用於治療mcp-1/ccr2相關疾病的分子及其使用方法

2023-10-09 09:41:14

專利名稱：：用於治療mcp-1/ccr2相關疾病的分子及其使用方法用於治療MCP-1/CCR2相關疾病的分子及其使用方法本發明的領域和背景本發明涉及新的分子，更具體地，涉及治療MCP-1/CCR2相關疾病，例如炎症性疾病和癌症的方法。在過去的幾年，描述了越來越多的白細胞化學吸引劑/活化因子(趨化因子)[Oppenheim，J.J."Annu.Rev.Immunol.,9:617-648(1991);SchallandBacon,Curr.Opm.Immunol.,6:865-873(1994);Baggiolmi,M.,""/.,Adv.Im腸l.,55:97-1-79(1994)]。應答早期炎症性介導物例如IL-1卩或TNF-a，各種各樣的細胞類型產生和分泌了趨化因子。趨化因子超家族包括兩個主要的分支a-趨化因子(也稱為CXC趨化因子)和(3-趨化因子(也稱為CC趨化因子)。這種分類基於胺基酸序列中的前兩個半胱氨酸是被單個氨基分隔(CXC)還是相鄰的(CC)。a-趨化因子分支包括蛋白質例如IL-8、嗜中性粒細胞活化肽-2(NAP-2)、黑素瘤生長刺激活性(MGSA/gro或GROa)和ENA-78,它們每一種都主要對嗜中性粒細胞和T、淋巴細胞具有吸引和活化效應。P-趨化因子分支的成員影響其他血細胞類型，例如單核細胞、淋巴糹田月包、p耆石鹹'(i細月包禾口p耆曙糹工細月包[Oppenheim,J.J.a/"Annu.Rev.Immunol.,9:617-648(1991);Baggiolmi,M.,e/1a/.,Adv.Imunol.,55:97-179(1994);MillerandK腦gel,CntRev.Immunol.,12:17-46(1992);Jose,P.J.,"a/.,J.Exp.Med.,179:881-118(1994);Ponath,P.D.,""/.,J.Clm.Invest,97:604-612(1996)]，包括蛋白質例如單核細胞趨化性蛋白1-4(MCP-l、MCP-2、MCP-3和MCP-4)、RANTES和巨噬細胞炎症性蛋白(MlP-la和MIP-l卩)。趨化因子超家族的第三個較小的分支包括膜結合趨化因子。這種類型的成員被稱為CX3C趨化因子[Bazan,J.F.，""/.,Nature385:640-644(1997)]。趨化因子可以介導針對白細胞的一系列前炎症性影響，例如趨化性的觸發、脫粒作用、脂質介導物的合成以及整聯蛋白活化[Oppenheim，J.J.e/1a/.,Annu.Rev.Immunol.,9:617-648(1991);Baggiolini,M,a/.,Adv.Imunol.,55:97-179(1994);Miller,M.D.andKrangel,M.S.,Cnt.Rev.Immunol.,12:17-46(1992)]。趨化因子結合屬於G-蛋白偶聯七跨膜結構域蛋白質家族的特定的糹田月包表面受體[Murphy,P.M.,Annu.Rev.Immunol.,12:593-633(1994)],其被稱為"趨化因子受體"。在結合它們的同源配體時，趨化因子受體通過相關的三聚G蛋白來轉導細胞內信號，引起細胞內鈣濃度的快速提高、細胞形狀的改變、細胞粘附分子表達的提高、脫粒作用和細胞遷移的促進，等等。已經暗示趨化因子是過敏性、炎症性和自體免疫性失調和疾病，如。孝喘、動脈粥樣硬化、血管球性腎炎、胰腺炎、再狹窄、類風溼性關節炎、糖尿病性腎病、肺纖維化和移植排斥的重要的介導物。特別地，作用於其受體CC趨化因子受體2(CCR-2)的單核細胞化學吸引物-l(MCP-1)在各種症候中起作用。在與它的受體結合時，MCP-1誘導細胞內4丐濃度的快速提高，其引起細胞粘附分子表達提通過使用遺傳修飾的小鼠的實驗已經提供了MCP-l/CCR-2相互作用的重要性的證明。MCP-1-A小鼠具有正常數量的白細胞和巨噬細胞，但是在幾種不同類型的免疫激發之後不能將單核細胞徵募到炎症的位點內[BaoLu,e/J.Exp.Med.1998,187,601]。同樣地，當用各種外源試劑激發時，CCR-2-A小鼠不能徵募單核細胞或產生幹擾素此外，無CCR-2小鼠的白細胞不應答MCP-1而遷移[LandinBormg,"a/.,J.Clin.Invest.1997,100,2552],從而證實了MCP-1/CCR-2相互作用的特異性。兩個其他的小組已經獨立地報導了使用CCR-2V-小鼠不同才朱系的相同結果[WillmmA.Kuziel,〃"/.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA1997，94，12053,和TakaoKurihara,"a/.，J.Exp.Med.1997,186,1757]。MCP-1-/-和CCR-2-Z-動物的生存力和一般的正常健康狀態是值得注意的，因為破壞MCP-l/CCR-2相互作用不引起生理學的危機。結合起來，這些數據表明阻斷MCP-1的作用的分子將在治療一系列炎症性和自體免疫性失調中有用。已知的是，MCP-1在患有類風溼性關節炎的患者中被上調[AlisaKoch,da/,,J.Clm.Invest.1992,90,772-779]。此外，幾項研究已經證實了MCP-1/CCR2相互作用的拮抗在治療類風溼性關節炎中的潛在治療價值。編碼MCP-1的DNA疫苗近來顯示了在大鼠中改善慢性的多佐劑i秀導的關節炎[SawsanYoussef，"a/.,J.Clm.Invest.2000,106,361]。類似地，通過向患有膠原誘導的關節炎[HiroomiOgata,Wa/.,J.Pathol.1997,182,106]或鏈球菌細胞壁誘導的關節炎[RalphC.Schimmer,"《J.Immunol.1998,160,1466]的大鼠直接施用MCP陽l的抗體可以控制炎性疾病症狀。或許最顯著地，MCP-1的肽拮抗劑，MCP-1(9-76)在關節炎的MRL-lpr小鼠模型中顯示了預防疾病發作和卩爭j氐疾病症習夫(取決於施用的時間)[Jiang-HongGong,"a/.,J.Exp.Med.1997,186,131]。MCP-1也在動脈粥樣石更化病變中被上調，已經證實了MCP-1的循環水平在疾病發展中起作用[AbdolrezaRezaie-Majd,W"/.,Arterioscler.Thromb.Vase.Biol.2002,22,1194-1199]。如通過富含巨噬細胞的動脈壁的免疫組織化學[Yla-Herttuala"c//.,ProcNatlAcadSciUSA88:5252-5256(1991);NelkenWJClmInvest88:1121-1127(1991)]和抗MCP-1抗體衝僉測[TakeyaWa/.,HumanPathol24:534-539(1993)]所顯示的，MCP-1負責徵募單核細胞進入動脈粥樣硬化區域。與野生型MCP-1抹系相比，LDL-受體/MCP-]缺陷和叩oB轉基因/MCP-1缺陷小鼠顯示了在它們的整個主動脈中顯著較低的脂質沉積和巨p藍細月包積累[Alcami"a/.,JImmunol160:624-633(1998);Gosling"a/.,JClinInvest103:773-778(1999);GuWa/.,Mol.Cell.2:275-281(1998);Boringe^/.，Nature394:894-897(1998)]。已知的是，MCP-1在人類多發性硬化中被上調，已經顯示了使用幹擾素卩-l卩的有效治療降低了外周血單核細胞中的MCP-1表達，表明MCP-1在疾病發展中起作用[CarlaIarlon,""/,J.Neuroimmunol.2002,123,170-179]。其他研究已經表明MCP-l/CCR-2相互作用的拮抗在治療多發性硬化中的潛在治療價值；所有這些研究已經在多發性硬化的常規動物模型實驗性自體免疫腦脊髓炎(EAE)中被證明。向患有EAE的動物施用MCP-1的抗體顯著地減小了疾病復發[K.J.Kennedy,"a/.,J.Neuroimmunol.1998,92,98]。jt匕夕卜，兩項更誶斤近的報導現在已經顯示了CCR-2-A小鼠對EAE有抗性[BrianT.Fife,""/.,丄Exp.Med.2000,192,899;LeonidIzikson，a/.,J.Exp.Med.2000,192,1075]。已知的是，MCP-1在肺移值之後出現了閉塞性細支氣管炎綜合症的患者中被上調[MartineReynaud-Gaubert,W，J.ofHeartandLungTransplant.,2002,21,721-730;JohnBelperio,"《J.Clin.Invest.2001,108,547-556]。在閉塞性細支氣管炎綜合症的鼠模型中，施用MCP-1的抗體引起氣道閉塞的減弱；類似地，CCR2-A小鼠在這個相同模型中對氣道閉塞有抗性[JohnBelperio,""/.,J.Clin.Invest2001,108,547-556]。這些數據表明，MCP-1/CCR2的拮抗可能在治療移植後的器官排斥中是有益的。其他研究已經表明了MCP-1/CCR2相互作用的拮抗在治療哮喘中的潛在治療價值。在卵清蛋白激發的小鼠中中和抗體對MCP-1的隔離引起了支氣管超反應性和炎症的顯著降低[Jose-AngelGonzalo,""/.,J.Exp.Med.1998,188,157]。證明了通過施用MCP-1的抗體有可能在曼氏裂頭吸蟲(Schistosomamansoni)卵激發的小鼠中降低過敏性氣道炎症[NicholasW.Lukacs,""/，J.Immunol.1997,158,4398]。與此一致，MCP-1-/-小鼠顯示了對曼氏裂頭吸蟲卵攻擊的減弱的應答[BaoLu,Wa/.,J.Exp.Med.1998,187,601]。其他研究已經表明了MCP-1/CCR2相互作用的拮抗在治療腎病中的潛在治療價值。在血管球性腎炎的鼠模型中施用MCP-1的抗體引起了腎小球新月體形成和I型膠原沉積的顯著降低[ClareM.Lloyd，"a/.,J.Exp.Med.1997,185,1371]。此外，與它們的MCP誦l十/+對應小鼠相比，患有誘導的腎中毒血清腎炎的MCP-l-A小鼠顯示了顯著更低的腎管損傷[GregoryH.Tesch,""/.,J.Clin.Invest.1999,103,73]。一項研究已經表明了MCP-1/CCR2相互作用的拮抗在治療系統性紅斑狼瘡中的潛在治療價值。MCP-lV-小鼠與MRL-FAS.sup.lpr小鼠雜交(後者具有類似於人類系統性紅斑狼瘡的致死性自體免疫疾病)導致比野生型MRL-FAS.sup.lpr小鼠更少的疾病和更久的存活[GregoryH.Tesch,Wa/.,J.Exp.Med.1999,190,1813]。MCP-1/CCR2相互作用在結腸炎的病變中也是相關的，因為。01-2-/-小鼠免於葡聚糖硫酸鈉誘導的結腸炎的影響[^1"0G.Andres,""/"J.Immunol.2000,164,6303]。一項研究已經表明了MCP-1/CCR2相互作用的拮抗在治療牙槽炎中的潛在治療價值。當使用針對大鼠MCP-1(JE)產生的抗體靜脈內地治療患有IgA免疫複合物肺損傷的大鼠時，牙槽炎的症狀被部分地減輕了[MichaelL.Jones，W"/.,J.Immunol.1992,149,2147]。MCP-1/CCR2在癌症中也是相關的。當帶有人類乳腺癌細胞的免疫缺陷小鼠用抗MCP-l抗體治療時，觀察到了肺部微轉移的抑制和存活的提高[RosalbaSalcedo,a/.,Blood2000,96,34-40]。特別地，如本發明人在PCTWO2004/080273中詳細描述的，MCP-l被指明在前列腺癌症中。Restmosis是涉及MCP-l的又一種症候。CCR2缺陷的小鼠顯示了股動脈損傷後內膜面積和內膜/中膜比例的降低(相對於野生型同窩)[MerceRoque,"a/.Arterioscler.Thromb.Vase.Biol.2002,22,554-559)。其他研究已經提供了證據，MCP-l在以上未才是及的各種疾病狀態中被過量表達。這些報導提供了相關的證明，MCP-1拮抗劑可能是這些疾病的有用的治療劑。MCP-l已經被證明在患有炎症性腸病的患者的腸上皮細胞和腸黏膜中過表達[H.C.Remecker,W"/.，Gastroenterology1995,108,40;MichaelC.Grimm,da/.，J.Leukoc.Biol.1996,59,804]。兩項報導描述了患有誘導的腦外傷的大鼠MCP-l的量表達[丄S.Kmg,"a/.,J.Neuroimtmmol.1994，56,127;JoanW.Berman,""/.,J.Immunol.1996,156,3017]。MCP-l還顯示了在齧齒動物心臟同種異體移植中的過量表達，暗示了MCP-l在移植動脈^^化的發病中的作用[MaryE.Russell，"a/.Proc.Natl.Acad.Sci.USA1993，90，6086]。已經在患有特發性肺纖維化的患者的肺內皮細月包中注意到MCP-l的過表達[HarryN.Antomades,e/1/"Proc.Natl.Acad.Sci.USA1992,89,5371]。類似地，在患有銀屑病的患者的皮膚中注意到MCP-1的過量表達[M.Deleuran,""/,J.Dermatol.Sci.1996,13,228,andR.Gillitzer,Wfl/"J.Invest.Dermatol.1993,101,127]。最後，新近的才艮道已經顯示了，在患有HIV-1相關性痴呆的患者的腦和腦脊液中MCP-l被過量表達[AlfredoGarzmo-Demo,WO99/46991]。迄今報導的大多數趨化因子拮抗劑不是針對特定趨化因子的中和#元體才尤是小分子4吉#元劑[Howard""/.，TrendBiotechnol14:46-51(1996)]。抗MCP-l抗體已經在如上所述的許多小鼠疾病模型中被有效地使用。然而，與使用抗體來拮抗趨化因子功能相關的主要難題是它們在慢性人類疾病中使用之前必需被人源化。此外，多種趨化因子結合和活化單個受體的能力促使了多種抗體策略的開發或使用交叉反應性抗體以完全阻斷或防止病理狀況。在科學和專利文獻中已經報導了幾種趨化因子受體功能的小分子拮抗劑[White,JBiolChem273:10095-10098(1998);Hesseigesser,JBiolChem273:15687-15692(1998);Bright""/.,BioorgMedChemLett8:771-774(1998);Lapierre,26thNatlMedChemSymposium,June14-18，Richmond(Va.)5USA(1998);Forbes《B畫rgMedChemLett10:1803-18064(2000);Kato"a/.,WO97/24325;Shiotaa/.,WO97/44329;NayaWa/.,WO98/04554;TakedaIndustries,JP09-55572(1998);Schwender"a/.,WO98/02151;Hagmann"a/.,WO98/27815;Connor"a/.,WO98/06703;Wellington""/.，U.S.Pat.No.6,288,103]。然而，趨化因子受體拮抗劑的特異性意味著，以多種或冗餘的趨化因子表達譜為特徵的炎症性失調將相對更難以通過這些試劑治療。因而，克服了上述局限性的用於治療CCR-2相關疾病的組合物及其使用方法，是廣泛公認亟需的，並且將是高度有益的。發明概述根據本發明的一個方面，提供了一種包含異源胺基酸序列的分子，所述異源胺基酸序列結合到缺少CCR2N-末端結構域的CCR2胺基酸序列，所述CCR2胺基酸序列能夠結合MCP-],並且其中所述分子是無免疫原性的。根據本發明的另一個方面，提供了一種分子，其包含附著於非蛋白質部分的CCR2胺基酸序列，其中所述CCR2胺基酸序列能夠結合MCP-1,而且所述分子在受試者中是無免疫原性的。根據本發明的再一個方面，提供了一種分子，其包含至少兩種CCR2胺基酸序列，每種都能夠結合MCP-l。根據本發明的又一個方面，提供了一種包含標籤的分子，所述標籤附著於缺少CCR2N-末端結構域的CCR2胺基酸序列，所述CCR2胺基酸序列能夠結合MCP-1。根據本發明的其他方面，4是供了一種如SEQIDNO:14或15所列的分子。根據本發明的其他方面，提供了包含所述分子和藥學上可接受的載體的藥物組合物。根據本發明的其他的方面，提供了包含特定分子和藥學上可接受的載體的藥物組合物，所述特定分子包含缺少CCR2N-末端結構域並能夠結合MCP-1的CCR2胺基酸序列，所述藥物組合物是無免疫原性的。根據本發明的其它方面，提供了在有需要的受試者中治療MCP-1/CCR2相關疾病的方法，包括向所述受試者施用治療有效量的所述分子，從而治療所述受試者中MCP-1/CCR2相關疾病。根據本發明的其它方面，提供了所述分子在製備藥物中的用途，所述藥物被鑑定為治療MCP-1/CCR2相關疾病。根據本發明的其它方面，提供了從生物樣品分離MCP-1的方法，所述方法包括(a)使所述生物樣品與權利要求4的分子接觸，從而MCP-1和權利要求4的分子形成複合物；和(b)分離所述複合物從而從所述生物樣品中分離MCP-1。根據本發明的其它方面，提供了在有需要的受試者中治療MCP-1/CCR2相關疾病的方法，包括向所述受試者施用治療有效量的分子，所述分子包含缺少CCR2N-末端結構域並能夠結合MCP-1的CCR2胺基酸序列，從而在所述受試者中治療MCP-1/CCR2相關疾病。根據本發明的其它方面，提供了特定分子在製備藥物中的用途，所述特定分子包含缺少CCR2N-末端結構域並能夠結合MCP-1的CCR2胺基酸序列，所述藥物被鑑定為用於治療MCP-1/CCR2相關疾病。根據如下所述的本發明的優選實施方式中進一步的特徵，所述異源胺基酸序列包含免疫球蛋白胺基酸序列。根據所描迷的優選實施方式中進一步的特徵，所述缺少CCR2N-末端結構域的CCR2胺基酸序列是如SEQIDNO:2中所示的。根據所描述的優選實施方式中再進一步的特徵，所述MCP-1/CCR2相疾病選自由炎症性疾病、壞死、動"永粥才羊石更化、癌症、多發性石更化、鬥分瘤、單核細胞性白血病、腎臟疾病(例如，血管球性腎炎)、hamman-rich綜合症、子宮內膜異位、類風溼性關節炎、細支氣管炎、譯喘、系統性紅斑狼掩、炎症性腸病(例如，結腸炎)、牙槽炎、再狹窄、腦外傷、銀屑病、特發性肺纖維化和移植動脈硬化構成的組。根據所描述的優選實施方式中又進一步的特徵，所述標籤是表位標籤。根據所描述的優選實施方式中又進一步的特徵，所述分子附著於固相支持物。根據所描述的優選實施方式中又進一步的特徵，所述分子附著於非蛋白質部分。根據所描述的優選實施方式中又進一步的特徵，所述非蛋白質部分選自由聚乙二醇(PEG)、聚乙烯基吡咯烷酮(PVP)、笨乙烯馬來酐共聚物(SMA)以及二乙烯基醚與順丁烯二酸酐共聚物(DIVEMA)構成的組。才艮據所描述的優選實施方式中又進受的載體被配製為用於腸胃外施用。才艮據所描述的優選實施方式中又進受的載體基本上是無免疫原性的。才艮據所描述的優選實施方式中又進受的載體包含脂胺基酸(lipoammeacid)。才艮據所描述的優選實施方式中又進受的載體包括碳水化物。才艮據所描述的優選實施方式中又進受的載體包括微球體。才艮據所描述的優選實施方式中又進受的載體包括脂質體。才艮據所描述的優選實施方式中又進受的載體包括聚合物微球體。通過提供用於治療MCP-1/CCR2相關疾病的新的分子及其使用方法，本發明成功地克服了當前已知的配置的缺點。除非另外定義，此處使用的所有技術和科學術語具有本發明所屬
技術領域：
的普通技術人員通常所理解的相同含義。雖然類似於或等同於在此描述的那些的方法和材料可以被用於本發明的實踐和測試，^f旦以下描述了適合的方法和材料。在矛盾的情況下，以本專利說明書(包步的特徵，所述藥學上可接括定義)為準。此外，材料、方法和實施例僅是說明性的，而無意限制。附圖的簡要說明參考附圖，在此僅以舉例的方式描述本發明。現在詳細地具體參考附圖，要強調的是，所顯示的細節是通過實例的方式，目的僅是說明本發明的優選實施方式的說明性論述，為了提供被認為是最有用的和易於理解本發明的原則和概念觀點的內容而存在。對此來說，不進行嘗試來顯示比基本理解本發明所必需的更詳細的本發明結構細節，附圖的說明使得本領域技術人員明白本發明的幾種形式可以如何在實踐中體現。圖la-b是顯示前列腺癌症患者選擇性地發展針對MCP-1的高度顯著的自身抗體滴度的圖表。圖la——來自23位前列腺癌症患者、患有良性前列腺肥大(BPH)的患者和10名對照受試者的人類血清，所有年齡匹配的對象(mails),被監視針對以下13種趨化因子的自身抗體的可能的出現SDF-1(CXCL12,GenBankAccessionNo.NM199168)、M1F(GenBankAccessionNo.LI9686)、MIP-la(CCL3,GenBankAccessionNo.NM002983)、MEP-l卩(CCL4,GenBankAccessionNo.NM002984)、IL-8(CXCL8，GenBankAccessionNo.M2813)、IP-IO(CXCL10,GenBankAccessionNo.NM001565)、MIP-3a(CCL20,GenBankAccessionNo.BC020698)、MIP-3卩(CCL-19，GenBankAccessionNo.BC027968)、Lymphotactm(XCLl，GenBankAccessionNo.NM002995)、MIG(CXCL9,GenBankAccessionNo.NM002416)、RANTES(CCL5,GenBankAccessionNo.NM002985)、MCP-3(CCL7,GenBankAccessionNo.NM006273)和MCP-1(CCL2，GenBankAccessionNo.NM002982)。在大多數前列腺癌症患者中觀察到針對僅一種上述趨化因子，MCP-1，的顯著的抗體滴度(p<0.01)。圖lb——在上述圖la中描述的每個臨床樣品中對MCP-1的Log2Ab滴度。約82%的前列腺癌症患者(19/23)和僅約4.7%(1/21)患有BPH的患者顯示了對MCP-1的顯著(p<0.01)反應(1og2Ab滴度〉10)。圖2是描繪編碼本發明的Ig-CCR2肽(Ig-E3)的表達構建體的產生的示意圖。圖3是描繪CCR2的E3結構域與MCP-1的特異性結合的柱形圖。圖4是描述人類CCR2(E3)-IgG抑制MCP-1誘導的THP-1細胞(ATCCAccessionNO.TIB-202)的遷移的能力的柱形圖。進行了體外穿孔遷移分析。簡言之，將THP-1細胞(106個細胞/孔)添加到轉移孔平板的上室，CCL2(重組人類MCP-1,RHMCP-1;(20ng/ml)添加到下孔，其也補充有如圖所示的不同濃度的CCR2(E3)-IgG。在37。C孵育2小時之後，通過FACS對遷移的THP-1細胞計數。結構顯示為三個副本的平均數土SE。圖5a-d是描繪在施用CCR2(E3)-IgG的細胞和對照(施用IgG的或PBS處理的)細胞之間所比較的原發肺瘤的發展和它的轉移性散布的圖表。圖5a-b是描繪當與PC-3細胞的施用一同開始(圖5a)或在之後18天(圖5b)施用CCR2(E3)-IgG時，CCR2(E3)-IgG隨著時間降低腫瘤生長的能力的圖表。在所標出的各個時間重複地測量來自施用CCR2(E3)-IgG(藍色表示)、施用同種型匹配的對照IgG(綠色表示)或施用PBS(褐色或黃色表示)的小鼠的腫瘤體積(mm3)。圖5c是顯示在PC3細胞施用後8天注射的CCR2(E3)-IgG的抗腫瘤活性的圖表。在所標出的各個時間重複地測量來自施用PC-3細胞和CCR2(E3)-IgG(藍色表示)、施用同種型匹配的對照IgG(綠色表示)或PBS(粉色表示)的小鼠的腫瘤的體積(mm3)。這些結果證明了圖5a-b所示CCR2(E3)-IgG的預防和治療活性。圖5d是描繪與對照細胞比較、通過所標明的CCR2(E3)-Ig對表達螢光素酶的PC-3細胞的骨和肺轉移的抑制作用的圖表。圖6a-f是顯示在肺瘤位點使用CCR2(E3)-Ig阻斷CCL-2完全地抑制VEGF產生的照片。顯示了使用CCR2(E3)-Ig(圖6a、d)、同種型匹配的對照IgG(圖6b、e)或PBS(對照細胞；圖6c、f)的治療。處死動物，取出腫瘤/組織。洗滌組織、固定並滲透化，通過免疫染色使用共焦顯微鏡檢測VEGF。在x10(附圖6a-c)或x40(附圖6d-f)放大率下顯示顯微圖。圖7是描述通過光密度測定的CCL2處理的PC3細胞的細胞遷移的柱形圖。用CCL2(MCP-1)、CCL2連同針對CCL2的抗體(MCP-l+抗MCP-1)、CCL2連同CCR2(E3)-IgG(MCP-1+CCR2(E3)-IgG)以及未被配體處理的對照細胞來處理PC3細胞。優選實施方式的說明本發明是用於治療MCP-1/CCR2相關疾病例如癌症的分子、包含所述分子的組合物以及使用所述分子的方法。參考附圖和附隨的說明可以更好地理解本發明的原理和操作。在詳細地解釋本發明的至少一個實施方式之前，要理解的是，本發明不將它的應用限於以下說明所闡述的或通過實施例所例示的細節。本發明能有其他的實施方式或者能以各種方式實踐和進行。並且，要理解的是在此釆用的用語和術語是為了說明的目的而不應認為是限制性的。單核細胞化學吸引物劑蛋白(MCP)-l,也稱為CCL2,特異性地吸引單核細胞和記憶T細胞。它的表達出現於以細胞遷移為特徵的多種疾病中，對於它在癌症、心血管疾病和炎症性疾病中的關4建作用，存在著相當的生物學和遺傳學證據。儘管有密集的篩選，至今還沒有MCP-1/CCL2的受體CCR2的拮抗劑。當還原本發明至實踐時，本發明人揭示了MCP-1對CCR2的結合是由CCR2的第三個細胞夕卜區域(E3)(GenBankAccessionNo.NP000639.1的胺基酸坐標273-292)專有地介導的。這與DattaMannan禾口Stone的早先的淨艮告[Datta-MannanAndStone(2004)Biochemistry43:14602-11]形成鮮明對比，他們表明MCP-1與CCR2的結合取決於CCR2的N-末端結構域(N-ter)和第三個細^^卜環體(E3)兩者。這些結果表明，通過大量地隔離MCP-1，包含CCR2的E3區域的肽可以用作抑制性試劑。因而，本發明設想包含CCR2E3結構域並優選缺少CCR2N-末端結構域的任何CCR2胺基酸序列，以及包含所述CCR2胺基酸序列的組合物在治療MCP-1/CCR2相關疾病例如癌症中的用途。重要地，本發明的組合物是無免疫原性的以實現最大的療效。因而，本發明設想，例如，在複合物中包含CCR2序列，其中所述CCR2序列附著於蛋白質(例如，異源胺基酸序列)或非蛋白質(例如，PEG)部分，它們每一種都能夠延長所述組合物在循環中的半衰期。因而，根據本發明的一個方面，提供了包含與CCR2胺基酸序列結合的至少一種異源胺基酸序列的無免疫原性分子，所述CCR2胺基酸序列優選地缺少CCR2N-末端結構域(例如，翻譯的GenBankAccessionNo.NM—000647/NP—000638的胺基酸坐標1-41,或GenBankAccessionNo.NM—000648/NP—000639的相應胺基酸坐標)，所述CCR2胺基酸序列能夠結合MCP-1。如接下來的實施例部分所顯示的，包含新近揭示的MCP-1結合結構域(E3-IgG)的本發明這個方面的嵌合分子，即使在腫瘤細胞施用長達18天之後，還抑制肺瘤發展。令人驚訝地，相同的嵌合分子甚至顯著地抑制了肺瘤向骨和肺組織的轉移。總而言之，當前的發現支持了本發明的分子在治療MCP-1/CCR2相關疾病例如癌症中的用途。應當注意到，本發明這個方面的嵌合分子顯著地不同於WO97/31949中描述的那些，其教導了使用嵌合的E3(即，KLH-E3)肽來產生針對CCR2的E3區域的抗體，從而抑制CCR2受體的配體結合。本發明的無免疫原性肽被用於靶向CCR2的配體，MCP-l,從而抑制所述配體的受體結合。因此，本發明的分子容許精巧的治療控制和特異性，它們可以被容易地合成和施用，並且以高度的生物有效性為特徵。在此使用時，與CCL2可互換使用的MCP-l,是指哺乳動物(例如，人類)MCP-1蛋白，例如在GenBankAccessionNos.NM—002982或NP一002973中列出的。在此使用時，術語"無免疫原性的"是指一種物質，其在被施用該物質的受試者中基本上不能產生免疫應答。例如，在人體內無免疫原性是指，在使本發明這方面的嵌合分子接觸人的適合組織時，在適合的潛伏期(例如，8到14天)之後在第二次施用所述嵌合分子時，、。在此使用時，:'CCR2胺基酸^列""是指具有對MCP-1的親和性結合的哺乳動物(例如，人類)趨化因子C-C受體2蛋白質的肽部分。應當注意到，單個的CCR2胺基酸序列可以被包括在本發明的分子中，但是包括至少兩個CCR2胺基酸序列、每一個都能夠結合CCR2(優選以高親和性，例如SEQIDNO:9)可能是優選的。由於提高的親合力，這些多肽可以被用作MCP-1活性的強力抑制物，可以使用更低的劑量。在此使用時，"親和性結合"是指至少10-6M的最小KD值。在GenBankAccessionNos.NM—000647和NP—000639.1中提供了CCR2蛋白的實例。如所提及的，本發明這方面的CCR2優選缺少N-末端結構域，但是保留了E3結構域(即，GenBankAccessionNo.NM—000647的胺基酸坐標273-292，SEQIDNO:2)或其模擬物。在此使用時，術語"模擬物"當涉及肽時是指分子結構，其在與MCP-1的相互作用中充當了本發明的肽的替代物[關於肽模擬物的綜述，參見Morgan"(1989)Ann.ReportsMed.Chem.24:243-252]。在此使用時，肽模擬物包括合成的結構(已知的和尚未知的)，其可以或可以不含有胺基酸和/或肽鍵，但保持了肽配體的結構和功能特徵。以下進一步描述了可以利用來產生模擬物的胺基酸的種類。術語"肽模擬物"還包括類肽和寡類肽，其是N-取代的胺基酸的肽或寡fi體[SimonW/,(1972)Proc.Natl.Acad.Sci.USA89:9367-9371]。進一步作為肽模擬物包括的是肽庫，其是被設計以具有給定胺基酸長度並代表與之相應的所有可想像的胺基酸序列的肽的集合。以下描述了用於肽模擬物的產生的方法。包括SEQIDNO:2的胺基酸序列，並且可以由SEQIDNO:1所歹'J的核酸序列編碼。才艮據本發明的這個方面的另一個優選實施方式，本發明的這個方面的分子是如SEQIDNO:14或15中所示的。在此使用時，術語"肽"涵蓋天然的肽(降解產物、合成性合成的肽或重組肽)以及如上文中提及的擬肽(一般地，合成性合成的肽)、以及是肽類似物的類肽和半類肽，其可能具有，例如，修飾，使得所述肽在體內更為穩定或更能透入細胞中。這種修飾包括，但不限於N末端修飾、C末端修飾、肽鍵修飾，包括但不限於，CH2-NH、CH2-S、CH2-SO、0=C-NH、CH2-0、CH2-CH2、S=C-NH、CH=CH或CF=CH，主幹修飾以及殘基修飾。製備肽模擬化合物的方法是本領域公知的，例如，在QuantitativeDrugDesign,C.A.RamsdenGd.,Chapter17.2,F.ChoplmPergamonPress(]992)中詳細i兌明了，通過引用將其合併在此，如同完全在此列出一樣。以下提供了關於此方面的進一步的細節。肽中的肽鍵(-CO-NH-)可以被例如N-曱基化的鍵(-N(CH3)-CO-)、酯鍵(-C(R)H-C-O-O隱C(R)-N陽)、酮亞曱基鍵(-CO-CH2-)、a-氮雜鍵(-NH-N(R)-CO-)取代，其中R是任何烷基，例如曱基，carba鍵(-CH2-NH-)、鞋亞乙基鍵(-CH(OH)-CH2-)、硫胺鍵(畫CS-NH-)、烯雙鍵(-CH=CH-)、逆醯胺鍵(retroamide)(畫NH-CO陽)、肽衍生物(-N(R)-CH2-C0-),其中R是天然存在於碳原子上的"正常的"側鏈。這些修飾可以出現在肽鏈上的任何鍵上，甚至同時在幾個(2_3個)上。天然的芳香族胺基酸，Trp、Tyr和Phe可以被合成的非天然酸，例如苯基甘氨酸、TIC、naphthylelanme(Nol)、Phe的環甲基化的衍生物、Phe的卣化衍生物或鄰曱基-Tyr。除了上述的之外，本發明的肽還可以包括一個或多個修飾的胺基酸或一個或多個非胺基酸單體(例如，脂肪酸、複雜的碳水化物等等)。在說明書和以下的權利要求部分使用時，術語"胺基酸"被理解為包括20種天然產生的胺基酸；在體內常常翻譯後修飾的那些胺基酸，包括，例如，羥脯氨酸、磷酸絲氨酸和磷酸蘇氨酸；和其他稀有的胺基酸，包括但不限於2-氨基己二酸、羥基賴氨酸、異鎖鏈賴氨素、正纈氨酸、正亮氨酸和鳥氨酸。此外，術語"胺基酸"包括D-和L-胺基酸。1)和非常規的或修飾的胺基酸(表2)。tableseeoriginaldocumentpage18tableseeoriginaldocumentpage192tableseeoriginaldocumentpage19tableseeoriginaldocumentpage20tableseeoriginaldocumentpage21tableseeoriginaldocumentpage22tableseeoriginaldocumentpage23由於當前的肽優選在需要肽處於可溶形式的治療或診斷中使用，本發明的肽優選包括一個或多個非天然的或天然的極性胺基酸，包括但不限於絲氨酸和蘇氨酸，由於它們的含羥基側鏈能夠提高肽的溶解度。本發明的肽優選以線性形式利用，然而要理解的是，在環化不嚴重地影響肽性質的情況下，也可以使用環狀形式的肽。如上文描述的，肽模擬物的產生可以使用各種方法實現，包括，例如展示技術。因而，本發明關注包含多種展示載體(例如，噬菌體、病毒或細菌)的展示庫，每一種展示了來自CCR2的E3(例如，SEQIDNO:2)的多肽序列的至少2個、至少3個、至少5個、至少7個、至少11個、至少15個連續胺基酸。構建這種展示庫的方法是本領域7>知的。在例如YoungAC,"Thethree-dimensionalstructuresofapolysaccharidebindingantibodytoCryptococcusneoformansanditscomplexwithapeptidefromaphagedisplaylibrary:implicationsfortheidentificationofpeptidemimotopes"JMolBiol1997Dec12;274(4):622-34;GiebelLBe,a/."Screeningofcyclicpeptidephagelibrariesidentifiesligandsthatbindstreptavidmwithhighaffinities"Biochemistry1995Nov28;34(47):15430-5;DaviesELW/.,"Selectionofspecificphage-displayantibodiesusinglibrariesderivedfromchickenimmunoglobulingenes"JImmunolMethods1995Oct12;186(1):125-35;JonesCRTal."Currenttrendsinmolecularrecognitionandbioseparat薩"JChromatogrA1995Jul14;707(1):3-22;DengSJ"a/."Basisforselectionofimprovedcarbohydrate-bindingsingle-chainantibodiesfromsyntheticgenelibraries"ProcNatlAcadSciUSA1995May23;92(11):4992-6;以及DengSJ""Selectionofantibodysingle-chamvariablefragmentswithimprovedcarbohydratebindingbyphagedisplay"JBiolChem1994Apr1;269(13):9533-8中描述了這些方法，通過引用將它們合併在此。肽模擬物也可以使用計算生物學來揭示。可以利用對於顯示三維結構才莫型有用的軟體程序，例如RIBBONS(Carson,M.,1997.MethodsmEnzymology277,25)、〇(Jones,TA."a/.,1991.ActaCrystallogr.A47,110)、DINO(DINO:VisualizmgStructuralBiology(2001)http:〃www.dino3d.org);和QUANTA、INSIGHT、SYBYL、MACROMODE、ICM、MOLMOL、RASMOL以及GRASP(在Kraulis,J.,1991.ApplCrystallogr.24,946中綜述)來模擬MCP-1和預期的肽模擬物之間的相互作用從而鑑定顯示了結合特定的MCP-1區域的最高可能性的肽。蛋白質-肽相互作用的計算機建模已經被成功地用於合理藥物設計，對於進一步的細節，參見Lam"1994.Science263,380;WlodawerWa/"1993.AnnRevBiochem.62,543;Appelt,1993.PerspectivesinDrugDiscoveryandDesign1，23;Erickson,1993.PerspectivesmDrugDiscoveryandDesign1,109和MauroMJ.2002.JClmOncol.20,325-34。如所提及的，本發明的這個方面的嵌合分子包括異源的胺基酸序列。在此使用時，用語"異源胺基酸序列"是指不構成CCR2胺基酸序列的一部分的無免疫原性胺基酸序列。這種序列優選的為本發明的這個方面的分子賦予了溶解性，優選的提高所述嵌合分子在血清中的半衰期。所述異源胺基酸序列一般定位於本發明的CCR2肽的氨基或羧基末端。如所提及的，至少一個異源胺基酸序列可以結合到本發明的CCR2胺基酸序列上。例如，至少一個CCR2胺基酸序列可以插入兩個異源序歹'j之間，如Hoogenboom(1991)Mol.Immunol.28:1027-1037所描述的。所述異源胺基酸序列可以通過任何肽或非肽的4建附著於所述CCR2胺基酸序列上。CCR2胺基酸序列對所述異源胺基酸序列的附著可以通過直接的共價結合(肽鍵或取代的肽鍵)或間接的結合例如通過使用具有功能基團的接頭來實現。功能基團包括但不限於，游離羧酸(C(=0)OH)、游離氨基(NH2)、酯基(C(=0)OR，其中R是烷基、環烷基或芳基)、醯滷基團(C(=0)A，其中A是氟化物、氯化物、溴化物或石典化物)、卣素(氟化物、氯化物、溴化物或碘化物)、羥基基團(OH)、硫醇基團(SH)、氰基(C^N)、游離C-氨基曱酸基團(NR"-C(=0)-OR',其中每個R'和R"獨立地是氫、烷基、環烷基或芳基)。可以根據本發明的這個方面使用的異源胺基酸序列的實例是免疫球蛋白序列，例如免疫球蛋白重量結構域的鉸鏈和Fc區域(參見美國專利No.6,777，196)。本發明的這個方面的嵌合體中的免疫球蛋白部分可以從IgGl、IgG2、IgG3或IgG4亞型、IgA、IgE、IgD或IgM獲得，以下將進一步討論。從與適合的免疫球蛋白恆定區序列(免疫粘附素)連接的受體序列構建的嵌合體是本領域已知的。文獻中報導的免疫粘附素包括T細月包受體[Gascoigne""/"Proc.Natl.Acad.Sci.USA,84:2936-2940(1987)]、CD4[Caponetal.，Nature337:525-531(1989);Traunecker""/"Nature,339:68-70(1989);Zettmeissle"/.,DNACellBiol.USA,9:347-353(1990);Byrn""/.,Nature,344:667-670(1990)];L-選擇蛋白(歸巢受體)[(WatsonJ.Cell.Biol.,110:2221-2229(1990);Watson""/.,Nature,349:164-167(1991)]、CD44[Aruffo""/.,Cell,61:1303-1313(19卯)]、CD28和B7(LmsleyW"/，J.Exp.Med.,173:721-730(1991)];CTLA-4[Lisley"a/.,丄Exp.Med.174:561-569(1991)];CD22[Stamenkovic"a/"Cell,66:1133-1144(1991)];TNF受體[Ashkenazi"Proc.Natl.Acad.Sci.USA,88:10535-10539(1991);Lesslauer,Eur.J.Immunol.,27:2883-2886(1991);Peppele/1a/.,J.Exp.Med.,174:1483-1489(1991)];NP受體[Bennette,"/.,J.Biol.Chem.266:23060-23067(1991)]和IgE受體a[Ridgway""/,,J.Cell.Biol.,115:abstr.1448(1991)]的融合物。一般地，在這種融合物中，嵌合分子將保持至少功能上活性的免疫球蛋白重鏈的恆定區的鉸鏈和CH2和CH3結構域。融合物也可產生於恆定區的Fc部分的C-末端，或緊^接重鏈的CHI的N-末端或輕《連的相應區域。在異源序列和CCR2胺基酸序列之間融合(接合)的確切位點不是關鍵的。特定的位點是本領域公知的，可以選擇以優化本發明的這個方面的嵌合分子的生物學活性、分泌或結合特徵(參見以下的實施例部分的實施例3)。雖然有可能將完整的重鏈恆定區結合到本發明的CCR2胺基酸序列，優選的是融合較短的序列。例如，剛好在絞鏈區中木瓜蛋白酶切割位點上遊開始的序列被用於融合物中，所述木瓜蛋白酶裂解位點化學上劃定了IgGFc;當重鏈恆定區的第一個殘基為114時是殘基216，或其它免疫球蛋白的類似位點。在特別優選的實施方式中，CCR2胺基酸序列被融合到IgGl、IgG2或IgG3重鏈的絞鏈區和CH2和CH3，或CH1、鉸鏈、CH2和CH3結構域(參見美國專利NO.6,777，196)。進行融合的確切位點不是關鍵的，可以通過常規的實驗確定最佳位點。如所提及的，用於構建本發明的這個方面的嵌合分子的免疫球蛋白序列可以來自IgG免疫球蛋白重鏈恆定區。使用人類IgGl和IgG3免疫球蛋白序列是優選的。使用IgGl的主要優點是IgGl可以在固定化的蛋白A上有效地純化。相比之下，IgG3的純化需要蛋白G，一種顯然較不方便的介質。然而，當選擇Ig融合配偶體用於特定的嵌合體構建時，應當考慮免疫球蛋白的其他結構和功能部分。例如，IgG3鉸鏈是更長和更柔性的，從而它可以適應更大的CCR2胺基酸序列，而其與IgGl融合時可能不摺疊或不能正確地起作用。另一種考慮可能是化合價；IgG是二價的同二聚體，而諸如IgA和IgM的Ig亞型可以分別產生基本的Ig同二聚體單位的二聚或五聚結構。在選擇本發明的這個方面的嵌合分子的免疫球蛋白部分時的其他考慮在美國專利NO.6,77,196中描述了。因而，本發明的這個方面的分子可以包括異源胺基酸序列，如上所述。作為上文提及的補充或選擇，本發明的CCR2胺基酸序列(能夠結合MCP-1)可以附著於非蛋白質部分，選擇在受試者中為無免疫原性的這種分子。這種分子是高度穩定的(可能由於非蛋白質部分賦予的位阻而對體內蛋白水解活性有抗性)，並且可以使用常用的固相合成方法來生產，這是便宜的和高效的，下文中進一步說明。然而，要理解的是，仍然可以使用重組技術，從而藉此重組肽產物經歷體外修飾(例如，下文進一步描述的PEG化)。如所提及的，CCR2胺基酸序列附著於非蛋白質部分。如在此使用的用語"非蛋白質部分"是指附著於上述CCR2胺基酸序列的、不包括胺基酸(肽鍵)的分子。根據當前優選的實施方式，本發明的這個方面的非蛋白質部分是聚合物或共聚物(合成的或天然的)。本發明的非蛋白質部分的非限制性實例包括聚乙二醇(PEG)、聚乙烯基吡咯烷酮(PVP)、二乙烯醚和順丁烯二酸酐共聚物(DIVEMA;參見，移寸^口，KanedaY,e/a/.,1997,Biochem.Biophys.Res.Commun.239:160-5)以及苯乙烯馬來酐共聚物(SMA;參見例如，MuY,"a/.,1999,BiochemBiophysResCommun.255:75-9)。這種非蛋白質部分的生物結合為CCR2胺基酸序列賦予了穩定性(例如，對抗蛋白酶活性)和/或溶解性(例如，在生物液體，例如血液、胃液內)，而保持了它的生物學活性並延長了它的半衰期。在表現出短的半衰期和血液的快速清除的治療性蛋白質的情況下，生物結合是特別有益的。生物結合的蛋白質在血漿中提高的半衰期是來自蛋白質結合物的增加的大小(其限制了它們的腎小球濾過作用)以及由於聚合物位阻而降低的蛋白水解作用。一般地，每個肽附著的聚合物鏈越多，半衰期延長越大。然而，採取方法來不降低本發明的CCR2胺基酸序列的特定活性(即，MCP-1結合)。CCR2胺基酸序列與PEG的生物結合(即，PEG化)可以使用PEG衍生物來實現，所述PEG衍生物例如PEG羧酸的N-羥基琥珀醯亞胺(NHS)酉旨、單曱氧基PEG2-NHS、羧曱基化的PEG的琥珀醯亞胺基酯(SCM-PEG)、PEG的笨三唑石炭酸酯書f生物、PEG的縮水甘油醚、PEG對硝基苯基碳酸酯(PEG-NPC，例如曱氧基PEG-NPC)、PEG酪、PEG-正吡咬基-二硫化物、羰基二咪唑基(carbonyldimidazol)-活化的PEGs、PEG-硫醇、PEG-馬來醯亞胺。這些PEG衍生物是以各種分子量商業上可獲4尋的[參見，例i口Catalog,PolyethyleneGlycolandDerivatives,2000(ShearwaterPolymers,Inc.，Huntsvlle,Ala.)]。如果希望，許多上述衍生物是可以以單功能的單曱氧基PEG(mPEG)形式獲得的。一般地，添加到本發明的CCR2胺基酸序列的PEG應當從分子量(MW)數百道爾頓到約100kDa(例如，在3-30kDa之間)。可以使用更大MW的PEG,但可能引起PEG化的肽的產量的一些損失。也應當監視較大的PEG分子的純度，因為難以獲得象較低分子量PEG可獲得的那樣高純度的較高分子量PEG。優選的是使用至少85%純度、更優選的至少90%純度、95%純度或更高純度的PEG。在例如Hermanson,BioconjugateTechniques,AcademicPressSanDiego，Calif.(1996),atChapter15andmZalipsky""/.,"SuccimmidylCarbonatesofPolyethyleneGlycol,"mDunnandOttenbrite,eds.，PolymericDrugsandDrugDeliverySystems,AmericanChemicalSociety,Washington,D.C.(1991)中進一步討論了分子的PEG化。方便地，PEG可以通過位點特異性誘變附著於CCR2胺基酸序列的選定位置，只要保持了結合物的活性(即，MCP-1結合)。例如，在SEQIDNO:1所列CCR2胺基酸序列的5位的半胱氨酸殘基可以是PEG化的耙點。作為補充或選4奪，其他半胱氨酸殘基可以一皮添加到CCR2胺基酸序列(例如，在N-末端或C-末端)以藉此充當PEG化的靶點。可以進行計算分析來選擇誘變而不損害活性的優選的位置。可以採用活化的PEG的各種結合化學作用，活化的PEG例如PEG-馬來醯亞胺、PEG-乙烯碸(VS)、PEG-丙烯酸酯(AC)、PEG-正吡啶基二硫化物。製備活化的PEG分子的方法是本領域已知的。例如，PEG-VS可以在氬氣下通過PEG-OH的二氯甲烷(DCM)溶液與NaH反應，然後與二乙烯碸反應(摩爾比OH1:NaH5:二乙烯基碸50，以0.2克PEG/mLDCM)來製備。PEG-AC可以在氬氣下通過PEG-OH的DCM溶液與丙烯醯氯和三乙胺反應(摩爾比OHl:丙烯醯氯1.5:三乙胺2，0.2克PEG/mLDCM)來製備。這些化學基團可以附著於線性化的、2臂、4臂或8臂PEG分子。雖然結合到半胱氨酸殘基是可以藉助來PEG化本發明的CCR2胺基酸的一種便利的方法，如果希望也可以使用其他的殘基。例如，乙酸酐可以用於與NH2和SH基團反應，而不是COOH、S--S或-SCHg基團，而過氧化氳可以用於與-SH和-SCH3基團反應，而不是NH2。反應可以在適合於與所述肽中期望的殘基結合的條件下採用利用了公知的反應性的化學作用來進行。對於本發明的CCR2胺基酸序列與PVP的生物結合，藉助於4，4'-偶氮雙(4-氰戊酸)作為基團起始劑以及3-巰基丙酸作為鏈轉移劑，通過在二甲基甲醯胺中的游離基聚合來從N-乙烯基-2-吡咯烷酮合成帶有末端COOH-的PVP。產生的具有Mr6,000平均分子量的PVP可以通過高性能液相色譜分離和純化，合成的PVP的末端COOH基團通過N-羥基琥珀醯亞胺/二環己基碳二亞胺法來活化。基本上如通過引用合併在jt匕的HaruhikoKamada,"/.,2000,CancerResearch60:6416-6420中所描述的，CCR2胺基酸序列與60倍摩爾過量的活化的PVP反應，用氨基caploic酸(相對於活化的PVP5倍摩爾過量)終止反應。使用例如高性能液相色譜(HPLC)來分離、純化和鑑定產生的結合的CCR2分子(例如，PEG化的或PVP結合的CCR2)。此外，與其受體(例如CCR2)的結合特異性，基本上如對於其他趨化因子所描述的[例如，MCP-la，參見，例如HesselgesserJ,1998(同上)，通過引用將其完全合併在此]。本發明的這個方面的分子可以是生物化學合成的，例如使用標準的固相技術合成的。這些方法包括排阻固相合成、部分固相合成法、片段縮合和經典的溶液合成。當肽相對短(即，10kDa)時和/或當它不能通過重組技術產生(即，不由核酸序列編碼，例如下文進一步描述的"標籤")並由此涉及不同的化學作用時，優選的使用這些方法，固相肽合成步驟是本領域7^知的，由JohnMorrowStewartandJamsDillahaYoung,SolidPhasePeptideSyntheses(2ndEd"PierceChemicalCompany,1984)進一步描述了。合成的肽可以通過製備高效液相層析法[CreightonT.(19")■Proteins,structuresandmolecularprinciples.WHFreemanandCo.N.Y.]來純化，其組成可以通過胺基酸測序來確i人。在期望大量本發明肽的情況下，本發明的肽可以使用例如由Bitter""/.,(1987)MethodsinEnzymol.153:516-544，Studier"a/.(1990)MethodsmEnzymol.185:60-89,Brisson"a/.(1984)Nature310:511-514,TakamatsuWa/.(1987)EMBOJ.6:307-311,CoruzziW(1984)EMBOJ.3:1671-1680以及Brogli"a/.,(1984)Science224:838-843,Gurley"a/.(1986)Mol.Cell.Biol.6:559-565andWe'ssbach&Weissbach,1988,MethodsforPlantMolecularBiology,AcademicPress,NY,SectionVIII,pp421-463所描述的重組技術來產生。筒言之，將表達構建體(即，表達載體)導入宿主細胞中，所述表達構建體包括分離的多核苷酸(即，從其天然產生來源分離的，例如SEQIDNO:10)，所述多核苷酸包含位於調節元件的轉錄控制之下的編碼本發明CCR2(任選地與編碼異源胺基酸序列的核酸序列按讀碼同框融合)的核酸序列。例如，編碼本發明的CCR2肽的核酸序列(例如，SEQIDNO:1)同框連接到免疫球蛋白cDNA序列(例如，SEQIDNO:3和5)。要理解的是，也可以使用基因組免疫球蛋白片段的連接。在這種情況下，融合需要存在用於表達的免疫球蛋白調節序列。編碼IgG重鏈恆cDNA庫分離，通過雜交或通過聚合酶鏈式反應(PCR)技術。編碼CCR2胺基酸序列和免疫球蛋白的核酸序列可以串聯地連接到表達構建體(載體)中，其指導在選定的宿主細胞中的有效表達，以下進一步說明。對於在哺乳動物細胞中表達，可以使用基於pRK5的載體[Schall""/.，Cell,61:361-370(1990)]和基於CDM8的載體[Seed,Nature,329:840(1989)]。確切的4妄點可以通過使用寡核苷酸指導的秀變[Zoller"《NucleicAcidsRes.,10:6487(1982);Capon"a/,,Nature,337:525-531(1989)]在設計的接點密碼子之間除去額夕卜的序列來創建。可以使用合成的寡核苷酸，其中每一半與期望的接點兩側的序列互補；理想地，這些寡核苷酸是11到48mer。做為選擇，PCR技術可以用於與適合的載體同框地連接分子的兩個部分。將表達構建體導入宿主細胞的方法是本領域公知的，包括電穿孔、脂轉染和化學轉染(例如，磷酸鈣)。還參見隨後的實施例部分的實施例2。將"轉化的"細胞在適合的條件下培養，其容許由所述核酸序列編碼的嵌合分子的表達。在預定的時間之後，從所述細胞或細胞培養物回收表達的嵌合分子，根據重組多肽的最終用途進行純化。取決於使用的宿主/載體系統，許多適合的的轉錄和翻i奪元件，包括組成型和可誘導的啟動子、轉錄增強子元件、轉錄終止子等等，可以用於表達載體中[參見，如J^口Bitter""/.，(1987)MethodsmEnzymol.153:516-544]。除了含有用於插入的編碼序列[編碼嵌合體]的轉錄和翻譯的必需元件之外，本發明的表達構建體也可以包括被設計來優化表達的融合蛋白的穩定性、生產、純度、產量或毒性的序列。編碼序列。這些包括但不限於，微生物，例如用含有嵌合體編碼序列的重組噬菌體DNA、質粒DNA或粘粒DNA表達載體轉化的細菌；用含有嵌合體編碼序列的重組酵母表達載體轉化的酵母；用含有嵌合體編碼序列的重組病毒表達載體(例如，花椰菜花葉病毒，CaMV;菸草花葉病毒，TMV)感染的或用重組質粒表達載體例如Ti質粒轉化的植物細胞系統。哺乳動物表達系統是優選地用於表達本發明的嵌合體。用於分子表達的宿主細胞系的選擇主要取決於表達載體。真核表達系統是優選的(例如，哺乳動物和昆蟲)，因為它們容許翻-斧後的修飾(例如，糖基化)。另一種考慮是所需要的蛋白質的量。毫克量通常可以通過瞬時轉染來產生。例如，腺病毒EIA轉化的293人類胚腎細胞系可以用基於pRK5的載體通過磷酸鈣方法改良法來瞬時轉染以容許有效的表達。基於CDM8的載體可以用於通過DEAE-葡聚糖法來轉染COS細胞(AruffoCell，61:1303-1313(1990);ZettmeisslDNACellBiol.US,9:347-353(1990))。如果希望更大量的蛋白質，可以在宿主細胞系的穩定轉染之後表達分子(參見，例如實施例小節的實施例2)。要理解的是，分子的N-末端的疏水性前導序列的存在將確保轉染的細胞對分子的加工和分泌。要理解的是，可以優選的使用細菌或酵母宿主系統來降低生產成本。然而，由於細菌宿主系統缺少蛋白質糖基化機制，生產之後的糖基化可能是需要的。在任何情況下，在有效的條件下培養轉化的細胞，其容許大量的重組多肽的表達。有效的培養條件包括，但不限於，有效的培養基、生物反應器、溫度、pH值和允許蛋白質生產的氧條件。有效的培養基是指任何培養基，在其中培養細胞來產生本發明的重組嵌合分子。這種培養基一般包括具有可同化碳、氮和磷酸鹽源，以及合適的鹽、礦物質、金屬和其他營養物例如維生素的水溶液。本發明的細胞可以在常規的發酵生物反應器、搖瓶、試管、微滴定平皿和陪氏平皿中培養。培養可以在適合於重組細胞的溫度、pH值和氧含量下進4於。這些培養條件是本領域普通技術人員的專門技能之內的。取決於用於生產的載體和宿主系統，產生的本發明的蛋白質可以保留在重組細胞之內、分泌到發酵培養基中、分泌到兩層細胞膜的間隔中，例如E.coli中的周質間隙中；或保留在細胞或病毒膜的外表面上。在培養預定時間之後，進行重組蛋白質的回收。用語"回收重組蛋白質"是指收集含有蛋白質的完整的發酵培養基，並且不必暗指其他的分離或純化步驟。本發明的蛋白質可以使用各種標準的蛋白質純化技術來純化，例如但不限於，親和層析、離子交換層析、過濾、電泳、疏水性相互作用層析、凝膠過濾層析、反相層析、伴刀豆凝集素A層析、層析聚焦和差異溶解。本發明的分子優選的以"基本上純的"形式獲得。如在此使用的，"基本上純的"是指容許所述蛋白質在以下描述的各種應用中有效使用的純度。包含免疫球蛋白胺基酸序列的嵌合分子可以通過親和層析方便地純化。蛋白A作為親和配體的適用性取決於在嵌合體中使用的免疫球蛋白Fc結構域的種類和同種型。可以使用蛋白A來純化基於人類yl、或了4重4連的嵌合分子[Lmdmark""/.,丄Immunol.Meth.,62:1-13(1983)]。蛋白G優選地用於所有的小鼠同種型和用於人類y3[Guss""/，EMBOJ.,5:1567-1575(1986)]。親和配體所附著的固相支持物最常見的是瓊脂糖，但其他固相支持物也是可用的。與瓊脂糖可以實現的相比，機械穩定的固相支持物，例如受控的孔隙玻璃或聚(苯乙烯二乙烯基)苯容許更快的流速和更短的處理時間。將嵌合分子與蛋白A或G親和柱結合的條件完全由Fc結構域的特徵，即它的種類和同種型來確定。一般地，當選擇了適合的配體時，直接從未條件化的培養液發生有效的結合。本發明的這個方面的嵌合分子一個區別特徵是，對於人類yl分子，對蛋白A的結合能力相對於相同的Fc型的抗體有些減弱。在含有溫和的離液鹽的酸性pH值(在3.0或3.0以上)或在中性pH值緩衝液中，結合的本發明的這個方面的嵌合分子可以被有效地洗脫。這種親和層析步驟可以產生>95%純度的嵌合分子製備物。醫學級純度是治療性應用必需的。本領域已知的其他方法可以用於替代或補充在蛋白A或G上的親和層析來純化包括免疫球蛋白部分的嵌合分子。這種嵌合分子在親硫凝膠層析[Hutchens""/"Anal.Biochem.,159:217-226(1986)]和固定的金屬螯合物層析[Al-Mashikhie"/.,J.DairySci.,71:1756-1763(1988)]中的表現類似於抗體。然而，與抗體相比，它們對離子交換柱的表現不僅由它們的等電點決定，還由可能由由於它們的嵌合性質而存在於分子中的電荷偶極決定。要理解的是，本發明的分子可以被用於結合任何配體，所述配體例如通過E3結構域來結合CCR2。這些可以包括CCL7、CCL8和CCL13[D'Ambrosi。(2003)J.Immunol.Methods273:3-13]。本發明的這個方面的分子可以用於治療MCP-1/CCR2相關疾病。因而，根據本發明的另一方面，提供了在有需要的受試者中治療MCP-1/CCR2相關疾病的方法。所述方法包括向所述受試者施用治療有效量的本發明的分子，從而在所述受試者中治療MCP-1/CCR2相關疾病。在此使用時，術語"受試者"是指哺乳動物，優選人類受試者。在此使用時，術語"治療"是指防止、治癒、逆轉、減弱、減輕、最小化、抑制或停止MCP-1/CCR2相關疾病的有害影響。在此使用時，用語"MCP-1/CCR2相關疾病"是指發作或進展取決於MCP-1和其受體CCR2間的相互作用的疾病。動脈粥樣硬化、癌症(例如，前列腺癌、乳房癌、乳腺癌、成膠質細胞瘤、食道癌、成神經細胞瘤)、多發性石更化、粉瘤、單核細胞性白血病、腎臟疾病(例如，血管球性腎炎)、hamman-nch綜合症、子宮內膜異位、類風溼性關節炎、細支氣管炎、哮喘、系統性紅斑狼瘡、炎症性腸病(例如，結腸炎)、牙槽炎、再狹窄、腦外傷、銀屑病、特發性肺纖維化和移植動脈硬化構成的組。本發明的分子可以直接地或在藥物組合物中施用給受試者，在所述藥物組合物中它與適合的載體或W武形劑混合。在此使用時，"藥物組合物"是指一種或多種在此描述的活性成分與其他化學成分例如生理學適合的載體和賦形劑的製品。藥物組合物的目的是促進化合物向有機體的施用。優選的，所述藥物組合物是無免疫原性的。在此使用時，術語"活性成分"是指本發明的分子責任產生預期的生物學效果。下文中，可互換使用的用語"生理學上可接受的載體"和"藥學上可接受的載體"是指不對有機體引起的顯著刺激以及不消除施用的化合物的生物學活性和性質的載體或稀釋劑。佐劑包括在這些用語中。因而，例如，本發明的藥學上可接受的載體可以包括脂胺基酸。做為選擇，本發明使用的藥學上可接受的載體可以包括包埋材料，例如多元醇(即，碳水化物)。適合於用作賦形劑的碳水化物的非限制性實例包括麥芽糊精(例如，GlucidexRoquette)、海藻糖(例如，TrehaloseMerck)、纖維二糖、葡萄糖、果糖、麥芽酮糖、異麥芽酮糖、乳果糖、麥芽糖、龍膽二糖、乳糖、異麥芽糖、麥芽糖醇(例如，MaltisorbRoquette)、乳闢唐醇、赤薛醇、異麥芽酉同鬥唐醇(palatimtol)、木糖醇、甘露醇、山梨醇、半乳糖醇和核糖醇、蔗糖、棉子糖、龍膽糖、車前糖、毛蕊糖、水蘇糖、松三糖、葡聚糖和環己六醇。然而做為選擇，本發明使用的藥學上可接受的載體是適合於口服施用的孩史球體。例如，農義球體可以包括在胃中的pH值水平(例如，低於4的pH值水平)下對溶解或酸降解有抗性的有機材料的水不溶性基質，基本上如Vaghefi等人的美國專利No.6,849,271所描述的，通過引用將其合併在此。這種有機基質材料可以是，例如，甘油三酯、氪化植物油、蠟或蠟的混合物、聚烷氧基烷基醚、聚烷氧基烷基酯和水不溶性的部分降解的蛋白質。要理解的是，所述生物結合的聚合物(例如，本發明的PEG化的CCR2肽)可以用在藥學上可接受的載體中並作為其一部分，因而充當用於遞送CCR2胺基酸序列的載體分子，而同時充當遞送載體的成分。這種雙重用途的優選的實施方式是脂質體載體，例如，PEG結合的脂質體，如例如George等人的美國專利申請No.20030186869中所描述的，通過引用將其完全合併在此。在此，術語"賦形劑"是指添加到藥物組合物中來進一步促進活性成分的施用的惰性物質。賦形劑的非限定性實例包括碳酸鈣、磷酸4丐、各種糖類和澱粉種類、纖維素衍生物、明膠、植物油和聚乙二醇。酉己制和施用藥物的#支術可以最新X反本的"Remington'sPharmaceuticalSciences,"MackPublishingCo.,Easton,PA中找到，通過引用將其完全合併在此。適合的施用途徑可包括例如，口服、直腸的、穿黏膜的，特別是經鼻、腸的或胃腸外的遞送，包括肌肉內的、皮下的和髓內的注射，以及鞘內的、直接心室內的、靜脈的、腹膜內的、鼻內的或眼球內注射。作為選擇，人們可以以局部而不是全身性方式來施用藥物組合物，例如，直接將藥物組合物注射進患者的組織區域。本發明的藥物組合物可以通過本領域7>知的過程，例如通過常夫見的混合、溶解、粒化、製成糖衣、研磨、乳化、密封、捕集或凍千過程來製備。因而本發明的藥物組合物可以使用一種或多種生理學上可接受的載體按常規的方式來配製，所述載體包括便於將活性成分加工成可以藥學上使用的製品的賦形劑和輔助劑。適當的配方取決於給藥途徑的選擇。對於注射，可將藥物組合物的活性成分配製在水溶液中，優選的在生理學相容的緩衝液例如Hanks'溶液、Rmger's溶液或生理鹽水li衝液中。對於穿黏膜施用，將適合於需透過的障礙物的滲透劑用在配方中。這種滲透劑是本領域公知的。對於口力良施用，所述藥物組合物可以通過卩吏活性化合物與本領域公知的藥學上可接受的載體混合來容易地配製。這些載體使得所述藥物組合物能被配製為片劑、丸劑、錠劑、膠嚢、液體、凝膠劑、糖漿、漿液、懸浮液等等，用於由患者口服攝取。口服使用的藥理學製品可以在添加所希望的輔助劑之後，使用固體賦形劑、任選的研磨所述產生的混合物、以及加工農麼粒的混合物以獲得片劑或糖衣丸核，來製備。特別地，適合的賦形劑是填充物，例如糖類，包括乳糖、蔗糖、甘露醇或山梨醇；纖維素製品，例如玉米澱粉、小麥澱粉、米澱粉、馬鈴薯澱粉、明膠、黃蓍樹膠、甲基纖維素、羥基丙基甲基纖維素和碳醯胺纖維素鈉；和/或生理學上可接受的聚合物例如聚乙烯吡咯烷酮(PVP)。如果希望，可以添加崩解劑，例如交聯的聚乙烯基吡咯烷酮、瓊脂或藻酸或其鹽，例如海藻酸鈉。錠劑核心提供有適合的包衣。為了這個目的，可以使用濃縮的糖溶液，其可以任選含有阿拉伯樹膠、滑石粉、聚乙烯基吡咯烷酮、聚羧乙烯凝膠、聚乙二醇、二氧化鈦、漆溶液和適合的有機溶劑或溶劑混合物。染料或色素可以添加到所述片劑或糖衣丸包衣中用於鑑別或表徵不同的活性化合物劑量組合。可以口服使用的藥物組合物包括由明力交製成的push-fit力史嚢，以及由明膠和成形劑，例如甘油或山梨醇製成的軟的密封的膠嚢。push-fit膠嚢可以含有與填料例如乳糖、粘合劑例如澱粉、潤滑劑例如滑石粉或硬脂酸鎂以及任選的穩定劑混合的活性成分。在軟膠嚢中，活性成分可以溶解或懸浮在適合的液體中，例如脂肪油、液體石蠟或液體聚乙二醇。此外，可以添加穩定劑。用於口服施用的所有製劑應當是適合於所選給藥途徑的劑量。對於口腔施用，所述組合物可採用按常井見方式配製的片劑、錠劑的形式。對於吸入施用，使用適合的推進劑，例如，二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟曱烷或二氧化碳，以氣溶膠噴霧呈現的形式從密封的包裝物或噴霧器方便地遞送根據本發明使用的活性成分。對於加壓的氣霧劑來說，劑量可以通過提供遞送計量量的閥門來確定。例如，在分配器中使用的明膠的膠嚢和藥筒可以配製為含有化合物的粉末混合物和適當的粉末基劑，例如乳糖或澱粉。在此描述的藥物組合物可以配製為通過注射用於腸胃外施用，例如，通過彈丸注射(bolusmjection)或連續的輸注。用於注射的製劑可以以單位劑型存在，例如，在任選地帶有添加的防腐劑的安魯瓦瓶或多劑量容器中。所述組合物可以是在油或水賦形劑中懸浮液、溶液或乳劑的形式，可以含有配方試劑，例如懸浮、穩定和/或分散試劑。用於腸胃外施用的藥物組合物包括水可溶形式的活性製品的水溶液。另外，活性成分的懸浮液可以製備為適合的油性或基於水的注射懸浮液。適合的親油性溶劑或賦形劑包括脂肪油，例如芝麻油，或合成脂肪酸酯，例如油酸乙酯或甘油三酯，或脂質體。水性注射懸浮液可以含有提高懸浮液的粘度的物質，例如羧甲基纖維素鈉鹽、山梨醇或葡聚糖。任選地，懸浮液也可以含有適合的穩定劑或提高活性成分的溶解性以允許製備高濃度溶液的試劑。做為選擇，活性成分可以是粉未形式，用於在使用前與適合的賦形劑，例如，無菌的無熱原的基於水的溶液來構建。通過使用諸如可可脂或其他甘油酯的常規栓劑基劑，本發明的藥物組合物也可以一皮配製為直腸的組合物，例如一全劑或滯留灌腸劑，。適合於在本發明的上下文中使用的藥物組合物包括一些組合物，其中以有效量包含活性成分來實現預期的目的。更具體地，"治療有效量，，是指有效防止、減輕或改善失調(例如，缺血)的症狀或延長接受治療的受試者的存活的活性成分(例如，核酸或構建體)的量。治療有效量的確定處於本領域技術人員的能力之內，特別是考慮在此提供的詳細公開的情況下。對於用於本發明的方法任何製品，可以最初從體外和細胞培養分析來估計劑量或治療有效量。例如，可以在動物模型中配製劑量來實現期望的濃度或滴度。這種信息可用於更精確地測定人類中有用的劑曰裡。在此描述的活性成分的毒性和療效可以通過標準的藥學步驟在體外、在細胞培養物或實-瞼動物中確定。從這些體外和細胞培養分析獲得的數據可被用於配製用於人類的劑量範圍。取決於採用的劑型和使用的給藥途徑，劑量可以變動。可以由獨立的醫師#4居患者的狀況選擇確切的製劑、給藥途徑和劑量。(參見，例如Fmgl,E.(1975),"ThePharmacologicalBasisofTherapeutics,"Ch.1,p.l.)可以分別地調節給藥數量和施用間隔來提供足夠的活性成分血漿或腦水平來誘導或抑制生物效應(即，最低有效濃度，MEC)。MEC將隨每種製品變化，但可以從體外數據來估計。實現MEC所必需的劑量將取決於個體特徵和給藥途徑。可以使用檢測分析來確定血漿濃度。取決於要治療的狀況的嚴重度和反應性，給藥可以是單次或多次施用，療程持續從幾天到幾個星期，或直到實現治癒或實現疾病狀態的減弱。毫無疑問，要施用的組合物的量將取決於待治療的受試者、痛苦的嚴重度、施用的方式和處方醫師的判斷，等等。如果希望，本發明的組合物可以存在於包裝或分配器設備中，例如PDA批准的試劑盒，其可以含有一種或多種含有所述活性成分的單位劑型。例如，所述包裝可以包括金屬或塑料薄膜，例如泡罩包裝。所述包裝或分配器設備可以伴有施用的說明。所述包裝或分配器設備也可以伴隨有由管理藥物的製造備、使用或銷售的政府部分4幾構開具規定形式的注意事項公告，所述公告反映機構批准了組合物的形式用於人類或獸醫學施用。例如，這種注意事項公告可以包括由美國食品和藥品管理局對於處方藥物的和批准和經批准的的產品插入物批准插頁的標籤。配製在藥學上可接受的載體中包含本發明的製品、配製在藥學上可接受的載體中的組合物也可以被製備、置於合適的容器中，並被標記上對以上進一步詳述的適應症的治療。要理解的是，本發明的這個方面的分子(例如，嵌合的蛋白)可以通過基因治療的方式向受試者提供。因此，以上描述的哺乳動物表達構建體可以採用上文描述的任何適合的施用方式(即，體內基因治療)來向受試者施用。做為選擇，經由合適的基因遞送工具/方法(轉染、轉導、同源重組，等等)和所需的表達系統將核酸構建體導入適合的細胞，然後在培養中擴展修飾的細胞並返回到受試者中(即，離體基因治療)。當前優選的體內核酸轉移技術包括使用病毒或非病毒構建體如腺病毒、慢病毒、單純性皰疹I病毒或腺病毒相關病毒(AAV)和基於脂質的系統的轉染。用於基因的脂質介導轉移的有用的脂質是，例如，DOTMA、DOPE和DC-Chol[Tonkmson"a/"CancerInvestigation,14(1):54-65(1996)]。用於基因治療的最優選的構建體是病毒，最優選的是腺病毒、AAV、慢病毒或逆轉錄病毒。病毒構建體例如逆病毒構建體包括至少一個轉錄啟動子/增強子或基因座界定元件，或通過其他的方式如可變剪接、核RNA輸出或信使的翻譯後修飾來控制基因表達的其他元件。這種載體構建體還包括包裝信號、長末端重複(LTR)或其部分，以及適合於病毒使用的正鏈和負鏈引物結合位點，除非它已經存在於病毒構建體中。此外，這種構建體一般包括信號序列，用於肽從其置身其中的宿主細胞分泌。優選地，用於這個目的的信號序列是哺乳動物信號序列，例如lgK前導序列(例如，SEQIDNO:7和8)。任選地，構建體還可以包括指導多聚腺苦酸化的信號，以及一個或多個限制性位點和翻i奪終止序列。舉例來說，這種構建體一般將包括5'LTR、tRNA結合位點、包裝信號、第二《連DNA合成起點和3'LTR或其部分。可以使用非病毒的其他載體，例如陽離子脂質、聚賴氨酸和樹枝狀聚合物(dendrimers)。本發明的CCR2肽對MCP-1的親和性使得其能用在MCP-1的純化和;險測中。因而，根據本發明的又另一個方面，提供了包含標籤和本發明的CCR2肽的分子。在此使用時，術語"標籤"是指由結合配偶體例如抗體、螯合劑或抗生物素蛋白(生物素)分子特異性識別的部分。所述標籤可以置於CCR2肽的C-末端或N-末端，只要它不影響其生物學活性(例如，MCP-1結合)。例如，標籤多肽具有足夠的殘基以提供表位(即，表位標籤)，針對該表位可以產生抗體，而又足夠短從而不千擾CCR2肽的生物學活性。所述表位標籤優選還是十分獨特的，以致針對它的抗體基本上不與其他表位交叉反應。適合的標籤多肽一般地具有至少六個胺基酸殘基，通常在約8-50個胺基酸殘基之間(優選的，在約9-30個胺基酸殘基之間)。優選的是聚組氨酸序列，其結合鎳，容許通過例如所描述的Ni-NTA層析來分離標籤的蛋白質(Lmdsaywa/.Neuron17:571-574(1996)]。這種CCR2的表位標籤的形式是期望的，因為它的存在可以使用針對所述標籤多肽的標記的抗體來檢測。而且，提供表位標籤允許本發明的CCR2肽容易地通過使用抗標籤抗體的親和純化來純化。涉及抗體的親和純化糹支術和^^斷分析在此稍後il明。標籤多肽和它們相應的抗體是本領域/〉知的。實例包括流感HA標籤多肽和它的抗體12CA5(FieldMol.Cell.Biol.,8:2159-2165(1988));c-myc標籤和它的8F9、3C7、6E10、G4、B7和9E10抗體(Evan""/.，MolecularandCellularBiology,5:3610-3616(1985));和單純性皰滲病毒糖蛋白D(gD)標籤和它的抗體(PaborskyW"/.，ProteinEngineering,3(6):547-553(1990))。已經/>開了其他標籤多月太。實如j包4舌Flag月太[Hopp"a/.,BioTechnology,6:1204-1210(1988)];KT3表位肽[Martinet/.，Science,255:192-194(1992)];a-微管蛋白表位肽[Skmner"J.Biol.Chem.，266:15163-15166(1991)];和T7基因10蛋白狀標籤[Lutz陽Freyermuthe/1"/，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,87:6393-6397(1990)]。一旦選4奪了標籤多肽，可以使用本領域公知的方法來產生它的抗體。這些抗體是商業上可獲得的，例3口來自Sigma,St.Louis.USA。本發明的這個方面的分子可以用於從生物樣品分離MCP-1或檢測其中MCP-1的存在。如在此使用的，用語"生物樣品"是指生物流體，例如其中存在MCP-1的血液、血清、血漿、淋巴、膽汁、尿、唾液、痰、滑液、精液、淚、腦脊液、支氣管肺泡灌洗液、腹腔積液、膿、條件培養基等等。根據本發明的這個方面，MCP-1的分離通過以下方式來實現使生物樣品與本發明的這個方面的分子接觸，從而MCP-1和所述分子形成複合物(使用容許分子與MCP-1結合的緩衝液、溫度條件，實例參見datta-MannanandStone2004,上文)；並分離所述複合物從而從所述生物樣品分離MCP-1。為了分離所述複合物，分子優選的固定在固相支持物上。如在此使用的，用語"固相支持物"是指目的試劑(例如，本發明的這個方面的分子)可以粘附的非水基質。固相支持物的實例包括但不限於，部分或全部地由玻璃(例如，受控的孔隙玻璃)、多糖(例如，瓊脂糖)、聚丙烯醯胺、聚苯乙烯、聚乙烯醇和矽樹脂形成的固相支持物。在某些實施方式中，取決於實際情況，固相支持物可以包括測定^^的孔；在其它實施方式中，其是純化柱(例如，親和層析柱)。這個術語還包括離散微粒的不連續固相，例如那些在美國專利No.4,275,149中描述的。做為選擇，這樣的分子可以用於檢測生物樣品中MCP-1的水平。對於診斷應用，分子一^:地將用可檢測的部分標記。可檢測部分可以是能夠直接或間接地產生可檢測信號的任何一種。例如，所述可檢測部分可以是放射性同位素、螢光或化學發光化合物，或標籤(例如上文描述的，標記的抗體可以與之結合)。本發明的分子可以應用於任何已知的測定方法，例如竟爭性結合測定、直接和間接夾心測定和免疫^CJ定測定。Zola,MonoclonalAntibodies:AManualofTechniques,pp.147-158(CRCPress,Inc.,1987)。分子和任選的固相支持物和成像試劑(例如，抗;、生色底;勿等等^可以被包裝在具有適合的緩衝液和防腐劑的適合的容器中，用於診斷。在參閱無意用來限制的以下實施例時，本發明的其他目的、益處和新的特徵對於本領域的普通技術人員將變得明顯。另外，上文中描述的各種實施方式和方面以及在以下的權利要求部分中要求權利的每一種都可以在以下實施例中找到實驗支持。實施例現在參考以下實施例，其與以上的描述一同以非限制性的方式說明了本發明。一般地，在此使用的術語和本發明中使用的實驗方法包括分子的、生物化學的、微生物學的和重組DNA的技術。這些技術已經在文獻中充分i兌明了。參見，例如，MolecularCloning:AlaboratoryManual"Sambrook"<a/.，(1989);"CurrentProtocolsinMolecularBiology"VolumesI-IIIAusubel,R.M.,ed.(1994);Ausubel"a/.，"CurrentProtocolsinMolecularBiology",JohnWileyandSons,Baltimore,Maryland(1989);Perbal,"APracticalGuidetoMolecularClonmg",JohnWiley&Sons,NewYork(1988);Watson""/,,"RecombinantDNA",ScientificAmericanBooks,NewYork;Birrena/.(eds)"GenomeAnalysis:ALaboratoryManualSeries",Vols.1-4,ColdSpringHarborLaboratoryPress,NewYork(1998);在美國專利Nos.4,666,828;4,683,202;4,801,531;5,192,659和5,272,057中闡述的方法；"CellBiology:ALaboratoryHandbook",VolumesI-IIICellis，J.E.,ed.(1994);"CurrentProtocolsinImmunology"VolumesI-IIIColiganJ.E.,ed.(1994);Stitese/1a/,(eds),"BasicandClmicalImmunology"(8thEdition),Appleton&Lange,Norwalk,CT(1994);MishellandShiigi(eds),"SelectedMethodsinCellularImmunology",W.H.FreemanandCo.,NewYork(1980);在專利和科學文獻中廣泛地描迷了可用的免疫測定，參見，例如，美國專利Nos.3,791,932;3,839,153;3,850,752;3,850,578;3,853,987;3,867,517;3,879,262;3,901,654;3,935,074;3,984,533;3,996，345;4,034,074;4,098,876;4,879,219;5,011，771和5,281,521;"OligonucleotideSynthesis"Gait，M.J.,ed.(1984);"NucleicAcidHybridization"Hames,B.D.，andHigginsS.J.,eds.(1985);"TranscriptionandTranslation"Hames,B.D.，andHigginsS.J.，Eds.(1984);"AmmalCellCulture"Freshney,R.I.,ed.(1986);"ImmobilizedCellsandEnzymes"IRLPress,(1986);"APracticalGuidetoMolecularCloning"Perbal,B.,(1984)和"MethodsmEnzymology"Vol.1-317，AcademicPress;"PCRProtocols:AGuideToMethodsAndApplications",AcademicPress,SanDiego,CA(1990);Marshak""StrategiesforProteinPurificationandCharacterization-ALaboratoryCourseManual"CSHLPress(1996);通過引用將所有這些合併在此，如同在此完全地闡述了一樣。在這個文件的通篇提供了其他一般的參考文件。其中的步驟被認為是本領域公知的，為了讀者的方便而提供。通過引用將其中含有的所有信息合併在此。,/i/靡婆症,慈l^示7乂,MC屍-/使用關於針對包括MCP-1(CCL2)在內各種趨化因子的抗體在前列腺癌症患者中存在性的ELISA測試，確定了CCL2與前列腺癌症之間的if關係。,悉4^f本-與以色列Haifa的CARMEL和RAMBAM醫療中心的泌尿科學部合作進行了人類實驗工作。所有的血清和組織樣品在日期為2003年11月11日的Helsinki委員會批准No.1822之下從RAMBAM醫院的患者獲得。由來自CARMEL醫療中心泌尿科學部的AviStem教授進行病理分析。患者的臨床數據在以下的表1中概述。在#646,漆產的4;t-使用之前詳細描述的ELISA測試來才全測針對每種測試的趨化因子的Ab滴度(Wildbaum,G.,M.Nahir,andN.Karin.2003.Beneficialautoimmunitytoproinflammatorymediatorsrestrainstheconsequencesofself-destructiveimmunity.Immunity19:679)。重組人類趨化因子SDF-1(CXCL12)、MlP隱la(CCL3)、MIP-l卩(CCL4)、IL-8(CXCL8)、IP-10(CXCL10)、MIP-3a(CCL20)、MIP-3(3(CCL-19)、Lymphotactm(XCLl)、MIG(CXCL9)、RANTES(CCL5)、MCP-3(CCL7)和MCP-l(CCL2)全部購自PeproTech,RockyHill,NJ。人類MIF購自R&DSystems(Minneapolis,NM)。錄果#/#^#症,悉;#^雲7#對^(:屍-/的^著的《,戎庫諒i來自23位前列腺癌症患者，21位具有良性前列腺肥大(BPH)的個體、11位對照受試者的血清(以下的表3)測試了針對各種趨化因子的自身抗體的存在，特別是參與癌症的那些，包括SDF-1(CXCL12)、MIF、M1P-1cx(CCL3)、MIP-1P(CCL4)、IL-8(CXCL8)、IP隱IO(CXCL10),、MIP-3oc(MCP-10)、MIP-3(3(CCL-19)、淋巴細胞趨化因子(XCL1)、MIG(CXCL9)、RANTES(CCL5)、MCP-3(CCL7)和MCP-1(MCP-1)。,3-,悉者凝#炎'《;^#一在徵集的前列腺癌症患者的數目23年齡，年[中值(範圍)]74(64-81)tableseeoriginaldocumentpage44徵集的良性前列腺肥大患者的數目21tableseeoriginaldocumentpage44所有測試的趨化因子中，前列腺癌症患者具有專門針對MCP-1的高顯著度的抗體滴度(圖la，log2Ab滴度11.85±0.8)。在健康個體和BPH患者中抗MCP-1抗體的基線滴度(log2)是5-6，與根據任何其他的趨化因子觀察到的沒有不同。因而，前列腺癌症患者顯示了針對MCP-1的高度特異性的和選擇性的抗體反應(圖la,p10,p<0.01)(圖lb)。這些結果表明，MCP-1CCR2相互作用的抑制作用可以用來抑制由MCP-1/CCR2調節的癌症和其他疾病。ccw嵌合戚的Z^^j勿^屑辦f和,驗,潔CCW2f五3,-/gG淘建#^Z^:圖2顯示了CCR2(E3)-IgG嵌合體表達構建體的示例。根據之前用來產生CTLA4-Ig的基礎方案(VanOosterhout,A.J.，C.L.Hofstra，R.Shields,B.Chan,I.VanArk,P.M.Jardieu,andF.P.Nijkamp.1997MurineCTLA4-IgGtreatmentinhibitsairwayeosmophiliaandhyperresponsivenessandattenuatesIgEupregulationmamurinemodelofallergicasthma.AmJRespirCellMolBiol17:386)來產生IgGl構建體，修改是編碼人類IgGl重鏈的恆定區(鉸鏈-CH2-CH3)的cDNA從LPS和IL-4活化的外周血單核細胞(PBMC)克隆到pSecTag2/HygroB(Invitrogen,SanDiego,CA)上。人類CCR2-E3從LPS活化的人類PBMC中使用如下編碼部分CCR2的6結構域(E3，分別為SEQIDNO:1禾口2)的引物來亞克隆正義cccaagcttggcctgagtaactgtgaaag(SEQIDNO:12)，反義ccgctcgagagtctctgtcacctgcgtgg(SEQIDNO:13)。在證實序列之後，將擴增的PCR產物克隆到pSec-Tag2載體(Invitrogen,SanDiego,CA)中。將人類IgGFey的鉸鏈-CH2-CH3連接到質粒(pSec-CCR2)的CCR2(E3)下遊來產生融合蛋白CCR2-IgG。潛定的/&c-CCW2f醜3，-/gG^這勿應,秀將pSec-CCR2(E3)-IgG質粒與CHODHFR迷你基因載體根據廠家的方案使用jetPEI(多相轉染-IllkirchCedex,France)共轉染入DG44CHO細胞(DHFR—'-)(由USA哥倫比亞大學的Dr.LawrenceChasm提供)。在含有潮黴素(hygromycme)(200)ig/ml)的培養基中篩選穩定轉染的糹田胞。通過從AmershamBiosciences(Uppsia,Sweden)獲得的蛋白G-Sepharose柱從上清液純化CCR2(E3)-IgG融合蛋白，使用山羊抗人IgG-HRP(Sigma,St.Louis,MO)通過Western印跡分析來驗證。CC72f五3,-/gG^一^^/,合MC屍-/通過ELISA測定確定了CCR2的E3結構域結合MCP-1的能力。五ZJ&4-通過如下的直接ELISA測定了CCR2(E3)-IgG對各種商業上可獲得的人類趨化因子(PeproTech,RockyHill,NJ)的結合特異性96孑LELISA平板(Nunc,roskilde,Denemark)用100ng/mL每種趨化因子包被，用1%BSA/PBS洗滌和封閉。然後添加濃度5jig/ml的CCR2(E3)-IgG。添加HRP標記的小鼠抗人Ig(Jackson,Pennsylvama)作為第二抗體。結果顯示為4S0nm處的O.D.讀數。CCL2單克隆抗體(MAB679;R&DSystems,Mmne叩olis,NM)用作陽性對照(1(ig/ml)。茲l通過ELISA測定CCR2(E3)-IgG與各種細胞因子的結合。如圖3所示，CCR2的E3結構域足以結合MCP-1,與測試的其他因子相比，展現了與這種趨化因子的高四倍的結合。CO2廣￡3J-/gG,浙M^P-7滲^的勿/《if移勿l賓THP-1細胞從美國典型培養物保藏所獲得(ATCC，Rockville,MD,ATCCAccessionNo.TIB-202),根據廠家的方案培養。勿應if移都;t-測試了CCR2(E3)-IgG抑制MCP-1誘導的THP-1細胞遷移的能力。4吏用轉移孔室(CorningCostar,Cambridge,MA)進行了化學趨向性測定。將THP-1細胞與培養基(1x106細胞/孔)添加到轉移孔的上室，在用培養基平衡下室之後，添加補充有或不補充可溶CCR2(E3)-IgG的重組人類MCP-l(R&DSystems,Minneapolis,NM)。然後在含有7.5%(302的溼潤空氣中在37。C孵育轉移孔3小時。從下室收集遷移的單核細胞並計數。潛^圖4顯示了可溶的CCR2(E3)-IgG以劑量依賴性的方式顯著地並斷然地(90%)阻斷MCP-1誘導的THP-1細胞遷移。用CCR2(E3)-IgG治療小鼠-六隻SCID/Bg小鼠的三個組皮下施用5x106個PC陽3Luc細月包/小鼠(ElHilali""/,ClmCancerRes.2005Febl;ll(3):1253-8.).第一組經歷CCR2(E3)-IgG的重複施用(200昭/小鼠，i.v.,四天的間隔)。第二組施用匹配量的PBS,第三組施用同種型匹配的對照IgG。對於晚期治療(即，建立的肺瘤的治療)，在施用PC-3細胞18天後開始施用。J^GF的^^^-參見deWet,J.R.,K.V.Wood,M.DeLuca,D.R.Helmski，andS.Subramam.1987.Fireflyluciferasegene:structureandexpressionmmammaliancells.MolCellBiol7:725;Rubio,N.,M.M.Villacampa,andJ.Blanco.1998.TraffictolymphnodesofPC-3prostatetumorcellsmnudemicevisualizedusmgtheluciferasegeneasatumorcellmarker.LabInvest78:1315;Rubio,N.,M..LorgansmeasuredusmgprostatetumorPC-3cellsexpressingtheluciferasegeneasaquantifiabletumorcellmarker.Prostate44:133;Harlow,E.,andD.Lane.1988.Antibodies,alaboratorymanual.ColdSpringHarborLaboratory,NewYork。在第30天處死動物，獲取腫瘤並切片。使用來自SantaCruz.的兔抗VEGF(如果你需要，我可以明天給你提供cat編號)檢測VEGF。炎>￡#遊澤#-如先前描述的，參見ElHilaliClmCancerRes.2005Febl;ll(3):1253-8。簡言之，使用C〇2在第30天處死動物。獲取肺和骨並在液氮中冷凍。然後將冷凍的組織研磨成粉未，添加裂解緩衝液(Promega)。樣品渦旋數秒，混合物離心20分鐘(13000rpm)。然後添加螢光素酶底物。潛^使用CCR2(E3)-Ig的治療完全地降低了PC-3腫瘤生長-如圖5a所示，與施用PBS或對照IgG的小鼠中發展的腫瘤相比，重複施用CCR2(E3)-IgG完全地抑制了PC-3腫瘤生長。使用CCR2-Ig的晚期治療(第15天)阻斷了預先建立的原發腫瘤的發展和它形成轉移的能力。圖5b清楚地顯示了，即使當CCR2(E3)-IgG在腫瘤發展之後(細胞注射的第18天)施用，CCL2的阻斷顯著地降低了原發肺瘤的發展和它形成轉移的能力。即使在腫瘤細胞施用的中間時間(8天)之後，CCR2(E3)-IgG仍能夠抑制腫瘤發展。用CCR2(E3)-Ig治療降低了肺瘤轉移-如圖5c所示，如由螢光素酶活性的降低所指明的，用CCR2(E3)-IgG治療小鼠顯著地抑制了向肺部和骨組織的紳瘤轉移。與未治療的動物相比，在兩種組織中的螢光素酶活性被降低了4-10倍，並且總體達到了相同的最小水平(即，約0.5)。用CCR2(E3)-IgG治療完全地降低VEGF表達-如圖6a-f所示，與同種型匹配的對照IgG(附圖6b、e)和PBS(圖6d、f)相比，使用CCR2(E3)-IgG(圖6a、d)顯著地降低了VEGF在腫瘤位點的表達。這表明，CCR2途徑的阻斷抑制了VEGF的腫瘤誘導的活性。CCX2滲^#PC-3勿應遷移被CCW2J-/gG細胞遷移測定-使用CellBiolabs，SanDiego,CA的CytoSelect試劑盒測定細胞遷移。抗CCL2是從Dr.Martinez和Dr.Melado，免疫學和月中瘤學部，CentroNationaldeBiotecnologia，UAMCampusdeCantoblanco,Madrid,Spam獲得的。簡言之，如圖7所示，PC-3細胞(106/孔)添加到轉移孔平板的上室，CCL2(重組人類MCP-l、RHMCP-1;20ng/ml)添加到下孔，下孔也補充有抗CCL2(50yg)和/或CCR2(E3)-IgG(200)ig)。在37°C孵育2小時之後，通過FACS計數遷移的PC-3細胞。結果顯示為三個副本的平均數土SE。結果在CCL2對前列腺癌細胞的可能的作用機制之中的是它吸引腫瘤細胞。這可以在圖7中看出，CCL2與CCR2-Ig比抗CCL2mAb更好地抑制PC3細胞的遷移。CCW2屍EG必為了穩定本發明的CCR2胺基酸序列以及為了使它適合於口服和/或胃腸外施用，肽可以使用本領域已知的方法(例如，Croyle,M.A.，Wa/.,2000,Hum.GeneTher.11:1721-1730;Croyle,M.A.,"a/,,2004,J.Virol.78:912-921)PEG化，所述肽具有以下的序列LysGlyLeuSerAsnCysGluSerThrSerGinLeuAspGinAlaThrGinValThrGluThr(SEQIDNO:11),除了在它的N-末端添加了賴氨酸殘基之外其與SEQIDNO:1相同。例如，單甲氧基聚(乙烯)乙二醇可以通過琥珀醯亞胺基琥珀酸酯(其可以從SigmaChemicals,St.Louis,Mo.獲得)活化。一旦被活化，聚合物可以以約10:1(聚合物肽)的肺瘤比添加至CCR2肽，在25。C輕柔攪拌下來進一步進行PEG化反應。通過添加相對於添加的PEG數量過量(例如，10倍)的賴氨酸(SigmaChemicals)，可以停止反應。未反應的PEG、過量的賴氨酸和反應副產物通過在用100mM磷酸鉀緩衝的鹽水(pH7.4)平衡的Micro-BioSpmP-30層析柱(Bio-Rad)上進行緩衝液交換來消除。要理解的是，為了清楚而在獨立的實施方式的上下文中描述的本發明的某些特徵，也可以組合於單個實施方式中提供。反之，為了簡便起見在單個實施方式的上下文中描述的本發明的各種特徵，也可以單獨地或以任何適合的子組合來才是供。儘管已經結合其具體實施方式描述了本發明，很明顯的是，多種替換、修改和變體對於本領域技術人員是顯而易見的。因此，旨在包括所有落在所附的權利要求的精神和廣義範圍內的這種替換、修改和變體。在本說明書中提及的所有出版物、專利和專利申請和GenBankAccession號碼通過引用將它們完全地合併到本說明書中，達到如同每個單獨的出jf反物、專利或專利申i青或GenBankAccession號碼一皮具體和分別地指明通過引用合併在此的相同程度。此外，在本申請中所有參考文獻的引用或列明不應被看作是承認這些參考文獻是本發明可獲得的現有技術。權利要求1.一種包含異源胺基酸序列的分子，所述異源胺基酸序列結合到缺少CCR2N-末端結構域的CCR2胺基酸序列，所述CCR2胺基酸序列能夠結合MCP-1，並且其中所述分子是無免疫原性的。2.—種分子，其包含附著於非蛋白質部分的CCR2胺基酸序列，其中所述CCR2胺基酸序列能夠結合MCP-1，而且所述分子在受試者中是無免疫原性的。3.—種分子，包含至少兩個各自能夠結合MCP-1的CCR2胺基酸序列。4.一種包含標籤的分子，所述標籤附著於缺少CCR2N-末端結構域的CCR2胺基酸序列，所述CCR2胺基酸序列能夠結合MCP-1。5.如SEQIDNO:14或15所示的分子。6.包含權利要求1、2或3的分子以及藥學上可接受的載體的藥物糹且合物。7.包含一種分子和藥學上可接受的載體的藥物組合物，所述分子包含缺少CCR2N-末端結構域並能夠結合MCP-1的CCR2胺基酸序列，所述藥物組合物是無免疫原性的。8.—種在有需要的受試者中治療MCP-1/CCR2相關疾病的方法，包括向所述受試者施用治療有效量的權利要求1、2、3和/或5和Z或7的分子，從而在所述受試者中治療MCP1/CCR2相關疾病。9.權利要求1、2、3、5或7的分子的用途，用於製備被鑑定用於治療MCP-1/CCR2相關疾病的藥物。10.—種從生物樣品中分離MCP-1的方法，所述方法包括(a)使所述生物樣品與權利要求4的分子接觸，以使得MCP-1和權利要求4的分子形成複合物；以及(b)從所述生物樣品分離所述複合物從而分離MCP-1。11.權利要求1、6、8或9的任一項的分子、藥物組合物、方法和用途，其中所述異源胺基酸序列包含免疫球蛋白胺基酸序列。12.^又利要求1、4、6、8、9或10的任一項的分子、藥物組合物、方法和用途，其中所述缺少CCR2N-末端結構域的CCR2胺基酸序列在SEQIDNO:2中示出。13.權利要求8或9的任一項的方法或用途，其中所述MCP-1/CCR2相關疾病選自由炎症性疾病、壞死、動脈粥樣石更4匕、癌症、多發性石更化、粉瘤、單核細胞性白血病、腎臟疾病(例如，血管球性腎炎)、hamman-rich綜合症、子宮內膜異位、類風溼性關節炎、細支氣管炎、哞喘、系統性紅斑狼瘡、炎症性腸病(例如，結腸炎)、牙槽炎、再狹窄、腦外傷、銀屑病、特發性肺纖維化和移植動脈硬化構成的組。14.權利要求4或10的任一項的分子或方法，其中所述標籤是表位標籤。15.權利要求4或10的任一項的分子或方法，其中權利要求4的分子附著於固相支持物上。16.權利要求1、2、3、5或7的任一項的分子，附著於非蛋白質部分。17.^又利要求2、6、8、9的任一項的分子、藥物組合物、方法或用途，其中所述非蛋白質部分選自由聚乙二醇(PEG)、聚乙烯基吡咯烷酮(PVP)、苯乙烯馬來酐共聚物(SMA)和二乙烯醚與順丁烯二酸酐的共聚物(DIVEMA)構成的組。18.^又利要求6或7的^壬一項的藥物組合物，其中所述接受的載體被配製為用於腸胃外施用。19.^又利要求6或7的^f壬一項的藥物組合物，其中所述接受的載體基本上是無免疫原性的。20.^又利要求6或7的任一項的藥物組合物，其中所述藥學接受的載體包括脂胺基酸。21.壽又利要求6或7的任一項的藥物組合物，其中所述藥學上可接受的載體包括碳水化物。22.^又利要求6或7的^壬一項的藥物組合物，其中所述藥學上可接受的載體包括微球體。23.權利要求6或7的任一項的藥物組合物，其中所述藥學上可接受的載體包括脂質體。24.^又利要求6或7的任一項的藥物組合物，其中所述藥學上可接受的載體包括聚合物微球體。25.—種在有需要的受試者中治療MCP-1/CCR2相關疾病的方法，包括向所述受試者施用治療有效量的分子，所述分子包含缺少CCR2N-末端結構域並能夠結合MCP-1的CCR2胺基酸序列，從而在所述受試者中治療MCP-1/CCR2相關疾病。26.—種分子用於製備藥物的用途，所述分子包含缺少CCR2N-末端結構域並能夠結合MCP-1的CCR2胺基酸序列，所述藥物被鑑定為用於治療MCP-1/CCR2相關疾病。27.權利要求25或26的任一項的方法或用途，其中所述缺少CCR2N-末端結構域的CCR2胺基酸序列如SEQIDNO:2中所示。28.^又利要求25或26的任一項的方法或用途，其中所述MCP-1/CCR2相關疾病選自由炎症性疾病、壞死、動力永粥樣石更化、癌症、、多發性硬化、粉瘤、單核細胞性白血病、腎臟疾病(例如，血管球性腎炎)、hamman-rich綜合症、子宮內膜異位、類風溼性關節炎、細支氣管炎、哮喘、系統性紅斑狼瘡、炎症性腸病(例如，結腸炎)、牙槽炎、再狹窄、腦外傷、銀屑病、特發性肺纖維化和移植動脈硬化構成的組。29.權利要求25或26的任一項的方法或用途，其中所述分子在SEQIDNO:14或15中示出。全文摘要分子和包含該分子的組合物用於分離MCP-1和治療CCR2/MCP-1相關疾病。文檔編號C07K14/715GK101160323SQ200680012540公開日2008年4月9日申請日期2006年4月10日優先權日2005年4月15日發明者G·威爾德鮑姆,L·伊扎克,N·卡林,U·韋因伯格,Y·佐哈申請人:拉帕波特家族醫學科學研究所