一種複合蛋白沉澱劑的製作方法
2023-05-16 17:12:26 1
專利名稱：一種複合蛋白沉澱劑的製作方法
技術領域：
本發明涉及一種蛋白沉澱劑。
背景技術：
現有的有機溶劑蛋白沉澱劑、酸性或鹼性蛋白沉澱劑與重金屬蛋白沉澱劑多為單一組分，蛋白沉澱率低，提取分離效果差。雖然，10％的三氯醋酸與6％的高氯酸有較高的蛋白沉澱率，與樣本等體積的情況下蛋白沉澱率達98.5％～99.5％，但存在酸性過強，對色譜柱損害大，成本高的問題；而採用液-液萃取法進行生物樣本中的藥物提取，耗時長、操作繁瑣、樣本中藥物成分損耗大，極大的影響了體內藥物分析的效率與準確性，不能滿足快速、準確提供實驗數據的需要。
發明內容
本發明的目的是為了解決現有單一組分蛋白沉澱劑蛋白沉澱率低、提取分離效果差，10％的三氯醋酸與6％的高氯酸酸性過強對色譜柱損害大、成本高以及採用液-液萃取法提取生物樣本中藥物耗時長、操作繁瑣、樣本損耗大的缺陷，從而提供了一種複合蛋白沉澱劑。複合蛋白沉澱劑按重量份數比由1～1.5份濃度為分析純的5-磺基水楊酸、75～85份濃度為分析純的甲醇和15～25份蒸餾水製成。本發明複合蛋白沉澱劑配製簡單，組分少，蛋白沉澱率高，達99％以上。本發明複合蛋白沉澱劑pH呈弱酸性，對色譜柱損害小(樣本PH＜2.5對色譜柱損害大)，成本低。使用本發明的複合蛋白沉澱劑，蛋白沉澱與生物樣本中的藥物提取分離一步完成，操作簡單，用時少，樣本中藥物成分損耗少，藥物提取回收率達70％以上，大大提高了體內藥物分析的效率與準確性，能夠滿足藥物研究的需要。
圖1是經濃度為6％的高氯酸處理的空白血漿色譜圖，圖2是經複合蛋白沉澱劑處理的空白血漿色譜圖。
具體實施例方式
具體實施方式
一本實施方式為複合蛋白沉澱劑按重量份數比由1～1.5份濃度為分析純的5-磺基水楊酸、75～85份濃度為分析純的甲醇和15～25份蒸餾水製成。
本實施方式將濃度為分析純的5-磺基水楊酸、濃度為分析純的甲醇和蒸餾水按重量份數比混合、溶解後即可使用。
本實施方式複合蛋白沉澱劑應用於鹽酸塞利洛爾等心血管類藥物生物樣本的前處理，以便進行反相高效液相色譜分析。生物樣本(血漿)的處理步驟(一)按1∶1的體積比將生物樣本與本實施方式複合蛋白沉澱劑混合、振蕩；(二)離心，蛋白沉澱，取上清液進行液相色譜分析，分析生物樣本中的藥物成分。
生物樣本經本實施方式複合蛋白沉澱劑沉澱後高效液相色譜分析的精密度高於現有其它蛋白沉澱劑採用液-液萃取後高效液相色譜分析的精密度。對幾種蛋白沉澱劑進行比較，結果如表1所示。
表1
分別以濃度為6％的高氯酸和本實施方式複合蛋白沉澱劑為蛋白沉澱劑對空白血漿生物樣本進行沉澱，然後再進行液相色譜分析，檢測波長254nm，流動相甲醇∶H2O(65∶35，色譜柱C18柱，流速1mL/min，運行時間10min，進樣量20μL。色譜分析結果如圖1和圖2所示，血漿雜質峰均在開始後4.5分鐘內出現，其後無任何雜質峰幹擾，說明複合蛋白沉澱劑的應用有利於藥物樣品與雜質的分離測定。
具體實施方式
二本實施方式與具體實施方式
一的不同點是複合蛋白沉澱劑按重量份數比由1.1～1.4份濃度為分析純的5-磺基水楊酸、76～84份濃度為分析純的甲醇和16～24份蒸餾水製成。其它步驟與實施方式一相同。
具體實施方式
三本實施方式與具體實施方式
一的不同點是複合蛋白沉澱劑按重量份數比由1.2～1.3份濃度為分析純的5-磺基水楊酸、78～82份濃度為分析純的甲醇和18～22份蒸餾水製成。其它步驟與實施方式一相同。
具體實施方式
四本實施方式與具體實施方式
一的不同點是複合蛋白沉澱劑按重量份數比由1.2份濃度為分析純的5-磺基水楊酸、80份濃度為分析純的甲醇和20份蒸餾水製成。其它步驟與實施方式一相同。
權利要求
1.一種複合蛋白沉澱劑，其特徵在於複合蛋白沉澱劑按重量份數比由1～1.5份濃度為分析純的5-磺基水楊酸、75～85份濃度為分析純的甲醇和15～25份蒸餾水製成。
2.根據權利要求1所述的複合蛋白沉澱劑，其特徵在於複合蛋白沉澱劑按重量份數比由1.1～1.4份濃度為分析純的5-磺基水楊酸、76～84份濃度為分析純的甲醇和16～24份蒸餾水製成。
3.根據權利要求1所述的複合蛋白沉澱劑，其特徵在於複合蛋白沉澱劑按重量份數比由1.2～1.3份濃度為分析純的5-磺基水楊酸、78～82份濃度為分析純的甲醇和18～22份蒸餾水製成。
4.根據權利要求1所述的複合蛋白沉澱劑，其特徵在於複合蛋白沉澱劑按重量份數比由1.2份濃度為分析純的5-磺基水楊酸、80份濃度為分析純的甲醇和20份蒸餾水製成。
全文摘要
一種複合蛋白沉澱劑，它涉及一種蛋白沉澱劑。它解決了現有單一組分蛋白沉澱劑蛋白沉澱率低、提取分離效果差，10％的三氯醋酸與6％的高氯酸酸性過強對色譜柱損害大及採用液－液萃取法提取生物樣本中藥物耗時長、操作繁瑣、樣本損耗大的缺陷。複合蛋白沉澱劑按重量份數比由1～1.5份濃度為分析純的5－磺基水楊酸、75～85份濃度為分析純的甲醇和15～25份蒸餾水製成。所發明的複合蛋白沉澱劑的蛋白沉澱率達99％以上，pH呈弱酸性對色譜柱損害小。使用本發明的複合蛋白沉澱劑，蛋白沉澱與生物樣本中的藥物提取分離一步完成，操作簡單，用時少，樣本中藥物成分損耗少，藥物提取回收率達70％以上，大大提高了體內藥物分析的效率與準確性，能夠滿足藥物研究的需要。
文檔編號C07K1/00GK1908005SQ200610010399
公開日2007年2月7日 申請日期2006年8月11日 優先權日2006年8月11日
發明者杜智敏, 張波 申請人:哈爾濱醫科大學