獼猴桃靈芝複合酵素及其製備方法

2023-10-04 21:06:34 4

專利名稱：獼猴桃靈芝複合酵素及其製備方法
技術領域：
本發明屬於食品工程領域，具體地說，涉及一種獼猴桃靈芝複合酵素及其製備方法。
背景技術：
酵素是一種由胺基酸組成的具有特殊生物活性的物質，它存在於所有活的動植物體內，是維持機體正常功能，消化食物，修復組織等生命活動的一種必需物質，幾乎參與所有的生命活動。酵素分為酸化還原酵素、轉移酵素、加水分解酵素、脫離酵素、異性化酵素和合成酵素等六大類。具有氧化作用、分解作用、新陳代謝作用、熱能作用、淨化血液作用、抗菌防禦作用。酵素技術是一門集多菌群複合發酵、萃取技術為一體的新型高新技術。微生物發酵的傳統食品如泡菜、豆瓣醬、納豆、味噌等也可以稱為酵素產品。但本項目研究的酵素特指以新鮮蔬菜、水果等植物為原料，經不同種類益生菌群多輪次發酵而製得的微生物制齊U。因此，酵素食飲品含有來源於天然植物、微生物中的豐富酶系、維生素、礦物質以及具有廣泛生理功效的活性物質、人體益生菌群等，具有調理腸胃、抗衰老、抗氧化、提高機體免疫力、調節血脂等廣泛的生理作用等。國內外酵素髮酵的技術工藝較多，共同特徵如下(1)生產酵素的原料大多為來自本地的具有某種特殊生理功效成分或高含某種營養素的優質果蔬。(2)發酵方式基本上都採用自然發酵或半自然發酵(參與酵素髮酵的部分微生物為純種接種)。(3)發酵工藝一般採用乳酸菌、酵母菌二次發酵法。酵素產品的生產原料及技術工藝使得酵素的生產及風味和品質具有鮮明的地域特點(1)酵素生產原料主要是新鮮的水果和蔬菜，不同地貌、氣候環境條件下果蔬的種類、品種以及品質存在巨大的差異。因此，來源於不同地域的果蔬原料釀造的酵素會有風味和品質上的差異。(2)酵素的釀造採用自然發酵或半自然發酵，生長於不同地貌、氣候環境條件下的果蔬，其腐生、內生菌群會存在很大差異，導致酵素髮酵微生物菌群生物學特性不同，進而發酵特性及其代謝產物等不同，最終影響酵素的風味和品質。(3)酵素釀造採用自然或半自然固態或半固態大池或大缸的常溫發酵方式。因此，酵素髮酵地的空氣和水源中微生物以及氣候條件對酵素髮酵過程以及產品品質都會產生很大的影響。根據以上分析，釀造優質的酵素不僅需要先進的技術工藝，還需要優質的果蔬原料以及獨特的環境、氣候條件。目前，國內酵素產品市場尚處於培育階段，潛在市場空間廣闊。然而酵素生產工藝有待進一步改進和提升，以滿足市場的大量需求。

發明內容
本發明的目的是提供一種獼猴桃靈芝複合酵素及其製備方法。為了實現本發明目的，本發明的一種獼猴桃靈芝複合酵素，所述複合酵素的製備方法包括以下步驟I)將去除表面柔毛的獼猴桃洗淨，然後在臭氧水中進行過流式浸沒殺菌；將殺菌後浙幹的獼猴桃打漿；2)將水果洗淨，然後在臭氧水中進行過流式浸沒殺菌；所述水果任選刺梨、梨、火龍果、李子、桔子、檸檬、蘋果、葡萄、草莓等中的至少一種；將殺菌後浙幹的桔子、檸檬、火龍果去皮壓爛；刺梨、梨、李子、蘋果切成小塊，果核或籽保留完好；將葡萄、草莓壓爛，葡萄籽保留完好；3)將處理好的獼猴桃、刺梨、梨、火龍果、李子、桔子、檸檬、蘋果、葡萄和草莓分別按70:4:4:2:2:5:2:3:5:5的重量比混合；4)將西紅柿洗淨，然後在臭氧水中進行過流式浸沒殺菌；將殺菌後浙幹的西紅柿壓爛；5)靈芝發酵物的製備a)斜面菌種培養將靈芝菌接種斜面，28°C ±1°C培養8d ；b)液體菌種的製備將斜面菌種直接轉接至液體種子培養基中，28°C ±1°C，150rpm振蕩培養5_6d，製備得到液體種子液；c)擴大培養將靈芝菌液體種子液按10%的接種量轉接至擴大培養基中，280C ±l°C，30rpm振蕩培養20d，然後靜置培養40d ；6)乳酸菌混合發酵液的製備d)斜面菌種培養將嗜酸乳桿菌(Lactobacillus acidophilus)、發酵乳桿菌(Lactobacillus fermentum)、植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum)、羅伊氏乳桿菌(Lactobacillus reuteri)和鼠李糖乳桿菌(Lactobacillus rhamnosus)分別接種斜面，37 0C ±1°C 培養 24-32h ；e)液體菌種的製備分別將嗜酸乳桿菌、發酵乳桿菌、植物乳桿菌、羅伊氏乳桿菌和鼠李糖乳桿菌斜面菌苔用無菌水製備成菌懸液，按10%的接種量分別轉接至液體種子培養基中，37°C ±l°C，35rpm振蕩培養12_24h ;然後用無菌水調菌濃度為I X 108_2 X IO8Cfu/mL，製備得到液體種子液；f)擴大培養分別將嗜酸乳桿菌、發酵乳桿菌、植物乳桿菌、羅伊氏乳桿菌和鼠李糖乳桿菌的液體種子液按15%的接種量轉接至擴大培養基中，37°C ±l°C，35rpm振蕩培養24-28h，製備得到各乳酸菌發酵液；g)將上述各乳酸菌發酵液按等比例混合，即得到乳酸菌混合發酵液；7)酵母發酵液的製備h)斜面菌種培養將朽1檬形克勒克氏酵母(Kloeckera apiculata)接種斜面，30 0C ±1°C 培養 18-24h ；i)液體菌種的製備將果酒酵母菌苔用無菌水製備成菌懸液，按10%的接種量轉接至液體種子培養基中，30°C 土 rC，125rpm振蕩培養8-12h ;然後用無菌水調整菌濃度為I X 108-2 X 108cfu/mL,製備得到液體種子液；j)擴大培養將果酒酵母液體種子液按15%的接種量轉接至擴大培養基中，300C ±l°C，75rpm振蕩培養8-12h，製備得到酵母發酵液；8)醋酸菌發酵液的製備
k)斜面菌種培養將巴氏醋酸桿菌(Acetobacer pasteurianus)接種斜面，30 0C ±1°C 培養 24-36h ；I)液體菌種的製備將醋酸桿菌用無菌水製備成菌懸液，按10%的接種量轉接至液體種子培養基中，30°C ±l°C，30rpm振蕩培養24-36h ;然後用無菌水調整菌濃度為I X 108-2 X 108cfu/mL,製備得到液體種子液；m)擴大培養將醋酸桿菌液體種子液按13%的接種量轉接至擴大培養基中，300C ±l°C，30rpm振蕩培養8-12h，製備得到醋酸菌發酵液；9)將乳酸菌混合發酵液按每1000ml/100kg西紅柿的量接入步驟4)處理好的西紅柿中，攪拌混合，在30±4°C的條件下密封發酵60d ；10)將酵母發酵液按每700ml/100kg水果的量接入步驟3)處理好的水果中，攪拌混合，在30±4°C的條件下密封發酵60d ；11)將步驟9)和步驟10)中得到的發酵物與步驟5)的靈芝發酵物按6:1:3的重量比混合，在30±4°C的條件下密封發酵40-60d ；12)將步驟11)中得到的發酵物與步驟8)的醋酸菌發酵液按900ml醋酸菌發酵液/IOOkg發酵物的比例混合，在30±4°C的條件下密封發酵50-60d ;最後將所得發酵物過濾，濾液經低溫真空濃縮，即得獼猴桃靈芝複合酵素。所述獼猴桃靈芝複合酵素可以製成飲品或獼猴桃靈芝複合酵素粉。其中，步驟I)、步驟2)和步驟4)中使用的臭氧水濃度為4ppm。本發明還提供一種獼猴桃靈芝複合酵素的製備方法，包括以下步驟I)將去除表面柔毛的獼猴桃洗淨，然後在臭氧水中進行過流式浸沒殺菌；將殺菌後浙幹的獼猴桃打漿；2)將水果洗淨，然後在臭氧水中進行過流式浸沒殺菌；所述水果任選刺梨、梨、火龍果、李子、桔子、檸檬、蘋果、葡萄、草莓等中的至少一種；將殺菌後浙幹的桔子、檸檬、火龍果去皮壓爛；刺梨、梨、李子、蘋果切成小塊，果核或籽保留完好；將葡萄、草莓壓爛，葡萄籽保留完好；3)將處理好的獼猴桃、刺梨、梨、火龍果、李子、桔子、檸檬、蘋果、葡萄和草莓分別按70:4:4:2:2:5:2:3:5:5的重量比混合；4)將西紅柿洗淨，然後在臭氧水中進行過流式浸沒殺菌；將殺菌後浙幹的西紅柿壓爛；5)靈芝發酵物的製備a)斜面菌種培養將靈芝菌接種斜面，280C ± 1°C培養8d ；b)液體菌種的製備將斜面菌種直接轉接至液體種子培養基中，28°C ±1°C，150rpm振蕩培養5_6d，製備得到液體種子液；c)擴大培養將靈芝菌液體種子液按10%的接種量轉接至擴大培養基中，280C ±l°C，30rpm振蕩培養20d，然後靜置培養40d ；6)乳酸菌混合發酵液的製備d)斜面菌種培養將嗜酸乳桿菌(Lactobacillus acidophilus)、發酵乳桿菌(Lactobacillus fermentum)、植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum)、羅伊氏乳桿菌(Lactobacillus reuteri)和鼠李糖乳桿菌(Lactobacillus rhamnosus)分別接種斜面，37 °C ±1°C 培養 24-32h ；e)液體菌種的製備分別將嗜酸乳桿菌、發酵乳桿菌、植物乳桿菌、羅伊氏乳桿菌和鼠李糖乳桿菌斜面菌苔用無菌水製備成菌懸液，按10%的接種量分別轉接至液體種子培養基中，37°C ±l°C，35rpm振蕩培養12_24h ;然後用無菌水調菌濃度為I X 108_2X IO8Cfu/mL，製備得到液體種子液；f)擴大培養分別將嗜酸乳桿菌、發酵乳桿菌、植物乳桿菌、羅伊氏乳桿菌和鼠李糖乳桿菌的液體種子液按15%的接種量轉接至擴大培養基中，37°C ±l°C，35rpm振蕩培養24-28h，製備得到各乳酸菌發酵液；g)將上述各乳酸菌發酵液按等比例混合，即得到乳酸菌混合發酵液；7)酵母發酵液的製備h)斜面菌種培養將朽1檬形克勒克氏酵母(Kloeckera apiculata)接種斜面，30 0C ±1°C 培養 18-24h ；i)液體菌種的製備將果酒酵母菌苔用無菌水製備成菌懸液，按10%的接種量轉接至液體種子培養基中，30°C 土 rC，125rpm振蕩培養8-12h ;然後用無菌水調整菌濃度為I X 108-2 X 108cfu/mL,製備得到液體種子液；j)擴大培養將果酒酵母液體種子液按15%的接種量轉接至擴大培養基中，300C ±l°C，75rpm振蕩培養8-12h，製備得到酵母發酵液；8)醋酸菌發酵液的製備k)斜面菌種培養將巴氏醋酸桿菌(Acetobacer pasteurianus)接種斜面，30 0C ±1°C 培養 24-36h ；I)液體菌種的製備將醋酸桿菌用無菌水製備成菌懸液，按10%的接種量轉接至液體種子培養基中，30°C ±l°C，30rpm振蕩培養24-36h ;然後用無菌水調整菌濃度為I X 108-2 X 108cfu/mL,製備得到液體種子液；m)擴大培養將醋酸桿菌液體種子液按13%的接種量轉接至擴大培養基中，300C ±l°C，30rpm振蕩培養8-12h，製備得到醋酸菌發酵液；9)將乳酸菌混合發酵液按每1000ml/100kg西紅柿的量接入步驟4)處理好的西紅柿中，攪拌混合，在30±4°C的條件下密封發酵60d ；10)將酵母發酵液按每700ml/100kg水果的量接入步驟3)處理好的水果中，攪拌混合，在30±4°C的條件下密封發酵60d ；11)將步驟9)和步驟10)中得到的發酵物與步驟5)的靈芝發酵物按6:1:3的重量比混合，在30±4°C的條件下密封發酵40-60d ；12)將步驟11)中得到的發酵物與步驟8)的醋酸菌發酵液按900ml醋酸菌發酵液/IOOkg發酵物的比例混合，在30±4°C的條件下密封發酵50-60d ;最後將所得發酵物過濾，濾液經低溫真空濃縮，即得獼猴桃靈芝複合酵素。其中，步驟I)、步驟2)和步驟4)中使用的臭氧水濃度為4ppm。步驟5)中a)使用的斜面培養基的配製方法為向馬鈴薯浸汁200g/葡萄糖20g和瓊脂15g中加水1000ml，121°C高壓滅菌20_30min ;所述馬鈴薯浸汁的配製方法為取去皮馬鈴薯200g，切成小塊，加水1000ml，煮沸30min，用紗布過濾，然後補足失水至1000ml，即得。
b)中所述液體種子培養基的配製方法為向馬鈴薯浸汁200g和葡萄糖20g中加水1000ml，121°C高壓滅菌20_30min ;所述馬鈴薯浸汁的配製方法為取去皮馬鈴薯200g，切成小塊，加水1000ml，80°C浸泡lh，用紗布過濾，然後補足失水至1000ml，即得。c)中所述擴大培養基的配製方法為向葡萄糖20g和打碎的刺梨200g中加水1000ml, 121°C高壓滅菌 20_30min，即得。步驟6)中d)使用的斜面培養基的配製方法為向牛肉蛋白粉10g、酵母粉5g、葡萄糖20g、醋酸鈉5g、檸檬酸銨2g、硫酸鎂O. 58g、硫酸錳O. 28g和瓊脂粉15g中加入蒸餾水1000ml，調 ρΗ6· 2 6. 4，121°C高壓滅菌 15_20min，即得。e)中所述液體種子培養基的配製方法為向牛肉膏Sg、胰蛋白腖Sg、酵母粉5g、葡萄糖20g、醋酸鈉5g、檸檬酸銨2g、硫酸鎂O. 58g、硫酸錳O. 28g和吐溫80ml中加入蒸餾水1000ml，調 ρΗ6· 2 6. 4，121°C高壓滅菌 15_20min，即得。f)中所述擴大培養基的配製方法為向牛肉膏8g、胰蛋白腖8g、酵母粉5g、葡萄糖20g、醋酸鈉5g、檸檬酸銨2g、硫酸鎂O. 58g、硫酸錳O. 28g、吐溫80ml和番茄汁IOml中加入蒸餾水1000ml，調ρΗ6· 2 6. 4，121 °C高壓滅菌15_20min，即得。步驟7)中h)使用 的斜面培養基的配製方法為向酵母膏10g、蛋白腖20g、葡萄糖、20g和瓊脂粉15g中加入蒸餾水1000ml，121°C高壓滅菌15_20min，即得。i)中所述液體種子培養基的配製方法為12°麥芽汁，121°C高壓滅菌20min，即得。j)中所述擴大培養基的配製方法為將12°麥芽汁970ml和獼猴桃汁30ml混合，121°C高壓滅菌20-30min，即得；所述獼猴桃汁由獼猴桃直接打漿獲得。步驟8)中k)使用的斜面培養基的配製方法為向葡萄糖9g、酵母粉Sg、碳酸鈣5g和瓊脂粉15g中加水IOOOmL,調ρΗ5· 5。O.1MPa滅菌20min ;滅菌後加95%食用級酒精40mL,即得。I)中所述液體種子培養基的配製方法為向葡萄糖IOg和酵母粉9g中加水IOOOmL,調pH5. 5,0.1MPa滅菌20min ;滅菌後加95%食用級酒精40mL，即得。m)中所述擴大培養基的配製方法為向葡萄糖IOg和酵母粉9g中加水IOOOmL,調ρΗ5· 5。0.1MPa滅菌20min ;滅菌後加95%食用級酒精50mL,即得。以上製備方法中選用的各種水果原料為成熟、無腐爛、無病害的新鮮或貯藏的果實。相對於現有技術，本發明的優點在於(—)製備本發明的獼猴桃靈芝複合酵素所用原料為富含維生素C、多糖、胺基酸等有益成分的獼猴桃與珍貴藥食用真菌靈芝組合，具有抗氧化，養胃腸，預防三高症，提高免疫力，預防癌症等多種生理活性。(二)採用臭氧技術處理原料，可有效殺滅原料表面微生物，同時保證原料的完整性，營養物質及酶等活性物質成分不受影響。(三)採用常溫(<35°C)多菌群、多階段、多層次共發酵技術，實現對獼猴桃等活性物質的生物萃取，所製備的酵素食飲品兼有獼猴桃、靈芝等有效活性成分和各益生菌及其有益代謝產物。


圖1為本發明實施例1中獼猴桃靈芝複合酵素製備工藝流程圖。
具體實施例方式以下實施例用於說明本發明，但不用來限制本發明的範圍。若未特別指明，實施例中所用的技術手段為本領域技術人員所熟知的常規手段，所用原料均為市售商品。實施例獼猴桃靈芝複合酵素的製備1.1原料的選擇獼猴桃選擇已成熟，無腐爛、無病害的獼猴桃果實，可以是新鮮摘取的，也可以是貯藏的。其它水果包括刺梨、梨、火龍果、李子、桔子、檸檬、蘋果、葡萄、草莓，選擇已成熟、無病害、無腐爛的果實，可以是新鮮摘取的，也可以是貯藏的。西紅柿選擇已成熟，無腐爛、無病害的西紅柿，可以是新鮮摘取的，也可以是貯藏的。1. 2原料的前處理1. 2.1獼猴桃的前處理I)挑選出壞、爛果，去除雜物和泥土 ；2)將獼猴桃清洗，去除表面柔毛，浙幹，然後轉入4ppm濃度的臭氧水中進行過流式浸沒殺菌，取出浙幹；3)將殺菌後浙幹的獼猴桃打漿。1. 2. 2其它水果的前處理I)挑選出壞、爛果，去梗，去除雜物和泥土 ；2)清洗，浙幹，然後轉入4ppm濃度的臭氧水中進行過流式浸沒殺菌，取出浙幹；3)將殺菌處理的桔子、檸檬、火龍果去皮壓爛；刺梨、梨、李子、蘋果碎成小塊，但果核或籽不要弄破；葡萄、草莓壓爛，但葡萄籽不要弄破。1. 2. 3西紅柿的前處理I)挑選出壞、爛西紅柿，去除雜物和泥土 ；2)清洗，浙幹，然後轉入4ppm濃度的臭氧水中進行過流式浸沒殺菌，取出浙幹；3)將殺菌處理的西紅柿壓爛，單獨裝入一個已清洗、消毒的陶瓷缸中。1. 3殺菌處理的原料混合將處理好的獼猴桃、刺梨、梨、火龍果、李子、桔子、檸檬、蘋果、葡萄和草莓分別按70:4:4:2:2:5:2:3:5:5的重量比混合，裝入另一個已清洗、消毒的陶瓷缸中。1. 4靈芝發酵物的製備a)斜面菌種培養將靈芝菌接種斜面，28°C ±1°C培養8d。b)液體菌種的製備將斜面菌種直接轉接至液體種子培養基中，28°C ±1°C，150rpm振蕩培養5_6d，製備得到液體種子液。c)擴大培養將靈芝菌液體種子液按10%的接種量轉接至擴大培養基中，28°C ± I°C，30rpm振蕩培養20d，然後靜置培養40d。其中，a)中使用的斜面培養基的配製方法為向馬鈴薯浸汁200g/葡萄糖20g和瓊脂15g中加水1000ml，121°C高壓滅菌20_30min ;所述馬鈴薯浸汁的配製方法為取去皮馬鈴薯200g，切成小塊，加水1000ml，煮沸30min，用紗布過濾，然後補足失水至1000ml，SP得。b)中所述液體種子培養基的配製方法為向馬鈴薯浸汁200g和葡萄糖20g中加水1000ml，121°C高壓滅菌20_30min ;所述馬鈴薯浸汁的配製方法為取去皮馬鈴薯200g，切成小塊，加水1000ml，80°C浸泡lh，用紗布過濾，然後補足失水至1000ml，即得。c)中所述擴大培養基的配製方法為向葡萄糖20g和打碎的刺梨200g中加水1000ml, 121°C高壓滅菌 20_30min，即得。1. 5乳酸菌混合發酵液的製備d)斜面菌種培養將嗜酸乳桿菌(Lactobacillus acidophilus)、發酵乳桿菌(Lactobacillus fermentum)、植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum)、羅伊氏乳桿菌(Lactobacillus reuteri)和鼠李糖乳桿菌(Lactobacillus rhamnosus)分別接種斜面，37 0C ±1°C 培養 24-32h。e)液體菌種的製備分別將嗜酸乳桿菌、發酵乳桿菌、植物乳桿菌、羅伊氏乳桿菌和鼠李糖乳桿菌斜面菌苔用無菌水製備成菌懸液，按10%的接種量分別轉接至液體種子培養基中，37°C ±l°C，3 5rpm振蕩培養12_24h ;然後用無菌水調菌濃度為I X 108_2X IO8Cfu/mL，製備得到液體種子液。f)擴大培養分別將嗜酸乳桿菌、發酵乳桿菌、植物乳桿菌、羅伊氏乳桿菌和鼠李糖乳桿菌的液體種子液按15%的接種量轉接至擴大培養基中，37°C ±l°C，35rpm振蕩培養24-28h，製備得到各乳酸菌發酵液。g)將上述各乳酸菌發酵液按等體積比例混合，即得到乳酸菌混合發酵液。其中，d)中使用的斜面培養基的配製方法為向牛肉蛋白粉10g、酵母粉5g、葡萄糖20g、醋酸鈉5g、檸檬酸銨2g、硫酸鎂0. 58g、硫酸錳0. 28g和瓊脂粉15g中加入蒸餾水1000ml，調 ρΗ6· 2 6. 4，121°C高壓滅菌 15_20min，即得。e)中所述液體種子培養基的配製方法為向牛肉膏Sg、胰蛋白腖Sg、酵母粉5g、葡萄糖20g、醋酸鈉5g、檸檬酸銨2g、硫酸鎂0. 58g、硫酸錳0. 28g和吐溫80ml中加入蒸餾水1000ml，調 ρΗ6· 2 6. 4，121°C高壓滅菌 15_20min，即得。f)中所述擴大培養基的配製方法為向牛肉膏8g、胰蛋白腖8g、酵母粉5g、葡萄糖20g、醋酸鈉5g、檸檬酸銨2g、硫酸鎂0. 58g、硫酸錳0. 28g、吐溫80ml和番茄汁IOml中加入蒸餾水10001111，調口冊.2 6.4，1211高壓滅菌15_20min，即得。1. 6酵母發酵液的製備h)斜面菌種培養將朽1檬形克勒克氏酵母(Kloeckera apiculata)接種斜面，30 0C ±1°C 培養 18-24h。i)液體菌種的製備將果酒酵母菌苔用無菌水製備成菌懸液，按10%的接種量轉接至液體種子培養基中，30°C 土 rC，125rpm振蕩培養8-12h ;然後用無菌水調整菌濃度為I X 108-2X 108cfu/mL,製備得到液體種子液。j)擴大培養將果酒酵母液體種子液按15%的接種量轉接至擴大培養基中，30°C ± 1°C，75rpm振蕩培養8_12h，製備得到酵母發酵液。其中，h)中使用的斜面培養基的配製方法為向酵母膏10g、蛋白腖20g、葡萄糖、20g和瓊脂粉15g中加入蒸餾水1000ml，121°C高壓滅菌15_20min，即得。i)中所述液體種子培養基的配製方法為12°麥芽汁，121°C高壓滅菌20min，即得。j)中所述擴大培養基的配製方法為將12°麥芽汁970ml和獼猴桃汁30ml混合，121°C高壓滅菌20-30min，即得；所述獼猴桃汁由獼猴桃直接打漿獲得。1. 7醋酸菌發酵液的製備k)斜面菌種培養將巴氏醋酸桿菌(Acetobacer pasteurianus)接種斜面，30 0C ±1°C 培養 24-36h。I)液體菌種的製備將醋酸桿菌用無菌水製備成菌懸液，按10%的接種量轉接至液體種子培養基中，30°C ±l°C，30rpm振蕩培養24-36h ;然後用無菌水調整菌濃度為I X 108-2X 108cfu/mL,製備得到液體種子液。m)擴大培養將醋酸桿菌液體種子液按13%的接種量轉接至擴大培養基中，30°C ± I°C，30rpm振蕩培養8_12h，製備得到醋酸菌發酵液。其中，k)中使用的斜面培養基的配製方法為向葡萄糖9g、酵母粉8g、碳酸I丐5g和瓊脂粉15g中加水IOOOmL,調pH5. 5。O.1MPa滅菌20min ;滅菌後加95%食用級酒精40mL，即得。I)中所述液體種子培養基的配製方法為向葡萄糖IOg和酵母粉9g中加水IOOOmL,調pH5. 5,0.1MPa滅 菌20min ;滅菌後加95%食用級酒精40mL，即得。m)中所述擴大培養基的配製方法為向葡萄糖IOg和酵母粉9g中加水IOOOmL,調ρΗ5· 5。0.1MPa滅菌20min ;滅菌後加95%食用級酒精50mL,即得。1. 8 發酵1. 8.1將乳酸菌混合發酵液按每1000ml/100kg西紅柿的量接入上述處理好的西紅柿中，攪拌混合，在30±4°C的條件下密封發酵60d ；1. 8. 2將酵母發酵液按每700ml/100kg水果的量接入1. 3中處理好的水果中，攪拌混合，在30±4°C的條件下密封發酵60d ；1.8. 3將步驟1.8.1和1. 8. 2中得到的發酵物與上述靈芝發酵物按6:1:3的重量比混合，在30±4°C的條件下密封發酵40-60d ；1. 8. 4將步驟1. 8. 3中得到的發酵物與上述醋酸菌發酵液按900ml醋酸菌發酵液/IOOkg發酵物的比例混合，在30±4°C的條件下密封發酵50-60d ;最後將所得發酵物過濾，濾液經低溫真空濃縮，即得獼猴桃靈芝複合酵素。所述獼猴桃靈芝複合酵素可以製成飲品或獼猴桃靈芝複合酵素粉。上述獼猴桃靈芝複合酵素的製備工藝流程如圖1所示。本發明的獼猴桃靈芝複合酵素兼有獼猴桃、靈芝等有效活性成分(如富含微生物素C、胺基酸、靈芝多糖、SOD等)和益生菌(如嗜酸乳桿菌、發酵乳桿菌、植物乳桿菌、羅伊氏乳桿菌和鼠李糖乳桿菌)及其有益代謝產物(如GABA、寡肽、胺基酸等)。這些天然來源的活性物質及益生菌具有滋養胃腸功能，平衡和穩定腸道正常微生物菌群的作用。同時具有抗氧化，提高免疫力，改善亞健康狀態，預防高血脂、高血壓、糖尿病，預防癌症的功效。雖然，上文中已經用一般性說明及具體實施方案對本發明作了詳盡的描述，但在本發明基礎上，可以對之作一些修改或改進，這對本領域技術人員而言是顯而易見的。因此，在不偏離本發明精神的基礎上所做的這些修改或改進，均屬於本發明要求保護的範圍。
權利要求
1.獼猴桃靈芝複合酵素，其特徵在於，所述複合酵素的製備方法包括以下步驟1)將去除表面柔毛的獼猴桃洗淨，然後在臭氧水中進行過流式浸沒殺菌；將殺菌後浙幹的獼猴桃打漿；2)將水果洗淨，然後在臭氧水中進行過流式浸沒殺菌；所述水果任選刺梨、梨、火龍果、 李子、桔子、檸檬、蘋果、葡萄、草莓中的至少一種；將殺菌後浙幹的桔子、檸檬、火龍果去皮壓爛；刺梨、梨、李子、蘋果切成小塊，果核或籽保留完好；將葡萄、草莓壓爛，葡萄籽保留完好；3)將處理好的獼猴桃、刺梨、梨、火龍果、李子、桔子、檸檬、蘋果、葡萄和草莓分別按 70:4:4:2:2:5:2:3:5:5 的重量比混合；4)將西紅柿洗淨，然後在臭氧水中進行過流式浸沒殺菌；將殺菌後浙幹的西紅柿壓5)靈芝發酵物的製備a)斜面菌種培養將靈芝菌接種斜面，280C土 1°C培養8d ；b)液體菌種的製備將斜面菌種直接轉接至液體種子培養基中，28°C±l°C，150rpm振蕩培養5-6d，製備得到液體種子液；c)擴大培養將靈芝菌液體種子液按10%的接種量轉接至擴大培養基中，28°C土 1°C， 30rpm振蕩培養20d，然後靜置培養40d ；6)乳酸菌混合發酵液的製備d)斜面菌種培養將嗜酸乳桿菌(Lactobacillusacidophilus)、發酵乳桿菌 (Lactobacillus fermentum)、植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum)、羅伊氏乳桿菌 (Lactobacillus reuteri)和鼠李糖乳桿菌(Lactobacillus rhamnosus)分別接種斜面， 37 0C ±1°C 培養 24-32h ；e)液體菌種的製備分別將嗜酸乳桿菌、發酵乳桿菌、植物乳桿菌、羅伊氏乳桿菌和鼠李糖乳桿菌斜面菌苔用無菌水製備成菌懸液，按10%的接種量分別轉接至液體種子培養基中，37°C ± 1°C，35rpm振蕩培養12_24h ;然後用無菌水調菌濃度為I X 108-2 X 108cfu/mL,製備得到液體種子液；f)擴大培養分別將嗜酸乳桿菌、發酵乳桿菌、植物乳桿菌、羅伊氏乳桿菌和鼠李糖乳桿菌的液體種子液按15%的接種量轉接至擴大培養基中，37°C ±l°C，35rpm振蕩培養 24-28h，製備得到各乳酸菌發酵液；g)將上述各乳酸菌發酵液按等比例混合，即得到乳酸菌混合發酵液；7)酵母發酵液的製備h)斜面菌種培養將朽1檬形克勒克氏酵母(Kloeckeraapiculata)接種斜面， 30 0C ±1°C 培養 18-24h ；i)液體菌種的製備將果酒酵母菌苔用無菌水製備成菌懸液，按10%的接種量轉接至液體種子培養基中，30°c ±l°C，125rpm振蕩培養8-12h ;然後用無菌水調整菌濃度為 I X 108-2 X 108cfu/mL,製備得到液體種子液；j)擴大培養將果酒酵母液體種子液按15%的接種量轉接至擴大培養基中， 300C ±l°C，75rpm振蕩培養8-12h，製備得到酵母發酵液；8)醋酸菌發酵液的製備k)斜面菌種培養將巴氏醋酸桿菌(Acetobacer pasteurianus)接種斜面,30°C ±1°C 培養 24-36h ；I)液體菌種的製備將醋酸桿菌用無菌水製備成菌懸液，按10%的接種量轉接至液體種子培養基中，30°C ±l°C，30rpm振蕩培養24-36h ;然後用無菌水調整菌濃度為 I X 108-2 X 108cfu/mL,製備得到液體種子液；m)擴大培養將醋酸桿菌液體種子液按13%的接種量轉接至擴大培養基中， 300C ±l°C，30rpm振蕩培養8-12h，製備得到醋酸菌發酵液；9)將乳酸菌混合發酵液按每1000ml/100kg西紅柿的量接入步驟4)處理好的西紅柿中，攪拌混合，在30±4°C的條件下密封發酵60d ；10)將酵母發酵液按每700ml/100kg水果的量接入步驟3)處理好的水果中，攪拌混合， 在30±4°C的條件下密封發酵60d ；II)將步驟9)和步驟10)中得到的發酵物與步驟5)的靈芝發酵物按6:1:3的重量比混合，在30±4°C的條件下密封發酵40-60d ；12)將步驟11)中得到的發酵物與步驟8)的醋酸菌發酵液按900ml醋酸菌發酵液 /IOOkg發酵物的比例混合，在30±4°C的條件下密封發酵50-60d ;最後將所得發酵物過濾， 濾液經低溫真空濃縮，即得獼猴桃靈芝複合酵素。
2.獼猴桃靈芝複合酵素的製備方法，其特徵在於，包括以下步驟1)將去除表面柔毛的獼猴桃洗淨，然後在臭氧水中進行過流式浸沒殺菌；將殺菌後浙幹的獼猴桃打漿；2)將水果洗淨，然後在臭氧水中進行過流式浸沒殺菌；所述水果任選刺梨、梨、火龍果、 李子、桔子、檸檬、蘋果、葡萄、草莓中的至少一種；將殺菌後浙幹的桔子、檸檬、火龍果去皮壓爛；刺梨、梨、李子、蘋果切成小塊，果核或籽保留完好；將葡萄、草莓壓爛，葡萄籽保留完好；3)將處理好的獼猴桃、刺梨、梨、火龍果、李子、桔子、檸檬、蘋果、葡萄和草莓分別按 70:4:4:2:2:5:2:3:5:5 的重量比混合；4)將西紅柿洗淨，然後在臭氧水中進行過流式浸沒殺菌；將殺菌後浙幹的西紅柿壓5)靈芝發酵物的製備a)斜面菌種培養將靈芝菌接種斜面，28°C土 1°C培養8d ；b)液體菌種的製備將斜面菌種直接轉接至液體種子培養基中，28°C±l°C，150rpm振蕩培養5-6d，製備得到液體種子液；c)擴大培養將靈芝菌液體種子液按10%的接種量轉接至擴大培養基中，28°C±1°C， 30rpm振蕩培養20d，然後靜置培養40d ；6)乳酸菌混合發酵液的製備d)斜面菌種培養將嗜酸乳桿菌(Lactobacillusacidophilus)、發酵乳桿菌 (Lactobacillus fermentum)、植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum)、羅伊氏乳桿菌 (Lactobacillus reuteri)和鼠李糖乳桿菌(Lactobacillus rhamnosus)分別接種斜面， 37 0C ±1°C 培養 24-32h ；e)液體菌種的製備分別將嗜酸乳桿菌、發酵乳桿菌、植物乳桿菌、羅伊氏乳桿菌和鼠李糖乳桿菌斜面菌苔用無菌水製備成菌懸液，按10%的接種量分別轉接至液體種子培養基中，37°C ± 1°C，35rpm振蕩培養12_24h ;然後用無菌水調菌濃度為I X 108-2 X 108cfu/mL,製備得到液體種子液；f)擴大培養分別將嗜酸乳桿菌、發酵乳桿菌、植物乳桿菌、羅伊氏乳桿菌和鼠李糖乳桿菌的液體種子液按15%的接種量轉接至擴大培養基中，37°C ±l°C，35rpm振蕩培養 24-28h，製備得到各乳酸菌發酵液；g)將上述各乳酸菌發酵液按等比例混合，即得到乳酸菌混合發酵液；7)酵母發酵液的製備h)斜面菌種培養將朽1檬形克勒克氏酵母(Kloeckeraapiculata)接種斜面, 30 0C ±1°C 培養 18-24h ；i)液體菌種的製備將果酒酵母菌苔用無菌水製備成菌懸液，按10%的接種量轉接至液體種子培養基中，30°c ±l°C，125rpm振蕩培養8-12h ;然後用無菌水調整菌濃度為 I X 108-2 X 108cfu/mL,製備得到液體種子液；j)擴大培養將果酒酵母液體種子液按15%的接種量轉接至擴大培養基中， 300C ±l°C，75rpm振蕩培養8-12h，製備得到酵母發酵液；8)醋酸菌發酵液的製備k)斜面菌種培養將巴氏醋酸桿菌(Acetobacer pasteurianus)接種斜面,30°C ±1°C 培養 24-36h ；I)液體菌種的製備將醋酸桿菌用無菌水製備成菌懸液，按10%的接種量轉接至液體種子培養基中，30°C±l°C，30rpm振蕩培養24-36h;然後用無菌水調整菌濃度為 I X 108-2 X 108cfu/mL,製備得到液體種子液；m)擴大培養將醋酸桿菌液體種子液按13%的接種量轉接至擴大培養基中， 300C ±l°C，30rpm振蕩培養8-12h，製備得到醋酸菌發酵液；9)將乳酸菌混合發酵液按每1000ml/100kg西紅柿的量接入步驟4)處理好的西紅柿中，攪拌混合，在30±4°C的條件下密封發酵60d ；10)將酵母發酵液按每700ml/100kg水果的量接入步驟3)處理好的水果中，攪拌混合， 在30±4°C的條件下密封發酵60d ；11)將步驟9)和步驟10)中得到的發酵物與步驟5)的靈芝發酵物按6:1:3的重量比混合，在30±4°C的條件下密封發酵40-60d ；12)將步驟11)中得到的發酵物與步驟8)的醋酸菌發酵液按900ml醋酸菌發酵液 /IOOkg發酵物的比例混合，在30±4°C的條件下密封發酵50-60d ;最後將所得發酵物過濾， 濾液經低溫真空濃縮，即得獼猴桃靈芝複合酵素。
3.根據權利要求2所述的製備方法，其特徵在於，步驟I)、步驟2)和步驟4)中使用的臭氧水濃度為4ppm。
4.根據權利要求2所述的製備方法，其特徵在於，步驟5)中a)使用的斜面培養基的配製方法為向馬鈴薯浸汁200g/葡萄糖20g和瓊脂15g中加水1000ml，121°C高壓滅菌 20-30min ;所述馬鈴薯浸汁的配製方法為取去皮馬鈴薯200g，切成小塊，加水1000ml，煮沸30min，用紗布過濾，然後補足失水至1000ml，即得；b)中所述液體種子培養基的配製方法為向馬鈴薯浸汁200g和葡萄糖20g中加水1000ml，121°C高壓滅菌20-30min ;所述馬鈴薯浸汁的配製方法為取去皮馬鈴薯200g，切成小塊，加水1000ml，80°C浸泡lh，用紗布過濾，然後補足失水至1000ml，即得；c)中所述擴大培養基的配製方法為向葡萄糖20g和打碎的刺梨200g中加水1000ml， 121°C高壓滅菌20-30min,即得。
5.根據權利要求2所述的製備方法，其特徵在於，步驟6)中d)使用的斜面培養基的配製方法為向牛肉蛋白粉10g、酵母粉5g、葡萄糖20g、醋酸鈉5g、檸檬酸銨2g、硫酸鎂 O. 58g、硫酸錳O. 28g和瓊脂粉15g中加入蒸餾水1000ml，調ρΗ6· 2 6. 4，121°C高壓滅菌 15-20min,即得；e)中所述液體種子培養基的配製方法為向牛肉膏8g、胰蛋白腖8g、酵母粉5g、葡萄糖20g、醋酸鈉5g、檸檬酸銨2g、硫酸鎂O. 58g、硫酸錳O. 28g和吐溫80ml中加入蒸餾水 1000ml，調 ρΗ6· 2 6. 4，121 °C高壓滅菌 15_20min，即得；f)中所述擴大培養基的配製方法為向牛肉膏8g、胰蛋白腖8g、酵母粉5g、葡萄糖20g、 醋酸鈉5g、檸檬酸銨2g、硫酸鎂O. 58g、硫酸錳O. 28g、吐溫80ml和番茄汁IOml中加入蒸餾水 1000ml，調 ρΗ6· 2 6. 4，121°C高壓滅菌 15_20min，即得。
6.根據權利要求2所述的製備方法，其特徵在於，步驟7)中h)使用的斜面培養基的配製方法為向酵母膏10g、蛋白腖20g、葡萄糖、20g和瓊脂粉15g中加入蒸懼水1000ml, 121°C高壓滅菌15_20min,即得；i)中所述液體種子培養基的配製方法為12°麥芽汁，121°C高壓滅菌20min，即得；j)中所述擴大培養基的配製方法為將12°麥芽汁970ml和獼猴桃汁30ml混合， 121°C高壓滅菌20-30min，即得；所述獼猴桃汁由獼猴桃直接打漿獲得。
7.根據權利要求2所述的製備方法，其特徵在於，步驟8)中k)使用的斜面培養基的配製方法為向葡萄糖9g、酵母粉8g、碳酸I丐5g和瓊脂粉15g中加水IOOOmL,調pH5. 5。 O.1MPa滅菌20min ;滅菌後加95%食用級酒精40mL，即得；I)中所述液體種子培養基的配製方法為向葡萄糖IOg和酵母粉9g中加水IOOOmL,調 pH5. 5,0.1MPa滅菌20min ;滅菌後加95%食用級酒精40mL,即得；m)中所述擴大培養基的配製方法為向葡萄糖IOg和酵母粉9g中加水IOOOmL,調 ρΗ5· 5。O.1MPa滅菌20min ;滅菌後加95%食用級酒精50mL,即得。
8.根據權利要求2-7任一項所述的製備方法，其特徵在於，選用的各種水果原料為成熟、無腐爛、無病害的新鮮或貯藏的果實。
全文摘要
本發明提供了一種獼猴桃靈芝複合酵素及其製備方法，向以獼猴桃為主要原料的水果中引入靈芝菌，經過發酵工程及生物萃取技術處理，加工成營養價值更高的、保健效果更好的酵素食飲品。本發明所用原料為富含維生素C、多糖、胺基酸等有益成分的獼猴桃與珍貴藥食用真菌靈芝組合，具有抗氧化，養胃腸，預防三高症，提高免疫力，預防癌症等多種生理活性；採用臭氧技術處理原料，可有效殺滅原料表面微生物，同時保證原料的完整性，營養物質及酶等活性物質成分不受影響；採用常溫(26-34℃)多菌群、多階段、多層次共發酵技術，實現對獼猴桃等活性物質的生物萃取，所製備的酵素食飲品兼有獼猴桃、靈芝等有效活性成分和各益生菌及其有益代謝產物。
文檔編號A23L1/29GK103039883SQ20131001598
公開日2013年4月17日 申請日期2013年1月16日 優先權日2013年1月16日
發明者周禮紅, 丁旭, 陳立傑 申請人:周禮紅