包含噻吩並[2,3－c]吡啶衍生物的藥用組合物及其用途的製作方法

2023-10-11 05:42:04 2

專利名稱：包含噻吩並[2,3－c]吡啶衍生物的藥用組合物及其用途的製作方法
技術領域：
本發明涉及包含噻吩並[2，3-c]吡啶化合物的藥用組合物，所述化合物能夠抑制效應細胞粘附分子(ECAM)(尤其是選擇蛋白)和糖胺聚糖(GAG)(尤其是硫酸乙醯肝素糖胺聚糖(HS-GAG))之間的相互作用，以及治療或預防細胞粘附和細胞遷移相關性疾病或病症的方法，尤其是治療或預防炎性和自身免疫性疾病和病症以及病毒性疾病、癌症和澱粉樣病的方法。
背景技術：
炎性反應主要由白細胞、嗜中性白細胞和淋巴細胞介導，這些細胞在血液中循環並且與血管內皮產生可逆性相互作用。炎性刺激作用下，白細胞牢固地附著到血管內皮，經血管壁遷移(外滲)，然後沿著趨化梯度向炎性刺激移動。因此，白細胞與血管內皮細胞的相互作用在炎性反應中是必需的初始步驟。選擇蛋白在炎症中起關鍵作用，因為它們引起血液中的白細胞到脈管系統的最初附著。阻止選擇蛋白介導性細胞粘附可以改善或避免炎症性有害後果。因此，選擇蛋白是細胞粘附病症治療的主要靶，尤其是炎症治療的主要靶。
選擇蛋白調控嗜中性白細胞和淋巴細胞粘附並進入淋巴組織和炎症位置(Rosen，Am.J.Respir.Cell.Mol.Biol.，3397-402，1990)。三種已知的選擇蛋白為E-選擇蛋白(原名ELAM.1)、P-選擇蛋白(原名PADGEM、GMP-140或CD61)和L-選擇蛋白(原名mLHR、Leu8、TQ-1、gp90、MEL、Lam-1或Lecam-1)(Lasky，Annu.Rev.Biochem.64113，1995；Kansas，Blood 883259，1996)。每種選擇蛋白的調控機制不同，並且以不同方式參與炎症或免疫過程。每種選擇蛋白的凝集素結構域對於其粘附功能來說是決定性的。選擇蛋白從血流中捕獲白細胞，使白細胞間歇性附壁，從而白細胞沿著內皮細胞表面「滾動」，這種選擇蛋白捕獲之後發生更緊密細胞粘附。L-選擇蛋白在白細胞組成性表達並且介導淋巴細胞粘附外周淋巴結的高內皮微靜脈，而嗜中性白細胞粘附細胞因子活化的內皮細胞(Spertini等J.Immunol.1472565-2573，1991)。在炎性病症中，可能是L-選擇蛋白起最關鍵的作用(Shimizu等，Immunol.Today 13106，1992；Picker等，Annu.Rev.Immunol.10561，1992)。
Buerke等證實了在炎性病症中選擇蛋白的重要作用，例如貓的局部缺血再灌注損傷(Buerke，M.等，J.Clin.Invest.931140，1994)。單核細胞上存在的L-選擇蛋白以及E-或P-選擇蛋白配體在慢性炎症中涉及這些受體-配體相互作用。(L.Lasky Annu.Rev.Biochem.64113-39，1995)。L-選擇蛋白的單克隆抗體阻止嗜中性白細胞遷移到炎性皮膚(Lewinsohn等，J.Immunol.1384313，1987)，阻止嗜中性白細胞和單核細胞遷移到炎性腹水(Jutila等，J.Immunol.1433318，1989)，並阻止嗜中性白細胞遷移到發炎的腹膜。Jasin等證明使用抗體能抑制嗜中性白細胞在發炎滑膜中積聚(Jasin等，Arthritis RheuM.33S34，1990)。抗L-選擇蛋白和E-選擇蛋白的單克隆抗體EL-246減輕膿毒症引起的肺損傷(Ridings，PC等，Arch Surg.1199-1208，1995)。單克隆抗體SMART為L-選擇蛋白封閉性抗體，用於伴有多器官功能衰竭(人們認為這種病症部分是因為炎性細胞浸潤引起)的創傷的臨床試驗。人們推測抗L-選擇蛋白抗體通過阻止嗜中性白細胞粘附到內皮從而提供治療作用，它在嚴重創傷的靈長類模型體內是有效的(Schlag G等，Critical Care Medicine 1999，27，1900-1907)。人們認為這種單克隆抗體還對成人呼吸窘迫症候群和心肌梗塞的治療有益。
糖胺聚糖(本文又名「GAG」)為天然的碳水化合物類分子，它們很有可能是通過與效應分子相互作用參與調控許多細胞過程，包括血液凝固血液凝固、血管生成、腫瘤生長和平滑肌細胞增生。GAG通常是(但不總是)共價結合到稱為蛋白聚糖的結構中的蛋白核。蛋白聚糖結構大量存在於細胞表面，並且與細胞周圍的胞外基質有關。GAG由重複二糖單位構成。例如，硫酸乙醯肝素糖胺聚糖(本文又名「HS-GAG」)由重複二糖單位D-葡糖醛酸和N-乙醯基-或N-磺基-D-葡糖胺構成。HS-GAG的高分子多樣性源於它們獨特的硫酸化模式(Sasisekharan，R.和Venkataraman，G.，Current Opinion in Chem.Biol.，4，626-631，2000；Lindahl，U.等，J.Biol.Chem.，273，24979-24982，1998；Esko，J.和Selleck，S.B.，Annu.Rev.Biochem.，71，435-471，2002)。一種研究最全面的HS-GAG是廣泛使用的抗凝血劑肝素。肥大細胞中的肝素是硫酸乙醯肝素的高度硫酸化形式。包括細胞因子、生長因子、酶和細胞粘附分子的許多重要的調節蛋白與肝素緊密結合。儘管蛋白與GAG(例如肝素和硫酸乙醯肝素)的相互作用在生物學上十分重要，但是蛋白-GAG結合需要的結構還未被充分表徵。離子的相互作用對於促進蛋白-GAG結合很重要，而帶電殘基的間距可以決定蛋白-GAG親合力和特異性。
HS-GAG提供了在細胞-組織-器官水平上的治療性新方法和策略。例如，鑑定影響具體生物學過程的特異性HS-GAG序列將能夠開發出基於多糖序列的新型分子治療藥物。合成的HS-GAG或HS-GAG序列的分子模擬物可以提供對抗病症的新方法，例如細菌性和病毒性感染、動脈粥樣硬化、癌症和阿爾茨海默氏病。
選擇蛋白經結合碳水化合物配體的凝集素結構域介導它們的粘附功能。新的證據表明GAG(尤其是HS-GAG)是與選擇蛋白相互作用的碳水化合物受體(Nelson RM等，Blood 82，3253-3258，1993；Ma，YQ和Geng，JG，J.Immunol.165，558-565，2000；Giuffre，L.等，J.Cell.Biol.136，945-956，1997；Watanabe N.等，J.Biochem.125，826-831，1999；Li YF等，FEBS Lett 444，201-205，1999)。與這種觀測結果一致的是，肝素、HS-GAG和肝素衍化的低聚糖直接阻滯L-選擇蛋白依賴性粘附(美國專利號5,527,785，Bevilacqua等)。此外，短的硫酸化肝素衍生的四糖減少嗜中性白細胞與表達P-選擇蛋白的COS細胞結合(Nelson RM等，Blood 82，3253-3258，1993)。HS的多價特徵可能是流動條件下結合L-選擇蛋白的重要因素(Sanders等，出處同上)。
由於GAG和選擇蛋白之間的相互作用在細胞-基質和細胞-細胞粘附中起重要作用，而後者涉及某些疾病和炎症，所以調控這些相互作用具有治療意義。
Bevilacqua等(美國專利號5,527,785)提供了一種通過給予肝素樣低聚糖調控患者選擇蛋白結合的方法。低聚糖通過結合到L-或P-選擇蛋白起作用。
Xie X等(用C 275，34818-25，2000)介紹了通過硫酸化糖類(包括羧基被還原的肝素和硫酸化肝素)抑制L-和P-選擇蛋白介導性細胞粘附。雖然這些分子在治療炎症方面表現出選擇蛋白阻滯劑的效用，但是作為治療劑各自都有明顯的缺點，包括體內半衰期短、費用高、潛在的免疫原性和其它可能具有的副作用。這些方法另外的缺陷在於缺乏有效的方法來改善這些分子的藥理性。
另外，幾個研究小組開發對肝素或對肝素樣分子(即PG或其它GAG)(參見例如美國專利號5,919,761，Wakefield等)具有高親合力的小肽在多種應用中用於調節天然GAG和PG活性。
仍然需要非肽類合成的小分子化合物，它們能夠調節GAG的功能以及調節GAG和GAG效應蛋白分子間的相互作用。
美國專利6,232,320公開了作為細胞粘附抑制劑的噻吩並[2，3-c]吡啶可用作炎症抑制劑。這些公開的化合物與本發明化合物不同，因為它們具有不同的雜環系並且不含磺醯基苯甲醯基氨基。
日本專利申請JP 2001151779公開了4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶、藥用組合物和包含它們的TNF-α形成抑制劑，同樣的公開還見於Fujita M等(Bioorg.Med.Chem.Lett.，121607-1611，2002)。相關的日本專利申請JP 2001151780公開了新型4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶作為TNF-α合成的抑制劑，同樣的公開還見於Fujita等(Bioorg.Med.Chem.Lett.121897-1900，2002)。這兩個日本專利申請在4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶環的3位提供了不同的取代基(2001151779申請中為芳基羰基，2001151780申請中為羧基或烷氧基羰基)。然而，所有這些化合物不同於本發明化合物，因為它們不含作為骨架部分的磺醯基苯甲醯基氨基，而磺醯基苯甲醯基氨基是本發明化合物的必要特徵。
Balakin等(J.Chem.Inf.Comput.Sci.421332-1342，2002)介紹了使用計算機根據性質設計的以G-蛋白偶聯受體(GPCR)為靶的化合物庫。在虛擬篩選的數萬種結構中，根據此分析使用的選擇標準，GPCR靶的庫中的某些化合物(包括一種噻吩並[2，3-c]吡啶化合物)定為最高得分的結構。
SciFinder Scholar資料庫(2003版本)列出了2846種噻吩並[2，3-c]吡啶衍生物(至2003年12月30日止)，但沒有對任何一種這類化合物介紹用途和化學合成數據。
化合物供應商Chemical Diversity Labs Inc.(San Diego，CA)發布了名為CombiLab Probe Libraries的資料庫(2002年6月修訂版；220,674種化合物結構)，其中列出了438種噻吩並[2，3-c]吡啶衍生物，但沒有介紹用途和化學合成數據。
化合物供應商I.F.Lab(Kiev，Ukraine)發布了名為IF LAB Libraries的資料庫(2003年7月；77,098種化合物結構)，其中列出了3145種噻吩並[2，3-c]吡啶衍生物，但沒有介紹效用和化學合成數據。ChemicalDiversity Labs Inc.資料庫中的某些化合物與I.F.LAB資料庫中的化合物相同。
沒有任何背景技術公開或暗示噻吩並[2，3-c]吡啶的磺醯基苯甲醯基氫基衍生物具有有益的藥理活性。
發明概要本發明目的之一是提供醫療和診斷用途的包含小分子有機化合物的藥用組合物，其中小分子有機化合物是效應細胞粘附分子(ECAM)(尤其是L-選擇蛋白和P-選擇蛋白)與糖胺聚糖(GAG)(尤其是硫酸乙醯肝素糖胺聚糖(HS-GAG))之間相互作用的抑制劑。因此，這些組合物可用作L-選擇蛋白和P-選擇蛋白介導的細胞-細胞相互作用的抑制劑，尤其是用作白細胞粘附、遷移和浸潤抑制劑。另外，所述組合物直接與HS-GAG相互作用，因此可用作任何HS-GAG介導性病變和病症的抑制劑。
一方面，本發明提供包含作為有效成分的通式I化合物和其藥物學上可接受的鹽以及藥物學上可接受的稀釋劑或載體的藥用組合物， 其中R1選自H；1-6個碳原子的直鏈或支鏈烷基；芳基烷基；取代的芳基烷基；任選被烷基取代的環烷基；烷醯基；任選在芳基被取代的芳基羰基；環烷基羰基；烷氧基羰基；R2選自羧基；氰基；氨基羰基；烷基氨基羰基；任選在芳基被取代的芳基氨基羰基；二烷基氨基羰基，其中各烷基為直鏈或支鏈C1-C6烷基，或者兩個烷基一起可形成包含氮、任選包含1-2個額外的雜原子的3-7元飽和、不飽和或芳族單環或雙環雜環基；烷氧基羰基；烷醯基；環烷基羰基；任選在芳基被取代的芳基羰基；苯並噻唑-2-基；R3和R4選自任選被羥基、烷氧基、氨基或烷基氨基取代的C1-C6烷基、C2-C4單不飽和烯基、環烷基、芳基、芳基甲基，或者R3和R4一起可形成包含氮、任選包含1-2個額外的雜原子的任選取代的5-7元飽和、不飽和或芳族單環或雙環雜環基；R5、R6、R7和R8選自H或C1-C6烷基，前提條件是當R5、R6、R7和R8為C1-C6烷基時，R1為氫。
一個實施方案，R1選自甲基、乙基、1-甲基乙基、苯基甲基、乙醯基、乙氧基羰基且R5＝R6＝R7＝R8為氫。
再一個實施方案，R1為氫且R5＝R6＝R7＝R8為氫或甲基。
又一個實施方案，R1＝R5＝R6為甲基且R7＝R8為氫。
再一個實施方案，R2選自氰基、甲氧基羰基、乙氧基羰基、氨基羰基、甲基氨基羰基、二甲基氨基羰基、吡咯烷基羰基、哌啶基羰基、嗎啉基羰基、苯並噻唑-2-基。
進一步的實施方案，R3和R4選自甲基、乙基、丙基、丁基、甲氧基乙基、氯丁基、氰基乙基、苯基、環戊基、環己基、苯基甲基、烯丙基或巴豆基，R3和R4可相同或不同。
再一個實施方案，R3和R4形成吡咯烷、哌啶、2-甲基、3-甲基、4-甲基或3，5-二甲基哌啶、全氫吖庚因、嗎啉、哌嗪、4-甲基哌嗪、3，4-二氫-2(1H)-異喹啉基、3，4-二氫-1(2H)喹啉、1，3，3-三甲基-6-氮雜二環[3.2.1]辛-6-烷和它們的取代的衍生物。取代的衍生物包括但不限於哌嗪基-4-甲酸酯、哌啶基-4-甲酸酯、哌啶基-3-甲酸酯。
某些優選實施方案，本發明提供包含選自下列結構式I化合物的組合物1)2-[[4-[(乙基丁基氨基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-3-(苯並噻唑-2-基)-6-乙基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶(化合物5)；2)2-[[(4-(3，4-二氫-2(1H)-異喹啉基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-6-(1-甲基乙基)-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶-3-甲醯胺(化合物1)；3)2-[[4-(甲基苯基氨基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-6-(1-甲基乙基)-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶-3-甲醯胺；4)2-[[4-(3，4-二氫-1(2H)-喹啉基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-4，5，6，7-四氫-5，5，7，7-四甲基噻吩並[2，3-c]吡啶-3-甲醯胺；5)2-[[4-[(二乙基氨基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-3-(苯並噻唑-2-基)-6-乙基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶(化合物11)；6)2-[[4-(嗎啉基磺醯基)苯甲醯基]氨基]-3-(苯並噻唑-2-基)-6-(1-甲基乙基)-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶；7)2-[[4-(二乙基氨基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-4，5，6，7-四氫-5，5，7，7-四甲基噻吩並[2，3-c]吡啶-3-甲酸乙酯；8)2-[[4-(3，4-二氫-1(2H)-喹啉基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-3-(苯並噻唑-2-基)-4，5，6，7-四氫-5，5，7，7-四甲基噻吩並[2，3-c]吡啶；9)2-[[4-(六氫-1H-吖庚因-1-基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-4，5，6，7-四氫-5，5，7，7-四甲基噻吩並[2，3-c]吡啶-3-甲酸乙酯；10)2-[[4-[[4-(甲基)-1-哌嗪基]磺醯基]苯甲醯基]氨基]-3-(苯並噻唑-2-基)-6-甲基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶；11)2-[[4-[(1，3，3-三甲基-6-氮雜二環[3.2.1]辛-6-基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-3-(苯並噻唑-2-基)-6-甲基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶；12)2-[[4-[(甲基苯基氨基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-3-(苯並噻唑-2-基)-6-甲基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶；13)2-[[4-(嗎啉基磺醯基)苯甲醯基]氨基]-3-(苯並噻唑-2-基)-6-甲基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶；14)2-[[4-[(二乙基氨基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-3-(苯並噻唑-2-基)-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶-6-甲酸乙酯；15)2-[[4-[[4-(3-甲基-1-哌啶基)]磺醯基]苯甲醯基]氨基]-3-(苯並噻唑-2-基)-6-甲基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶；16)2-[[4-[(二乙基氨基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-3-(苯並噻唑-2-基)-6-(苯基甲基)-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶；17)2-[[4-[(二乙基氨基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-3-(苯並噻唑-2-基)-6-甲基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶；18)2-[[4-[[4-(乙氧基羰基)-1-哌嗪基]磺醯基]苯甲醯基]氨基]-4，5，6，7-四氫-5，5，7，7-四甲基噻吩並[2，3-c]吡啶-3-甲醯胺；19)2-[[4-[(環己基甲基氨基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-4，5，6，7-四氫-5，5，7，7-四甲基噻吩並[2，3-c]吡啶-3-甲醯胺；20)2-[[4-[(二-2-丙烯基氨基)磺醯基]苯甲醯基]-4，5，6，7-四氫-5，5，7，7-四甲基噻吩並[2，3-c]吡啶-3-甲酸甲酯；21)2-[[4-[(二-2-甲氧基乙基氨基)]磺醯基]苯甲醯基]-4，5，6，7-四氫-5，5，7，7-四甲基噻吩並[2，3-c]吡啶-3-甲醯胺；22)2-[[4-[(1，3，3-三甲基-6-氮雜二環[3.2.1.]辛-6-基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-6-甲基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶-3-甲醯胺；23)2-[[4-[(二乙基氨基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-3-(苯並噻唑-2-基)-6-甲基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶；24)2-[[4-[(二乙基氨基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-3-(苯並噻唑-2-基)-6-(1-甲基乙基)-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶；25)2-[[4-[(二-2-甲氧基乙基氨基)磺醯基]苯甲醯基]-氨基]-3-(苯並噻唑-2-基)-6-甲基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶；26)2-[[4-[(甲基苯基氨基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-3-(苯並噻唑-2-基)-6-甲基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶；27)2-[[4-[[4-(乙氧基羰基)-1-哌嗪基]磺醯基]苯甲醯基]氨基]-3-(苯並噻唑-2-基)-6-甲基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶；28)2-[[4-[(甲基丁基氨基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-6-(1-甲基乙基)-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶-3-甲酸乙酯；29)2-[[4-[[4-(乙氧基羰基)-1-哌嗪基]磺醯基]苯甲醯基]氨基]-6-(1-甲基乙基)-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶-3-甲酸乙酯；30)2-[[4-(二乙基氨基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-4，5，6，7-四氫-5，5，7，7-四甲基噻吩並[2，3-c]吡啶-3-甲醯胺；31)2-[[4-[(甲基苯基氨基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-6-乙基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶-3-N-甲基-甲醯胺；32)2-[[4-[[乙基(苯基甲基)氨基]磺醯基]苯甲醯基]氨基]-6-乙基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶-3-甲醯胺；33)2-[[4-[(4-甲基-1-哌嗪基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-6-乙基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶-3-甲醯胺；34)2-[[(4-(3，4-二氫-1(2H)-喹啉基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-6-乙基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶-3-N-甲基-甲醯胺；35)2-[[4-[(4-甲基-1-哌嗪基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-6-乙基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶-3-N-甲基-甲醯胺；36)2-[[4-[(4-甲基-1-哌嗪基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-3-(苯並噻唑-2-基)-6-乙基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶；37)2-[[4-(二乙基氨基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-6-乙基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶-3-N-甲基-甲醯胺；38)2-[[4-(二乙基氨基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-6-乙基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶-3-N-嗎啉基-甲醯胺。
當前更優選的實施方案，本發明藥用組合物包含選自下列的化合物1)2-[[4-[(乙基丁基氨基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-3-(苯並噻唑-2-基)-6-乙基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶(化合物5)；2)2-[[4-[(二乙基氨基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-3-(苯並噻唑-2-基)-6-乙基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶(化合物11)；3)2-[[4-[[乙基(苯基甲基)氨基]磺醯基]苯甲醯基]氨基]-6-乙基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶-3-甲醯胺(化合物28)；4)2-[[4-[(4-甲基-1-哌嗪基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-6-乙基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶-3-甲醯胺(化合物29)。
再一個實施方案，本發明藥用組合物抑制GAG與GAG特異性ECAM結合。
進一步的實施方案，本發明藥用組合物抑制HS-GAG與選擇蛋白(尤其是L-選擇蛋白和P-選擇蛋白)的相互作用。
又一個實施方案，本發明藥用組合物直接與GAG(尤其是HS-GAG)結合。
進一步的實施方案，本發明藥用組合物體內抑制白細胞和嗜中性白細胞浸潤。
應當明白，本發明不包括已經公開這類藥物活性的任何化合物或其藥用組合物。明確排除化合物2-[[4-[(1，3，3-三甲基-6-氮雜二環[3.2.1.]辛-6-基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-6-乙基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶-3-甲酸乙酯。
再一方面，本發明公開了一些新型化合物並且這些化合物同樣要求保護。一個實施方案，本發明提供小分子有機化合物2-[[4-[[乙基(苯基甲基)氨基]磺醯基]苯甲醯基]氨基]-6-乙基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶-3-甲醯胺(化合物28)。
再一個實施方案，本發明提供小分子有機化合物2-[[4-[(4-甲基-1-哌嗪基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-6-乙基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶-3-甲醯胺(化合物29)。
又一方面，本發明提供一種抑制體外細胞粘附和細胞遷移的方法，該方法包括使細胞與足夠量的本發明藥用組合物接觸以抑制GAG與GAG特異性ECAM結合。
進一方面，本發明提供一種治療或預防GAG-ECAM相互作用介導的細胞粘附和細胞遷移相關性疾病和病症的方法，該方法包括對需要患者給予治療有效量的藥用組合物，所述組合物包含通式I化合物及其藥物學上可接受的鹽以及藥物學上可接受的稀釋劑或載體， 其中
R1選自H；1-6個碳原子的直鏈或支鏈烷基；芳基烷基；取代的芳基烷基；任選被烷基取代的環烷基；烷醯基；任選在芳基被取代的芳基羰基；環烷基羰基；烷氧基羰基；R2選自羧基；氰基；氨基羰基；烷基氨基羰基；任選在芳基被取代的芳基氨基羰基；二烷基氨基羰基，其中各烷基為直鏈或支鏈C1-C6烷基，或者兩個烷基一起可形成包含氮、任選包含1-2個額外的雜原子的3-7元飽和、不飽和或芳族單環或雙環雜環基；烷氧基羰基；烷醯基；環烷基羰基；任選在芳基被取代的芳基羰基；苯並噻唑-2-基；R3和R4選自任選被羥基、烷氧基、氨基或烷基氨基取代的C1-C6烷基、C2-C4單不飽和烯基、環烷基、芳基、芳基甲基，或者R3和R4一起可形成包含氮、任選包含1-2個額外的雜原子的任選取代的5-7元飽和、不飽和或芳族單環或雙環雜環基；R5、R6、R7和R8選自H或C1-C6烷基，前提條件是當R5、R6、R7和R8都為C1-C6烷基時，R1為氫。
某些優選實施方案，治療或預防GAG-ECAM相互作用介導的細胞粘附和細胞遷移相關性疾病和病症的方法包括對需要患者給予治療有效量的本發明藥用組合物，所述組合物包含作為有效成分的選自下列的結構式I化合物1)2-[[4-[(乙基丁基氨基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-3-(苯並噻唑-2-基)-6-乙基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶(化合物5)；2)2-[[(4-(3，4-二氫-2(1H)-異喹啉基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-6-(1-甲基乙基)-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶-3-甲醯胺(化合物1)；3)2-[[4-(甲基苯基氨基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-6-(1-甲基乙基)-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶-3-甲醯胺；4)2-[[4-(3，4-二氫-1(2H)-喹啉基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-4，5，6，7-四氫-5，5，7，7-四甲基噻吩並[2，3-c]吡啶-3-甲醯胺；5)2-[[4-[(二乙基氨基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-3-(苯並噻唑-2-基)-6-乙基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶(化合物11)；6)2-[[4-(嗎啉基磺醯基)苯甲醯基]氨基]-3-(苯並噻唑-2-基)-6-(1-甲基乙基)-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶；7)2-[[4-(二乙基氨基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-4，5，6，7-四氫-5，5，7，7-四甲基噻吩並[2，3-c]吡啶-3-甲酸乙酯；8)2-[[4-(3，4-二氫-1(2H)-喹啉基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-3-(苯並噻唑-2-基)-4，5，6，7-四氫-5，5，7，7-四甲基噻吩並[2，3-c]吡啶；9)2-[[4-(六氫-1H-吖庚因-1-基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-4，5，6，7-四氫-5，5，7，7-四甲基噻吩並[2，3-c]吡啶-3-甲酸乙酯；10)2-[[4-[[4-(甲基)-1-哌嗪基]磺醯基]苯甲醯基]氨基]-3-(苯並噻唑-2-基)-6-甲基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶；11)2-[[4-[(1，3，3-三甲基-6-氮雜二環[3.2.1]辛-6-基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-3-(苯並噻唑-2-基)-6-甲基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶；12)2-[[4-[(甲基苯基氨基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-3-(苯並噻唑-2-基)-6-甲基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶；13)2-[[4-(嗎啉基磺醯基)苯甲醯基]氨基]-3-(苯並噻唑-2-基)-6-甲基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶；14)2-[[4-[(二乙基氨基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-3-(苯並噻唑-2-基)-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶-6-甲酸乙酯；15)2-[[4-[[4-(3-甲基-1-哌啶基)]磺醯基]苯甲醯基]氨基]-3-(苯並噻唑-2-基)-6-甲基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶；16)2-[[4-[(二乙基氨基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-3-(苯並噻唑-2-基)-6-(苯基甲基)-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶；17)2-[[4-[(二乙基氨基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-3-(苯並噻唑-2-基)-6-甲基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶；18)2-[[4-[[4-(乙氧基羰基)-1-哌嗪基]磺醯基]苯甲醯基]氨基]-4，5，6，7-四氫-5，5，7，7-四甲基噻吩並[2，3-c]吡啶-3-甲醯胺；19)2-[[4-[(環己基甲基氨基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-4，5，6，7-四氫-5，5，7，7-四甲基噻吩並[2，3-c]吡啶-3-甲醯胺；20)2-[[4-[(二-2-丙烯基氨基)磺醯基]苯甲醯基]-4，5，6，7-四氫-5，5，7，7-四甲基噻吩並[2，3-c]吡啶-3-甲酸甲酯；21)2-[[4-[(二-2-甲氧基乙基氨基)]磺醯基]苯甲醯基]-4，5，6，7-四氫-5，5，7，7-四甲基噻吩並[2，3-c]吡啶-3-甲醯胺；22)2-[[4-[(1，3，3-三甲基-6-氮雜二環[3.2.1.]辛-6-基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-6-甲基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶-3-甲醯胺；23)2-[[4-[(二乙基氨基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-3-(苯並噻唑-2-基)-6-甲基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶；24)2-[[4-[(二乙基氨基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-3-(苯並噻唑-2-基)-6-(1-甲基乙基)-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶；25)2-[[4-[(二-2-甲氧基乙基氨基)磺醯基]苯甲醯基]-氨基]-3-(苯並噻唑-2-基)-6-甲基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶；26)2-[[4-[(甲基苯基氨基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-3-(苯並噻唑-2-基)-6-甲基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶；27)2-[[4-[[4-(乙氧基羰基)-1-哌嗪基]磺醯基]苯甲醯基]氨基]-3-(苯並噻唑-2-基)-6-甲基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶；28)2-[[4-[(甲基丁基氨基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-6-(1-甲基乙基)-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶-3-甲酸乙酯；29)2-[[4-[[4-(乙氧基羰基)-1-哌嗪基]磺醯基]苯甲醯基]氨基]-6-(1-甲基乙基)-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶-3-甲酸乙酯；30)2-[[4-(二乙基氨基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-4，5，6，7-四氫-5，5，7，7-四甲基噻吩並[2，3-c]吡啶-3-甲醯胺；31)2-[[4-[(甲基苯基氨基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-6-乙基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶-3-N-甲基-甲醯胺；32)2-[[4-[[乙基(苯基甲基)氨基]磺醯基]苯甲醯基]氨基]-6-乙基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶-3-甲醯胺；33)2-[[4-[(4-甲基-1-哌嗪基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-6-乙基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶-3-甲醯胺；34)2-[[(4-(3，4-二氫-1(2H)-喹啉基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-6-乙基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶-3-N-甲基-甲醯胺；35)2-[[4-[(4-甲基-1-哌嗪基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-6-乙基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶-3-N-甲基-甲醯胺；36)2-[[4-[(4-甲基-1-哌嗪基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-3-(苯並噻唑-2-基)-6-乙基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶；37)2-[[4-(二乙基氨基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-6-乙基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶-3-N-甲基-甲醯胺；38)2-[[4-(二乙基氨基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-6-乙基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶-3-N-嗎啉基-甲醯胺。
當前更優選的實施方案，治療或預防GAG-ECAM相互作用介導的細胞粘附和細胞遷移相關性疾病和病症的方法包括對需要患者給予治療有效量的藥用組合物，所述組合物包含作為有效成分的選自下列的結構式I化合物1)2-[[4-[(乙基丁基氨基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-3-(苯並噻唑-2-基)-6-乙基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶(化合物5)；2)2-[[4-[(二乙基氨基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-3-(苯並噻唑-2-基)-6-乙基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶(化合物11)；3)2-[[4-[[乙基(苯基甲基)氨基]磺醯基]苯甲醯基]氨基]-6-乙基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶-3-甲醯胺(化合物28)；4)2-[[4-[(4-甲基-1-哌嗪基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-6-乙基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶-3-甲醯胺(化合物29)。
一個實施方案，本發明提供一種治療或預防GAG-ECAM相互作用介導性疾病或病症的方法，其中GAG選自硫酸乙醯肝素(HS-GAG)、肝素、硫酸軟骨素、硫酸皮膚素、硫酸角質素及它們的衍生物和片段。當前優選的實施方案，GAG為HS-GAG。
又一個實施方案，本發明提供一種治療或預防GAG-ECAM相互作用介導性疾病或病症的方法，其中GAG特異性ECAM選自選擇蛋白、整聯蛋白、纖連蛋白和細胞因子。當前的優選實施方案，GAG特異性ECAM選自L-選擇蛋白和P-選擇蛋白。
再一個實施方案，GAG-ECAM相互作用介導性疾病或病症選自炎性病變或病症、自身免疫性病症或疾病、血小板介導性病症、腫瘤轉移、病毒性疾病、凝血障礙、動脈粥樣硬化、澱粉樣病和腎病。
再一個實施方案，GAG-ECAM相互作用介導性炎性病變或病症有例如(但不限於)膿毒性休克、局部缺血後白細胞介導性組織損傷、凍傷性損傷或休克、白細胞介導的急性肺損傷、急性胰腺炎、腎炎、哮喘、外傷性休克、中風、創傷性腦損傷、腎炎、急性和慢性炎症(包括特應性皮炎、牛皮癬、眼色素層炎、視網膜炎和炎症性腸病)。
當前的優選實施方案，本發明提供一種預防或治療炎症性腸病的方法，該方法包括對需要患者給予治療有效量的藥用組合物，所述組合物包含噻吩並[2，3-c]吡啶化合物2-[[4-[(二乙基氨基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-3-(苯並噻唑-2-基)-6-乙基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶(化合物11)和其藥物學上可接受的鹽；還包含藥物學上可接受的稀釋劑或載體。
又一個實施方案，GAG-ECAM相互作用介導性自身免疫性疾病有例如(但不限於)類風溼性關節炎和多發性硬化。
當前的優選實施方案，本發明提供一種預防或治療多發性硬化的方法，該方法包括對需要患者給予治療有效量的藥用組合物，所述組合物包含作為有效成分的噻吩並[2，3-c]吡啶化合物2-[[4-[(二乙基氨基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-3-(苯並噻唑-2-基)-6-乙基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶(化合物11)和其藥物學上可接受的鹽；還包含藥物學上可接受的載體或稀釋劑。
更進一步的實施方案，GAG-ECAM相互作用介導性疾病或病症包括下列相互作用介導性疾病或病症細胞-細胞、細胞-病毒、細胞-基質和細胞-蛋白相互作用，例如但不限於病毒附著細胞、細胞粘附、血小板聚集、淋巴細胞粘附和遷移以及澱粉樣纖維形成。
更進一步的實施方案，本發明提供一種治療或預防GAG(尤其是HS-GAG)介導性疾病和病症的方法。GAG介導性疾病和病症選自澱粉樣病例如阿爾茨海默氏病和II型糖尿病；病毒性疾病例如丙型和B型肝炎、流感、鼻病毒感染、巨細胞病毒感染、AIDS以及呼吸道合胞病毒感染；細菌感染和瘧疾；腎病；癌症例如白血病；以及凝血障礙。
根據下文的詳細說明，本發明的更多實施方案以及全部適用範圍將是顯而易見的。然而，應當知道，當提及本發明優選實施方案時，給出的詳細說明和具體實施例僅僅是示例的，因為根據這些詳細說明，屬於本發明實質和範圍的各種變更和修改對本領域技術人員來說是顯而易見的。
附圖
簡要說明FIG.1顯示L-選擇蛋白與固定化肝素的結合作用。
FIG.2顯示可溶性肝素對L-選擇蛋白/IgG與固定化肝素結合的抑制作用。
FIG.3顯示抗L-選擇蛋白抗體DREGG-55對L-選擇蛋白/IgG與固定化肝素結合的抑制作用。抗β-澱粉樣抗體作為對照。
FIG-4顯示化合物5對小鼠腹膜炎嗜中性白細胞浸潤的劑量依賴性抑制作用。
FIG.5顯示化合物5對爪水腫的抗炎作用。
FIG.6顯示對遲髮型超敏反應(DTH)模型靜脈內給予的化合物5的抗炎作用。
FIG.7顯示在不存在或存在化合物1(100μM)的條件下L-選擇蛋白與固定化肝素的結合作用。
FIG.8顯示不同抑制劑化合物對L-選擇蛋白與固定化牛腎硫酸乙醯肝素結合的抑制作用。
FIG.9顯示對小鼠炎症性腸病(IBD)模型腹膜內給予受試化合物11(TC11)的治療作用。
FIG.10顯示對小鼠炎症性腸病(IBD)模型口服給予受試化合物11(TC11)的治療作用。
FIG.11顯示受試化合物11對大鼠多發性硬化(實驗性自身免疫性腦脊髓炎)模型的治療作用。
發明詳述定義除非另有說明，否則在本文使用的下列術語的含義如下。
術語「化合物」是指分子量小於1500道爾頓的有機小分子，優選300-1200道爾頓的化合物。
術語「GAG」是指糖胺聚糖，包括硫酸乙醯肝素(HS-GAG)、肝素、硫酸軟骨素、硫酸皮膚素和硫酸角質素。包括GAG鏈式的蛋白聚糖(例如硫酸乙醯肝素蛋白聚糖或硫酸軟骨素蛋白聚糖)。包括化學法或酶催法產生的GAG片段。還包括可以通過本領域已知的化學法或酶催法產生的GAG衍生物。GAG可以是游離的或者與接頭、載體、細胞或蛋白連接。GAG可以是粗製的或從器官、組織或細胞提純。
術語「HS-GAG」是指硫酸乙醯肝素糖胺聚糖。包括硫酸乙醯肝素的片段(例如化學法、酶催法或提純製備的硫酸乙醯肝素片段)。包括HS-GAG鏈式蛋白聚糖例如硫酸乙醯肝素蛋白聚糖。HS-GAG可以是游離的或者與接頭、載體、細胞或蛋白連接的，或其它化學法或酶催法修飾的。HS-GAG可以是粗製的或從器官、組織或細胞提純。
「HS-PG」是指硫酸乙醯肝素蛋白聚糖。
「肝素」為多硫酸化多糖，沒有蛋白與其結合。本文使用的肝素是指從不同器官或物種例如豬腸黏膜製備的肝素。本發明包括不同分子量的肝素(包括低分子量肝素，例如市售的Fraxiparin)以及通過本領域已知的化學反應或酶催反應製備或修飾的其它肝素衍生物。
「GAG衍生物」或「ECAM衍生物」是分別由GAGS或ECAMS衍化的產物，通過一種或多種化學法或酶催法修飾製備。修飾的目的在於改善分子相關基團的活性。
「低聚糖片段」或「GAG衍化的低聚糖」是用GAG通過控制裂解並且優選裂解後提純而衍化的產物。
術語「L-選擇蛋白/IgG」和「P-選擇蛋白/IgG」是指選擇蛋白嵌合體分子，其中選擇蛋白的N末端蛋白包含與IgG Fc段融合的結合域(Aruffo等，Cell 6735，1991；Foxall等J.Cell Biol.117895，1992)。
術語「GAG特異性ECAM」是效應細胞粘附分子，是指參與介導細胞粘附、細胞-細胞和細胞-基質相互作用並且具有GAG結合域的碳水化合物結合性蛋白分子。ECAM的實例是選擇蛋白例如L-選擇蛋白、P-選擇蛋白、整聯蛋白、纖連蛋白、細胞因子等。術語「GAG特異性ECAM」還包括突變體ECAM、蛋白域、ECAM衍化的多肽或肽，ECAM的化學或酶催衍生物等，只要突變體ECAM、蛋白域、多肽、肽和ECAM衍生物保持結合GAG的能力。
術語「抑制劑化合物」是指抑制、調節或逆轉GAG功能的小分子有機化合物。例如，抑制劑化合物可以抑制以下兩種分子之間的相互作用(結合)(1)GAG，例如但不限於肝素或HS-GAG；(2)GAG特異性ECAM，例如但不限於L-選擇蛋白、P-選擇蛋白或整聯蛋白。
術語「炎症」、「炎性疾病」、「炎性病症」或「炎性病變」是指伴有炎性反應的生理或病理病症。這類病症包括但不限於膿毒症、局部缺血再灌注損傷、Crohn氏病、關節炎、多發性硬化、心肌病、結腸炎、傳染性腦膜炎、腦炎、急性呼吸窘迫症候群、器官/組織移植排斥(例如皮膚、腎、心臟、肺、肝、骨髓、角膜、胰腺、小腸)、傳染病、皮炎、中風、外傷性腦損傷、炎症性腸病和自身免疫性疾病。
術語「治療」包括給予患者本發明化合物以達到包括預防、緩解、阻止或治癒細胞粘附或細胞遷移事件介導性病症的目的，具體地說是選擇蛋白粘附事件，更具體地說是L-選擇蛋白和P-選擇蛋白介導性粘附事件。這種治療不一定徹底改善特定病症相關的炎性反應或其它反應。此外，這種治療可以與本領域技術人員已知的其它傳統治療法聯合使用以減輕所述疾病或病症。
本發明的方法可以在檢測到例如炎症前進行「預防性」治療，以阻止處於高危狀態的患者(例如移植患者)形成該病症。
術語「癌症」是指各種癌症相關性病症，包括轉移、腫瘤生長和血管生成。本發明癌症的實例為白血病。
除非另有說明，否則在整個說明書和權利要求書中，單數「一個」、「一種」和「所述」、「該」包括複數情況。例如提及例如「一種化合物」時，包括這種化合物的混合物；提及「一種P-選擇蛋白」或「一種L-選擇蛋白」時，包括所述分子各自的混合物；提及「所述(該)製劑」或「所述(該)方法」時，包括同類型的一種或多種本文介紹的的製劑、方法和/或步驟，和/或根據本文公開內容，對本領域熟練技術人員顯而易見的一種或多種產品、方法和/或步驟。
藥用組合物本發明涉及包含作為有效成分的至少一種化合物的藥用組合物，所述化合物能夠抑制糖胺聚糖(GAG)(尤其是硫酸乙醯肝素糖胺聚糖(HS-GAG))與效應細胞粘附分子(ECAM)(尤其是GAG特異性ECAM，具體地說是L-選擇蛋白和P-選擇蛋白)之間的相互作用。
本發明多方面提供藥用組合物，其中包含作為有效成分的通式I化合物和其藥物學上可接受的鹽的藥用組合物，而且還包含藥物學上可接受的稀釋劑或載體， 其中R1選自H；1-6個碳原子的直鏈或支鏈烷基；芳基烷基；取代的芳基烷基；任選被烷基取代的環烷基；烷醯基；任選在芳基被取代的芳基羰基；環烷基羰基；烷氧基羰基；R2選自羧基；氰基；氨基羰基；烷基氨基羰基；任選在芳基被取代的芳基氨基羰基；二烷基氨基羰基，其中各烷基為直鏈或支鏈C1-C6烷基，或者兩個烷基一起可形成包含氮、任選包含1-2個額外的雜原子的3-7元飽和、不飽和或芳族單環或雙環雜環基；烷氧基羰基；烷醯基；環烷基羰基；任選在芳基被取代的芳基羰基；苯並噻唑-2-基；R3和R4選自任選被羥基、烷氧基、氨基或烷基氨基取代的C1-C6烷基、C2-C4單不飽和烯基、環烷基、芳基、芳基甲基，或者R3和R4一起可形成包含氮、任選包含1-2個額外的雜原子的任選取代的5-7元飽和、不飽和或芳族單環或雙環雜環基；R5、R6、R7和R8選自H或C1-C6烷基，前提條件是當R5、R6、R7和R8都為C1-C6烷基時，R1為氫。
根據一個實施方案，R1選自甲基、乙基、1-甲基乙基、苯基甲基、乙醯基、乙氧基羰基且R5＝R6＝R7＝R8為氫。
再一個實施方案，R1為氫且R5＝R6＝R7＝R8為氫或甲基。
又一個實施方案，R1＝R5＝R6為甲基且R7＝R8為氫。
進一步的實施方案，R2選自氰基、甲氧基羰基、乙氧基羰基、氨基羰基、甲基氨基羰基、二甲基氨基羰基、吡咯烷基羰基、哌啶基羰基、嗎啉基羰基、苯並噻唑-2-基。
再一個實施方案，R3和R4選自甲基、乙基、丙基、丁基、甲氧基乙基、氯丁基、氰基乙基、苯基、環戊基、環己基、苯基甲基、烯丙基或巴豆基，R3和R4可相同或不同。
再一個實施方案，R3和R4形成吡咯烷、哌啶、2-甲基、3-甲基、4-甲基或3，5-二甲基哌啶、全氫吖庚因、嗎啉、哌嗪、4-甲基哌嗪、3，4-二氫-2(1H)-異喹啉基、3，4-二氫-1(2H)喹啉、1，3，3-三甲基-6-氮雜二環[3.2.1]辛-6-烷和它們的取代衍生物。取代的衍生物包括但不限於哌嗪基-4-甲酸酯、哌啶基-4-甲酸酯、哌啶基-3-甲酸酯。
一個實施方案，本發明優選的藥用組合物包含作為有效成分的選自下列的結構式I化合物1)2-[[4-[(乙基丁基氨基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-3-(苯並噻唑-2-基)-6-乙基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶(化合物5)；2)2-[[(4-(3，4-二氫-2(1H)-異喹啉基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-6-(1-甲基乙基)-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶-3-甲醯胺(化合物1)；3)2-[[4-(甲基苯基氨基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-6-(1-甲基乙基)-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶-3-甲醯胺；4)2-[[4-(3，4-二氫-2(1H)-異喹啉基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-4，5，6，7-四氫-5，5，7，7-四甲基噻吩並[2，3-c]吡啶-3-甲醯胺；5)2-[[4-[(二乙基氨基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-3-(苯並噻唑-2-基)-6-乙基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶(化合物11)；6)2-[[4-(嗎啉基磺醯基)苯甲醯基]氨基]-3-(苯並噻唑-2-基)-6-(1-甲基乙基)-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶；7)2-[[4-(二乙基氨基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-4，5，6，7-四氫-5，5，7，7-四甲基噻吩並[2，3-c]吡啶-3-甲酸乙酯；8)2-[[4-(3，4-二氫-1(2H)-喹啉基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-3-(苯並噻唑-2-基)-4，5，6，7-四氫-5，5，7，7-四甲基噻吩並[2，3-c]吡啶；9)2-[[4-(六氫-1H-吖庚因-1-基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-4，5，6，7-四氫-5，5，7，7-四甲基噻吩並[2，3-c]吡啶-3-甲酸乙酯；10)2-[[4-[[4-(甲基)-1-哌嗪基]磺醯基]苯甲醯基]氨基]-3-(苯並噻唑-2-基)-6-甲基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶；11)2-[[4-[(1，3，3-三甲基-6-氮雜二環[3.2.1]辛-6-基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-3-(苯並噻唑-2-基)-6-甲基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶；12)2-[[4-[(甲基苯基氨基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-3-(苯並噻唑-2-基)-6-甲基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶；13)2-[[4-(嗎啉基磺醯基)苯甲醯基]氨基]-3-(苯並噻唑-2-基)-6-甲基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶；14)2-[[4-[(二乙基氨基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-3-(苯並噻唑-2-基)-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶-6-甲酸乙酯；15)2-[[4-[[4-(3-甲基-1-哌啶基)]磺醯基]苯甲醯基]氨基]-3-(苯並噻唑-2-基)-6-甲基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶；16)2-[[4-[(二乙基氨基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-3-(苯並噻唑-2-基)-6-(苯基甲基)-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶；17)2-[[4-[(二乙基氨基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-3-(苯並噻唑-2-基)-6-甲基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶；18) 2-[[4-[[4-(乙氧基羰基)-1-哌嗪基]磺醯基]苯甲醯基]氨基]-4，5，6，7-四氫-5，5，7，7-四甲基噻吩並[2，3-c]吡啶-3-甲醯胺；19)2-[[4-[(環己基甲基氨基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-4，5，6，7-四氫-5，5，7，7-四甲基噻吩並[2，3-c]吡啶-3-甲醯胺；20)2-[[4-[(二-2-丙烯基氨基)磺醯基]苯甲醯基]-4，5，6，7-四氫-5，5，7，7-四甲基噻吩並[2，3-c]吡啶-3-甲酸甲酯；21)2-[[4-[(二-2-甲氧基乙基氨基)]磺醯基]苯甲醯基]-4，5，6，7-四氫-5，5，7，7-四甲基噻吩並[2，3-c]吡啶-3-甲醯胺；22)2-[[4-[(1，3，3-三甲基-6-氮雜二環[3.2.1.]辛-6-基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-6-甲基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶-3-甲醯胺；23)2-[[4-[(二乙基氨基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-3-(苯並噻唑-2-基)-6-甲基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶；24)2-[[4-[(二乙基氨基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-3-(苯並噻唑-2-基)-6-(1-甲基乙基)-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶；25)2-[[4-[(二-2-甲氧基乙基氨基)磺醯基]苯甲醯基]-氨基]-3-(苯並噻唑-2-基)-6-甲基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶；26)2-[[4-[(甲基苯基氨基)磺醯基]苯甲醯基]氨基-3-(苯並噻唑-2-基)-6-甲基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶；27)2-[[4-[[4-(乙氧基羰基)-1-哌嗪基]磺醯基]苯甲醯基]氨基]-3-(苯並噻唑-2-基)-6-甲基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶；28)2-[[4-[(甲基丁基氨基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-6-(1-甲基乙基)-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶-3-甲酸乙酯；29)2-[[4-[[4-(乙氧基羰基)-1-哌嗪基]磺醯基]苯甲醯基]氨基]-6-(1-甲基乙基)-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶-3-甲酸乙酯；30)2-[[4-(二乙基氨基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-4，5，6，7-四氫-5，5，7，7-四甲基噻吩並[2，3-c]吡啶-3-甲醯胺；31)2-[[4-[(甲基苯基氨基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-6-乙基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶-3-N-甲基-甲醯胺；32)2-[[4-[[乙基(苯基甲基)氨基]磺醯基]苯甲醯基]氨基]-6-乙基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶-3-甲醯胺；33)2-[[4-[(4-甲基-1-哌嗪基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-6-乙基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶-3-甲醯胺；34)2-[[(4-(3，4-二氫-1(2H)-喹啉基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-6-乙基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶-3-N-甲基-甲醯胺；35)2-[[4-[(4-甲基-1-哌嗪基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-6-乙基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶-3-N-甲基-甲醯胺；36)2-[[4-[(4-甲基-1-哌嗪基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-3-(苯並噻唑-2-基)-6-乙基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶；37)2-[[4-(二乙基氨基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-6-乙基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶-3-N-甲基-甲醯胺；38)2-[[4-(二乙基氨基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-6-乙基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶-3-N-嗎啉基-甲醯胺。
再一個實施方案，更優選的本發明藥用組合物包含作為有效成分的選自下列的結構式I化合物1)2-[[4-[(乙基丁基氨基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-3-(苯並噻唑-2-基)-6-乙基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶(化合物5)；2)2-[[4-[(二乙基氨基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-3-(苯並噻唑-2-基)-6-乙基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶(化合物11)；3)2-[[4-[[乙基(苯基甲基)氨基]磺醯基]苯甲醯基]氨基]-6-乙基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶-3-甲醯胺(化合物28)；4)2-[[4-[(4-甲基-1-哌嗪基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-6-乙基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶-3-甲醯胺(化合物29)。
本發明還提供化合物2-[[4-[[乙基(苯基甲基)氨基]磺醯基]苯甲醯基]氨基]-6-乙基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶-3-甲醯胺(化合物28)和2-[[4-[(4-甲基-1-哌嗪基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-6-乙基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶-3-甲醯胺(化合物29)以及它們的藥用組合物，所述化合物的合成見下文的實施例1和2。
除非另有說明，否則本發明還包括本發明介紹化合物的所有手性、非對映體和外消旋形式；這些化合物還可能具有不對稱中心。許多烯烴、C-和N-雙鍵等的幾何異構體也可能存在於本文介紹的化合物中，並且所有這樣的穩定異構體屬於本發明範疇。應當知道，包含不對稱取代的碳原子的本發明化合物可以旋光形式或外消旋形式分離。本領域公知如何製備旋光活性形式，例如拆分外消旋形式或用旋光活性起始原料合成。本發明包括所有手性、非對映體、外消旋形式和所有幾何異構形式的結構，除非特別指明具體的立體化學結構或異構體形式。
當連接取代基的鍵與一個環中連接兩個原子的鍵出現交叉時，那麼這樣的取代基可以連接到該環上的任何原子。當未具體指出連接取代基與其它基團的鍵時或者未具體指出在這樣的其它基團中鍵所連接的原子時，那麼這樣的取代基可與這樣的其它基團上的任何原子形成鍵。
只有在取代基和/或變量的組合產生穩定化合物時，才允許這樣的組合。所謂穩定化合物或穩定結構，本文是指其穩定程度足以從反應混合物分離獲得有效純度並可配製成有效治療藥物的化合物。
本文使用的術語「取代(的)」是指指定原子上的任何一個或多個氫被指定基團取代，前提條件是不超過指定原子的常價，且這種取代產生穩定的化合物。
「先導化合物」為所選組合庫的化合物，測定表明其對要調控的相關細胞活性具有顯著效果。本發明的性質是調控至少一種與GAG或GAG-ECAM相互作用相關的生理活性。
術語「烷基」是指1-12個碳原子的直鏈或支鏈或環烴。在一個實施方案中，烷基具有1-10個碳原子。在另一個實施方案中，烷基具有1-8個碳原子。在再一個實施方案中，烷基具有1-6個碳原子。在再一個實施方案中，烷基具有1-4個碳原子。烷基可未被取代或被一個或多個取代基取代，即取代基不幹擾化合物的生理活性。合適取代基的非限制性實例包括但不限於滷基、羥基、C1-C10烷基、C2-C10烯基、C2-C10炔基、C1-C10烷氧基、C7-C12芳烷基、C7-C12烷芳基、C1-C10烷硫基、芳硫基、芳氧基、芳基氨基、C3-C10環烷基、C3-C10環烯基、二(C1-C10)烷基氨基、C2-C12烷氧基烷基、C1-C6烷基亞磺醯基、C1-C10烷基磺醯基、芳基磺醯基、芳基、羥基、羥基(C1-C10)烷基、芳氧基(C1-C10)烷基、C1-C10烷氧基羰基、芳氧基羰基、芳醯基氧基、取代的烷氧基、氟代烷基、硝基、氰基、氰基(C1-C10)烷基、C1-C10烷醯氨基、芳醯基醯氨基、芳基氨基磺醯基、磺醯氨基、脒基、醯氨基、烷基醯氨基、二烷基醯氨基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、羰基、脲基、羧基、雜環基、硝基烷基和-(CH2)m-Z-(C1-C10烷基)，其中m為1-8且z為氧或硫。
術語「低級烷基」是指1-6個碳原子的直鏈或支鏈烷基，例如甲基、乙基、1-甲基乙基、丙基、丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、異戊基、己基等。在一個優選實施方案中，低級烷基為甲基。在再一個優選實施方案中，低級烷基為甲基乙基。
術語「芳基」是指具有至少一個碳環芳基的芳基，未被取代或被一個或多個上文定義的惰性取代基取代。
術語「雜環基」或「雜芳基」是指這樣的環包含一個或多個雜原子(例如氧、氮、硫等)、有或沒有不飽和現象或芳香性、任選被一個或多個上文定義的惰性取代基取代。雜環取代基的非限制性實例為咪唑、吡唑、吡嗪、噻唑、噻嗪、噁唑、呋喃、二氫呋喃、四氫呋喃、吡啶、二氫吡啶、四氫吡啶、異噁唑等。多環可以是稠合的(如喹啉或苯並呋喃)或不稠合的(如4-苯基吡啶)。
雜環部分是包含一個或多個雜原子(優選氮)的1-2個環狀部分，各環狀部分可以是獨立或稠合的，例如但不限於咪唑、吡唑、吡嗪、吡啶、二氫吡啶、四氫吡啶、異噁唑、喹啉、異喹啉等。
「滷代烷基」是指被一個或多個滷素原子(例如F、Cl、Br或I)取代的上文定義的烷基。「羥基」是指OH。「烯基」是指具有至少一個碳-碳雙鍵的基團。「芳基烷基」是指與芳基結合的烷基，其中烷基和芳基的定義同上。芳基烷基的一個實例為苄基。
正如本文預期的一樣，本發明進一步包括本發明定義的化合物的類似物、衍生物、異構體、藥物學上可接受的鹽和水合物。
術語「異構體」包括但不限於旋光異構體和類似物、結構異構體和類似物、構象異構體和類似物等。因此，本發明包括本發明化合物的各種旋光異構體。本領域技術人員應當知道，本發明化合物包含至少一個手性中心。因此，這些化合物以旋光活性形式或外消旋形式存在和分離。某些化合物也可能有多晶形現象。應當知道，本發明化合物包括任何外消旋、旋光活性、多晶形或立體異構形式或者它們的混合物。在一個實施方案中，化合物為純(R)-異構體。在再一個實施方案中，化合物為純(S)-異構體。在再一個實施方案中，化合物為(R)和(S)異構體的混合物。在再一個實施方案中，化合物為包含等量(R)和(S)異構體的外消旋混合物。本領域公知如何製備旋光活性形式，例如用重結晶方法拆分外消旋形式、用旋光活性起始原料合成、用手性合成法或者用手性固定相的色譜法分離。
本發明進一步包括化合物的衍生物。術語「衍生物」包括但不限於醚衍生物、酸衍生物、醯胺衍生物、酯衍生物等。另外，本發明進一步包括本文介紹的化合物的水合物。術語「水合物」包括但不限於半水合物、一水合物、二水合物、三水合物等。
本發明化合物的衍生物也可為前體藥物形式。前體藥物被認為是任何共價結合的載體，當這樣的前體藥物給予哺乳動物受治療者時，其在體內釋放結構式I的活性母體藥物。結構式I化合物的前體藥物通過修飾化合物的功能團製備，這樣的修飾可通過常規處理或在體內裂解為母體化合物。前體藥物包括這樣的結構式I化合物當給予哺乳動物受治療者後，其中羥基、氨基、巰基或羧基與所結合的任何基團裂解分別形成游離的羥基、氨基、巰基或羧基。前體藥物的實例包括但不限於結構式I化合物的醇和胺功能團的乙酸酯、甲酸酯和苯甲酸酯衍生物等。
一個實施方案，本發明化合物抑制GAG與GAG特異性ECAM的相互作用。
再一個實施方案，本發明化合物抑制HS-GAG與選擇蛋白的相互作用，尤其是與L-選擇蛋白和P-選擇蛋白的相互作用(參見下文的又一個實施方案，本發明化合物直接結合到GAG，尤其是HS-GAG(參見下文的實施例6)。本發明化合物因此可用於治療或預防GAG介導性疾病和病症。
又一個實施方案，本發明提供一種抑制體外細胞粘附和細胞遷移的方法，該方法包括使細胞與至少一種有效量的結構式I化合物接觸以抑制GAG與GAG特異性ECAM的相互作用(參見下文的實施例7)。
本發明化合物的抑制作用可以通過幾種方法體外評價。一種測定GAG-ECAM結合的方法(一種下文示例方法)檢測L選擇蛋白/IgG與固定化肝素的結合。另一種測定方法是利用固定化L-選擇蛋白或者與IgG之外的蛋白域融合的L-選擇蛋白。結合的L-選擇蛋白量通過ELISA測定確定，使用例如抗L-選擇蛋白的單克隆抗體，其與辣根過氧化物酶結合。FIG.1表示L-選擇蛋白/IgG結合肝素的飽和曲線。FIG.2表示可溶性肝素抑制L-選擇蛋白/IgG與固定化肝素結合。抗L-選擇蛋白碳水化合物結合域的mAb(Dregg-55)抑制L-選擇蛋白/IgG與肝素結合(FIG.3)，而非特異性抗體(例如抗β澱粉樣蛋白)不能抑制這種結合，因此進一步證實了這種特異性結合。Dregg-55抗體也表現出抑制體外L-選擇蛋白依賴性粘附、體外嗜中性白細胞積聚和體內炎症(Co M.S.等，Immunotechnology 493253-266，1999)。因此，Dregg-55抗體實驗表明本發明測定可用於發現抑制細胞相互作用和浸潤並且具有治療潛能的化合物。
可用不同系統測定本發明結構式I化合物的生理活性。例如，可將化合物固定在固體表面，測量表達HS-GAG的細胞的粘附作用。還可測定受試化合物競爭性抑制HS-GAG與可結合HS-GAG的其它蛋白(例如其它細胞粘附分子、細胞因子或病毒蛋白)結合的能力。許多測定形式採用放射性或非放射性標記的測定成分。標記系統可為各種形式。根據本領域公知的方法，標記物可以直接或間接與所需的測定成分偶合。
根據進一步的實施方案，本發明化合物抑制白細胞和嗜中性白細胞體內浸潤(參見下文的實施例8和FIG.4)。
本發明化合物降低白細胞遷移到急性炎症位點的能力用巰基乙酸鹽誘導BALB/c小鼠腹膜炎的模型評價。在這種動物模型中，L-和P-選擇蛋白與HS-GAG的相互作用涉及嗜中性白細胞浸潤(Nelson，R.M.，823253-3258，1993；Xie，X.等，J.Biol.Chem.，27534818-34825，2000)。
本發明結構式I化合物有效抑制白細胞和嗜中性白細胞遷移到腹膜腔。化合物還降低淋巴細胞遷移，用小鼠遲髮型超敏反應模型評價(參見下文的實施例10和FIG.6；方法參見Lange-Asschenfeldt B.等，Blood，99538-545，2002)。
必要的時候，具有所需生理活性的本發明化合物可以修飾以提供所需特性例如改善的藥理性。
就診斷目的而言，各種標記物可以與化合物連接，可以直接或間接提供可檢測的信號。因此，本發明化合物可針對不同的最終目的以各種方式進行修飾，同時仍然保持生理活性。另外，可以在末端引入各種反應性位點用於連接顆粒、固體反應物、大分子等。
在各種體內或體外應用中可以使用標記化合物。可使用的標記物很廣泛，例如放射性核素(例如γ射線放射性同位素例如鎝-99或銦-111)、螢光劑(例如螢光素)、酶、酶底物、酶輔因子、酶抑制劑、化學發光化合物、生物發光化合物等。本領域普通技術人員應當知道可結合化合物的其它合適標記物，或者用常規實驗能夠確定這類標記物。本領域普通技術人員可以利用常規標準技術完成這些標記的結合。
對於體內診斷成像鑑別例如炎症位點，根據公知技術通常採用放射性同位素。
本發明包括本發明化合物的藥物學上可接受的鹽。藥物學上可接受的鹽可以通過處理無機鹼(例如氫氧化鈉)或無機酸/有機酸(例如鹽酸、檸檬酸等)製備。
術語「藥物學上可接受的鹽」是指用藥物學上可接受的無毒鹼或酸製備的鹽，所述鹼或酸包括無機鹼或有機鹼以及無機酸或有機酸。無機鹼衍化的鹽包括鋁鹽、銨鹽、鈣鹽、銅鹽、鐵鹽、亞鐵鹽、鋰鹽、鎂鹽、錳鹽、亞錳鹽、鉀鹽、鈉鹽、鋅鹽等。尤其優選銨鹽、鈣鹽、鎂鹽、鉀鹽和鈉鹽。藥物學上可接受的無毒有機鹼衍化的鹽包括伯胺鹽、仲胺鹽、叔胺鹽、取代的胺鹽(包括天然存在的取代胺的鹽)、環胺鹽以及鹼性離子交換樹脂的鹽，例如精氨酸、甜菜鹼、咖啡因、膽鹼、N，N′-二苄基乙二胺、二乙胺、2-二乙基氨基乙醇、2-二甲基氨基乙醇、乙醇胺、乙二胺、N-乙基-嗎啉、N-乙基哌啶、葡糖胺、殼糖胺、組氨酸、海巴明、異丙胺、賴氨酸、甲葡糖胺、嗎啉、哌嗪、哌啶、聚胺樹脂、普魯卡因、嘌呤、可可鹼、三乙胺、三甲胺、三丙胺、氨丁三醇等的鹽。
當本發明化合物為鹼性時，可以用藥物學上可接受的無毒酸製備鹽，所述酸包括無機酸和有機酸。這樣的酸包括乙酸、苯磺酸、苯甲酸、樟腦磺酸、檸檬酸、乙磺酸、富馬酸、葡糖酸、穀氨酸、氫溴酸、鹽酸、羥乙磺酸、乳酸、馬來酸、蘋果酸、杏仁酸、甲磺酸、粘酸、硝酸、撲酸、泛酸、磷酸、琥珀酸、硫酸、酒石酸、對甲苯磺酸等。尤其優選檸檬酸、氫溴酸、鹽酸、馬來酸、磷酸、硫酸和酒石酸。
應當明白，本文涉及本發明結構式I化合物時，還包括其藥物學上可接受的鹽。
藥用製劑本發明藥用組合物可配製為適於各種途徑給藥的劑型，包括經口、直腸、經皮、皮下、靜脈內、肌內和鼻內給藥。這樣的組合物通過藥物學領域公知的方法製備，組合物包含作為有效成分的至少一種上述結構式I化合物和其衍生物，還包含賦形劑或載體。製備本發明藥用組合物時，通常將活性成分與賦形劑混合，通過賦形劑稀釋或裝入載體，這樣的載體可以為膠囊、小袋、紙袋或其它容器形式。當賦形劑用作稀釋劑時，可以是固體、半固體或液體物質，作為活性成分的溶媒、載體或介質。因此，組合物可以為片劑、丸劑、散劑、錠劑、小袋劑、扁囊劑、酏劑、混懸劑、乳劑、溶液劑、糖漿劑、氣霧劑(固體或液體介質)、軟膏劑(活性化合物重量佔例如至多10％)、軟質和硬質明膠膠囊劑、栓劑、無菌注射溶液劑和無菌包裝散劑。
在製備製劑時，可能需要碾磨活性成分以提供合適大小的顆粒，然後與其它成分混合。如果活性化合物基本不溶解，通常將其碾磨為小於200目大小的顆粒。如果活性成分基本溶於水，通常經碾磨調節顆粒大小以提供大體上均勻分布的製劑，例如約40目。
合適賦形劑的一些實例包括乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨醇、甘露糖醇、澱粉、阿拉伯樹膠、磷酸鈣、藻酸鹽、黃芪膠、明膠、矽酸鈣、微晶纖維素、聚乙烯吡咯烷酮、纖維素、水、糖漿和甲基纖維素。製劑還可以包括潤滑劑例如滑石粉、硬脂酸鎂和礦物油；溼潤劑；乳化及懸浮劑；防腐劑例如羥基苯甲酸甲酯和羥基苯甲酸丙酯；甜味劑；和調味劑。使用本領域熟知的方法可以將本發明組合物配製為給予患者後快速、持續或延時釋放活性成分的製劑。
優選將組合物配製劑量為約0.1-500mg的單位劑型。術語「單位劑型」是指對人患者和其它哺乳動物適於用作單一劑量的物理離散單位，每個單位包含適合產生所需治療效果的預定量的活性化合物和合適的藥用賦形劑。
活性成分的有效劑量範圍大，而通常以治療有效量給藥。然而應當知道，實際給予的化合物量應當通過主治醫師根據相關情形而定，這些情形包括要治療的病症、選擇的給藥途徑、給予的實際化合物、個體患者的年齡、體重和反應、患者症狀的嚴重程度等。
為了製備固體組合物例如片劑，將主要活性成分與藥用賦形劑混合形成固體預製劑組合物，其包含本發明化合物的均勻混合物。當提及這些預製劑組合物為均勻的時，是指有效成分均勻地分散於整個組合物中，因此該組合物可容易地細分為等劑量的有效劑型，例如片劑、丸劑和膠囊劑。然後將固體預製劑組合物細分為上述類型的單位劑型，其中包含例如0.1至約500mg本發明有效成分。
本發明片劑或丸劑可包衣或其它配製處理，以提供長效劑型。例如，片劑或丸劑可包括內層劑量組分和外層劑量組分，外層包封在內層上。內外兩層間為腸包衣層，腸包衣層抑制其在胃崩解，使內層組分完整進入十二指腸或延時釋放。多種材料可用作這樣的腸包衣層或包衣，這類物質包括許多聚合酸以及聚合酸和例如蟲膠、十六烷醇和醋酸纖維素等物質的混合物。
口服或注射給予的液體劑型(其中摻入本發明組合物)包括水溶液劑、適當調味的糖漿劑、水性或油性混懸劑和含食用油(例如棉籽油、芝麻油、椰子油或花生油)的經調味的乳劑，以及酏劑和類似的藥用溶媒。
吸入或吹入的組合物包括藥物學上可接受的水性溶劑或有機溶劑或者它們的混合物中的溶液劑和混懸劑以及散劑。液體或固體組合物可以包含上述合適的藥物學上可接受的賦形劑。優選經口或鼻呼吸道給予組合物以局部或全身作用。在優選的藥物學上可接受的溶劑中，組合物可以利用惰性氣體霧化。霧化溶液可以直接從噴霧裝置吸入，或者將霧化裝置連接到面罩、帳罩或間歇正壓呼吸機。溶液劑、混懸劑或散劑組合物可以適當方式輸送製劑的裝置給藥，優選經口或鼻給藥。
本發明方法中使用的再一種優選製劑使用透皮給藥裝置(「貼劑」)。這樣的透皮貼可以用於連續或不連續輸注控制量的本發明化合物。輸送藥物的透皮貼劑的製備和用法是本領域公知的。參見例如美國專利號5,023,252，全文通過引用結合到本文中。可製備這樣的貼劑以連續、脈動或按需輸送藥物。
當需要或必需向大腦引入藥用組合物時，可以使用直接或間接給藥技術。直接給藥技術通常包括將藥物輸送導管放置到宿主的心室系統以避免血腦屏障。一種將生物因子輸送到身體特定解剖區的植入給藥系統的介紹見美國專利號5,011,472，全文通過引用結合到本文中。一般優選間接技術，其通常涉及將親水性藥物轉化為脂溶性藥物以配製提供藥物潛伏化作用的組合物。通常如下實現潛伏化作用封閉存在於藥物上的羥基、羰基、硫酸酯基和伯胺基，使得藥物的脂溶性更強並且能夠透過血腦屏障輸送。或者，可以通過動脈內輸注高滲溶液增強輸送親水藥物，這種方式可以暫時打開血腦屏障。
治療用途本發明提供抑制細胞-基質和細胞-細胞相互作用的小分子有機化合物，因此可抑制導致某些疾病和病症發生發展的級聯過程。
本發明多方面提供一種治療或預防GAG-ECAM相互作用介導的細胞粘附和細胞遷移相關性疾病和病症，該方法包括對需要患者給予治療有效量的藥用組合物，所述組合物包含通式I化合物及其藥物學上可接受的鹽以及藥物學上可接受的稀釋劑或載體， 其中
R1選自H；1-6個碳原子的直鏈或支鏈烷基；芳基烷基；取代的芳基烷基；任選被烷基取代的環烷基；烷醯基；任選在芳基被取代的芳基羰基；環烷基羰基；烷氧基羰基；R2選自羧基；氰基；氨基羰基；烷基氨基羰基；任選在芳基被取代的芳基氨基羰基；二烷基氨基羰基，其中各烷基為直鏈或支鏈C1-C6烷基，或者兩個烷基一起可形成包含氮、任選包含1-2個額外的雜原子的3-7元飽和、不飽和或芳族單環或雙環雜環基；烷氧基羰基；烷醯基；環烷基羰基；任選在芳基被取代的芳基羰基；苯並噻唑-2-基；R3和R4選自任選被羥基、烷氧基、氨基或烷基氨基取代的C1-C6烷基、C2-C4單不飽和烯基、環烷基、芳基、芳基甲基，或者R3和R4一起可形成包含氮、任選包含1-2個額外的雜原子的任選取代的5-7元飽和、不飽和或芳族單環或雙環雜環基；R5、R6、R7和R8選自H或C1-C6烷基，前提條件是當R5、R6、R7和R8都為C1-C6烷基時，R1為氫。
用於治療和預防GAG-ECAM相互作用介導的細胞粘附和細胞遷移相關性疾病和病症的優選藥用組合物在上文中介紹。
根據一個實施方案，本發明藥用組合物用於治療GAG-ECAM相互作用相關性疾病或病症，其中GAG選自硫酸乙醯肝素(HS-GAG)、肝素、硫酸軟骨素、硫酸皮膚素、硫酸角質素及它們的衍生物和片段。
根據當前一個優選實施方案，本發明藥用組合物用於治療GAG-ECAM相互作用相關性疾病或病症，其中GAG為HS-GAG。
根據進一步的實施方案，本發明藥用組合物用於治療GAG-ECAM相互作用相關性疾病或病症，其中GAG特異性ECAM選自選擇蛋白、整聯蛋白、纖連蛋白和細胞因子。
根據當前一個優選實施方案，本發明藥用組合物用於治療GAG-ECAM相互作用相關性疾病或病症，其中GAG特異性ECAM選自L-選擇蛋白和P-選擇蛋白。
已經證實抗細胞粘附和抗細胞遷移療法對治療許多疾病和病症是高效的，所述疾病和病症包括炎性病變、自身免疫性病變、癌和腫瘤轉移以及血小板介導性疾病。
本發明藥用組合物可以治療與L-和P-選擇蛋白相關的或涉及選擇蛋白介導性白細胞隨血流流動的許多炎症性病症。可治療的病症包括但不限於器官或組織移植排斥(例如，同種移植物排斥或自體骨髓移植)、動脈粥樣硬化、視網膜炎、癌轉移、類風溼性關節炎、白細胞介導的急性肺損傷(例如成人呼吸窘迫綜合症)、哮喘、變應性鼻炎、變應性結膜炎、炎症性肺病、再狹窄、腎炎、急性和慢性炎症、特應性皮炎、牛皮癬、接觸性皮膚過敏、心肌缺血和炎症性腸病。優選實施方案中的藥用組合物用於治療嗜中性白細胞浸潤相關的炎症性病症，例如缺血再灌注損傷、急性胰腺炎、膿毒性休克、眼色素層炎、類風溼性關節炎和炎症性腸病。
再灌注損傷是臨床心臟病學上的主要難題。降低缺血心肌的白細胞粘附的治療藥物可有效提高溶解血栓藥物的療效。用例如組織型纖溶酶原激活劑或鏈激酶藥物的溶解血栓治療可以緩減許多在不可逆性心肌細胞死亡前嚴重心肌缺血患者的冠狀動脈阻塞。然而，很多這樣的患者儘管恢復了血流仍然會出現心肌壞死。已知「再灌注損傷」與白細胞粘附缺血區血管內皮有關，大概部分是由於凝血酶和細胞因子激活了血小板和內皮，這使它們粘附於白細胞(Romson等，Circulation 671016-1023，1983)。這些粘附的白細胞可遷移穿過內皮和缺血性心肌，這和它因血流恢復得到搭救一樣。
炎症性腸病是兩種類似疾病(Crohn氏病和潰瘍性結腸炎)的集合術語。Crohn氏病是一種特發的、慢性潰瘍性狹窄性炎症性疾病，特徵在於界限清楚並且通常因肉芽腫性炎症反應累及貫穿腸壁各層。儘管該疾病最常發於末端迴腸和/或結腸，但可發生於胃腸道(從口腔到肛門)的任何部位。潰瘍性結腸炎是一種主要局限於結腸黏膜和黏膜下層的炎性反應。炎症性腸病損害中可見大量淋巴細胞和巨噬細胞並且可促成炎症性損傷。
根據進一步的實施方案，本發明提供一種預防或治療炎症性腸病的方法，該方法包括對需要患者給予治療有效量的藥用組合物，所述組合物包含作為有效成分的噻吩並[2，3-c]吡啶化合物2-[[4-[(二乙基氨基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-3-(苯並噻唑-2-基)-6-乙基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶(化合物11)和藥物學上可接受的鹽；還包含藥物學上可接受的載體。如下文實施例8所述，化合物5和化合物11抑制白細胞和嗜中性白細胞浸潤進入小鼠腹膜。白細胞和嗜中性白細胞浸潤是炎症性腸病的特徵。另外，下文的實施例11證明化合物11有效抑制小鼠炎症性腸病模型的結腸損害。如FIG.9和10所示，化合物11的療效呈劑量依賴性並且腹膜內和口服給藥後都具有統計學意義。
哮喘的特徵是氣管支氣管樹對各種刺激的強烈反應，加強支氣管導氣管陣發性收縮的發生強烈反應。刺激導致各種炎症介質釋放，募集嗜鹼細胞、嗜曙紅細胞和嗜中性白細胞，導致炎症性損傷。
類風溼性關節炎是一種慢性復發性炎症性疾病，主要引起關節功能障礙和破壞。通常，類風溼性關節炎首先影響手和足的小關節，不過也可能涉及腕、肘、踝和膝。關節炎由於滑膜細胞與由循環浸潤到關節滑膜內襯的白細胞的相互作用引起。
動脈粥樣硬化是一種動脈疾病。動脈粥樣化基本損害是內膜中隆起的病灶斑塊，具有一個脂質核和外層纖維帽。動脈粥樣化危害動脈血流並削弱受影響的動脈。心肌梗塞和腦梗塞是這種疾病的主要併發症。巨噬細胞和白細胞募集到動脈粥樣化，加劇炎症性損傷。
本發明藥用組合物可進一步用於治療器官或移植排斥。近年來，在運用外科技術移植組織和器官(例如皮膚、腎、肝、心臟、肺、胰腺和骨髓等)方面已經取得了顯著成效。或許未解決的主要問題是缺乏令人滿意的誘導受者對移植的同種移植物或器官的免疫耐受性的藥物。當宿主植入同種異體細胞或器官時，宿主免疫系統可能對外來的移植物抗原產生免疫應答(宿主抗移植物病)，導致破壞移植的組織。CD8+細胞、CD4細胞和單核細胞都涉及排斥移植組織。有效抑制選擇蛋白的本發明化合物還阻礙同種抗原產生的免疫應答，從而阻止這類細胞參與破壞移植的組織或器官(參見例如Georczynski等，Immunology 87573-580，1996)。
本發明藥用組合物的相關用途是調控涉及「移植物抗宿主」病(GVHD)的免疫反應。GVHD是當免疫活性細胞轉移到同種異體基因受者時發生的可能致命的疾病。在這種情形下，供者的免疫活性細胞可能侵襲受者的組織。皮膚、腸上皮細胞和肝的組織為常見的靶並且可能在GVHD病程中被破壞。當移植免疫組織時(例如骨髓移植)，這種疾病存在特別嚴重的危險；在其它情形下，例如包括心臟和肝移植，也報導過不太嚴重的GVHD。調控供者的L-選擇蛋白介導性細胞歸巢特性的本發明化合物可用於治療GVHD(Li，B.，Eur JImmunol 31617-24，2001)。
本發明藥用組合物進一步的用途為治療癌症和轉移。如下文實施例13所述，化合物1抑制多種腫瘤細胞系生長。對於某些擴散到患者整個身體的癌症，一定發生細胞-細胞粘附或轉移過程。具體地說，癌症細胞必須從它們原發部位遷移並且進入血管從而於較遠點推動移生。這種過程的關鍵方面是在遷移到周圍組織前癌症細胞的粘附(粘附到沿著血管壁排列的血小板和內皮細胞)。這種病變可以通過給予本發明化合物阻斷，其通常有助於阻滯細胞-細胞粘附。具體地說，P-選擇蛋白介導性病變涉及轉移(Varki，A.和Varki，N.M.，Braz J Med Biol Res.34711-7，2001)本發明藥用組合物還包括治療白血病的用途，例如急性骨髓性白血病，其涉及白血病細胞外滲和腫瘤形成。如實施例14所述，化合物1抑制白血病細胞生長。本發明還包括治療(包括預防)血管生成病症的方法。本文使用的術語「血管生成病症」包括異常新血管生成的病症，例如腫瘤轉移和眼新血管生成(包括例如糖尿病性視網膜病、新生血管性青光眼)。
本發明藥用組合物進一步的用途是治療多發性硬化。多發性硬化是一種進行性神經自身免疫性疾病，它被認為是特異性自身免疫反應中的某些白細胞破壞髓磷脂(包裹神經纖維的絕緣鞘)的結果。已證實抗L-選擇蛋白的小鼠單克隆抗體對多發性硬化的動物模型實驗性自身免疫性腦脊髓炎(EAE)具有抑制作用(Archelos，J.J.，J.Neurol.Sci.，159127-34，1998)。
本發明還提供一種預防或治療多發性硬化的方法，該方法包括對需要患者給予治療有效量的藥用組合物，所述組合物包含作為有效成分的噻吩並[2，3-c]吡啶化合物2-[[4-[(二乙基氨基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-3-(苯並噻唑-2-基)-6-乙基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶(化合物11)和藥物學上可接受的載體。如FIG.11所示，化合物11於兩種測試濃度抑制EAE的症狀。
還發現本發明結構式I化合物直接結合HS-GAG，因此可用於治療HS-GAG介導性病症。HS-GAG介導性病症包括細胞-細胞、細胞-病毒、細胞-基質和細胞-蛋白相互作用介導的病症。HS-GAG介導性病症的實例包括病毒附著細胞、細胞粘附、血小板聚集、淋巴細胞粘附和遷移以及澱粉樣纖維形成。
根據再一個實施方案，本發明藥用組合物因此還可用於治療(或預防)病毒性病症例如丙型和B型肝炎、巨細胞病毒感染、呼吸道合胞病毒感染和AIDS。
根據又一個實施方案，本發明藥用組合物可用於治療或預防動脈粥樣硬化、澱粉樣病[包括阿爾茨海默氏病和II型糖尿病(非胰島素依賴性糖尿病)]、炎症性和免疫性病症、癌症、骨退化、骨質疏鬆症、骨關節炎、腫瘤轉移和包括腎小球性腎炎的腎疾病。
根據又一個實施方案，本發明藥用組合物用於治療或預防凝血障礙。本發明化合物可用於阻礙肝素和其它抗凝血劑糖胺聚糖對凝血酶和Xa因子活性的作用，而且同樣也可影響其它血液凝固蛋白。肝素通常用於抗凝作用。已經詳細總結了外原性給予的肝素與血液凝固和纖溶途徑的蛋白的相互作用(參見例如Van Kuppevelt，T.H.等，J Biol Chem，27312960-12966，1998)。當抗凝作用已經使出血成為一種威脅時，通常必需逆轉肝素的作用，特別是在心肺旁路常規使用肝素抗凝後，以及形成內源性肝素樣血液凝固抑制劑的患者中。目前，經FDA批准的現有肝素解毒劑僅有魚精蛋白。魚精蛋白是從含高濃度胺基酸精氨酸的魚精核中提取的鹼性蛋白混合物。當注射到已經用肝素治療的人體時，魚精蛋白迅速絡合肝素從而中和它的活性。儘管魚精蛋白在人體有效抗普通肝素，但它不能抗低分子量肝素或非肝素糖胺聚糖抗凝血劑Orgaran(即硫酸軟骨素/硫酸乙醯肝素/硫酸皮膚素的混合物)。魚精蛋白也有許多副作用(包括肺低血壓)，它們難以控制並且嚴重威脅患者健康。同時，由於魚精蛋白是天然產物，它沒有準確定義並且產物可能變化，因此存在劑量確定問題。完善定義的可結合肝素或其它GAG的化合物可能有效逆轉上述過量的特定抗凝血劑製劑。Carson及其同事(Munro，M.S.等，Trans Am Soc Artif Intern Organs，27499-503，1983)已經鑑定出上皮/內皮細胞表面蛋白的肝素結合性肽，這些肽對影響凝血酶生成的肝素具有一定中和能力，但是僅在高肽濃度以及低肝素和低凝血酶濃度發現最佳效果。本發明小分子有機化合物將明顯優於這些肽，因為它們更穩定並且更經濟。因此，本發明化合物可用於中和普通肝素、低分子量肝素或Orgaran。
血液凝固和纖溶途徑的蛋白與內皮細胞表面PG之間的多種相互作用通常在內皮細胞表面保持平衡，從而保持不形成血栓的狀態。本發明肝素結合性化合物作用類似於血小板因子4(PF4)，因為它們可以與肝素結合，降低抗凝血劑活性，這種結合發生在內皮細胞表面，因此使得能夠形成凝塊。
本發明化合物其它潛在用途是通過阻滯組織中肝素受體與循環肝素的結合而阻滯肝素的攝取和清除，並且因此延長循環肝素的半衰期。使用本發明化合物將減少肝素的給予頻率和需要量。這尤其可用於採用低分子量肝素的家庭治療，低分子量肝素通過皮下注射給藥並且正成為住院治療後的標準抗凝血治療。
應當知道，選擇本發明結構式I化合物，雖然是因為它們能夠抑制某些選擇蛋白與HS-GAG的結合，而且這種特性有助於它們的醫學活性，然而，不能排除化合物也通過其它作用機理並行或協同發揮其有利的醫學作用。因此，本領域熟練從業者應當知道，本發明的一個方面是介紹新型藥用組合物，而且申請人無意通過解釋它們預防或治療作用的特定作用機理來加以限制。
本發明實質(提供能夠抑制GAG-ECAM相互作用的新型化合物、它們的藥用組合物及其用途)可以通過下列非限制性實施例更好地理解。
實施例實施例1常規合成結構式I化合物根據Noravyan等(A.S.Noravyan等，Khim.-Farm.Zh.，14，37-40，1980)所述的反應流程合成結構式I化合物。下文的結構式A化合物(R1和R2的定義同結構式I)與下文的結構式B化合物醯基氯(其中R3和R4的定義同結構式I)在無水苯中、回流及存在三乙胺下反應。濾出三乙胺鹽酸鹽的沉澱晶體，在低真空下蒸發濾液。後續處理殘餘物，獲得結構式I目標化合物，60-80％產率。
實施例2合成化合物29如下合成化合物2-[[4-[(4-甲基-1-哌嗪基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-6-乙基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡-3-甲醯胺(化合物29)向2.25g(10mmol)2-氨基-6-乙基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶-3-甲醯胺的無水甲苯溶液加入2.0g(20mmol)三乙胺和含3.6g(12nmol)對-[(4-甲基-1-哌嗪基)磺醯基]苯甲醯氯的30ml無水甲苯。回流反應混合物3h後冷卻。濾出三乙胺鹽酸鹽的沉澱晶體。真空蒸發濾液，加入乙酸乙酯結晶殘餘物。黃色晶體經乙酸乙酯洗滌後乾燥。獲得目標化合物，72％產率，熔點232℃。
1H NMR(DMSO-d6)δ(ppm)7.80-8.12(4H，m，苯)，3，8(2H，m，CH2)，2.82(8H，t，CH2-哌嗪)，2.28-2.41(6H，m，3CH2)，1.14(3H，t，CH3)，0.90(3H，t，NCH3)。
實施例3合成化合物28如下合成化合物2-[[4-[[乙基(苯基甲基)氨基]磺醯基]苯甲醯基]氨基]-6-乙基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶-3-甲醯胺(化合物28)向2.25g(10mmol)2-氨基-6-乙基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶-3-甲醯胺的無水甲苯溶液加入2.0g(20mmol)三乙胺和含4.0g(12mmol)對-[[乙基(苯基甲基)氨基]磺醯基]苯甲醯氯的30ml無水甲苯。回流反應混合物3h後冷卻。濾出沉澱的三乙胺鹽酸鹽。真空蒸發濾液，加入乙酸乙酯結晶殘餘物。黃色晶體經乙酸乙酯洗滌後乾燥。獲得目標化合物，65％產率，熔點246℃。
1H NMR(DMSO-d6)δ(ppm)8.03-8.10(4H，m，苯)，7.28-7.33(5H，m，苯)，4.36(2H，s，NCH2Ph)，3.58(2H，m，CH2)，3.18(2H，m，CH2)，2.50-2.90(6H，m，CH2)，1.34(3H，t，CH3)，0.88(3H，t，CH3)。
實施例4藥用組合物本發明藥用組合物通過下列製劑實施例說明製劑實施例1製備包含下列成分的硬質明膠膠囊劑
將上述成分混合後以340mg量填充入硬質明膠膠囊。
製劑實施例2用下列成分製備片劑
將上述成分混合後壓縮成每片重240mg的片劑。
製劑實施例3製備包含以下成分的乾粉吸入器製劑
將活性成分與乳糖混合，然後將混合物加入乾粉吸入器。
製劑實施例4如下製備每片包含30mg活性成分的片劑
將活性成分、澱粉和纖維素通過20目U.S.篩後充分混合。將聚乙烯吡咯烷酮溶液與獲得的粉末混合，然後通過16目U.S.篩。於50℃-60℃乾燥如此產生的細粒，然後通過16目U.S.篩。先將羧甲基澱粉鈉、硬脂酸鎂和滑石粉通過30目U.S.篩，然後加入細粒中，混合後用壓片機壓縮成每片重120mg的片劑。
製劑實施例5如下製備每個膠囊包含40mg活性成分的膠囊劑
將活性成分、澱粉和硬脂酸鎂混合，通過20目U.S.篩，然後以150mg含量填充入硬質明膠膠囊。
製劑實施例6如下製備每枚包含25mg活性成分的栓劑
將活性成分通過60目U.S.篩，懸浮於預先用必需的最低熱度熔化的飽和脂肪酸甘油酯。然後將混合物倒入標稱為2.0g容量的栓劑模具冷卻。
製劑實施例7如下製備每5.0ml劑量包含50mg活性成分的混懸劑
將活性成分、蔗糖和黃原膠混合，通過10目U.S.篩，然後與預先製備的微晶纖維素和羧甲基纖維素鈉的水溶液混合。用一些水稀釋苯甲酸鈉、調味劑和著色劑並攪拌。然後加入足夠量的水以獲得需要的體積。
製劑實施例8如下製備每個膠囊包含15mg活性成分的膠囊劑
將活性成分、纖維素、澱粉和硬脂酸鎂混合後通過20目U.S.篩，然後將425mg填充入硬質明膠膠囊。
製劑實施例9可以如下製備靜脈內製劑
製劑實施例10可以如下製備局部製劑
將白色軟石蠟加熱至熔化。將液體石蠟和乳化蠟混合後攪拌至溶解。加入活性成分，持續攪拌至活性成分分散。然後將混合物冷卻固化。
實施例5體外測定以確定抑制劑結構式I化合物抑制L-選擇蛋白(P-選擇蛋白)與HS-GAG的結合使用一種體外測定評價結構式I受試化合物抑制L-選擇蛋白與HS-GAG相互作用的能力。該測定適於測定各特定化合物產生50％抑制作用(IC-50)的濃度。該測定使用的GAG為肝素。因此，將軛合牛血清白蛋白的豬腸黏膜肝素(肝素-BSA；Sigma Cat.No.H0403)的5mg/ml磷酸緩衝鹽水(PBS；pH 6.5)加入96孔聚苯乙烯ELISA板(NUNC Cat.No.442404；0.1ml/孔)，於4℃溫育過夜(ON)。然後，將所述板用去離子水和PBS(pH6.5)通過浸泡徹底洗滌。然後將ELISA板用BSA(ICN Cat.No.160069，3％，200μl/孔)於室溫(RT)封閉1小時。封閉後，將所述板用去離子水、含吐溫20(Sigma Cat.No.P-1379，0.05％)的PBS(pH6.5)依次洗滌。將合成或購自ChemDiv Labs(SanDiego，CA)的化合物溶於DMSO後用PBS稀釋，以0.01-300μM的不同濃度加入各孔中。將重組人L-選擇蛋白/IgG(Research andDevelopment Systems Cat.No.728-LS)溶於含BSA(0.1％)的PBS，將氯化鈣(1mM)加入ELISA板(100μl/孔)，於室溫溫育60分鐘並震蕩。溫育後，將所述板用去離子水洗滌後用含吐溫20的PBS(pH6.5)洗滌3次。將抗人IgG過氧化物酶軛合物(1∶5000；Sigma Product No.A8667)在含BSA(0.1％)的PBS中稀釋，將氯化鈣(1mM)加入ELISA板(100μl/孔)，於室溫溫育30分鐘並震蕩。然後該板經去離子水洗滌後用包含吐溫20的PBS(pH 6.5)洗滌3次。將過氧化物酶底物色原TMB(DakoCat.No.S1599)加入ELISA板(100μl/孔)，於室溫溫育。15分鐘後，加入(200μl/孔)ELISA終止溶液(1N鹽酸、3N硫酸)以終止過氧化物酶催化的比色反應。用ELISA板閱讀器(Dynatech MR5000)於450nm測量樣品的光學密度(OD)。用Graphpad Prism軟體分析數據後確定IC-50值。以同樣方式測定P-選擇蛋白，但是使用重組人P-選擇蛋白/IgG(Research and Development Systems Cat.No.137-PS)。
上述測定表明，結構式I化合物具有抑制活性。抑制劑化合物的實例參見表1。
表1.所選化合物對L-選擇蛋白與肝素結合的抑制作用






所有測定至少重複2次並給出代表性結果。
另外，在如上所述的體外測定中，使用軛合牛血清白蛋白(SigmaCat.No.A7638)的牛腎硫酸乙醯肝素(Sigma Cat.No.H7640)以證明L-選擇蛋白與HS-GAG的結合不同於與肝素的結合，並且證明抑制劑化合物抑制該結合。FIG.8表明結構式I的幾種不同抑制劑化合物抑制L-選擇蛋白與牛腎硫酸乙醯肝素的結合。
實施例6測定證明抑制劑化合物與肝素和其它HS-GAG的直接相互作用測定1.
為了證明L-選擇蛋白抑制劑化合物的確直接結合到肝素和其它HS-GAG，將個體化合物與固定化肝素在沒有L-選擇蛋白下溫育用肝素-BSA包被96孔ELISA板，然後用BSA按實施例5所述方法封閉。將抑制劑化合物以0.1-200μM的最終濃度用ELISA板溫育90分鐘，然後用溫育緩衝液洗滌。洗滌後，將L-選擇蛋白/IgG加入與化合物預溫育的孔中。同時，在單獨的對照孔中，將L-選擇蛋白與抑制劑化合物一起溫育90分鐘。溫育後，通過軛合辣根過氧化物酶的抗體量化L-選擇蛋白與板的結合，按實施例5所述的方法進行OD測量。在預溫育或共同溫育的實驗中，抑制劑化合物5和11在抑制L-選擇蛋白與肝素結合方面的水平相同。
測定2.
抑制劑化合物與肝素和其它HS-GAG直接結合的其它證據可通過擴展的測定1證明。用肝素-BSA包被96孔ELISA板，然後用BSA按上述方法封閉。將抑制劑化合物以預定的抑制L-選擇蛋白結合的濃度在ELISA板溫育60分鐘，然後用溫育緩衝液洗滌。洗滌後，將L-選擇蛋白/IgG以遞增濃度(5-250μg/ml)加入該板並溫育90分鐘。然後，通過軛合辣根過氧化物酶的抗體量化L-選擇蛋白與板的結合，然後按實施例5所述方法測定光學密度。在較高L-選擇蛋白濃度(50-250μg/ml)證實L-選擇蛋白定量結合，證明抑制劑化合物防止L-選擇蛋白與肝素結合，因此，這些結果證明抑制劑化合物直接與肝素相互作用，肝素因此為L-選擇蛋白受體。實例如FIG.7所示。用空的三角形(對照)繪製的劑量反應曲線代表板與L-選擇蛋白在不存在抑制劑化合物1下溫育後獲得的結果。
實施例7在剪切流條件下抑制劑化合物抑制白細胞粘附內皮細胞按Lawrence和Springer的方法(Cell 65859-873，1991)將人T-淋巴細胞穿過人內皮細胞層。於高剪切流時，HS-GAG-ECAM相互作用的結果是遷移的T-淋巴細胞短暫地間歇性粘附到內皮細胞。產生的T-細胞滾動通過攝像機記錄，用相同時間測量每個規定區域的滾動細胞數。在高剪切流條件下可溶性肝素(細胞表面GAG的競爭者)破壞T-細胞滾動。化合物1、11和25以25μM分別抑制90％、90％和70％的細胞滾動。
實施例8白細胞和嗜中性白細胞滲入小鼠腹膜模型對BALB/c小鼠(6周齡，～20g重量，15隻/組)腹膜內注射含抑制劑化合物的0.2ml DMSO/吐溫/無菌鹽水1小時，然後給予硫乙醇酸鹽(Sigma)。給予對照組溶媒，對假手術對照組不給予硫乙醇酸鹽。對小鼠腹膜內注射1ml 3％硫乙醇酸鹽肉湯(Xie，X.等，J.Biol.Chem.，275，34818-34825，2000)。3小時後處死小鼠，用含2mM EDTA的5ml冰冷的鹽水灌洗腹膜腔預防凝固。紅細胞溶解後，用血細胞計數器計數白細胞。用Türck著色後計數嗜中性白細胞。數據表達為平均值±SEM，通過t檢驗進行統計分析。用P＜0.05的值表明統計學顯著性。
給予硫乙醇酸鹽誘導腹膜腔的白細胞積聚增加到大約3倍。通過給予包括化合物5和化合物11的抑制劑化合物有效抑制白細胞遷移至腹膜腔。測定嗜中性白細胞計數，得到類似的結果相同。以三種劑量更詳細地測試化合物52mg/kg、10mg/kg和50mg/kg(FIG.4)。發現該化合物為白細胞遷移的有效抑制劑；在50mg/kg、10mg/kg和2mg/kg劑量時分別降低浸潤75％、50％和25％。人們公知體內白細胞遷移和浸潤是炎症性、自身免疫性和其它病症的特徵。因此，本發明抑制劑化合物抑制白細胞體內浸潤的能力對這些病症具有治療用途。
實施例9角叉菜膠誘導的爪水腫在給予受試化合物60分鐘後，對Balb/c小鼠的左後爪注射0.02ml新製備的2％角叉菜膠溶液，誘發急性水腫(Torres，S.R.等，EuropeanJournal of Pharmacology 408199-211，2000)。對右爪給予0.02ml鹽水作對照。將角叉菜膠注射於右後爪的蹠區，用Mitutoyo工程測微計於給予角叉菜膠後2、4和24小時測量爪的厚度，左右足墊的差表達為平均值±SEM。i.p.給予後，抑制劑化合物明顯降低了角叉菜膠誘導的爪水腫。化合物5的劑量反應曲線見FIG.5。這些結果表明抑制GAG結合GAG-ECAM的化合物具有抗炎活性。
實施例10遲髮型超敏反應(DTH)對小鼠(15隻/組)剃過的腹部(50μl)和每爪(5μl)局部應用2％噁唑酮(4-乙氧基亞甲基-2-苯基-2-噁唑啉-5-酮；Sigma，St Louis，MO)的丙酮/橄欖油(4∶1 vol/vol)溶液，使其過敏(Lange-Asschenfeldt B.等，Blood 99538-545，2002)。致敏5天後，對右耳局部給予10μl 1％噁唑酮溶液激發免疫反應，而左耳僅用溶媒處理。在激發前1小時給予化合物。激發24小時後用小鼠耳腫法測量炎症程度。使用未配對的t檢驗進行統計分析。
如FIG.6所示，激發24小時後，化合物5(劑量3mg/kg，iv給予)抑制DTH至56％的對照值。在p＞0.001時數據具有統計學顯著性。
實施例11三硝基苯磺酸(TNBS)誘導的結腸炎對照小鼠(12隻/組)腹膜內(IP)注射受試化合物(TC)溶媒(吐溫80，5％，200μl)。實驗小鼠(12隻/組)IP注射TC(10mg/kg或35mg/kg，200μl)。對照小鼠和實驗小鼠每天注射1次，連續注射7天。第一次IP注射24小時後，通過直腸內給予TNBS(150mg/kg溶於NaCl(0.9％)EtOH(50％)(1∶1；80μl/小鼠))在對照組、實驗組和未處理組誘發炎症性腸病(IBD)。給予TNBS 7天後，用頸椎脫臼法處死所有小鼠。在解剖顯微鏡(X5)下檢查小鼠的結腸，以0-10級(結腸損害記分)評價肉眼可見的損害。如FIG.9所示，抑制劑化合物11於10和35mg/kg的劑量有效抑制結腸損害。FIG.10表示在相同實驗模型中口服化合物11的效果。每天經口給予1次化合物與0.5％甲基纖維素的混懸劑，連續給藥7天。每組12隻小鼠，對照小鼠僅接受0.5％甲基纖維素。以3、50和100mg/kg的劑量口服化合物11有效抑制結腸損害(FIG.10)。
實施例12實驗性自身免疫性腦脊髓炎(EAE)在自身免疫性病症中，自身抗原反應性T細胞在胸腺中未被清除並且在外周活化，它們可能在特定的器官誘發損害。在Lewis大鼠誘發的自身免疫性疾病模型EAE與人多發性硬化(MS)疾病具有許多相似之處。腦損害的MS患者的T細胞具有TCR連接重排，與用髓磷脂鹼性蛋白肽MBP p87-99免疫的Lewis大鼠的脊髓中發現的T細胞相同。另外，MS患者的主要T細胞和B細胞涉及MBP p87-99反應。
通過MBP p87-99免疫法誘發大鼠EAE。從出現EAE症狀前1天開始(EAE誘導後第12天)每天腹膜內注射給予抑制劑化合物1次，連續注射3天。臨床疾病的程度劃分如下0＝無症狀；1＝尾部肌肉失去張力；2＝後肢癱瘓；3＝四肢癱瘓；4＝四肢癱瘓且處於垂死狀態。如FIG.11所示，化合物11以10和35mg/kg的劑量有效抑制EAE的臨床症狀。
實施例13抑制癌細胞系生長將各細胞系(MCF7(乳腺癌)、NCI-H460(非小細胞肺癌)和SF-268(神經膠質瘤)在微量滴定板上預溫育。然後加入濃度0.1μM的抑制劑化合物並溫育培養基48小時。用alamar藍(Gray GD，WickstromE，Biotechniques 21(5)780-782，1996)進行終點測定。每種化合物的結果用處理細胞與未經處理細胞相比較的生長百分率表示。將任何一種細胞系生長降至約32％或更少的化合物適合進一步深入地研究(Monks A等，J.Natl.Cancer Inst.，83757-766，1991。化合物1對細胞系MCF7、NCI-H460和SF-268的生長抑制分別達99％、100％和99％。
實施例14抑制白血病細胞生長將各細胞系(RPMI-8226(多發性骨髓瘤)、MOLT-4(急性淋巴細胞白血病)、CCR-CEM(人T細胞白血病)、K562(慢性骨髓性白血病)、SR(慢性骨髓性白血病)在微量滴定板上預溫育(Monks A等，J.Natl.Cancer Inst.，83757-766，1991)。加入不同濃度(10-8-10-4摩爾)的抑制劑化合物並溫育培養基48小時。使用磺醯羅丹明B(SRB)蛋白測定法評價細胞活力或生長(Skehan P等，J.Natl.Cancer Inst.，82；1107-1112，1990)。化合物1對細胞系RPMI-8226、MOLT-4、CCR-CEM、K562和SR的生長抑制分別達100％、100％、100％、100％和93％。可以忽略細胞死亡(少於15％)。
實施例15測量肝素和其它抗凝血劑GAG對血液凝固的抑制作用的方法測定1.抑制劑化合物對逆轉Xa因子活性影響的體外測定方法。
用0.32％檸檬酸鈉或正常人血漿製備依諾肝素鈉(Rhone PouleneRohrer)、Orgaran(Organan)或普通肝素(Sigma)溶液，製備的溶液包含0.5U/ml抗Xa因子活性。對照Stachrom Heparin(Diagnostica Stago)試劑盒(Dignac M等，Nouv.Res.Fr Hematol.35545-549，1994)提供的標準進行校準。於37℃2分鐘內形成肝素/ATIII絡合物，加入抑制劑化合物，再溫育混合物1-5分鐘，然後加入Xa因子，最後加入顯色底物持續1分鐘，於405nm讀取吸光率。將肝素化對照相對受試樣品的吸光率增量除以肝素化對照與無肝素對照在405nm的吸光率差，獲得逆轉百分率。
測定2.抑制劑化合物對逆轉普通肝素對凝血酶活性抑制作用的體外影響。
從正常供體獲取血漿。使凝血酶濃度(人α凝血酶，EnzymeResearch Laboratories，South Bend，IN)標準化以獲得20-22秒的凝固時間。以0.5IU抗凝血酶活性/ml加入肝素。僅有肝素的凝固時間大約3分鐘。為了測試化合物在該系統的影響，向血漿加入肝素1分鐘後，以0.1-100μM濃度加入化合物。1分鐘後，加入凝血酶並測定凝固時間。
測定3.抑制劑化合物對依諾肝素鈉逆轉Xa因子活性抑制作用的體內影響。
將大鼠(300-400克)用氯胺酮/乙醯丙嗪麻醉，在左頸靜脈和右股靜脈插入套管。抽取血液後立即注射依諾肝素鈉後以建立Xa因子基礎活性。經頸靜脈導管注射依諾肝素鈉(43IU抗FXa活性/kg 0.1ml鹽水，基於用於人的建議劑量)，然後立即注射0.2ml鹽水。從股靜脈採血(0.1ml)到檸檬酸鈉，每30秒1次，持續3分鐘。於3分鐘時經頸靜脈導管注射含化合物的0.1ml磷酸鹽緩衝鹽水，然後注射0.2ml鹽水衝洗。給予化合物後立即重新開始採血，每30秒1次直到首次依諾肝素鈉注射後10分鐘，然後在第15、20、25和30分鐘採血。離心樣品獲得血漿，用Stachrom Heparin試劑盒通過抗Xa因子活性測定法檢測殘餘的依諾肝素鈉。用顯色的Xa因子底物溫育1分鐘後於405nm測量吸光率。
本領域技術人員應當知道，本發明不受上述具體介紹限制。因為本發明範圍由下面的權利要求規定。
權利要求
1.一種以下結構的噻吩並[2，3-c]吡啶化合物2-[[4-[[乙基(苯基甲基)氨基]磺醯基]苯甲醯基]氨基]-6-乙基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶-3-甲醯胺。
2.一種以下結構的噻吩並[2，3-c]吡啶化合物2-[[4-[(4-甲基-1-哌嗪基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-6-乙基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶-3-甲醯胺。
3.一種藥用組合物，其包含作為有效成分的下述通式I化合物及其藥物學上可接受的鹽以及藥物學上可接受的稀釋劑或載體， 其中R1選自H；1-6個碳原子的直鏈或支鏈烷基；芳基烷基；取代的芳基烷基；任選被烷基取代的環烷基；烷醯基；任選在芳基被取代的芳基羰基；環烷基羰基；烷氧基羰基；R2選自羧基；氰基；氨基羰基；烷基氨基羰基；任選在芳基被取代的芳基氨基羰基；二烷基氨基羰基，其中各烷基為直鏈或支鏈C1-C6烷基，或者兩個烷基一起可形成包含氮、任選包含1-2個額外的雜原子的3-7元飽和、不飽和或芳族單環或雙環雜環基；烷氧基羰基；烷醯基；環烷基羰基；任選在芳基被取代的芳基羰基；苯並噻唑-2-基；R3和R4選自任選被羥基、烷氧基、氨基或烷基氨基取代的C1-C6烷基、C2-C4單不飽和烯基、環烷基、芳基、芳基甲基，或者R3和R4一起可形成包含氮、任選包含1-2個額外的雜原子的任選取代的5-7元飽和、不飽和或芳族單環或雙環雜環基；R5、R6、R7和R8選自H或C1-C6烷基，前提條件是當R5、R6、R7和R8都為C1-C6烷基時，R1為氫。
4.權利要求3的藥用組合物，其中R1選自甲基、乙基、1-甲基乙基、苯基甲基、乙醯基、乙氧基羰基，R5＝R6＝R7＝R8為氫。
5.權利要求3的藥用組合物，其中R1為氫，R5＝R6＝R7＝R8為氫或甲基。
6.權利要求3的藥用組合物，其中R1＝R5＝R6為甲基且R7＝R8為氫。
7.權利要求3的藥用組合物，其中R2選自氰基、甲氧基羰基、乙氧基羰基、氨基羰基、甲基氨基羰基、二甲基氨基羰基、吡咯烷基羰基、哌啶基羰基、嗎啉基羰基、苯並噻唑-2-基。
8.權利要求3的藥用組合物，其中R3和R4選自甲基、乙基、丙基、丁基、甲氧基乙基、氯丁基、氰基乙基、苯基、環戊基、環己基、苯基甲基、烯丙基或巴豆基，R3和R4可相同或不同。
9.權利要求3的藥用組合物，其中R3和R4形成吡咯烷、哌啶、2-甲基、3-甲基、4-甲基或3，5-二甲基哌啶、全氫吖庚因、嗎啉、哌嗪、4-甲基哌嗪、3，4-二氫-2(1H)-異喹啉基、3，4-二氫-1(2H)喹啉、1，3，3-三甲基-6-氮雜二環[3.2.1]辛-6-烷和它們的取代衍生物。
10.權利要求3的藥用組合物，其中結構式I化合物選自1)2-[[4-[(乙基丁基氨基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-3-(苯並噻唑-2-基)-6-乙基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶；2)2-[[(4-(3，4-二氫-2(1H)-異喹啉基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-6-(1-甲基乙基)-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶-3-甲醯胺；3)2-[[4-(甲基苯基氨基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-6-(1-甲基乙基)-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶-3-甲醯胺；4)2-[[4-(3，4-二氫-2(1H)-異喹啉基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-4，5，6，7-四氫-5，5，7，7-四甲基噻吩並[2，3-c]吡啶-3-甲醯胺；5)2-[[4-[(二乙基氨基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-3-(苯並噻唑-2-基)-6-乙基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶；6)2-[[4-(嗎啉基磺醯基)苯甲醯基]氨基]-3-(苯並噻唑-2-基)-6-(1-甲基乙基)-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶；7)2-[[4-(二乙基氨基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-4，5，6，7-四氫-5，5，7，7-四甲基噻吩並[2，3-c]吡啶-3-甲酸乙酯；8)2-[[4-(3，4-二氫-1(2H)-喹啉基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-3-(苯並噻唑-2-基)-4，5，6，7-四氫-5，5，7，7-四甲基噻吩並[2，3-c]吡啶；9)2-[[4-(六氫-1H-吖庚因-1-基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-4，5，6，7-四氫-5，5，7，7-四甲基噻吩並[2，3-c]吡啶-3-甲酸乙酯；10)2-[[4-[[4-(甲基)-1-哌嗪基]磺醯基]苯甲醯基]氨基]-3-(苯並噻唑-2-基)-6-甲基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶；11)2-[[4-[(1，3，3-三甲基-6-氮雜二環[3.2.1]辛-6-基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-3-(苯並噻唑-2-基)-6-甲基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶；12)2-[[4-[(甲基苯基氨基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-3-(苯並噻唑-2-基)-6-甲基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶；13)2-[[4-(嗎啉基磺醯基)苯甲醯基]氨基]-3-(苯並噻唑-2-基)-6-甲基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶；14)2-[[4-[(二乙基氨基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-3-(苯並噻唑-2-基)-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶-6-甲酸乙酯；15)2-[[4-[[4-(3-甲基-1-哌啶基)]磺醯基]苯甲醯基]氨基]-3-(苯並噻唑-2-基)-6-甲基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶；16)2-[[4-[(二乙基氨基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-3-(苯並噻唑-2-基)-6-(苯基甲基)-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶；17)2-[[4-[(二乙基氨基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-3-(苯並噻唑-2-基)-6-甲基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶；18)2-[[4-[[4-(乙氧基羰基)-1-哌嗪基]磺醯基]苯甲醯基]氨基]-4，5，6，7-四氫-5，5，7，7-四甲基噻吩並[2，3-c]吡啶-3-甲醯胺；19)2-[[4-[(環己基甲基氨基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-4，5，6，7-四氫-5，5，7，7-四甲基噻吩並[2，3-c]吡啶-3-甲醯胺；20)2-[[4-[(二-2-丙烯基氨基)磺醯基]苯甲醯基]-4，5，6，7-四氫-5，5，7，7-四甲基噻吩並[2，3-c]吡啶-3-甲酸甲酯；21)2-[[4-[(二-2-甲氧基乙基氨基)]磺醯基]苯甲醯基]-4，5，6，7-四氫-5，5，7，7-四甲基噻吩並[2，3-c]吡啶-3-甲醯胺；22)2-[[4-[(1，3，3-三甲基-6-氮雜二環[3.2.1.]辛-6-基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-6-甲基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶-3-甲醯胺；23)2-[[4-[(二乙基氨基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-3-(苯並噻唑-2-基)-6-甲基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶；24)2-[[4-[(二乙基氨基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-3-(苯並噻唑-2-基)-6-(1-甲基乙基)-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶；25)2-[[4-[(二-2-甲氧基乙基氨基)磺醯基]苯甲醯基]-氨基]-3-(苯並噻唑-2-基)-6-甲基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶；26)2-[[4-[(甲基苯基氨基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-3-(苯並噻唑-2-基)-6-甲基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶；27)2-[[4-[[4-(乙氧基羰基)-1-哌嗪基]磺醯基]苯甲醯基]氨基]-3-(苯並噻唑-2-基)-6-甲基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶；28)2-[[4-[(甲基丁基氨基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-6-(1-甲基乙基)-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶-3-甲酸乙酯；29)2-[[4-[[4-(乙氧基羰基)-1-哌嗪基]磺醯基]苯甲醯基]氨基]-6-(1-甲基乙基)-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶-3-甲酸乙酯；30)2-[[4-(二乙基氨基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-4，5，6，7-四氫-5，5，7，7-四甲基噻吩並[2，3-c]吡啶-3-甲醯胺；31)2-[[4-[(甲基苯基氨基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-6-乙基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶-3-N-甲基-甲醯胺；32)2-[[4-[[乙基(苯基甲基)氨基]磺醯基]苯甲醯基]氨基]-6-乙基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶-3-甲醯胺；33)2-[[4-[(4-甲基-1-哌嗪基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-6-乙基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶-3-甲醯胺；34)2-[[(4-(3，4-二氫-1(2H)-喹啉基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-6-乙基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶-3-N-甲基-甲醯胺；35)2-[[4-[(4-甲基-1-哌嗪基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-6-乙基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶-3-N-甲基-甲醯胺；36)2-[[4-[(4-甲基-1-哌嗪基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-3-(苯並噻唑-2-基)-6-乙基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶；37)2-[[4-(二乙基氨基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-6-乙基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶-3-N-甲基-甲醯胺；38)2-[[4-(二乙基氨基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-6-乙基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶-3-N-嗎啉基-甲醯胺。
11.權利要求10的藥用組合物，其中結構式I化合物為2-[[4-[(乙基丁基氨基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-3-(苯並噻唑-2-基)-6-乙基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶。
12.權利要求10的藥用組合物，其中結構式I化合物為2-[[4-[(二乙基氨基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-3-(苯並噻唑-2-基)-6-乙基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶。
13.權利要求10的藥用組合物，其中結構式I化合物為2-[[4-[[乙基(苯基甲基)氨基]磺醯基]苯甲醯基]氨基]-6-乙基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶-3-甲醯胺。
14.權利要求10的藥用組合物，其中結構式I化合物為2-[[4-[(4-甲基-1-哌嗪基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-6-乙基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶-3-甲醯胺。
15.權利要求3-14任一項的藥用組合物，其能夠抑制GAG與GAG特異性ECAM的相互作用。
16.權利要求15的藥用組合物，其中GAG選自硫酸乙醯肝素(HS-GAG)、肝素、硫酸軟骨素、硫酸皮膚素、硫酸角質素以及它們的衍生物和片段。
17.權利要求16的藥用組合物，其中GAG為HS-GAG。
18.權利要求15的藥用組合物，其中GAG特異性ECAM選自L-選擇蛋白和P-選擇蛋白。
19.權利要求15的藥用組合物，其用於體內抑制嗜中性白細胞浸潤，前提條件是該化合物不為2-[[4-[(1，3，3-三甲基-6-氮雜二環[3.2.1]辛-6-基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-6-乙基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶-3-甲酸乙酯。
20.一種體外抑制細胞粘附或細胞遷移的方法，該方法包括使細胞與有效量的權利要求3-19任一項的藥用組合物接觸以阻止GAG與至少一種GAG特異性ECAM的相互作用。
21.一種治療或預防GAG-ECAM相互作用介導的細胞粘附或細胞遷移性疾病或病症的方法，該方法包括對需要這種治療或預防的患者給予治療有效量的藥用組合物，所述組合物包含通式I化合物及其藥物學上可接受的鹽以及藥物學上可接受的稀釋劑或載體， 其中R1選自H；1-6個碳原子的直鏈或支鏈烷基；芳基烷基；取代的芳基烷基；任選被低級烷基取代的環烷基；低級烷醯基；任選在芳基被取代的芳基羰基；環烷基羰基；烷氧基羰基；R2選自羧基；氰基；氨基羰基；烷基氨基羰基；任選在芳基被取代的芳基氨基羰基；二烷基氨基羰基，其中各烷基為直鏈或支鏈低級烷基，或者兩個烷基一起可形成包含氮、任選包含1-2個額外的雜原子的3-7元飽和、不飽和或芳族單環或雙環雜環基；烷氧基羰基；低級烷醯基；環烷基羰基；任選在芳基被取代的芳基羰基；苯並噻唑-2-基；R3和R4選自任選被羥基、烷氧基、氨基或烷基氨基取代的C1-C6烷基、C2-C4單不飽和烯基、環烷基、芳基、芳基甲基，或者R3和R4一起可形成包含氮、任選包含1-2個額外的雜原子的任選取代的5-7元飽和、不飽和或芳族單環或雙環雜環基；R5、R6、R7和R8選自H或C1-C6烷基，前提條件是當R5、R6、R7和R8都為C1-C6烷基時，R1為氫。
22.權利要求21的方法，其中R1選自甲基、乙基、1-甲基乙基、苯基甲基、乙醯基、乙氧基羰基，R5＝R6＝R7＝R8為氫。
23.權利要求21的方法，其中R1為氫，R5＝R6＝R7＝R8為氫或甲基。
24.權利要求21的方法，其中R1＝R5＝R6為甲基，R7＝R8為氫。
25.權利要求21的方法，其中R2選自氰基、甲氧基羰基、乙氧基羰基、氨基羰基、甲基氨基羰基、二甲基氨基羰基、吡咯烷基羰基、哌啶基羰基、嗎啉基羰基、(3，5-二甲基-1H-吡唑基)羰基、苯並噻唑-2-基。
26.權利要求21的方法，其中R3和R4選自甲基、乙基、丙基、丁基、甲氧基乙基、氯丁基、氰基乙基、苯基、環戊基、環己基、苯基甲基、烯丙基或巴豆基，R3和R4可相同或不同。
27.權利要求21的方法，其中R3和R4形成吡咯烷、哌啶、2-甲基、3-甲基、4-甲基或3，5-二甲基哌啶、全氫吖庚因、嗎啉、哌嗪、4-甲基哌嗪、3，4-二氫-2(1H)-異喹啉基、3，4-二氫-1(2H)喹啉、1，3，3-三甲基-6-氮雜二環[3.2.1]辛-6-烷和它們的取代衍生物。
28.權利要求21的方法，其中結構式I化合物選自1)2-[[4-[(乙基丁基氨基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-3-(苯並噻唑-2-基)-6-乙基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶；2)2-[[(4-(3，4-二氫-2(1H)-異喹啉基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-6-(1-甲基乙基)-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶-3-甲醯胺；3)2-[[4-(甲基苯基氨基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-6-(1-甲基乙基)-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶-3-甲醯胺；4)2-[[4-(3，4-二氫-1(2H)-喹啉基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-4，5，6，7-四氫-5，5，7，7-四甲基噻吩並[2，3-c]吡啶-3-甲醯胺；5)2-[[4-[(二乙基氨基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-3-(苯並噻唑-2-基)-6-乙基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶；6)2-[[4-(嗎啉基磺醯基)苯甲醯基]氨基]-3-(苯並噻唑-2-基)-6-(1-甲基乙基)-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶；7)2-[[4-(二乙基氨基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-4，5，6，7-四氫-5，5，7，7-四甲基噻吩並[2，3-c]吡啶-3-甲酸乙酯；8)2-[[4-(3，4-二氫-1(2H)-喹啉基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-3-(苯並噻唑-2-基)-4，5，6，7-四氫-5，5，7，7-四甲基噻吩並[2，3-c]吡啶；9)2-[[4-(六氫-1H-吖庚因-1-基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-4，5，6，7-四氫-5，5，7，7-四甲基噻吩並[2，3-c]吡啶-3-甲酸乙酯；10)2-[[4-[[4-(甲基)-1-哌嗪基]磺醯基]苯甲醯基]氨基]-3-(苯並噻唑-2-基)-6-甲基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶；11)2-[[4-[(1，3，3-三甲基-6-氮雜二環[3.2.1]辛-6-基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-3-(苯並噻唑-2-基)-6-甲基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶；12)2-[[4-[(甲基苯基氨基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-3-(苯並噻唑-2-基)-6-甲基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶；13)2-[[4-(嗎啉基磺醯基)苯甲醯基]氨基]-3-(苯並噻唑-2-基)-6-甲基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶；14)2-[[4-[(二乙基氨基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-3-(苯並噻唑-2-基)-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶-6-甲酸乙酯；15)2-[[4-[[4-(3-甲基-1-哌啶基)]磺醯基]苯甲醯基]氨基]-3-(苯並噻唑-2-基)-6-甲基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶；16)2-[[4-[(二乙基氨基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-3-(苯並噻唑-2-基)-6-(苯基甲基)-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶；17)2-[[4-[(二乙基氨基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-3-(苯並噻唑-2-基)-6-甲基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶；18)2-[[4-[[4-(乙氧基羰基)-1-哌嗪基]磺醯基]苯甲醯基]氨基]-4，5，6，7-四氫-5，5，7，7-四甲基噻吩並[2，3-c]吡啶-3-甲醯胺；19)2-[[4-[(環己基甲基氨基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-4，5，6，7-四氫-5，5，7，7-四甲基噻吩並[2，3-c]吡啶-3-甲醯胺；20)2-[[4-[(二-2-丙烯基氨基)磺醯基]苯甲醯基]-4，5，6，7-四氫-5，5，7，7-四甲基噻吩並[2，3-c]吡啶-3-甲酸甲酯；21)2-[[4-[(二-2-甲氧基乙基氨基)]磺醯基]苯甲醯基]-4，5，6，7-四氫-5，5，7，7-四甲基噻吩並[2，3-c]吡啶-3-甲醯胺；22)2-[[4-[(1，3，3-三甲基-6-氮雜二環[3.2.1.]辛-6-基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-6-甲基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶-3-甲醯胺；23)2-[[4-[(二乙基氨基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-3-(苯並噻唑-2-基)-6-甲基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶；24)2-[[4-[(二乙基氨基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-3-(苯並噻唑-2-基)-6-(1-甲基乙基)-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶；25)2-[[4-[(二-2-甲氧基乙基氨基)磺醯基]苯甲醯基]-氨基]-3-(苯並噻唑-2-基)-6-甲基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶；26)2-[[4-[(甲基苯基氨基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-3-(苯並噻唑-2-基)-6-甲基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶；27)2-[[4-[[4-(乙氧基羰基)-1-哌嗪基]磺醯基]苯甲醯基]氨基]-3-(苯並噻唑-2-基)-6-甲基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶；28)2-[[4-[(甲基丁基氨基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-6-(1-甲基乙基)-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶-3-甲酸乙酯；29)2-[[4-[[4-(乙氧基羰基)-1-哌嗪基]磺醯基]苯甲醯基]氨基]-6-(1-甲基乙基)-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶-3-甲酸乙酯；30)2-[[4-(二乙基氨基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-4，5，6，7-四氫-5，5，7，7-四甲基噻吩並[2，3-c]吡啶-3-甲醯胺；31)2-[[4-[(甲基苯基氨基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-6-乙基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶-3-N-甲基-甲醯胺；32)2-[[4-[[乙基(苯基甲基)氨基]磺醯基]苯甲醯基]氨基]-6-乙基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶-3-甲醯胺；33)2-[[4-[(4-甲基-1-哌嗪基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-6-乙基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶-3-甲醯胺；34)2-[[(4-(3，4-二氫-1(2H)-喹啉基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-6-乙基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶-3-N-甲基-甲醯胺；35)2-[[4-[(4-甲基-1-哌嗪基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-6-乙基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶-3-N-甲基-甲醯胺；36)2-[[4-[(4-甲基-1-哌嗪基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-3-(苯並噻唑-2-基)-6-乙基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶；37)2-[[4-(二乙基氨基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-6-乙基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶-3-N-甲基-甲醯胺；38)2-[[4-(二乙基氨基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-6-乙基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶-3-N-嗎啉基-甲醯胺。
29.權利要求28的方法，其中結構式I化合物為2-[[4-[(乙基丁基氨基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-3-(苯並噻唑-2-基)-6-乙基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶。
30.權利要求28的方法，其中結構式I化合物為2-[[4-[(二乙基氨基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-3-(苯並噻唑-2-基)-6-乙基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶。
31.權利要求28的方法，其中結構式I化合物為2-[[4-[[乙基(苯基甲基)氨基]磺醯基]苯甲醯基]氨基]-6-乙基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶-3-甲醯胺。
32.權利要求28的方法，其中結構式I化合物為2-[[4-[(4-甲基-1-哌嗪基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-6-乙基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶-3-甲醯胺。
33.權利要求21的方法，其中細胞粘附或細胞遷移相關性疾病或病症選自炎症性病症、自身免疫性病症或疾病、血小板介導性病症、腫瘤轉移、病毒性疾病、動脈粥樣硬化、澱粉樣病和腎病。
34.權利要求33的方法，其中炎症性病症選自膿毒性休克、局部缺血後白細胞介導性組織損害、凍傷性損傷或休克、白細胞介導的急性肺損傷、急性胰腺炎、哮喘、外傷性休克、中風、創傷性腦損傷、腎炎、急性和慢性炎症、特應性皮炎、牛皮癬、眼色素層炎、視網膜炎以及炎症性腸病。
35.權利要求33的方法，其中自身免疫性疾病選自類風溼性關節炎和多發性硬化。
36.一種治療或預防GAG介導性疾病或病症的方法，該方法包括對需要這種治療或預防的患者給予治療有效量的權利要求3-14任一項的藥用組合物。
37.權利要求36的方法，其中GAG為HS-GAG。
38.權利要求36和37任一項的方法，其中所述疾病或病症選自澱粉樣病、病毒性疾病、細菌感染、腎病、癌症、腫瘤轉移和凝血障礙。
39.權利要求38的方法，其中所述疾病或病症選自阿爾茨海默氏病、II型糖尿病、C型肝炎、B型肝炎、流感、鼻病毒感染、巨細胞病毒感染、AIDS、呼吸道合胞病毒感染、瘧疾和白血病。
40.一種調控患者體內的糖胺聚糖抗凝血活性的方法，該方法包括給予治療有效量的權利要求3-14任一項的藥用組合物，從而調控糖胺聚糖的抗凝血活性。
41.權利要求40的方法，其中糖胺聚糖為肝素。
42.一種預防或治療炎症性腸病的方法，該方法包括對需要這種預防或治療的患者給予治療有效量的藥用組合物，所述組合物包含作為有效成分的下述結構的噻吩並[2，3-c]吡啶化合物2-[[4-[(二乙基氨基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-3-(苯並噻唑-2-基)-6-乙基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶，以及其藥物學上可接受的鹽；而且還包含藥物學上可接受的載體或稀釋劑。
43.一種預防或治療多發性硬化的方法，該方法包括對需要這種預防或治療的患者給予治療有效量的藥用組合物，所述組合物包含作為有效成分的下述結構的噻吩並[2，3-c]吡啶化合物2-[[4-[(二乙基氨基)磺醯基]苯甲醯基]氨基]-3-(苯並噻唑-2-基)-6-乙基-4，5，6，7-四氫噻吩並[2，3-c]吡啶，以及其藥物學上可接受的鹽；而且還包含藥物學上可接受的載體或稀釋劑。
全文摘要
本發明提供噻吩並[2，3－c]吡啶衍生物、包含噻吩並[2，3－c]吡啶衍生物的藥用組合物、以及它們的使用方法。所述化合物能夠抑制糖胺聚糖(GAG)與效應細胞粘附分子(ECAM)的相互作用，可用於治療GAG－ECAM相互作用介導性疾病和病症，尤其是炎症性和自身免疫性疾病、病毒性疾病、癌症和澱粉樣病。
文檔編號C07D495/04GK1771037SQ200480009369
公開日2006年5月10日 申請日期2004年2月5日 優先權日2003年2月5日
發明者P·格雷戈爾, N·哈裡斯, J·科佩, R·朱克 申請人:裡蒙尼克斯藥品有限公司