子宮頸上皮內瘤變模型及模型建立方法
2023-05-07 13:15:31 1
專利名稱：子宮頸上皮內瘤變模型及模型建立方法
技術領域：
本發明涉及子宮頸上皮內瘤變模型及模型建立方法。
背景技術：
子宮頸癌是人體最常見的腫瘤之一，不但在女性生殖系統腫瘤中佔首位，而且是女性各 種惡性腫瘤中最多見的腫瘤。我國宮頸癌死亡率佔總癌症死亡率的第四位，佔女性癌的第二 位。子宮頸上皮內瘤變(cervical intra印ithelial neoplasia, CIN)是與子宮頸浸潤癌相 關的一組癌前病變，能反映子宮頸癌發生發展中的連續過程。CIN的病理特點是局限於子宮 頸鱗狀上皮層的瘤變，包括細胞排列異常及核異常。按其程度不同可分為非典型增生CINI 級、CINII級及C頂m級，分別為輕度、中度和重度(包括原位癌)。隨著CIN病變程度加重， 細胞DNA非整倍體和中心體複製增加。隨著分子生物學發展和臨床研究的深入，發現CIN並 非是簡單的病理生理學發展過程，而是具有兩種不同的生物學行為。其一是由病毒引起的病 變，常自然消退，很少發展為浸潤癌；另一種是多因素(包括病毒)誘發的病變，具有癌變潛 能，可能發展為浸潤癌。免疫缺陷小鼠，可以克服異種間的免疫排斥反應，接受人類正常和腫瘤組織移植，移植 後的組織仍保持原有的組織形態及生化特徵，更接近人類疾病的病理變化。子宮頸上皮內瘤變CINI 、 CINII、 CINIII三個病理級別反應著子宮頸癌發生發展的連續 過程，這一過程是可以被阻斷的，關鍵在於及時診斷和處理，顯然，建立相應的動物模型將 有利於探討子宮頸上皮內瘤變向子宮頸癌轉化的機制。但是，迄今為止，沒有建立相關動物 模型的報導。發明內容本發明是為避免上述現有技術所存在的問題，提供一種子宮頸上皮內瘤變模型，並提供 該模型的建模方法，為研究子宮頸癌的發病機制，逆轉子宮頸上皮內瘤變向子宮頸癌轉化提 供了新的研究策略。本發明解決技術問題所採用的技術方案是本發明子宮頸上皮內瘤變模型的特點是將子宮頸上皮內瘤變組織，埋植到免疫缺陷小鼠 體內建立子宮頸上皮內瘤變模型。本發明子宮頸上皮內瘤變模型的特點也在於所述子宮頸上皮內瘤變組織包括CIN I 、 CINII和CINIII三個病理級別組織。
所述免疫缺陷小鼠包括N0D-SCID鼠和裸鼠。子宮頸上皮內瘤變模型建立方法的特點是按如下歩驟操作a、 取材子宮頸上皮內瘤變組織取自陰道鏡下活檢並經病理確診的組織，所取組織置 入培養液無菌瓶，隨即置於冰盒；並送入動物房接種；b、 取免疫缺陷小鼠，6-8周齡，性成熟，雌性；C、接種前處理所取組織用2 — 8'C磷酸緩衝鹽溶液洗去血塊和黏液，於無菌培養皿內 剪成小塊，分裝在盛有培養液的無菌管內為備用標本；d、種植腹腔注射麻醉小鼠，待小鼠麻醉後固定於操作板上，消毒備皮，並做小口， 將已備標本種植於皮下，無菌絲線縫合即成。本發明子宮頸上皮內瘤變模型模型建立方法的特點也在於在所述步驟a中，子宮頸上皮內瘤變組織包括CINI 、 CINII、 CINIII三個病理級別的組織。所述步驟b的培養液中含有100U / ml青黴素和100 U / ml鏈黴素。 子宮頸上皮內瘤變分為三級CINI級即輕度不典型增生。上皮下1/3層細胞核增大， 核質比例略增大，核染色稍加深，核分裂相少，細胞極性保存。CINII級即重度不典型增生。 上皮下1/3 2/3層細胞核明顯增大，核質比例增大，核深染，核分裂相較多，細胞數量明 顯增多，細胞極性尚存。CINIII級即重度不典型增生和原位癌。病變細胞幾乎或全部佔據上 皮全層，細胞核異常增大，核質比例顯著增大，核型不規則，染色較深，核分裂相增多，細 胞擁擠，排列紊亂，無極性。與已有技術相比，本發明有益效果體現在1、 本發明中三種病理級別的子宮頸上皮內瘤變組織是來源於陰道鏡活檢確診的組織， 組織來源豐富，穩定可靠。2、 免疫缺陷小鼠的機體免疫系統對子宮頸上皮內瘤變組織呈現免疫豁免狀態，由此導 致子宮頸上皮內瘤變組織容易異位種植，為造模提供了更好的理論依據。3、 可以通過對CINI、 CINII、 CINIII三種動物模型轉歸的研究，探討子宮頸癌癌變的 機制。4、 本發明模型可以分別用於觀察CIN I動物模型的病變組織轉化到CINII或者好轉的周 期，用於觀察CINII動物模型的病變組織轉化到CIN I或者CINIII的周期，以及用於觀察CIN m動物模型的小鼠的生存期和癌灶轉移周期，為逆轉CINI、 CINII病變組織的惡性轉化， 提供了可行的臨床動物實驗模型。免疫缺陷小鼠(如NOD-SCID、裸鼠等)可以克服異種間的免疫排斥反應，接受人類腫
瘤組織的移植，移植後的組織仍保持原有的組織形態及生化特徵，更接近人類疾病的病理變 化；此類小鼠遺傳背景明確，體內微生物可控制，模型性狀顯著且穩定，質量和規格可選擇，價格適中，來源豐富；本發明模型建立成功率高，模型性狀顯著且穩定，觀察周期短，實驗 結果具有較大的臨床參考意義。
圖1為CIN I級動物模型的子宮頸上皮內瘤變組織，光鏡下HE染色圖(X 200)。 圖2為CINII級動物模型的子宮頸上皮內瘤變組織，光鏡下HE染色圖(X 200)。 圖3為CINIII級動物模型的子宮頸上皮內瘤變組織，光鏡下HE染色圖(X 200)。 以下通過具體實施方式
，並結合附圖對本發明作進一步說明。
具體實施方式
本實施例中子宮頸上皮內瘤變模型是將子宮頸上皮內瘤變組織，包括CINI、 CINII、 CINIII，分別埋植到非肥胖性糖尿病嚴重聯合免疫缺陷N0D-SCID小鼠體內建立子宮頸上皮內 瘤變模型。模型的建立按如下步驟在常溫下進行操作 取材子宮頸上皮內瘤變(CINI、 CINII、 CINIII)組織分別取自陰道鏡下活檢並經病理確診 的組織，所取組織置入5毫升RPMI1640培養液無菌瓶，隨即置於冰盒；具體實施中，PMRI1640 培養液中可含有100U/ml青黴素和100 U/ml鏈黴素，用於預防小鼠感染。K動物取NOD-SCID， 6-8周齡，性成熟，雌性。2、 接種前處理所取蛻膜用磷酸緩衝鹽溶液洗去血塊和黏液，於無菌培養皿內剪成1 X 2毫米小塊， 分裝在盛有RPMI1640培養液的無菌管內為備用標本。3、 種植以氯胺酮100毫克/千克腹腔注射麻醉小鼠，待小鼠麻醉後固定於操作板上，將已備標 本種植於皮下。具體實施中，可以是對其背部進行消毒備皮，並在兩側各做一隻0. 5釐米長 小口，將己備標本種植於皮下，無菌絲線縫合即成，皮下種植更有利於觀察。分組16隻NOD-SCID鼠分4組。實驗鼠12隻A組為4隻小鼠，種植CIN I級病變組 織；B組為4隻小鼠，種植CINII級病變組織；C組4隻小鼠，種植CIW11級病變組織；D 組(對照組)4隻小鼠，為不作任何處理的空白對照。移植後處理分別在移植後8周、16周、32周、48周，取出背部皮下病灶，10%福爾
馬林固定，乙醇逐級脫水，常規石蠟包埋，做HE染色。 結果1、 NOD-SCID鼠存活及生長情況 16隻均存活，可以排除飼養條件引起的感染。2、 於8周從實驗鼠皮下取出移植物經HE染色，有11隻小鼠皮下兩側均見到子宮內膜 的腺體和間質，成功率為91. 67% 。3、 移植物病理第8周從小鼠背部皮下取出病灶，常規石蠟包埋，HE染色，病理結果發現A組中有3 只為CIN I級(圖1)，種植成功率為75%; B組均為CINII級(圖2)，成功率為100%; C 組分別為CINIII級(圖3)，成功率為100%。
權利要求
1、一種子宮頸上皮內瘤變模型，其特徵是將子宮頸上皮內瘤變組織，埋植到免疫缺陷小鼠體內建立子宮頸上皮內瘤變模型。
2、 根據權利要求1所述的子宮頸上皮內瘤變模型，其特徵是所述子宮頸上皮內瘤變組 織包括CIN I 、 CINII和CINIII三個病理級別組織。
3、 根據權利要求1所述的子宮頸上皮內瘤變模型，其特徵是所述免疫缺陷小鼠包括 N0D-SCID鼠和裸鼠。
4、 一種權利要求l所述模型的建立方法，其特徵是按如下步驟操作a、 取材子宮頸上皮內瘤變組織取自陰道鏡下活檢並經病理確診的組織，所取組織置 入培養液無菌瓶，隨即置於冰盒；並送入動物房接種；b、 取免疫缺陷小鼠，6-8周齡，性成熟，雌性；c、 接種前處理所取組織用2 — 8'C磷酸緩衝鹽溶液洗去血塊和黏液，於無菌培養皿內 剪成小塊，分裝在盛有培養液的無菌管內為備用標本；d、 種植腹腔注射麻醉小鼠，待小鼠麻醉後固定於操作板上，消毒備皮，並做小口， 將已備標本種植於皮下，無菌絲線縫合即成。
5、 根據權利要求4所述模型的建立方法，其特徵是在所述步驟a中，所述子宮頸上皮 內瘤變組織包括CINI、 CINII、 CINIII三個病理級別的組織。
6、 根據權利要求2所述模型的建立方法，其特徵是所述歩驟b的培養液中含有100U / ml青黴素和100 U / ml鏈黴素。
全文摘要
子宮頸上皮內瘤變模型及模型建立方法，其特徵是將子宮頸上皮內瘤變組織，埋植到免疫缺陷小鼠體內建立子宮頸上皮內瘤變模型。建模方法的特徵是子宮頸上皮內瘤變組織分別取自陰道鏡下活檢並經病理科確診的組織，接種在小鼠背部皮下；本發明免疫缺陷小鼠可以克服異種間的免疫排斥反應，接受人類腫瘤組織的移植，移植後的組織模型性狀顯著且穩定，觀察周期短，實驗結果的具有較大的臨床參考意義。可以通過對CIN I、CIN II、CIN III動物模型的轉歸，病理過程探討子宮頸癌癌變的機制。並且觀察動物模型的子宮頸上皮內瘤變組織轉歸的周期，為逆轉CIN I、CIN II病變組織的惡性轉化提供了可行的臨床動物實驗模型。
文檔編號A61B19/00GK101125102SQ20071013253
公開日2008年2月20日 申請日期2007年9月19日 優先權日2007年9月19日
發明者馮定慶, 斌 凌, 穎 周, 朱園園, 敏 李, 沈國棟, 趙衛東, 高宗俠 申請人:安徽省立醫院