植物組織切片的製作方法、植物組織切片及其應用的製作方法

2023-05-13 00:01:11 5

植物組織切片的製作方法、植物組織切片及其應用的製作方法
【專利摘要】本發明是關於一種植物組織切片的製作方法、植物組織切片及其應用，屬於植物組織切片製作領域，所述方法包括：依次對植物組織樣品進行排氣、脫水、包埋、修塊、切片，得到植物組織切片，所述的脫水，包括：將熔融態的聚乙二醇溶解於超純水中，製成不同濃度的聚乙二醇溶液；按照所述聚乙二醇溶液濃度由低到高的順序，依次用所述的不同濃度的聚乙二醇溶液浸潤排氣後的植物組織樣品，最後用熔融的聚乙二醇浸潤所述的樣品，直至所述的樣品呈現均一的透明狀，得脫水樣品；所述的包埋，包括：固定所述脫水樣品；用熔融態的聚乙二醇作為包埋劑包埋所述脫水樣品，得到聚乙二醇包埋的樣品塊。該方法簡化了製作工藝、無毒害且切片無需進行脫蠟等後續處理。
【專利說明】植物組織切片的製作方法、植物組織切片及其應用
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種植物組織切片的製作方法、植物組織切片及其應用，屬於植物組織切片製作領域，特別是涉及一種供光學顯微鏡觀察的植物組織切片的製作方法、該切片及其應用。
【背景技術】
[0002]植物組織切片是通過徒手切取或用切片機切取的動植物組織薄片。供光學顯微鏡觀察用的植物組織切片，其厚度一般為5-10微米，其通常採用石蠟包埋切片製作法製作。
[0003]石蠟包埋切片製作法，包括以下步驟:(I)採集、分割樣品；(2)殺死與固定:利用藥劑如F.A.A固定液等迅速把樣品細胞殺死，以保持樣品本來的狀態和結構；(3)脫水:用脫水劑如酒精等除去樣品組織中的水分；(4)透明:用透明劑如二甲苯、氯仿等將脫水劑從樣品中除去，使樣品透明；(5)浸蠟:用包埋劑石蠟逐漸除去樣品的透明劑；(6)包埋:將樣品放入包埋盒，用包埋劑石蠟包埋，然後將包埋盒放置低溫下冷卻，製成蠟塊；(7)修塊:將已製成的蠟塊切成小塊，每一小塊包含一塊樣品，然後按照所需的切面切小蠟塊，直至觀察到樣品切面；(8)切片:用燒紅的蠟鏟把小蠟塊底部牢固的粘接在載蠟器上，用切片機切出符合要求的切片備用。上述方法製得的切片，經脫蠟、染色、脫水透明和封片處理後即可製得供光學顯微鏡觀察的玻片標本。
[0004]發明人在實現本發明的過程中，發現現有技術至少存在以下問題:
[0005]上述方法製作切片時所用的透明劑二甲苯、氯仿等為致癌物，有損操作人員的身體健康；製得的切片必須經過脫蠟工藝，才能製成供光學顯微鏡觀察的玻片標本。

【發明內容】

[0006]為了解決現有技術的問題，本發明實施例提供了一種植物組織切片的製作方法、植物組織切片及其應用。所述技術方案如下:
[0007]—方面，提供了一種植物組織切片的製作方法，所述方法包括:依次對植物組織樣品進行排氣、脫水、包埋、修塊、切片，得到植物組織切片，所述的脫水，包括:將熔融態的聚乙二醇溶解於超純水中，製成不同濃度的聚乙二醇溶液；按照所述聚乙二醇溶液濃度由低到高的順序，依次用所述的不同濃度的聚乙二醇溶液浸潤排氣後的植物組織樣品，最後用熔融的聚乙二醇浸潤所述的樣品，直至所述的樣品呈現均一的透明狀，得脫水樣品；所述的包埋，包括:固定所述脫水樣品；用熔融態的聚乙二醇作為包埋劑包埋所述脫水樣品，得到聚乙二醇包埋的樣品塊。
[0008]較佳的，所述的脫水，包括:將熔融態的聚乙二醇溶解於超純水中，製成幾種不同濃度的聚乙二醇溶液，所述的幾種不同濃度的聚乙二醇溶液中，聚乙二醇的體積百分比濃度梯度為15-25% ;在絕對壓力為0.ΟΙ-lMPa、溫度為60_75°C的條件下，按照聚乙二醇濃度由低到高的順序，依次用所述的幾種不同濃度的聚乙二醇溶液浸潤所述樣品，最後，用熔融的聚乙二醇浸潤所述的樣品，直至所述樣品呈現均一的透明狀，得到脫水樣品。[0009]較佳的，所述包埋，包括:將包埋盒水平放置；將一託底緊靠所述包埋盒內壁放置；迅速沿所述託底與所述包埋盒接觸的位置注入少量熔融態的聚乙二醇；待所述聚乙二醇凝固後，繼續迅速加入熔融態的聚乙二醇直至其淹沒所述託底；將所述脫水樣品放入所述包埋盒使其緊靠所述託底；待聚乙二醇開始凝固，所述脫水樣品的位置固定後，繼續注入熔融態的聚乙二醇至其充滿所述包埋盒；將注滿聚乙二醇的包埋盒靜置，直至聚乙二醇完全凝固後，得到聚乙二醇包埋的樣品塊。
[0010]較佳的，所述脫水和所述包埋中所用的聚乙二醇的分子量為1500-2500。
[0011]教教的，所述脫水和所述包埋中所用的聚乙二醇的聚合度為2000，分子量為1800-2200，熔點為 49-53°C。
[0012]較佳的，所述植物組織樣品為0.3cmX0.3cmX0.5cm大小的細長條；所述切片包括:將所述樣品固定在切片機的載物臺上，調整所述切片機，使其刀片的傾斜角為30-40 °，緩慢切取，得植物組織切片。
[0013]較佳的，所述修塊，包括:破開所述包埋盒，去除多餘的聚乙二醇，使所述樣品及所述託底露出。
[0014]較佳的，所述排氣，包括:將所述樣品置於超純水中，常壓下煮沸，保持沸騰狀態20-45分鐘，然後迅速將所述樣品轉移至15-30°C的超純水中，常壓、室溫下浸泡30-60分鐘；至少重複進行上述步驟3-5次，得到排氣後的樣品，所述排氣後的樣品能自由沉入盛滿超純水的容器的底部。
[0015]用去離子水反覆衝洗所述切片，得到脫去包埋劑的切片。
[0016]另一方面，提供了一種由上述製作方法製成的植物組織切片。
[0017]又一方面，提供了一種由上述植物組織切片製備供光學顯微鏡觀察的玻片標本的方法，所述方法包括:脫去切片的包埋劑、將脫去包埋劑的切片製成供光學顯微鏡觀察的玻片標本；所述脫去切片的包埋劑，具體為:用去離子水反覆衝洗所述切片，得到脫去包埋劑的切片。
[0018]本發明實施例提供的技術方案帶來的有益效果是:
[0019]本發明提供的製作方法採用包埋劑作為脫水劑，在脫水過程中同時實現包埋劑的浸潰，並且，無需進行透明處理即可進行包埋，既簡化了切片的製作工藝又避免了使用透明劑對操作人員的危害；由此方法製成的切片經去離子水衝洗後即可用於製備供光學顯微鏡觀察的玻片標本，無需進行脫蠟等後續處理，工藝簡單。
[0020]上述說明僅是本發明技術方案的概述，為了能夠更清楚了解本發明的技術手段，並可依照說明書的內容予以實施，以下以本發明的較佳實施例並配合附圖詳細說明如後。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0021]圖1為由實施例1提供的切片製成的玻片標本在63X倍普通光學顯微鏡(Exposure: 200ms;Gain: 1.0; Saturation: 1.5;Gamma:0.87.)下觀察到的細胞結構圖；
[0022]圖2為由對比例I提供的切片製成的玻片標本在63X倍普通光學顯微鏡(Exposure: 200ms;Gain: 1.0; Saturation: 1.5;Gamma:0.87.)下觀察到的細胞結構圖；
[0023]圖3為由實施例1提供的切片製成的玻片標本在63X倍普通光學顯微鏡(Exposure: 200ms;Gain: 1.0; Saturation: 1.5;Gamma:0.87)下觀察到的細胞結構圖；[0024]圖4為由對比例I提供的切片製成的玻片標本在63X倍普通光學顯微鏡(Exposure: 200ms;Gain: 1.0; Saturation: 1.5;Gamma:0.87)下觀察到的細胞結構圖；
[0025]圖5為由實施例2提供的切片製成的玻片標本在63X倍普通光學顯微鏡(Exposure: 200ms;Gain: 1.0; Saturation: 1.5;Gamma:0.87)下觀察到的細胞結構圖；
[0026]圖6為由對比例2提供的切片製成的玻片標本在63X倍普通光學顯微鏡(Exposure: 200ms;Gain: 1.0; Saturation: 1.5;Gamma:0.87)下觀察到的細胞結構圖；
【具體實施方式】
[0027]下面結合具體實施例及附圖對本發明作進一步說明，但不作為對本發明的限定。
[0028]實施例1
[0029]本實施例提供了一種植物組織切片的製作方法，所述方法包括以下步驟:
[0030]步驟(I):獲取植物組織樣品；
[0031]根據所得切片的用途需要，獲取適量植物組織樣品，本實施例中，所述植物組織樣品為闊葉木楊木的木莖，在體視顯微鏡下將闊葉木楊木的木莖修整成
0.3cmX0.3cmX0.5cm大小、表面平整的細長條，所述細長條即為闊葉木楊木的木莖組織樣品;
[0032]步驟(2):用超純水排出所述樣品中的氣體，得到排氣後的樣品；
[0033]該步驟中可採用常用的樣品排氣方法，排出所述樣品中的氣體，本實施例中排氣方法具體包括:
[0034]2a、將所述樣品置於超純水中，常壓下煮沸，保持沸騰狀態20-45分鐘，然後迅速將所述樣品轉移至20°C的超純水中，常壓、室溫下浸泡30-60分鐘；
[0035]2b、反覆進行步驟2a，直至所述樣品能自由沉入盛滿超純水的容器的底部，若所述樣品在進行步驟2a前已經能夠自由沉入盛滿超純水的容器的底部，則重複進行步驟2a3_5次，得到排氣後的樣品。
[0036]在所述樣品能夠自由沉入盛滿超純水的容器的底部後仍然重複進行步驟2a3_5次，能夠確保所述樣品中的氣體能夠被儘可能的排空，以便於後續包埋時包埋劑能夠完全填充在所述樣品的孔隙內，保證所述樣品組織硬度均勻，從而確保所得切片中的細胞保持良好的形態。
[0037]步驟(3):用聚乙二醇作為脫水劑為所述排氣後的樣品脫水，脫水步驟包括:
[0038]將熔融態的聚乙二醇溶解於溫度不低於其熔融溫度的超純水中，製成不同濃度的聚乙二醇溶液；
[0039]按照所述聚乙二醇溶液濃度由低到高的順序，依次用所述的不同濃度的聚乙二醇溶液浸潤排氣後的植物組織樣品；
[0040]最後用熔融的聚乙二醇浸潤所述的樣品，直至所述的樣品呈現均一的透明狀，得脫水樣品；
[0041]本實施例所用聚乙二醇的分子量為1500-2500，優選聚乙二醇的聚合度為2000，分子量為1800-2200，熔點為49-53°C (該聚乙二醇購買自北京東方試劑公司)，操作步驟如下:
[0042]3a、在65°C下預熔聚乙二醇；[0043]3b、將熔融態的聚乙二醇溶解於65°C的超純水中，製成4種不同濃度的聚乙二醇溶液，所述溶液中聚乙二醇的體積百分比濃度分別為20%、50%、70%、90% ；
[0044]3c、在絕對壓力為0.08MPa、溫度為65°C的條件下，用20%的聚乙二醇溶液浸潤所述排氣後的樣品0.5-lh ；
[0045]接著，在絕對壓力為0.06MPa、溫度為65 °C的條件下，用50%的聚乙二醇溶液在65°C下浸潤所述排氣後的樣品1-1.5h ；
[0046]然後，在絕對壓力為0.04MPa、溫度為65°C的條件下，用70%的聚乙二醇溶液在65°C下浸潤所述排氣後的樣品l_2h ；
[0047]之後，在絕對壓力為0.02MPa、溫度為65°C的條件下，用90%的聚乙二醇溶液在65°C下浸潤所述排氣後的樣品l_2h ；
[0048]最後，在絕對壓力為0.0lMPa、溫度為65°C的條件下，用聚乙二醇浸潤5_10h，直至所述排氣後的樣品呈現均一的透明狀，得到脫水樣品。
[0049]預熔溫度過高不僅升溫時間長而且浪費能源，預熔溫度過短無法保證聚乙二醇溶解在同溫度下的超純水中，該溫度下預熔聚乙二醇既能保證聚乙二醇的完全溶解在同溫度下的超純水中又能最大限度的縮短升溫時間、節約能源；聚乙二醇溶液的濃度梯度設計的不合理會導致樣品脫水所需時間過長甚至是脫水不完全，所述的幾種不同濃度的聚乙二醇溶液中，聚乙二醇的體積百分比濃度梯度為15-25%時，聚乙二醇的滲透能力較好，脫水效率高，脫水耗時較短，在該濃度梯度範圍內優選本實施例的濃度梯度，在該濃度梯度下的聚乙二醇溶液能夠保證快速、完全的脫去樣品中的水，以保證樣品組織硬度的均一；在加壓條件下浸潤，能夠提高浸潤效率，進一步縮短脫水時間，但壓強過大易對植物細胞造成不同程度的損壞，絕對壓力為0.0l-1MPa時，既能縮短脫水時間又能夠保證植物細胞完好；脫水時，較佳溫度範圍為60-75 °C，當溫度過低時，聚乙二醇為固態，當溫度過高時，容易導致植物細胞內組分發生反應而變質，不利於獲得植物細胞的組分信息。
[0050]步驟(4):用聚乙二醇作為包埋劑包埋所述脫水樣品，得到聚乙二醇包埋的樣品塊；
[0051]本實施例所用聚乙二醇的分子量為1500-2500，優選聚乙二醇的聚合度為2000，分子量為1800-2200，熔點為49-53°C，(該聚乙二醇購買自北京東方試劑公司)，操作步驟如下:
[0052]常壓室溫下，將包埋盒放置在水平桌面上，本實施例中，所述包埋盒選用普通聚碳酸酯材料製成的包埋盒，其外部尺寸為2.5cmX2.5cmX2.0cm，壁厚0.1cm ；
[0053]用鑷子將一託底緊靠所述包埋盒內壁放置，本實施例中所述託底為0.7cm X 0.7cm X 0.7cm的立方體木質託底；
[0054]迅速沿所述木質託底與所述包埋盒接觸的位置注入少量預熔好的聚乙二醇，以使所述木質託底與所述包埋盒固定；
[0055]待所述聚乙二醇凝固後，繼續迅速加入熔融態的聚乙二醇直至其淹沒所述木質託底；
[0056]用鑷子將上述脫水樣品放入所述包埋盒，用鑷子小心扶住樣品，使其時刻緊靠所述木質託底；
[0057]待聚乙二醇開始凝固，所述脫水樣品的位置固定後，即可抽出鑷子，繼續注入聚乙二醇至其充滿所述包埋盒，以防止凝固後的樣品塊中存在塌陷或者氣泡，加注過程要迅速以儘量減少氣泡的產生，若發現氣泡，則需重複該步驟，重新進行包埋；
[0058]在常壓室溫下，將注滿聚乙二醇的包埋盒靜置直至聚乙二醇完全凝固後，得到聚乙二醇包埋的樣品塊。為加快聚乙二醇的凝固速度，在其他實施例中可以將注滿聚乙二醇的包埋盒放置在4°C下冷藏。
[0059]聚乙二醇的分子量過大時，在步驟(3)中容易造成浸潤不充分；聚乙二醇的分子量過小時通常為液體不能進行包埋，聚乙二醇的分子量在1500-2500之間時能夠保證充分浸潤樣品，且其常溫下為固態，因而能對樣品進行包埋。
[0060]步驟(5):對所述樣品塊進行修塊，直至露出所述樣品；
[0061]破開所述包埋盒，用刀片去除多餘的聚乙二醇，使所述樣品及所述木質託底露出。
[0062]步驟(6):對所述樣品進行切片，得闊葉木楊木的木莖組織橫切面切片。
[0063]修塊後，將所述木質託底連同樣品一起固定在切片機的載物臺上，調整所述切片機，使刀片的傾斜角為30-40°，緩慢切取5 — ΙΟμπι的薄片，得闊葉木楊木的木莖組織橫切面切片。本實施例中，所述切片機型號為YD-1508R輪轉式切片機。
[0064]當所述樣品為0.3cmX0.3cmX0.5cm大小的細長條時,在該角度下切取的薄片，其細胞不易受損。
[0065]實施例2
[0066]本實施例提供了一種植物組織切片的製作方法，所述製作方法與實施例1相同，唯一不同的是，本實施例中植物組織樣品為禾本科芒草節間組織樣品，得到的是禾本科芒草節間組織橫切面切片。
[0067]實施例3
[0068]本實施例提供了一種用實施例1和2提供的植物組織切片製備供光學顯微鏡觀察的玻片標本的方法，所述方法包括:
[0069]將得到的切片放在載玻片上，用去離子水反覆衝洗所述切片，得到脫去包埋劑的切片，為保證將包埋劑完全衝洗乾淨，用40-60ml左右去離子水至少衝洗所述切片4-5次；
[0070]用擦鏡紙將脫去包埋劑的切片周圍多餘的水分吸除，然後在脫去包埋劑的切片四周滴入新的去離子水，將蓋玻片一側與所述載玻片接觸，然後緩慢的放下所述蓋玻片另一偵牝操作過程中保證無氣泡產生；
[0071]蓋玻片完全蓋上後，用樹脂膠將蓋玻片四周封死，得到供光學顯微鏡觀察的玻片標本。
[0072]對比例I
[0073]用傳統石蠟包埋切片製作法製作闊葉木楊木的木莖組織橫切面切片，具體操作步驟如下:
[0074]在體視顯微鏡下將闊葉木楊木的木莖修整成0.3cmX0.3cmX0.5cm大小、表面平整的細長條；
[0075]將所述細長條浸泡在甲醛固定劑中，室溫下放置24小時，其中所述甲醛固定劑由9體積PBS(pH7.4)和I體積甲醛混合而成，然後，倒掉甲醛固定劑，加人PBS(pH7.4)，每隔8小時更換一次，4°C保存，換液共3天；
[0076]依次用體積濃度為30%、50%、70%、80%、90%、95%的酒精溶液對所述細長條進行脫水，每個梯度的溶液脫水時間為30分鐘，然後用純酒精浸泡I小時；
[0077]用過渡浸泡液浸泡所述細長條30分鐘，其中所述過渡浸泡液由酒精和二甲苯按體積比為1:1的比例混合而成；
[0078]然後用二甲苯浸泡，時刻觀察至所述細長條變透明時取出；
[0079]在烘箱中，在62°C下預熔石蠟，將預熔的石蠟與二甲苯按體積比為1:1混合形成浸泡液，將所述細長條放入所述浸泡液中，浸泡30分鐘，然後用純石蠟浸泡兩次，每次2小時；
[0080]在包埋盒中注入石蠟打底，然後放入所述細長條，澆上石蠟包埋成樣品塊，將所述樣品塊放入4°C冰箱或水中冷凝，標明細長條放入方向，4°C存放備用；
[0081]修塊；
[0082]將進行修塊後的所述樣品塊固定在木塊上，壓實；
[0083]將固定有所述樣品塊的木塊固定在切片機的載物臺上，調整所述切片機，使刀片的傾斜角為30-40°，緩慢切取5 - ΙΟμπι的薄片，得闊葉木楊木的木莖組織橫切面切片。本實施例中，所述切片機型號為LEICA SM2010R平推式切片機。
[0084]對比例2
[0085]用傳統石蠟包埋切片製作法製作禾本科芒草節間組織橫切面切片，具體操作步驟與對比例I相同。
[0086]對比例3
[0087]本實施例提供了一種用對比例I和2提供的植物組織切片製備供光學顯微鏡觀察的玻片標本的方法，所述方法包括:
[0088]將得到的切片光面朝上平展於平板上；
[0089]託起所述平板將所述切片的光面朝下，放於水面上，水溫40°C，使所述切片在水平上伸展；
[0090]用鑷子將伸展後的所述切片放置在脫蠟溶劑中浸泡至石蠟完全溶解，其中所述脫蠟溶劑由丙酮和3-氨丙基-3-乙氧基甲矽烷按體積比為50:1配製而成；
[0091]然後，將所述切片貼在預先處理好的載玻片上，在40°C下烘烤過夜，除去所述脫蠟溶劑備用，其中，載玻片的預處理方法如下:將載玻片洗淨，放入所述脫蠟溶劑中浸泡10?30s，取出後再放入純丙酮中10?20s，取出晾乾備用；
[0092]將蓋玻片一側與烘烤後的所述載玻片接觸，然後緩慢的放下所述蓋玻片另一側，操作過程中保證無氣泡產生；
[0093]蓋玻片完全蓋上後，用樹脂膠將蓋玻片四周封死，得到供光學顯微鏡觀察的玻片標本。
[0094]將實施例3和對比例3提供的4個玻片標本放至在普通光學顯微鏡下進行觀察，細胞結構分別如圖1-6所示。
[0095]參見圖1和圖2，對比例I採用傳統石蠟包埋切片製作法獲得的切片中凝膠層(GL, gelatinous layer)沿切片方向從次生壁中上發生了剝離,而用本發明提供的方法獲得的切片中凝膠層與次生壁緊密相連，並且在切片過程中保持了原有的存在狀態；
[0096]參見圖2和圖3，對比例I採用傳統石蠟包埋切片製作法獲得的切片中，導管細胞壁(V，vessel)在切片過程中發生了破裂，而用本發明提供的方法獲得的切片中導管細胞壁較為完整的存在；
[0097]參見圖5和圖6，對比例I採用傳統石蠟包埋切片製作法獲得的切片中，，芒草節間組織中初生木質素導管(Pxv, Protoxylem vessel),次生木質素導管(Mxv, Metaxylemvessel),厚壁纖維細胞(Sf, sclerenchyma fiber)的細胞壁在切片過程中發生了明顯的破裂，而用本發明提供的方法獲得的這些細胞的細胞壁較為完整的保存。
[0098]以上所述，僅是本發明的較佳實施例而已，並非對本發明作任何形式上的限制，雖然本發明已以較佳實施例揭露如上，然而並非用以限定本發明。任何熟悉本專業的技術人員，在不脫離本發明技術方案範圍內，當可利用上述揭示的技術內容作出些許更動或修飾為等同變化的等效實施例，但凡是未脫離本發明技術方案的內容，依據本發明的技術實質對以上實施例所作的任何簡單修改、等同變化與修飾，均仍屬於本發明技術方案的範圍內。
【權利要求】
1.一種植物組織切片的製作方法，所述方法包括:依次對植物組織樣品進行排氣、脫水、包埋、修塊、切片，得到植物組織切片，其特徵在於: 所述的脫水，包括: 將熔融態的聚乙二醇溶解於超純水中，製成不同濃度的聚乙二醇溶液； 按照所述聚乙二醇溶液濃度由低到高的順序，依次用所述的不同濃度的聚乙二醇溶液浸潤排氣後的植物組織樣品，最後用熔融的聚乙二醇浸潤所述的樣品，直至所述的樣品呈現均一的透明狀，得脫水樣品； 所述的包埋，包括: 固定所述脫水樣品； 用熔融態的聚乙二醇作為包埋劑包埋所述脫水樣品，得到聚乙二醇包埋的樣品塊。
2.根據權利要求1所述植物組織切片的製作方法，其特徵在於，所述的脫水，包括: 將熔融態的聚乙二醇溶解於超純水中，製成幾種不同濃度的聚乙二醇溶液，所述的幾種不同濃度的聚乙二醇溶液中，聚乙二醇的體積百分比濃度梯度為15-25% ； 在絕對壓力為0.ΟΙ-lMPa、溫度為60-75°C的條件下，按照聚乙二醇濃度由低到高的順序，依次用所述的幾種不同濃度的聚乙二醇溶液浸潤所述樣品，最後，用熔融的聚乙二醇浸潤所述的樣品，直至所述樣品呈現均一的透明狀，得到脫水樣品。
3.根據權利要求1或2所述植物組織切片的製作方法，其特徵在於，所述包埋，包括: 將包埋盒水平放置； 將一託底緊靠所述包埋盒內壁放置； 迅速沿所述託底與所述包埋盒接觸的位置注入少量熔融態的聚乙二醇； 待所述聚乙二醇凝固後，繼續迅速加入熔融態的聚乙二醇直至其淹沒所述託底； 將所述脫水樣品放入所述包埋盒使其緊靠所述託底； 待聚乙二醇開始凝固，所述脫水樣品的位置固定後，繼續注入熔融態的聚乙二醇至其充滿所述包埋盒； 將注滿聚乙二醇的包埋盒靜置，直至聚乙二醇完全凝固後，得到聚乙二醇包埋的樣品塊。
4.根據權利要求1-3任一項所述植物組織切片的製作方法，其特徵在於，所述脫水和所述包埋中所用的聚乙二醇的分子量為1500-2500。
5.根據權利要求4所述植物組織切片的製作方法，其特徵在於，所述脫水和所述包埋中所用的聚乙二醇的聚合度為2000，分子量為1800-2200，熔點為49_53°C。
6.根據權利要求1-3任一項所述植物組織切片的製作方法，其特徵在於: 所述植物組織樣品為0.3cmX0.3cmX0.5cm大小的細長條； 所述切片包括:將所述樣品固定在切片機的載物臺上，調整所述切片機，使其刀片的傾斜角為30-40 °，緩慢切取，得植物組織切片。
7.根據權利要求3所述植物組織切片的製作方法，其特徵在於: 所述修塊，包括:破開所述包埋盒，去除多餘的聚乙二醇，使所述樣品及所述託底露出。
8.根據權利要求1-7任一項所述植物組織切片的製作方法，其特徵在於:所述排氣，包括: 將所述樣品置於超純水中，常壓下煮沸，保持沸騰狀態20-45分鐘，然後迅速將所述樣品轉移至15-30°C的超純水中，常壓、室溫下浸泡30-60分鐘； 至少重複進行上述步驟3-5次，得到排氣後的樣品，所述排氣後的樣品能自由沉入盛滿超純水的容器的底部。
9.由權利要求1-8任一項所述的製作方法製成的植物組織切片。
10.由權利要求9所述的植物組織切片製備供光學顯微鏡觀察的玻片標本的方法，所述方法包括:脫去切片的包埋劑，將脫去包埋劑的切片製成供光學顯微鏡觀察的玻片標本，其特徵在於，所述脫去切片的包埋劑，具體為: 用去離子水反覆衝洗所述切片，得到脫去包埋劑的切片。
【文檔編號】G01N1/28GK103512784SQ201310430671
【公開日】2014年1月15日 申請日期:2013年9月18日 優先權日:2013年9月18日
【發明者】許鳳, 馬建鋒, 張遜 申請人:北京林業大學