生物組織低溫保護劑及製備、使用方法
2023-05-15 19:08:01 1
生物組織低溫保護劑及製備、使用方法
【專利摘要】生物組織低溫保護劑及製備、使用方法。生物新鮮組織離開活體或者原來的生存環境後，生物體的內源酶開始降解遺傳物質，其降解速度與內源酶含量及溫度有直接關係。一種生物組織低溫保護劑，其組成包括：(NH4)2SO4、NaCl、NaSO4、NaNO3、KBrO3、超純水，所述的(NH4)2SO4的重量份數為300-400，所述的NaCl的重量份數為2-3，所述的NaSO4的重量份數為18-25，所述的NaNO3的重量份數為0.2-0.3，所述的KBrO3的重量份數為0.1-0.2，所述的超純水的重量份數為1000。本發明用於新鮮生物標本的低溫保藏。
【專利說明】生物組織低溫保護劑及製備、使用方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及一種生物組織低溫保護劑及製備、使用方法。
【背景技術】
[0002] 生物新鮮組織離開活體或者原來的生存環境後，生物體的內源酶開始降解遺傳物 質，其降解速度與內源酶含量及溫度有直接關係。目前，傳統的生物技術是在液氮環境或超 低溫冰箱內對生物標本進行保藏。然而，低溫環境中生物組織中的分解酶仍然會對組織進 行溶解破壞作用，使細胞及遺傳物質不斷降解。
[0003] 生物標本的保藏是一項長久的工作，標本的保存有的需要幾十年甚至上百年。降 解的生物標本既不能滿足科學研究的需要也不能系統恢復生物的生存屬性。所以，生物遺 傳物質的保存是生物標本保藏的一項重要內容，只有生物的遺傳信息得以完整有效的保存 下來，才是對物種真正意義的保存。
[0004] 目前傳統的保藏生物標本遺傳信息的方法是進行低溫保藏，低溫保護劑對標本的 保藏至關重要。研製無毒無刺激性的生物組織低溫保護劑對生物標本遺傳信息的保藏有重 要作用。
【發明內容】
[0005] 本發明的目的是提供一種能夠長期保持新鮮組織不變質的生物組織低溫保護劑 及製備、使用方法。
[0006] 上述的目的通過以下的技術方案實現： 一種生物組織低溫保護劑，其組成包括：(NH4)2S04、NaCl、NaS0 4、NaN03、KBr03、超純水， 所述的（NH4)2S04的重量份數為300-400，所述的NaCl的重量份數為2-3，所述的NaS0 4 的重量份數為18-25 ,所述的NaN03的重量份數為0. 2-0. 3 ,所述的KBr03的重量份數為 0. 1-0. 2,所述的超純水的重量份數為1000。
[0007] 所述的生物組織低溫保護劑，所述的（NH4)2S0 4的重量份數為300，所述的NaCl 的重量份數為2,所述的NaS04的重量份數為18 ,所述的NaN03的重量份數為0. 2 ,所述的 KBr03的重量份數為0. 1。
[0008] 所述的（NH4)2S04的重量份數為400，所述的NaCl的重量份數為3，所述的NaS0 4 的重量份數為25 ,所述的NaN03的重量份數為0. 3 ,所述的KBr03的重量份數為0. 2。
[0009] 所述的（NH4) 2S04的重量份數為350，所述的NaCl的重量份數為2. 5，所述的NaS04 的重量份數為20,所述的NaN03的重量份數為0. 25 ,所述的KBr03的重量份數為0. 15。 [0010] 一種生物組織低溫保護劑的製備方法，採用超純水作為介質，第一步稱取 (NH4) 2S04的重量份數為300-400，加入600重量份數的超純水中；第二步稱取NaCL的重 量份數為2-3、NaS04的重量份數為18-25和NaN03的重量份數為2-3，依次加入300重量 份數的超純水中；第三步稱取KBr03的重量份數為0. 1-0. 2，再加入100重量份數的超純水 中；將上述三步所得的三種試劑各用玻璃棒攪拌lmin，超聲波超聲20min ;然後將第二步、 第三步兩種試劑依次緩慢加入第一步的試劑中，邊加邊用玻璃棒攪拌，最後用超聲波在超 聲lOmin，倒入棕色玻璃瓶中，用4°C冰箱保存備用。
[0011] 一種生物組織低溫保護劑的使用方法，第一步生物標本組織切塊，第二步將切好 的生物標本在室溫下用生物組織低溫保護劑浸泡，使溶液滲入細胞製成樣本，第三步將樣 本在溫度為4°C放置6小時，第四步將樣本移入-20°C或-86°C環境下進行長期保存。
[0012] 有益效果： 1.本發明可迅速滲入組織進行細胞和遺傳物質（DNA和RNA)的保護；保護液迅速的保 護作用確保了生物標本用作科學研究的基因表達分析結果的準確性；樣本能夠長期保護， 即使是多次反覆凍融，遺傳物質也不會降解；可對生物標本進行低溫有效長期保藏。
[0013] 2.本發明在低溫環境中對標本進行保護，在細胞水平與分子水平一同來對生物標 本進行保護，真正做到生物標本的有效保藏。
[0014] 3.本發明採用的措施是將生物組織進行野外採集後，用生物組織低溫保護劑處 理；有效控制生物體的各種分解酶的作用，同時還能夠不破壞組織細胞及生物遺傳物質的 結構和功能。
[0015] 4.本發明能夠與很多內源分解酶的有效生物基團（-SH或-0H等基團）發生反應， 從而破壞內源酶的活性中心，起到對生物組織遺傳物質的有效保護的作用。
[0016] 5.本發明是對生物新鮮組織保存方法的一次創新，使生物標本的低溫保存更為有 效。
[0017] 6.本發明在低溫環境下可對標本的細胞結構和遺傳物質（DNA和RNA)進行長期保 存，防止降解。
[0018] 7.本發明能夠同時與相應的標本處理試驗方法兼容，可以更為有效的對生物標本 進行相應的研究及後續操作；加入生物組織低溫保護劑的生物樣本可在_20°C或-80°C條 件下長期保存；經該產品保護的組織可用於所有關於分子生物學的後續實驗，包括目的基 因的克隆、RNA領域及DNA指紋技術等方面的研究。
[0019]
【具體實施方式】： 實施例1 : 一種生物組織低溫保護劑，其組成包括：(NH4)2S04、NaCl、NaS0 4、NaN03、KBr03、超純水， 所述的（NH4)2S04的重量份數為300-400，所述的NaCl的重量份數為2-3，所述的NaS0 4 的重量份數為18-25 ,所述的NaN03的重量份數為0. 2-0. 3 ,所述的KBr03的重量份數為 0. 1-0. 2,所述的超純水的重量份數為1000。
[0020] 實施例2 : 實施例1所述的生物組織低溫保護劑，所述的（NH4)2S04的重量份數為300，所述的 NaCl的重量份數為2,所述的NaS04的重量份數為18 ,所述的NaN03的重量份數為0. 2 ,所 述的KBr03的重量份數為0. 1。
[0021] 實施例3: 實施例1所述的生物組織低溫保護劑，所述的（NH4)2S04的重量份數為400，所述的 NaCl的重量份數為3 ,所述的NaS04的重量份數為25 ,所述的NaN03的重量份數為0. 3 ,所 述的KBr03的重量份數為0. 2。
[0022] 實施例4 : 實施例1所述的生物組織低溫保護劑，所述的（NH4)2S04的重量份數為350，所述的 NaCl的重量份數為2. 5 ,所述的NaS04的重量份數為20,所述的NaN03的重量份數為0. 25 , 所述的KBr03的重量份數為0. 15。
[0023] 實施例5 : 一種生物組織低溫保護劑的製備方法，採用超純水作為介質，第一步稱取（NH4)2S04的 重量份數為300-400，加入600重量份數的超純水中；第二步稱取NaCL的重量份數為2-3 、NaS04的重量份數為18-25和NaN03的重量份數為2-3，依次加入300重量份數的超純水 中；第三步稱取KBr03的重量份數為0. 1-0. 2，再加入100重量份數的超純水中；將上述三 步所得的三種試劑各用玻璃棒攪拌lmin，超聲波超聲20min ;然後將第二步、第三步兩種試 劑依次緩慢加入第一步的試劑中，邊加邊用玻璃棒攪拌，最後用超聲波在超聲l〇min，倒入 棕色玻璃瓶中，用4°C冰箱保存備用。
[0024] 實施例6 : 一種生物組織低溫保護劑的使用方法，第一步生物標本組織切塊，第二步將切好的生 物標本在室溫下用生物組織低溫保護劑浸泡，使溶液滲入細胞製成樣本，第三步將樣本在 溫度為4°C放置6小時，第四步將樣本移入-20°C環境下進行長期保存。
[0025] 實施例7 : 實施例6所述的生物組織低溫保護劑的使用方法，切好的生物標本組織塊(各維尺寸 均小於0. 5cm)只需簡單地在室溫下浸入約5倍體積的生物組織低溫保護劑(例如，0. 5的樣 本需要約2. 5低溫保護試劑）中。溶液滲入細胞，穩定生物組織。然後樣本在4°C放置6小 時(生物組織浸入保護劑液面下)，然後將組織移入-20°C (組織不會凍結)或_86°C環境下。 這樣生物組織可以長期保存，如果進行實驗室操作，可當作剛獲得的樣本進行處理即可。大 多數組織可直接轉入裂解緩衝液進行勻漿化，先後經過低溫保護劑處理和冷凍的樣本，可 使用研缽進行研磨，或者解凍後像新鮮組織一樣處理，因為各種生物分解酶已被滅活，所以 不用擔心細胞破裂和分解酶的釋放。
[0026] 實施例8 : 實施例1所述的生物組織低溫保護劑，所述的（NH4) 2S04的重量份數為370,所述的NaCl 的重量份數為2 ,所述的NaS04的重量份數為22,所述的NaN03的重量份數為0. 2 ,所述的 KBr03的重量份數為0. 1。
[0027] 實施例9 : 實施例1所述的生物組織低溫保護劑，所述的（NH4)2S04的重量份數為330，所述的 NaCl的重量份數為3 ,所述的NaS04的重量份數為20 ,所述的NaN03的重量份數為0. 3 ,所 述的KBr03的重量份數為0. 2。
[0028] 實施例10 : 實施例6所述的生物組織低溫保護劑的使用方法，第一步生物標本組織切塊，第二步 將切好的生物標本在室溫下用生物組織低溫保護劑浸泡，使溶液滲入細胞製成樣本，第三 步將樣本在溫度為4°C放置6小時，第四步將樣本移入-86°C環境下進行長期保存。
[0029] 實施例11 : 實施例5所述的生物組織低溫保護劑的製備方法，採用超純水作為介質，第一步稱取 (NH4)2S04的重量份數為300，加入600重量份數的超純水中；第二步稱取NaCL的重量份數
【權利要求】
1. 一種生物組織低溫保護劑，其組成包括：(NH4)2S0 4、NaCl、NaS04、NaN03、KBr03、超純 水，其特徵是：所述的（NH 4)2S04的重量份數為300-400，所述的NaCl的重量份數為2-3， 所述的NaS04的重量份數為18-25，所述的NaN0 3的重量份數為0. 2-0. 3，所述的KBr03的 重量份數為〇. 1-0. 2 ,所述的超純水的重量份數為1000。
2. 根據權利要求1所述的生物組織低溫保護劑，其特徵是：所述的（冊14)2304的重量份 數為300，所述的NaCl的重量份數為2,所述的NaS0 4的重量份數為18，所述的NaN03的重 量份數為0. 2 ,所述的KBr03的重量份數為0. 1。
3. 根據權利要求1所述的生物組織低溫保護劑，其特徵是：所述的（冊14)2304的重量份 數為400，所述的NaCl的重量份數為3，所述的NaS0 4的重量份數為25，所述的NaN03的重 量份數為0. 3 ,所述的KBr03的重量份數為0. 2。
4. 根據權利要求1所述的生物組織低溫保護劑，其特徵是：所述的（冊14)2304的重量份 數為350，所述的NaCl的重量份數為2. 5，所述的NaS04的重量份數為20,所述的NaN03的 重量份數為〇. 25 ,所述的KBr03的重量份數為0. 15。
5. -種生物組織低溫保護劑的製備方法，其特徵是：採用超純水作為介質，第一步稱 取（NH4)2S04的重量份數為300-400，加入600重量份數的超純水中；第二步稱取NaCL的 重量份數為2-3、NaS04的重量份數為18-25和NaN03的重量份數為2-3，依次加入300重 量份數的超純水中；第三步稱取KBr03的重量份數為0. 1-0. 2，再加入100重量份數的超純 水中；將上述三步所得的三種試劑各用玻璃棒攪拌lmin，超聲波超聲20min ;然後將第二 步、第三步兩種試劑依次緩慢加入第一步的試劑中，邊加邊用玻璃棒攪拌，最後用超聲波在 超聲lOmin，倒入棕色玻璃瓶中，用4°C冰箱保存備用。
6. -種生物組織低溫保護劑的使用方法，其特徵是：第一步生物標本組織切塊，第二 步將切好的生物標本在室溫下用生物組織低溫保護劑浸泡，使溶液滲入細胞製成樣本，第 三步將樣本在溫度為4°C放置6小時，第四步將樣本移入-20°C或_86°C環境下進行長期保 存。
【文檔編號】A01N1/00GK104054695SQ201410316055
【公開日】2014年9月24日 申請日期:2014年7月4日 優先權日:2014年7月4日
【發明者】覃東立, 張昌盛, 李林海, 王俊傑, 張曉萌, 鍾震宇, 王玉濤 申請人:中國水產科學研究院黑龍江水產研究所