具有3-苯基-7-羥基香豆素結構的化合物及其藥用用途的製作方法

2023-10-05 18:31:59

專利名稱：：具有3-苯基-7-羥基香豆素結構的化合物及其藥用用途的製作方法
技術領域：
：本發明屬有機化學及藥物合成領域，涉及具有3-取代苯基-4-甲基-7-羥基香豆素結構，同時6-位具有特定取代基的新化合物，及該新化合物顯著的新生血管抑制活性的藥用用途。
背景技術：
：血管新生(Angiogenesis)在腫瘤的生成、侵潤以及轉移過程中起著非常關鍵的作用，腫瘤組織較正常組織富含血管，血管為腫瘤組織提供其生長必需的營養成分和氧。而對普通成年人而言，除了一些特殊的生理需求，如女性的生殖系統、組織損傷或缺氧以外，脈管系統的內皮細胞通常是相對靜止的，在體內這些內皮細胞可以存活超過1000多天。因此，20世紀70年代JudahFolkman提出了腫瘤生長依賴於新生血管的理論，並提出通過抑制血管生長、切斷營養供給而達到抑制和消除腫瘤的設想。現有技術揭示了血管生成過程的複雜過程，包括血管舒張、血管通透性增加、周圍基質降解，內皮細胞(endothelialcells，EC)活化、移行、增生、出芽生長形成管腔，最後新生血管成熟、重塑構成血管網。新生血管的生成過程受血管生成正、負因子的共同調控，生長因子的濃度上升或抑制因子的濃度下降使開關處於開放狀態，從而導致血管形成。有關研究將血管內皮細胞作為藥物研究的耙標，其優勢表現為l.與腫瘤細胞相比，血管內皮細胞的穩定性，很少發生自發的變異，因而不容易發生抗腫瘤藥物常見的耐藥性；2.腫瘤血管內皮細胞裂分速度是正常組織血管內皮細胞的50-100倍，處於高速分裂的血管內皮細胞比相對靜止的細胞具有更多的信號表達；3.血管新生在普通成人中的發生是有限的;4.藥物對血管內皮細胞的作用相對容易而且直接；5.成千上萬的腫瘤細胞的生長依賴於非常細小的一段微血管，因而摧毀少量的腫瘤微血管即能夠阻斷腫瘤細胞的生長，以能達到放大效果(^W2Ype朋/.oZT朋cer，2005，41，1109-1116)。因此腫瘤的血管系統已成為一個嶄新的、有希望的抗腫瘤治療靶點。以腫瘤血管生成為靶點，開發血管生成抑制藥在抗腫瘤研究中成為了一個新的十分活躍的研究領域。從Folkman提出了腫瘤生長依賴於新生血管的理論至今三十多年中，有關血管新生的生理和病理過程研究有了飛躍性進展，同時也相繼出現了多種多樣的新生血管抑制劑用於腫瘤治療。目前大約有20多種血管生成抑制藥已進入臨床I-III期試驗，並且證實了對多種腫瘤具有優良的抗腫瘤活性。其中已被批准進入臨床的藥物，一個是單克隆抗體Bevacizumab(Avastin)，作用耙點為VEGF-A,由Genentech公司研發，於2004年於美國上市，與其他藥物聯合使用用於結腸癌、乳腺癌以及肺癌的治療；另一個是由Pfizer公司開發的VEGFRs酪氨酸激酶抑制劑SU11248(Sutent，Sunitinib)，臨床用於治療亞穩定態腎癌(mRCC)(Crit.Rev.Oncol./Hematol.(2007),doi:10.1016/j.critrevonc.2007.01.002)。2-甲氧基雌二醇(2-Methoxyestmdiol，1)是20世紀70年代研究雌激素代謝過程時，在人體內發現的雌二醇(Estradiol)的代謝產物。近期國外對其藥理作用進行了深入研究，發現2-甲氧基雌二醇能擾亂微血管的生成，包括刺激活化蛋白激酶信號和調節Fas表達，誘導內皮細胞的凋亡和抑制新生血管生成，是很好的新生血管形成抑制劑。進一步研究表明它可用來治療多發性骨髓瘤、前列腺癌、乳腺癌等疾病，具有廣譜抗腫瘤作用，同時該化合物不依賴雌激素受體，無雌激素作用。由於其本身即為人體內源性的活性代謝產物而在臨床上表現出的低毒性，雖然由於其存在來源不足的缺陷，但其作為新興的腫瘤化學治療藥物仍具有非常優勢的前景。目前有數十個國家針對腫瘤治療正在進行臨床研究，並分別進入I或II期臨床試驗(屍/ar鵬co^er鄰v，2003,23,165)。所述的2-甲氧基雌二醇為具有剛性骨架的甾體結構化合物，具有式I的結構。
發明內容本發明的目的是提供具有3-苯基-7-羥基香豆素結構的化合物，該類化合物與2-甲氧基雌二醇具有相似的結構特徵，而結構骨架為非甾體結構類型。本發明的進一步目的是提供上述化合物的藥用用途，具體涉及所述化合物在製備抑制腫瘤新生血管藥物中的用途。本發明的化合物具有式II的結構II其中，3-位苯基上取代基R產-OH,-OCH3,-N02,-NH2，-NHR,或-服2R為1-6個碳原子的烴基;6-位取代基R產F，-Cl，-Brj-OCH3。本發明所涉及的3-苯基-7-羥基香豆素結構的化合物通過下述方法製備首先分別合成式II中Rt=-OCH3(甲氧基)和=-N02(硝基)的化合物，對甲氧基進行脫甲基反應獲得^:-OH化合物，對硝基進行還原反應可獲得R4=-NH2化合物，氨基烴化獲得=-NHR或&=-NR2化合物。其中，所涉及的3-甲氧基苯基-7-羥基香豆素=-OCH3和3-硝基苯基-7-羥基香豆素^=-N02的製備方法是按反應式1採用5-取代-2，4-二羥基苯乙酮分別與對甲氧基苯乙醯氯和對硝基苯乙醯氯在鹼性條件下縮合完成繼而對反應式1產物中的Ri基團即甲氧基和硝基做相應的結構改造，反應式2為當&為甲氧基時，在Lewis酸條件下脫去甲基，即可生成R產-OH的產物formulaseeoriginaldocumentpage8反應式3為當Ri為硝基時，在Fe/酸條件下，硝基可還原為氨基，獲得R產-NH2產物，對氨基烴化可獲得一系列3-位苯基對位不同胺基取代的衍生物formulaseeoriginaldocumentpage8本發明對式II的具有3-取代苯基-4-甲基-7-羥基香豆素結構的新化合物，進行了臍靜脈內皮細胞模型篩藥實驗，生物活性測定結果顯示，所述化合物具有與陽性對照物2-甲氧基雌二醇相當的新生血管抑制活性。所述化合物可製備新生血管抑制藥物。具體實施例方式實施例1合成3"(4-對甲氧基苯基)-4-甲基-6-溴-7-羥基香豆素formulaseeoriginaldocumentpage8108mg(1.01mmol)對甲氧基苯乙酸製備成醯氯，加入到62mg(0.27mmol)5-溴-2，4-二羥基苯乙酮，llmL丙酮，907mg(6.58mmol)碳酸鉀的反應液中。回流攪拌，反應2h後TLC顯示反應完全。過濾碳酸鉀，濾液減壓蒸乾丙酮，加入2NHCl調pH二2，乙酸乙酯抽提，千燥濃縮得淡黃色固體，乙酸乙酯重結晶得純品約60mg(62%)，mp:264-268°C。力-醒R(400MHz，CDC13):2.28(s,3H，4-CH3)，3.85(s,3H,4，-OCH3)，5.94(s,H，7-OH)，6.98-7.00(d,2H，/=6.65Hz,3',5，-H)，7.22-7.23(d，2H,/=6.65Hz,2，，6，畫H),7.03(s，H,8畫H)，7.77(s,H,5畫H);MS(m/e，％):360(M+，13.42)，362(同位素峰，11.15),361(M+l，6.24)。實施例2合成3-(4-對硝基苯萄-4-甲基-6-溴-7-羥基香豆素180mg(1.01mmol)對硝基苯乙酸製備成醯氯，加入到70mg(0.31mmol)5-溴-2，4-二羥基苯乙酮，15mL丙酮，1g(7.25mmol)碳酸鉀的反應液中。回流攪拌，反應2h後TLC顯示反應完全。過濾碳酸鉀，濾液減壓蒸乾丙酮，加入2NHCl調pH二2，乙酸乙酯抽提，合併有機相，水洗中性，乾燥濃縮得淡黃色固體，乙酸乙酯重結晶得純品約65mg(56%)。力-醒R(400MHz,CDC13):2.30(s，3H,4-CH3),5.94(s,H,7-OH),7.10-7.11(d，2H,/=6.68Hz,3'，5，-H),7.24-7.25(d，2H，/=6.68Hz:2，，6，-H),7.08(s，H，8國H)，7.84(s,H,5-H);MS(m/e，%):375(]VT),377(同位素峰)。實施例3合成3-(4-對甲氧基苯基)-4-甲基-6-甲氧基-7-羥基香豆素formulaseeoriginaldocumentpage10108mg(1.01mmol)對甲氧基苯乙酸製備成醯氯，加入到58mg(0.32mmol)5-甲氧基-2，4-二羥基苯乙酮，15mL丙酮，1g(7.25mmol)碳酸鉀的反應液中。回流攪拌，反應2h後TLC顯示反應完全。過濾碳酸鉀，濾液減壓蒸乾丙酮，加入2NHCl調pH二2，乙酸乙酯抽提，合併有機相，乾燥濃縮得淡黃色固體，乙酸乙酯重結晶得純品約55mg(55%)mp:206-210。C。iH國醒R(400MHz,CDCl3):2.30(s,3H，4畫CH3),3.85(s，3H,6-OCH3)，3.99(s，3H,4,-OCH3)，6.09(s，H，7畫OH),6.95(s,H,8-H)，6.97-6.99(d,2H，《/=6.65Hz，3',5，-H),6.99(s，H,5-H),7.23-7.24(d,2H,/=6.65Hz,2',6，隱H),;MS(m/e，％):312(M+,34.81),313(M+1,6.24)。實施例4合成3-(4-對硝基苯基)-4-甲基-6-甲氧基-7-羥基香豆素formulaseeoriginaldocumentpage10180mg(1.01mmol)對硝基苯乙酸製備成醯氯，加入到64mg(0.36mmol)5-甲氧基-2，4-二羥基苯乙酮，15mL丙酮，1g(7.25mmol)碳酸鉀的反應液中。回流攪拌，反應2h後TLC顯示反應完全。過濾碳酸鉀，濾液減壓蒸乾丙酮，加入2NHCl調pH二2，乙酸乙酯抽提，得淡黃色固體，乙酸乙酯重結晶得純品約76mg(65%)。iH-NMR(400MHz，CDC13):2.31(s,3H,4-CH3)，3.88(s,3H,6-OCH3),6.09(s,H,7國0H)，6.99(s,H,8-H),7.17-7.19(d,2H，6.65Hz,3',5，-H),7.20(s,H，5-H),7.43-7.44(d,2H,/=6.65Hz,2',6,-H)，；MS(m/e，％):327(M+),328(M+l)。實施例5合成3-(4-對羥基苯萄-4-甲基-6-溴-7-羥基香豆素,OCH3a乂OHO、03-(4-對甲氧基苯基)-4-甲基-6-溴-7-羥基香豆素1.08g(3.00mmol)溶於10mLCH2Cl2中，冰鹽浴條件下，滴加0.8mLBBr3溶於10mLCH2Cl2的溶液，2h滴加完畢。自然升溫至室溫(20°C)，攪拌lh後TLC跟蹤顯示反應完全。冰水浴冷卻下，反應液中緩慢滴加50XNa2CO3水溶液，調至pH-4。CH2Cl2抽提，合併有機相，水洗至中性，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓除去溶劑得油狀物1.28g。粗品柱層析(矽膠H，石油醚丙酮10:3)得目標化合物0.60g，收率62%，mp>300°C.^-NMR(400MHz,DMS0-4):2.21(s,3H,4-CH3),6.78-6.81(d,2H，J=8.61Hz,2，，6,-H)，7.05-7.08(d，2H，/=8.61Hz,3，，5，-H)，6.89(s,H,8-H),7.90(s，H，5國H)，9.57(s,H,4,-OH),11.34(s，H,7畫OH);MS(m/e，％):346(M+，15.66)，348(同位素峰，15.15)。實施例6合成3-(4-對羥基苯基)-4-甲基-6-甲氧基-7-羥基香豆素3-(4-對甲氧基苯基)-4-甲基-6-甲氧基-7-羥基香豆素78mg(0.25mmol)溶於10ml二氯甲垸中，加入100mgAlCl3(0.75mmol)，滴加丙二硫醇132mg(1.23mmol)，室溫攪拌，反應液呈酒紅色。攪拌60小時後，停止反應。2N鹽酸水溶液淬滅反應，二氯甲垸萃取，合併有機相，水洗至中性，無水Na2S04乾燥，過濾濃縮得油狀物。柱層析(矽膠H，石油醚乙酸乙酯=20:l)分離得目標產物白色固體64mg(73%)，mp>300°C。iH國NMR(400MHz,DMSO-4):2.06(s,3H，4-CH3),3.85(s,3H，6-OCH3)，6.78(s，H,8-H),6.78-6.80(d，2H，J=8.78Hz，2',6，-H)，7.05-7.07(d，2H，《/=8.29他，3，，5，-H)，7.16(s,H,5-H)，9.53(s，H，4'-OH)，10.21(s，H，7-OH);MS(m/e,%):298(M+,53.79)，299(M+1,14.10)。實施例7生物活性測定臍靜脈內皮細胞模型篩藥法1.原代臍靜脈內皮細胞分離培養在臍靜脈內注入膠原酶，震蕩培養，吸出靜脈腔內膠原酶所消化的細胞懸液，置入離心管中，離心；棄上清，在沉澱加入5mLM199培養液，接種於培養瓶，放5XC02孵箱；隔天換液，以後每2—3天換液一次。2.傳代培養待內皮細胞融合80%時即可傳代。加入0.1%胰酶，待鏡下見大多數細胞巻縮變圓，可加入含10%胎牛血清的培養液。收取細胞懸液，加入離心管中，離心。棄上清，以M199培養液重懸細胞；調整細胞濃度以5X104/mL的密度接種於25cm培養瓶中。3.藥物對HUVEC增殖的抑制作用，確定IC501)選培養瓶培養的，生長良好80—90%匯合的細胞，胰蛋白酶消化，製成懸液，計數，接種入96孔板，向每孔中接種細胞懸液，5X104/孔，置溫箱中培養，細胞進入指數增生期；2)加入5個不同濃度的測試藥物，置37。C溫箱中培養48小時，對照組不加藥；3)再加入MTT溶液，繼續培養4小時；小心吸去孔內培養液，每孔加入DMSO後，在酶聯免疫檢測儀570nm處測量各孔的吸光值。細胞增殖抑制率=(對藥一給藥)/對照X100%。生物活性測定結果顯示，所述化合物具有與陽性對照物2-甲氧基雌二醇相當的新生血管抑制活性。所述化合物可製備新生血管抑制藥物。表1是本發明的化合物的新生血管抑制活性結果。tableseeoriginaldocumentpage13權利要求1、式II結構的具有3-取代苯基-4-甲基-7-羥基香豆素結構、同時6-位具有取代基化合物其中，3-位苯基上取代基R1＝-OH，-OCH3，-NO2，-NH2，-NHR，或-NR2，R為1-6個碳原子的烴基；6-位取代基R2＝-F，-Cl，-Br，或-OCH3。2、權利要求1的化合物的製備方法，其特徵是通過下述方法首先分別合成式II中R1=-OCH3和R1=-N02的化合物，對甲氧基進行脫甲基反應獲得R1=-OH化合物，對硝基進行還原反應可獲得R1=-NH2化合物，氨基烴化獲得R1=-NHR或R1=-NR2化合物。3、按權利要求2的製備方法，其特徵是，其中，按反應式1採用5-取代-2，4-二羥基苯乙酮分別與對甲氧基苯乙醯氯和對硝基苯乙醯氯在鹼性條件下縮合完成製備3-甲氧基苯基-7-羥基香豆素R1=-OCH3和3-硝基苯基-7-羥基香豆素R1=-N02，formulaseeoriginaldocumentpage2對反應式1產物中的甲氧基和硝基做結構改造，當R1為甲氧基時，在Lewis酸條件下脫去甲基，按反應式2生成R1=-OH的產物formulaseeoriginaldocumentpage3當R,為硝基時，在Fe/酸條件下，按反應式3，硝基還原為氨基，獲得R產-皿2產物，對氨基烴化獲得3-位苯基對位不同胺基取代的衍生物全文摘要本發明屬有機化學及藥物合成領域，涉及式II結構的具有3-取代苯基-4-甲基-7-羥基香豆素結構，同時6-位具有特定取代基的新化合物，經臍靜脈內皮細胞模型篩藥實驗，生物活性測定結果顯示，所述化合物具有與陽性對照物2-甲氧基雌二醇相當的新生血管抑制活性，所述化合物可製備新生血管抑制藥物。其中，R1＝-OH，-OCH3，-NO2，-NH2，-NHR，或-NR2，R為1-6個碳原子的烴基；R2＝-F，-Cl，-Br，或-OCH3。文檔編號A61P9/00GK101386612SQ200710045758公開日2009年3月18日申請日期2007年9月10日優先權日2007年9月10日發明者鵬夏,倩張,霖曹,焰朱,皓蔣,昊鄒申請人:復旦大學