用作半胱氨酸活性依賴性酶抑制劑的噻二唑化合物的製作方法

2023-10-05 07:24:04

專利名稱：用作半胱氨酸活性依賴性酶抑制劑的噻二唑化合物的製作方法
技術領域：
本發明涉及通過抑制半胱氨酸蛋白酶和半胱氨酸活性依賴性酶用於治療痤瘡、感冒、炎性關節病的新化合物及其可藥用的酸加成鹽和鹼加成鹽。本發明尤其涉及具有藥物實用性的新化合物，涉及它們的製備方法，涉及通過抑制半胱氨酸蛋白酶和半胱氨酸活性依賴性酶治療各種疾病的組合物和應用。
背景技術：
和現有技術轉穀氨醯胺酶、鼻病毒3C蛋白酶、(需)鈣蛋白酶、β-白介素轉化酶和組織蛋白酶B都是半胱氨酸活性依賴性酶的實例，它們涉及各種病症和／或疾病，例如痤瘡、感冒和關節炎的發展。這些酶的化學結構中包括半胱氨酸殘基。據信酶中半胱氨酸殘基的巰基起親核試劑的作用，造成底物的水解，從而導致病症和／或疾病的發展。因此，為阻止疾病的發展，曾嘗試開發捕獲巰基的物質以抑制這類酶的催化活性。Hagiwara報導了1，2，4-噻二唑啉作為醇脫氫酶抑制劑(一種半胱氨酸活性依賴性酶)的用途。
美國專利5618792公開了某些3-取代的噁二唑和3-取代的噻二唑類肽，它們是絲氨酸蛋白酶抑制劑。美國專利4207090公開了作為殺蟲劑的3-三滷代甲基-[1，2，4]-噻二唑的氨基酯衍生物。美國專利5677302公開了1，2，4-噻二唑[4，5-a]苯並咪唑和咪唑並[1，2-d]-1，2，4-噻二唑作為H+／K+-ATP酶(也稱為質子泵，另一種半胱氨酸活性依賴性酶)抑制劑的用途。具有磺醯亞氨基的縮合噻二唑衍生物公開於美國專利5550138中，它們是組織蛋白酶B抑制劑。半胱氨酸蛋白酶的各種肽基抑制劑綜述於蛋白質分布(ProteinProfi1e)，1995，第2卷，問題14，第1587-1591。不走運的是，絕大多數努力都大大受挫於潛在抑制劑與其他親核試劑，例如富含於生理系統中的醇類和胺類的反應性。
開發出對半胱氨酸活性依賴性酶的半胱氨酸殘基上的巰基具有選擇性反應性的化合物代表著該本領域的巨大進步。
發明概述本發明的一個目的是提供新的藥物化合物和含有這類化合物的組合物，它們具有半胱氨酸活性依賴性酶抑制劑的活性，並因此用於治療由這類酶，尤其是人轉穀氨醯胺酶、鼻病毒3C蛋白酶和組織蛋白酶B活性引起的病症和／或疾病。
本發明的另一個目的是提供這類化合物的合成方法。
因此，本發明提供以下通式(I)化合物或其可藥用鹽，條件是Y不是三氟甲基或三氯甲基 其中Z選自基團(a)-A-W；其中A是胺基酸殘基，或者是含2-3個胺基酸殘基的肽或其等排形式並且W表示式-N(R1)2或-OR1的基團，其中R1獨立地是氫、低級烷基、低級鏈烯基、低級炔基，其中不飽和鍵與N或O原子相距至少一個碳原子；(b)-X-A-W；其中X是選自式 和 基團的間隔基並且A，W的定義同上；(c) 其中R表示氫、低級鏈烷醯基、低級環烷基羰基、低級烷氧羰基、低級芳基烷氧基羰基或N-保護基並且R1和A的定義同上；條件是在基團(a)和(b)中，A的N-末端分別是直接或是通過如上定義的間隔基X與1，2，4-噻二唑環的C5相連；並且在基團(c)中，A的羧基末端與5-氨基-1，2，4-噻二唑的氮原子直接相連；並且Y選自(1) 低級烷氧基、低級環烷氧基、低級芳烷氧基、雜環氧基和低級雜環烷氧基，其中的烷基或芳基環可任選地被1-2個取代基取代，所述取代基選自氨基、烷氧基、羥基、滷素、氨基、烷基氨基、二烷基氨基；(2) 低級烷基、低級環烷基、低級雜環烷基、雜環基、芳基、低級芳烷基、低級芳基鏈烯基、低級雜環基鏈烯基，其中的烷基或芳基環可任選地被1-2個取代基取代，所述取代基選自氨基、烷氧基、羥基、滷素、氨基、烷基氨基和二烷基氨基；(3) 低級烷氧羰基、羧基；(4) 下式的酮基 其中R2表示低級烷基、低級環烷基、低級雜環烷基、雜環基、芳基、低級芳烷基，其中其中的烷基或芳環可任選地被1-2個取代基取代，所述取代基選自氨基、烷氧基、羥基、滷素、氨基、烷基氨基、二烷基氨基；(5) 下式的氨基甲醯基 其中R2定義如上；(6) 氨基、低級烷基氨基、二低級烷基氨基；(7) 下式的醯胺基 其中R2定義如上；(8) 下式的基團 其中A定義如上並且A的羧基末端與3-氨基-1，2，4-噻二唑的氮直接相連。R和R1定義如上；(9) 下式的醇 其中R2定義如上；(10)下式的碸
其中R2定義如上；(11)下式的亞碸 其中R2定義如上；(12)下式的磺醯氨基 其中R2定義如上；(13)低級烷硫基、低級芳烷硫基、芳硫基；(14)下式的基團-CH2-A-WA定義如上，A的N末端與亞甲基直接相連並且W定義如上；(15)下式的基團-CH2-NR3R4其中R3和R4各自獨立地是烷基、芳烷基、雜環基、雜環烷基；R3和R4與N原子一起形成選自哌啶基、吡咯烷基、哌嗪基的五或六元環，哌嗪的N-4位可任選地被吡啶基、雜環基、烷基、芳烷基或芳基取代。
附圖2是式(I)化合物對IL-1誘發的新合成的蛋白聚糖的降解的降低的圖示。
優選方案描述一類優選的本發明化合物是相應於下式(II)的化合物或它們的可藥用鹽 其中A、W和Y如前述所定義。
第二類優選的本發明化合物是通式(III)的化合物或它們的可藥用鹽 其中X、A、W和Y如前述所定義。
另一類優選的本發明化合物是通式(IV)的化合物或它們的可藥用鹽 其中A、R、R1和Y如前述所定義。
雖然所有這些化合物的作用機理還未被證實，但據信本發明的3，5-二取代的1，2，4-噻二唑與所述酶的半胱氨酸殘基反應形成二硫鍵，由此抑制所述酶的活性。本發明的3，5-二取代的1，2，4-噻二唑的S-N鍵是高內能的，該高內能至少部分是源於硫原子d軌道和氮原子p軌道間的未鍵合電子的排斥作用。因此3，5-二取代的1，2，4-噻二唑可能易於親核進攻。在四十多年前就有用還原劑裂解1，2，4-噻二唑的S-N鍵的報導(Gordeler，Chem．Ber．，1954，87，57)。半胱氨酸依賴性酶的巰基可用作還原劑(親核試劑)，形成化學修飾，由此抑制酶的活性。
1，2，4-噻二唑C-5位上的Z基團被設計為引入特異性識別一種給定半胱氨酸活性依賴性酶的活性位點的識別序列，C-3位上的基團Y的設計用以通過活化相鄰的鍵調節5-取代的1，2，4-噻二唑與酶的反應性。
本發明化合物與半胱氨酸活性依賴性酶的反應性可通過它們與N-乙醯半胱氨酸的反應性進行評價。附

圖1示例了本發明的式(I)化合物與N-乙醯半胱氨酸之間的反應。第一步通過裂解1，2，4-噻二唑的S-N鍵形成二硫化物。二硫化物IX與第二種硫醇反應產生式X化合物。
本發明的化合物具有胺基酸或者肽殘基側鏈。該側鏈可與1，2，4-噻二唑的C3位或C5位相連。尤其是當本發明的單環化合物與環在5位相連時，其中的胺基酸或肽殘基側鏈的應用使得選擇對被該化合物抑制的酶具有結合親和力的適宜基團。並且，抑制劑的結合親和力可被調節以使其在最近於活性位點半胱氨酸殘基處與酶結合，最終形成二硫鍵。
在遠離-S-N=C基團的位置存在適當選擇的作為化合物側鏈的酶結合或識別基團可篩選化合物並使其與所選擇的酶結合，提高了所述酶的巰基的化學攻擊。由於存在識別性側基，具有這種性質的化合物在其進攻特異性、選定酶時具有高度選擇性，但對在生物體系中遇到的其他硫醇的反應性則低得多。
優選的本發明式(II)化合物是那些化合物，其中A是甘氨醯基、亮氨醯基-脯氨醯基和異亮氨醯基-脯氨醯基；W是-NH2或-OH；Y是低級烷基(甲基)、低級烷氧基(甲氧基、正丁氧基)、低級芳基(苯基)、肉桂基、1H-吲哚-3-基甲基、-CH2-NR3R4(其中R3和R4如前述所定義)、-CH2-A-W，其中A和W如前面所定義。
優選的本發明式(III)化合物是那些化合物，其中A是亮氨醯基、亮氨醯基-脯氨醯基和異亮氨醯基-脯氨醯基並且Z和Y定義如上。特別優選的式(III)化合物是其中Y是低級烷氧基的那些化合物。
優選的本發明式(IV)化合物是那些化合物，其中A是苯丙氨醯基、甘氨酸基，R1是H並且R如前述所定義。
優選的本發明化合物對特定的半胱氨酸活性依賴性酶表現出特異性，因此不與其他潛在的親核試劑，例如醇類或胺類進行反應。
在本文中術語「低級」，例如用於低級烷基的，是指1-8個碳原子。
術語「芳基」，在單獨或聯合使用時，均指苯基或萘基，它們可任選地帶有一個或多個選自烷基、烷氧基、滷素、羥基、和氨基等的取代基，例如苯基、對甲苯基、4-甲氧基苯基、4-(叔丁氧基)苯基、4-氟苯基、4-氯苯基、4-羥基苯基、1-萘基和2-萘基等。
術語「芳烷氧羰基」，在單獨或聯合使用時，指式-C(O)-O-芳烷基基團，其中術語「芳烷基」具有上面給出的含義。芳烷氧羰基的實例是苄氧羰基。
術語「芳烷基」是指其中一個氫原子被一個芳基替代的烷基，例如苄基、苯乙基等。
術語「芳基鏈烯基」是指其中的一個氫原子被芳基替代的鏈烯基，例如3-苯基烯丙基、2-苯基烯丙基和1-苯基烯丙基等。
術語「環烷羰基」是指由單環或橋連環烷基羧酸衍生的醯基，例如環丙羰基、環己烷羰基、金鋼烷羰基等，或者是指由苯並稠合的單環環烷基羧酸衍生物的醯基，它們可任選地被，如烷基氨基取代，例如1，2，3，4-四氫-2-萘甲醯基、2-乙醯氨基-1，2，3，4-四氫-2-萘甲醯基。
術語「芳基鏈烷醯基」是指芳基取代的鏈烷羧酸衍生的基團，例如苯乙醯基、3-苯基丙醯基、氫化肉桂醯基、4-苯丁醯基、2-萘乙醯基、4-氯氫化肉桂醯基、4-氨基氫化肉桂醯基和4-甲氧基氫化肉桂醯基等。
術語「芳醯基」是指由芳族羧酸衍生的基團。這類基團的實例包括芳族羧酸、可任選取代的苯甲酸或萘甲酸衍生的基團，例如苯甲醯基、4-氯苯甲醯基、4-羧基苯甲醯基、4-[(苄氧基)-羰基]苯甲醯基、1-萘甲醯基、2-萘甲醯基、6-羧基-2-萘甲醯基和6-[(苄氧基)甲醯氨基]-2-萘甲醯基等。
本文中採用的術語「芳環基除非另有說明，均是指穩定的5-7元單環或雙環或者穩定的7-10元雙雜環，它們可以是飽和的或不飽和的，由碳原子和一至三個選自N、O和S的雜原子組成，其中的氮和硫雜原子可任選地被氧化，氮原子可任選地被季銨化，還包括其中任何上述定義的雜環是與苯環稠合的任何雙環基團。雜環可在任何雜原子或碳原子位置相連得到穩定的結構。這類雜環單元，通常稱為雜環基的實例包括哌啶基、哌嗪基、2-氧代哌嗪基、2-氧代哌嗪基(2-oxopiper-azinyl)、2-氧代哌啶基、2-氧代吡咯烷基、2-氧代吖庚因基、吖庚因基、吡咯基、4-哌啶酮基、吡咯烷基、吡唑基、吡唑烷基、咪唑基、咪唑啉基、咪唑烷基、哌啶基、哌嗪基、嘧啶基、噠嗪基、噁唑烷基、異噁唑基、異噁唑烷基、嗎啉基、噻唑基、噻唑烷基、異噻唑基、奎寧環基、異噻唑烷基、吲哚基、喹啉基、異喹啉基、苯並咪唑基、噻二唑基、苯並吡喃基、苯並噻唑基、苯並噁唑基、呋喃基、四氫呋喃基、四氫吡喃基、噻吩基、苯並噻吩基、四氫喹啉基(如，1，2，3，4-四氫-2-喹啉基等)、1，2，3，4-四氫異喹啉基(如，1，2，3，4-四氫-1-氧代異喹啉基等)、喹喔啉基、β-咔啉基、2-苯並呋喃羰基、硫雜嗎啉基、硫雜嗎啉基亞碸、硫雜嗎啉基碸和噁二唑基等。雜環的碳原子或雜原子上可被取代，產生穩定的結構。
「胺基酸殘基」是指任何天然存在的、α-、β-和γ-氨基羧酸，包括它們的D和L光學異構體及其外消旋混合物，以及這些胺基酸的N-低級烷基和N-苯基低級烷基衍生物。胺基酸殘基通過胺基酸的氮原子或者胺基酸的羧基碳原子鍵合。可結合到本發明中的天然存在的胺基酸包括，但不限於，丙氨酸、精氨酸、天冬醯胺、天冬氨酸、半胱氨酸、半胱氨酸、穀氨酸、穀氨醯胺、甘氨酸、組氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、賴氨酸、甲硫氨酸、鳥氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、甲狀腺素、色氨酸、酪氨酸、纈氨酸、β-丙氨酸和γ-氨基丁酸。優選的胺基酸殘基包括脯氨酸、賴氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、異亮氨酸、丙氨酸、γ-氨基丁酸、纈氨酸、甘氨酸和苯基甘氨酸。
「胺基酸殘基」還包括通常已知的合成的非天然胺基酸和合理設計的擬肽，其中考慮了胺基酸殘基的H-結合元素。合成的非天然胺基酸包括胺基酸，例如4-羥基脯氨酸、0-苄基蘇氨酸、4-環己基脯氨酸、3，4，5-三甲基脯氨酸、3，4-二甲基脯氨酸、4，5-二甲基脯氨酸、4-氯苯丙氨酸、八氫吲哚-2-羧酸、八氫異喹啉-3-羧酸、哌啶基-2-羧酸、哌嗪基-2-羧酸、4-苯基脯氨酸、3-苯基脯氨酸、4-環己基脯氨酸、3-環己基脯氨酸、4-氨基脯氨酸、八氫-環戊烷[b]吡咯-2-羧酸、statone、抑胃酶氨酸(statine)、正抑胃酶氨酸(norstatine)衍生物、4-氨基-3-羥基-5-苯基戊酸、4-氨基-3-氧代-5-苯基戊酸、3-氨基-2-羥基-4-苯基丁酸、2，2-二氟抑胃酶氨酸、環己基丙氨酸和下列胺基酸 其中a表示1或2。Ra是氫、烷基、羥基、烷氧羰基氨基。
合理設計的擬肽的代表性實例如下所示 其中Rb、Rc和Rd獨立地表示氫和烷基。 除甘氨酸外，所有的α-胺基酸都包含至少一個不對稱碳原子。因此，它們是光學活性的，可以D或L構型或者以外消旋混合物形式存在。因此，本發明的有些化合物可以旋光體製備，或者以本文要求保護的化合物的外消旋混合物形式製備。
肽殘基含有肽鍵，肽鍵可在一個胺基酸的羰基官能團和另一個氨基化合物(可以是另一個胺基酸或胺)間形成。本發明的化合體可以是等排物形式的，如-CH2NH-(還原的)、-COCH2-(酮的)、-CH(OH)CH2-(羥基)、-CH(NH2)CH2-(氨基)、-CH2CH2-或者-CH2CH2CH2-(烴)。本發明化合物的等排物形式優選沒有肽的氨基甲醯基。當其等排體形式具有肽的氨基甲醯基時，其等排物形式中具有一個或兩個，優選具有一個肽鍵。
肽殘基由胺基酸殘基組成，優選由天然構型的胺基酸殘基組成。當它們是非天然構型的胺基酸時，優選僅有一個這類非天然構型的胺基酸。本文使用的胺基酸殘基包括，例如八氫吲哚-2-羧酸和羥基脯氨酸這樣的胺基酸殘基。
當術語「R」被稱為「N-保護基」是，是氨基保護基。保護基R的實例是例如公開於「有機合成中的保護基」，T．V．Greene，J．WileySons NY(1980)0 219-287中的。這些基團包括，但不限於，醯基，例如乙醯基、甲氧基琥珀醯基、羥基琥珀醯基或者苯環上可任選地被如對甲氧基羰基、對甲氧基或對硝基取代的苯甲醯基；烷氧羰基，例如叔丁氧羰基；芳基甲氧羰基，例如9-芴基甲氧羰基或苯環上可任選地被對甲氧基、對硝基、對氯或間苯基取代的苄氧羰基；芳甲基，例如芳環上可任選地被對甲氧基、對硝基或對氯取代的苄基；或者芳基磺醯基，例如可任選地被對甲基或對甲氧基取代的苯磺醯基或芳環上可任選地被例如氨基或二烷基氨基取代的萘磺醯基。
術語「芳氧基鏈烷醯基」是指式芳基-O-鏈烷醯基的醯基，術語「雜環氧羰基」是指由雜環基-O-CO-衍生的醯基，其中的雜環基定義如上。
術語「雜環基鏈烷醯基」是指由雜環基-取代的鏈烷羧酸衍生的醯基，其中的雜環基具有上面給出的含義。
術語「雜環烷氧羰基」是指由雜環基取代的烷基-O-CO-衍生物的醯基，其中的雜環基具有上面給出的含義。
術語「氨基鏈烷醯基」是指由氨基取代的鏈烷羧酸衍生的醯基，其中的氨基可以是伯、仲、叔氨基，其上可含有選自氫、和烷基、芳基、芳烷基、環烷基和環烷基烷基等的取代基。
術語「任選的」或「可任選地」是指隨後描述的事件或情況可以發生或不發生，該描述包括了所述的事件或情況發生的例子和所述事件或情況不發生的例子。例如，「可任選被取代的苯基」是指該苯基可以被取代，也可以不被取代，該描述包括了未取代的苯基和取代的苯基。
本發明的某些化合物具有手性中心，可以旋光對映體形式存在。本文描述和要求保護的本發明包括各種單獨的對映體以及它們的外消旋修飾物和外消旋混合物。
「可藥用的無毒鹽」是指本發明化合物的可藥用鹽，它們保留了母體化合物的生物活性並且在生物學或其他方面有益(例如，鹽是穩定的)。本發明的化合物可形成兩種類型的鹽(1)具有羧酸官能團的式I、II、III和IV化合物的無機鹼或有機鹼的鹽；和(2)在許多本發明化合物的胺官能團上可形成酸加成鹽。
由無機鹼衍生的可藥用鹽包括鈉鹽、鉀鹽、鋰鹽、銨鹽、鈣鹽、鎂鹽、亞鐵鹽、鋅鹽、銅鹽、二價錳鹽、鋁鹽、三價鐵鹽和三價錳鹽等。特別優選的是銨鹽、鉀鹽、鈉鹽、鈣鹽和鎂鹽。由有機鹼衍生的可藥用的無毒鹽包括伯胺、仲胺和叔胺的鹽；包括天然存在的取代胺的鹽；環胺的鹽和鹼性離子交換樹脂的鹽。這類鹽的實例有，例如異丙基胺、三甲胺、二乙胺、三乙胺、三丙基胺、乙醇胺、2-二甲氨基乙醇、氨丁三醇、二環己基胺、酪氨酸、精氨酸、組氨酸、咖啡因、普魯卡因、hydrabramine、膽鹼、甜菜鹼、亞乙基二胺、葡糖胺、甲基葡糖胺、可可鹼、嘌呤、哌嗪、哌啶、N-乙基哌啶和多胺樹脂等。特別優選的有機無毒鹼是異丙基胺、二乙胺、乙醇胺、哌啶、氨丁三醇、二環己基胺、膽鹼和咖啡因。
可藥用酸加成鹽是與無機酸和有機酸形成的鹽，無機酸是例如氫滷酸、硫酸、硝酸和磷酸等；有機酸是例如乙酸、丙酸、乙醇酸、丙酮酸、草酸、蘋果酸、丙二酸、琥珀酸、馬來酸、富馬酸、酒石酸、檸檬酸、苯甲酸、肉桂酸、苦杏仁酸、甲磺酸、乙磺酸、對甲苯磺酸和水楊酸等。
術語「動物」是指人以及其他動物，尤其是哺乳動物(如狗、貓、馬、牛、豬等)、爬行動物、魚類、昆蟲和蠕蟲。
最優選的本發明化合物是下列2-(3-甲氧基-[1，2，4]噻二唑-5-基氨基)-乙醯胺；2-(3-正丁氧基-[1，2，4]噻二唑-5-基氨基)-乙醯胺；2-[3-(3-苯基烯丙基)-[1，2，4]噻二唑-5-基氨基]-乙醯胺；2-[3-(1H-吲哚-3-基甲基)-[1，2，4]噻二唑-5-基氨基]-乙醯胺；N-(3-甲氧基-[1，2，4]噻二唑-5-基)-L-亮氨醯基-L-脯氨酸；N-(3-丁氧基-[1，2，4]噻二唑-5-基)-L-亮氨醯基-L-脯氨酸；N-(3-苯基-[1，2，4]噻二唑-5-基)-L-亮氨醯基-L-脯氨酸；N-(3-甲基-[1，2，4]噻二唑-5-基)-L-亮氨醯基-L-脯氨酸；N-(3-甲氧基-[1，2，4]噻二唑-5-基)-L-異亮氨醯基-L-脯氨酸；N，N』-{3-亞甲基-[1，2，4]噻二唑-5-基}-二-(L-亮氨醯基-L-脯氨酸甲酯)，其化學式如下 {3-[4-(2-吡啶基)哌嗪基甲基]-1，2，4-噻二唑-5-基]-亮氨醯基-脯氨酸，其化學式如下 5-(3-甲氧基-1，2，4-噻二唑基)-氨基甲醯基-亮氨醯基異戊醯胺；5-(3-甲氧基-1，2，4-噻二唑基)-氨基甲醯基-異亮氨醯基異戊醯胺；{3-甲氧基-[1，2，4]噻二唑-5-基}氨基甲醯基-L-亮氨醯基-L-脯氨酸；3-甲氧基-5-苄氧羰基-苯丙氨醯氨基-[1，2，4]-噻二唑；3，5-二-(N-苄氧羰基-L-苯丙氨醯氨基)-[1，2，4]噻二唑，其化學式如下 本發明提供製備本發明化合物的合成方法。方法的選擇很大程度上取決於最終化合物中C3和C5位上所選擇的取代基Z和Y。
式II化合物可通過式3化合物與伯胺或仲胺的反應製備。這些胺的實例是2-吡啶基哌嗪和亮氨醯基脯氨酸甲酯。該方法適於製備其中Y是低級烷基、低級烷氧基、雜環基、1-滷代烷基、芳基、二烷基氨基的化合物。 該反應通常在惰性溶劑，例如N，N-二甲基甲醯胺、四氫呋喃、二氯甲烷、乙腈、二甲亞碸中，在有或沒有鹼，例如1-3摩爾三乙胺(對於每摩爾化合物3而言)的存在下進行。這些溶劑可單獨或者按需以任何比例組合使用。反應溫度可在0-150℃範圍內進行選擇，優選為約10-65℃。反應時間通常為約1-50小時，優選1-8小時。對每摩爾化合物3的胺的用量為1-3摩爾。
式3化合物可在二氯甲烷和氫氧化鈉的兩相混合物中，於0-25℃下用全氯甲硫醇對相應的脒衍生物處理2-6小時製得。
化合物1的製備方法包括下列文獻中報導的方法美國專利3324141；《有機化學雜誌》(J．Org．Chem．)，1962，27，2589；Chem．Ber．，1957，90，182。
其中間隔基X是-NH-CO-CH2的式III化合物通過用胺N-烷基化式(4)化合物製備 化合物通過常規方法分離。化合物(4)則通過化合物(5)與溴乙醯溴在惰性溶劑，如二氯甲烷或四氫呋喃中和在鹼，如三乙胺的存在下反應製備。化合物(5)由脒(1)與硫氰酸鉀(KSCN)在鹼，例如氫氧化鈉的存在下在惰性溶劑，如丙酮和水中製備。
其中間隔基X是-NH-CO-的式III化合物通過化合物(5)與H-A-W在1，1-羰基二咪唑的存在下在惰性溶劑，如THF或DMF中反應製備。 式(IV)化合物的製備如下用常規肽偶聯試劑，例如1，1-羰基二咪唑或二苯基磷醯疊氮化物在惰性溶劑，如二甲基甲醯胺或四氫呋喃中，化合物(5)與N-保護的胺基酸或N-保護的肽羧酸R-A-OH進行肽偶聯反應
R-A-OH-般可從Sigma Aldrich Inc．購得，例如苄氧羰基-L-苯丙氨酸、苄氧羰基-L-苯丙氨醯基-L-丙氨酸(R-A』-OH作為N-保護的胺基酸)、N-t-Boc-3-氨基-2-羥基-5-甲基己酸(R-A』-OH是具有氨基甲醯基形式的肽鍵的保護的二肽)、N-t-Box-3-氨基-2-羥基-4-苯基丁酸(R-A』-OH是等排物形式的N-保護的胺基酸)。如果沒有市售，這類化合物可按照《合成肽》(Synthetic Peptide，第1卷，George R．Pettit，Van Nostrand Reinhold，1970)中公開的方法製備。
在本發明的製備式(IVA)化合物的另一種途徑中，用常規的肽偶聯試劑，例如1，1-羰基二咪唑或二苯基磷醯疊氮化物在惰性溶劑，例如二甲基甲醯胺或四氫呋喃中將式(6)化合物與N-保護的胺基酸或肽酸R-A-OH進行反應。 本發明的假肽的製備包括使用二-氯衍生物7作為原料。在相轉移催化劑，例如四-N-丁基溴化銨的存在下在惰性溶劑，例如二甲基甲醯胺中，胺H-A-W與化合物7在室溫下反應20-30小時得到化合物8。該反應是溫度依賴性的。在較高的溫度下，例如70-90℃下，形成二取代的產物化合物IIA。化合物8還與其他胺，例如H-A-W或R3R4NH反應分別得到式IIA和IIB的化合物。
本發明的某些化合物由於存在鹼性胺氮原子可轉化為其相應的可藥用酸加成鹽。通過用化學計算過量的適宜有機酸或無機酸，例如磷酸、丙酮酸、鹽酸或硫酸等處理游離鹼形式的化合物可將這些化合物轉化為各種酸加成鹽。典型地是，將游離鹼溶於極性有機溶劑，例如對二噁烷或二甲氧基乙烷中，往其中加入酸。溫度保持在0-50℃。所得的酸加成鹽自發沉澱出來，或者通過減少極性溶劑沉澱出來。通常是在水性溶劑的存在下和約0-50℃的溫度下，通過用化學計算過量的適宜鹼，例如碳酸鉀或氫氧化鈉處理，這些酸加成鹽可分解為相應的游離鹼。游離鹼通過常規方法分離，例如用有機溶劑萃取。可利用鹽的溶解度、酸的揮發性或酸性差異，或者通過用適宜負荷的離子交換樹脂進行相互轉換本發明化合物的酸加成鹽。例如，可通過將式I化合物的鹽與稍稍化學計算過量的pKa低於原料鹽的酸成分的酸反應進行互換。反應在約0℃至所用溶劑的沸點溫度之間進行。
為治療上文提及的疾病和／或病症，本發明的化合物可以含有常規無毒可藥用載體、輔料或賦形劑的製劑形式口服或經非胃腸使用。本文採用的適於非胃腸包括皮下注射或輸液技術。除了治療溫血動物，例如小鼠、大鼠、馬、牛、羊、狗、貓等外，本發明的化合物還可有效地治療人。
用於組合物的常規無毒固體載體包括，例如藥用級的甘露醇、乳糖、澱粉、硬脂酸鎂、糖精鈉、滑石、纖維素、葡萄糖、蔗糖、碳酸鎂，也可使用類似的物質。上面定義的活性化合物可配製成液體藥用組合物，它們可例如通過將上面定義的活性化合物和可任選的藥物輔料混合、溶解、分散於載體，例如水、鹽水、葡萄糖水溶液、甘油、乙醇等製備成溶液或懸浮液。如果需要，給藥的藥物組合物還可含有少量無毒輔助物質，例如潤溼劑或乳化劑等，如乙酸鈉、山梨醇酐一月桂酸酯、三乙醇胺乙酸胺、三乙醇胺油酸酯等。製備這類劑型的實際方法是已知的，或者對於本領域普通專業人員是顯而易見的例如參見Remington’s Pharmaceutical Sciences，Mack PublishingCompany，Easton，Pa，15th Edition，1975。在任何情況下，給藥的製劑組合物總是含有有效緩解被治療對象的症狀量的活性化合物。
含有活性成分的藥物組合物可以呈適於口服使用的形式，片劑、含片、錠劑、水懸浮液或油懸浮液、可分散的粉末或顆粒、乳劑、硬膠囊和軟膠囊，或者糖漿或酏劑。用於口服的組合物可按照本領域已知製備藥物組合物的任何方法製備，為提供良好的是適口的製劑，這類組合物含有已知或多種下述物質甜味劑、矯味劑、著色劑和防腐劑。
片劑含有和適於製片的無毒可藥用賦形劑混合的活性成分。賦形劑的實例有，例如惰性稀釋劑，例如磷酸鈣或磷酸鈉；制粒劑和崩解劑，例如玉米澱粉或藻酸；粘合劑，如澱粉、明膠或阿拉伯膠；潤滑劑，如硬脂酸鎂、硬脂酸或滑石。片劑可通過已知技術包衣以延遲崩解和在胃腸道中的吸收，由此在較長的時間內提供緩釋作用。
口服用製劑還可以硬明膠膠囊形式存在，其中活性成分與惰性固體稀釋劑，例如磷酸鈣或高嶺土混合；或者以軟明膠膠囊形式存在，其中活性成分與水或油性基質，例如花生油、液體石蠟或橄欖油混合。
水懸浮液含有與適於製備水懸浮液的賦形劑混合的活性成分。這類賦形劑是助懸劑，例如羧甲基纖維素鈉、甲基纖維素、羥丙甲基纖維素、藻酸鈉、聚乙烯吡咯烷酮、樹膠和阿拉伯膠；分散劑或潤溼劑可以是天然存在的磷酸酯，例如卵磷脂或者氧化烯與脂肪酸的縮合產物，例如聚氧乙基硬脂酸酯或者氧化乙烯與長鏈脂族醇的縮合產物，例如十七氧化乙烯鯨蠟醇或者氧化乙烯與脂肪酸和己糖醇酐衍生的部分酯的縮合產物，例如聚乙烯山梨醇酐一油酸酯。水懸浮液還可含有一種或多種防腐劑，例如對羥基苯甲酸的乙酯或正丙基酯；一種或多種著色劑，例如蔗糖或糖精。油性懸浮液可通過將活性成分懸浮在植物油或礦物油中進行配製，所述植物油是例如花生油、橄欖油、芝麻油或椰子油，礦物油是例如液體石蠟。油性懸浮液還可含有增稠劑，例如蜂蠟、硬石蠟或鯨蠟醇。甜味劑例如是上述的，也可加入芳香劑以提供適口的口服製劑。這些組合物可通過加入抗氧劑，例如抗壞血酸防腐。
適於加入水製備水懸浮液的可分散粉末和顆粒含有與分散劑或潤溼劑、助懸劑和一種或多種防腐劑混合的活性成分。適宜的分散劑或潤溼劑和助懸劑可例舉上面已經提及的那些。也可存在其他輔劑，例如甜味劑、芳香劑和著色劑。
本發明的藥物組合物還可以是水包油形式的。油相可以是植物油，例如橄欖油或花生油或者礦物油，例如液體石蠟或這些的混合物。適宜的乳化劑可以是天然存在的磷酸酯、脂肪酸和己糖醇酐衍生的酯，例如山梨醇酐一油酸酯及所述部分酯與氧化乙烯的縮合產物，例如聚氧乙烯山梨醇酐一油酸酯。乳劑也可含有甜味劑和矯味劑。
糖漿和酏劑可用甜味劑，例如甘油、丙二醇、山梨醇或蔗糖進行配製。這類製劑還可含有緩和劑、防腐劑以及矯味劑和著色劑。藥物組合物可按照本領域已知的方法，用上面例舉的適宜分散劑或潤溼劑和助懸劑進行配製。無菌注射劑可以是在無毒的可非胃腸用的稀釋劑或溶劑中的無菌溶液或懸浮液，例如在1，3-丁二醇中的溶液。可使用的可藥用載體和溶劑是水、林格氏溶液和等滲氯化鈉溶液。此外，固化油也常用作溶劑或懸浮介質。為此，可使用任何品牌的固化油，包括合成的一甘油酯或二甘油酯。另外，注射劑中還可使用脂肪酸，例如油酸。
非胃腸給藥通常是以皮下、肌內或靜脈注射為特徵。注射劑可在注射前製成常規形式，例如液體溶液或懸浮液或者乳液。適宜的賦形劑是，例如，水、鹽水、葡萄糖、甘油或乙醇等。此外，如果需要，給藥的藥物組合物還可含有少量無毒的輔助物質，例如潤溫劑或乳化劑、pH緩衝劑等，例如乙酸鈉、山梨醇酐一月桂酸酯、三乙醇胺油酸酯等。
與載體結合製備單劑的活性成分的量將根據治療的對象和對人給藥的特定方式發生變化，可含有0．5毫克-5毫克的活性化合物和適宜的常規量的載體，載體可佔組合物總量的約5％-約95％。單位劑型通常含有約1毫克-約500毫克的活性成分。
然而，應該清楚，對任一具體患者的特定劑量水平將取決於多種因素，包括使用的特定化合物的活性、年齡、體重、健康狀況、性別、飲食、給藥時間、聯合用藥和所治療疾病的嚴重程度。
下面的具體實施例進一步描述和說明了本發明。
1H-NMR(CDCl3)δ4．02(s，OMe，3H)；13C-NMR(CDCl3)d173．56(C3)，169．68(C5)，57．07(OMe)；MS(APCl)m／z151．1(M++1)，108．0，94．0，73．0，58．0。B、以類似方式，製備下列化合物3-丁氧基-5-氯-[1，2，4]噻二唑，淺黃色油狀，產率50．9％。1H-NMR(CDCl3)δ4．35(t，J=6．6Hz，2H，CH2)，1．75(m，2H，CH2)，1．44(m，2H，CH2)，0．93(t，J=7．1Hz，3H，CH3)；13C-NMR(CDCl3)δ173．27(C3)，169．37(C5)，70．17(C1』)，30．70(C2』)，18．96(C3』)，13．67(C4』)。N-(5-氯-[1，2，4]噻二唑-3-基)-乙醯胺或3-乙醯氨基-5-氯-1，2，4噻二唑，經放置為淺黃色固體，產率(34．8％)。1H-NMR(CDCl3)δ2．50(s，Me)；13C-NMR(CDCl3)δ173．97(C3)，171．86(CO)，164．07(C5)，22．54(CH3)。3-(5-氯-[1，2，4]噻二唑-3-基甲基)-1H-吲哚或5-氯-3-{1H-吲哚-3-基甲基}-1，2，4-噻二唑，淺棕色固體，產率(28％)。1H-NMR(CDCl3)δ8．29(br．s，1H，NH)，7．68(d，J=7．8Hz，1H，CHNH)，7．11-7．33(m，4H，Ar-H)，4．48(s，2H，CH2)；13C-NMR(CDCl3)δ175．50(C3)，173．00(C5)，136．31，127．13，123．19，122．26，119．70，119．05，111．41，110．55，29．97(CH2)；MSm／z249．7(M+)，130．1，117．1。實施例3A、5-氯-3-[3-氯苯基-1-(四氫吡喃-2-基氧)甲基]-[1，2，4]噻二唑的製備用35分鐘的時間，往冰冷卻的2-(3-氯苯基)-2-(四氫吡喃-2-基氧)乙脒鹽酸鹽(12．0g，39．51mmol)的二氯甲烷(20ml)溶液和氫氧化鈉(9．49g，0．237moL，溶於60ml水中)加入全氯甲基硫醇(9．18g，49．46mmol)的二氯甲烷(50ml)溶液。將該反應混合物在冰冷的溫度下再攪拌1小時，收集有機層、乾燥(硫酸鈉)、過濾並真空濃縮。經矽膠柱色譜用己烷和乙酸乙酯(94／6)的混合液洗脫純化，得到淺黃色油狀的標題化合物(8．4g，61．5％)。
1H-NMR(CDCl3)δ7．56(d，J=6．9Hz，1H，Ar-H)，7．39-7．44(m，1H，Ar-H)，7．28-7．32(m，2H，Ar-H)，6．08和6．03(s，0．5H各，α-H)，4．84和4．72(t，J=3．1Hz，0．5H各，OCHO)，3．49-3．92(m，2H，OCH2)，1．55-1．94(m，6H，3CH2)。B、以類似方式，製備下列化合物3-[(5-氯-[1，2，4]噻二唑-3-基)-(四氫吡喃-2-基氧)甲基]-吡啶，棕色油狀物，產率28．7％(非對映異構體的混合物)。1H-NMR(CDCl3)δ8．55和8．52(d，J=4．5Hz，0．67和0．33H各)，7．69-7．81(m，2H)，7．18-7．28(m，1H)，6．20和6．15(s，0．33和0．67H各，ArCHO)，4．81-4．87(m，1H，OCHO)，3．84-3．90(m，1H，OCH)，3．44-3．54(m，1H，OCH)，1．90-1．96(m，1H)，1．75-1．80(m，2H)，1．51-1．60(m，3H)；MS m／z312．1(M++1)，228，210，85．5-氯-3-氯甲基-[1，2，4]噻二唑，棕色油，產率83．6％。1H-NMR(CDCl3)δ4．70(s)；13C-NMR(CDCl3)δ174．33(C3)，170．56(C5)，40．17(CH2)。
1H-NMR(MeOD)δ4．03(s，2H，NCH2)，3．94(s，3H，OMe)；13C-NMR(MeOD)δ182．0，173．3，170．0，56．7(MeO)，47．9；MS(m／z)189(M++1)，172，144，87。
1H-NMR(CDCl3)δ6．98(br．s，1H，NH)，4．29(t，J=5．0Hz，2H，OCH2)，4．18(br．s，2H，NCH2)，3．80(s，3H，OMe)，1．75(m，2H，OCH2CH2)，1．46(m，2H，CH2CH3)，0．94(t，J=7．1Hz，3H，CH3)；13C-NMR(CDCl3)δ182．1(C3)，170．0(C=O)，167．8(C5)，69．0(OCH2)，52．7(OMe)，46．1(NCH2)，30．9，19．0， 13．7。[3-(3-苯基烯丙基)-[1，2，4]噻二唑-5-基氨基]-乙酸甲酯或N-{3-肉桂基-[1，2，4]-噻二唑-5-基}-甘氨酸甲酯，灰白色固體，產率68％。
1H-NMR(CDCl3)δ7．18-7．40(m，6H，Ar-H和NH)，6．42-6．55(m，2H，HC=CH)，4．12(br．s，2H，NCH2)，3．75(s，3H，OMe)，3．66(d，J=6．0Hz，2H，C=CCH2)；13C-NMR(CDCl3)δ183．6(C3)，172．0(C5)，170．0(C=O)，137．2，132．3，128．5(C-ortho)，127．3，126．3(C-meta)，125．2，52．6(OMe)，46．7(NCH2)，36．8(C=CCH2)，{3-(1H-吲哚-3-基甲基)-[1，2，4]-噻二唑-5-基氨基}-乙酸甲酯或N-{3-(1H-吲哚-3-基甲基)-[1，2，4]噻二唑-5-基}-甘氨酸甲酯；淺棕色固體，產率71．4％。1H-NMR(CDCl3)d(旋轉異構體)8．36(br．s，1H，NH)，7．72和7．64(d，J=7．7Hz，0．25H和0．75H各，C=CH)，6．93-7．28(m，5H，Ar-H和NH)，4．22和4．19(s，0．6H和1．4H各，ln-CH2)，3．87(s，2H，NCH2)，3．71(s，3H，OMe)；13C-NMR(CDCl3)δ183．6(C3)，172．0(C5)，169．8(C=O)，136．3，127．3，123．0，121．9，119．3，119．2，111．4，111．3，52．6(OMe)，46．5(NCH2)，29．7(lnCH2)。{3-(1-苯基-1-(四氫吡喃-2-基氧)甲基)-[1，2，4]-噻二唑-5-基氨基}-乙酸甲酯或N-{3-(1-苯基-1-(四氫吡喃-2-基氧)甲基)-[1，2，4]噻二唑-5-基}-甘氨酸甲酯；無色油狀物，產率89％。
1H-NMR(CDCl3)δ(非對映異構體)7．45-7．55(m，2H，Ar-H)，7．23-7．40(m，3H，Ar-H)，7．00和6．65(br．s，0．5H和0．5H各，NH)，5．91和5．87(s，0．5H和0．5H各，aH)，4．85和4．66(t，0．5H和0．5H各，OCHO)，4．06(s，2H，NCH2)，3．78(s，3H，OMe)，3．52-4．05(m，2H，OCH2)，1．56-1．92(m，6H，3CH2)。C、以類似於實施例5A所述的方法，製備下列化合物N-{3-甲氧基-[1，2，4]-噻二唑-5-基}-亮氨酸甲酯；N-{3-甲氧基-[1，2，4]-噻二唑-5-基}-異亮氨酸甲酯；N-{3-甲氧基-[1，2，4]-噻二唑-5-基}-丙氨酸甲酯；N-{3-甲氧基-[1，2，4]-噻二唑-5-基}-脯氨酸甲酯；N-{3-甲氧基-[1，2，4]-噻二唑-5-基}-苯丙氨酸甲酯；N-{3-甲氧基-[1，2，4]-噻二唑-5-基}-酪氨酸甲酯；N-{3-甲氧基-[1，2，4]-噻二唑-5-基}-絲氨酸甲酯；N-{3-甲氧基-[1，2，4]-噻二唑-5-基}-蘇氨酸甲酯。D、N-(3-甲氧基-[1，2，4]-噻二唑-5-基)-L-脯氨酸甲酯的製備往L-脯氨酸甲酯鹽酸鹽(331mg，2mmol)在DMF(15ml)中的懸浮液中加入三乙胺(0．56ml，4mmol)。將所得混合物在室溫攪拌10分鐘。然後，滴加5-氯-3-甲氧基-[1，2，4]-噻二唑(151mg，1mmol)的DMF(5ml)溶液。將所得混合物在室溫攪拌16小時。混合物用水和乙酸乙酯稀釋。收集有機層，用鹽水洗滌，硫酸鈉乾燥、過濾並真空濃縮。經矽膠柱色譜用己烷和乙酸乙酯(1／1)混合溶劑洗脫純化，得到淺黃色油狀的N-(3-甲氧基-[1，2，4]-噻二唑(thiadiazo)-5-基)-L-脯氨酸甲酯(210mg，86．4％)。1H-NMR(CDCl3)δ4．50(m，1H，CHCO2)，3．96(s，3H，OMe)，3．75(s，3H，OMe)，3．55(m，1H，NCHpro)，3．40(m，1H，NCHpro)，2．11-2．35(m，4H，2CH2pro)。
1H-NMR (DMSO)δ8．46(t，J=5．4Hz，1H，NH)，7．58(d，J=7．9Hz，1H)，7．53(br．s，1H，NH)，7．35(d，J=8，1Hz，1H)，7．20(br．s，1H)，7．07(t，J=7．3Hz，1H)，6．97(t，J=7．5Hz，1H)，4．04(s，2H，ln-CH2)，3．94(d，J=5．4Hz，2H，NCH2)；13C-NMR(DMSO)δ182．9(C3)，171．7(C5)，170．2(C=O)，136．2，127．2，123．4，120．9，118．9，118．3，111．3，110．5，47．3(NCH2)，29．3(lnCH2)；MS(m／z)288(M++1)，271，243，184，155，130。2-{3-(苯基-(四氫吡喃-2-基氧)甲基)-[1，2，4]-噻二唑-5-基氨基}-乙醯胺或β-N-{3-(苯基-(四氫吡喃-2-基氧)甲基)-[1，2，4]噻二唑-5-基}-甘氨醯胺；白色固體，產率80．2％。熔點147．5-148．5℃；1H-NMR(CDCl3)δ(非對映異構體)7．50-7．52(m，3H，Ar-H)，7．28-7．38(m，2H，Ar-H)，6．82和6．68(br．t，0．5H和0．5H各，NHCH2)，6．08和5．98(br．s，0．5H和0．5H各，NH)，5．92和5．87(s，0．5H和0．5H各，αH)，5．68(br．s，1H，NH)，4．86和4．65(t，J=3．7Hz，0．5H和0．5H各，OCHO)，3．99(t，J=6．5Hz，2H，NCH2)，3．52-4．05(m，2H，OCH2)，1．52-1．80(m，6H，3CH2)；C、以類似於實施例6A所述的方法，製備下列化合物β-N-(3-正丁氧基-[1，2，4]-噻二唑-5-基)-丙氨醯胺；β-N-(3-正丁氧基-[1，2，4]-噻二唑-5-基)-苯丙氨醯胺；β-N-(3-正丁氧基-[1，2，4]-噻二唑-5-基)-亮氨醯胺；β-N-(3-正丁氧基-[1，2，4]-噻二唑-5-基)-異亮氨醯胺；β-N-(3-正丁氧基-[1，2，4]-噻二唑-5-基)-酪氨醯胺；
1H-NMR(CDCl3)δ7．90(br．s，1H，NHCH)，4．50-4．70(m，1H，NHCH)，4．45(dd，J=7．1，3．4Hz，1H，CHCO2)，4．26(t，J=6．7Hz，2H，OCH2)，3．92(m，1H)，3．53-3．61(m，1H)，1．85-2．35(m，5H)，1．67-1．76(m，3H)，1．55-1．62(m，1H)，1．39-1．48(m，2H)，0．85-0．97(m，10H，3Me和1CH)；MS(m／z)385(M++1)，329，270，242，214，116，70。N-(3-苯基-[1，2，4]噻二唑-5-基)-L-亮氨醯基-L-脯氨酸，白色固體，產率91．8％。熔點在112℃泡沫化，在136．0-138．0℃熔化。
1H-NMR(CDCl3)δ8．08-8．12(m，2H，Ar-H)，7．58(br．s，1H，NHCH)，7．38-7．42(m，3H，Ar-H)，4．90(m，1H，NHCH)，4．53(m，1H，CHCO2)，4．09-4．14(m，1H)，3．52-3．62(m，1H)，2．00-2．32(m，4H)，1．75-1．95(m，2H)，1．55-1．64(m，1H)，1．04(d，J=5．9Hz，3H，Me)，0．99(d，J=6．0Hz，3H，Me)，0．85-0．92(m，1H)；MS(m／z)389(M++1)，333，274，246，190，116，70。N-{3-甲基-[1，2，4]-噻二唑-5-基}-L-亮氨醯基-L-脯氨酸，白色固體，產率80％。熔點在81℃泡沫化，在112-115℃熔化。
H-NMR(CDCl3)d7．30(br．s，NHCH)，4．42-460(m，1H，NHCH)，3．80-4．00(m，1H，CHCO2)，3．54-3．65(m，1H)，2．37(s，
3H，Me)，2．07-2．42(m，5H)，1．50-1．90(m，4H)，0．96-1．10(m，6H，2Me)，0．80-0．95(m，1H)；MS(m／z)327(M++1)，271，212，184，116，70。N-{3[1-(4-(2-吡啶基)哌嗪-1-基)甲基]-[1，2，4]-噻二唑-5-基}-L-亮氨醯基-L-脯氨酸，淺黃色固體，產率70．7％。熔點163．5-166．0℃。1H-NMR(CDCl3)δ8．21(m，1H)，7．46-7．49(m，1H)，6．60-6．65(m，2H)，4．20-4．70(m，2H，CHCO andCHCO2)，3．80(m，1H，NCHpro)，3．40-3．75(m，7H，NCHpro，N=CCH2，2NCH2)，2．72(m，4H，2NCH2)，1．60-2．05(m，6H，2CH2pro和CH2)，0．90-1．03(2d，J=5．5和5．7Hz，7H，2Me和1CH)；MS(m／z)488(M++1)，442，368，345，297，253，225，176，147，121。N，N』-{3-亞甲基-[1，2，4]-噻二唑-5-基}-二{L-亮氨醯基-L-脯氨酸}淺黃色固體，產率84．2％。熔點1H-NMR(CDCl3)δ6．83(d，J=6．8Hz，1H，SCNH)，4．78(m，1H，CHCO)，4．61(dd，J=8．7和4．8Hz，1H，CHCO2)，4．59(m，1H，CHCO)，4．42(dd，J=8．3和4．1Hz，1H，CHCO2)，3．68(m，2H，N=CCH2)，3．38-3．70(m，5H，2NCH2pro和NH)，1．38-2．40(m，12H，4C2Hpro和2C2H)，0．85-1．05(4d，J=6．5，6．7，6．7和6．4Hz，14H，4Me和2CH)；MS(m／z)553(M++1)。C、以類似方法，製備下列化合物N-(3-甲氧基-[1，2，4]-噻二唑-5-基)-L-亮氨醯基-L-八氫(3aS，6aS)-環戊二烯並[b]吡咯-2(S)-羧酸；N-(3-甲氧基-[1，2，4]-噻二唑-5-基)-L-亮氨醯基-{4-叔丁氧羰基}哌嗪-2(R或S)-羧酸；N-(3-甲氧基-[1，2，4]-噻二唑-5-基)-L-亮氨醯基-十氫(4aR，8aS)-異喹啉-3(S)-羧酸；N-(3-甲氧基-[1，2，4]-噻二唑-5-基)-L-亮氨醯基-L-八氫吲哚-2-羧酸；N-(3-甲氧基-[1，2，4]-噻二唑-5-基)-L-亮氨醯基-L-二氫吲哚-2-羧酸；N-(3-甲氧基-[1，2，4]-噻二唑-5-基)-L-異亮氨醯基-L-八氫吲哚-2-羧酸；N-(3-甲氧基-[1，2，4]-噻二唑-5-基)-L-異亮氨醯基-L-八氫(3aS，6aS)-環戊二烯並[b]吡咯-2(S)-羧酸。
1H-NMR(CDCl3)δ7．46-7．50(m，2H)，7．26-7．36(m，4H，Ar-
H和NH)，5．79-5．85(m，1H，αH)，4．58-4．95(m，1H，OCHO)，4．38-4．51(m，2H)，3．81-4．02(m，2H)，3．74(s，3H，OMe)，3．60-3．70(m，1H)，3．45-3．55(m，1H)，1．45-2．10(m，12H)，1．04(d，J=6．6Hz，3H，Me)，0．90(t，J=7．3Hz，3H，Me)。
1H-NMR(CDCl3)δ7．28-7．46(m，6H，5Ar-H和NH)，5．75-5．85(m，1H，αH)，4．40-4．60(m，2H)，3．58-3．95(m，3H)，3．72(s，3H，OMe)，1．85-2．20(m，4H)，1．62-1．82(m，2H)，1．14-1．32(m，1H)，1．04(d，J=6．3Hz，3H，Me)，0，91(t，J=7．0Hz，3H，Me)。B、以類似方式，製備下列化合物N-[3-(1-苯基-1-羥基)甲基-[1，2，4]噻二唑-5-基]-L-異亮氨醯基-L-脯氨酸，白色固體，產率76％。熔點在100℃泡沫化，在163-166℃熔化；1H-NMR(CDCl3)δ7．79(br，1H，NH)，7．38-7．48(m，2H)，7．26-7．36(m，3H，Ar-H)，5．69-5．74(m，1H，αH)，3．50-4．50(m，3H)，1．80-2．20(m，6H)，1．60-1．780(m，1H)，1．10-1．30(m，1H)，0．91(d，J=5．7Hz，3H，Me)，0．87(t，J=7．5Hz，3H，Me)；MS(m／z)419(M++1)，401，349，304，242，218，163，107，83。
1H-NMR(CDCl3)δ8．16(d，J=7．5Hz，2H)，8．08(d，J=8．4Hz，1H，NH)，7．59(t，J=7．2Hz，1H)，7．44(t，J=7．6Hz，2H)，4．62-4．66(m，2H)，4．30-4．32(m，1H)，3．76(s，3H，OMe)，3．75-3．80(m，1H)，2．24-2．30(m，1H)，1．95-2．10(m，5H)，1．76-1．78(m，1H)，1．28-1．34(m，1H)，1．13(d，J=6．6Hz，3H，Me)，0．96(t，J=7．4Hz，3H，Me)。B、以類似方式，製備下列化合物2-[3-苯甲醯基-[1，2，4]噻二唑-5-基氨基]-乙醯胺或β-N-(3-苯甲醯基-1，2，4-噻二唑-5-基)-甘氨醯胺，白色固體，產率46．2％。熔點227-228℃；1H-NMR(DMSO)δ8．84(br．s，1H，NH)，8．03-8．05(m，2H)，7．69(t，J=6．8Hz，1H，NHCH2)，7．54-7．57(m，3H)，7．19(br．s，1H，NH)，4．02(d，J=5．3Hz，2H，NCH3)；MSm／z263(M++1)，246，218，185，158，140，105。實施例16N-(3-苯甲醯基-[1，2，4]噻二唑-5-基)-L-異亮氨醯基-L-脯氨酸的製備以類似於實施例11描述的方法，皂化實施例15A的酯，然後酸化，得到白色固體的N-(3-苯甲醯基-[1，2，4]噻二唑-5-基)-L-異亮氨醯基-L-脯氨酸(93．8％)。熔點在103℃泡沫化，在132-134℃熔化；1H-NMR(CDCl3)δ8．15(br．s，1H，NH)，8．13(d，J=7．6Hz，2H)，7．55(t，J=7．0Hz，1H)，7．42(t，J=7．8Hz，2H)，4．58-4．62(m，1H)，4．55(dd，J=7．6，4．0Hz，1H)，4．18-4．22(m，1H)，3．58-3．63(m，1H)，1．92-2．2(m，6H)，1．65-1．75(m，1H)，1．21-1．30(m，1H)，0．98(d，J=6．8Hz，3H，Me)，0．90(t，J=7．4Hz，3H，Me)；MSm／z417(M++1)，371，302，274，206，116，70。
1H-NMR(CDCl3)δ12．75(s，1H，NH)，6．70(d，J=12．0Hz，1H，NH)，4．79-4．87(m，1H，NCHpro)，4．54-4．59(dd，J=11．8，6．0Hz，1H，NCH)，4．12(s，3H，OMe)，3．64-3．90(m，2H，NCH2pro)，1．56-2．26(m，6H，3CH2)，0．94-1．12(two d，J=9．7Hz，7H，2CH3+CH)；13C-NMR(CDCl3)δ178．3(C3)，172．3，171．1(CO2)，165．9(C5)，153．7(NHC=ONH)，58．8，56．6，52．2，49．8，47．0(CH2)，42．0(CH2)，29．0(CH2)，24．8(CH2)，24．5，23．2，22．0；MS (m／z)400(M++1)，326，271，243，209，158，130，87。
M．p．161-162℃；1H-NMR(CDCl3)δ7．14-7．38(m，12H，10Ar-H和2NH)，5．92(br．s，1H，NH)，5．06(s，2H，OCH2)，4．38(m，1H，CHCH2Ar)，4．00(m，1H，CHCH3)，3．97(s，3H，OMe)，3．00-3．08(m，2H，CHCH2Ar)，1．34(d，J=8．9Hz，3H，Me)；MS(m／z)484(M++1)，416，361，316，285，185，132，75。後一種化合物還可用二苯基磷醯疊氮化物和三乙胺代替DCC／HOBT製備，產率27．7％。
3H，OMe)；13C-NMR(CDCl3)δ176．8(C3)，166．9(C5)，166．6(C=O)，56．9(OMe)，25．9(CH2)。B、類似地，用氯乙醯氯製備時，得到5-氯乙醯氨基-3-甲氧基-[1，2，4]-噻二唑，白色固體(52％)。M．p．207-208℃；1H-NMR(CDCl3)δ12．04(br．s，1H，NH)，4．45(s，2H，CH2)，4．11(s，3H，OMe)。
上述實驗的條件記載於下列文獻中Menard R．等，30Biochemistry 1990，29，6706-6713；Fox T．等，Biochemistry 1992，31，12571-12576；Cannona E．等，Biochemistry 1996，35，8149-8157。典型的實驗包括選擇抑制劑的濃度，以便在2小時內可獲得最大抑制，監測完全的漸進曲線(即，螢光指對時間)並分析數據。分析得到兩種參數剛達到穩態時的％抑制率和表示達到穩態速率的速率常數。通常，酶活性隨時間而降低直至達到最大的抑制水平(即，穩態)，此時酶活性保持恆定。由於在穩態仍可測得明顯水平的活性(即，抑制不完全)，將數據代入方程(1)，該方程常用於緩慢結合的可逆性抑制劑。[P]=v0．t+{(V1-V0．)[1-e-kobs』]}／kobs(1)％抑制=(1．-V1／V0)·100(2)在該方程中，[P]表示產物的濃度(由螢光讀數獲得)，Kobs是達到穩態的一級速率常數，V0是對應於沒有抑制劑存在的速率的起始速率，V1是穩態時抑制的酶的速率。％抑制率應用方程(2)獲得，其中在沒有抑制劑存在下測得的速率用於V0。下面給出這種方法的一種簡單機理 在該機理中，實驗測得的Kobs值對應於kobs．=kon[inh]+koffKoff隨抑制劑濃度的不同發生變化。Koff通常較Kon[inh]慢得多並且Kobs／[inh]可用於估測Kon。該研究中採用此方法和結果如下所示3-甲氧基-5-(苄氧羰基-L-苯丙氨醯基-L-丙氨醯氨基)-1，2，4-噻二唑，400mM的抑制率為65％，Kobs／[inh]=38M-1s-1。N-[3-甲氧基-[1，2，4]-噻二唑-5-基]-(L-亮氨醯基-L-脯氨酸)，60mM為85％抑制，Kobs／[inh]=170M-1s-1。
採用異羥肟酸酯比色法(J．Biol．Chem．，1971，246，1093)測定轉穀氨醯胺酶的活性。將測試化合物溶於甲醇中，將其加到純化轉穀氨醯胺酶的緩衝溶液中，使其終濃度為0．1mM(10％MeOH)。培養1個小時後，用標準活性分析法分析溶液中殘留的活性。3-甲氧基-5-(苄氧羰基-L-苯丙氨醯基-L-丙氨醯氨基)-1，2，4-噻二唑在100μM下對酶完全抑制。
將三(羥甲基)甲胺(61mg，0．5mmol)在2ml水中的溶液滴加到N-[(3-甲氧基)-[1，2，4]-噻二唑-5-基]-L-亮氨醯基-L-脯氨酸(171mg，0．5mmol)在10ml甲醇中的溶液中。將所得澄明溶液在室溫攪拌1小時。真空除去揮發性物質，殘餘的白色泡沫物在室溫下真空乾燥16小時(225mg，產率97．1％)。熔點在49℃泡沫化，在127-128℃熔化。1H-NMR(MeOD)δ4．80(m，1H，CHN)，4．30(m，1H，CHCO2)，3．93(s，2H)，3．91(s，2H)，3．90(s，2H)，3．62(s，3H，OMe)，3．50-3．60(m，2H)，2．00-2．20(m，3H)，1．60-1．85(m，3H)，0．94-1．05(m，7H，2Me和2CH)。
將回收的分離塊進行洗滌並置換新鮮培養基。加入20微升(10μCi／ml)硫酸鈉[35S]並將軟骨分離塊在37℃下培養72小時以放射性標記蛋白多糖。徹底洗滌分離塊(5次)，以除去游離的放射性同位素並在不含血清的F-12培養基(3％Ab)中培養過夜。然後將分離塊分四份在新鮮的含不同濃度Apo-501(10-7、10-6、10-5和10-4)的不含血清的培養基中培養24小時。第二天，將每份軟骨洗滌並轉移到24孔板的孔中，往各孔中加入1ml新鮮製備的含相應濃度的Apo-501和50ngIL-β的培養基(不含血清的，3％Ab)。將分離塊在37℃培養72小時。採用液體閃爍計數法測量[35S]硫酸鹽-糖胺聚糖的放射性來測定用不同濃度的Apo501處理的各份軟骨中的蛋白多糖降解的程度。將100微升培養基樣品加到5ml閃爍混合物(Ready Safe，Beckmann)中並計數。蛋白多糖的降解表示為每毫克軟骨(乾重)釋放到培養基中的放射性標記的糖胺聚糖(每分鐘每毫升的計數)。
如附圖2所示，Apo501證明了對IL-1誘導的蛋白多糖降解具有抑制作用。Apo501在1x10-6M下導致IL-1(50ng／ml)誘導的新合成的蛋白多糖的降解(p=0．023)明顯減少(60％)。
權利要求
1.3，5-二取代的1，2，4-噻唑化合物，具有通式(I)的結構，或其可藥用鹽 其中Z選自(a)-A-W；其中A是胺基酸殘基，或者是含2-3個胺基酸殘基的肽或其等排體並且W表示式-N(R1)2或-OR1的基團，其中R1獨立地是氫、低級烷基、低級鏈烯基、低級炔基，其中不飽和鍵與N或O原子相距至少一個碳原子；(b)-X-A-W；其中X是選自式 和 基團的間隔基並且A，W的定義同上；(c) 其中R表示氫、低級鏈烷醯基、低級環烷基羰基、低級烷氧羰基、低級芳基烷氧基羰基或N-保護基並且R1和A的定義同上；條件是在基團(a)和(b)中，A的N-末端分別是直接或是通過如上定義的間隔基X與1，2，4-噻二唑環的C5相連；並且在基團(c)中，A的羧基末端與5-氨基-1，2，4-噻二唑的氮原子直接相連；並且Y選自(1)低級烷氧基、低級環烷氧基、低級芳烷氧基、雜環氧基和低級雜環烷氧基，其中的烷基或芳基環可任選地被1-2個取代基取代，所述取代基選自氨基、烷氧基、羥基、滷素、氨基、烷基氨基、二烷基氨基；(2)低級烷基、低級環烷基、低級雜環烷基、雜環基、芳基、低級芳烷基、低級芳基鏈烯基、低級雜環基鏈烯基，其中的烷基或芳基環可任選地被1-2個取代基取代，所述取代基選自氨基、烷氧基、羥基、滷素、氨基、烷基氨基和二烷基氨基；(3)低級烷氧羰基、羧基；(4)下式的酮基 其中R2表示低級烷基、低級環烷基、低級雜環烷基、雜環基、芳基、低級芳烷基，其中其中的烷基或芳環可任選地被1-2個取代基取代，所述取代基選自氨基、烷氧基、羥基、滷素、氨基、烷基氨基、二烷基氨基；(5)下式的氨基甲醯基 其中R2定義如上；(6)氨基、低級烷基氨基、低級二烷基氨基；(7)下式的醯胺基 其中R2定義如上；(8)下式的基團 其中A定義如上並且A的羧基末端與3-氨基-1，2，4-噻二唑的氮直接相連。R和R1定義如上；(9)下式的醇 其中R2定義如上；(10)下式的碸 其中R2定義如上；(11)下式的亞碸 其中R2定義如上；(12)下式的磺醯氨基 其中R2定義如上；(13)低級烷硫基、低級芳烷硫基、芳硫基；(14)下式的基團-CH2-A-WA定義如上，A的N末端與亞甲基直接相連並且W定義如上；(15)下式的基團-CH2-NR3R4其中R3和R4各自獨立地是烷基、芳烷基、雜環基、雜環烷基；R3和R4與N原子一起形成選自哌啶基、吡咯烷基、哌嗪基的五或六元環，哌嗪的N-4位可任選地被吡啶基、雜環基、烷基、芳烷基或芳基取代。
2.3，5-二取代的1，2，4-噻二唑化合物，具有通式(II)的結構或其可藥用鹽 其中A是胺基酸殘基，或者是含2-3個胺基酸殘基的肽或其等排物，其中A的N末端與1，2，4-噻二唑環的C5位直接相連；並且W表示式-N(R1)2或-OR1的基團，其中R1獨立地是氫、低級烷基、低級鏈烯基、低級炔基，其中不飽和鍵與N或O原子相距至少一個碳原子；並且Y選自(1)低級烷氧基、低級環烷氧基、低級芳烷氧基、雜環氧基和低級雜環烷氧基，其中的烷基或芳基環可任選地被1-2個取代基取代，所述取代基選自氨基、烷氧基、羥基、滷素、氨基、烷基氨基、二烷基氨基；(2)低級烷基、低級環烷基、低級雜環烷基、雜環基、芳基、低級芳烷基、低級芳基鏈烯基、低級雜環基鏈烯基，其中的烷基或芳基環可任選地被1-2個取代基取代，所述取代基選自氨基、烷氧基、羥基、滷素、氨基、烷基氨基和二烷基氨基；(3)低級烷氧羰基、羧基；(4)下式的酮基 其中R2表示低級烷基、低級環烷基、低級雜環烷基、雜環基、芳基、低級芳烷基，其中的烷基或芳環可任選地被1-2個取代基取代，所述取代基選自氨基、烷氧基、羥基、滷素、氨基、烷基氨基、二烷基氨基；(5)下式的氨基甲醯基 其中R2定義如上；(6)氨基、低級烷基氨基、低級二烷基氨基；(7)下式的醯胺基 其中R2定義如上；(8) 下式的基團 其中A定義如上並且A的羧基末端與3-氨基-1，2，4-噻二唑的氮直接相連。R和R1定義如上；(9) 下式的醇 其中R2定義如上；(10)下式的碸 其中R2定義如上；(11)下式的亞碸 其中R2定義如上；(12)下式的磺醯氨基 其中R2定義如上；(13)低級烷硫基、低級芳烷硫基、芳硫基；(14)下式的基團-CH2-A-WA定義如上，A的N末端與亞甲基直接相連並且W定義如上；(15)下式的基團-CH2-NR3R4其中R3和R4各自獨立地是烷基、芳烷基、雜環基、雜環烷基；R3和R4與N原子一起形成選自哌啶基、吡咯烷基、哌嗪基的五或六元環，哌嗪的N-4位可任選地被吡啶基、雜環基、烷基、芳烷基或芳基取代。
3.3，5-二取代的1，2，4-噻二唑化合物，具有通式(III)的結構，或其可藥用鹽 其中A是胺基酸殘基，或者是含2-3個胺基酸殘基的肽或其等排物，其中A的N末端通過間隔基X與1，2，4-噻二唑的C5位相連；X是選自式 和 基團的間隔基並且W表示式-N(R1)2或-OR1的基團，其中R1獨立地是氫、低級烷基、低級鏈烯基、低級炔基，其中不飽和鍵與N或O原子相距至少一個碳原子；並且Y選自(1)低級烷氧基、低級環烷氧基、低級芳烷氧基、雜環氧基和低級雜環烷氧基，其中的烷基或芳基環可任選地被1-2個取代基取代，所述取代基選自氨基、烷氧基、羥基、滷素、氨基、烷基氨基、二烷基氨基；(2)低級烷基、低級環烷基、低級雜環烷基、雜環基、芳基、低級芳烷基、低級芳基鏈烯基、低級雜環基鏈烯基，其中的烷基或芳基環可任選地被1-2個取代基取代，所述取代基選自氨基、烷氧基、羥基、滷素、氨基、烷基氨基和二烷基氨基；(3) 低級烷氧羰基、羧基；(4) 下式的酮基 其中R2表示低級烷基、低級環烷基、低級雜環烷基、雜環基、芳基、低級芳烷基，其中其中的烷基或芳環可任選地被1-2個取代基取代，所述取代基選自氨基、烷氧基、羥基、滷素、氨基、烷基氨基、二烷基氨基；(5) 下式的氨基甲醯基 其中R2定義如上；(6) 氨基、低級烷基氨基、低級二烷基氨基；(7) 下式的醯胺基 其中R2定義如上；(8) 下式的基團 其中A定義如上並且A的羧基末端與3-氨基-1，2，4-噻二唑的氮直接相連。R和R1定義如上；(9) 下式的醇 其中R2定義如上；(10)下式的碸 其中R2定義如上；(11)下式的亞碸R2-S-(11)下式的亞碸 其中R2定義如上；(12)下式的磺醯胺基 其中R2定義如上；(13)低級烷硫基、低級芳烷硫基、芳硫基；(14)下式的基團-CH2-A-WA定義如上，A的N末端與亞甲基直接相連並且W定義如上；(15)下式的基團-CH2-NR3R4其中R3和R4各自獨立地是烷基、芳烷基、雜環基、雜環烷基；R3和R4與N原子一起形成選自哌啶基、吡咯烷基、哌嗪基的五或六元環，哌嗪的N-4位可任選地被吡啶基、雜環基、烷基、芳烷基或芳基取代。
4.3，5-二取代的1，2，4-噻二唑化合物，具有通式(IV)的結構，或其可藥用鹽 其中A是胺基酸殘基，或者是含2-3個胺基酸殘基的肽，A的羧基末端與5-氨基-1，2，4-噻二唑的氮原子直接相連，並且R和R1如權利要求1中所定義；並且Y選自(1) 低級烷氧基、低級環烷氧基、低級芳烷氧基、雜環氧基和低級雜環烷氧基，其中的烷基或芳基環可任選地被1-2個取代基取代，所述取代基選自氨基、烷氧基、羥基、滷素、氨基、烷基氨基、二烷基氨基；(2) 低級烷基、低級環烷基、低級雜環烷基、雜環基、芳基、低級芳烷基、低級芳基鏈烯基、低級雜環基鏈烯基，其中的烷基或芳基環可任選地被1-2個取代基取代，所述取代基選自氨基、烷氧基、羥基、滷素、氨基、烷基氨基和二烷基氨基；(3) 低級烷氧羰基、羧基；(4) 下式的酮基 其中R2表示低級烷基、低級環烷基、低級雜環烷基、雜環基、芳基、低級芳烷基，其中的烷基或芳環可任選地被1-2個取代基取代，所述取代基選自氨基、烷氧基、羥基、滷素、氨基、烷基氨基、二烷基氨基；(5) 下式的氨基甲醯基 其中R2定義如上；(6) 氨基、低級烷基氨基、二低級烷基氨基；(7) 下式的醯胺基 其中R2定義如上；(8) 下式的基團 其中A定義如上並且A的羧基末端與3-氨基-1，2，4-噻二唑的氮直接相連。R和R1定義如上；(9) 下式的醇 其中R2定義如上；(10)下式的碸 其中R2定義如上；(11)下式的亞碸 其中R2定義如上；(12)下式的磺醯胺基 其中R2定義如上；(13)低級烷硫基、低級芳烷硫基、芳硫基；(14)下式的基團-CH2-A-WA定義如上，A的N末端與亞甲基直接相連並且W定義如上；(15)下式的基團-CH2-NR3R4其中R3和R4各自獨立地是烷基、芳烷基、雜環基、雜環烷基；R3和R4與N原子一起形成選自哌啶基、吡咯烷基、哌嗪基的五或六元環，哌嗪基的N-4位可任選地被吡啶基、雜環基、烷基、芳烷基或芳基取代。
5.權利要求1或2的3，5-二取代的1，2，4-噻二唑化合物，其中A是甘氨醯基，W是-NH2並且Y如權利要求1所定義。
6.權利要求5的化合物，其中Y是甲氧基，該化合物是N-(3-甲氧基-[1，2，4]-噻二唑-5-基氨基)-乙醯胺。
7.權利要求5的化合物，其中Y是正丁氧基，該化合物是N-(3-正丁氧基-[1，2，4]-噻二唑-5-基氨基)-乙醯胺。
8.權利要求5的化合物，其中Y是肉桂基，該化合物是N-(3-苯基烯丙基)-[1，2，4]-噻二唑-5-基氨基]-乙醯胺。
9.權利要求5的化合物，其中Y是1H-吲哚-3-基甲基，該化合物是N-{3-(1H-吲哚-3-基甲基)-[1，2，4]-噻二唑-5-基氨基}-乙醯胺。
10.權利要求1或2的3，5-二取代的1，2，4-噻二唑化合物，其中A是亮氨醯基-脯氨醯基或異亮氨醯基-脯氨醯基，W是-OH並且Y如權利要求1所定義。
11.權利要求10的化合物，其中A是亮氨醯基-脯氨醯基，W是-OH並且Y如權利要求1所定義。
12.權利要求10的化合物，其中A是異亮氨醯基-脯氨醯基，W是-OH並且Y如權利要求1所定義。
13.權利要求11的化合物，其中Y是甲氧基，該化合物是N-(3-甲氧基-[1，2，4]噻二唑-5-基)-L-亮氨醯基-L-脯氨酸。
14.權利要求11的化合物，其中Y是正丁氧基，該化合物是N-(3-丁氧基-[1，2，4]噻二唑-5-基)-L-亮氨醯基-L-脯氨酸。
15.權利要求11的化合物，其中Y是甲基，該化合物是N-(3-甲基-[1，2，4]噻二唑-5-基)-L-亮氨醯基-L-脯氨酸。
16.權利要求11的化合物，其中Y是苯基，該化合物是N-(3-苯基-[1，2，4]噻二唑-5-基)-L-亮氨醯基-L-脯氨酸。
17.權利要求12的化合物，其中Y是甲氧基，該化合物是N-(3-甲氧基-[1，2，4]噻二唑-5-基)-L-異亮氨醯基-L-脯氨酸。
18.權利要求10的化合物，它是N，N』-{3-亞甲基-[1，2，4]噻二唑-5-基]-二-(L-亮氨醯基-L-脯氨酸)。
19.權利要求10的化合物，它是{3-[4-(2-吡啶基)哌嗪基甲基]-1，2，4-噻二唑-5-基}-亮氨醯基-脯氨酸。
20.權利要求10的化合物，它是N，N』-{3-亞甲基-[1，2，4]噻二唑-5-基}-二-(L-亮氨醯基-L-脯氨酸甲酯)。
21.權利要求1或3的化合物，其中X是 ，A、W和Y如權利要求1所定義。
22.權利要求1或3的化合物，其中X是 ，A、W和Y如權利要求1所定義。
23.權利要求21的化合物，其中A是亮氨醯基並且W和Y如權利要求1所定義。
24.權利要求23的化合物，其中W是NH-異戊基並且Y如權利要求1所定義。
25.權利要求24的化合物，其中Y是甲氧基，該化合物是5-(3-甲氧基-1，2，4-噻二唑基)-氨基甲醯基-亮氨醯基異戊醯胺。
26.權利要求22的化合物，其中A是亮氨醯基-脯氨醯基並且W和Y如權利要求1所定義。
27.權利要求26的化合物，其中W是OH並且Y如權利要求1所定義。
28.權利要求27的化合物，其中W是甲氧基，該化合物是N-{(3-甲氧基-[1，2，4]噻二唑-5-基)氨基甲醯基甲基}-L-亮氨酸-L-脯氨酸。
29.權利要求1或4的化合物，其中A是苯丙氨醯基，R1是氫，R是苄氧羰基並且Y如權利要求1所定義。
30.權利要求29的化合物，其中Y是甲氧基，該化合物是5-(N-苄氧羰基-L-苯丙氨醯氨基)-3-甲氧基-[1，2，4]噻二唑。
31.權利要求29的化合物，其中Y是苄氧羰基-苯丙氨醯氨基，該化合物是N，N』-{3，5-二-(N-苄氧羰基-L-苯丙氨醯氨基)}-[1，2，4]-噻二唑。
32.一種藥物組合物，含有權利要求1的化合物或其可藥用鹽與可藥用稀釋劑或載體。
33.一種藥物組合物，含有權利要求2的化合物或其可藥用鹽與可藥用稀釋劑或載體。
34.一種藥物組合物，含有權利要求3的化合物或其可藥用鹽與可藥用稀釋劑或載體。
35.一種藥物組合物，含有權利要求4的化合物或其可藥用鹽與可藥用稀釋劑或載體。
36.一種治療哺乳動物的疾病或病症的方法，其中所述疾病或病症通過抑制至少一種半胱氨酸活性依賴性酶得到緩解，該方法包括施用有效量的權利要求1的化合物或其可藥用鹽。
37.一種治療哺乳動物的疾病或病症的方法，其中所述疾病或病症通過抑制至少一種半胱氨酸活性依賴性酶得到緩解，該方法包括施用有效量的權利要求2的化合物或其可藥用鹽。
38.一種治療哺乳動物的疾病或病症的方法，其中所述疾病或病症通過抑制至少一種半胱氨酸活性依賴性酶得到緩解，該方法包括施用有效量的權利要求3的化合物或其可藥用鹽。
39.一種治療哺乳動物的疾病或病症的方法，其中所述疾病或病症通過抑制至少一種半胱氨酸活性依賴性酶得到緩解，該方法包括施用有效量的權利要求4的化合物或其可藥用鹽。
40.權利要求36-39的方法，其中的病症是痤瘡。
41.權利要求36-39的方法，其中的疾病是感冒。
42.權利要求36-39的方法，其中的疾病是炎性關節病。
全文摘要
本發明提供新的1,2,4－噻二唑化合物,它們是有效的半胱氨酸活性依賴性酶,尤其是半胱氨酸蛋白酶的抑制劑。這些化合物通過抑制轉穀氨醯胺酶治療痤瘡,通過抑制人鼻病毒3C蛋白酶治療感冒以及通過抑制組織蛋白酶治療炎性關節病。本發明的化合物是通式(Ⅰ)的3,5－二取代的1,2,4－噻二唑,其中Z是具有酶識別序列的含氮基團,Y是調整所述抑制劑與半胱氨酸活性依賴性酶的硫醇基反應性的取代基。Y基團也可用於識別。
文檔編號C07K5/065GK1291993SQ99803568
公開日2001年4月18日 申請日期1999年2月23日 優先權日1998年3月2日
發明者K·卡利米安, T·F·泰姆, R·C·S·H·倫－唐, 李萬仁 申請人:阿普泰克斯公司