一種傘滑刃屬線蟲的培養與收集方法及其裝置的製作方法

2023-10-05 02:30:14 2

專利名稱：一種傘滑刃屬線蟲的培養與收集方法及其裝置的製作方法
技術領域：
本發明涉及一種傘滑刃屬線蟲的培養與收集方法及其裝置，屬線蟲培養技 術領域。
背景技術：
'植物病原線蟲的培養是植物病理學教學與科研中重'要的實驗環節。針對傘
滑刃屬中松材線蟲和擬松材線蟲，最常用的培養方法是PDA培養基灰葡萄孢菌 培養法，通常在玻璃培養皿中進行。具體方法是先將灰葡萄孢菌接種在無菌的 固體PDA培養基上，培養灰葡萄孢長滿培養皿時，接種所需要的線蟲，培養約 兩周後當可見大量灰葡萄孢菌絲被線蟲取食時，即可用無菌水衝洗培養基表面 回收線蟲，該方法存在的主要缺點是1.回收到的線蟲懸浮液中混有大量的灰 葡萄孢菌絲和孢子；2.獲得的線蟲懸浮液中死蟲佔了相當大的比例；3.獲得蟲 量相對較少。此外也有學者提出用三角瓶裝麥粒培養基進行培養，此方法獲得 蟲量較大，但死蟲數量較多，菌絲碎片和孢子混雜的缺點依然存在。因此在後 續實M中，不得不從大量的線蟲懸浮液中逐條挑取以獲得乾淨的健康活蟲，從 而加大實驗難度，延長實驗時間，費工費時。因此，線i的培養及實驗用蟲的 選取成為研究植物病原線蟲的一個重要難題。
經文獻檢索，未見與本發明相同的公開報導。

發明內容
本發明的目的在於克服現有技術之不足，提供一種傘滑刃屬線蟲的培養與 收集方法及其裝置。
本發明的傘滑刃屬線蟲的培養與收集方法由常規的培養與收集方法改進
而成，具體步驟如下
a. 選用密封性較好的組織培養瓶；
b. 選用通用2毫升離心管，將離心管的蓋(3)和離心管(4)用小刀分開, 切除多餘的部分，保證其切口平滑，用半固體膠將離心管(4)與離心管蓋(3) 的接口粘合至無縫隙，風乾、消毒，滅菌備用；
c/在組織培養瓶蓋(2)上選取對稱的數個位點；
d. 測量離心管蓋(3)的直徑，選用小於離心管蓋G)直徑的打孔器在組 織培養瓶蓋(2)上對稱位點打孔；
e. 將離心管蓋(3)鑲嵌在織培養瓶蓋(2)上的孔中；
f. 在組織培養瓶體(1).中裝入麥粒培養基至四分之三處，蓋上常規組織 培養瓶蓋(2)，常規滅菌接種灰葡萄孢和所需培養的蟲體；
g. 當所培養線蟲開始取食灰葡萄孢時，在超淨工作檯上用權利要求2所述 的蓋子消毒後替換常規組織培養瓶蓋(2)，放入25"C培養箱中培養；
h. 培養兩到三天後，松材線蟲爬上組織培養瓶瓶壁並一部分進入離心管
(4)中；
'i.將已收集到松材線蟲的離心管管體拔下，用於實驗研究；同時將滅菌備 用的未使用過離心管管體鑲嵌在織培養瓶蓋(2)上已打好的孔中，繼續收集；
j.經過多次收集，在後期蟲量少的情況下，向組織培養瓶中噴入霧狀無菌
水促進收集；
k.當實驗研究需要純活蟲時，提前12小時將已收集到松材線蟲的離心管 管體拔下，同時將滅菌備用的新離心管管體鑲嵌在織培養瓶蓋(2)上的孔中， 次日離心管管體中收集的線蟲即為活蟲。 '
本發明的傘滑刃屬線蟲培養與收集方法的裝置，由組織培養瓶體(1)和 組織堉養瓶蓋(2)組成，其中組織培養瓶蓋(2)上開有孔，孔中鑲嵌有由 離心管蓋(3)和離心管U)'構成的離心管管體。本實用新型的離心管U) 的數量按需要確定；組織培養瓶選用通用的任何形狀的透明瓶。
本發明與現有技術相比，具有結構簡單，線蟲培養及實驗用蟲選取的操作
程序簡便，實驗難度降低，實驗時間短，實驗用蟲的純度及實驗結果的準確性 提高等優點。可廣泛用於傘清刃屬線蟲的培養及高純度蟲群的收集。


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附圖是本發明裝置的結構示意圖。
具體實施例方式
'本發明方法採用的裝置，由組織培養瓶體(1)和組^U咅養瓶蓋(2)組成， 其中組織培養瓶蓋(2)上開有孔，孔中鑲嵌有由離心管蓋(3)和離心管(4)
構成的離心管管體。本實用新型的離心管(5)的數量按需要確定；組織培養
瓶選用通用的任何形狀的透明瓶。
本發明的傘滑刃屬線蟲的培養與收集方法由常規的培養與收集方法改進
而成，具體步驟如下
a. 選用密封性較好的組織培養瓶；
b. 選用通用2毫升離心管，將離心管的蓋(3)和離心管(4)用小刀分開， 切除多餘的部分，保證其切口平滑，用半固體膠將離心管(4)與離心管蓋(3) 的接口粘合至無縫隙，風乾、'消毒，滅菌備用；
c. 在組織培養瓶蓋(2)上選取對稱的3個位點；
d. 測量離心管蓋(3)的直徑，選用小於離心管蓋(3)直徑的打孔器在組 織培養瓶蓋(2)上對稱位點打孔；
e. 將離心管蓋(3)鑲嵌在織培養瓶蓋(2)上的孔中；
f. 在組織培養瓶體(1)中裝入麥粒培養基至四分之三處，蓋上常規組織
培養瓶蓋(2)，常規滅菌接種灰葡萄孢和所需培養的松材線蟲；
g. 當所培養松材線蟲開始取食灰葡萄孢時，在超淨工作檯上用權利要求2 所述的蓋子消毒後替換常規組織培養瓶蓋(2)，放入25"C培養箱中培養；
.h.培養兩到三天後，松材線蟲爬上組織培養瓶瓶寧並一部分進入離心管 (4)中；
i.將已收集到松材線蟲的離心管管體拔下，用於實驗研究；同時將滅菌備 用的未使用過離心管管體鑲嵌在織培養瓶蓋(2)上已打好的孔中，再次收集;
j.經過多次收集，在後期蟲量少的情況下，向組織培養瓶中噴入霧狀無菌 水促進收集；
k.當實驗研究需要純活蟲時，提前12小時將已收集到松材線蟲的離心管 管體拔下，同時將滅菌備用的新離心管管體鑲嵌在織培養瓶蓋(2)上的孔中， 次曰離心管管體中收集的線蟲即為活蟲。
權利要求
1、一種傘滑刃屬線蟲的培養與收集方法，由常規的培養與收集方法改進而成，其特徵在於a.當所培養線蟲開始取食灰葡萄孢時，在超淨工作檯上用權利要求2所述的蓋子消毒後替換常規組織培養瓶蓋(2)，放入25℃培養箱中培養；b.培養兩到三天後，線蟲爬上組織培養瓶瓶壁並一部分進入離心管(4)中；c.將已收集到線蟲的離心管管體拔下，用於實驗研究；同時將滅菌備用的未使用過離心管管體鑲嵌在織培養瓶蓋(2)上已打好的孔中，繼續收集；d.經過多次收集，在後期蟲量少的情況下，向組織培養瓶中噴入霧狀無菌水促進收集；e.當實驗研究需要純活蟲時，提前12小時將已收集到線蟲的離心管管體拔下，同時將滅菌備用的新離心管管體鑲嵌在織培養瓶蓋(2)上的孔中，次日離心管管體中收集的線蟲即為活蟲。
全文摘要
本發明涉及一種傘滑刃屬線蟲的培養與收集方法及其裝置，屬線蟲培養技術領域。裝置是由組織培養瓶體(1)、組織培養瓶蓋(2)、鑲嵌在組織培養瓶蓋(2)上由離心管蓋(3)和離心管(4)構成的離心管管體組成。方法由常規的培養與收集方法改進而成。本發明與現有技術相比，具有結構簡單，簡化了常規線蟲培養及實驗用蟲選取複雜的操作程序，實驗難度降低，節省了實驗時間，實驗用蟲的純度及實驗結果的準確性提高等優點。可廣泛用於傘滑刃屬線蟲的培養及高純度蟲群的收集。
文檔編號A01K67/033GK101347110SQ200810058860
公開日2009年1月21日 申請日期2008年8月28日 優先權日2008年8月28日
發明者喻盛甫, 姚茹瑜, 李維蛟, 揚 王, 陳志星 申請人:雲南農業大學