產生同等或增強的治療或預防效果。通常，擬肽與範例多肽(paradigmpolypeptide)(即具有生物或藥理功能或活性的多肽)在結構上相同或相似，但也可以是一個或多個肽鍵，可選地被選自由以下鍵組成的組中的鍵所取代-CH2NH-、-CH2S-、-CH2-CH2-、-CH＝CH-(順式和反式)、-COCH2-、-CH(OH)CH2-和-CH2SO-。該擬肽可以完全由天然胺基酸組成，或由胺基酸的非天然類似物組成，或是部分由天然的肽胺基酸和部分由胺基酸的非天然類似物組成的嵌合分子。該模擬物也可以包含任意量的天然胺基酸保守取代，只要該取代基本上也不改變模擬物的活性。例如，如果模擬組合物能夠下調連接蛋白蛋白質或連接子的生物活動(作用)或活性，例如，防止連接子的對接以形成間隙連接介導的細胞間通訊，或防止連接子打開而使細胞質暴露到細胞外周質(millieu)中，則該模擬組合物落入本發明的範圍內。肽模擬物、擬肽和連接蛋白調控肽包括本文列出的描述肽模擬物、擬肽和連接蛋白調控肽的那些，以及本領域無論是現在已知或今後開發的那些。術語「組合物」涵蓋包括一種或多種成分的產物。如本文以多種形式使用的，術語連接蛋白活性的「調控子」和這樣的調控子包括連接蛋白功能或表達的小分子拮抗劑、反義分子、核酶、三螺旋分子和RNAi多核苷酸、基因治療方法等，以及其它。術語「百分數(％)一致性」是指在兩個或多個序列的比較中發現的序列相似性的百分數。百分數一致性可以通過電子學方法測定，例如，使用任何合適的軟體。同樣，兩個序列間(或其中之一的一個或多個部分或二者的一個或多個部分)的「相似性」可通過比較一個序列與第二個序列來確定。「藥學上可接受的或藥用」化合物和其它化合物或製劑的成份，例如載體、稀釋液或賦形劑，是適於對其接受者給予的。通常，術語「蛋白質」是指任意兩個或更多單個胺基酸(天然或非天然)通過肽鍵連接的聚合體，當連接於一個胺基酸的α-碳上的羧酸基團的羧基碳原子共價結合於連接在相鄰胺基酸的α-碳上的氨基基團的氨基氮原子時形成肽鍵。這些肽鍵連接和包括它們的原子(即α-碳原子、羧基碳原子(及其取代氧原子))以及氨基氮原子(和它們的取代氫原子)形成蛋白質的「多肽主鏈」。此外，本文使用的術語「蛋白質」可以理解為包括術語「多肽」和「肽」(本文中它們可以替換使用)。相似地，蛋白質片段、類似物、衍生物和變體在本文可能是指「蛋白質」，而且除非另外聲明，應該被認為是「蛋白質」。術語蛋白質「片段」是指含有少於該蛋白質所有胺基酸殘基的多肽。蛋白質的「結構域」也是一個片段，包含賦予其活性或功能通常必需的蛋白質的胺基酸殘基。術語「嚴格條件」是指允許多核苷酸之間雜交的條件。嚴格條件可以用鹽濃度、有機溶劑的濃度(例如甲醯胺)、溫度和其它本領域中已知的條件來限定。降低鹽濃度、提高有機溶劑濃度(例如甲醯胺)或升高雜交溫度則嚴格度增加。例如，嚴格的鹽濃度通常小於約750mMNaCl和75mM檸檬酸三鈉，優選小於約500mMNaCl和50mM檸檬酸三鈉，最優選小於約250mMNaCl和25mM檸檬酸三鈉。在沒有有機溶劑例如甲醯胺的情況，可以得到低嚴格度的雜交，在有機溶劑存在的情況下可以得到高嚴格度的雜交(例如，至少約35％的甲醯胺，最優選至少約50％的甲醯胺)。嚴格的溫度條件通常包括至少約30℃，更優選至少約37℃，最優選至少約42℃的溫度。可變的其它參數，例如雜交時間、洗滌劑如十二烷基磺酸鈉(SDS)濃度以及包括或不包括載體DNA，都是本領域技術人員熟知的。通過結合所需的多種條件以達到多種水平的嚴格性，是本領域的現有技術。嚴格的雜交條件也可以利用低於靶序列熔融溫度(Tm)，從約5℃到約20℃或約25℃的範圍和對靶具有精確或幾乎精確互補性的探針的條件來限定。本文中使用的熔解溫度是多數雙鏈核酸分子半解離成為單鏈時的溫度。計算核酸Tm的方法是本領域中熟知的(例如，參見BergerandKimmel，MethodsInEnzymology，Vol.152GuideToMolecularCloningTechniques，SanDiego(1987)AcademicPress，Inc.andSambrooketal.，MolecularCloning(1989)ALaboratoryManual，2ndEd.，Vols.1-3，ColdSpringHarborLaboratory)。正如標準的參考文獻指出的，Tm值簡單的估計可以通過以下公式計算Tm＝81.5+0.41(％G+C)，當核酸處於1MNaCl的水溶液中時(參見，例如，AndersonandYoung，「QuantitativeFilterHybridization」inNucleicAcidHybridization(1985))。雜交的熔融溫度(以及因此嚴格雜交的條件)受多種因素的影響，例如探針的長度和性質(DNA、RNA、鹼基組成)和靶的性質(DNA、RNA、鹼基組成、存在於溶液中的或固定的等)，以及鹽濃度和其它成分(例如甲醯胺、硫酸葡聚糖、聚乙二醇的存在或缺失)。這些因素的影響在本領域是熟知的並且在本領域的標準參考書中也有討論，參見，例如Sambrook，supra，andAusubel，supra。通常，嚴格的雜交條件為小於約1.0M鈉離子的鹽濃度，通常在pH7.0至8.3時為約0.01到1.0M的鈉離子，對於短探針(例如，10至50個核苷酸)溫度至少為約30℃，對於長探針(例如，大於50個核苷酸)溫度至少為約60℃。正如提到的，也可以通過添加如甲醯胺等的不穩定試劑達到嚴格條件，在該情況下應採用較低的溫度。在本發明中，多核苷酸可能是在高嚴格度的介質例如0.03M的氯化鈉和0.03M的檸檬酸鈉的介質中，在約50℃到約60℃的條件下與連接蛋白的mRNA雜交的多核苷酸。術語「治療上有效量」是指研究人員、獸醫、內科醫生和其它的臨床醫生尋找的會得到期望反應例如組織、系統、動物或人的生物或醫學反應的目標化合物的量。「治療」是指治療性治療和預防性治療。需要治療的那些包括已患有紊亂(障礙)和那些需要預防紊亂的。術語「載體」是指為了將核酸傳遞到細胞內(在這裡質粒、噬菌體、病毒可以與細菌、酵母、無脊椎動物和/或哺乳動物宿主細胞起作用)，以質粒、噬菌體、病毒、或其它體系形式的核酸分子擴增、複製和/或表達載體(可是天然或合成的)。載體可以保持獨立於宿主細胞的基因組DNA或可能全部或部分整合到基因組DNA中。載體通常不必包括全部必要的元件，使得在與其共存的任何宿主細胞中發揮功能。「表達載體」是在適當的條件下能夠引導外源性多核苷酸表達，例如，編碼融合蛋白結合結構域的多核苷酸。如本文所描述的，術語「同源物和同族體」包括可以是連接蛋白多核苷酸(例如mRNA)序列同源的多核苷酸。這樣的多核苷酸通常具有與相關序列至少約70％的同源性，優選至少約80％、90％、95％、97％或99％的同源性，例如，覆蓋至少約15、20、30、40、50、100或更多個連續的核苷酸(同源序列的)。同源性可以基於本領域的任何方法計算。例如UWGCGPackage提供了可用來計算同源性的BESTFIT程序(例如在其默認設置使用)(Devereuxetal.，NucleicAcidsResearch12，p387-395(1984))。PILEUP和BLAST算法可以用於計算同源性或對比序列(通常在其默認設置)，例如AltschulS.F.；JMolEvol36290-300(1993)；Altschul，S.F.etal.；JMolBiol215403-10(1990)中描述的。公眾可以從NationalCenterforBiotechnologyInformation(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/L)中得到用於執行BLAST分析的軟體。該算法包括首先通過，當其與資料庫序列中相同長度的代碼對準比較確定查詢序列中的長度為W的短代碼是否匹配或滿足某些正值的閾值T，確定高分序列對。T被稱為相鄰代碼分數闕值(wordscorethreshold)(Altschuletal.，supra)。這些初始的相鄰代碼取樣點(hit)作為開始尋找包含它們的HSP的種子。代碼取樣點沿每個序列的兩個方向延伸以儘可能增加累積的對準比較分數。代碼取樣點在每個方向上的延伸，當遇到以下情況時停止累積對準比較分數通過數量X從其最大達到值下降；由於一種或多種負分數殘基對準比較的累積，累積分數達到0或更低；或達到每個序列的末端。BLAST算法的參數W、T和X確定對準比較的敏感度和速度。BLAST程序默認字長度(W)為11的代碼、BLOSUM62打分矩陣(參見HenikoffandHenikoffProc.Natl.Acad.Sci.USA8910915-10919(1992))、50的對準比較、10的期望值(E)、M＝5、N＝4，以及兩條鏈的對比。BLAST算法對兩個序列的相似性進行統計學分析；(參見，例如KarlinandAltschulProc.Natl.Acad.Sci.USA905873-5787(1993)。BLAST算法提供的一個分析相似性的方法是最小總值可能性(P(N))，該方法提供了在兩個核苷酸或胺基酸序列之間偶然發生匹配的可能性指數。例如，如果與第一個序列相比，最小總值可能性小於約1，優選小於約0.1，更優選小於約0.01，以及最優選小於約0.001時，一個序列被認為與另一個序列相似。同源序列通常通過至少(或不大於)約1、2、5、10、15、20個或更多的突變(可以是取代、缺失或插入)而與相關序列不同。關於計算同源性，這些突變可以通過上面提到的任何區域測定。同源性序列通常選擇性地與原始序列雜交，其水平明顯高於背景。選擇性雜交通常在使用高嚴格性介質(例如，0.03M氯化鈉和0.03M檸檬酸鈉，從約50℃到約60℃)的條件下達到。然而，該雜交也可以在任何本領域已知的適當條件下進行(參見Sambrooketal.，MolecularCloningALaboratoryManual(1989))。例如，如果高嚴格性是必需的，適宜的條件包括60℃的0.2xSSC。如果低嚴格性是必需的，適宜的條件包括60℃的2xSSC。「細胞」是指適合期望應用的任何活細胞。細胞包括真核細胞和原核細胞。術語「基因產物」是指從基因轉錄的RNA分子，或遺傳編碼的或從RNA翻譯的多肽。術語「重組」是指在體外合成或其它操作製得的多核苷酸(例如，「重組多核苷酸」)，指在細胞或其它生物體系中利用重組多核苷酸生產基因產物的方法，或指由重組多核苷酸編碼的多肽(「重組蛋白質」)。因此，「重組」多核苷酸即可以通過其生產方法也可以通過其結構進行定義。關於其生產方法，該過程是指使用重組核酸技術，例如，包括在核苷酸序列中的人為幹預，通常為選擇和生產。可替換地，可以是通過產生包含兩個或更多在天然情況下彼此不相鄰片段的融合序列製得的多核苷酸。因此，例如，包括用任何非天然的載體通過轉化細胞製成的產物，正如多核苷酸包括使用任何合成的寡核苷酸方法生成的序列。類似地，「重組」多肽是一種重組多核苷酸的表達產物。「重組宿主細胞」是包含載體的細胞，例如，克隆載體或表達載體，或者是已經經過重組技術處理以表達感興趣的蛋白質的細胞。在已測序的人類基因組中，連接蛋白基因家族是多樣化的，有20個以鑑別出的成員。不同的連接蛋白基因產物結合形成具有不同性質(包括孔轉導性(poreconductance)、尺寸選擇性、電荷選擇性、電壓門控性質和化學門控性質)的間隙連接，並且在發育的不同時期或疾病過程中，表達在不同的組織中。在最近的文獻中，連接蛋白最常根據其分子量命名，例如Cx26是26Kd的連接蛋白。當比較不同物種來源的連接蛋白基因時可能導致混淆，例如人Cx36與斑馬魚Cx35是同源的。因此，本文中所使用的可以被理解為提到特定的連接蛋白就是指其所有物種的變體，即使它們的分子量不同。因此，例如，提到「連接蛋白43」不僅是指人連接蛋白43，也指每個其它物種中類似的連接蛋白，不論其分子量是否為43Kd。同樣，提到非人類「連接蛋白43」是指連接蛋白43類似物或在該物種的變體。因此，例如，提到「馬連接蛋白43」是指人連接蛋白43在馬中的相關類似物或變體，儘管其不具有43Kd的分子量。化合物本文描述的化合物對於改善、治療或預防多種紊亂和病症，包括但不限於心血管疾病、炎症、神經學上的和血管性病症，以及治療創傷是有用的。該化合物在藥物組合物以及與醫學設備和醫學操作(包括，例如手術、移植過程以及器官或組織的移植)的聯合應用中也是有用的。本文描述的某些優選的化合物能夠調控或影響分子進出細胞的運輸(例如阻斷或抑制)。因此，本文描述的某些抗-連接蛋白化合物調控細胞通訊(例如細胞之間)。某些抗-連接蛋白化合物調控或影響細胞質和細胞周質或胞外空間之間的分子的傳輸。這些化合物通常靶向半通道(連接子)，因為半通道獨立地涉及細胞質與胞外空間或組織間小分子的交換。因此，本文提供的化合物可以直接或間接地減少細胞之間或細胞與胞外空間或組織之間的連接，以及調控分子從細胞內運輸到胞外空間，也在本發明的某些化合物和具體實施方式的範圍內。任何能夠得到期望地抑制通過間隙連接或連接蛋白半通道分子通過(例如，運輸)的分子都能夠用於本發明的具體實施方式。在特定的具體實施方式中也提供了通過間隙連接或連接蛋白半通道調控分子通過的化合物(例如那些調控分子從細胞質到達胞外空間的分子)。這些化合物可以通過間隙連接或連接蛋白半通道解偶聯或不解偶聯(阻斷通過間隙連接的分子運輸)來調控分子的通過。這些化合物包括，例如蛋白質和多肽、多核苷酸以及任何其它的有機化合物，並且它們可以，例如全部或部分阻斷間隙連接或半通道的功能或表達。某些間隙連接抑制劑的列表，參見，例如Evans，W.H.和Boitano，S.Biochem.Soc.Trans.29606-612(2001)。肽和多肽連接蛋白抑制劑結合蛋白質，包括肽、擬肽、抗體、抗體片段等在某些具體實施方式中都是間隙連接和半通道的合適調節分子以及間隙連接。結合蛋白質包括，例如，單克隆抗體、多克隆抗體、抗體片段(包括，例如，Fab、F(ab』)2和Fv片段；單鏈抗體；單鏈Fv；以及諸如那些包括例如結合結構域、鉸鏈區、CH2和CH3結構域的單鏈結合分子，如Ledbetter等人在WO02/056910中描述的，2002年7月25日公開)；能夠與抗原決定簇(即部分分子，通常是指表位)結合的重組抗體和抗體片段，該抗原決定簇與特定的抗體或其它結合分子接觸。這些結合蛋白質包括抗體、抗體片段等等，可以是嵌合的或人源化的或其它處理使其在被給藥的患者體內具有更小的免疫原性，並且可以是合成的、重組產生的或產生或在表達文庫中產生的。可以考慮任何本領域已知的或以後發現的結合分子，例如那些本文提到的和/或本領域中詳細描述的。參見Harlow，E.，和Lane，D.，″AntibodiesALaboratoryManual，″ColdSpringHarborLaboratory，ColdSpringHarbor，NY，349(1988)，以引用的方式結合於此。例如，結合蛋白質不僅包括抗體等，還包括配體、受體、擬肽或其它與靶(例如，連接蛋白、半通道或相關的分子)結合的結合片段或分子(例如，通過噬菌體展示技術產生的)。結合分子通常具有期望的特異性，包括但不限於結合特異性和期望的親和力。親和力，例如，可能是Ka大於或等於約104M-1、大於或等於約106M-1、大於或等於約107M-1、大於或等於約108M-1。甚至親和力大於約108M-1也是適宜的，例如親和力等於或大於約109M-1，約1010M-1、約1011M-1和約1012M-1。根據本發明的結合蛋白質的親和力可以通過常規技術容易地測定，例如那些在Scatchardetal.1949Ann.N.Y.Acad.Sci.51660中描述的。在本文提供的某些具體實施方式中優選間隙連接和半通道的肽抑制劑(例如擬肽)。參見，例如Berthoud，V.M.etal.AmJ.Physiol.LungCellMol.Physiol.279L619-L622(2000)；Evans，W.H.andBoitano，S.Biochem.Soc.Trans.29606-612，andDeVrieseA.S.，etal.KidneyInt.61177-185(2001)。通過使用親水性分析(hydropathyplots)得到的數據，提出連接蛋白含有四個跨膜區域和兩個短的細胞外環。PaulDL.JCellBiol103123-134(1996)。連接蛋白的第一個和第二個細胞外環區域的定位進一步的特點是用於相應的分裂間隙連接的免疫定位的抗肽抗體報告生產。GoodenoughD.A.JCellBiol1071817-1824(1988)；MeyerR.A.，JCellBiol119179-189(1992)。半通道的胞外結構域通過兩個相鄰細胞相互「對接」形成完整的間隙連接通道而起作用。阻礙這些胞外結構域相互作用的試劑會損害細胞之間的通訊。對應於連接蛋白胞外環內的序列的短肽，據報導可以作為細胞之間通訊的抑制劑。BoitanoS.andEvansW.AmJPhysiolLungCellMolPhysiol279L623-L630(2000)。據報導已經有使用表達在成對的非洲蟾蜍卵母細胞內的連接蛋白(Cx)32產生的肽作為細胞之間的通道形成的抑制劑。DahlG，etal.，BiophysJ671816-1822(1994).Berthoud，V.M.andSeul，K.H.總結了某些這樣的結果AmJ.Physiol.LungCellMol.Physiol.279L619-L622(2000)。Jensen等人(US2004/0092429)已經報導了通過酪氨酸殘基磷酸化調控半通道功能，其教導的內容不包括本文提供的抗-連接蛋白化合物和方法。另外一方面，抗-連接蛋白化合物包括含有對應於連接蛋白(例如連接蛋白45、43、26、30、31.1和37)跨膜區域(例如第一個到第四個)的胺基酸序列的肽。在某些具體實施方式中，抗-連接蛋白化合物包括含有對應於連接蛋白45的部分跨膜區域的胺基酸序列的肽。在某些具體實施方式中，抗-連接蛋白化合物是具有包含SEQIDNO62的5至20個相鄰胺基酸的胺基酸序列的肽、具有包含SEQIDNO62的8至15個連續胺基酸的胺基酸序列的肽、或具有包含SEQIDNO62的11至13個連續胺基酸的胺基酸序列的肽。其它具體實施方式是抗-連接蛋白化合物，其是包含SEQIDNO62的至少5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、20、25或30個連續胺基酸的胺基酸序列的肽。在某些本文提供的抗-連接蛋白化合物中，對應於SEQIDNO62在46-75和199-228位置的連接蛋白45的胞外結構域被用於開發特定的肽序列。因此，本文描述的某些肽具有對應於SEQIDNO62在46-75和199-228位置區域的胺基酸序列。該肽不需要具有與SEQIDNO62相同的部分，並且在本文描述的測定方法和本領域已知的其它方法中，可以進行保守的胺基酸變化使這些肽保持結合活性或功能活性。在其它具體實施方式中，連接蛋白的肽靶向區域不是胞外結構域(例如，不是對應於46-75和199-228位點的SEQIDNO62部分)。在其它的具體實施方式中，抗-連接蛋白化合物包括包含對應於連接蛋白43的跨膜區域部分的胺基酸序列的肽。在某些具體實施方式中，抗-連接蛋白化合物是具有包含SEQIDNO63的5至20個連續胺基酸的胺基酸序列的肽、具有包含SEQIDNO63的8至15個連續胺基酸的胺基酸序列的肽、具有包含SEQIDNO63的11至13個連續的胺基酸的胺基酸序列的肽。其它具體實施方式主要是具有包含SEQIDNO63至少5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、20、25或30個連續胺基酸的胺基酸序列的肽的抗-連接蛋白化合物。在其它抗-連接蛋白化合物中，對應於SEQIDNO63在37-76和178-208位置上的胺基酸的連接蛋白43的胞外結構域被用於開發特定的肽序列。因此，本文描述的某些肽具有對應於SEQIDNO63的37-76和178-208位點區域的胺基酸序列。這些肽不需要與SEQIDNO63的那些部分相同的胺基酸序列，並且在本文描述的和本領域已知的其它試驗中，可以進行保守的胺基酸變化以使肽保持結合活性或功能活性。在其它具體實施方式中，連接蛋白的肽靶向區域不同於胞外結構域(例如SEQIDNO63不對應於37-76和178-208位置的部分)。在某些非限制性具體實施方式中，抗-連接蛋白肽包含對應於具有保守胺基酸取代的連接蛋白胞外結構域部分的序列，以使這些肽是功能性活化的抗-連接蛋白化合物。典型的保守胺基酸取代包括例如用另一個非極性胺基酸取代非極性胺基酸，用另一個芳香族胺基酸取代芳香族胺基酸，用另一個脂肪族胺基酸取代脂肪族胺基酸，用另一個極性胺基酸取代極性胺基酸，用另一個酸性胺基酸取代酸性胺基酸，用另一個鹼性胺基酸取代鹼性胺基酸，以及用另一個可電離的胺基酸取代可電離的胺基酸。下面表1中示出了靶向連接蛋白43的示例性肽。M1、2、3和4分別是指連接蛋白43蛋白質的第一至第四個跨膜區域。E2分別是指第一和第二個胞外環。表1細胞間通訊的肽抑制劑(cx43)FEVAFLLIQWIM3&E2(SEQIDNO32)LLIQWYIGFSLE2(SEQIDNO33)SLSAVYTCKRDPCPHQE2(SEQIDNO34)VDCFLSRPTEKTE2(SEQIDNO35)SRPTEKTIFIIE2&M4(SEQIDNO36)LGTAVESAWGDEQM1&E1(SEQIDNO37)QSAFRCNTQQPGE1(SEQIDNO38)QQPGCENVCYDKE1(SEQIDNO39)VCYDKSFPISHVRE1(SEQIDNO40)表2提供了用於抑制半通道或間隙連接功能的另外的示例性連接蛋白肽。在其它的具體實施方式中，對這些肽或其片段形成保守胺基酸變化。表2細胞間通訊的另外的肽抑制劑(cx32、cx43)連接蛋白位置AA』和序列Cx32E139-7AAESVWGDEIKSSFICNTLQPGCNSVCYDHFFPISHVR(SEQIDNO41)Cx32E141-52ESVWGDEKSSFI(SEQIDNO42)Cx32E152-63ICNTLQPGCNSV(SEQIDNO43)Cx32E162-73SVCYDHFFPISH(SEQIDNO44)Cx32E2164-188RLVKCEAFPCPNTVDCFVSRPTEKT(SEQIDNO45)Cx32E2166-177VKCEAFPCPNTV(SEQIDNO46)Cx32E2177-188VDCFVSRPTEKT(SEQIDNO47)Cx32E163-75VCYDHFFPISHVR(SEQIDNO48)Cx32E143-59VWGDEKSSFICNTLQPGY(SEQIDNO49)Cx32E146-59DEKSSFICNTLQPGY(SEQIDNO50)Cx32E2182-192SRPTEKTVFTV(SEQIDNO51)Cx32/Cx43E2182-188SRPTEKT(SEQIDNO52)201-207Cx43E164-76VCYDKSFPISHVR(SEQIDNO53)Cx43E2201-211SRPTEKT1FII(SEQIDNO54)Cx32E152-63ICNTLQPGCNSV(SEQIDNO55)Cx40E2177-192FLDTLHVCRRSPCPHP(SEQIDNO56)Cx43E2180-195SLSAVYTCKRDPCPHQ(SEQIDNO57)Cx43E164-76VCYDKSFPISHVR(SEQIDNO58)Cx43E2201-211SRPTEKTIFII(SEQIDNO59)Cx43E2188-205KRDPCHQVDCFLSRPTEK(SEQIDNO60)表3提供了用於開發本文描述的肽抑制劑的連接蛋白家族成員的細胞外環。表3中提供的肽、及其片段在某些非限制性具體實施方式中被用作肽抑制劑。在其它非限制性具體實施方式中，本表中包含約8至約15個、約11至約13個連續胺基酸的肽是本發明的肽抑制劑。在其它具體實施方式中，保守的胺基酸變化形成肽或其片段。參見BoitanoS.andEvansW.AmJPhysiolLungCellMolPhysiol279L623-630(2000)。表3各種連接蛋白家族成員的胞外環E1huCx26KEVWGDEQADFVCNTLQPGCKNVCYDHYFPISHIR(SEQIDNO68)huCx30QEVWGDEQEDFVCNTLQPGCKNVCYDHFFPVSHIR(SEQIDNO69)huCx30.3EEVWDDEQKDFVCNTKQPGCPNVCYDEFFPVSHVR(SEQIDNO70)huCx31ERVWGDEQKDFDCNTKQPGCTNVCYDNYFPISNIR(SEQIDNO71)huCx31.1ERVWSDDHKDFDCNTRQPGCSNVCFDEFFPVSHVR(SEQIDNO72)huCx32ESVWGDEKSSFICNTLQPGCNSVCYDQFFPISHVR(SEQIDNO73)huCx36ESVWGDEQSDFECNTAQPGCTNVCYDQAFPISHIR(SEQIDNO74)huCx37ESVWGDEQSDFECNTAQPGCTNVCYDQAFPISHIR(SEQIDNO75)huCx40.1RPVYQDEQERFVCNTLQPGCANVCYDVFSPVSHLR(SEQIDNO76)huCx43ESAWGDEQSAFRCNTQQPGCENVCYDKSFPISHVR(SEQIDNO77)huCx46EDVWGDEQSDFTCNTQQPGCENVCYDRAFPISHIR(SEQIDNO78)huCx46.6EAIYSDEQAKFTCNTRQPGCDNVCYDAFAPLSHVR(SEQIDNO79)huCx40ESSWGDEQADFRCDTIQPGCQNVCTDQAFPISHIR(SEQIDNO80)huCx45GESIYYDEQSKFVCNTEQPGCENVCYDAFAPLSHVR(SEQIDNO81)E2huCx26MYVFYVMYDGFSMQRLVKCNAWPCPNTVDCFVSRPTEKT(SEQIDNO82)huCx30MYVFYFLYNGYHLPWVLKCGIDPCPNLVDCFISRPTEKT(SEQIDNO83)huCx30.3LYIFHRLYKDYDMPRVVACSVEPCPHTVDCYISRPTEKK(SEQIDNO84)huCx31LYLLHTLWHGFNMPRLVQCANVAPCPNIVDCYIARPTEKK(SEQIDNO85)huCx31.1LYVFHSFYPKYILPPVVKCHADPCPNIVDCFISKPSEKN(SEQIDNO86)huCx32MYVFYLLYPGYAMVRLVKCDVYPCPNTVDCFVSRPTEKT(SEQIDNO87)huCx36LYGWTMEPVFVCQRAPCPYLVDCFVSRPTEKT(SEQIDNO88)huCx37LYGWTMEPVFVCQRAPCPYLVDCFVSRPTEKT(SEQIDNO89)huCx40.1GALHYFLFGFLAPKKFPCTRPPCTGVVDCYVSRPTEKS(SEQIDNO90)huCx43LLIQWYIYGFSLSAVYTCKRDPCPHQVDCFLSRPTEKT(SEQIDNO91)huCx46IAGQYFLYGFELKPLYRCDRWPCPNTVDCFISRPTEKT(SEQIDNO92)huCx46.6LVGQYLLYGFEVRPFFPCSRQPCPHVVDCFVSRPTEKT(SEQIDNO93)huCx40IVGQYFIYGIFLTTLHVCRRSPCPHPVNCYVSRPTEKN(SEQIDNO94)huCx45LIGQYFLYGFQVHPFYVCSRLPCHPKIDCFISRPTEKT(SEQIDNO95)示出了不同連接蛋白同種型的E2結構域序列以及與SEQIDNO35和SEQIDNO36同源的胺基酸(黑體示出)。注意到肽SEQIDNO36的最後四個胺基酸是第四個跨膜結構域的一部分。表4提供了用於開發本文描述的肽抑制劑的連接蛋白家族成員的細胞外結構域。在某些非限制性具體實施方式中，表4中提供的肽及其片段被用作肽抑制劑。在其它非限制性具體實施方式中，本表中包含約8至約15個，約11至約13個連續胺基酸的肽是本發明的肽抑制劑。在其它具體實施方式中，對這些肽或其片段形成保守的胺基酸變化。表4胞外結構域PePtideVDCFLSRPTEKT(SEQIDNO35)PePtideSRPTEKTIFII(SEQIDNO36)huCx43LLIQWYIYGFSLSAVYTCKRDPCPHQVDCFLSRPTEKTIFII(SEQIDNO96)huCx26MYVFYVMYDGFSMQRLVKCNAWPCPNTVDCFVSRPTEKTVFTV(SEQIDNO97)huCx30YVFYFLYNGYHLPWVLKCGIDPCPNLVDCFISRPTEKTVFTI(SEQIDNO98)huCx30.3LYIFHRLYKDYDMPRVVACSVEPCPHTVDCYISRPTEKKVFTY(SEQIDNO99)huCx31LYLLHTLWHGFNMPRLVQCANVAPCPNIVDCYIARPTEKKTY(SEQIDNO100)huCx31.1LYVFHSFYPKYILPPVVKCHADPCPNIVDCFISKPSEKNIFTL(SEQIDNO101)huCx32MYVFYLLYPGYAMVRLVKCDVYPCPNTVDCFVSRPTEKTVFTV(SEQIDNO102)huCx36LYGWTMEPVFVCQRAPCPYLVDCFVSRPTEKTIFII(SEQIDNO103)huCx37LYGWTMEPVFVCQRAPCPYLVDCFVSRPTEKTIFII(SEQIDNO104)huCx40.1GALHYFLFGFLAPKKFPCTRPPCTGVVDCYVSRPTEKSLLML(SEQIDNO105)huCx46IAGQYFLYGFELKPLYRCDRWPCPNTVDCFISRPTEKTIFII(SEQIDNO106)huCx46.6LVGQYLLYGFEVRPFFPCSRQPCPHVVDCFVSRPTEKTVFLL(SEQIDNO107)huCx40IVGQYFIYGIFLTTLHVCRRSPCPHPVNCYVSRPTEKNVFIV(SEQIDNO108)huCx45LIGQYFLYGFQVHPFYVCSRLPCHPKIDCFISRPTEKTIFLL(SEQIDNO109)表5提供了對照連接蛋白40的胞外環(E1和E2)示出的連接蛋白40的肽抑制劑。黑體胺基酸是指連接蛋白40的跨膜區域。表5Cx40肽抑制劑E1LGTAAESSWGDEQADFRCDTIQPGCQNVCTDQAFPISHIRFWVLQ(SEQIDNO110)LGTAAESSWGDEQA(SEQIDNO111)DEQADFRCDTIQP(SEQIDNO112)TIQPGCQNVCTDQ(SEQIDNO113)VCTDQAFPISHIR(SEQIDNO114)AFPISHIRFWVLQ(SEQIDNO115)E2MEVGFIVGQYFIYGIFLTTLHVCRRSPCPHPVNCYVSRPTEKNVFIV(SEQIDNO116)MEVGFIVGQYF(SEQIDNO117)IVGQYFIYGIFL(SEQIDNO118)GIFLTTLHVCRRSP(SEQIDNO119)RRSPCPHPVNCY(SEQIDNO120)VNCYVSRPTEKN(SEQIDNO35)SRPTEKNVFIV(SEQIDNO36)表6提供了參照連接蛋白45的胞外環(E1和E2)示出的連接蛋白45的肽抑制劑。黑體胺基酸是指連接蛋白45的跨膜區域。表6Cx45肽E1LTAVGGESIYYDEQSKFVCNTEQPGCENVCYDAFAPLSHVRFWVFQ(SEQIDNO121)LTAVGGESIYYDEQS(SEQIDNO122)DEQSKFVCNTEQP(SEQIDNO123)TEQPGCENVCYDA(SEQIDNO124)VCYDAFAPLSHVR(SEQIDNO125)APLSHVRFWVFQ(SEQIDNO126)E2FEVGFLIGQYFLYGFQVHPFYVCSRLPCHPKIDCFISRPTEKTIFLL(SEQIDNO127)FEVGFLIGQYF(SEQIDNO128)LIGQYFLYGFQV(SEQIDNO129)GFQVHPFYVCSRLP(SEQIDNO130)SRLPCHPKIDCF(SEQIDNO131)IDCFISRPTEKT(SEQIDNO36)SRPTEKTIFLL(SEQIDNO37)在某些具體實施方式中，優選某些不阻斷期望的間隙連接而阻斷半通道的肽抑制劑。同時不被任何特定的理論或機制所束縛，也認為某些擬肽(例如VCYDKSFPISHVR，SEQIDNO53)阻斷半通道但並不導致間隙連接的解偶聯(參見Leybeartetal.CellCommonAdhes10251-257(2003))。肽SRPTEKTIFII(SEQIDNO54)也可以使用，例如阻斷半通道而不引起間隙連接解偶聯。肽SRGGEKNVFIV(SEQIDNO61)可以用作對照序列(DeVrieseetal.，KidneyInternat.61177-185(2002))。對於連接蛋白45肽抑制劑的例子有YVCSRLPCHP(SEQIDNO132)，QVHPFYVCSRL(SEQIDNO133)、FEVGFLIGQYFLY(SEQIDNO134)、GQYFLYGFQVHP(SEQIDNO135)、GFQVHPFYVCSR(SEQIDNO136)、AVGGESIYYDEQ(SEQIDNO137)、YDEQSKFVCNTE(SEQIDNO138)、NTEQPGCENVCY(SEQIDNO139)、CYDAFAPLSHVR(SEQIDNO140)、FAPLSHVRFWVF(SEQIDNO141)和LIGQY(SEQIDNO142)、QVHPF(SEQIDNO143)、YVCSR(SEQIDNO144)、SRLPC(SEQIDNO145)、LPCHP(SEQIDNO146)以及GESIY(SEQIDNO147)、YDEQSK(SEQIDNO148)、SKFVCN(SEQIDNO149)、TEQPGCEN(SEQIDNO150)、VCYDAFAP(SEQIDNO151)、LSHVRFWVFQ(SEQIDNO152)。這些肽可能僅為3個胺基酸長度，包括SRL、PCH、LCP、CHP、IYY、SKF、QPC、VCY、APL、HVR或更長，例如LIQYFLYGFQVHPF(SEQIDNO153)、VHPFYCSRLPCHP(SEQIDNO154)、VGGESIYYDEQSKFVCNTEQPG(SEQIDNO155)、TEQPGCENVCYDAFAPLSHVRF(SEQIDNO156)、AFAPLSHVRFWVFQ(SEQIDNO157)。在某些非限制性具體實施方式中，包含式1A中的肽約3至約30個，約8至約15個，約11至約13個連續胺基酸的肽是本發明的肽抑制劑。式1AX1-X2-X3-X4-X5-Gly-X7-X8-X9-X10-X11-X12-X13-X14-X15-X16-X17-X18-Cys-X20-X21-X22-X23-Pro-Gly-X26-X27-X28-X29-Cys-X31-X32-X33-X34-X35-Pro-X37-X38-X39-X40-X41-X42-X43-X44-X45-X46(式1A)其中X1和X37獨立地選自由Leu、Ile、Met和Val組成的組；X2選自由Thr、Asn、Ser和Ala組成的組；X3選自由Ala、Ser、Gly和Thr組成的組；X4、X18、X29、X40和X44獨立地選自由Val、Ile、Met和Leu組成的組；X5選自由Gly、Glu、Asp、Ser和Ala組成的組；X7、X13、X22和X27獨立地選自由Glu、Asp、Gln和Lys組成的組；X8、X15和X38獨立地選自由Ser、Ala、Asn和Thr組成的組；X9選自由Ile、Val、Leu和Met組成的組；X10、X11和X31獨立地選自由Tyr、Phe、Trp和His組成的組；X12和X32獨立地選自由Asp、Glu和Asn組成的組；X14和X23獨立地選自由Gln、Glu、Arg和Lys組成的組；X16選自由Lys、Arg、Glu和Gln組成的組；X17和X34獨立地選自由Phe、Tyr和Trp組成的組；X20和X28獨立地選自由Asn、Ser、His和Asp組成的組；X21選自由Thr和Ser組成的組；X33和X35獨立地選自由Ala和Ser組成的組；X39選自由His、Tyr和Asn組成的組。X41選自由Arg、Lys和Gln組成的組；X42和X45獨立地選自由Phe、Tyr、Cys、Leu和Tyr組成的組；X43選自由Trp、Tyr、Arg、Lys、Cys和Phe組成的組；並且X46選自由Gln、His、Glu、Lys、Arg、Asn和Asp組成的組。在某些非限制性具體實施方式中，包含式1B中的肽的約3至約30個，約8至約15個，約11至約13個連續胺基酸的肽是本發明的肽抑制劑。式1BX1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-Gly-X9-X10-X11-X12-X13-Gly-X15-X16-X17-X18-Pro-X20-X21-X22-Cys-X24-X25-X26-Pro-Cys-X29-P-X31-X32-X33-Cys-X35-X36-X37-X38-Pro-X40-X41-X42-X43-X44-X45-X46-X47-X48(式1B)而X22獨立地選自由Val、Ile、Met和Leu組成的組；X4選自由Gly、Glu、Asp、Ser和Ala組成的組；X6、X12和X26獨立地選自由Leu、Ile、Met和Val組成的組；X7、X32、X36、X44和X48獨立地選自由Ile、Val、Leu和Met組成的組；X9和X16獨立地選自由Gln、Glu、Arg和Lys組成的組；X10、X13和X21獨立地選自由Tyr、Phe、Trp和His組成的組；X11、X15、X20和X35獨立地選自由Phe、Tyr和Trp組成的組；X18和X29獨立地選自由His、Tyr和Asn組成的組；X24和X37獨立地選自由Ser、Ala、Asn和Thr組成的組；X25和X38獨立地選自由Arg、Lys和Gln組成的組；X31和X42獨立地選自由Lys、Arg、Glu和Gln組成的組；X33選自由Asp、Glu和Asn組成的組；X40和X43獨立地選自由Thr和Ser組成的組；X41選自由Glu、Asp、Gln和Lys組成的組；以及X46和X47獨立地選自由Val、Ile、Met、Leu和Phe組成的組。在某些非限制性具體實施方式中，包含式2A中的肽的約3至約30個，約8至約15個，約11至約13個連續胺基酸的肽是本發明的肽抑制劑。式2AX1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-Gly-X11-X12-X13-X14-X15-X16-X17-Cys-X19-X20-X21-X22-Pro-Gly-Cys-X26-X27-X28-Cys-X30-X31-X32-X33-X34-Pro-X36-X37-X38-X39-X40-X41-X42-X43-X44-X45(式2A)其中X1和X44獨立地選自由Leu、Ile、Met、Val和Pro組成的組；X2選自由Gly、Glu、Asp、Ser和Ala組成的組；X3選自由Thr、Ser、Asn和Ala組成的組；X4選自由Ala、Ser、Gly和Thr組成的組；X5、X28、X39和X43獨立地選自由Val、Ile、Met和Leu組成的組；X6、X12和X26獨立地選自由Glu、Asp、Gln和Lys組成的組；X7、X14、X33和X37獨立地選自由Ser、Ala、Asn和Thr組成的組；X8和X15獨立地選自由Ala和Ser組成的組；X9選自由Trp、Tyr和Phe組成的組；X11和X31獨立地選自由Asp、Glu和Asn組成的組；X13、X21和X22獨立地選自由Gln、Glu、Arg和Lys組成的組；X16和X34獨立地選自由Phe、Tyr和Trp組成的組；X17和X40獨立地選自由Arg、Lys、和Gln組成的組；X19和X27獨立地選自由Asn、Ser、His和Asp組成的組；X20選自由Thr和Ser組成的組；X30選自由Tyr、Phe、Trp和His組成的組；X32選自由Lys、Arg、Glu和Gln組成的組；X36選自由Ile、Val、Leu和Met組成的組；X38選自由His、Tyr和Asn組成的組；X41選自由Phe、Tyr、Cys、Leu和Trp組成的組；X42選自由Trp、Tyr、Phe、Arg、Lys和Cys組成的組；X45選自由Gln、His、Glu、Lys、Arg、Asn和Asp組成的組。在某些非限制性具體實施方式中，包含式2B的肽的約3至約30個，約8至約15個，約11至約13個連續胺基酸的肽是本發明的肽抑制劑。式2BX1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10-X11-X12-X13-Gly-X15-X16-X17-X18-X19-X20-X21-X22-Cys-X24-X25-X26-Pro-Cys-Pro-X30-X31-X32-X33-Cys-X35-X36-X37-X38-Pro-X40-X41-X42-X43-X44-X45-X46-X47-X48(式2B)其中X1、X5和X45獨立地選自由Phe、Tyr、Cys、Trp和Leu組成的組；X2選自由Glu、Asp、Gln、Gly、His、Arg、Asn和Lys組成的組；X3、X17和X22獨立地選自由Val、Ile、Met和Leu組成的組；X4選自由Gly、Glu、Asp、Ser和Ala組成的組；X6、X12和X26獨立地選自由Leu、Ile、Met和Val組成的組；X7、X32、X36、X44和X48獨立地選自由Ile、Val、Leu和Met組成的組；X9和X16獨立地選自由Gln、Glu、Arg和Lys組成的組；X10、X13和X21獨立地選自由Tyr、Phe、Trp和His組成的組；X11、X15、X20和X35獨立地選自由Phe、Tyr和Trp組成的組；X18和X29獨立地選自由His、Tyr和Asn組成的組；X24和X37獨立地選自由Ser、Ala、Asn和Thr組成的組；X25和X38獨立地選自由Arg、Lys和Gln組成的組；X31和/或X42選自由Lys、Arg、Glu和Gln組成的組；X33選自由Asp、Glu和Asn組成的組；X40和X43獨立地選自由Thr和Ser組成的組；X41選自由Glu、Asp、Gln和Lys組成的組；並且X46和X47獨立地選自由Val、Ile、Met、Leu和Phe組成的組。肽的親和力結合測定牽出測定(pull-downassay)可以用於檢驗蛋白質和肽之間的相互作用。在這個試驗中，肽可以用蛋白反應活性(protein-reactive)或融合標籤即GST(穀胱甘肽轉移酶)標記，其可以通過連接到纖維素、瓊脂糖或鎳珠捕獲並「牽出」蛋白質結合伴侶。在用SDS-PAGE上加載緩衝液或可替換的競爭性分析物洗脫液洗脫複合物之後，該複合物通過跑SDS-PAGE凝膠和使用蛋白質分析檢測方法顯像。本領域已知的進行結合試驗的方法描述在以下的文獻中Einarson，M.B.andOrlinick，J.R.，「IdentificationofProtein-ProteinInteractionswithGlutathioneS-TransferaseFusionProteins」InProtein-ProteinInteractionsAMolecularCloningManual，ColdSpringHarborLaboratoryPress，pp.37-57(2002)，Einarson，M.B.DctectionofProtein-ProteinInteractionsUsingtheGSTFusionProteinPulldownTechnique.InMolecularCloningALaboratoryManual，3rdEdition，ColdSpringHarborLaboratoryPress，pp.18.55-18.59(2001)，andVikis，H.G.andGuan，K.L.Glutathione-S-Transferase-FusionBasedAssaysforStudyingProtein-ProteinInteractions.InProtein-ProteinInteractions，MethodsandApplications，MethodsinMolecularBiology，261，Fu，H.Ed.HumanaPress，Totowa，N.J.，pp.175-186(200)，將以上的每一個的全部內容結合於此作為參考。蛋白質和肽的相互作用和親和力可以使用表面等離子體共振技術測定，該技術能夠實時測定這些相互作用(可通過BIAcore)。該方法在測定較低親和力的蛋白質間相互作用時具有優勢。表面等離子體共振依賴光學現象，其用於在生物特異性表面上測定溶液濃度的變化。在全內反射的條件下，在薄金屬膜內產生信號。這個信號依賴於與表面接觸的溶液的折射率。如果發生生物特異性反應，溶液中的分子表現出折射率的變化並因此產生可檢測的信號。通常，蛋白質通過多種可能方法中的一種固定於羧甲基化葡聚糖-金表面。感興趣的作用肽被注射到表面上並實時檢測結合動力學。本領域已知的進行結合測定的方法描述在下面文獻中Schuck，P.，「Rcliabledeterminationofbindingaffinityandkineticsusingsurfaceplasmonresonancebiosensors」，CurrrentOpinioninBiotechnology，8(4)498-502(1997)，andZhang，X.，Oglesbee，M.「UseofsurfaceplasmonresonanceforthemeasurementoflowaffinitybindinginteractionsbetweenHSP72andmeaslesvirusnucleocapsidprotein.」BiologicalProceduresOnline.5(1)170-181(2003).功能性測定功能性測定可以用於確定擬肽是否能夠阻斷半通道的開放。HeLa人宮頸癌細胞系被Cx43、Cx45或其它感興趣的特定連接蛋白穩定地轉染。細胞培養在零鈣液(zerocalciumsolution)(含有1mMEGTA的HBSS-HEPES)中，該溶液已經顯示活化連接蛋白半通道(參見Braet，K.，etal.，「PharmacologicalsensitivityofATPreleasetriggeredbyphotoliberationofinositol-1，4，5-trisphosphateandzeroextracellularcalciuminbrainendothelialcells.JournalofCellularPhysiology」，197(2)p.205-213(2003)，DeVries，S.H.andE.A.Schwartz，」Hemi-gap-junctionchannelsinsolitaryhorizontalcellsofthecatfishretina.」JournalofPhysiology，445p.201-230(1992)，andLi，H.，etal.，Propertiesandregulationofgapjunctionalhemichannelsintheplasmamembranesofculturedcells.JournalofCellBiology，134(4)p.1019-1030(1996))。然後，細胞在含有1mMEGTA和2mM碘化丙啶的HBSS-HEPES溶液中培養30分鐘。碘化丙啶是一種不能透過膜的螢光染料，但由於其分子量小，能夠通過半通道進入。可以用螢光顯微鏡測定碘化丙啶的攝取。在擬肽存在的條件下將細胞與碘化丙啶一起培養以確定擬肽是否能夠阻止染料的攝取。多核苷酸與核酸連接蛋白抑制劑反義化合物也可以用於某些具體實施方式中。反義化合物包括多核苷酸，例如反義脫氧核苷酸、嗎啉代核苷酸、RNAi和脫氧核酶，靶向特異性連接蛋白同工型，這導致蛋白質異構型的翻譯減少並幹擾細胞間隙連接的功能。這些反義化合物的給予會導致在連接蛋白表達被下調的位點，減少間隙連接介導的細胞間通訊。反義化合物，例如，已經被用於調控涉及病毒、真菌和代謝性疾病的基因的表達。美國專利申請第5,166,195號提出了HIV的寡核苷酸抑制劑。美國專利申請第5,004,810號提出了用於與單純性皰疹病毒Vmw65mRNA雜交並抑制複製的低聚物。提供了反義化合物，包括寡核苷酸，用於調控編碼連接蛋白的核酸分子的功能，最終調控生產的連接蛋白的量。通過提供例如與編碼連接蛋白的核酸，優選mRNA特異雜交的寡核苷酸可達到這一目的。反義寡核苷酸或多核苷酸可以例如與連接蛋白mRNA的全部或部分雜交。通常反義多核苷酸與連接蛋白mRNA的核糖體結合區域或編碼區域雜交。多核苷酸可以與連接蛋白mRNA的全部或一個區域互補。例如，多核苷酸可以與連接蛋白mRNA的全部或一部分精確互補。反義多核苷酸可以抑制連接蛋白的轉錄和/或翻譯。優選地，多核苷酸是連接蛋白基因轉錄和/或翻譯的特異性抑制劑，並不抑制其它基因的轉錄和/或翻譯。其產物可以結合於連接蛋白基因或mRNA的(i)編碼序列的5』端、和/或(ii)編碼序列、和/或(iii)編碼序列的3』端。通常反義多核苷酸會引起細胞中連接蛋白mRNA和/或蛋白質表達減少。反義多核苷酸通常是相對於連接蛋白mRNA反義。該多核苷酸可以能夠與連接蛋白mRNA雜交並且能夠抑制連接蛋白的表達，通過幹擾連接蛋白mRNA代謝的一個或多個方面，包括轉錄、mRNA加工、mRNA從細胞核中運出、翻譯或mRNA降解。反義多核苷酸通常與連接蛋白mRNA雜交形成雙鏈(duplex)，該雙鏈導致mRNA的翻譯的直接抑制和/或失去穩定性。該雙鏈可能易被核酸酶降解。反義寡核苷酸與mRNA雜交幹擾mRNA的一種或多種正常功能。受到幹擾的mRNA功能包括所有的重要功能，例如RNA遷移到蛋白質翻譯位點，從RNA翻譯成蛋白質，RNA剪接以產生一種或多種mRNA物種，以及RNA可能具有的催化活性。特異性蛋白質與RNA的結合也可以受到反義寡核苷酸與RNA雜交的幹擾。幹擾mRNA功能的全部效果是調節連接蛋白的表達。在本發明的上下文中，「調節」即包括抑制也包括刺激；即，可以減少表達或增加表達。該調節可以通過本領域常規的方法測定，例如，通過mRNA表達的RNA印記分析或反轉錄酶PCR，正如在本申請的實施例中教導的或通過蛋白質表達的蛋白質印記或ELISA測定或通過蛋白質表達的免疫沉澱試驗測定。正如本申請的實施例所教導的，也能夠測定對細胞增殖或腫瘤細胞生長的影響。一旦確定了一個或多個靶位點，選擇與靶充分互補的，即充分雜交並具有足夠特異性以產生期望的調節作用的寡核苷酸。可以用任何產生核酸的合適方法生成反義核酸(DNA、RNA、修飾的、類似物等等)。針對其它連接蛋白的寡脫氧核苷酸可以通過任何本領域認可的方法，例如電腦程式MacVector和OligoTech(fromOligosetc.Eugene，Oregon，USA)根據其核苷酸選擇。用於該合成的設備可以通過包括MacVector和OligoTech(fromOligosetc.Eugene，Oregon，USA)的銷售點購買得到。對於一般關於反義多核苷酸的方法，參見AntisenseRNAandDNA，D.A.Melton，Ed.，ColdSpringHarborLaboratory，ColdSpringHarbor，NY(1988))。也可參見Dagleetal.，NucleicAcidsResearch，191805(1991)。對於反義療法，參見，例如Uhlmannetal.，Chem.Reviews，90543-584(1990)。通常，核苷酸序列的至少一部分已知用於需要抑制其表達的連接蛋白。多核苷酸靶可能通過基因步移技術和步移PCR進一步確定。該用於確定與已知核苷酸序列毗鄰的未知多核苷酸序列的方法在本領域中是熟知的。參見，例如ParkerJ.D.，etal.NucleicAcidsRes193055-60(1991)foradescriptionofwalkingPCR)。所有這些前述的參考文獻，以及本文其它的參考文獻，都以引用的方式將其全文結合於此。優選地，反義化合物靶向一種或多種特異性連接蛋白異構體。特定的連接蛋白異構體也可能被靶向，例如，基於其在時間上或空間上的表達。間隙連接在血管組織中表達，並且在某些具體實施方式中，表達在血管組織(例如，內皮細胞)中的連接蛋白同工型被靶向。參見CamellitiP.etal.Cardiovasc.Res.62414-425(2004)。內皮細胞、內皮祖細胞和平滑肌細胞被報導表達連接蛋白37、40、43和45。參見DeWit，(2004)；Hacfligeretal.，(2004)，SohlandWillecke，(2004)，andSzmitkoetal.，(2003).。還有報導稱在臨近創傷處的血管中的連接蛋白43被上調。QiuCetal.，CurrentBiology，131967-1703(2003)。在其它具體實施方式中，靶向其它同工型。可能被反義化合物靶向的連接蛋白的特異同工型包括但不限於本文描述的45、43、37、31.1、26和其它連接蛋白。在某些具體實施方式中，抗-連接蛋白化合物靶向連接蛋白43、45和/或40，在其它具體實施方式中，抗-連接蛋白化合物靶向連接蛋白7、32和/或26。可以靶向一種或多種連接蛋白。在某些具體實施方式中，一種抗-連接蛋白化合物靶向多於一種的連接蛋白(例如，連接蛋白43和連接蛋白45)。在其它具體實施方式中，製劑或組合物(例如，藥物組合物)中包含多於一種的抗-連接蛋白化合物。本發明認為，任何連接蛋白都可能被本文描述的、本領域已知的或以後發現的一種或多於一種的抗-連接蛋白化合物所靶向。優選但不必需地，靶向的連接蛋白是人類的連接蛋白。連接蛋白可以例如具有選自SEQIDNO12-31的核酸鹼基序列。在某些具體實施方式中，反義化合物靶向於編碼連接蛋白的具有選自SEQIDNO12-31的核酸鹼基序列的核酸分子中的至少8個核酸鹼基。連接蛋白的靶根據設計或改造的組織類型而變化，本發明中使用的反義多核苷酸的精確序列會根據靶連接蛋白而變化。寡核苷酸靶向的一種或多種連接蛋白依賴於被下調的位點。根據連接蛋白亞單位組合物，這反映了間隙連接在全身不同部位的不均勻構成。然而，根據在組織中的分布，某些連接蛋白比其它的更加普遍，如本文所描述的。寡核苷酸單獨使用或聯合使用都可以靶向連接蛋白45、43、26、37、30和/或31.1(例如，參見SEQIDNO12-31)，其適用於角膜工程或改造方面的應用。本發明的一方面，寡脫氧核苷酸可以是未修飾的磷酸二酯寡聚體。本發明的另一方面，聚核苷酸可以是單鏈或雙鏈的。在某些非限制性實施例中，反義化合物靶向連接蛋白mRNA或mRNA前體分子的特異區域，包括外顯子、內含子、mRNA剪接位點(外顯子-外顯子或內含子-外顯子結合處)、5』端非翻譯區域和3』端非翻譯區域。也考慮，靶向獨立的連接蛋白的寡核苷酸可以聯合使用(例如，靶向一個、兩個、三個、四個或更多個不同的連接蛋白)。例如，靶向連接蛋白45以及一種或多種連接蛋白家族的其它成員(例如連接蛋白43、26、30、31.1和43)的ODN可以聯合使用。也考慮，單獨的反義多核苷酸可以對特定的連接蛋白是特異的，或對1，2，3或更多的不同連接蛋白是特異的。特異性多核苷酸通常會靶向連接蛋白之間的連接蛋白基因或mRNA中不是保守的序列，而非特異性多核苷酸會靶向保守序列。因此，在某些具體實施方式中，反義化合物靶向編碼人連接蛋白26、連接蛋白30、連接蛋白31.1、人連接蛋白37、連接蛋白43、連接蛋白45核酸分子的至少8個核酸鹼基，其中所述反義化合物抑制與所述患者眼睛相關的細胞的人連接蛋白的表達。在某些具體實施方式中，對應於連接蛋白的核酸分子具有選自包括在本申請列出的序列中的SEQIDNO12-31的核酸鹼基序列(相當於包括例如補體、cDNA、編碼連接蛋白的部分等等)。在某些具體實施方式中，組合物靶向兩種或更多人連接蛋白並抑制兩種或更多種人連接蛋白的表達。在其它一些具體實施方式中，反義化合物是反義寡核苷酸。連接蛋白43的示例性反義寡核苷酸包括GTAATTGCGGCAAGAAGAATTGTTTCTGTC(SEQIDNO1)；GTAATTGCGGCAGGAGGAATTGTTTCTGTC(SEQIDNO2)；和GGCAAGAGACACCAAAGACACTACCAGCAT(SEQIDNO3)。連接蛋白26的反義寡核苷酸的實例具有序列TCCTGAGCAATACCTAACGAACAAATA(SEQIDNO4)。選擇的連接蛋白37典型的反義寡核苷酸包括序列5』CATCTCCTTGGTGCTCAACC3』(SEQIDNO5)和5』CTGAAGTCGACTTGGCTTGG3』(SEQIDNO6)。選擇的連接蛋白30的示例性反義寡核苷酸包括序列5』CTCAGATAGTGGCCAGAATGC3』(SEQIDNO7)和5』TTGTCCAGGTGACTCCAAGG3』(SEQIDNO8)。選擇的連接蛋白31.1的示例性反義寡核苷酸包括序列5』CGTCCGAGCCCAGAAAGATGAGGTC3』(SEQIDNO9)；5』AGAGGCGCACGTGAGACAC3』(SEQIDNO10)和5』TGAAGACAATGAAGATGTT3』(SEQIDNO11)。在進一步的具體實施方式中，選自下列序列的寡脫氧核苷酸，尤其適合下調連接蛋白43的表達5』GTAATTGCGGCAAGAAGAATTGTTTCTGTC3』(SEQIDNO1)5』GTAATTGCGGCAGGAGGAATTGTTTCTGTC3』；(SEQIDNO2)5』GGCAAGAGACACCAAAGACACTACCAGCAT3』(SEQIDNO3)。在又一個具體實施方式中，選自下列序列的寡脫氧核苷酸，尤其適合連接蛋白26、37、30和31.15』TCCTGAGCAATACCTAACGAACAAATA3』(連接蛋白26)(SEQIDNO4)5』CATCTCCTTGGTGCTCAACC3』(連接蛋白37)(SEQIDNO5)5』CTGAAGTCGACTTGGCTTGG3』(連接蛋白37)(SEQIDNO6)5』CTCAGATAGTGGCCAGAATGC3』(連接蛋白30)(SEQIDNO7)5』TTGTCCAGGTGACTCCAAGG3』(連接蛋白30)(SEQIDNO8)5』CGTCCGAGCCCAGAAAGATGAGGTC3』(連接蛋白31.1)(SEQIDNO9)5』AGAGGCGCACGTGAGACAC3』(連接蛋白31.1)(SEQIDNO10)5』TGAAGACAATGAAGATGTT3』(連接蛋白31.1)(SEQIDNO11)。本文提供的反義化合物通常包括約8至約40個核酸鹼基(即約8至約40個相連接的核苷)，更典型地包括約12至約40個核酸鹼基，甚至更典型地約30個核酸鹼基。包含多核苷酸的反義化合物可以長達至少約40，例如至少約60或至少約80個核苷酸並且達到100、200、300、400、500、1000、2000或3000或更多的核苷酸。合適的反義化合物包括，例如30鹼基ODN。在某些具體實施方式中，反義化合物靶向編碼連接蛋白的具有選自SEQIDNO12-31的核酸鹼基序列的核酸分子的至少約8個核酸鹼基。在某些具體實施方式中，反義化合物靶向編碼連接蛋白的具有選自SEQIDNO12-31的核酸鹼基序列的核酸分子的至少約10個、至少約12個、至少約14個、至少約16個、至少約18個、至少約20個、至少約25個、至少約30個以及至少約35個核酸鹼基。反義化合物的大小，包括寡核苷酸靶向編碼人連接蛋白的核酸分子的至少為約8至35個核酸鹼基的寡核苷酸，可以是8個核酸鹼基的長度或更長，在8和100個核酸鹼基之間、在8和50個核酸鹼基之間、在8和40個核酸鹼基之間、在10和50個核酸鹼基之間、在12和50個核酸鹼基之間、在14和50個核酸鹼基之間、在16和50個核酸鹼基之間、在18和50個核酸鹼基之間、在20和50個核酸鹼基之間、在25和50個核酸鹼基之間、在15和35個核酸鹼基之間等等。本發明的其它反義化合物可以具有這樣或更小或更大的尺寸，例如長度大於100個核酸鹼基。反義化合物包括但不限於反義寡核苷酸(ODN)、反義多核苷酸、脫氧核酶、嗎啉代寡核苷酸、RNAi分子或其類似物、siRNA分子或其類似物、PNA分子或其類似物、DNA酶或其類似物、5』端突變的U1小核RNA及其類似物。如本文提供的反義化合物可以包括寡脫氧核苷酸(ODN)的應用。ODN通常長約20個核苷酸並與mRNA前體和mRNA雜交生成核糖核酸酶H(RNA酶H)的底物，核糖核酸酶H特異地降解已形成的RNA-DNA雙鏈的RNA鏈。如果以抑制RN酶H活動的方式修飾，ODN能夠通過空間位阻或抑制mRNA前體的剪接抑制mRNA的翻譯。ODN及其修飾物已經被用於靶向雙鏈DNA以抑制通過形成三螺旋的轉錄。ODN可以通過本領域認可的自動化合成方法得到，並可相對直接地獲得任何序列的ODN以及通過反義鹼基對阻斷基因表達。在某些方面，為了阻斷基因表達，ODN的磷酸二酯主鏈可以被修飾以增加其作為靶特異性試劑的效率。這些主鏈修飾物被開發以改善ODN的穩定性並增強其細胞攝取。最廣泛使用的修飾物是其中非橋接氧被硫原子取代生成的硫代磷酸酯ODN。至少一種硫代磷酸酯ODN已經被FDA批准，幾種其它的硫代磷酸酯反義ODN正處於多種癌症和炎性疾病的早期臨床試驗階段。關於阻斷基因功能的ODN的活動機制根據ODN主鏈變化(Branch，A.D.Hepatology24，1517-1529(1996)；Dias，N.andStein，C.A.Mol.CancerThor.1，347-355(2002)；Stein，C.A.andCohen，J.S.，CancerRes.48，2659-2668(1988)；Zon，G.Ann.N.Y.AcadSci.，616，161-172(1990)。帶淨負電荷的ODN，例如磷酸二酯和硫代磷酸酯，引起RNA酶H介導的靶mRNA的斷裂。其它主鏈修飾物由於缺少電荷或與靶RNA形成的螺旋的類型(可以歸為空間位阻ODN)不與RNA酶H結合。通常使用的後一組成員包括嗎啉基、U-O-甲基、」-O-烯丙基、鎖核酸和肽核酸(PNA)。在其它抑制的靶中，這些ODN能夠阻斷剪接、翻譯、細胞核-細胞質運輸和翻譯。另一方面，連接蛋白表達的調節涉及核酶的使用。核酶是即使在完全沒有蛋白質的情況下起到酶作用的RNA分子。其具有顯著特異地破壞和/或形成共價鍵的催化活性，因此多個數量級地加速靶向反應的自發速度。核酶與RNA通過Watson-Crick鹼基配對結合併通過催化磷酸二酯主鏈的水解來降解靶RNA。有多種不同種類的核酶，其中「錘頭狀」核酶是最被廣泛研究的。正如其名稱所暗示的，當與其靶mRNA雜交時，錘頭狀核酶形成獨特的二級結構。核酶中對催化重要的殘基與靶-互補序列相鄰，靶-互補序列又包圍靶RNA的切割位點。核酶導致的切割需要二價離子，例如鎂，同時也依賴於靶RNA的結構和可接近性。通過使用定位信號在細胞內共定位核酶和靶RNA很大程度上增強了其沉默效應。考慮到細胞中核酶的持續生產，錘頭狀核酶足夠短到可以被化學合成或通過載體轉錄，允許在細胞內的連續生產。RNA作為催化劑的能力在嗜熱四膜蟲(Tetrahymenathermophila)和RNA酶的RNA部分自身剪接I類內含子中首次得到證實。發現這兩種RNA酶之後，RNA介導的催化作用被發現與酵母、真菌和植物線粒體(以及葉綠體)單鏈植物類病毒和擬病毒RNA、丁型肝炎病毒和粗糙鏈孢黴中衛星RNA中的自身剪接II類內含子有關。核酶是天然的，但也可以人工設計用於表達順式(在相同的核酸鏈上)或反式(非共價連接核酸)地靶向特異的序列。利用體外選擇實驗開發了新的生物化學活性並產生新的作用於底物而不是RNA的核酶基序。嗜熱四膜蟲的I類內含子是第一個順式剪接的核酶被轉化成反式反應形式，其被稱為內含子/核酶，在基因組研究和可能的治療方面都是有用的。在反式剪接反應中，靶mRNA有缺陷的外顯子能夠交換共價結合於內含子/核酶的正確外顯子。這是通過連接到內含子的外顯子通過鹼基配對到靶mRNA上定位的，使其可以在酯交換反應中共價結合到靶轉錄本的5』端。該反應被用於將野生型序列反式剪接到鐮刀狀細胞球蛋白轉錄本和突變p53轉錄本種，並取代強直性肌營養不良等位基因上的蛋白質激酶轉錄本的3」-UTR內展開的三連體。核糖核酸內切酶RNA酶P可以在遍及整個自然界的生物體中找到。根據其分離自不同的機體，該酶含有RNA和一種或多種蛋白質組分。從大腸埃希氏桿菌(Escherichiacoli)和枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)酶中分離的RNA組分缺少蛋白質交換某種鹽和離子的條件下，可以作為位點特異性切割劑。對人和細菌酶要求的底物的研究表明，任何一種酶的最小底物量類似於轉運RNA分子的一個片段。該結構可以獨特設計的反義RNA模仿，其與靶RNA配對，並在檢測試管和細胞中用作RNA酶P介導的、位點特異性切割的底物。也表明反義成分可以共價結合於RNA酶PRNA，從而使該酶僅指向感興趣的靶RNA。研究人員在設計反義RNA中已經利用了這個性質，使其與感興趣的靶RNA配對以刺激靶位點特異性切割以及用於細胞培養中單純皰疹病毒和巨細胞病毒的靶向抑制。某些小的植物致病性RNA(類病毒、衛星RNA和擬病毒)，來自粗糙脈胞菌(N.crassa)線粒體DNA質粒和動物丁型肝炎病毒的轉錄本，在缺少體外蛋白質的條件下發生自身切割反應。該反應要求中性pH值和Mg2+。該自身切割反應是體內複製的滾環機制的主要部分。這些自身剪切的RNA根據在剪切位點附近的序列和形成的二級結構可以細分為種群。小核酶來源於單鏈植物類病毒和擬病毒RNA中發現的基序。以共有的二級結構和保守的核苷酸系列為基礎，術語「錘頭狀」被歸入自身切割結構域的一組。錘頭狀核酶由30個核苷酸組成。錘頭狀催化結構域的簡單性使其在反作用核酶設計中成為一個普遍的選擇。使用Watson-Crick鹼基配對，錘頭狀核酶可以被設計成切割任何靶RNA。切割位點的要求相對簡單，並且事實上可以靶向任何UH序列基序(H為U、C或者A)。第二種植物來源的自我切割基序，最初在菸草環斑病衛星RNA的負鏈中被證實，被稱為「髮夾結構」或「紙夾結構」。髮夾核酶在產生2」端的可逆反應中切割RNA底物，Y-循環磷酸鹽和5」-氫氧化T1末端設計的催化基序的版本也切割並翻轉多種反式靶標的多種拷貝。髮夾結構的底物要求包括GUC，其中切割發生在G的直接上遊。髮夾結構的核酶也催化連接反應，儘管其更加常用於切割反應。在細胞中大量應用錘頭狀核酶和髮夾狀核酶下調特異性細胞和病毒的靶。Haseloff和Gerlach設計了錘頭狀基序(HaseloffandGerlach；Nature.Aug18；334(6183)585-91(1988))，其可以被設計成通過修飾與正確靶鹼基配對的臂來切割任何靶標。Ramenzani等人使用工程設計為表達抗人類免疫缺陷病毒(HIV)gag核酶的細胞實際上完全抑制了病毒基因的表達和複製的研究中，證實該錘頭狀核酶基序具有潛在的治療上的應用(RamezaniA.etal.，FrontiersinBioscience7a，29-36；(2002))。另一方面，連接蛋白表達的調節包括催化DNA(或DNA酶)的使用。通過體外進化已經開發了能夠位點特異地切割RNA靶的小DNA(因為沒有發現天然DNA酶)。已經確定兩種具有不同的切割位點特異性的不同催化基序。最常使用的10-20種酶通過Watson-Crick鹼基配對結合到它們的RNA底物上，並位點特異性切割靶RNA，與錘頭狀核酶和髮夾狀核酶一樣，產生了2，3』-環磷酸和5』-OH終點。靶mRNA的切割導致靶mRNA被破壞和DNA酶循環使用以及切割多種底物。催化DNA相對地合成便宜而且具有良好的催化性能，這使其在反義DNA或核酶中成為有用的替代品。已經公開了多種DNA酶在細胞培養中的應用，包括vegFmRNA的抑制作用並因此阻礙血管形成和抑制慢性骨髓性白血病特徵的bcr/abl融合轉錄本的表達。催化DNA可以外源給藥，其可以通過主鏈修飾在載體缺失的條件下優化系統轉運。本發明的另一個方面，調節組成型連接蛋白基因包括使用具有嗎啉代主鏈結構的寡核苷酸Summerton，J.E.andWeller，D.D.U.S.Pat.No.5,034,506。本發明的另一方面，反義多核苷酸可以被化學修飾以增強其對核酸酶的耐受能力並增加進入細胞的效率。例如，可以使用包含硫代磷酸酯寡脫氧核苷酸片段和適當位置修飾的寡脫氧或寡核糖核苷酸片段的混合主鏈寡核苷酸(MBO)。MBO具有硫代磷酸酯鍵和其它修飾的寡核苷酸的其它片段，例如甲基膦酸酯、氨基磷酸酯、二硫代磷酸酯、N3』P5』-氨基磷酸酯和寡核糖核苷酸硫代磷酸酯及其2』-O-烷基類似物、以及2』-O-甲基核糖核苷酸甲基膦酸酯，它們是非離子的並且具有耐受核酸酶或2』-O-烷基寡核糖核苷酸的能力。正如本領域已知的，核苷是一種鹼基-糖化合物。核苷的鹼基部分通常為雜環基。該雜環基的兩種最常用的種類是嘌呤和嘧啶。核苷酸是核苷進一步包括共價結合於核苷的糖部分的磷酸基團。對於那些包括五呋喃糖的核苷，磷酸基團可以連接到糖的2』、3』或5』羥基。在形成寡核苷酸時，磷酸基團彼此共價連接到相鄰的核苷以形成線性的多聚化合物。最後該線性多聚結構的各個末端進一步連結以形成環形結構，然而，通常優選開放的線性結構。在寡核苷酸結構中，磷酸基團通常被認為是形成寡核苷酸的中間核苷的主鏈。RNA和DNA的正常鍵和主鏈是3』，5』-磷酸二酯鍵。本發明中有用的反義化合物可以包括含有修飾主鏈或非天然核苷間鍵的寡核苷酸。具有修飾主鏈的寡核苷酸包括那些主鏈上保留一個磷原子和那些主鏈上沒有磷原子的寡核苷酸。在本發明的上下文中，在修飾寡核苷酸的核苷間的主鏈上沒有磷原子也可以被認為是寡核苷。本發明中有用的具有修飾寡核苷酸主鏈的反義化合物包括，例如，硫代磷酸酯、手性硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、磷酸三酯、氨基烷基磷酸三酯、甲基和包括3』-亞烷基膦酸酯和手性膦酸酯的其它烷基膦酸酯、亞膦酸酯、包括3』-氨基氨基磷酸酯和氨基烷基氨基磷酸酯的氨基磷酸酯、硫代氨基磷酸酯、硫代烷基膦酸酯、硫代烷基磷酸三酯和具有正常3』-5』鍵、它們的2』-5』連接類似物和那些具有轉化極性的硼酸亞膦酸酯，其中臨近的核苷單元對將3』-5』連結至5』-3』或2』-5』至5』-2』。也包括多種鹽、混合鹽和游離酸形式。一方面，考慮的是，其中不包括磷原子的修飾寡核苷酸主鏈具有由短鏈烷基或環烷基核苷間鍵(internucleosidelinkage)、混合雜原子和烷基或環烷基核苷間鍵，或一種或多種短鏈雜原子或雜環核苷間鍵形成的主鏈。這些包括具有嗎啉鍵(部分由核苷的糖部分形成)；矽氧烷主鏈；硫化物、亞碸和碸主鏈；甲醯基(formacetyl)和硫代甲醯基主鏈；亞甲基甲醯基和硫代甲醯基主鏈；含烯的主鏈；氨基磺酸鹽主鏈；亞甲基亞胺(methyleneimino)和亞甲基肼主鏈；磺酸酯和磺醯胺主鏈；醯胺主鏈以及其它具有混合N、O、S和CH2組分部分的主鏈。一個方面，考慮的是，擬寡核苷酸(寡核苷酸模擬物)，糖和核苷間鍵全部即核苷酸單元主鏈被新的基團取代。鹼基單元用於與合適的核酸靶化合物雜交。一種這樣的寡聚化合物，表現出優異的雜交性能的擬寡核苷酸，稱為肽核酸(PNA)。在PNA化合物中，寡核苷酸的糖主鏈被含有醯胺的主鏈代替，尤其是氨基乙基甘氨酸主鏈。鹼基被保留和直接或間接地結合於主鏈醯胺部分的雜氮原子上。PNA化合物進一步的教導在Nielsenetal.(Science，254，1497-1500(1991))中可找到。一方面，考慮具有硫代磷酸酯主鏈的寡核苷酸和具有雜原子主鏈的寡核苷酸，尤其是-CH2-NH-O-CH2-、-CH2-N(CH)3-O-CH2-[稱為甲基亞胺(methylimino)或MMI主鏈]、-CH2-O-N(CH3)-CH2-、-CH2-N(CH3)-N(CH3)-CH2-以及-O-N(CH3)-CH2-CH2-(其中天然磷酸二酯主鏈以-O-P-O-CH2-表示)。另一方面，考慮修飾的寡核苷酸也可以含有一種或多種取代糖部分。例如，寡核苷酸在2』位置上含有下列基團之一OH、F、O-、S-或N-烷基、O-烷基-O-烷基、O-、S-或N-烯基或O-、S-、或N-炔基，其中烷基、烯基和炔基可以被C1至C10烷基或C2至C10烯基和炔基取代或未取代的。尤其優選的是O[(CH2)nO]mCH3、O(CH2)nOCH3、O(CH2)2ON(CH3)2、O(CH2)nNH2、O(CH2)nCH3、O(CH2)nONH2和O(CH2)nON[(CH2)nCH3]2，其中n和m為從1至約10。其它優選的寡核苷酸可能在2』位置上含有下列基團之一C1至C10低級烷基、取代的低級烷基、烷芳基、芳烷基、O-烷芳基或O-芳烷基、SH、SCH3、OCN、Cl、Br、CN、CF3、OCF3、SOCH3、SO2CH3、ONO2、NO2、N3、NH2、雜環烷基、雜環烷芳基、氨烷基氨基、聚烷基氨基、取代的甲矽烷基、RNA切割基團、報導子基團、嵌入劑(intercalator)、改善寡核苷酸藥動學性質的基團、改善寡核苷酸藥效的基團以及其它具有相似性質的取代基。優選的修飾包括2』-甲氧乙氧基(2』-O-CH2CH2OCH3，也被稱為2』-O-(2-甲氧乙基)或2』-MOE)(Martinetal.Helv.Chim.Acta1995，78，486-504)，即，烷氧烷氧基。其它修飾包括2』-二甲氨基氧乙氧基，即，O(CH2)2ON(CH3)2基團，也稱為2』-DMAOE，以及2』-二甲氨基-乙氧乙氧基(2』-DMAEOE)，即，2』-O-CH2-O-CH2-N(CH2)2。還可以考慮，修飾可以包括2』-甲氧基(2』-O-CH3)、2』-氨基丙氧基(2』-OCH2CH2CH2NH2)和2』-氟(2』-F)。也可以在寡核苷酸的其它位置做相似的修飾，尤其是在核苷酸3』末端上或2』-5』連接的寡核苷酸中糖的3』位置和核苷酸5』末端的5』位置上。寡核苷酸也可以具有糖模擬物，例如環丁基部分，代替五呋喃基糖。另一方面，考慮寡核苷酸還可以包括核酸鹼基(在本領域中通常簡稱為「鹼基」)修飾或取代。本文使用的「未修飾的」或「天然的」核酸鹼基包括嘌呤鹼基腺嘌呤(A)和鳥嘌呤(G)，和嘧啶鹼基胸腺嘧啶(T)、胞嘧啶(C)和尿嘧啶(U)。修飾的核酸鹼基包括其它合成和天然的核酸鹼基，例如5-甲基胞嘧啶(5-me-C或m5c)、5-羥甲基胞嘧啶、黃嘌呤、次黃嘌呤、2-氨基腺嘌呤、腺嘌呤和胞嘧啶的6-甲基和其它烷基衍生物、腺嘌呤和胞嘧啶的2-丙基和其它烷基衍生物、2-硫代尿嘧啶、2-硫代胸腺嘧啶和2-硫代胞嘧啶、5-滷尿嘧啶和胞嘧啶、5-丙炔基尿嘧啶和胞嘧啶、6-氮尿嘧啶、胞嘧啶和胸腺嘧啶、5-尿嘧啶(假尿嘧啶)、4-硫代尿嘧啶、8-滷素、8-氨基、8-硫羥基、8-硫代烷基、8-羥基和其它8-取代的腺嘌呤和鳥嘌呤，5-滷素尤其是5-溴、5-三氟甲基和其它5-取代的尿嘧啶和胞嘧啶，7-甲基鳥嘌呤、7-甲基腺嘌呤、8-氮雜鳥嘌呤和8-氮雜腺嘌呤、7-去氮鳥嘌呤和7-去氮腺嘌呤和3-去氮鳥嘌呤和3-去氮腺嘌呤。更多的核酸鹼基包括披露在美國專利申請第3,687,808號中的，那些披露在ConciseEncyclopediaOfPolymerScienceAndEngineering，pages858-859，Kroschwitz，J.JohnWiley&Sons中的，那些披露在Englischetal.(AngewandteChemie，InternationalEdition，30，613-722(1991))中的，以及那些披露在Sanghvi，Y.S.，Chapter15，AntisenseResearchandApplication，pages289-302，Crooke，S.T.andLebleu，B.，ed.，CRCPress(1993)中的。這些鹼基中的某些對於增加寡聚化合物的結合親和力尤其有用。它們包括5-取代嘧啶、6-氮雜嘧啶和N-2，N-6和O-6取代的嘌呤，包括2-氨基丙基腺嘌呤、5-丙炔基尿嘧啶和5-丙炔基胞嘧啶。5-甲基胞嘧啶的取代已經表現出增加核酸雙鏈的穩定性達0.6至1.2℃(Sanghvi，Y.S.，Crooke，S.T.andLebleu，B.，eds.，AntisenseResearchandApplication，CRCPress，BocaRaton，pages276-278(1993))是目前優選的鹼基取代物，當其與2』-O-甲氧乙基糖修飾物結合時甚至更加優選。另一方面，考慮到的寡核苷酸修飾物涉及化學結合於寡核苷酸的一個或多個部分或結合物，其增強寡核苷酸的活性、細胞分布或細胞攝取。這些部分包括但不限於脂質部分例如膽固醇部分(Letsingeretal.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA86，6553-6556(1989))、膽酸(Manoharanetal.，Bioorg.Med.Chem.Lett.4，1053-1059(1994))、硫醚，例如己基-S-三苯甲基硫醇(hexyl-S-tritylthiol)(Manoharanetal.，Ann.N.Y.Acad.Sci.660，306-309；Manoharanetal.，Bioorg(1992).Med.Chem.Let.3，2765-2770(1993))、硫代膽固醇(Oberhauseretal.，Nucl.AcidsRes.，20，533-538(1992))、脂肪鏈，例如十二元醇或十一烷殘基(Saison-Behmoarasetal.，EMBOJ.10，1111-1118(1991)；Kabanovetal.，FEBSLett.259，327-330(1990)；Svinarchuketal.，Biochimie75，49-54(1993))、磷脂，例如十六烷基外消旋甘油或三乙基胺1，2-二氧十六烷基-外消旋-甘油-3-氫-磷酸酯(Manoharanetal.，TetrahedronLett.36，3651-3654(1995)；Sheaetal.，Nucl.AcidsRes.18，3777-3783(1990))、多胺或聚乙烯乙二醇鏈(Manoharanetal.，Nucleosides&Nucleotides14，969-973(1995))，或金剛烷乙酸(Manoharanetal.，TetrahedronLett.36，3651-3654(1995))，，或棕櫚基部分(Mishraetal.，Biochim.Biophys.Acta1264，229-237(1995))，或十八胺或己胺羰基羥膽固醇部分(Crookeetal.，J.Pharmacol.Exp.Ther.277，923-937(1996))。還可以考慮到的是，使用嵌合寡核苷酸的寡核苷酸。在本發明的上下文中，「嵌合」寡核苷酸或「嵌合體」是含有兩個或多個化學上不同的區域(每個由至少一種核苷酸組成)的寡核苷酸。這些寡核苷酸通常含有至少一個其中寡核苷酸被修飾的區域，使得寡核苷酸具備增強的抗核酸酶降解的能力、增強的細胞攝取和/或對靶核酸增強的結合親和力。寡核苷酸的其它區域可以作為能夠切割RNA:DNA或RNA:RNA雜交體的酶的底物。作為實施例，RNA酶H是一種切割RNA:DNA雙鏈的RNA鏈的細胞核酸內切酶。因此，導致靶RNA的切割，從而在很大程度上增強了基因表達的反義抑制效率。靶RNA的切割可以用凝膠電泳方法常規檢測，如果有必要，可結合本領域中已知的核酸雜交技術。該RNA酶H介導的靶RNA的切割與使用核酶切割核酸是有區別的。嵌合寡核苷酸的實例包括但不限於「結合體(gapmer)」，其中存在三個不同的區域，通常為一個中心區域和在其側面的兩個化學性質彼此相同但與間隙不同的區域。結合體(gapmer)優選的實施例為寡核苷酸的中心部分(「間隙」)作為RNA酶H的底物並優選由2』-脫氧核苷酸組成的寡核苷酸，而側翼部分(5』和3』「翼」)被修飾以使其具有對靶RNA分子更強的親和力但不能夠支持核酸酶的活性(例如氟-或2』-O-甲氧乙基取代基)。嵌合寡核苷酸不限於那些在糖上修飾的寡核苷酸，也可以包括具有修飾的主鏈的寡聚核苷或寡核苷酸，例如具有硫代磷酸酯(P＝S)和磷酸二酯(P＝O)主鏈連接區域，或具有MMI和P＝S主鏈連接區域。其它嵌合體包括「wingmer(溫格默)」，在本領域中也稱為「hemimer(海默)」，即，具有兩個不同區域的寡核苷酸。在wingmer優選的實施例中，寡核苷酸的5』部分作為RNA酶H的底物，並優選由2』-脫氧核苷酸組成，而3』部分被修飾以使其具有對靶RNA分子更強的親和力但不能支持核酸酶的活性(例如2』-氟-或2』-O-甲氧乙基-取代的)，反之亦然。在一個具體實施方式中，本發明的寡核苷酸在至少一個核苷酸的糖部分含有2』-O-甲氧乙基(2』-O-CH2CH2OCH3)修飾。該修飾已經顯示增強寡核苷酸對靶的親和力和寡核苷酸的抗核酸酶能力。根據本發明，一個、多個或所有寡核苷酸的核苷酸亞單位可能具有2』-O-甲氧乙基(-O-CH2CH2OCH3)修飾。含有多個具有2』-O-甲氧乙基修飾的核苷酸亞單位的寡核苷酸在寡核苷酸(也可能是嵌合寡核苷酸)內的任何核苷酸亞單位可以具有這樣的修飾。除2』-O-甲氧乙基修飾以外，也考慮含有增強反義效率、效力或靶親和力的其它修飾的寡核苷酸。本發明還提供了與雙鏈或二倍體連接蛋白核酸(例如，在連接蛋白RNA或連接蛋白基因的摺疊區域)結合的多核苷酸(例如，DNA、RNA、PNA或其類似物)，形成包含三股螺旋或「三倍體」核酸。三股螺旋結構通過例如阻止連接蛋白基因的轉錄而導致連接蛋白表達受抑制，因此降低或消除細胞中的活性。不被任何特殊的機制束縛，認為三股螺旋配對包括雙螺旋充分開放以與聚合酶、轉錄因子或常規分子結合發生的能力。用三股螺旋結構的鹼基配對規則(參見，例如Chengetal.，J.Biol.Chem.26315110(1988)；FerrinandCamerini-Otero，Science3541494(1991)；Ramdasetal.，J.Biol.Chem.26417395(1989)；Strobeletal.，Science2541639(1991)；andRigasetal.，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.839591(1986))和連接蛋白mRNA和/或基因序列構造三倍體寡-和多核苷酸。通常，形成三倍體的寡核苷酸包含約10至約25個核苷酸或與連接蛋白RNA或基因更長的「互補」特異序列(即足夠大以形成穩定的三股螺旋，但根據運送的模式確定足夠小的程度，如果需要，可以體內給藥)。在本文中，「互補的」是指能夠形成穩定的三股螺旋。在一個具體實施方式中，寡核苷酸被設計成與連接蛋白基因的調控區域特異結合(例如，連接蛋白5』-側翼序列、啟動子和增強子)或特異結合轉錄起始位點(例如從翻譯起始位點的-10到+10之間)。最新應用三倍體DNA治療進展的綜述，參見Geeetal.，inHuberandCarr，1994，MolecularandImmunologicApproaches，FuturaPublishingCo，MtKiscoNYandRininslandetal.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA945854(1997)本發明還提供對於抑制連接蛋白活性有用的核酶。該核酶結合併特異性切割和滅活連接蛋白mRNA的活性。有用的核酶可以包括與連接蛋白mRNA的5』-和3』-末端序列互補並能夠用基於連接蛋白mRNA序列的技術進行設計。考慮到的是，本文提供的核酶包括那些具有I類內含子核酶特性的核酶(Cech，Biotechnology13323(1995))和其它的錘頭狀核酶(Edgington，Biotechnology10256(1992))。核酶包括具有諸如GUA、GUU和GUC切割位點的核酶。長度在15至20個核糖核苷酸之間的短RNA寡核苷酸(對應於含有切割位點的靶連接蛋白基因區域)可以評甲可以使寡核苷酸更理想的二級結構特徵。可以通過使用核糖核酸酶保護測定或根據本領域已知的標準方法在體外對核酶活性的檢測方法來檢測切割位點與互補寡核苷酸雜交的可接近性而評價切割位點的適合性。進一步考慮的是這樣的翻譯化合物，其中反義和核酶功能結合於同一寡核苷酸。此外，核酶可以含有一個或更多修飾的核苷酸或核苷酸之間經修飾的鍵，正如上述並結合本文提供的說明性反義寡核苷酸的描述。本發明還提供了通過象RNA幹擾(RNAi)的方法對抑制連接蛋白活性有用的多核苷酸。這和其它抑制基因的技術在本領域是公知的。該技術的綜述見Science2881370-1372(2000)。RNAi影響轉錄後水平並且是序列特異性的。該過程包括引入部分或全部雙鏈特性的RNA，或該RNA前體或能夠編碼該RNA進入細胞或進入細胞外環境的RNA。正如Fire等人在美國專利申請第6,506,559號中描述的，該RNA可能含有一個或多個聚合的核糖核苷酸鏈。可以通過自身互補RNA單鏈和互補RNA雙鏈形成雙鏈結構。該RNA可能包括對磷酸-糖主鏈或核苷酸的修飾。RNA雙鏈結構可能在細胞內或細胞外形成。研究表明，一種或多種核糖核苷酸特異性地與雙鏈RNA結合併將雙鏈RNA切割為短的片段。核糖核酸酶仍然與這些片段結合，最終特異地結合於互補mRNA上，即，特異性結合於連接蛋白基因轉錄的mRNA鏈。連接蛋白基因的mRNA也被核糖核酸酶降解為短片段，從而排除了連接蛋白基因的翻譯和表達，並因此抑制了連接蛋白的活性。此外，RNA聚合酶也能夠促進大量小片段拷貝的合成，使系統效率呈指數增長。該基因抑制途徑的獨特特徵在於沉默不限於細胞起始處。基因沉默的影響可能被傳播到機體的其它部位甚至透過種系遺傳至數代。一方面，雙鏈(ds)RNA依賴的基因特異性轉錄後沉默方法涉及使用小幹擾RNA(siRNA)。一般RNAi方法的使用受到某些限制，包括適應長dsRNA分子的活化的哺乳動物細胞中非特異的抗病毒防禦機制(GilJ，EstebanM，「InductionofapoptosisbythedsRNA-dependentproteinkinase(PKR)Mechanismsofaction」.Apoptosis2000，5107-114)。本領域的最新進展表明21個核苷酸RNA的合成二倍體能夠介導哺乳動物細胞中基因特異的RNAi而不引起種屬抗病毒防禦機制(ElbashirS，etal.，「Duplexesof21-nucleotideRNAsmediateRNAinterferenceinculturedmammaliancells」.Nature，411494-498(2001)；CaplenN.etal.，ProcNatlAcadSci，989742-9747(2001))。因此，siRNA逐漸被認為是基因特異性調控的有力工具。如本文描述的，RNAi包括一組共用很多公用生化成分的相關基因沉默機制，其中末端效應器分子為，例如但不限於，小21-23核苷酸反義RNA。一種使用相對長的dsRNA觸發器(trigger)的機制，dsRNA觸發器被細胞酶Dicer處理變短，例如但不限於21-23核苷酸的dsRNA，被稱為siRNA。與靶RNA互補的siRNA鏈併入被稱為RNA誘導沉默複合體(RISC)的多蛋白複合體，其作為靶位點內mRNA鏈的內切核苷酸切割的嚮導(guide)。這導致完整mRNA的降解；反義siRNA可以被循環利用。在低等生物中，RNA依賴的RNA聚合酶也使用退火嚮導(guide)siRNA作為引物，生成更多面向靶的dsRNA，其最終作為Dicer的底物，生成更多的siRNA並放大siRNA信號。該途徑通常用作植物病毒的防禦機制。正如本文描述的，siRNA可能由兩個分離的退火信號鏈組成，例如但不限於21-23核苷酸，其末端的兩個3』-核苷酸是不配對的(3』突出)。可替換地，siRNA可能是單個莖環(stem-loop)形式，經常稱為小髮夾RNA(shRNA)。通常，但不總是，shRNA的反義鏈也與si/shRNA的正義配體鏈(partnerstrand)完全互補。在哺乳動物細胞中，長dsRNA(通常為長度大於30個核苷酸)觸發乾擾素途徑(通路)，激活蛋白激酶R和2；5」-寡腺苷酸(oligoadenylate)合成酶。幹擾素途徑的激活能夠導致翻譯的普遍下調和RNA普遍降解。然而，導入哺乳動物細胞的外源性較小的siRNA據報導可以繞過幹擾素途徑。siRNA反義產物也可以來源於外源微小RNA。在人類細胞中，不管原始類型(siRNA和微小RNA)或處理途徑，最終成熟的siRNA，例如但不限於與mRNA完全同源的21-23核苷酸的反義RNA，將引導mRNA切割。通常，siRNA與靶位點之間不匹配的效果與活性完全消除幾乎相同，只了解其部分原因；然而，部分同源導致mRNA翻譯的抑制。通常，與靶錯配的siRNA被設計為模擬原型微小RNA-靶相互作用，根據特異性相互反應和mRNA中靶位點的數量可以介導不同程度的翻譯抑制。RNAi可以通過前體siRNA的外源給予或通過siRNA或shRNA以啟動子為基礎的表達激活。小幹擾RNA(siRNA)可以化學合成或通過DNA為基礎的載體系統產生。通常，這涉及小髮夾(sh)RNA的轉錄，其被有效地處理以在細胞中形成siRNA(PaddisonP，CaudyA，HannonGStablesuppressionofgeneexpressionbyRNAiinmammaliancells.ProcNatlAcadSciUSA991443-1448(2002)；PaddisonP，CaudyA，BernsteinE，HannonG，ConklinDShorthairpinRNAs(shRNAs)inducesequence-specificsilencinginmammaliancells.Genes&Dev16948-958(2002)；SuiG，etal.，ProcNatlAcadSci85515-5520(2002)；BrummelkampT，etal.，Science296550-553(2002))。因此，在上下文中，siRNA可以被用作一種有效的組織特異性靶向和基因表達調控的方法。根據本發明使用的寡核苷酸可以通過公知的固相合成技術方便且常規地得到。用於這樣的合成的設備在本領域中已知在多個銷售處出售。也可以使用這樣的合成的任何其它方法；寡核苷酸實際的合成在本領域中被認可。已知使用類似的技術製備寡核苷酸，例如硫代磷酸酯和2』-烷氧基或21-烷氧基烷氧基衍生物，包括2』-O-甲氧乙基寡核苷酸(Martin，P.Helv.Chim.Acta78，486-504(1995))。已知使用類似的技術和可商購得到的修飾的amidite和可控孔玻璃(CPG)產物例如生物素、螢光素、吖啶或補骨脂素(psoralen)修飾的amidite和/或CPG(可從GlenResearch，Sterling，Va.獲得)以合成螢光標記的、生物素化的或其它共軛寡核苷酸。方法另一方面，本發明包括通過給予本文提供的化合物來治療受治者(例如，患者)、靶器官、靶組織或靶細胞。某些具體實施方式涉及治療具有血管紊亂的受治者、靶器官、靶組織或靶細胞的方法，包括給予受治者本文提供的能夠抑制連接蛋白半通道表達、形成或活性的反義化合物、擬肽或其它化合物。血管紊亂包括例如，任何與動脈、血管以及血管和/或心血管系統相關的紊亂或病症，包括與器官或組織相關的紊亂和病症。典型的實例包括但不限於動脈硬化症、微血管紊亂、大血管紊亂、中風、腦血管疾病(大腦缺血)、血栓、外傷導致的血管損傷(例如，皮下損傷、支架植入、再狹窄或血管成形術)，由葡萄糖水平升高(糖尿病)導致的血管損傷、糖尿病性視網膜、下肢外周血管疾病、器官缺血以及內皮細胞破壞。其它的具體實施方式涉及治療炎性疾病的方法，包括給予受治者、靶器官、靶組織、或靶細胞本文提供的能夠抑制連接蛋白半通道的表達、形成、或活性的反義化合物、擬肽、或其它化合物。其它具體實施方式涉及與移植或植入操作結合一起治療受治者、靶器官、靶組織、或靶細胞的方法，包括給予所述患者本文提供的能夠抑制連接蛋白半通道的表達、形成、或活性並抑制或預防與所述移植或植入操作相關的組織水腫的反義化合物、擬肽、或其它化合物。其它的具體實施方式涉及治療心肌梗死及與其相關的心臟疾病的方法，包括給予受治者本文提供的能夠抑制連接蛋白半通道的表達、形成、或活性的反義化合物、擬肽、或其它化合物。另外其它的具體實施方式涉及治療冠狀動脈疾病的方法，包括給予受治者、靶器官、靶組織、或靶細胞本文提供的能夠抑制連接蛋白半通道的表達、形成、或活性的反義化合物、擬肽、或其它化合物。其它的具體實施方式涉及治療與缺血相關的損傷的方法，包括最初的缺血性損傷和隨後的再灌注損傷。其它的具體實施方式涉及治療心肌梗死及與其相關的心臟疾病的方法，包括共同給予受治者本文提供的能夠抑制連接蛋白半通道的表達、形成、或活性的反義化合物、擬肽、或其它化合物和其它已知用於心臟缺血病症包括BakerD.W.等人描述的ACC/AHAGuidelinesfortheEvaluationandManagementofChronicHeartFailureintheAdult，2001；AmericanCollegeofCardiologyandtheAmericanHeartAssociation，)的治療方法或步驟。這些方法包括，例如，心臟移植、外科和機械方法、為了血液動力學和臨床改善的二尖瓣膜修復或替換、用於循環支持的體外設備、左心室輔助設備、機械降壓、左心室切除術(Batista方法)、用於治療患者缺血性心肌症的心肌成形術和多種動脈瘤切除方法。植入物和其它外科或內科裝置可以以不同的方式利用本發明的試劑(例如，抗-連接蛋白化合物和組合物)塗覆(或其它適合釋放的方法)，包括例如(a)直接將抗-連接蛋白試劑和組合物粘附於植入物或裝置上(例如，通過給植入物或裝置噴一層聚合物/藥物薄膜，或將植入物或裝置在聚合物/藥物溶液中浸泡，或通過其它共價或非共價的方法)；(b)用一種物質塗覆植入物或裝置，例如水凝膠，其然後吸收抗-連接蛋白組合物(或上述抗-連接蛋白因子)；(c)將塗覆有抗-連接蛋白組合物的線(或該聚合物本身形成線)交織纏繞於植入物或裝置上；(d)或將植入物或裝置插入含有或塗有抗-連接蛋白組合物的套筒或網中；(e)用抗-連接蛋白試劑或組合物構造該植入物或裝置本身；或(f)通過其它適合的植入物或裝置釋放抗-連接蛋白試劑。在本發明優選的具體實施方式中，該組合物在儲存過程中和插入時應該牢固地粘附於植入物或裝置上。該抗-連接蛋白試劑或組合物還應優選在儲存過程中、插入之前或在插入身體後溫暖至體溫時不會降解(如果需要)。此外，應該優選平滑和均勻地塗布於植入物或裝置上，抗-連接蛋白試劑的分布一致，而不改變其延展輪廓。在本發明優選的具體實施方式中，該抗-連接蛋白試劑或組合物應一旦被使用，就能向植入物或裝置周圍的組織中提供一致的、可預測的、延長的抗-連接蛋白因子釋放。對於血管支架(stents)，除上述特性外，該組合物不應導致支架血栓形成(導致血塊的產生)，或導致血流的嚴重紊亂(比支架本身如果未被塗覆應該導致的嚴重)。本文中提供的抗-連接蛋白化合物、組合物和方法可以用於多種利用植入物、內科和外科裝置等的操作過程中。一方面，植入我、外科裝置或支架被塗覆或使用其它方法構造，使其包含和/或釋放本文提供的任何抗-連接蛋白試劑。典型的例子包括心血管裝置(例如，可植入的靜脈導管、靜脈埠(port)、隧道式靜脈導管、慢性靜脈點滴線或埠，包括肝動脈注射導管、起搏器線路、可植入的去纖顫器)；神經/神經外科裝置(例如，腦室腹膜分流術、腦室心房分流術、神經刺激設備、硬腦膜修補和植入以預防椎板切除術後硬腦膜纖維變性、用於持續蛛網膜下滴注的裝置)；胃腸裝置(例如，慢性留置導管、進食管和分流管)；眼科植入物(例如，多重植入物和其它用於新生血管性青光眼的植入物、翼狀胬肉的藥物洗脫隱形眼鏡、用於故障dacrocystalrhinostomy、角膜新血管形成的藥物洗脫隱形眼鏡、糖尿病性視網膜病的植入物、高危角膜移植的藥物洗脫隱形眼鏡)；耳鼻喉裝置(例如，小骨植入、咽鼓管夾板或用於粘合耳的支架或作為transtempanic排出的替代方法的慢性耳炎支架)；整形外科手術移植(例如，預防在胸大肌下或乳腺下的方法或乳房切除術後植入凝膠或含鹽的乳房填充物或下顎植入後的纖維攣縮，)，以及整形外科植入物(例如，膠合的整形外科修補物)。本文提供的反義化合物、擬肽或其它化合物在某些具體實施方式中可以以預定時間給藥。在某些具體實施方式中，反義連接蛋白半通道表達、形成或活性在內皮細胞中被抑制。在某些具體實施方式中，可以治療受治者包括中風的血管紊亂。在某些具體實施方式中，可以治療受治者包括缺血在內的血管紊亂。該缺血可以是例如組織缺血、心肌缺血或腦缺血。在某些具體實施方式中，本文治療的受治者具有缺血導致神經功能喪失的風險。在其它具體實施方式中，可以治療受治者血管紊亂，包括治療或緩解由缺血導致的中樞或周圍神經系統中的細胞死亡或降解。在某些具體實施方式中，可以治療受治者血管紊亂，其中給予本文提供的反義化合物、擬肽或其它化合物結合對患者進行的血管或冠脈操作。在其它具體實施方式中，本文提供的反義化合物、擬肽或其它化合物在所述血管或冠狀操作過程中給予。本文提供的化合物的給予可以在選擇的時間點之前或之後。該「選擇的時間點」可以為，例如，對應於紊亂或病症的發作，例如心血管紊亂、炎症、血管紊亂或缺血事件，或進行醫學操作例如血管或冠脈操作。本文提供的化合物(例如反義化合物、擬肽等)，例如，可以在選擇的時間點之前、同時或之後給予。在某些具體實施方式中，化合物在選擇的時間點立即給予或直到約24小時之後給予。在其它具體實施方式中，化合物在選擇的時間點之後約1小時內給予，在選擇的時間點之後約2小時內給予，在選擇的時間點之後約3小時內給予，在選擇的時間點之後約4小時內給予，在選擇的時間點之後約5小時內給予，在選擇的時間點之後約6小時內給予，在選擇的時間點之後約8小時內給予，在選擇的時間點之後約10小時內給予，在選擇的時間點之後約12小時內給予，在選擇的時間點之後約14小時內給予，在選擇的時間點之後約16小時內給予，在選擇的時間點之後約20小時內給予，或在選擇的時間點之後約24小時內給予。在某些具體實施方式中，本文中提供的化合物的給予與對患者實施的心臟或其它外科手術結合。「選擇的時間點」在本文中是指，包括損傷的時間、進行操作的時間，例如，心臟或血管操作等等。在某些具體實施方式中，本文中提供的化合物的給予與進行血管手術的醫學裝置結合。在某些具體實施方式中，待治療的血管紊亂選自一種或多種缺血性中風、短暫性腦缺血發作、顱內出血、蛛網膜下腔出血、血栓性中風、靜脈血栓、肺部栓塞、栓塞性中風、腦血管紊亂、外周動脈閉塞性疾病、動靜脈畸形(arteriovenousmalformation)以及動脈瘤(aneurysm)。在某些具體實施方式中，待治療的血管紊亂與一種或多種冠心病、冠狀血管紊亂、動脈粥樣硬化血管疾病、動脈粥樣硬化斑塊破裂、和/或血栓栓塞相關，血管紊亂與高血壓、心肌梗塞、心絞痛、缺血性心臟病、大動脈紊亂、下肢外周動脈病症、纖維肌性發育不良、煙霧病(也稱為腦底異常血管網病，moyamodisease)和血栓性脈管炎(thromboangiitis)。在某些具體實施方式中，待治療的炎性紊亂(失調)選自一種或多種關節炎、風溼性關節炎(RA)、炎症、關節破壞或損傷、炎性紊亂、Grave’s病、橋本病(hashimoto’sdisease)、風溼性關節炎、系統性紅斑狼瘡、乾燥症候群、免疫性血小板減少性紫癜、多發性硬化症、重症肌無力、硬皮病、牛皮癬、腸炎、克隆氏病(crohn’sdiseases)、潰瘍性結腸炎、膿毒症和膿毒性休克，以及消化系統的自身免疫性疾病。在某些其它具體實施方式中，治療受治者、靶器官、靶組織或靶細胞與凝血、血栓形成、纖維蛋白溶解、心血管疾病、糖尿病、影響心臟的內分泌紊亂、與懷孕相關的心血管疾病、風溼熱、與HIV感染相關的心血管紊亂、與心臟疾病相關的血液學和腫瘤學紊亂、與心臟疾病相關的神經性紊亂，以及與心臟疾病相關的腎臟紊亂中的一種或多種相關的病症。在某些其它具體實施方式中，治療與移植或植入操作相關的受治者、靶器官、靶組織、靶細胞，該移植或植入操作與心力衰竭、先天性心臟病、兒童後天性心臟病、瓣膜心臟病、感染性心內膜炎、心肌失效症(cardiomypopathy)、心臟腫瘤、心包性心臟病、外傷性心臟病、肺部栓塞、肺部高血壓、肺源性心臟病、運動性心臟症候群、外周動脈循環紊亂、影響器官系統的血管紊亂、影響中樞神經系統的血管紊亂、影響大腦的血管紊亂、影響視網膜的血管紊亂、影響腎的血管紊亂、影響神經的血管紊亂、微血管紊亂，以及大血管紊亂。可以治療與移植或植入操作(手術)相關的受治者，該移植或植入操作選自心臟移植、腎移植、肝移植、肺移植、胰腺移植、腸移植或聯合器官移植中的一種或多種。可以治療與移植或植入操作相關的受治者，該移植或植入操作包括眼部組織、皮膚、心臟瓣膜、骨頭、肌腱、靜脈、韌帶、骨髓移植、牙齒或齒齦組織植入、與整形手術相關的移植或植入、與髖部或關節替換操作有關的移植或植入，以及涉及幹細胞的組織移植或植入中的一種或多種。不受特定機制約束或限制，在某些具體實施方式中，通過給予能夠結合於或調控連接子(半通道)的抗-連接蛋白化合物以達到預期效果的目的來治療治療受治者、靶器官、靶組織、或靶細胞，預期的效果，包括例如以下的一種或多種用於預防缺血或外傷後脊髓中的水腫、用於預防缺血或外傷後的組織中血管壁降解(例如在腦、視神經、脊髓和心臟中)、用於治療炎性關節炎和具有水腫和炎症症狀的或由持續炎症導致發生血管萎縮的其它炎性紊亂、用於治療亞急性或慢性眼角膜損傷(其中預防血管萎縮允許從角膜緣缺血恢復)、作為一種再生上皮形成的方法用於治療亞急性或慢性的眼角膜損傷、用於治療眼部化學燒傷以觸發上皮恢復並使從亞急性角膜緣缺血恢復、用於治療亞急性或慢性皮膚損傷或糖尿病性潰瘍，其中預防持續性血管萎縮使組織從缺血中恢復、用於治療慢性皮膚損傷或糖尿病性潰瘍其中連接蛋白43在前緣持續表達抑制了再生上皮的形成、用於使用連接蛋白擬肽直接輸送到腦室或通過脊柱/脊髓輸送治療外周缺血、用於使用連接蛋白擬肽直接輸送到腦室或通過脊柱/脊髓輸送抑制或預防周圍缺血後的水腫、全身系統給予連接蛋白擬肽治療外周缺血、將連接蛋白擬肽直接輸送到腦室或通過脊柱/脊髓輸送連接蛋白擬肽治療中風或中樞神經系統缺血、全身系統給予連接蛋白擬肽治療中風或中樞神經系統缺血、用於預防缺血後腦的癲癇樣電活動、用於預防腦的癲癇樣電活動(epileptiformactivity)(例如癲癇)、用於預防缺血引起的腦癲癇樣活動、用於使用連接子擬肽或連接蛋白特異性反義多核苷酸預防組織水腫，和/或用於預防器官移植後損傷擴散、再灌注水腫(和排異反應)。另一方面，本發明的化合物的給藥量能夠調控連接蛋白、半通道或間隙連接的表達、形成或活性。不受任何機制約束或限制並且沒有任何限制，在某些具體實施方式中，認為靶連接蛋白半通道被定位於細胞的細胞質膜上，而且其被期望產生抑制不期望的分子從所述細胞的細胞質輸送到胞外空間的效果。而且，不被任何特定的機制限制，在某些具體實施方式中，給予本文提供的能夠通過維持血管上皮細胞完整性，抑制或預防心臟中進行性梗死和再灌注損傷，用增強細胞存活和/或組織修復的有效量以促進血液對損傷組織的再灌注，通過抑制由中風或中樞神經系統損傷後的上皮細胞破裂來維持血腦屏障，用於維持組織損傷後的血管完整性，或抑制或預防與移植或植入過程相關的組織水腫。藥物組合物另一方面，本發明包括含有本發明的化合物，包括反義化合物和擬肽的藥物組合物。本文提供的反義化合物還可以包括生物等價化合物，包括藥學上可接受的鹽和藥物前體。其包括任何藥學上可接受的鹽、酯、或這些酯的鹽、或任何其它的一旦給予包括人類的動物該化合物就能夠提供(直接或間接)其生物活性代謝產物或殘基。例如，肽能夠被改造以增強其在體內的穩定性。例如可以加入合成側鏈，其相互連接形成了肽形成環。該環化也可以通過將N-末端和C-末端連接在一起形成藥物前體，其在進入身體之後被蛋白酶作用變成線狀。因此，例如，披露的內容也涉及藥學上可接受的核酸的鹽和該酸的藥物前體。「藥學上可接受的鹽」是生理學和藥學上可接受的本文提供的核酸的鹽即，保留需要的親代化合物生物活性並不另外引入不期望的毒理學效果的鹽(參見，例如，Bergeetal.，J.ofPharmaSci.66，1-19(1977))。肽或其變體可以在體外合成，例如，通過固相肽合成方法或酶催化的肽合成或藉助於DNA重組技術合成。固相肽合成方法是一種已確定的和廣泛使用的方法，描述在以下的參考文獻中Stewartetal.，SolidPhasePeptideSynthesis，W.H.FreemanCo.，SanFrancisco(1969)；Merrifield，J.Am.Chem.Soc.852149(1963)；Meienhoferin″HormonalProteinsandPeptides，″ed.；C.H.Li，Vol.2(AcademicPress，1973)，pp.48-267；andBavaayandMerrifield，″ThePeptides，″eds.E.GrossandF.Meienhofer，Vol.2(AcademicPress，1980)pp.3-285。這些肽可以進一步純化，通過分餾或免疫親和性或離子交換柱、乙醇沉澱、反相HPLC、二氧化矽層析或諸如DEAE的陰離子交換樹脂層析、色譜聚焦、SDS-PAGE、硫酸銨沉澱、凝膠過濾，例如使用SephadexG-75、配體親和層析、或從非極性溶劑或非極性/極性溶劑混合物中結晶或沉澱。優選通過結晶或沉澱純化。作為可選的成分，本發明的藥物製劑可以包括，藥學上可接受的載體、稀釋劑、增溶或乳化劑以及本領域中能夠得到的該類的鹽。這些物質的實例包括諸如生理學上緩衝鹽溶液和水的正常鹽溶液。在本發明的藥物製劑中有用的特異性非限制性載體和/或稀釋劑的實例包括水和生理學上可接受的緩衝鹽溶液，例如pH7.0-8.0的磷酸鹽緩衝鹽溶液。合適的藥物載體包括但不限於無菌水、鹽溶液(例如Ringer’s溶液)、酒精、聚乙二醇、明膠、如乳糖、直鏈澱粉或澱粉之類的碳水化合物、硬脂酸鎂、滑石、矽酸、粘性石蠟、脂肪酸酯、羥甲基纖維素、聚乙烯基吡咯烷酮等。藥物製劑可以為已滅菌的並且與期望的輔助試劑混合，例如，潤滑劑、防腐劑、穩定劑、潤溼劑、乳化劑、影響滲透壓的鹽、緩衝液、著色劑和/或芳香族物質以及對該活性化合物沒有不良反應的物質。其也可以在需要時與其它活性物質聯合應用，例如酶抑制劑，以降低代謝降解作用。本發明的肽或肽變體的羧基鹽可以通過將該肽與一種或多種期望鹼基的等價物例如金屬氫氧化物鹼，例如氫氧化鈉；金屬碳酸鹽或碳酸氫鹽，例如碳酸鈉或碳酸氫鈉；或胺鹼，例如三乙胺、三乙醇胺等等接觸，以常規的方式製備。肽或肽的變體氨基基團的N-醯基衍生物可以通過使用N-醯基保護的胺基酸進行最終縮合，或通過醯基化保護的或未保護的肽來製備。O-醯基衍生物可以通過，例如，游離羥基肽或肽樹脂(peptideresin)的醯化來製備。使用標準的醯化試劑例如醯基滷、酐、醯基咪唑等等都可以實現醯化。如果需要，N-醯化和O-醯化可以一起進行。肽或肽的變體或肽或肽變體的胺基酸殘基的酸加成鹽可以通過將肽或胺與一種或多種期望的無機或有機酸例如鹽酸的等價物接觸來製備。肽的羧酸酯也可以通過任何本領域已知的常用方法來製備。對於寡核苷酸，藥學上可接受的鹽的實例包括但不限於(a)與陽離子例如鈉、鉀、銨、鎂、鈣，多胺例如精胺和亞精胺等形成的鹽；(b)與無機酸例如鹽酸、氫溴酸、硫酸、磷酸、檸檬酸等形成的酸加成鹽；(c)與有機酸例如乙酸、草酸、酒石酸、琥珀酸、馬來酸、富馬酸、葡糖酸、檸檬酸、蘋果酸、抗壞血酸、苯甲酸、鞣酸、棕櫚酸、海藻酸、聚穀氨酸、萘磺酸、甲磺酸、p-苯甲磺酸、萘二磺酸、多聚半乳糖醛酸等形成的鹽；(d)與基本陰離子例如氯、溴和碘形成的鹽。本文提供的寡核苷酸可以另外或可替換地製備成「藥物前體」的形式遞送。術語「藥物前體」是指一種治療試劑，其可以製備成無活性的形式，該無活性形式在機體內或其細胞內通過內源酶或其它化學品和/或條件下可被轉化為活性形式(即藥物)。尤其，根據WO93/24510Gosselinetal.，publishedDecember9，1993中公開的方法，寡核苷酸藥物前體模型可以通過SATE[(S-乙醯-2-硫代乙基)磷酸]衍生物製備。本文提供的化合物可以按配方製成藥物組合物，除了寡核苷酸，其可以包括藥學上可接受的載體、增稠劑、稀釋液、緩衝液、防腐劑、表面活性劑、中性或陽離子脂質、脂質複合物、脂質體、滲透增強劑、載體化合物和其它藥學上可接受的載體或賦形劑等。藥物組合物也可以包括一種或多種活性成分，例如幹擾素、抗菌劑、抗炎劑、麻醉劑等等。不經腸的給藥製劑可以包括無菌水溶液，其也含有緩衝液、脂質體、稀釋劑和其它合適的添加劑。包括本文提供的寡核苷酸的藥物組合物可以包括為了增強寡核苷酸營養輸送的滲透增強劑。滲透增強劑可以分為五大類，即，脂肪酸、膽鹽、螯合劑、表面活性劑和非表面活性劑(Leeetal.，CriticalReviewsinTherapeuticDrugCarrierSystems8，91-192(1991)；Muranishi，CriticalReviewsinTherapeuticDrugCarrierSystems7，1-33(1990))。可以包括來自一種或多種這幾大類中的一種或多種滲透增強劑。起滲透增強劑作用的多種脂肪酸及其衍生物包括油酸、月桂酸、葵酸、肉豆蔻酸、棕櫚酸、硬脂酸、亞油酸、亞麻酸、二葵酸酯、三葵酸酯、甘油單油酸酯(1-單油醯-外消旋-甘油)、甘油桂酸酯、辛酸、花生四烯酸、甘油1-單葵酸酯、1-十二烷基氮雜環庚烷-2-酮、醯基肉毒鹼、醯基膽鹼、單-或二甘油酯及其生理上可接受的鹽(即，油酸鹽、月桂酸鹽、肉豆蔻酸鹽、棕櫚酸鹽、硬脂酸鹽、亞油酸鹽，等等)。Leeetal.，CriticalReviewsinTherapeuticDrugCarrierSystemspage92(1991)；Muranishi，CriticalReviewsinTherapeuticDrugCarrierSystems7，1(1990)；El-Haririetal.，J.Pharm.Pharmacol.44，651-654(1992))。膽汁的生理學功能包括促進脂質和脂溶性維生素分散和吸收(Brunton，Chapter38InGoodman&Gilman′sThePharmacologicalBasisofTherapeutics，9thEd.，Hardmanetal.McGraw-Hill，NewYork，N.Y.，pages934-935(1996))。各種天然的膽鹽及其合成衍生物起到滲透增強劑的作用。因此，術語「膽鹽」包括任何天然的膽汁成分以及其合成衍生物。可以使用含有一種或多種滲透增強劑的複合製劑。例如，膽鹽可以與脂肪酸聯合使用以形成複合製劑。螯合試劑包括但不限於乙二胺四乙酸(EDTA)、檸檬酸、水楊酸酯或酯(例如，水楊酸鈉、5-甲氧基水楊酸酯和homovanilate)、膠原的N-醯基衍生物、β-二酮(烯胺)的聚乙二醇月桂基醚-9和N-氨基醯基衍生物[Leeetal.，CriticalReviewsinTherapeuticDrugCarrierSystemspage92(1991)；Muranishi，CriticalReviewsinTherapeuticDrugCarrierSystems7，1-33(1990)；Buuretal.，J.ControlRel.14，43-51(1990))。螯合試劑具有作為DNA酶抑制劑的額外優勢。表面活性劑包括例如十二烷基硫酸鈉、聚氧乙烯-9-月桂醯醚和聚氧乙烯-20-十六烷基醚(Leeetal.，CriticalReviewsinTherapeuticDrugCarrierSystemspage92(1991))；和全氟化碳乳劑例如FC-43(Takahashietal.，J.Pharm.Phamacol.40，252-257(1988))。非表面活性劑包括，例如不飽和環狀尿素，1-烷基-和1-烯基氮雜環環丙烷-鏈烷酮衍生物(Leeetal.，CriticalReviewsinTherapeuticDrugCarrierSystemspage92(1991)).並且非甾族的抗炎劑例如雙氯酚酸鈉、茚甲新以及苯基丁氮酮(Yamashitaetal.，J.Pharm.Pharmacol.39，621-626(1987))。本文使用的「載體化合物」包括核酸或其類似物，其本身是惰性的(即本身沒有生物學活性)，但其在體內過程中被認為降低具有生物學活性的核酸的生物利用度，例如，降解生物學活性核酸或促進其從循環中排出。核酸和載體化合物共同給藥，通常是後者過剩，能夠導致肝臟、腎臟或其它循環系統外庫(extracirculatiryreservoirs)中核酸恢復量的顯著降低，推測是由於載體化合物和核酸之間競爭共同受體的原因。與載體化合物相比，「藥學上可接受的載體」(賦形劑)是藥學上可接受的溶劑、懸浮劑或任何其它的用於將一種或多種核酸輸送給動物的惰性載體。藥學上可接受的載體可以是液體或固體，並在與一定藥物組合物的核酸和其它組分聯合使用時選擇以有計劃的方式給藥以提供需要的量、連貫性等等。典型的藥學上可接受的載體包括但不限於粘結劑(例如預膠化的玉米澱粉、聚乙烯基砒咯烷酮或羥丙基甲基纖維素等)、填料(例如乳糖和其它糖、微晶體纖維素、果膠、明膠、硫酸鈣、乙基纖維素、聚丙烯酸酯或磷酸氫鈣等)、潤滑劑(例如硬脂酸鎂、滑石、矽石、膠體的二氧化矽、硬脂酸、金屬硬脂酸鹽、氫化植物油、玉米澱粉、聚乙烯乙二醇、苯甲酸鈉、醋酸鈉等)、崩解劑(例如澱粉、澱粉乙醇酸鈉(sodiumstarchglycolate)等)、或潤溼劑(例如，月桂醯硫酸鈉)。本文提供的組合物還可以包含在藥物組合物中常規存在的其它添加劑組分，以該領域中固定的使用水平使用。因此，例如，該組合物可以包含另外的適合的藥學活性材料例如止癢劑、收斂劑、局部麻醉劑或抗炎劑，或可以包含對物理上形成本發明的組合物各種不同劑型有用的其它材料，例如染料、芳香劑、防腐劑、抗氧化劑、遮光劑、增稠劑和穩定劑。然而，當添加這些材料時，不應不適當地幹擾本文提供的組合物中的組分的生物活性。不管化合物(例如，寡核苷酸、擬肽等)引入患者體內的方法，膠態分散體系可以被用作輸送載體以增強寡核苷酸在體內的穩定性和/或將寡核苷酸靶向特定的器官、組織或細胞種類。膠態分散體系包括但不限於高分子複合物、納米膠囊、微球、微珠和脂基體系包括水包油乳液、膠束、混合膠束、脂質體和脂質無特徵結構的寡核苷酸複合物。優選的膠態分散體系是大量的脂質體。脂質體是具有由一種或多種脂質形成的外層圍繞的水相核心的顯微球，該外層排列成雙層結構(參見，通常，Chonnetal.，CurrentOp.Biotech.6，698-708(1995))。在某些具體實施方式中，反義化合物和擬肽可以引入生物分布引導基團或與生物分布引導基團結合使用，生物分布引導基團包括一種或多種聚合物，以引導本發明提供的反義化合物、擬肽或其它化合物到期望的靶的附近或允許其持續的釋放。活性試劑包括，例如用於增強治療效果、用於優化生物分布和生物利用度、用於減少組織損傷、用於促進癒合或用於增加病人舒適度的化合物；典型的活性試劑包括血管活性劑、麻醉劑、用於缺血治療的試劑、生長因子和細胞因子。可替換地，本文提供的組合物可以使用微粒或納米粒聚合珠劑型。本文提供的化合物可以與活性試劑聯合使用並且與那裡的一些配體或抗配體(anti-ligand)分子密封入微粒劑型。在該方法中，本文提供的擬肽、反義化合物和其它化合物單獨或與其它活性試劑聯合使用，在某位點持續釋放一段時間，以提供持續的治療效果。考慮到本發明實踐中使用的其它活性試劑，例如生長因子、細胞因子等緩釋劑型也是有用的。從本發明的微粒劑型中釋放活性試劑可以是由擴散和微粒基質被蝕解造成的。生物降解率直接影響活性試劑的釋放動力學。在某些具體實施方式中，本發明的擬肽組合物、反義化合物和化合物的可控釋放的不經腸的製劑可以被製成植入、油性注射(oilyinjection)或微粒體系。微粒體系包括微球、微粒、微囊、納米微囊、納米珠或納米微粒。微囊含有作為中心核的治療用蛋白。在微珠中，治療試劑被分散於整個粒子中。脂質體可以被用於控制釋放以及包被藥物(entrappeddrug)的藥物靶向作用。反義多核苷酸可以實質上以獨立的形式存在。可以理解該產物可以與不會干擾產物預期目的的載體或稀釋劑混合，並仍被認為實質上是獨立的。產物也可以是基本上純化的形式存在，在該情況下，其通常含有90％，例如至少約95％、98％或99％的多核苷酸或製劑乾重。在某些具體實施方式中，本發明的藥物組合物，包括反義化合物或擬肽，可以通過局部、鼻腔、口服、胃腸、支氣管內、膀胱內、陰道內給藥至子宮、皮下、肌肉內、關節周圍、關節內部；腦脊液(ICSF)；腦組織(例如，顱內給藥)；脊髓；創傷處、腹膜內、胸膜內或全身系統給藥，例如靜脈內給藥、動脈內給藥、門脈內(intrapotally)給藥或直接器官給藥，例如心臟。靜脈給藥試劑比通過其它途徑給藥的試劑更快地被生物利用，因此，通常靜脈給藥試劑毒性更強。可替換地，本發明的反義化合物、擬肽和其它化合物的動脈內給藥可以應用於供應到動脈能夠達到的器官或組織中存在的疾病靶點。動脈遞送的應用包括，例如通過肝動脈給藥治療與肝臟相關的病症，通過頸動脈給藥治療與大腦相關的病症，通過支氣管動脈給藥治療與肺有關的病症，通過腎動脈給藥治療與腎臟有關的病症。因此，例如，在某些具體實施方式中，該化合物為用於系統給藥的肽/多肽(例如擬肽)，並且在其它具體實施方式中，該化合物用於直接遞送(例如至腦室或脊髓中)的肽/多肽(例如擬肽)。例如，授予Hammond的美國專利第6,752,987號和美國公開的申請第20030148968號，以引用的方式結合與此，其描述了用於心臟病的體內輸送，其可以通過將藥物組合物注射入血管或其它導管中，直接供給心肌或組織。優選地，該注射可以通過給予冠狀動脈或其它組織特異性動脈中的一個或二個進行(或通過彈丸式注射(又稱為團注法)到外周組織中)。以說明的方式，為了遞送到心肌，該注射液優選通過以下方式達到通過導管充分地(通常至少約1cm)引入冠動脈或者一個或多個隱靜脈或者乳內動脈橋或者其它輸送血液到達心肌的導管中的一種或兩種的腔內。優選在左側冠狀動脈和在右側冠狀動脈進行注射以提供心臟的所有區域整體的分布。根據本發明，為了進一步擴大擬肽或擬肽與活性試劑聯合的局部轉運以增強轉運效率，可以注入血管活性試劑，優選將組胺或組胺激動劑或血管內皮生長因子(VEGF)蛋白或一氧化氮供體(例如硝普鈉)注入到待治療的組織中，可以與擬肽或活性物質聯合的擬肽同時，或者優選地在此之前幾分鐘給予。一方面，脊髓給藥方法包括但不限於本領域中已知的脊髓注射技術。脊髓內注射或給藥的一般方法包括，例如硬膜外注射(包括骶管阻滯、經腰和經錐間孔注射)、脊柱小面關節注射(包括關節間和神經阻滯注射)、硬體注射(hardwearinjection)、骶髖關節注射以及差異下肢注射(lowerextremityinjection)。對於大多數脊髓注射，局部麻醉(麻木給藥)例如利多卡因(lidocaine)(或賽羅卡因(Xylocaine))或布比卡因(Bupivacaine)(麻卡因(Marcaine))共同注射到脊柱的特定區域內。某些方面，反義化合物或擬肽可以單獨給藥或與用於通常治療中風和缺血的試劑聯合給藥。中風和缺血包括例如1)缺血性中風，其是通過移除阻塞物並恢復到腦的血流治療的缺血，以及2)出血性中風，其是通過引入阻塞物以防止動脈瘤和動靜脈畸形的破裂和出血。一方面，缺血性中風的治療包括使用凝塊融解劑(clot-busters)，例如tPA。通常，tPA在症狀發作後的三小時時間內給藥。另一方面，治療可以包括使用抗凝血劑/抗血小板劑的預防性方法。抗血小板劑例如阿司匹林和抗凝血劑例如華法林(warfarin)來幹擾血液結塊的能力並且可以被用來預防中風的發生。一方面，缺血性中風的治療可以包括頸動脈內膜切除術(CarotidEndarterectomy)，其是將血管阻滯從頸動脈中手術移除的外科操作。另一方面，缺血性中風的治療可以包括血管成形術/支架，其包括使用球囊成型術(ballonangioplasty)和可植入的稱為支架的鋼篩治療心血管疾病，其中機械裝置用於補救脂肪積聚阻塞的血管。對於出血性中風，經常推薦外科治療，可在動脈瘤的基部(base)，即所謂的頸，安置一個金屬夾，也可去除包括動靜脈型血管畸形(AVM)的不正常血管。一個這樣的例子是血管腔內的操作，例如線圈，其創傷小而且包括使用導管引入腿和手臂中的大動脈，引導到沉積機械物質(mechanicalagent)例如線圈(coli)的動脈瘤或AVM處，以預防破裂。某些方面，反義化合物或擬肽可以與中風和缺血外科治療結合來給藥。用於治療中風的外科幹預包括但不限於用於治療中風的常規外科方式，其可以用於在腦內和外周預防中風、治療急性中風或修復血管損傷或畸形(例如，AVM)。它們包括，例如當頸動脈被阻塞時將動脈粥樣硬化斑塊從頸動脈中移除的頸動脈內膜切除術；以及顱外/顱內(EC/IC)搭橋手術，其是通過將頭皮中的健康動脈改道到被賭塞動脈影響的腦組織區域從而恢復大腦組織中缺乏血液區域的血流。另一方面，治療中風或缺血的外科方式包括，例如，夾閉技術(clipping)，其在治療導致蛛網膜下出血的腦動脈瘤中是有用的。夾閉包括將動脈瘤從血管夾閉以減少爆裂或出血的機會。另一方面，外科方法可以包括用於治療高危顱內動脈瘤的「可脫性線圈技術」。該技術通常包括將一個小的鉑線圈通過動脈插入大腿並穿過動脈到達動脈瘤的位置。然後該線圈被釋放到動脈瘤內，在該處線圈引起全身的免疫反應。機體在動脈瘤內部產生血塊，加強血管壁，並降低破裂的風險。一旦動脈瘤被穩定下來，神經外科醫生就可以夾閉動脈瘤同時減少病人出血和死亡的風險。還可以考慮中風的外科治療包括最近發展的技術，例如用於AVM和動脈瘤的立體定向顯微外科手術(StereotacticMicrosurgery)。其使用先進的計算機技術和幾何原理以準確定位AVM的精確位置。在手術過程中，定做的合適框架被附著到病人的頭部並通過CT或MRI建立三維參照點。該技術使神經外科醫生能夠在一毫米或兩毫米內定位AVM，使它們能夠用顯微鏡放大方法和精細的設備開展手術，而不影響正常的腦組織。其它方法包括，例如用於AVM的立體定向放射外科手術，由於立體定向放射外科手術準確定位AVM的精確位置，其使用相同的基礎技術而具有最小的創傷，相對低的危險。一旦定位，AVM是通過聚焦放射線引起其結塊然後消失而去除的。由於該技術的精確，通常不會影響到正常的腦組織。其它方法包括，例如，降溫方法，其運用降溫(冷卻身體)在大的和複雜的動脈瘤手術或難以處理的AVM外科手術治療過程中預防中風。大腦溫度的降低使外科醫生有必要的時間進行手術，使手術誘發中風的風險最低。稱為心肺旁路機的專門設備有時被用於當機體處於深度低溫時，從大腦中完全分流血流。其它的方法包括，例如血管重建，其是用於治療動脈瘤或堵塞的腦動脈的外科技術。該技術通過將另一段血管移植到腦動脈或向大腦提供一種新的血流來源而從本質上提供了一種新的血流通道。在某些具體實施方式中，可以單獨使用反義化合物或擬肽或與其它活性試劑，例如對增強藥效、減少組織損傷、促進癒合或增加患者舒適度有用的化合物結合使用進行靶向給藥。美國公開專利申請第20040259768號描述了用於靶向釋放的方法和試劑，其內容以引用的方式結合於此。正如本領域中已知的，多種導管和運送途徑可以用於輸送到冠狀動脈內。例如，適於在本發明中使用的多種通用導管和改進的導管都可以商業得到，例如AdvancedCardiovascularSystems(ACS)、TargetTherapeuticsandCordis。而且，通過直接注入冠狀動脈(現在最優選的)而達到向心肌遞送，正如本領域中已知的，可以使用多種方法將導管引入冠脈。以說明的方式，導管可以方便地引入股動脈並逆行穿過髂動脈和腹主動脈並進入冠狀動脈。可替換地，導管可以首先被引入上臂動脈或頸動脈並逆向穿過冠狀動脈。這些和其它技術的詳細描述可以在本領域中找到。(參見，例如，Topol，EJ(ed.)，TheTextbookofInterventionalCardiology，2ndEd.(W.B.SaundersCo.1994)；Rutherford，RB，VascularSurgery，3rdEd.(W.B.SaundersCo.1989)；WyngaardenJBetal.(eds.)，TheCecilTextbookofMedicine，19thEd.(W.B.Saunders，1992)；andSabiston，D，TheTextbookofSurgery，14thEd.(W.B.SaundersCo.1991))。本文提供的化合物可以腸胃外給藥。有時優選某些化合物與藥學上可接受的載體或稀釋劑結合產生藥物組合物。合適的載體或稀釋劑包括等滲鹽溶液，例如磷酸鹽緩衝液。該組合物可以配製成用於通過腸胃外、肌肉內、大腦內、靜脈內、皮下或經皮膚給藥。通過多種已知的轉染技術可以增強哺乳動物細胞對核酸的攝取，例如，使用轉染試劑。給藥的製劑可能包括這些試劑。這些試劑的實例包括陽離子試劑(例如磷酸鈣和DEAE-葡聚糖)和脂質體(lipofectant)(例如lipofectamTM和transfectamTM)。局部給藥劑型可以包括透皮貼劑、軟膏、洗劑、乳劑、凝膠、滴液、栓劑、噴霧劑、液體和粉劑。常規的藥物載體、含水的、粉末或油性成分(oilybases)、增稠劑等也是有用的。也可用塗覆的手套、保險套等等。口服給藥的組合物包括粉劑或顆粒劑、栓劑或水溶液或非水媒介的膠囊、帶裝劑或片劑。增稠劑、芳香劑、稀釋劑、乳化劑、分散助劑(dispersingaids)或粘合劑可以是理想的。腸胃外給藥組合物可以包括可含有緩衝液、稀釋劑以及其它合適的添加劑的無菌水溶液。在某些情況下，將寡核苷酸與其它傳統治療方法結合以增加治療方案的效果會更有效地治療病人。正如本文中使用的，術語「治療方案」是指包括治療的、緩和的和預防的方法。劑量依賴於多個因素，包括治療的疾病狀態的嚴重程度和響應度，治療過程持續幾天到幾個月或直到治療起效或直到疾病狀態減輕。本文中提供的化合物的毒性和治療效果可以通過細胞培養或實驗動物的標準化藥學方法確定。例如，確定LD50(半數致死劑量)和ED50(半數有效量)。毒性和治療效果的劑量比為治療指數，其可以用LD50/ED50比表示。優選具有大治療指數的化合物。雖然可以使用具有毒副作用的化合物，但需要注意設計一種轉運系統，其將該化合物靶向受疾病侵襲的組織位點上，使對未受疾病侵襲的細胞的潛在損傷最小，因此減少副作用。從細胞培養試驗和動物研究中獲得的數據可以用於確定人使用的劑量範圍。該化合物的劑量優選在循環濃度包括ED50而很少或沒有毒性的範圍內。劑量可以根據使用的劑型和採用的給藥途徑而在這個範圍內變化。對於本發明的方法中使用的任何化合物，治療有效劑量最初可以從細胞培養實驗推測。在動物模型中確定劑量，以達到包括IC50(即，檢測化合物的濃度達到最大程度地抑制症狀的一半)的循環血漿濃度範圍，如在細胞培養中確定的。這些信息可以用於更加精確地確定人類的有效量。可以測定血漿水平，例如，通過高效液相色譜。給藥時間可以從對患者體內藥物積累的測定來計算。劑量可以根據各種化合物，包括擬肽或寡核苷酸的相對效價變化，劑量通常可以基於在體外和動物模型體內發現的有效的EC50推測。合適的劑量可以例如根據給藥途徑在約0.1μg到總量約1克內變化。對於特定劑量和輸送方法的指導說明提供在文獻中並且通常可從本領域的從業人員獲知。本領域的技術人員會使用與蛋白質或其抑制劑不同的劑型。相似地，本文提供的多核苷酸、多肽和化合物的轉運對特定的細胞、病症和位置是特異的。通常，劑量為0.01mg/kg體重至100mg/kg體重，並且可以每日、每周、每月、或每年給藥一次或多次，或者甚至每2至20年給藥一次。在某些具體實施方式中，該劑量可以從術後立即給藥至術後24小時給藥，在另一具體實施方式中，該劑量可以在2小時至24小時給藥。長效組合物依據特定製劑的半衰期和清除率可以為每3至4天、每周或雙周給藥。本領域的普通技術人員基於測定的體液或組織中藥物的停留時間和濃度可以容易地估計給藥的重複率。成功地治療之後，需要讓患者接受維持治療以預防疾病狀態的復發，其中給予維持劑量的擬肽，在0.01mg/kg體重至100mg/kg體重的範圍內，每日一次或多次到每20年一次。在需要合適劑量水平連接蛋白調控的病症的治療和預防中，通常為患者每日0.001mg/kg體重至100mg/kg體重，其可以單次或多次給藥。合適的劑量水平可以為每日約1至約40mg/kg。在某些具體實施方式中，本文提供的化合物，包括特異性反義化合物或擬肽，給藥量在體內的濃度達到約1微摩爾至約1毫摩爾，約10微摩爾至約500微摩爾，或約30微摩爾至約300微摩爾，以及約25微摩爾至約300微摩爾在病變處的終濃度，以及包括約25微摩爾、或約160微摩爾、或約300微摩爾在病變處的終濃度，以及更加典型的在約1微摩爾至約10微摩爾之間。另一方面，給予肽抑制劑和擬肽可以達到約0.1mg/ml至約1mg/ml，約10mg/ml至約500mg/ml，約100mg/ml至約500mg/ml，約250mg/ml或約300mg/ml病變處的終濃度。採用的抗-連接蛋白化合物(例如，擬肽分子)有多個不同的濃度，優選在1×10-10M至1×10-4M之間。一旦確定了可以足夠調控連接蛋白(包括控制基因表達)的最小濃度，最優化的量被轉化為在體內合適的劑量。因此，抗-連接蛋白化合物可以給藥，以在受治者(例如哺乳動物)體內特定的細胞、組織或器官內達到期望的濃度。例如，在某些具體實施方式中，擬肽或其它基於肽的抗-連接蛋白化合物給藥(例如，全身性、口服或腸胃外，例如IV等)以達到在體內最終的肽濃度為約0.1微摩爾(1×10-7M)、約1微摩爾(1×10-6M)、約2微摩爾(2×10-6M)、約3微摩爾(3×10-6M)、約5微摩爾(5×10-6M)、約10微摩爾(1×10-5M)、約50微摩爾(5×10-5M)、約250微摩爾(2.5×10-4M)、約500微摩爾(5×10-4M)、約1毫摩爾(1×10-3M)，以及約5毫摩爾(5×10-3M)或更大。某些擬肽希望其體內濃度在約1至10微摩爾(1×10-6M至1×10-5M)之間，包括約5微摩爾(5×10-6M)。另一方面，基於肽的抗-連接蛋白化合物直接組織(例如哺乳動物腦室)給藥，給藥量為約0.1微摩爾/kg、1微摩爾/kg、10微摩爾/kg、50微摩爾/kg、250微摩爾/kg、500微摩爾/kg、1000微摩爾/kg、5000微摩爾/kg。例如，對於某些化合物，培養基中1×10-7M的抑制濃度轉化為約0.6mg/kg體重的劑量。在測試實驗室動物體內化合物的毒性之後，抗-連接蛋白化合物(例如反義化合物或擬肽分子)的水平可能接近100mg/kg體重或更高。也可以考慮將脊椎動物細胞取出，用擬肽治療處理，並再導入到脊椎動物中。本文中描述的化合物可以用於診斷、治療、預防以及作為研究試劑裝入試劑盒中。由於本發明的寡核苷酸與編碼連接蛋白的核酸雜交，可以容易地構建夾芯、熱量測試法以及其它試驗來發現這個事實。用於檢測寡核苷酸與連接蛋白基因或mRNA雜交的方法的準備工作可以常規地完成。這些準備工作可以包括酶的結合、放射性標記或任何其它合適的檢測系統。還可以製備用於檢測連接蛋白存在或不存在的試劑盒。為了研究的目的，也可以使用本發明的化合物。因此，寡核苷酸表現出的特異性雜交可以用於測定、純化製備的細胞產物及其它能夠被本領域的普通技術人員所認可的方法中。以下的實驗部分將描述本發明的不同方面，提供實驗部分僅作為說明，而並不構成對本發明範圍的限制。下列實施例用於說明而不是限制的目的。實施例1中樞神經系統中樞神經系統的損傷可以說是毀滅性的，在病人護理上會給社會造成巨大的長期的代價。嚴重損傷的神經組織中發生的病理變化具有共同的特徵。在損傷後的24至48小時內，該損傷明顯擴散，使受影響區域的尺寸增加。該擴散通過間隙連接介導的旁觀效應蔓延，通過間隙連接通道從損傷部位向其它的健康組織擴散神經毒素和鈣波(calciumwave)。Lin，J.H.etal.NatureNeurosci.1431-432(1998)。然而，這還伴有24至48小時後導致胞外空間閉合以及細胞死亡的炎性腫脹。例如在胎兒大腦損傷中的腫脹可以作為估量毒性水腫的皮質電阻抗變化來追蹤。Reddy，K.，etal.，PediatricResearch43674-682(1998)。該新的損傷並不是原始損傷的直接結果而是繼發的結果，其發生在損傷後的6和48小時之間，但也可能早在2小時，這提供了預防損傷擴散治療機會的時間窗。圖1示出了即使脊髓從動物離體時，發生水腫和腫脹(圖1A)。在兩種情況下，水腫可以通過利用阻止連接蛋白質連接蛋白43翻譯的反義寡脫氧核苷酸(ODN)而被抑制。在離體的脊索橫斷面中，在治療和對照之間評估的腫脹體積是明顯不同的(通過測量從頂部觀察的腫脹的面積評估的p＝0.001)。在CNS損傷後觀察到腫脹並且利用連接蛋白特異性反義ODN阻斷腫脹，表明間隙連接半通道正在被表達並在病理狀態下開放導致了細胞質和胞外空間之間直接的通路。神經元接著死亡。在損傷後24小時進行細胞檢測顯示空泡形成和由胞外液攝取引起的膜向內起泡(圖2)。正如在圖3A對彩色照圖的說明中描繪的，連接蛋白43的免疫組織化學標記物利用結合於細胞外環的抗體(連接蛋白剖析圖的左上部寬帶且標記Gap7M)和結合於蛋白質的細胞質羧基尾的抗體(連接蛋白剖析圖右下部寬帶和標記GAP1A)。細胞質抗體標記所有的Connexin43蛋白，並與紅色螢光標記的第二抗體結合使用。Gap7M抗體僅能標記半通道暴露的胞外環並與綠色螢光標記的第二抗體結合使用。Gap7M由於空間的阻礙不能結合到形成細胞間完整通道的對接連接子，而且僅有以半通道存在的連接子可用兩種抗體標記(因此當紅色和綠色第二抗體共定位在一處時會顯示黃色)。圖3B如在圖中對彩色照片的說明中描繪的，該圖表示將圖3A中描述的用兩種抗體雙重標記應用到擠壓損傷後24小時的脊髓橫斷面。該圖像中有小亮點是被標記的連接蛋白和大的淺色亮點是用DAPI標記的細胞核。很大一部分連接蛋白標記顯示複合的圖像，即黃色表明該兩種抗體(Gap7M和GAP1A)被共同定位。這意味著連接蛋白胞外環是暴露的並且存在的大多數連接子未與相鄰細胞的連接子對接，仍然是半通道。圖3C正如在圖中對彩色照片的說明中描述的，該圖像示出了將圖3A中描述的用兩種連接蛋白抗體雙重標記應用於擠壓損傷後24小時的脊髓。在這種情況下，連接蛋白43特異的反義ODN用於抑制蛋白質的翻譯。半通道將會以亮點的形式出現(綠色螢光標記的Gap7M和紅色螢光標記的GAP1A被共定位在一處，因此在彩色圖像中顯示黃色)。更大、更亮的點是用DAPI標記的細胞核。在經過這樣處理的脊髓中，很少有連接蛋白被標記，而且很少有半通道被看見。另外，結合併標記連接蛋白胞外環的間隙連接抗體(Gap7M抗體-圖3A)顯示在大鼠脊髓損傷後24小時(圖3B)標記大量的蛋白質水平。這些抗體僅結合於半通道的一部分，半通道一旦錨固，在膜內通道的這部分可相互作用形成多體(multimer)。這些資料表明許多在CNS損傷後早期見到的多數連接蛋白43上調仍然為半通道的形式。連接蛋白的表達和半通道的形成是通過在受傷時使用應用了連接蛋白43特異性反義ODN的PluronicF-127(泊洛沙姆(poloxamer))凝膠而被阻斷的(圖3C)。該處理表明在外植體模型中ODN處理在應用後6-8小時對蛋白質水平具有最大的影響(降低最多)，在2小時內明顯降低並且大約24小時後蛋白質水平恢復(參見Qiuetal，2003；Beckeretal，1999)。在大腦中，類似地，組織切片被置於培養孔中，但腫脹可以被抑制半通道形成(C綠色-數據未顯示)的連接蛋白43特異性反義ODN阻斷。在損傷後，連接蛋白水平的上調導致引起細胞水腫和死亡的半通道形成。然而，這不受神經種群的限制。在離體的脊髓橫斷面中，甚至在經反義處理的組織中培養5天後，異凝集素B4(IsolectinB4)標記(與血管的小神經膠質細胞和內皮細胞表面上的碳水化合物結合)顯示出了毛細血管的輪廓(圖5)。在對照橫斷面中，兩天後很少有毛細血管仍然存在(在5天後主要的異凝集素B4標記為活化的巨噬細胞表型的(泡沫)神經膠質細胞)。在經連接蛋白43反義處理的大腦切片中，毛細血管甚至在培養基中兩周後仍然完整；而在對照切片中沒有完整的毛細血管(數據未示出)。在大鼠體內脊髓損傷之後，用連接蛋白特異性反義ODN處理大鼠，並在24小時後將螢光化的牛血清白蛋白(FITC標記的BSA)注射入大鼠尾靜脈中。對照動物表現出染料從血管系統大量滲漏到周圍組織中，甚至損傷部位喙側的5mm處(圖5A)。形成強烈的對比，反義化合物處理的動物顯示很少的染料滲漏的跡象，染料被限制在毛細血管床中(圖5B)。表達連接蛋白43的毛細血管內皮細胞也形成半通道並且被破壞。重要的是，本文提供的連接蛋白43特異反義ODN處理抑制了血腦屏障的破壞、血管系統的破壞(這對再灌注和恢復是必要的)以及損傷的蔓延。結果表明，毛細血管/血管系統的破壞並不限於中樞神經系統，其具有更加廣泛的應用，例如用於治療血管病症，連接蛋白的調控對其是有益的。正如在圖5A對彩色照片的說明中描述的，該圖顯示了缺血梗死後24小時羊心室壁的三重標記。包含這個圖像的四幅是來自遠離梗死區域的組織。該組織用與血管內皮細胞結合的異凝集素B4(左上圖)標記，並用與Gap7M(右上圖)結合的抗體標記，以及用與連接蛋白43(左下圖)結合的抗體標記。Gap7M抗體識別連接蛋白保守的細胞外環區域，因此不是連接蛋白異構體特異的，但的確標記半通道(在完整的通道中Gap7M抗體被空間阻礙而不能接近其表位)。左上方的圖像顯示了在這個區域存在的正常毛細血管結構。不存在半通道(右上圖)但連接蛋白43存在於工作的心肌的閏盤內(左下圖)。右下圖是其它三幅圖像的疊加。幾乎沒有連接蛋白43標記覆蓋毛細血管壁，因為其主要與肌肉細胞結合。正如圖5B中對彩色照片的說明中描述的，該圖顯示了在缺血梗死後24小時羊心室壁的三重標記。所見區域不在梗死部位，但比圖5B中所示的用與血管內皮細胞結合的異凝集素B4(左上圖)標記的組織距離梗死部位更近。大多數血管仍然是完整的，但血管壁在某些部位(廣泛擴散的標記區域)有破損。抗Gap7M(右上圖)的抗體標記半通道。密集的半通道標記的長形斑塊是明顯的。左下圖表示連接蛋白43的抗體標記。仔細比較前三個圖，或分析出現在右下方的合併了其它三幅圖像的圖像，顯示僅有連接蛋白43與肌細胞結合。然而，半通道抗體在出現損傷的血管壁具有共同標記的區域，表明在那些區域存在連接子半通道。正如在圖5C對彩色照片的說明中描述的，該圖像顯示在缺血梗死後24小時的羊心室壁的三重標記。顯示的區域本身就在梗死區域內。該組織用與血管內皮細胞結合的異凝集素B4(左上圖)標記。大多數血管顯示損傷(不連續線的更廣泛擴散的標記區域(areasofbroaderdispersedlabelingindiscontinuouslines))。抗Gap7M的抗體(右上圖)標記半通道。密集的半通道標記的多重斑塊明顯分布於整個圖像。左下圖表示連接蛋白43的抗體標記的。仔細比較前三個圖之間，或分析出現在右下圖中合併了其它三幅圖像的圖像，顯示連接蛋白43與肌細胞結合，但標記物是短的斑塊，與通常在心肌細胞的閏盤中的連接蛋白43的標記明顯不同。這表明在這個中心梗死區域肌細胞也受到嚴重損傷。半通道抗體共同標記顯示廣泛的損傷的血管壁區域，表明在血管壁中存在連接子半通道。在半通道表達後很少有毛細血管表面上保持完整。此處，如圖6B中，Gap7M抗體標記沒有與連接蛋白43標記共同定位(如其在脊髓中一樣-圖2B)，表明其肯定是不同的連接蛋白同工型，最可能是連接蛋白45(參見Camelliti，P.，etal.，Cardiovasc.Res.62414-425(2004))。實施例2心血管系統這個實施例研究了間隙連接半通道在維持與缺血組織損傷相鄰的毛細血管床中的血管完整性的調控和功能。無菌凝膠泡沫穿過左前降支或捲曲的動脈以誘導透壁心肌梗死。該凝膠基本上是根據Devlin，G.，etal.，J.Anovinemodelofchronicstableheartfailure.J.Card.Fail.6140-143(2000)中的方法被輸送的。異凝集素B4標記的毛細血管內皮細胞顯示與缺血組織相鄰的毛細血管床被破壞。我們已經分析了在羊梗死模型中進行性的梗死(Camellitietal.，Spatiallyandtemporallydisctinctexpressionoffibroblastconnexinsaftersheepinfarction，CardiovascularResearch，62415-425(2004))，並且我們提出這是由間隙連接介導的旁觀效應引起的。本文的數據表明與內皮細胞損傷相關並在間隙連接半通道表達之後，間隙連接介導的旁觀效應的一個重要作用。在用異凝集素B4、連接蛋白43和半通道抗體對24小時缺血羊心臟進行三重標記的數據表明，在該情況下半通道不是連接蛋白43，而似乎是連接蛋白45(圖6A、6B、6C)。注意到Gap7M抗體識別連接蛋白的第一個細胞外環的保守區域並且不是連接蛋白特異的；其與一定量的連接蛋白家族成員發生交叉反應。連接蛋白45是在缺血心臟損傷後第一個被上調的連接蛋白(Camellitietal.2004)。這一系列圖像(圖6A、6B、6C)顯示當血管壁的損傷不是明顯遠離梗死區域的位置(圖6A)，越靠近梗死區域其逐漸嚴重(圖6B)並且與半通道的表達相關。在梗死區域本身中(圖6C)半通道蛋白表達程度較高，毛細血管壁大量被破壞，並且肌細胞閏盤(連接蛋白43間隙連接位於此處)消失。正如圖6中對彩色照片的說明中描述的，該圖像表示異凝集素B4(上圖)標記的毛細血管內皮細胞和肌間球蛋白抗體(myomesinantibody)標記物(中間)標記的缺血24小時後羊心室梗死的肌細胞的肌小節中的M線。這個區域與圖6C中所示的相同。毛細血管完全損傷並且正常的肌細胞肌小節帶的樣式被破壞，表明肌肉細胞死亡與血管壁破壞同時發生。下圖是上面兩幅圖的合併，表示損傷的毛細血管與異常的肌肉帶標記的關係。圖7示出了在梗死區域內被破壞血管的異凝集素B4標記與使用標記肌小節的M-帶的肌間球蛋白抗體圖示的肌小節破壞相關。正如在神經組織中，對血管壁繼發的損傷似乎在半通道表達之後，而且通常細胞死亡嚴重，並且是半通道開放(打開)的結果。據報導，使心臟處於低含氧量中30分鐘並再灌注(其中在培養基中有庚醇(一種非特異的間隙連接通道抑制劑))防止氧反常導致的過度收縮和肌細胞死亡。Garcia-Doradaetal.，Circulation963579-3586(1997)。這些作者報導過度收縮可能會通過間隙連接傳遞到相鄰的肌細胞。我們的數據與這個觀點一致，即在30分鐘內半通道表達在過度收縮(hypercontracture)中發揮重要的作用。在病理狀態下增加的連接蛋白表達和半通道開放導致在缺血損傷組織周圍內皮細胞破壞和缺血心血管系統損壞。本文中第一次描述了這個發現，認為其對於治療再灌輸損傷是非常重要的，並且可能是進行性梗死的機制。Robbins，S.andCotran，R.1979.Pathologicbasisofdisease.2ndEdition.WBSaundersCompany，Philadelphia.。實施例3擬肽設計擬肽設計在這個實施例中，9個重疊擬肽被設計成具有與被認為連接子對接過程涉及的連接蛋白43的細胞外環區域相同的胺基酸序列(Footeetal.，JCellBiol140(5)1187-97，(1998))。這些特定肽都被設計成11-13個殘基長度。某些肽包含與α螺旋跨膜亞單位外部匹配的胺基酸，其可能表現出增強的功能性抑制。由於胞外環區域中連接蛋白序列的保守性，因此並不是所有都是連接蛋白43特異性的。靶向連接子43(半通道)的肽在下面顯示。M1、M2、M3和M4分別是指連接子43蛋白的第一到第四個跨膜區域。E1和E2分別是指第一和第二胞外環FEVAFLLIQWI(SEQIDNO32)M3&E2LLIQWYIGFSL(SEQIDNO33)E2SLSAVYTCKRDPCPHQ(SEQIDNO34)E2VDCFLSRPTEKT(SEQIDNO35)E2SRPTEKTIFII(SEQIDNO36)E2&M4LGTAVESAWGDEQ(SEQIDNO37)M1&E1QSAFRCNTQQPG(SEQIDNO38)E1QQPGCENVCYDK(SEQIDNO39)E1VCYDKSFPISHVR(SEQIDNO40)E1實施例5擬肽的功能性測定使用肽進行兩種功能性測定。這些功能型測定為(i)在脊髓切片中阻斷細胞對染料(螢光黃(LuciferYellow))的攝取，以及(ii)抑制脊髓片段的水腫(用連接蛋白43特異性反義作為陽性對照)。使用的所有肽都是由Sigma-Genosys公司(澳大利亞)合成的。在脊髓切片中阻斷細胞對染料(螢光黃)的攝取螢光黃(luciferyellow)是一種小的、水溶性的、可固定的，能夠通過間隙連接通道從細胞穿過細胞，但不能通過細胞膜。將螢光黃加入到細胞外基質中可以檢查是否存在開放的間隙連接半通道。該染料將出現在表達開放通道細胞的細胞質中。用二氧化碳麻醉wisterp7大鼠並立即將其斬首。切除脊髓並轉移至pH值7.4的冷凍Hank平衡鹽溶液(HBSS)中。過多的分支神經和韌帶被移除，並將脊髓轉移至人工組織切板上切成一系列500微米厚的切片。由切片引起的損傷誘導整個切片中連接蛋白43的上調(間隙連接介導的旁觀效應使其加劇)，並導致連接蛋白半通道的表達。切片置於直徑為3釐米的微孔濾器(Millipore)中，置入24孔板並在有擬肽的培養基中培養。測定的所有9個肽的終濃度為500微摩爾。對照組為不添加肽，或添加1％的乙醇或1％的DMSO，使某些肽重新溶解於這些化合物中(肽由凍幹得到)。這時，某些切片也在30％的PluronicF-127凝膠中用連接蛋白43特異的反義寡脫氧核苷酸處理或僅用凝膠處理，作為對照實驗。用反義寡脫氧核苷酸處理的切片表明反義化合物抑制了連接蛋白表達以及隨後的染料攝取，因此這些充當陽性對照。切片在37℃下培養4小時，然後在每個孔中添加2.5mg/ml的螢光黃並保持30分鐘(在黑暗中)。然後將切片在PBS中漂洗兩次，進一步洗滌10分鐘三次，並用4％的多聚甲醛固定該切片。然後用LeicaTCS4D雷射掃描共焦顯微鏡進行觀察，以測定染料是否被細胞吸收。結果顯示僅用培養基培養的切片和僅用DMSO、乙醇和凝膠處理的切片具有大量的染料攝取。用連接蛋白43處理的切片沒有染料攝取。用肽處理的切片表現出相當多的染料攝取，除了那些使用下列肽(具有重疊序列)處理的VDCFLSRPTEKT(SEQIDNO35)，和SRPTEKTIFII(SEQIDNO36)用含有SEQIDNOS32-34、((FEVAFLLIQWI(SEQIDNO32)、LLIQWYIGFSL(SEQIDNO33)、SLSAVYTCKRDPCPHQ(SEQIDNO34))和SEQIDNOS37-40(LGTAVESAWGDEQ(SEQIDNO37)、QSAFRCNTQQPG(SEQIDNO38)，QQPGCENVCYDK(SEQIDNO39)和VCYDKSFPISHVR(SEQIDNO40))的肽處理的切片，其染料攝取的水平與對照切片的相當。總而言之，這些數據表明，脊髓切片表達半通道並在損傷的4小時內打開。重要的是，該數據也表明，對應於SEQIDNO35和36的肽能夠預防和/或阻斷和/或關閉半通道的打開並預防腫脹。脊髓水腫的預防在實施例1中描述的系統被用來檢測肽VDCFLSRPTEKT(SEQIDNO35)和SRPTEKTIFII(SEQIDNO36)對培養的脊髓段的效果，以檢測其抑制腫脹的能力。肽QQPGCENVCYDK(SEQIDNO39)用作陰性對照，由於在前述的切片培養中允許染料攝取，因此其被認為在該片段中不能阻斷水腫。DMSO又一次作為另外的對照。5mm長的脊髓片段置於24孔板獨立孔的HBSS中。該片段用一小滴強力膠(Superglue)使其緊貼在孔底部。去掉HBSS並向培養基(單獨培養基或DMSO對照中沒有肽)中添加500微摩爾的肽(終濃度)。將該板孵育24小時，去除培養基並用Bouin’s固定劑將組織固定24小時。分析上述脊髓片段的照片，包括用於計算與切割片段末端的腫脹對比脊髓片段總區域的ImageJ。計算(培養面積減去原始面積除以原始面積)腫脹(水腫)以獲得腫脹的百分率％。單因素方差分析用於確定統計學顯著性，顯著性的臨界水平為p＝0.05。結果為DMSO處理的脊髓片段腫脹最多(33％)，所有對照的脊髓節段腫脹21-23％。用肽QQPGCENVCYDK(SEQIDNO39)處理的片段也顯示有23％的腫脹，但用肽VDCFLSRPTEKT(SEQIDNO35)和SRPTEKTIFII(SEQIDNO36)則顯示分別減小15％和17％的腫脹(圖8)。用肽VDCFLSRPTEKT(SEQIDNO35)和SRPTEKTIFII(SEQIDNO36)處理的脊髓片段和對照之間的區別是顯著的(p＝0.43)。隨後對組織進行的組織學測試顯示用肽SRPTEKTIFII(SEQIDNO36)處理的片段保持更好的形態學，因此進行該肽的劑量反應試驗。確定用於在脊髓節段中阻斷水腫的肽SRPTEKTIFII(SEQIDNO36)最有效的濃度使用同樣的實驗進行。在這個例子中，劑量反應是通過肽的終濃度為5、10、50、250和500微摩爾確定的。結果示於圖8中。有趣的是，當與只有培養基的進行比較時，最低濃度的肽(5微摩爾)得到最好的結果(水腫最少)(p＝0.001)。中間範圍50微摩爾在重複實驗中表現出較差的效果。免疫組織學分析顯示用肽SRPTEKTIFII(SEQIDNO36)處理過的片段在培養基中24小時後星形細胞增多(GFAP表達)減少。儘管使用的濃度之間的差異沒有在水腫實驗中的明顯，但5微摩爾對於抑制炎症反應仍是最有效的。所有的處理均顯著降低膠質纖維酸性蛋白(GFAP)表達(用ImageJ分析的單位橫斷面積中的標記面積)(表7)。我們的實驗表明選定擬肽(SEQIDNO36)的圍產期羊實驗(在這個胎齡為平均25g)中，使用5μmol/kg腦重的劑量，其中一小時腦室內注射給予1ml人造CSF(僅CSF載體)，隨後再進一步每天給1ml灌注到大腦中，持續72小時，具有顯著的效果。約5μmol/kg腦、50μmol/kg以及250μmol/kg腦重的劑量也可以。對於靜脈內注射(系統轉運)對數級的影響在血漿濃度中增長可以用於確定合適的劑量，開始的負荷劑量達到0.5μmol/L(我們使用的這個年齡的圍產期羊中的平均胎血體積為約350ml)，然後為5、10、50、250、500和5000μM。ImageJ是公開的Java腳本，公共領域的圖像分析軟體最初是由NIH(稱為NIHImage)發展而來的。表7表7圖像中的GFAP標記區域是在脊髓切片後24小時取得的。對照脊髓具有高水平的GFAP，表明炎性反應和更強的處理片段的旁觀效應。較低的肽濃度對於限制星形細胞增多最有效。對活化的小神經膠質細胞計數，如預料的，在24小時沒有顯示出差異。二次炎性過程(secondaryinflammatoryprocess)(檢測小神經膠質細胞到巨噬細胞表型的分化和增值)通常發生在3至7天。實施例6連接蛋白特異的擬肽抑制圍產期羊模型中缺血和癲癇樣腦活動的體內應用由腦缺血導致的腦損傷在生命的所有階段都仍是一個嚴重的問題。在新生兒時期，中度至嚴重的損傷在出生時的每1000個存活的嬰兒中發生2到3例。一個最顯著的特徵是損傷從最嚴重損傷的區域外側擴散到以前未損傷的區域中。就在大腦缺血後，大腦的代謝會有一個持續幾小時的暫時恢復。而在這之後，會有進行性線粒體衰竭，同時有二次細胞腫脹，並在初始損傷後36至48小時達到最大。在神經膠質和神經元之間，間隙連接的活性偶聯，介導了旁觀效應，其中細胞死亡信號從死亡細胞轉移到損傷不嚴重的細胞或健康的細胞中。早期研究表明，體內局部應用連接蛋白43特異的反義寡脫氧核苷酸可以限制損傷的擴散和創傷後的次級炎症。參見WO2000/44409toBecker，D.andGreen.C.，題目為「FormulationsComprisingAntisenseMucleotidestoConnexins.」。在體內羊圍產期缺血模型中使用肽SRPTEKTIFII(SEQIDNO36)。數據表明，連接蛋白特異擬肽在缺血圍產期腦中或中風之後提供了一種有潛力的明顯減少二次損傷的治療。初步分析表明在妊娠晚期的新生羊大腦缺血24小時後，間隙連接半通道(即，未連接的連接子)的表達增加(圖9)。Romney-Suffolk雜交胎羊如其它地方(Gerritsetal，PediatrRes57(3)342-6，(2005)；Guanetal.，Neuroscience95(3)831-839，(1999)；Guanetal.，JCerebBloodFlowMetab21(5)493-502，(2001)；Gunnetal.，JClinInvest99(2)248-256，(1997)，Gunnetal.，Pediatrics102(5)1098-1106，(1998)，Gunnetal.，PediatrRes46(3)274-280，(1999)；Roelfsemaetal.，JCerebBloodFlowMetab24(8)877-886，(2004))詳細描述的，在普通麻醉下，在妊娠(0.85期(0.85term))的117至124天安裝監測裝置。監測裝置包括肱動脈和靜脈導管、EKG電極、胎兒腦動脈周圍的膨脹式限光器(inflatableoccluder)(Gunnetal.，1997；Roelfsemaetal.，2004)、前滷點(bregma)前5和15mm和側面10mm的頂骨EED電極(parietalEEGeletrodes)、置於它們側面測定皮質阻抗的一對電極(測定細胞毒性水腫(Gunnetal.1997))以及在前滷點前側4mm和左側6mm處插入17mm長的套管。監測裝置被從母體側腹、子宮和封閉的腹壁中取出，並將胎兒血管導管肝素化。母體的傷口用一種長效的局部麻醉劑布比卡因浸潤。在恢復5天之後，通過30分鐘的雙側頸動脈閉塞可以誘發腦血流灌注不足(Gunnetal.，1997；Roelfsemaetal.，2004；Tanetal.，AnnNeurol32(5)677-682，(1992)；Tanetal.，PediatrRes39(5)791-797，(1996))。連接蛋白擬肽5的腦室內注射開始於缺血後90分鐘並持續72小時。擬肽5的5μmol/kg腦重(在這個胎齡，平均為25克)的劑量是在腦室內注射(i.c.v.)1ml的人造CSF(CSF僅作為載體)中超過1小時給予的，之後每天向腦內進一步灌注1ml並持續72小時。通過向母體靜脈中注射戊巴比妥鈉結束實驗(30ml，300mg/ml)。取出胎兒腦進行組織學和免疫組織化學分析。結果(圖10)表明，早期注射肽可減輕二次延遲的發作活動和細胞毒性水腫。總之，這些數據表明靶向連接蛋白43半通道的胞外結構域的擬肽蛋白可以抑制大腦缺血後的二次(次級)水腫和炎症。在妊娠晚期的胎羊中，發現腦缺血與缺血後24小時內連接蛋白43和半通道的大量誘導相關，同時腦室內注射在再灌注之後90分鐘給足月胎兒注射擬肽蛋白顯示對二次發作(secondaryseizure)和細胞毒性水腫的明顯減弱作用。實施例7在亞急性創傷中使用連接蛋白43特異反義物治療人類患者-抑制血管萎縮能夠使從邊緣缺血中恢復在該研究中，患者患有眼亞急性未癒合創傷(化學燒傷)。8天後眼睛仍然發炎並且仍然存在前緣缺血(limbalisdhaemia)(表明前緣血管分布較少)。前緣含有對於角膜上皮恢復必需的幹細胞。在用連接蛋白43特異反義物治療後，該前緣缺血在20小時內消除並且開始重新形成上皮。結論是導致血管的持續萎縮的持續炎症因為前緣缺血加劇損傷。用連接蛋白43反義治療眼睛能夠減少炎症反應並觸發上皮恢復(Qiuetal.，CurrBiol131697-1703，(2003))。然而，注意到這是一個亞急性損傷，意味著慢性損傷的治療也是可能的-人類的這種損傷在上皮前緣保留了較高的連接蛋白43水平(Brandneretal.，JInvestDermatol1221310-1320，(2004))。此外，該治療能夠使血管恢復。我們提出有關的機制抑制血管壁內進一步的半通道表達，使血管重新生長。患者患者為25歲男性。他在一次建築工地高壓混凝土管的事故發生後首次出現左眼鹼性燒傷(眼中有混凝土/鹼，並延誤了第一次治療)。該受傷的眼睛沒有留下覆蓋眼睛前部的上皮組織(包括全部角膜)。初步治療給患者使用10％抗壞血酸鹽滴劑、10％檸檬酸鹽滴劑、1％醋酸潑尼松(醋酸強的松prednisoneacetate)滴劑、1％環戊丙甲胺(cyclopentalate)和氯黴素(chloramphenicol)、加上口服維生素C和脫氧土黴素(deoxycycline)。在最初的5天每小時使用潑尼松(prednisone)一次，之後給藥減少為每天4次。第四天將羊膜覆蓋在角膜上。連接蛋白43反義物治療(第0天)在受傷後的第8天，患者仍具有嚴重的發炎、前緣缺血，而且沒有上皮組織恢復的跡象。由於缺少任何可選擇的、可行的可以挽救患者眼睛的治療，因此取得了倫理許可(ethicalpermissions)。另一隻眼睛具有圓錐形角膜的跡象因此並不適宜後期前緣移植。損傷的眼睛或者被手術摘除或者使成為「結膜眼(conjunctiveeye)」(其中結膜以白鞘的形式存在，其生長覆蓋眼睛，使病人變瞎)。用導管針將在30％F-127Pluronic凝膠中的連接蛋白43反義物注射進角膜每側的兩個位置的羊膜下。注射約100微升的2微摩爾的抗-連接蛋白43並用棉棒在羊膜上使其慢慢擴散到整個角膜。將冷的凝膠注入，其立即凝結為柔軟的凍狀物質。將患者的其它一切治療均停止8小時以避免對治療有任何潛在的副作用。然後再給患者使用甾類滴劑(每天3次)、環戊丙甲胺(環噴他明，cyclopentalate)、抗壞血酸鹽、檸檬酸鹽和氯黴素滴劑(每天4次)。連接蛋白43反義物治療(第1天)在用連接蛋白43反義治療後20小時以內眼睛已經相當穩定(炎症減輕)，而且在三處已經重新長上上皮。前緣有好的血流呈現好的血管化現象，並且沒有前緣缺血的現象，即，在治療後20小時以內前緣重新有充足的血流。連接蛋白43反義物治療(第3天)在用連接蛋白43反義物治療後72小時以內，病人的狀況持續改善。眼睛平靜，前緣供血很好，而且上皮組織呈360度環繞生長。在一邊出現了小的片層狀蠕動(lamellapodialcrawling)的區域，但角膜周圍的其它區域很好甚至向內生長。連接蛋白43反義物治療(第6天)在治療後6天以內(受傷後14天)，上皮組織完全恢復(完全生長覆蓋)，雖然某些地方出現輕微的顆粒狀並可能在某些地方出現斑片或變薄(透過羊膜觀察評價)。前緣區域具有充足的血流，維持了良好的血管化。治療後40天，病人的化學燒傷恢復很好，表現為6/48肉眼(visionunaided)和6/15針孔。三分之二的上皮已經完全健康，三分之一的外圍部分表現出某些粘連生長，但並不覆蓋瞳孔而且也沒有血管分布。前緣血管化非常好。視神經神經病變缺血視神經病變(ION)，也被稱為視神經中風，是影響視神經血液供應疾病的總稱。ION可以基於位置和病因分類。前部ION(AAOIN)是指影響篩板前神經部分的疾病，而對於後部ION(PION)反過來也是正確的(Buonoetal.，SurveyofOphthalmology5015-26，(2005)；Collignonetal.，Ophthalmology1111663-1672，(2004))。通常PION更少見，並認為是由視神經的眼窩內部分梗死導致的，最可能是由於巨細胞動脈炎(GCA)或作為外科手術的次級併發症(BuonoandForoozan，2005；Hoetal.，JournalofNeurosurgicalAnesthesiology1738-44，(2005))。ION也可以根據病因被分成動脈炎性(動脈炎性ION)和非動脈炎性(NAION)。動脈炎性ION總是由GCA引起的，並通常導致睫狀後動脈(posteriorciliaryartery)的血栓閉塞，其可以導致視神經中其它動脈的並發梗阻(Galassoetal.，SeminarsinOphthalmology1975-77，(2004))。NAION是非青光眼(non-glaucomic)視神經病變的最常見形式，其每年的發病率為2.3/10,000(Collignon-Robeetal.，Ophthalmology1111663-1672，(2004))。GCA是一種慢性大腦中的大血管和中等血管血管炎，其特徵為發炎的巨細胞數量增加(Buonoetal.，SurveyofOphthalmology5015-26，(2005)；Khoslaetal.，JournalofPostgraduateMedicine50219-221，(2004)；Pennetal.，AutoimmunityReviews2199-203，(2003))。通常不會喪失視力，但其可作為供應視神經的前血管梗塞的次級併發症，並且常是不可逆的(Khoslaetal.，2004)。在西方國家，GCA的發病率在1～30/10,000的範圍，50歲以上的人群中的發病率提高(PennandDasgupta，2003)。ION的典型後果是伴有視力衰退或甚至失明的軸突神經束(axontract)降解(Buonoetal.，2005；Khoslaetal.，2004；PennandDasgupta，2003)。ION的傳統治療方法包括給予皮質類固醇和抗血小板試劑(Arnoldetal.，SeminarsinOphthalmology1739-46，(2002))，但使用這些藥物治療的患者並沒有表現出使這些疾病顯著改善。在視神經中，星形膠質細胞和少突膠質細胞都表達連接蛋白分子。連接蛋白43大量存在於星形膠質細胞中而且潛在地參與多種疾病過程。視神經的血管內皮細胞也表達連接蛋白43。在這項研究中，視神經缺血是在體外誘導的模型並且神經片段被置於用30％F-127Pluronic凝膠遞送的連接蛋白43特異性反義寡脫氧核苷酸處理的或用對照膠處理的器官型培養基中。。組織製備利用出生後21至25天(p21至p25)的wistar大鼠。給予過量二氧化碳將wistar大鼠處死，在中央矢狀位置(midsagittalorientation)處打開其顱骨，並將大腦接近小腦的尾部區域剪除並丟棄。在低於嗅葉(olfactorylobe)處切開一口以暴露視神經的顱內區域。可以通過該方法得到約0.3至0.5mm的跨越視神經管的視神經交叉和終點的視神經。然後，使該神經發生缺血，如下。Sundstrometal.DrugDiscoveryToday10993-1000，(2005)中提出了一種用於CNS缺血的可行的ION器官型培養模型實驗方法。在實驗進行前，在獵鷹管(falcontube)中製備10ml不含葡萄糖和穀氨酸鹽的培養基，用95％N2和5％CO2混合氣體鼓泡30分鐘，以去除氧氣。分離的視神經被轉移到缺氧無糖(OGD)溶液中並用石蠟膜和玻璃紙密封。該視神經在37℃下缺血溶液中培養2小時，並隨後回到器官型培養條件下根據需要培養一定長的時間。使用間期培養方法。在OGD溶液中培養之後，該視神經被置於半孔膜上並放入六孔板中，六孔板中含有1ml添加了B27、D-葡萄糖和L穀氨醯胺以及抗體的Neurobasal培養基(Gibco，USA)。對於反義物治療，給予7μL的含有10μM的對連接蛋白43特異的翻譯阻斷的AS-ODN的PluronicF-127凝膠(#P2443，Sigma，USA)以覆蓋每個視神經。這個量已經足夠覆蓋整個部分而沒有過度溢出該組織。對於僅有凝膠和對照組，在神經上分別使用相同量(7μL)的PluronicF-127凝膠和培養基。然後將培養板置於37℃，5％CO2的保溫箱中。該培養技術的主要優勢在於其確保了氧氣從頂部持續的供應而營養物質可從底部擴散。培養之後，用1xPBS(#BR14，oxoid，England)漂洗該神經15分鐘並在4％多聚甲醛(PFA)中固定約2小時，接著，通過在PBS中的20％、然後30％蔗糖冷凍保護。然後，該神經儲存在PBS中的15％蔗糖中，直到為下一步處理做好準備。切割該組織，視神經被包埋入OCT(#4583，Tissue，USA)中，在-20℃下冷凍並隨後被切割成長14μm和厚18μm的片段。這些切片收集到Histobond載玻片(#0810001，Marienfeld，Germany)上並在-80℃下儲存以為下一步處理。腫脹(水腫)通過從上方對視神經拍照並測定(培養的面積減去原始的面積再除以原始面積)得出腫脹百分數。使用碘化丙啶標記細胞膜破壞的細胞(或死細胞(compromisedcell))的細胞核來評估細胞死亡。在神經切割末端和神經的中間區域估計細胞死亡。圖11示出了缺血損傷後用反義和對照治療的視神經培養6小時和24小時的劑量效應曲線。圖11A示出了腫脹百分數，圖11B示出了在切割尾(前)端以及神經中部用碘化丙啶計數評價細胞死亡。用連接蛋白43反義物使神經水腫減小，尤其是在10微摩爾濃度下，在前面脊髓擠壓損傷的研究中已經表明10微摩爾濃度是最優選的(未公開)。使用劑量依賴的方式在兩個區域都導致死亡細胞計數的減少，在切口和神經中部的細胞死亡都有所降低。以下圖12示出了腫脹(水腫)的減輕可以維持一段時間。圖13示出了在缺血誘導之後2、6和24小時，在對照和連接蛋白43特異AS-ODN處理的視神經節段的中間，用碘化丙啶對死細胞進行染色。當與對照組在所有三個時間點進行比較時，連接蛋白43特異的AS-ODN處理組中很少有染色。圖13中的線性圖示出了對照和AS-ODN處理的視神經的神經中間區域每單位面積中的死亡細胞數。對照組的細胞死亡最初增加，在6小時時達到峰值，然後輕微下降(可能是由於組織水腫使每個單位面積內剩餘的細胞更少)。注意到在AS-ODN處理組織中，即使在培養24小時後，細胞死亡僅有很輕微的增加。血管段長度-血管性血友病因子染色為了顯示在對照和連接蛋白43特異反義物處理的視神經中被連接蛋白表達的血管所破壞的血管完整性，用血管性血友病因子(一種內皮細胞標記物)標記。由於血管破壞使可以計數的更小片段的數量增加並且所測量到的片段的長度也更小。研究從兩個動物的每個時間點獲得的六個獨立切片中，多於六十個血管的每個切片血管的平均長度和數量。平均起來，除了在研究的最長時間點，對照組中血管片段的數目少於連接蛋白43特異的AS-ODN處理的神經。條形圖(圖14)示出了連接蛋白43特異的AS-ODN處理的視神經在前三天維持相對恆定的長度，但到第6天開始下降約30％。從對照組中也可以觀察到類似的時間模式，但所有時間點的平均血管片段的長度都明顯短於反義物處理組。表8表8示出了對照組和處理組中血管片段計數的平均數目。在頭三天，與對照組相比，AS處理組平均比對照組少28～50％的血管片段。只有在6天之後，在器官型培養基中，AS處理的神經比對照組中具有更多的片段數，具有24％更多的血管。延長培養時間到有影響的時間。這個實施例表明，在視神經缺血之後抑制連接蛋白43的表達可以減少水腫(減少腫脹)、病變擴散(遠離原始損傷區域的每單位面積中死細胞的數量)、和血管降解。因此，其與實施例1-脊髓中相似。因為在體內研究中已報導有相同的水腫和血管減少，因此其具有治療上的應用(Bernsteinetal.，InvestOphthalmolVisSci444153-4162，(2003))。本文中提到的所有專利、出版物、科學文獻、網站及其它的文件和參考材料或材料都表示本發明所屬
技術領域：
技術人員的技術水平，因此每個這樣的參考文獻和材料以引用方式引入，如同其各自以全文方式引用或以全文方式列在本文中一樣。申請人保留將任何和全部來自任何專利、出版物、科學文獻、網站、可得到的電子信息及其它相關材料或文檔的材料和信息完全結合於本說明書中的權利。本文描述的具體方法和組合物是優選具體實施方式的典型代表並且是示範性的，並不作為對本發明範圍的限制。只要本領域技術人員一旦理解本說明書後就會想到的其它主題、方面和具體實施方式都包括在如權利要求的範圍所限定的本發明的精神範圍內。對於本領域技術人員很容易明顯看出，在不偏離本發明的範圍和精神的前提下，可以對本文公開的發明進行多種不同的替換和修改。在本文中，示例性描述的本發明可以在缺乏任何不是本文必要的專門批露的元素或限制的情況下進行。因此，例如，本文中的每個例子，本發明的具體實施方式和實施例中的，術語「包含」、「主要由......組成」和「由......組成」中的任何一個，在本說明書中都可由其它兩個中的任何一個替代。而且，術語「包含」、「包括」和「含有」等都可以廣義地理解並且沒有限制。在本文中，例證描述的方法和過程可以以不同的步驟順序進行，並且其不一定局限於本文或權利要求中示出的步驟的順序。而且，本文和附帶的權利要求使用的單數形式「一個」或「一種」包括複數，除非上下文中清楚地另外指出。本專利決不解釋為限於本文中特別公開的特定具體實施例或具體實施方式或方法。本專利決不解釋為受到任何審查員或任何其它官方或其它專利和商標局員工的意見的限制，除非這些陳述是明確的而且沒有規定或保守表達地適用於發明人的答辯。本文中使用的術語和表達是用於描述而不是作為限制的術語，而且這些術語和表達的使用也不是傾向於排除其它任何表現或描述的等同特徵或其部分，但在本發明要求保護的範圍內的多種不同的修改都被認為是可能的。因此，可以理解，儘管本發明已經通過優選的具體實施方式和最優的特徵明確地公開，但是本領域技術人員可以採用本文公開的構思的修改和變更，這些修改和變更被認為落入如所附權利要求限定的本發明範圍內。本文已經寬泛且一般地描述了本發明。每個更窄的種類和落入批露類的亞類都構成本發明的一部分。這包括本發明的附帶條件或消極限制的一般描述，其從屬中去除了任何主題，而不論去除物質是否在本文中明確地列舉出來。其它的具體實施方式落入在權利要求中。另外，在根據馬庫什類描述的本發明的特徵或方面中，本領域的技術人員將認識到，本發明也能夠根據任何馬庫什類的個別成員或亞組成員來加以描述。序列表科達治療有限公司(CODATHERAPEUTICSLTD)抗-連接蛋白化合物及其應用P14615DMS待定2006-02-03US60/6500752005-02-03131PatentInVer.3.3130DNAHomosapiens1gtaattgcggcaagaagaattgtttctgtc30230DNAHomosapiens2gtaattgcggcaggaggaattgtttctgtc30330DNAHomosapiens3ggcaagagacaccaaagacactaccagcat30427DNAHomosapiens4tcctgagcaatacctaacgaacaaata27520DNAHomosapiens5catctccttggtgctcaacc20620DNAHomosapiens6ctgaagtcgacttggcttgg20721DNAHomosapiens7ctcagatagtggccagaatgc21820DNAHomosapiens8ttgtccaggtgactccaagg20925DNAHomosapiens9cgtccgagcccagaaagatgaggtc251019DNAHomosapiens10agaggcgcacgtgagacac191119DNAHomosapiens11tgaagacaatgaagatgtt19123088DNAHomosapiens12acaaaaaagcttttacgaggtatcagcacttttctttcattagggggaaggcgtgaggaa60agtaccaaacagcagcggagttttaaactttaaatagacaggtctgagtgcctgaacttg120ccttttcattttacttcatcctccaaggagttcaatcacttggcgtgacttcactacttt180taagcaaaagagtggtgcccaggcaacatgggtgactggagcgccttaggcaaactcctt240gacaaggttcaagcctactcaactgctggagggaaggtgtggctgtcagtacttttcatt300ttccgaatcctgctgctggggacagcggttgagtcagcctggggagatgagcagtctgcc360tttcgttgtaacactcagcaacctggttgtgaaaatgtctgctatgacaagtctttccca420atctctcatgtgcgcttctgggtcctgcagatcatatttgtgtctgtacccacactcttg480tacctggctcatgtgttctatgtgatgcgaaaggaagagaaactgaacaagaaagaggaa540gaactcaaggttgcccaaactgatggtgtcaatgtggacatgcacttgaagcagattgag600ataaagaagttcaagtacggtattgaagagcatggtaaggtgaaaatgcgaggggggttg660ctgcgaacctacatcatcagtatcctcttcaagtctatctttgaggtggccttcttgctg720atccagtggtacatctatggattcagcttgagtgctgtttacacttgcaaaagagatccc780tgcccacatcaggtggactgtttcctctctcgccccacggagaaaaccatcttcatcatc840ttcatgctggtggtgtccttggtgtccctggccttgaatatcattgaactcttctatgtt900ttcttcaagggcgttaaggatcgggttaagggaaagagcgacccttaccatgcgaccagt960ggtgcgctgagccctgccaaagactgtgggtctcaaaaatatgcttatttcaatggctgc1020tcctcaccaaccgctcccctctcgcctatgtctcctcctgggtacaagctggttactggc1080gacagaaacaattcttcttgccgcaattacaacaagcaagcaagtgagcaaaactgggct1140aattacagtgcagaacaaaatcgaatggggcaggcgggaagcaccatctctaactcccat1200gcacagccttttgatttccccgatgataaccagaattctaaaaaactagctgctggacat1260gaattacagccactagccattgtggaccagcgaccttcaagcagagccagcagtcgtgcc1320agcagcagacctcggcctgatgacctggagatctagatacaggcttgaaagcatcaagat1380tccactcaattgtggagaagaaaaaaggtgctgtagaaagtgcaccaggtgttaattttg1440atccggtggaggtggtactcaacagccttattcatgaggcttagaaaacacaaagacatt1500agaatacctaggttcactgggggtgtatggggtagatgggtggagagggaggggataaga1560gaggtgcatgttggtatttaaagtagtggattcaaagaacttagattataaataagagtt1620ccattaggtgatacatagataagggctttttctccccgcaaacacccctaagaatggttc1680tgtgtatgtgaatgagcgggtggtaattgtggctaaatatttttgttttaccaagaaact1740gaaataattctggccaggaataaatacttcctgaacatcttaggtcttttcaacaagaaa1800aagacagaggattgtccttaagtccctgctaaaacattccattgttaaaatttgcacttt1860gaaggtaagctttctaggcctgaccctccaggtgtcaatggacttgtgctactatatttt1920tttattcttggtatcagtttaaaattcagacaaggcccacagaataagattttccatgca1980tttgcaaatacgtatattctttttccatccacttgcacaatatcattaccatcacttttt2040catcattcctcagctactactcacattcatttaatggtttctgtaaacatttttaagaca2100gttgggatgtcacttaacattttttttttttgagctaaagtcagggaatcaagccatgct2160taatatttaacaatcacttatatgtgtgtcgaagagtttgttttgtttgtcatgtattgg2220tacaagcagatacagtataaactcacaaacacagatttgaaaataatgcacatatggtgt2280tcaaatttgaacctttctcatggatttttgtggtgtgggccaatatggtgtttacattat2340ataattcctgctgtggcaagtaaagcacactttttttttctcctaaaatgtttttccctg2400tgtatcctattatggatactggttttgttaattatgattctttattttctctcctttttt2460taggatatagcagtaatgctattactgaaatgaatttcctttttctgaaatgtaatcatt2520gatgcttgaatgatagaattttagtactgtaaacaggctttagtcattaatgtgagagac2580ttagaaaaaatgcttagagtggactattaaatgtgcctaaatgaattttgcagtaactgg2640tattcttgggttttcctacttaatacacagtaattcagaacttgtattctattatgagtt2700tagcagtcttttggagtgaccagcaactttgatgtttgcactaagattttatttggaatg2760caagagaggttgaaagaggattcagtagtacacatacaactaatttatttgaactatatg2820ttgaagacatctaccagtttctccaaatgccttttttaaaactcatcacagaagattggt2880gaaaatgctgagtatgacacttttcttcttgcatgcatgtcagctacataaacagttttg2940tacaatgaaaattactaatttgtttgacattccatgttaaactacggtcatgttcagctt3000cattgcatgtaatgtagacctagtccatcagatcatgtgttctggagagtgttctttatt3060caataaagttttaatttagtataaacat3088131308DNAHomosapiens13atgggcgactggagctttctgggaagactcttagaaaatgcacaggagcactccacggtc60atcggcaaggtttggctgaccgtgctgttcatcttccgcatcttggtgctgggggccgcg120gcggaggacgtgtggggcgatgagcagtcagacttcacctgcaacacccagcagccgggc180tgcgagaacgtctgctacgacagggccttccccatctcccacatccgcttctgggcgctg240cagatcatcttcgtgtccacgcccaccctcatctacctgggccacgtgctgcacatcgtg300cgcatggaagagaagaagaaagagagggaggaggaggagcagctgaagagagagagcccc360agccccaaggagccaccgcaggacaatccctcgtcgcgggacgaccgcggcagggtgcgc420atggccggggcgctgctgcggacctacgtcttcaacatcatcttcaagacgctgttcgag480gtgggcttcatcgccggccagtactttctgtacggcttcgagctgaagccgctctaccgc540tgcgaccgctggccctgccccaacacggtggactgcttcatctccaggcccacggagaag600accatcttcatcatcttcatgctggcggtggcctgcgcgtccctgctgctcaacatgctg660gagatctaccacctgggctggaagaagctcaagcagggcgtgaccagccgcctcggcccg720gacgcctccgaggccccgctggggacagccgatcccccgcccctgccccccagctcccgg780ccgcccgccgttgccatcgggttcccaccctactatgcgcacaccgctgcgcccctggga840caggcccgcgccgtgggctaccccggggccccgccaccagccgcggacttcaaactgcta900gccctgaccgaggcgcgcggaaagggccagtccgccaagctctacaacggccaccaccac960ctgctgatgactgagcagaactgggccaaccaggcggccgagcggcagcccccggcgctc1020aaggcttacccggcagcgtccacgcctgcagcccccagccccgtcggcagcagctccccg1080ccactcgcgcacgaggctgaggcgggcgcggcgcccctgctgctggatgggagcggcagc1140agtctggaggggagcgccctggcagggacccccgaggaggaggagcaggccgtgaccacc1200gcggcccagatgcaccagccgcccttgcccctcggagacccaggtcgggccagcaaggcc1260agcagggccagcagcgggcgggccagaccggaggacttggccatctag1308141601DNAHomosapiens14ctccggccatcgtccccacctccacctgggccgcccgcgaggcagcggacggaggccggg60agccatgggtgactggggcttcctggagaagttgctggaccaggtccgagagcactcgac120cgtggtgggtaagatctggctgacggtgctcttcatcttccgcatcctcatcctgggcct180ggccggcgagtcagtgtggggtgacgagcagtcagatttcgagtgtaacacggcccagcc240aggctgcaccaacgtctgctatgaccaggccttccccatctcccacatccgctactgggt300gctgcagttcctcttcgtcagcacacccaccctggtctacctgggccatgtcatttacct360gtctcggcgagaagagcggctggcgcagaaggagggggagctgcgggcactgccggccaa420ggacccacaggtggagcgggcgctggccggcatagagcttcagatggccaagatctcggt480ggcagaagatggtcgcctgcgcattccgcgagcactgatgggcacctatgtcgccagtgt540gctctgcaagagtgtgctagaggcaggcttcctctatggccagtggcgcctgtacggctg600gaccatggagcccgtgtttgtgtgccagcgagcaccctgcccctacctcgtggactgctt660tgtctctcgccccacggagaagaccatcttcatcatcttcatgttggtggttggactcat720ctccctggtgcttaacctgctggagttggtgcacctgctgtgtcgctgcctcagccgggg780gatgagggcacggcaaggccaagacgcacccccgacccagggcacctcctcagaccctta840cacggaccagggtcttcttctacctccccgtggccaggggccctcatccccaccatgccc900cacctacaatgggctctcatccagtgagcagaactgggccaacctgaccacagaggagag960gctggcgtcttccaggccccctctcttcctggacccaccccctcagaatggccaaaaacc1020cccaagtcgtcccagcagctctgcttctaagaagcagtatgtatagaggcctgtggctta1080tgtcacccaacagaggggtcctgagaagtctggctgcctgggatgccccctgccccctcc1140tggaaggctctgcagagatgactgggctggggaagcagatgcttgctggccatggagcct1200cattgcaagttgttcttgaacacctgaggccttcctgtggcccaccaggcactacggctt1260cctctccagatgtgctttgcctgagcacagacagtcagcatggaatgctcttggccaagg1320gtactggggccctctggccttttgcagctgatccagaggaacccagagccaacttacccc1380aacctcaccctatggaacagtcacctgtgcgcaggttgtcctcaaaccctctcctcacag1440gaaaaggcggattgaggctgctgggtcagccttgatcgcacagacagagcttgtgccgga1500tttggccctgtcaaggggactggtgccttgttttcatcactccttcctagttctactgtt1560caagcttctgaaataaacaggacttgatcacaaaaaaaaaa1601152574DNAHomosapiens15gcaaaaagcgtgggcagttggagaagaagcagccagagtgtgaagaagcccacggaagga60aagtccagggaggaggaaaagaagcagaagttttggcatctgttccctggctgtgccaag120atgggcgattggagcttcctgggaaatttcctggaggaagtacacaagcactcgaccgtg180gtaggcaaggtctggctcactgtcctcttcatattccgtatgctcgtgctgggcacagct240gctgagtcttcctggggggatgagcaggctgatttccggtgtgatacgattcagcctggc300tgccagaatgtctgctacgaccaggctttccccatctcccacattcgctactgggtgctg360cagatcatcttcgtctccacgccctctctggtgtacatgggccacgccatgcacactgtg420cgcatgcaggagaagcgcaagctacgggaggccgagagggccaaagaggtccggggctct480ggctcttacgagtacccggtggcagagaaggcagaactgtcctgctgggaggaagggaat540ggaaggattgccctccagggcactctgctcaacacctatgtgtgcagcatcctgatccgc600accaccatggaggtgggcttcattgtgggccagtacttcatctacggaatcttcctgacc660accctgcatgtctgccgcaggagtccctgtccccacccggtcaactgttacgtatcccgg720cccacagagaagaatgtcttcattgtctttatgctggctgtggctgcactgtccctcctc780cttagcctggctgaactctaccacctgggctggaagaagatcagacagcgatttgtcaaa840ccgcggcagcacatggctaagtgccagctttctggcccctctgtgggcatagtccagagc900tgcacaccaccccccgactttaatcagtgcctggagaatggccctgggggaaaattcttc960aatcccttcagcaataatatggcctcccaacaaaacacagacaacctggtcaccgagcaa1020gtacgaggtcaggagcagactcctggggaaggtttcatccaggttcgttatggccagaag1080cctgaggtgcccaatggagtctcaccaggtcaccgccttccccatggctatcatagtgac1140aagcgacgtcttagtaaggccagcagcaaggcaaggtcagatgacctatcagtgtgaccc1200tcctttatgggaggatcaggaccaggtgggaacaaaggaggctcagagaagaaagacgtg1260tcccttctgaactgatgctttctcactgtcatcactgcttggctcctttgagccccgggt1320ctcaatgacgttgctcattaattctagaaactataaccagggctctgggatagtaagaga1380ggtgacaacccacccagactgcagttccctccccaccctctacccagtatacgaagcctt1440tcagattactcatgaaacagggtagagggaaagaagggaagcatggcaaaagctggcctg1500gaagggatagccagagggatagaatgactctctctctacataccagcagcataccaaatg1560cgttctctaagttcctacctccttgacctgatcaccctccctcctccaaggaagagctca1620aagttcccagccaatagacagcatgaatcaaggaacttgcattatatgtgctcttgaatc1680tgttgtctccatggaccattcctcggagtagtggtgagatggccttgggttgcccttggc1740ttctcctccctctactcagccttaaaaagggcttcttggaactttaccagcagcctcagc1800tttacaaatgccttggtatgtacctctggcaaatgccccaccttggtgatgttgcaacct1860ttccttctgctagggtgtacacctagcctgtgcaggtgtcagccctgctagggagtcact1920gtacacacaaactctactggaattcctgccaacatctgtcaccctgcagctcctttacag1980ttcaatccaatgatagaaaccatcccttccctttctcccttggctgttcacccagccatt2040ccctgaaggccttaccaacaggaatatccaagaagctgttgtcccctctcgaaccctgac2100cagatcatcagccactgaggccagtggaatttccccaggccttgttaaaacaaagaaagc2160attgtacctctcagattccccttgtggaaaaaaaaattctgctgtgaagatgaaaataaa2220aatggagagaaaacactggaaaactattttcccctcctatttacttcctttgctgactgc2280caacttagtgccaagaggaggtgtgatgacagctatggaggcccccagatctctctctcc2340tggaggctttagcaggggcaaggaaatagtaggggaatctccagctctcttggcagggcc2400tttatttaaagagcgcagagattcctatgtctccctagtgcccctaatgagactgccaag2460tgggggctgtagaaaagccttgccttccccagggattggcctggtctctgtattcactgg2520atccataatgggttgctgttgttttggatgaaggtaaacgatgcttggaattgg2574161191DNAHomosapiens16atgagttggagctttctgactcgcctgctagaggagattcacaaccattccacatttgtg60gggaagatctggctcactgttctgattgtcttccggatcgtccttacagctgtaggagga120gaatccatctattacgatgagcaaagcaaatttgtgtgcaacacagaacagccgggctgt180gagaatgtctgttatgatgcgtttgcacctctctcccatgtacgcttctgggtgttccag240atcatcctggtggcaactccctctgtgatgtacctgggctatgctatccacaagattgcc300aaaatggagcacggtgaagcagacaagaaggcagctcggagcaagccctatgcaatgcgc360tggaaacaacaccgggctctggaagaaacggaggaggacaacgaagaggatcctatgatg420tatccagagatggagttagaaagtgataaggaaaataaagagcagagccaacccaaacct480aagcatgatggccgacgacggattcgggaagatgggctcatgaaaatctatgtgctgcag540ttgctggcaaggaccgtgtttgaggtgggttttctgatagggcagtattttctgtatggc600ttccaagtccacccgttttatgtgtgcagcagacttccttgtcctcataagatagactgc660tttatttctagacccactgaaaagaccatcttccttctgataatgtatggtgttacaggc720ctttgcctcttgcttaacatttgggagatgcttcatttagggtttgggaccattcgagac780tcactaaacagtaaaaggagggaacttgaggatccgggtgcttataattatcctttcact840tggaatacaccatctgctccccctggctataacattgctgtcaaaccagatcaaatccag900tacaccgaactgtccaatgctaagatcgcctacaagcaaaacaaggccaacacagcccag960gaacagcagtatggcagccatgaggagaacctcccagctgacctggaggctctgcagcgg1020gagatcaggatggctcaggaacgcttggatctggcagttcaggcctacagtcaccaaaac1080aaccctcatggtccccgggagaagaaggccaaagtggggtccaaagctgggtccaacaaa1140agcactgccagtagcaaatcaggggatgggaagaactctgtctggatttaa1191171362DNAHomosapiens17agcgccaagagagaaagagcacatatttctccgtgggacactccttgtattggtgggtga60gaaatgggcgactggagtttcctggggaacatcttggaggaggtgaatgagcactccacc120gtcatcggcagagtctggctcaccgtgcttttcatcttccggatcctcatccttggcacg180gccgcagagttcgtgtggggggatgagcaatccgacttcgtgtgcaacacccagcagcct240ggctgcgagaacgtctgctacgacgaggcctttcccatctcccacattcgcctctgggtg300ctgcagatcatcttcgtctccaccccgtccctgatgtacgtggggcacgcggtgcactac360gtccgcatggaggagaagcgcaaaagccgcgacgaggagctgggccagcaggcggggact420aacggcggcccggaccagggcagcgtcaagaagagcagcggcagcaaaggcactaagaag480ttccggctggaggggaccctgctgaggacctacatctgccacatcatcttcaagaccctc540tttgaagtgggcttcatcgtgggccactacttcctgtacgggttccggatcctgcctctg600taccgctgcagccggtggccctgccccaatgtggtggactgcttcgtgtcccggcccacg660gagaaaaccatcttcatcctgttcatgttgtctgtggcctctgtgtccctattcctcaac720gtgatggagttgagccacctgggcctgaaggggatccggtctgccttgaagaggcctgta780gagcagcccctgggggagattcctgagaaatccctccactccattgctgtctcctccatc840cagaaagccaagggctatcagcttctagaagaagagaaaatcgtttcccactatttcccc900ttgaccgaggttgggatggtggagaccagcccactgcctgccaagcctttcaatcagttc960gaggagaagatcagcacaggacccctgggggacttgtcccggggctaccaagagacactg1020ccttcctacgctcaggtgggggcacaagaagtggagggcgaggggccgcctgcagaggag1080ggagccgaacccgaggtgggagagaagaaggaggaagcagagaggctgaccacggaggag1140caggagaaggtggccgtgccagagggggagaaagtagagacccccggagtggataaggag1200ggtgaaaaagaagagccgcagtcggagaaggtgtcaaagcaagggctgccagctgagaag1260acaccttcactctgtccagagctgacaacagatgatgccagacccctgagcaggctaagc1320aaagccagcagccgagccaggtcagacgatctaaccgtatga136218966DNAHomosapiens18atgggggaatggaccatcttggagaggctgctagaagccgcggtgcagcagcactccact60atgatcggaaggatcctgttgactgtggtggtgatcttccggatcctcattgtggccatt120gtgggggagacggtgtacgatgatgagcagaccatgtttgtgtgcaacaccctgcagccc180ggctgtaaccaggcctgctatgaccgggccttccccatctcccacatacgttactgggtc240ttccagatcataatggtgtgtacccccagtctttgcttcatcacctactctgtgcaccag300tccgccaagcagcgagaacgccgctactctacagtcttcctagccctggacagagacccc360cctgagtccataggaggtcctggaggaactgggggtgggggcagtggtgggggcaaacga420gaagataagaagttgcaaaatgctattgtgaatggggtgctgcagaacacagagaacacc480agtaaggagacagagccagattgtttagaggttaaggagctgactccacacccatcaggt540ctacgcactgcatcaaaatccaagctcagaaggcaggaaggcatctcccgcttctacatt600atccaagtggtgttccgaaatgccctggaaattgggttcctggttggccaatattttctc660tatggctttagtgtcccagggttgtatgagtgtaaccgctacccctgcatcaaggaggtg720gaatgttatgtgtcccggccaactgagaagactgtctttctagtgttcatgtttgctgta780agtggcatctgtgttgtgctcaacctggctgaactcaaccacctgggatggcgcaagatc840aagctggctgtgcgaggggctcaggccaagagaaagtcaatctatgagattcgtaacaag900gacctgccaagggtcagtgttcccaattttggcaggactcagtccagtgactctgcctat960gtgtga966191901DNAHomosapiens19cagggagttgtggttgcaacactgtactccagcctgggcaacagagggagactctgtctc60aacaaacaaacaaacaaagaaaaaaccccacagctatctagggaaaaagtaaagcaacca120gcatatagaagtgacatattgttatattttcaccataggtttgctttaagaaatagtgct180cccttcagaatggaagaatttatctgcctcttatttgatgtggatcagagctaagatggc240tgactaaataaacatgggggactggaatctccttggagatactctggaggaagttcacat300ccactccaccatgattggaaagatctggctcaccatcctgttcatatttcgaatgcttgt360tctgggtgtagcagctgaagatgtctggaatgatgagcagtctggcttcatctgcaatac420agaacaaccaggctgcagaaatgtatgctacgaccaggcctttcctatctccctcattag480atactgggttctgcaggtgatatttgtgtcttcaccatccctggtctacatgggccatgc540attgtaccgactgagagttcttgaggaagagaggcaaaggatgaaagctcagttaagagt600agaactggaggaggtagagtttgaaatgcctagggatcggaggagattggagcaagagct660ttgtcagctggagaaaaggaaactaaataaagctccactcagaggaaccttgctttgcac720ttatgtgatacacattttcactcgctctgtggttgaagttggattcatgattggacagta780ccttttatatggatttcacttagagccgctatttaagtgccatggccacccgtgtccaaa840tataatcgactgttttgtctcaagaccaacagaaaagacaatattcctattatttatgca900atctatagccactatttcacttttcttaaacattcttgaaattttccacctaggttttaa960aaagattaaaagagggctttggggaaaatacaagttgaagaaggaacataatgaattcca1020tgcaaacaaggcaaaacaaaatgtagccaaataccagagcacatctgcaaattcactgaa1080gcgactcccttctgcccctgattataatctgttagtggaaaagcaaacacacactgcagt1140gtaccctagtttaaattcatcttctgtattccagccaaatcctgacaatcatagtgtaaa1200tgatgagaaatgcattttggatgaacaggaaactgtactttctaatgagatttccacact1260tagtactagttgtagtcattttcaacacatcagttcaaacaataacaaagacactcataa1320aatatttggaaaagaacttaatggtaaccagttaatggaaaaaagagaaactgaaggcaa1380agacagcaaaaggaactactactctagaggtcaccgttctattccaggtgttgctataga1440tggagagaacaacatgaggcagtcaccccaaacagttttctccttgccagctaactgcga1500ttggaaaccgcggtggcttagagctacatggggttcctctacagaacatgaaaaccgggg1560gtcacctcctaaaggtaacctcaagggccagttcagaaagggcacagtcagaacccttcc1620tccttcacaaggagattctcaatcacttgacattccaaacactgctgattctttgggagg1680gctgtcctttgagccagggttggtcagaacctgtaataatcctgtttgtcctccaaatca1740cgtagtgtccctaacgaacaatctcattggtaggcgggttcccacagatcttcagatcta1800aacagcggttggcttttagacattatatatattatcagagaagtagcctagtggtcgtgg1860ggcacagaaaaaatagataggggcagctctaaagaccagct1901201311DNAHomosapiens20atgagctggagcttcctgacgcggctgctggaggagatccacaaccactccaccttcgtg60ggcaaggtgtggctcacggtgctggtggtcttccgcatcgtgctgacggctgtgggcggc120gaggccatctactcggacgagcaggccaagttcacttgcaacacgcggcagccaggctgc180gacaacgtctgctatgacgccttcgcgcccctgtcgcacgtgcgcttctgggtcttccag240attgtggtcatctccacgccctcggtcatgtacctgggctacgccgtgcaccgcctggcc300cgtgcgtctgagcaggagcggcgccgcgccctccgccgccgcccggggccacgccgcgcg360ccccgagcgcacctgccgcccccgcacgccggctggcctgagcccgccgacctgggcgag420gaggagcccatgctgggcctgggcgaggaggaggaggaggaggagacgggggcagccgag480ggcgccggcgaggaagcggaggaggcaggcgcggaggaggcgtgcactaaggcggtcggc540gctgacggcaaggcggcagggaccccgggcccgaccgggcaacacgatgggcggaggcgc600atccagcgggagggcctgatgcgcgtgtacgtggcccagctggtggccagggcagctttc660gaggtggccttcctggtgggccagtacctgctgtacggcttcgaggtgcgaccgttcttt720ccctgcagccgccagccctgcccgcacgtggtggactgcttcgtgtcgcgccctactgaa780aagacggtcttcctgctggttatgtacgtggtcagctgcctgtgcctgctgctcaacctc840tgtgagatggcccacctgggcttgggcagcgcgcaggacgcggtgcgcggccgccgcggc900cccccggcctccgcccccgcccccgcgccgcggcccccgccctgcgccttccctgcggcg960gccgctggcttggcctgcccgcccgactacagcctggtggtgcgggcggccgagcgcgct1020cgggcgcatgaccagaacctggcaaacctggccctgcaggcgctgcgcgacggggcagcg1080gctggggaccgcgaccgggacagttcgccgtgcgtcggcctccctgcggcctcccggggg1140ccccccagagcaggcgcccccgcgtcccggacgggcagtgctacctctgcgggcactgtc1200ggggagcagggccggcccggcacccacgagcggccaggagccaagcccagggctggctcc1260gagaagggcagtgccagcagcagggacgggaagaccaccgtgtggatctga1311211588DNAHomosapiens21agacattctctgggaaagggcagcagcagccaggtgtggcagtgacagggaggtgtgaat60gaggcaggatgaactggacaggtttgtacaccttgctcagtggcgtgaaccggcattcta120ctgccattggccgagtatggctctcggtcatcttcatcttcagaatcatggtgctggtgg180tggctgcagagagtgtgtggggtgatgagaaatcttccttcatctgcaacacactccagc240ctggctgcaacagcgtttgctatgaccaattcttccccatctcccatgtgcggctgtggt300ccctgcagctcatcctagtttccaccccagctctcctcgtggccatgcacgtggctcacc360agcaacacatagagaagaaaatgctacggcttgagggccatggggaccccctacacctgg420aggaggtgaagaggcacaaggtccacatctcagggacactgtggtggacctatgtcatca480gcgtggtgttccggctgttgtttgaggccgtcttcatgtatgtcttttatctgctctacc540ctggctatgccatggtgcggctggtcaagtgcgacgtctacccctgccccaacacagtgg600actgcttcgtgtcccgccccaccgagaaaaccgtcttcaccgtcttcatgctagctgcct660ctggcatctgcatcatcctcaatgtggccgaggtggtgtacctcatcatccgggcctgtg720cccgccgagcccagcgccgctccaatccaccttcccgcaagggctcgggcttcggccacc780gcctctcacctgaatacaagcagaatgagatcaacaagctgctgagtgagcaggatggct840ccctgaaagacatactgcgccgcagccctggcaccggggctgggctggctgaaaagagcg900accgctgctcggcctgctgatgccacataccaggcaacctcccatcccacccccgaccct960gccctgggcgagcccctccttctcccctgccggtgcacaggcctctgcctgctggggatt1020actcgatcaaaaccttccttccctggctacttcccttcctcccggggccttccttttgag1080gagctggaggggtggggagctagaggccacctatgccagtgctcaaggttactgggagtg1140tgggctgcccttgttgcctgcacccttccctcttccctctccctctctctgggaccactg1200ggtacaagagatgggatgctccgacagcgtctccaattatgaaactaatcttaaccctgt1260gctgtcagataccctgtttctggagtcacatcagtgaggagggatgtgggtaagaggagc1320agagggcaggggtgctgtggacatgtgggtggagaagggagggtggccagcactagtaaa1380ggaggaatagtgcttgctggccacaaggaaaaggaggaggtgtctggggtgagggagtta1440gggagagagaagcaggcagataagttggagcaggggttggtcaaggccacctctgcctct1500agtccccaaggcctctctctgcctgaaatgttacacattaaacaggattttacagcaaaa1560aaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaa1588222263DNAHomosapiens22cggagcccctcggcggcgcccggcccaggacccgcctaggagcgcaggagccccagcgca60gagaccccaacgccgagacccccgccccggccccgccgcgcttcctcccgacgcagagca120aaccgcccagagtagaagatggattggggcacgctgcagacgatcctggggggtgtgaac180aaacactccaccagcattggaaagatctggctcaccgtcctcttcatttttcgcattatg240atcctcgttgtggctgcaaaggaggtgtggggagatgagcaggccgactttgtctgcaac300accctgcagccaggctgcaagaacgtgtgctacgatcactacttccccatctcccacatc360cggctatgggccctgcagctgatcttcgtgtccacgccagcgctcctagtggccatgcac420gtggcctaccggagacatgagaagaagaggaagttcatcaagggggagataaagagtgaa480tttaaggacatcgaggagatcaaaacccagaaggtccgcatcgaaggctccctgtggtgg540acctacacaagcagcatcttcttccgggtcatcttcgaagccgccttcatgtacgtcttc600tatgtcatgtacgacggcttctccatgcagcggctggtgaagtgcaacgcctggccttgt660cccaacactgtggactgctttgtgtcccggcccacggagaagactgtcttcacagtgttc720atgattgcagtgtctggaatttgcatcctgctgaatgtcactgaattgtgttatttgcta780attagatattgttctgggaagtcaaaaaagccagtttaacgcattgcccagttgttagat840taagaaatagacagcatgagagggatgaggcaacccgtgctcagctgtcaaggctcagtc900gccagcatttcccaacacaaagattctgaccttaaatgcaaccatttgaaacccctgtag960gcctcaggtgaaactccagatgccacaatggagctctgctcccctaaagcctcaaaacaa1020aggcctaattctatgcctgtcttaattttctttcacttaagttagttccactgagacccc1080aggctgttaggggttattggtgtaaggtactttcatattttaaacagaggatatcggcat1140ttgtttctttctctgaggacaagagaaaaaagccaggttccacagaggacacagagaagg1200tttgggtgtcctcctggggttctttttgccaactttccccacgttaaaggtgaacattgg1260ttctttcatttgctttggaagttttaatctctaacagtggacaaagttaccagtgcctta1320aactctgttacactttttggaagtgaaaactttgtagtatgataggttattttgatgtaa1380agatgttctggataccattatatgttccccctgtttcagaggctcagattgtaatatgta1440aatggtatgtcattcgctactatgatttaatttgaaatatggtcttttggttatgaatac1500tttgcagcacagctgagaggctgtctgttgtattcattgtggtcatagcacctaacaaca1560ttgtagcctcaatcgagtgagacagactagaagttcctagtgatggcttatgatagcaaa1620tggcctcatgtcaaatatttagatgtaattttgtgtaagaaatacagactggatgtacca1680ccaactactacctgtaatgacaggcctgtccaacacatctcccttttccatgactgtggt1740agccagcatcggaaagaacgctgatttaaagaggtcgcttgggaattttattgacacagt1800accatttaatggggaggacaaaatggggcaggggagggagaagtttctgtcgttaaaaac1860agatttggaaagactggactctaaattctgttgattaaagatgagctttgtctacttcaa1920aagtttgtttgcttaccccttcagcctccaattttttaagtgaaaatataactaataaca1980tgtgaaaagaatagaagctaaggtttagataaatattgagcagatctataggaagattga2040acctgaatattgccattatgcttgacatggtttccaaaaaatggtactccacatacttca2100gtgagggtaagtattttcctgttgtcaagaatagcattgtaaaagcattttgtaataata2160aagaatagctttaatgatatgcttgtaactaaaataattttgtaatgtatcaaatacatt2220taaaacattaaaatataatctctataataaaaaaaaaaaaaaa2263232220DNAHomosapiens23gaacttctttcctggcacaggactcactgtgccccttcccgctgtgggtacaaggtctgc60cccccaccccagctctccaaagcccaccggcctccctggaggccgaggtcgacggcccgt120cgcaccgggagggggggctcccaggggtgccccacgcacggtcaaggtcccgcgccaagc180ggggaccgggctgggccggaagcgggcacggtactcgcggcaaactagcgtgggcgagtc240ctgattgcagtcggacctgccgccgcggcacttaacagtttgcagagtgcttcccgcccc300tgatctcattggagccttcggacagcccagcccatggccaccgatgcccccatttcacgc360ctgaggaagcggaggctcagacgggccaccagcccctccggaggctggcccgggagcgcc420tggcagcgtcgggtctaggagccggctccctcctgctccctcctccgcgccgcccggggt480gtgcccgccgtctgtgtgcaccactgctgagcccagctccggcgccctcgcctctgctgt540gggccccggggacgcggggtcaggccaccgcgttggccaggccgctgcaggtaggcacgg600cccccaccaggcgccatggactggaagacactccaggccctactgagcggtgtgaacaag660tactccacagcgttcgggcgcatctggctgtccgtggtgttcgtcttccgggtgctggta720tacgtggtggctgcagagcgcgtgtggggggatgagcagaaggactttgactgcaacacc780aagcagcccggctgcaccaacgtctgctacgacaactacttccccatctccaacatccgc840ctctgggccctgcagctcatcttcgtcacatgcccctcgctgctggtcatcctgcacgtg900gcctaccgtgaggagcgggagcgccggcaccgccagaaacacggggaccagtgcgccaag960ctgtacgacaacgcaggcaagaagcacggaggcctgtggtggacctacctgttcagcctc1020atcttcaagctcatcattgagttcctcttcctctacctgctgcacactctctggcatggc1080ttcaatatgccgcgcctggtgcagtgtgccaacgtggccccctgccccaacatcgtggac1140tgctacattgcccgacctaccgagaagaaaatcttcacctacttcatggtgggcgcctcc1200gccgtctgcatcgtactcaccatctgtgagctctgctacctcatctgccacagggtcctg1260cgaggcctgcacaaggacaagcctcgagggggttgcagcccctcgtcctccgccagccga1320gcttccacctgccgctgccaccacaagctggtggaggctggggaggtggatccagaccca1380ggcaataacaagctgcaggcttcagcacccaacctgacccccatctgaccacagggcagg1440ggtggggcaacatgcgggctgccaatgggacatgcagggcggtgtggcaggtggagaggt1500cctacaggggctgagtgaccccactctgagttcactaagttatgcaactttcgttttggc1560agatattttttgacactgggaactgggctgtctagccgggtataggtaacccacaggccc1620agtgccagccctcaaaggacatagactttgaaacaagcgaattaactatctacgctgcct1680gcaaggggccacttagggcactgctagcagggcttcaaccaggaagggatcaacccagga1740agggatgatcaggagaggcttccctgaggacataatgtgtaagagaggtgagaagtgctc1800ccaagcagacacaacagcagcacagaggtctggaggccacacaaaaagtgatgctcgccc1860tgggctagcctcagcagacctaaggcatctctactccctccagaggagccgcccagattc1920ctgcagtggagaggaggtcttccagcagcagcaggtctggagggctgagaatgaacctga1980ctagaggttctggagatacccagaggtcccccaggtcatcacttggctcagtggaagccc2040tctttccccaaatcctactccctcagcctcaggcagtggtgctcccatcttcctccccac2100aactgtgctcaggctggtgccagcctttcagaccctgctcccagggacttgggtggatgc2160gctgatagaacatcctcaagacagtttccttgaaatcaataaatactgtgttttataaaa2220241243DNAHomosapiens24caaggctcccaaggcctgagtgggcaggtagcacccaggtatagaccttccacgtgcagc60acccaggacacagccagcatgaactgggcatttctgcagggcctgctgagtggcgtgaac120aagtactccacagtgctgagccgcatctggctgtctgtggtgttcatctttcgtgtgctg180gtgtacgtggtggcagcggaggaggtgtgggacgatgagcagaaggactttgtctgcaac240accaagcagcccggctgccccaacgtctgctatgacgagttcttccccgtgtcccacgtg300cgcctctgggccctacagctcatcctggtcacgtgcccctcactgctcgtggtcatgcac360gtggcctaccgcgaggaacgcgagcgcaagcaccacctgaaacacgggcccaatgccccg420tccctgtacgacaacctgagcaagaagcggggcggactgtggtggacgtacttgctgagc480ctcatcttcaaggccgccgtggatgctggcttcctctatatcttccaccgcctctacaag540gattatgacatgccccgcgtggtggcctgctccgtggagccttgcccccacactgtggac600tgttacatctcccggcccacggagaagaaggtcttcacctacttcatggtgaccacagct660gccatctgcatcctgctcaacctcagtgaagtcttctacctggtgggcaagaggtgcatg720gagatcttcggccccaggcaccggcggcctcggtgccgggaatgcctacccgatacgtgc780ccaccatatgtcctctcccagggagggcaccctgaggatgggaactctgtcctaatgaag840gctgggtcggccccagtggatgcaggtgggtatccataacctgcgagatcagcagataag900atcaacaggtcccccccacatgaggccacccaggaaaaaaggcaggggcagtggcatcct960tgccgtagcagggtggtgaggagggtggctgtgggggctcaggaagctcgcccaggggcc1020aatgtgggaggttgggggtagtttggtccctgggtcctgagcctcaggggagggaggttg1080atagctactggggattttgtatatggcaacagtatatgtcaaacctcttattaaatatga1140ttttcccagtaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaa1200aaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaa1243251299DNAHomosapiens25atgaaattcaagctgcttgctgagtcctattgccggctgctgggagccaggagagccctg60aggagtagtcactcagtagcagctgacgcgtgggtccaccatgaactggagtatctttga120gggactcctgagtggggtcaacaagtactccacagcctttgggcgcatctggctgtctct180ggtcttcatcttccgcgtgctggtgtacctggtgacggccgagcgtgtgtggagtgatga240ccacaaggacttcgactgcaatactcgccagcccggctgctccaacgtctgctttgatga300gttcttccctgtgtcccatgtgcgcctctgggccctgcagcttatcctggtgacatgccc360ctcactgctcgtggtcatgcacgtggcctaccgggaggttcaggagaagaggcaccgaga420agcccatggggagaacagtgggcgcctctacctgaaccccggcaagaagcggggtgggct480ctggtggacatatgtctgcagcctagtgttcaaggcgagcgtggacatcgcctttctcta540tgtgttccactcattctaccccaaatatatcctccctcctgtggtcaagtgccacgcaga600tccatgtcccaatatagtggactgcttcatctccaagccctcagagaagaacattttcac660cctcttcatggtggccacagctgccatctgcatcctgctcaacctcgtggagctcatcta720cctggtgagcaagagatgccacgagtgcctggcagcaaggaaagctcaagccatgtgcac780aggtcatcacccccacggtaccacctcttcctgcaaacaagacgacctcctttcgggtga840cctcatctttctgggctcagacagtcatcctcctctcttaccagaccgcccccgagacca900tgtgaagaaaaccatcttgtgaggggctgcctggactggtctggcaggttgggcctggat960ggggaggctctagcatctctcataggtgcaacctgagagtgggggagctaagccatgagg1020taggggcaggcaagagagaggattcagacgctctgggagccagttcctagtcctcaactc1080cagccacctgccccagctcgacggcactgggccagttccccctctgctctgcagctcggt1140ttccttttctagaatggaaatagtgagggccaatgcccagggttggagggaggagggcgt1200tcatagaagaacacacatgcgggcaccttcatcgtgtgtggcccactgtcagaacttaat1260aaaagtcaactcatttgctggaaaaaaaaaaaaaaaaaa1299261805DNAHomosapiens26ctgggaagacgctggtcagttcacctgccccactggttgttttttaaacaaattctgata60caggcgacatcctcactgaccgagcaaagattgacattcgtatcatcactgtgcaccatt120ggcttctaggcactccagtggggtaggagaaggaggtctgaaaccctcgcagagggatct180tgccctcattctttgggtctgaaacactggcagtcgttggaaacaggactcagggataaa240ccagcgcaatggattgggggacgctgcacactttcatcgggggtgtcaacaaacactcca300ccagcatcgggaaggtgtggatcacagtcatctttattttccgagtcatgatcctcgtgg360tggctgcccaggaagtgtggggtgacgagcaagaggacttcgtctgcaacacactgcaac420cgggatgcaaaaatgtgtgctatgaccactttttcccggtgtcccacatccggctgtggg480ccctccagctgatcttcgtctccaccccagcgctgctggtggccatgcatgtggcctact540acaggcacgaaaccactcgcaagttcaggcgaggagagaagaggaatgatttcaaagaca600tagaggacattaaaaagcagaaggttcggatagaggggtcgctgtggtggacgtacacca660gcagcatctttttccgaatcatctttgaagcagcctttatgtatgtgttttacttccttt720acaatgggtaccacctgccctgggtgttgaaatgtgggattgacccctgccccaaccttg780ttgactgctttatttctaggccaacagagaagaccgtgtttaccatttttatgatttctg840cgtctgtgatttgcatgctgcttaacgtggcagagttgtgctacctgctgctgaaagtgt900gttttaggagatcaaagagagcacagacgcaaaaaaatcaccccaatcatgccctaaagg960agagtaagcagaatgaaatgaatgagctgatttcagatagtggtcaaaatgcaatcacag1020gtttcccaagctaaacatttcaaggtaaaatgtagctgcgtcataaggagacttctgtct1080tctccagaaggcaataccaacctgaaagttccttctgtagcctgaagagtttgtaaatga1140ctttcataataaatagacacttgagttaactttttgtaggatacttgctccattcataca1200caacgtaatcaaatatgtggtccatctctgaaaacaagagactgcttgacaaaggagcat1260tgcagtcactttgacaggttccttttaagtggactctctgacaaagtgggtactttctga1320aaatttatataactgttgttgataaggaacatttatccaggaattgatacttttattagg1380aaaagatatttttataggcttggatgtttttagttctgactttgaatttatataaagtat1440ttttataatgactggtcttccttacctggaaaaacatgcgatgttagttttagaattaca1500ccacaagtatctaaatttggaacttacaaagggtctatcttgtaaatattgttttgcatt1560gtctgttggcaaatttgtgaactgtcatgatacgcttaaggtggaaagtgttcattgcac1620aatatatttttactgctttctgaatgtagacggaacagtgtggaagcagaaggctttttt1680aactcatccgtttgccaatcattgcaaacaactgaaatgtggatgtgattgcctcaataa1740agctcgtccccattgcttaagccttcaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaa1800aaaaa1805272094DNAHomosapiens27aaatgaaagagggagcaggaggcgccggtcccagccacctcccaaggtccctggctcagc60tctgacaccccagtcccggccccagggtgagtggggttgggtggcggtttaggggcacca120ggggcgtgtggggacctgtgtaagtgtggggtggggaggatctcaggagatgtggaggct180ggaggcacaggaggccagggaggagggagaagcctggtgccgcactcccaccacgctggg240gtaggagggcagggacacctccgacaaaggaccctgtgagagttatgaaagcggagttgc300ctctgtaccagccccccaccctgagaggagttcactgcagtaaaaatggtgagagaaatg360gtgggccaagaaaggagtggtctcgctgcctctgccactcccactcctcccatgggcacc420aaattgggtctagcgtctcgggttcgaggctccactcttcccacagcatccttgacagct480aagggcaccgctgggtttccgcttccgaaaccaggcaagtcaggggctggtccagctgat540ctccaaggtccttcctaagaatctgggatctggaggatcccagggtcgaacggagacggc600tcagggggtgcggctaaaatgcaaatgggggatcctccccagcacccatcggtcccaaag660agaaggtaacccatagctgagcgtcgcctgctcccctcgggccctcccgtggccctccgt720ttcatactggtctcatcgctaaacccgggcctctcctacctcacgactcaccctgaagtc780agagaaggtccaacggaccccaccccgataggcttggaaggggcaggggtccctgacttg840ccccatcccctgactccccgccccgcgtccccagcgccatgggggagtgggcgttcctgg900gctcgctgctggacgccgtgcagctgcagtcgccgctcgtgggccgcctctggctggtgg960tcatgctgatcttccgcatcctggtgctggccacggtgggcggcgccgtgttcgaggacg1020agcaagaggagttcgtgtgcaacacgctgcagccgggctgtcgccagacctgctacgacc1080gcgccttcccggtctcccactaccgcttctggctcttccacatcctgctgctctcggcgc1140ccccggtgctgttcgtcgtctactccatgcaccgggcaggcaaggaggcgggcggcgctg1200aggcggcggcgcagtgcgcccccggactgcccgaggcccagtgcgcgccgtgcgccctgc1260gcgcccgccgcgcgcgccgctgctacctgctgagcgtggcgctgcgcctgctggccgagc1320tgaccttcctgggcggccaggcgctgctctacggcttccgcgtggccccgcacttcgcgt1380gcgccggtccgccctgcccgcacacggtcgactgcttcgtgagccggcccaccgagaaga1440ccgtcttcgtgctcttctatttcgcggtggggctgctgtcggcgctgctcagcgtagccg1500agctgggccacctgctctggaagggccgcccgcgcgccggggagcgtgacaaccgctgca1560accgtgcacacgaagaggcgcagaagctgctcccgccgccgccgccgccacctattgttg1620tcacttgggaagaaaacagacaccttcaaggagagggctcccctggtagcccccacccca1680agacagagctggatgcccctcgcttccgtagggaaagcacttctcctgcaggatggcatt1740gctctctccccttccatggcacgtagtatgtgctcagtaaatatgtgttggatgagaaac1800tgaaggtgtccccaggcctacaccactgccatgcccgaacactatccatgctatggtggg1860caccatctctctgatgacagttctgtgtccacaacccagacccctccacacaaacccaga1920tggggctgtgccgctgttttccagatgtattcattcaacaaatatttgtagggtacctac1980tgtgtgtcagaagatgttcaagatcagcatcatccgatggaaatagcatatgagccatgt2040atgtagtttcaagtttttcattagccgcattaaaaaagtaaaaggaaacaaatg209428840DNAHomosapiens28atgtgtggcaggttcctgcggcggctgctggcggaggagagccggcgctccacccccgtg60gggcgcctcttgcttcccgtgctcctgggattccgccttgtgctgctggctgccagtggg120cctggagtctatggtgatgagcagagtgaattcgtgtgtcacacccagcagccgggctgc180aaggctgcctgcttcgatgccttccaccccctctccccgctgcgtttctgggtcttccag240gtcatcttggtggctgtacccagcgccctctatatgggtttcactctgtatcacgtgatc300tggcactgggaattatcaggaaaggggaaggaggaggagaccctgatccagggacgggag360ggcaacacagatgtcccaggggctggaagcctcaggctgctctgggcttatgtggctcag420ctgggggctcggcttgtcctggagggggcagccctggggttgcagtaccacctgtatggg480ttccagatgcccagctcctttgcatgtcgccgagaaccttgccttggtagtataacctgc540aatctgtcccgcccctctgagaagaccattttcctaaagaccatgtttggagtcagcggt600ttctgtctcttgtttacttttttggagcttgtgcttctgggtttggggagatggtggagg660acctggaagcacaaatcttcctcttctaaatacttcctaacttcagagagcaccagaaga720cacaagaaagcaaccgatagcctcccagtggtggaaaccaaagagcaatttcaagaagca780gttccaggaagaagcttagcccaggaaaaacaaagaccagttggacccagagatgcctga84029672DNAHomosapiens29atgagttggatgttcctcagagatctcctgagtggagtaaataaatactccactgggact60ggatggatttggctggctgtcgtgtttgtcttccgtttgctggtctacatggtggcagca120gagcacatgtggaaagatgagcagaaagagtttgagtgcaacagtagacagcccggttgc180aaaaatgtgtgttttgatgacttcttccccatttcccaagtcagactttgggccttacaa240ctgataatggtctccacaccttcacttctggtggttttacatgtagcctatcatgagggt300agagagaaaaggcacagaaagaaactctatgtcagcccaggtacaatggatgggggccta360tggtacgcttatcttatcagcctcattgttaaaactggttttgaaattggcttccttgtt420ttattttataagctatatgatggctttagtgttccctaccttataaagtgtgatttgaag480ccttgtcccaacactgtggactgcttcatctccaaacccactgagaagacgatcttcatc540ctcttcttggtcatcacctcatgcttgtgtattgtgttgaatttcattgaactgagtttt600ttggttctcaagtgctttattaagtgctgtctccaaaaatatttaaaaaaacctcaagtc660ctcagtgtgtga672301113DNAHomosapiens30atggaaggcgtggacttgctagggtttctcatcatcacattaaactgcaacgtgaccatg60gtaggaaagctctggttcgtcctcacgatgctgctgcggatgctggtgattgtcttggcg120gggcgacccgtctaccaggacgagcaggagaggtttgtctgcaacacgctgcagccggga180tgcgccaatgtttgctacgacgtcttctcccccgtgtctcacctgcggttctggctgatc240cagggcgtgtgcgtcctcctcccctccgccgtcttcagcgtctatgtcctgcaccgagga300gccacgctcgccgcgctgggcccccgccgctgccccgacccccgggagccggcctccggg360cagagacgctgcccgcggccattcggggagcgcggcggcctccaggtgcccgacttttcg420gccggctacatcatccacctcctcctccggaccctgctggaggcagccttcggggccttg480cactactttctctttggattcctggccccgaagaagttcccttgcacgcgccctccgtgc540acgggcgtggtggactgctacgtgtcgcggcccacagagaagtccctgctgatgctgttc600ctctgggcggtcagcgcgctgtcttttctgctgggcctcgccgacctggtctgcagcctg660cggcggcggatgcgcaggaggccgggaccccccacaagcccctccatccggaagcagagc720ggagcctcaggccacgcggagggacgccggactgacgaggagggtgggcgggaggaagag780ggggcaccggcgcccccgggtgcacgcgccggaggggagggggctggcagccccaggcgt840acatccagggtgtcagggcacacgaagattccggatgaggatgagagtgaggtgacatcc900tccgccagcgaaaagctgggcagacagccccggggcaggccccaccgagaggccgcccag960gaccccaggggctcaggatccgaggagcagccctcagcagcccccagccgcctggccgcg1020cccccttcctgcagcagcctgcagccccctgacccgcctgccagctccagtggtgctccc1080cacctgagagccaggaagtctgagtgggtgtga1113311632DNAHomosapiens31atgggggactggaacttattgggtggcatcctagaggaagttcactcccactcaaccata60gtggggaaaatctggctgaccatcctcttcatcttccgaatgctggtacttcgtgtggct120gctgaggatgtctgggatgatgaacagtcagcatttgcctgcaacacccggcagccaggt180tgcaacaatatctgttatgatgatgcattccctatctctttgatcaggttctgggtttta240cagatcatctttgtgtcttctccttctttggtctatatgggccatgcactttataggctc300agggcctttgagaaagacaggcagaggaaaaagtcacaccttagagcccagatggagaat360ccagatcttgacttggaggagcagcaaagaatagatagggaactgaggaggttagaggag420cagaagaggatccataaagtccctctgaaaggatgtctgctgcgtacttatgtcttacac480atcttgaccagatctgtgctggaagtaggattcatgataggccaatatattctctatggg540tttcaaatgcaccccctttacaaatgcactcaacctccttgccccaatgcggtggattgc600tttgtatccaggcccactgagaagacaattttcatgctttttatgcacagcattgcagcc660atttccttgttactcaatatactggaaatatttcatctaggcatcagaaaaattatgagg720acactttataagaaatccagcagtgagggcattgaggatgaaacaggccctccattccat780ttgaagaaatattctgtggcccagcagtgtatgatttgctcttcattgcctgaaagaatc840tctccacttcaagctaacaatcaacagcaagtcattcgagttaatgtgccaaagtctaaa900accatgtggcaaatcccacagccaaggcaacttgaagtagacccttccaatgggaaaaag960gactggtctgagaaggatcagcatagcggacagctccatgttcacagcccgtgtccctgg1020gctggcagtgctggaaatcagcacctgggacagcaatcagaccattcctcatttggcctg1080cagaatacaatgtctcagtcctggctaggtacaactacggctcctagaaactgtccatcc1140tttgcagtaggaacctgggagcagtcccaggacccagaaccctcaggtgagcctctcaca1200gatcttcatagtcactgcagagacagtgaaggcagcatgagagagagtggggtctggata1260gacagatctcgcccaggcagtcgcaaggccagctttctgtccagattgttgtctgaaaag1320cgacatctgcacagtgactcaggaagctctggttctcggaatagctcctgcttggatttt1380cctcactgggaaaacagcccctcacctctgccttcagtcactgggcacagaacatcaatg1440gtaagacaggcagccctaccgatcatggaactatcacaagagctgttccattctggatgc1500tttctttttcctttctttcttcctggggtgtgtatgtatgtttgtgttgacagagaggca1560gatggagggggagattatttatggagagataaaattattcattcgatacattcagttaaa1620ttcaattcataa16323211PRTArtificialSequenceDescriptionofArtificialSequenceconnexin/anti-connexinpeptidesequence32PheGluValAlaPheLeuLeuIleGlnTrpIle15103311PRTArtificialSequenceDescriptionofArtificialSequenceconnexin/anti-connexinpeptidesequence33LeuLeuIleGlnTrpTyrIleGlyPheSerLeu15103416PRTArtificialSequenceDescriptionofArtificialSequenceconnexin/anti-connexinpeptidesequence34SerLeuSerAlaValTyrThrCysLysArgAspProCysProHisGln1510153512PRTArtificialSequenceDescriptionofArtificialSequenceconnexin/anti-connexinpeptidesequence35ValAspCysPheLeuSerArgProThrGluLysThr15103611PRTArtificialSequenceDescriptionofArtificialSequenceconnexin/anti-connexinpeptidesequence36SerArgProThrGluLysThrIlePheIleIle15103713PRTArtificialSequenceDescriptionofArtificialSequenceconnexin/anti-connexinpeptidesequence37LeuGlyThrAlaValGluSerAlaTrpGlyAspGluGln15103812PRTArtificialSequenceDescriptionofArtificialSequenceconnexin/anti-connexinpeptidesequence38GlnSerAlaPheArgCysAsnThrGlnGlnProGly15103912PRTArtificialSequenceDescriptionofArtificialSequenceconnexin/anti-connexinpeptidesequence39GlnGlnProGlyCysGluAsnValCysTyrAspLys15104013PRTArtificialSequenceDescriptionofArtificialSequenceconnexin/anti-connexinpeptidesequence40ValCysTyrAspLysSerPheProIleSerHisValArg15104138PRTArtificialSequenceDescriptionofArtificialSequenceconnexin/anti-connexinpeptidesequence41AlaAlaGluSerValTrpGlyAspGluIleLysSerSerPheIleCys151015AsnThrLeuGlnProGlyCysAsnSerValCysTyrAspHisPhePhe202530ProIleSerHisValArg354212PRTArtificialSequenceDescriptionofArtificialSequenceconnexin/anti-connexinpeptidesequence42GluSerValTrpGlyAspGluLysSerSerPheIle15104312PRTArtificialSequenceDescriptionofArtificialSequenceconnexin/anti-connexinpeptidesequence43IleCysAsnThrLeuGlnProGlyCysAsnSerVal15104412PRTArtificialSequenceDescriptionofArtificialSequenceconnexin/anti-connexinpeptidesequence44SerValCysTyrAspHisPhePheProIleSerHis15104525PRTArtificialSequenceDescriptionofArtificialSequenceconnexin/anti-connexinpeptidesequence45ArgLeuValLysCysGluAlaPheProCysProAsnThrValAspCys151015PheValSerArgProThrGluLysThr20254612PRTArtificialSequenceDescriptionofArtificialSequenceconnexin/anti-connexinpeptidesequence46ValLysCysGluAlaPheProCysProAsnThrVal15104712PRTArtificialSequenceDescriptionofArtificialSequenceconnexin/anti-connexinpeptidesequence47ValAspCysPheValSerArgProThrGluLysThr15104813PRTArtificialSequenceDescriptionofArtificialSequenceconnexin/anti-connexinpeptidesequence48ValCysTyrAspHisPhePheProIleSerHisValArg15104918PRTArtificialSequenceDescriptionofArtificialSequenceconnexin/anti-connexinpeptidesequence49ValTrpGlyAspGluLysSerSerPheIleCysAsnThrLeuGlnProGlyTyr1510155015PRTArtificialSequenceDescriptionofArtificialSequenceconnexin/anti-connexinpeptidesequence50AspGluLysSerSerPheIleCysAsnThrLeuGlnProGlyTyr1510155111PRTArtificialSequenceDescriptionofArtificialSequenceconnexin/anti-connexinpeptidesequence51SerArgProThrGluLysThrValPheThrVal1510527PRTArtificialSequenceDescriptionofArtificialSequenceconnexin/anti-connexinpeptidesequence52SerArgProThrGluLysThr155313PRTArtificialSequenceDescriptionofArtificialSequenceconnexin/anti-connexinpeptidesequence53ValCysTyrAspLysSerPheProIleSerHisValArg15105411PRTArtificialSequenceDescriptionofArtificialSequenceconnexin/anti-connexinpeptidesequence54SerArgproThrGluLysThrIlePheIleIle15105512PRTArtificialSequenceDescriptionofArtificialSequenceconnexin/anti-connexinpeptidesequence55IleCysAsnThrLeuGlnProGlyCysAsnSerVal15105616PRTArtificialSequenceDescriptionofArtificialSequenceconnexin/anti-connexinpeptidesequence56PheLeuAspThrLeuHisValCysArgArgSerProCysProHisPro1510155716PRTArtificialSequenceDescriptionofArtificialSequenceconnexin/anti-connexinpeptidesequence57SerLeuSerAlaValTyrThrCysLysArgAspProCysProHisGln1510155813PRTArtificialSequenceDescriptionofArtificialSequenceconnexin/anti-connexinpeptidesequence58ValCysTyrAspLysSerPheProIleSerHisValArg15105911PRTArtificialSequenceDescriptionofArtificialSequenceconnexin/anti-connexinpeptidesequence59SerArgProThrGluLysThrIlePheIleIle15106018PRTArtificialSequenceDescriptionofArtificialSequenceconnexin/anti-connexinpeptidesequence60LysArgAspProCysHisGlnValAspCysPheLeuSerArgProThrGluLys1510156111PRTArtificialSequenceDescriptionofArtificialSequenceconnexin/anti-connexincontrolpeptidesequence61SerArgGlyGlyGluLysAsnValPheIleVal151062396PRTHomosapiensConnexin4562MetSerTrpSerPheLeuThrArgLeuLeuGluGluIleHisAsnHis151015SerThrPheValGlyLysIleTrpLeuThrValLeuIleValPheArg202530IleValLeuThrAlaValGlyGlyGluSerIleTyrTyrAspGluGln354045SerLysPheValCysAsnThrGluGlnProGlyCysGluAsnValCys505560TyrAspAlaPheAlaProLeuSerHisValArgPheTrpValPheGln65707580IleIleLeuValAlaThrProSerValMetTyrLeuGlyTyrAlaIle859095HisLysIleAlaLysMetGluHisGlyGluAlaAspLysLysAlaAla100105110ArgSerLysProTyrAlaMetArgTrpLysGlnHisArgAlaLeuGlu115120125GluThrGluGluAspAsnGluGluAspProMetMetTyrProGluMet130135140GluLeuGluSerAspLysGluAsnLysGluGlnSerGlnProLysPro145150155160LysHisAspGlyArgArgArgIleArgGluAspGlyLeuMetLysIle165170175TyrValLeuGlnLeuLeuAlaArgThrValPheGluValGlyPheLeu180185190IleGlyGlnTyrPheLeuTyrGlyPheGlnValHisProPheTyrVal195200205CysSerArgLeuProCysProHisLysIleAspCysPheIleSerArg210215220ProThrGluLysThrIlePheLeuLeuIleMetTyrGlyValThrGly225230235240LeuCysLeuLeuLeuAsnIleTrpGluMetLeuHisLeuGlyPheGly245250255ThrIleArgAspSerLeuAsnSerLysArgArgGluLeuGluAspPro260265270GlyAlaTyrAsnTyrProPheThrTrpAsnThrProSerAlaProPro275280285GlyTyrAsnIleAlaValLysProAspGlnIleGlnTyrThrGluLeu290295300SerAsnAlaLysIleAlaTyrLysGlnAsnLysAlaAsnThrAlaGln305310315320GluGlnGlnTyrGlySerHisGluGluAsnLeuProAlaAspLeuGlu325330335AlaLeuGlnArgGluIleArgMetAlaGlnGluArgLeuAspLeuAla340345350ValGlnAlaTyrSerHisGlnAsnAsnProHisGlyProArgGluLys355360365LysAlaLysValGlySerLysAlaGlySerAsnLysSerThrAlaSer370375380SerLysSerGlyAspGlyLysAsnSerValTrpIle38539039563382PRTHomosapiensConnexin4363MetGlyAspTrpSerAlaLeuGlyLysLeuLeuAspLysValGlnAla151015TyrSerThrAlaGlyGlyLysValTrpLeuSerValLeuPheIlePhe202530ArgIleLeuLeuLeuGlyThrAlaValGluSerAlaTrpGlyAspGlu354045GlnSerAlaPheArgCysAsnThrGlnGlnProGlyCysGluAsnVal505560CysTyrAspLysSerPheProIleSerHisValArgPheTrpValLeu65707580GlnIleIlePheValSerValProThrLeuLeuTyrLeuAlaHisVal859095PheTyrValMetArgLysGluGluLysLeuAsnLysLysGluGluGlu100105110LeuLysValAlaGlnThrAspGlyValAsnValAspMetHisLeuLys115120125GlnIleGluIleLysLysPheLysTyrGlyIleGluGluHisGlyLys130135140ValLysMetArgGlyGlyLeuLeuArgThrTyrIleIleSerIleLeu145150155160PheLysSerIlePheGluValAlaPheLeuLeuIleGlnTrpTyrIle165170175TyrGlyPheSerLeuSerAlaValTyrThrCysLysArgAspProCys180185190ProHisGlnValAspCysPheLeuSerArgProThrGluLysThrIle195200205PheIleIlePheMetLeuValValSerLeuValSerLeuAlaLeuAsn210215220IleIleGluLeuPheTyrValPhePheLysGlyValLysAspArgVal225230235240LysGlyLysSerAspProTyrHisAlaThrSerGlyAlaLeuSerPro245250255AlaLysAspCysGlySerGlnLysTyrAlaTyrPheAsnGlyCysSer260265270SerProThrAlaProLeuSerProMetSerProProGlyTyrLysLeu275280285ValThrGlyAspArgAsnAsnSerSerCysArgAsnTyrAsnLysGln290295300AlaSerGluGlnAsnTrpAlaAsnTyrSerAlaGluGlnAsnArgMet305310315320GlyGlnAlaGlySerThrIleSerAsnSerHisAlaGlnProPheAsp325330335PheProAspAspAsnGlnAsnSerLysLysLeuAlaAlaGlyHisGlu340345350LeuGlnProLeuAlaIleValAspGlnArgProSerSerArgAlaSer355360365SerArgAlaSerSerArgProArgProAspAspLeuGluIle37037538064226PRTHomosapiensConnexin2664MetAspTrpGlyThrLeuGlnThrIleLeuGlyGlyValAsnLysHis151015SerThrSerIleGlyLysIleTrpLeuThrValLeuPheIlePheArg202530IleMerIleLeuValValAlaAlaLysGluValTrpGlyAspGluGln354045AlaAspPheValCysAsnThrLeuGlnProGlyCysLysAsnValCys505560TyrAspHisTyrPheProIleSerHisIleArgLeuTrpAlaLeuGln65707580LeuIlePheValSerThrProAlaLeuLeuValAlaMetHisValAla859095TyrArgArgHisGluLysLysArgLysPheIleLysGlyGluIleLys100105110SerGluPheLysAspIleGluGluIleLysThrGlnLysValArgIle115120125GluGlySerLeuTrpTrpThrTyrThrSerSerIlePhePheArgVal130135140IlePheGluAlaAlaPheMetTyrValPheTyrValMetTyrAspGly145150155160PheSerMetGlnArgLeuValLysCysAsnAlaTrpProCysProAsn165170175ThrValAspCysPheValSerArgProThrGluLysThrValPheThr180185190ValPheMetIleAlaValSerGlyIleCysIleLeuLeuAsnValThr195200205GluLeuCysTyrLeuLeuIleArgTyrCysSerGlyLysSerLysLys210215220ProVal22565266PRTHomosapiensConnexin3065MetAsnTrpAlaPheLeuGlnGlyLeuLeuSerGlyValAsnLysTyr151015SerThrValLeuSerArgIleTrpLeuSerValValPheIlePheArg202530ValLeuValTyrValValAlaAlaGluGluValTrpAspAspGluGln354045LysAspPheValCysAsnThrLysGlnProGlyCysProAsnValCys505560TyrAspGluPhePheProValSerHisValArgLeuTrpAlaLeuGln65707580LeuIleLeuValThrCysProSerLeuLeuValValMetHisValAla859095TyrArgGluGluArgGluArgLysHisHisLeuLysHisGlyProAsn100105110AlaProSerLeuTyrAspAsnLeuSerLysLysArgGlyGlyLeuTrp115120125TrpThrTyrLeuLeuSerLeuIlePheLysAlaAlaValAspAlaGly130135140PheLeuTyrIlePheHisArgLeuTyrLysAspTyrAspMetProArg145150155160ValValAlaCysSerValGluProCysProHisThrValAspCysTyr165170175IleSerArgProThrGluLysLysValPheThrTyrPheMetValThr180185190ThrAlaAlaIleCysIleLeuLeuAsnLeuSerGluValPheTyrLeu195200205ValGlyLysArgCysMetGluIlePheGlyProArgHisArgArgPro210215220ArgCysArgGluCysLeuProAspThrCysProProTyrValLeuSer225230235240GlnGlyGlyHisProGluAspGlyAsnSerValLeuMetLysAlaGly245250255SerAlaProValAspAlaGlyGlyTyrPro26026566273PRTHomosapiensConnexin31.166MetAsnTrpSerIlePheGluGlyLeuLeuSerGlyValAsnLysTyr151015SerThrAlaPheGlyArgIleTrpLeuSerLeuValPheIlePheArg202530ValLeuValTyrLeuValThrAlaGluArgValTrpSerAspAspHis354045LysAspPheAspCysAsnThrArgGlnProGlyCysSerAsnValCys505560PheAspGluPhePheProValSerHisValArgLeuTrpAlaLeuGln65707580LeuIleLeuValThrCysProSerLeuLeuValValMetHisValAla859095TyrArgGluValGlnGluLysArgHisArgGluAlaHisGlyGluAsn100105110SerGlyArgLeuTyrLeuAsnProGlyLysLysArgGlyGlyLeuTrp115120125TrpThrTyrValCysSerLeuValPheLysAlaSerValAspIleAla130135140PheLeuTyrValPheHisSerPheTyrProLysTyrIleLeuProPro145150155160ValValLysCysHisAlaAspProCysProAsnIleValAspCysPhe165170175IleSerLysProSerGluLysAsnIlePheThrLeuPheMetValAla180185190ThrAlaAlaIleCysIleLeuLeuAsnLeuValGluLeuIleTyrLeu195200205ValSerLysArgCysHisGluCysLeuAlaAlaArgLysAlaGlnAla210215220MetCysThrGlyHisHisProHisGlyThrThrSerSerCysLysGln225230235240AspAspLeuLeuSerGlyAspLeuIlePheLeuGlySerAspSerHis245250255ProProLeuLeuProAspArgProArgAspHisValLysLysThrIle260265270Leu67333PRTHomosapiensConnexin3767MetGlyAspTrpGlyPheLeuGluLysLeuLeuAspGlnValGlnGlu151015HisSerThrValValGlyLysIleTrpLeuThrValLeuPheIlePhe202530ArgIleLeuIleLeuGlyLeuAlaGlyGluSerValTrpGlyAspGlu354045GlnSerAspPheGluCysAsnThrAlaGlnProGlyCysThrAsnVal505560CysTyrAspGlnAlaPheProIleSerHisIleArgTyrTrpValLeu65707580GlnPheLeuPheValSerThrProThrLeuValTyrLeuGlyHisVal859095IleTyrLeuSerArgArgGluGluArgLeuArgGlnLysGluGlyGlu100105110LeuArgAlaLeuProAlaLysAspProGlnValGluArgAlaLeuAla115120125AlaValGluArgGlnMetAlaLysIleSerValAlaGluAspGlyArg130135140LeuArgIleArgGlyAlaLeuMetGlyThrTyrValAlaSerValLeu145150155160CysLysSerValLeuGluAlaGlyPheLeuTyrGlyGlnTrpArgLeu165170175TyrGlyTrpThrMetGluProValPheValCysGlnArgAlaProCys180185190ProTyrLeuValAspCysPheValSerArgProThrGluLysThrIle195200205PheIleIlePheMetLeuValValGlyLeuIleSerLeuValLeuAsn210215220LeuLeuGluLeuValHisLeuLeuCysArgCysLeuSerArgGlyMet225230235240ArgAlaArgGlnGlyGlnAspAlaProProThrGlnGlyThrSerSer245250255AspProTyrThrAspGlnValPhePheTyrLeuProValGlyGlnGly260265270ProSerSerProProCysProThrTyrAsnGlyLeuSerSerSerGlu275280285GlnAsnTrpAlaAsnLeuThrThrGluGluArgLeuAlaSerSerArg290295300ProProLeuPheLeuAspProProProGlnAsnGlyGlnLysProPro305310315320SerArgProSerSerSerAlaSerLysLysGlnTyrVal3253306835PRTArtificialSequenceDescriptionofArtificialSequenceconnexinextrcellulardomain68LysGluValTrpGlyAspGluGlnAlaAspPheValCysAsnThrLeu151015GlnProGlyCysLysAsnValCysTyrAspHisTyrPheProIleSer202530HisIleArg356935PRTArtificialSequenceDescriptionofArtificialSequenceconnexinextrcellulardomain69GlnGluValTrpGlyAspGluGlnGluAspPheValCysAsnThrLeu151015GlnProGlyCysLysAsnValCysTyrAspHisPhePheProValSer202530HisIleArg357035PRTArtificialSequenceDescriptionofArtificialSequenceconnexinextrcellulardomain70GluGluValTrpAspAspGluGlnLysAspPheValCysAsnThrLys151015GlnProGlyCysProAsnValCysTyrAspGluPhePheProValSer202530HisValArg357135PRTArtificialSequenceDescriptionofArtificialSequenceconnexinextrcellulardomain71GluArgValTrpGlyAspGluGlnLysAspPheAspCysAsnThrLys151015GlnProGlyCysThrAsnValCysTyrAspAsnTyrPheProIleSer202530AsnIleArg357235PRTArtificialSequenceDescriptionofArtificialSequenceconnexinextrcellulardomain72GluArgValTrpSerAspAspHisLysAspPheAspCysAsnThrArg151015GlnProGlyCysSerAsnValCysPheAspGluPhePheProValSer202530HisValArg357335PRTArtificialSequenceDescriptionofArtificialSequenceconnexinextrcellulardomain73GluSerValTrpGlyAspGluLysSerSerPheIleCysAsnThrLeu151015GlnProGlyCysAsnSerValCysTyrAspGlnPhePheProIleSer202530HisValArg357435PRTArtificialSequenceDescriptionofArtificialSequenceconnexinextrcellulardomain74GluSerValTrpGlyAspGluGlnSerAspPheGluCysAsnThrAla151015GlnProGlyCysThrAsnValCysTyrAspGlnAlaPheProIleSer202530HisIleArg357535PRTArtificialSequenceDescriptionofArtificialSequenceconnexinextrcellulardomain75GluSerValTrpGlyAspGluGlnSerAspPheGluCysAsnThrAla151015GlnProGlyCysThrAsnValCysTyrAspGlnAlaPheProIleSer202530HisIleArg357635PRTArtificialSequenceDescriptionofArtificialSequenceconnexinextrcellulardomain76ArgProValTyrGlnAspGluGlnGluArgPheValCysAsnThrLeu151015GlnProGlyCysAlaAsnValCysTyrAspValPheSerProValSer202530HisLeuArg357735PRTArtificialSequenceDescriptionofArtificialSequenceconnexinextrcellulardomain77GluSerAlaTrpGlyAspGluGlnSerAlaPheArgCysAsnThrGln151015GlnProGlyCysGluAsnValCysTyrAspLysSerPheProIleSer202530HisValArg357835PRTArtificialSequenceDescriptionofArtificialSequenceconnexinextrcellulardomain78GluAspValTrpGlyAspGluGlnSerAspPheThrCysAsnThrGln151015GlnProGlyCysGluAsnValCysTyrAspArgAlaPheProIleSer202530HisIleArg357935PRTArtificialSequenceDescriptionofArtificialSequenceconnexinextrcellulardomain79GluAlaIleTyrSerAspGluGlnAlaLysPheThrCysAsnThrArg151015GlnProGlyCysAspAsnValCysTyrAspAlaPheAlaProLeuSer202530HisValArg358035PRTArtificialSequenceDescriptionofArtificialSequenceconnexinextrcellulardomain80GluSerSerTrpGlyAspGluGlnAlaAspPheArgCysAspThrIle151015GlnProGlyCysGlnAsnValCysThrAspGlnAlaPheProIleSer202530HisIleArg358136PRTArtificialSequenceDescriptionofArtificialSequenceconnexinextrcellulardomain81GlyGluSerIleTyrTyrAspGluGlnSerLysPheValCysAsnThr151015GluGlnProGlyCysGluAsnValCysTyrAspAlaPheAlaProLeu202530SerHisValArg358239PRTArtificialSequenceDescriptionofArtificialSequenceconnexinextrcellulardomain82MetTyrValPheTyrValMetTyrAspGlyPheSerMetGlnArgLeu151015ValLysCysAsnAlaTrpProCysProAsnThrValAspCysPheVal202530SerArgProThrGluLysThr358339PRTArtificialSequenceDescriptionofArtificialSequenceconnexinextrcellulardomain83MetTyrValPheTyrPheLeuTyrAsnGlyTyrHisLeuProTrpVal151015LeuLysCysGlyIleAspProCysProAsnLeuValAspCysPheIle202530SerArgProThrGluLysThr358439PRTArtificialSequenceDescriptionofArtificialSequenceconnexinextrcellulardomain84LeuTyrIlePheHisArgLeuTyrLysAspTyrAspMetProArgVal151015ValAlaCysSerValGluProCysProHisThrValAspCysTyrIle202530SerArgProThrGluLysLys358540PRTArtificialSequenceDescriptionofArtificialSequenceconnexinextrcellulardomain85LeuTyrLeuLeuHisThrLeuTrpHisGlyPheAsnMetProArgLeu151015ValGlnCysAIaAsnValAlaProCysProAsnIleValAspCysTyr202530IleAlaArgProThrGluLysLys35408639PRTArtificialSequenceDescriptionofArtificialSequenceconnexinextrcellulardomain86LeuTyrValPheHisSerPheTyrProLysTyrIleLeuProProVal151015ValLysCysHisAlaAspProCysProAsnIleValAspCysPheIle202530SerLysProSerGluLysAsn358739PRTArtificialSequenceDescriptionofArtificialSequenceconnexinextrcellulardomain87MetTyrValPheTyrLeuLeuTyrProGlyTyrAlaMetValArgLeu151015ValLysCysAspValTyrProCysProAsnThrValAspCysPheVal202530SerArgProThrGluLysThr358832PRTArtificialSequenceDescriptionofArtificialSequenceconnexinextrcellulardomain88LeuTyrGlyTrpThrMetGluProValPheValCysGlnArgAlaPro151015CysProTyrLeuValAspCysPheValSerArgProThrGluLysThr2025308932PRTArtificialSequenceDescriptionofArtificialSequenceconnexinextrcellulardomain89LeuTyrGlyTrpThrMetGluProValPheValCysGlnArgAlaPro151015CysProTyrLeuValAspCysPheValSerArgProThrGluLysThr2025309038PRTArtificialSequenceDescriptionofArtificialSequenceconnexinextrcellulardomain90GlyAlaLeuHisTyrPheLeuPheGlyPheLeuAlaProLysLysPhe151015ProCysThrArgProProCysThrGlyValValAspCysTyrValSer202530ArgProThrGluLysSer359138PRTArtificialSequenceDescriptionofArtificialSequenceconnexinextrcellulardomain91LeuLeuIleGlnTrpTyrIleTyrGlyPheSerLeuSerAlaValTyr151015ThrCysLysArgAspProCysProHisGlnValAspCysPheLeuSer202530ArgProThrGluLysThr359238PRTArtificialSequenceDescriptionofArtificialSequenceconnexinextrcellulardomain92IleAlaGlyGlnTyrPheLeuTyrGlyPheGluLeuLysProLeuTyr151015ArgCysAspArgTrpProCysProAsnThrValAspCysPheIleSer202530ArgProThrGluLysThr359338PRTArtificialSequenceDescriptionofArtificialSequenceconnexinextrcellulardomain93LeuValGlyGlnTyrLeuLeuTyrGlyPheGluValArgProPhePhe151015ProCysSerArgGlnProCysProHisValValAspCysPheValSer202530ArgProThrGluLysThr359438PRTArtificialSequenceConnexinextracellulardomain94IleValGlyGlnTyrPheIleTyrGlyIlePheLeuThrThrLeuHis151015ValCysArgArgSerProCysProHisProValAsnCysTyrValSer202530ArgProThrGluLysAsn359538PRTArtificialSequenceArtificialSequenceConnexinextracellulardomain95LeuIleGlyGlnTyrPheLeuTyrGlyPheGlnValHisProPheTyr151015ValCysSerArgLeuProCysHisProLysIleAspCysPheIleSer202530ArgProThrGluLysThr359642PRTArtificialSequenceArtificialSequenceConnexinextracellulardomain96LeuLeuIleGlnTrpTyrIleTyrGlyPheSerLeuSerAlaValTyr151015ThrCysLysArgAspProCysProHisGlnValAspCysPheLeuSer202530ArgProThrGluLysThrIlePheIleIle35409743PRTArtificialSequenceArtificialSequenceConnexinextracellulardomain97MetTyrValPheTyrValMetTyrAspGlyPheSerMetGlnArgLeu151015ValLysCysAsnAlaTrpProCysProAsnThrValAspCysPheVal202530SerArgProThrGluLysThrValPheThrVal35409843PRTArtificialSequenceArtificialSequenceConnexinextracellulardomain98MetTyrValPheTyrPheLeuTyrAsnGlyTyrHisLeuProTrpVal151015LeuLysCysGlyIleAspProCysProAsnLeuValAspCysPheIle202530SerArgProThrGluLysThrValPheThrIle35409943PRTArtificialSequenceArtificialSequenceConnexinextracellulardomain99LeuTyrIlePheHisArgLeuTyrLysAspTyrAspMetProArgVal151015ValAlaCysSerValGluProCysProHisThrValAspCysTyrIle202530SerArgProThrGluLysLysValPheThrTyr354010044PRTArtificialSequenceArtificialSequenceConnexinextracellulardomain100LeuTyrLeuLeuHisThrLeuTrpHisGlyPheAsnMetProArgLeu151015ValGlnCysAlaAsnValAlaProCysProAsnIleValAspCysTyr202530IleAlaArgProThrGluLysLysIlePheThrTyr354010143PRTArtificialSequenceArtificialSequenceConnexinextracellulardomain101LeuTyrValPheHisSerPheTyrProLysTyrIleLeuProProVal151015ValLysCysHisAlaAspProCysProAsnIleValAspCysPheIle202530SerLysProSerGluLysAsnIlePheThrLeu354010243PRTArtificialSequenceArtificialSequenceConnexinextracellulardomain102MetTyrValPheTyrLeuLeuTyrProGlyTyrAlaMetValArgLeu151015ValLysCysAspValTyrProCysProAsnThrValAspCysPheVal202530SerArgProThrGluLysThrValPheThrVal354010336PRTArtificialSequenceArtificialSequenceConnexinextracellulardomain103LeuTyrGlyTrpThrMetGluProValPheValCysGlnArgAlaPro151015CysProTyrLeuValAspCysPheValSerArgProThrGluLysThr202530IlePheIleIle3510436PRTArtificialSequenceArtificialSequenceConnexinextracellulardomain104LeuTyrGlyTrpThrMetGluProValPheValCysGlnArgAlaPro151015CysProTyrLeuValAspCysPheValSerArgProThrGluLysThr202530IlePheIleIle3510542PRTArtificialSequenceArtificialSequenceConnexinextracellulardomain105GlyAlaLeuHisTyrPheLeuPheGlyPheLeuAlaProLysLysPhe151015ProCysThrArgProProCysThrGlyValValAspCysTyrValSer202530ArgProThrGluLysSerLeuLeuMetLeu354010642PRTArtificialSequenceArtificialSequenceConnexinextracellulardomain106IleAlaGlyGlnTyrPheLeuTyrGlyPheGluLeuLysProLeuTyr151015ArgCysAspArgTrpProCysProAsnThrValAspCysPheIleSer202530ArgProThrGluLysThrIlePheIleIle354010742PRTArtificialSequenceArtificialSequenceConnexinextracellulardomain107LeuValGlyGlnTyrLeuLeuTyrGlyPheGluValArgProPhePhe151015ProCysSerArgGlnProCysProHisValValAspCysPheValSer202530ArgProThrGluLysThrValPheLeuLeu354010842PRTArtificialSequenceArtificialSequenceConnexinextracellulardomain108IleValGlyGlnTyrPheIleTyrGlyIlePheLeuThrThrLeuHis151015ValCysArgArgSerProCysProHisProValAsnCysTyrValSer202530ArgProThrGluLysAsnValPheIleVal354010942PRTArtificialSequenceArtificialSequenceConnexinextracellulardomain109LeuIleGlyGlnTyrPheLeuTyrGlyPheGlnValHisProPheTyr151015ValCysSerArgLeuProCysHisProLysIleAspCysPheIleSer202530ArgProThrGluLysThrIlePheLeuLeu354011045PRTArtificialSequenceArtificialSequenceConnexindomain110LeuGlyThrAlaAlaGluSerSerTrpGlyAspGluGlnAlaAspPhe151015ArgCysAspThrIleGlnProGlyCysGlnAsnValCysThrAspGln202530AlaPheProIleSerHisIleArgPheTrpValLeuGln35404511114PRTArtificialSequenceArtificialSequenceConnexindomain111LeuGlyThrAlaAlaGluSerSerTrpGlyAspGluGlnAla151011213PRTArtificialSequenceArtificialSequenceConnexindomain112AspGluGlnAlaAspPheArgCysAspThrIleGlnPro151011313PRTArtificialSequenceArtificialSequenceConnexindomain113ThrIleGlnProGlyCysGlnAsnValCysThrAspGln1510210>11413PRTArtificialSequenceArtificialSequenceConnexindomain114ValCysThrAspGlnAlaPheProIleSerHisIleArg151011513PRTArtificialSequenceArtificialSequenceConnexindomain115AlaPheProIleSerHisIleArgPheTrpValLeuGln151011647PRTArtificialSequenceArtificialSequenceConnexindomain116MetGluValGlyPheIleValGlyGlnTyrPheIleTyrGlyIlePhe151015LeuThrThrLeuHisValCysArgArgSerProCysProHisProVal202530AsnCysTyrValSerArgProThrGluLysAsnValPheIleVal35404511711PRTArtificialSequenceArtificialSequenceConnexindomain117MetGluValGlyPheIleValGlyGlnTyrPhe151011812PRTArtificialSequenceArtificialSequenceConnexindomain118IleValGlyGlnTyrPheIleTyrGlyIlePheLeu151011914PRTArtificialSequenceArtificialSequenceConnexindomain119GlyIlePheLeuThrThrLeuHisValCysArgArgSerPro151012012PRTArtificialSequenceArtificialSequenceConnexindomain120ArgArgSerProCysProHisProValAsnCysTyr151012146PRTArtificialSequenceArtificialSequenceConnexindomain121LeuThrAlaValGlyGlyGluSerIleTyrTyrAspGluGlnSerLys151015PheValCysAsnThrGluGlnProGlyCysGluAsnValCysTyrAsp202530AlaPheAlaProLeuSerHisValArgPheTrpValPheGln35404512215PRTArtificialSequenceArtificialSequenceConnexindomain122LeuThrAlaValGlyGlyGluSerIleTyrTyrAspGluGlnSer15101512313PRTArtificialSequenceArtificialSequenceConnexindomain123AspGluGlnSerLysPheValCysAsnThrGluGlnPro151012413PRTArtificialSequenceArtificialSequenceConnexindomain124ThrGluGlnProGlyCysGluAsnValCysTyrAspAla151012513PRTArtificialSequenceArtificialSequenceConnexindomain125ValCysTyrAspAlaPheAlaProLeuSerHisValArg151012612PRTArtificialSequenceArtificialSequenceConnexindomain126AlaProLeuSerHisValArgPheTrpValPheGln151012747PRTArtificialSequenceArtificialSequenceConnexindomain127PheGluValGlyPheLeuIleGlyGlnTyrPheLeuTyrGlyPheGln151015ValHisProPheTyrValCysSerArgLeuProCysHisProLysIle202530AspCysPheIleSerArgProThrGluLysThrIlePheLeuLeu35404512811PRTArtificialSequenceArtificialSequenceConnexindomain128PheGluValGlyPheLeuIleGlyGlnTyrPhe151012912PRTArtificialSequenceArtificialSequenceConnexindomain129LeuIleGlyGlnTyrPheLeuTyrGlyPheGlnVal151013014PRTArtificialSequenceArtificialSequenceConnexindomain130GlyPheGlnValHisProPheTyrValCysSerArgLeuPro151013112PRTArtificialSequenceArtificialSequenceConnexindomain131SerArgLeuProCysHisProLysIleAspCysPhe1510權利要求1.一種用於治療血管紊亂的方法，包括以能夠調節與所述血管紊亂相關的組織中的連接蛋白半通道的量給予受治者抗-連接蛋白化合物。2.一種用於治療受治者的炎性紊亂的方法，包括給予所述受治者治療上有效量的抗-連接蛋白化合物，所述抗-連接蛋白化合物能夠抑制連接蛋白半通道的表達、形成或活性。3.一種用於與移植或植入操作聯合治療受治者的方法，包括以能夠抑制連接蛋白半通道的表達、形成或活性的量給予所述受治者抗-連接蛋白化合物。4.一種治療創傷的方法，包括給予所述創傷能夠抑制連接蛋白半通道的表達、形成或活性的抗-連接蛋白結合蛋白。5.根據權利要求4所述的方法，其中改善與所述移植或植入操作相關的組織水腫。6.根據權利要求1至4中任一項所述的方法，其中使用擬肽。7.根據權利要求1至3中任一項所述的方法，其中所述抗-連接蛋白化合物是選自由反義寡核苷酸、反義多核苷酸、脫氧核酶、嗎啉代寡核苷酸、RNAi分子、siRNA分子、PNA分子、DNA酶和5』末端突變的U1小核RNA，以及前述物質的類似物組成的組中的反義化合物。8.根據權利要求1所述的方法，其中一次給予所述抗-連接蛋白化合物。9.根據權利要求1所述的方法，其中所述半通道的調節包括抑制胞外半通道通訊。10.根據權利要求1至4中任一項所述的方法，其中所述抗-連接蛋白化合物是包含對應於連接蛋白43的部分跨膜區域的胺基酸序列的肽。11.根據權利要求10所述的方法，其中所述肽具有包含SEQIDNO62或SEQIDNO63的約5至約20個連續胺基酸的胺基酸序列。12.根據權利要求10所述的方法，其中所述肽具有包含SEQIDNO62或SEQIDNO63的約8至約15個連續胺基酸的胺基酸序列。13.根據權利要求10所述的方法，其中所述肽具有包含SEQIDNO62或SEQIDNO63的約11至約13個連續胺基酸的胺基酸序列。14.根據權利要求1至4中任一項所述的方法，其中所述抗-連接蛋白化合物是包含對應於所給予的連接蛋白45的部分跨膜區域的胺基酸序列的肽。15.根據權利要求14所述的方法，其中所述肽具有包含SEQIDNO62或SEQIDNO63的約5至約20個連續胺基酸的胺基酸序列。16.根據權利要求14所述的方法，其中所述肽具有包含SEQIDNO62或SEQIDNO63的約8至約15個連續胺基酸的胺基酸序列。17.根據權利要求14所述的方法，其中所述肽具有包含SEQIDNO62或SEQIDNO63的約11至約13個連續胺基酸的胺基酸序列。18.根據權利要求1至4中任一項所述的方法，其中內皮細胞中的半通道的表達、形成或活性被抑制。19.根據權利要求1所述的方法，其中所述血管紊亂是中風。20.根據權利要求1所述的方法，其中血管萎縮被改善。21.根據權利要求1所述的方法，其中血管破壞被改善。22.根據權利要求1所述的方法，其中所述血管紊亂是中樞神經系統損傷。23.根據權利要求1所述的方法，其中所述血管紊亂包括局部缺血。24.根據權利要求23所述的方法，其中所述局部缺血是組織缺血。25.根據權利要求23所述的方法，其中所述局部缺血是心肌缺血。26.根據權利要求23所述的方法，其中所述局部缺血是腦缺血。27.根據權利要求1所述的方法，其中所述受治者處於由於局部缺血而喪失神經功能的危險中。28.根據權利要求1所述的方法，其中由局部缺血導致的中樞或周圍神經系統中的細胞死亡或變性被改善。29.根據權利要求1所述的方法，其中所述抗-連接蛋白化合物聯合在受治者上實施的血管或冠脈操作加以給予。30.根據權利要求29所述的方法，其中所述抗-連接蛋白化合物是在所述血管或冠脈操作過程中給予的。31.根據權利要求29所述的方法，其中所述抗-連接蛋白化合物是在所述血管或冠脈操作後約1小時內給予的。32.根據權利要求29所述的方法，其中所述抗-連接蛋白化合物是在所述血管或冠脈操作後約2至24小時內給予的。33.根據權利要求1所述的方法，其中所述抗-連接蛋白化合物聯合在受治者上實施的心臟外科手術加以給予。34.根據權利要求1所述的方法，其中所述抗-連接蛋白化合物聯合用於實施血管操作的醫學裝置加以給予。35.根據權利要求1所述的方法，其中所述反義化合物包含選自EQIDNO1-11的核酸鹼基序列。36.根據權利要求1所述的方法，其中所述連接蛋白靶選自由連接蛋白45、43、26、37、30和31.1組成的組。37.根據權利要求1所述的方法，其中所述連接蛋白靶是連接蛋白45。38.根據權利要求1所述的方法，其中所述連接蛋白靶是連接蛋白43。39.根據權利要求1所述的方法，其中所述抗-連接蛋白化合物是反義化合物，所述反義化合物靶向編碼具有選自SEQIDNO12-31的核酸鹼基序列的連接蛋白的核酸分子的至少約8個核酸鹼基。40.根據權利要求39所述的方法，其中所述反義化合物是長度在約15至約35個核酸鹼基之間的反義寡核苷酸。41.根據權利要求1所述的方法，其中所述抗-連接蛋白化合物是反義化合物，所述反義化合物靶向編碼具有選自SEQIDNO12-31的核酸鹼基序列的連接蛋白的核酸分子的至少約12個核酸鹼基。42.根據權利要求1所述的方法，其中所述抗-連接蛋白化合物是包含選自SEQIDNO1-11的核酸鹼基序列的反義化合物。43.根據權利要求1所述的方法，其中所述抗-連接蛋白化合物是包含天然核酸鹼基和未修飾的核苷間鍵的反義寡核苷酸。44.根據權利要求1所述的方法，其中所述抗-連接蛋白化合物是包含至少一個修飾的核苷間鍵的反義寡核苷酸。45.根據權利要求44所述的方法，其中所述修飾的核苷間鍵是硫代磷酸酯鍵。46.根據權利要求1所述的方法，其中所述抗-連接蛋白化合物是包括包含至少一個修飾的糖部分的寡核苷酸的反義化合物。47.根據權利要求1所述的方法，其中所述抗-連接蛋白化合物是包括包含至少一個修飾的核酸鹼基的寡核苷酸的反義化合物。48.根據權利要求1所述的方法，其中所述抗-連接蛋白化合物連同對於減少組織損傷或促進癒合有用的第二化合物加以給予。49.根據權利要求48所述的方法，其中所述第二化合物是生長因子或細胞因子。50.根據權利要求49所述的方法，其中所述生長因子或細胞因子選自由FGF、NGF、NT3、PDGF、TGF、VEGF、BDGF、EGF、KGF，纖溶酶、整聯蛋白、白細胞介素和信號素組成的組。51.一種用於聯合心臟手術給藥的藥物製劑，所述製劑包含能夠阻斷連接蛋白半通道的試劑和對於經歷心臟手術的受治者的藥學上可接受的試劑。52.根據權利要求1所述的方法，其中所述連接蛋白半通道調節抑制來自具有所述半通道的細胞的細胞質的分子到胞外空間中的傳遞。53.根據權利要求1所述的方法，其中所述血管紊亂是在導致組織損傷的中風之後發生的。54.根據權利要求1所述的方法，其中所述抗-連接蛋白化合物是全身性給予所述受治者的。55.根據權利要求1所述的方法，其中所述抗-連接蛋白化合物是靜脈內給予所述受治者的。56.根據權利要求1所述的方法，其中所述抗-連接蛋白化合物是關節內給予所述受治者的。57.根據權利要求1所述的方法，其中所述抗-連接蛋白化合物是關節周圍給予所述受治者的。58.根據權利要求1所述的方法，其中所述抗-連接蛋白化合物是門脈內給予所述受治者的。59.根據權利要求1所述的方法，其中所述抗-連接蛋白化合物直接給予到所述受治者的器官中。60.根據權利要求1所述的方法，其中所述抗-連接蛋白化合物給予到所述受治者的腦脊液(ICSF)中。61.根據權利要求1所述的方法，其中所述抗-連接蛋白化合物給予到所述受治者的腦脊液(ICSF)中。62.根據權利要求1所述的方法，其中所述抗-連接蛋白化合物是顱內給予所述受治者的。63.根據權利要求1所述的方法，其中所述抗-連接蛋白化合物給予到所述受治者的脊髓中。64.根據權利要求1所述的方法，其中所述抗-連接蛋白化合物直接給予到所述受治者的心臟中。65.根據權利要求1所述的方法，其中所述抗-連接蛋白化合物以推注劑量給予。66.根據權利要求1所述的方法，其中所述抗-連接蛋白化合物通過持續遞送加以給予。67.根據權利要求1所述的方法，其中存在局部缺血，並且其中所述抗-連接蛋白化合物是在局部缺血後給予至少達72小時。68.根據權利要求1所述的方法，其中所述血管紊亂選自由缺血性中風、短暫性腦缺血發作、腦內出血、蛛網膜下腔出血、血栓性中風、靜脈血栓、肺栓塞、栓子性中風、腦血管疾病、外周動脈硬化閉合性疾病、動靜脈畸形和動脈瘤組成的組。69.根據權利要求1所述的方法，其中所述血管紊亂與以下疾病中的一種或多種有關冠心病、冠狀動脈紊亂、動脈粥樣硬化血管疾病、動脈粥樣硬化斑塊破裂和/或血栓、與高血壓有關的血管紊亂、心肌梗死、心絞痛、缺血性心臟病、大動脈紊亂、下肢外周動脈疾病、纖維肌性發育不良、煙霧病或血栓性脈管炎。70.根據權利要求2所述的方法，其中所述炎性紊亂選自由關節炎、風溼性關節炎(RA)、炎症、關節破壞或損害、炎性紊亂、Grave’s病、橋本病、風溼性關節炎、系統性紅斑狼瘡、乾燥症候群、免疫性血小板減少性紫癜、多發性硬化症、重症肌無力、硬皮病、牛皮癬、腸炎、克隆氏病、潰瘍性結腸炎、膿毒症和膿毒性休克、以及消化系統的自身免疫性疾病組成的組。71.根據權利要求1或4所述的方法，其中所述受治者患有以下疾病中的一種或多種凝血、血栓形成、纖維蛋白溶解、心血管疾病、糖尿病、影響心臟的內分泌紊亂、與懷孕相關的心血管疾病、風溼熱、與HIV感染相關的心血管紊亂、與心臟疾病相關的血液學和腫瘤學紊亂、與心臟疾病相關的神經性紊亂、以及與心臟疾病相關的腎臟紊亂。72.根據權利要求4所述的方法，其中所述受治者通過與以下疾病相關的移植或植入操作進行治療心力衰竭、先天性心臟病、兒童的後天性心臟病、瓣膜心臟病、感染性心內膜炎、心肌失效症、心臟腫瘤、心包性心臟病、外傷性心臟病、肺部栓塞、肺部高血壓、肺源性心臟病、運動性心臟症候群、外周動脈循環紊亂、影響器官系統的血管紊亂、影響中樞神經系統的血管紊亂、影響大腦的血管紊亂、影響視網膜的血管紊亂、影響腎的血管紊亂、影響神經的血管紊亂、微血管紊亂，以及大血管紊亂。73.根據權利要求4所述的方法，其中所述受治者通過與選自心臟移植、腎移植、肝移植、肺移植、胰腺移植、腸移植、或組合器官移植中的一種或多種相關的移植或植入操作進行治療。74.根據權利要求4所述的方法，其中所述受治者通過包括眼組織、皮膚、心臟瓣膜、骨、肌腱、靜脈、韌帶、骨髓移植物、牙齒或牙齦組織、與整形手術相關的移植或植入、與髖或關節替代操作有關的移植或植入、以及涉及幹細胞的組織移植或植入中的一種或多種的移植或植入操作進行治療。75.一種用於治療患有血管紊亂的受治者的抗-連接蛋白擬肽。76.一種用於治療患有炎性紊亂的受治者的連接蛋白的抗-連接蛋白擬肽。77.一種用於治療受治者以抑制或阻止與移植或植入操作相關的組織水腫的連接蛋白的抗-連接蛋白擬肽。全文摘要本發明提供了用於調節連接蛋白活性的方法和組合物，包括，例如，在治療心血管、血管、神經學方面的應用，在創傷以及其它適應症方面的應用。這些化合物和方法可以在治療上，例如用於降低與疾病和紊亂相關的不良作用的嚴重性，其中需要局部中斷直接的細胞間通訊或者防止半通道打開。文檔編號A61K38/10GK101573131SQ200680010590公開日2009年11月4日申請日期2006年2月3日優先權日2005年2月3日發明者科林·R·格林,戴維·L·貝克爾申請人:科達治療有限公司