一種米託蒽醌納米靶向緩釋長循環脂質體及製備方法

2023-05-19 01:24:01 1

專利名稱：一種米託蒽醌納米靶向緩釋長循環脂質體及製備方法
技術領域：
本發明涉及一種米託蒽醌納米靶向緩釋長循環脂質體及製備方法，屬於藥物技術
領域。
背景技術：
米託蒽醌(mitoxantrone)於1978年由Zee-Cheng和1979年由Murdock首次合 成，是第二代蒽環類抗腫瘤藥物，臨床上多用於治療白血病、乳腺癌、惡性淋巴瘤等。其作用 機制是插入細胞DNA中，抑制癌細胞核酸合成而發揮抗癌作用，但其有較嚴重的骨髓抑制 作用，且游離藥物進入血後大部分(95%以上)與血漿蛋白結合。但是其大量應用時常引起 嚴重的骨髓抑制和心肝肺的系統毒性，因而極大的限制了其臨床應用。
脂質體是目前降低藥物毒性常見的製劑手段之一，但是以傳統的卵磷脂、膽固醇 製備的常規脂質體在體內多被網狀內皮系統(reticuloendothelial system,RES)吞噬，在 血液循環中駐留時間較短。並且其物理化學穩定性差，儲存和應用過程中容易發生融合聚 集，包封藥物容易洩漏；官能團少，不易進行表面修飾，無靶向性、功能單一 ；基因轉染效率 仍顯著低於病毒載體等。近年來，開發新型脂質體的研究受到廣泛關注。

發明內容
本發明的目的在於提供一種具有靶向性能，具有良好的緩控釋功能，包封率高，穩 定性好，粒徑小，毒副作用小，緩釋時間可調的一種米託蒽醌納米靶向緩釋長循環脂質體及 製備方法。 具體技術方案如下 —種米託蒽醌納米靶向緩釋長循環脂質體，其粒徑在90 120nm之間，如圖2的 粒徑分析測試結果所示。其粒徑均勻，分散性好，很少發生熔合，團聚現象，如圖l透射圖片 所示。表面富含有葉酸。 本發明的一種米託蒽醌納米靶向緩釋長循環脂質體的製備方法，其原料質量份數 比配比為 聚乙二醇修飾的o-羧甲基殼聚糖十八烷基季銨鹽(PEG-0QCMC):葉酸修飾 的o-羧甲基殼聚糖十八烷基季銨鹽(FA-0QCMC) : o-羧甲基殼聚糖十八烷基季銨鹽
(oqcmc):米託蒽醌=1 : i 2 : 2 4 : o. 5 i ;o-羧甲基殼聚糖十八烷基季銨鹽
膽固醇的質量比為4 2 : i; 採用反相乳液法聚合時製備步驟如下 a.將聚乙二醇修飾的0-羧甲基殼聚糖十八烷基季銨鹽、葉酸修飾的0-羧甲基殼 聚糖十八烷基季銨鹽、米託蒽醌溶於蒸餾水中，形成水相，待用； b.將O-羧甲基殼聚糖十八烷基季銨鹽，膽固醇，溶於二氯甲烷中，形成油相；
c.將油相在110 200w功率範圍下進行超聲，加入水相，超聲形成水油均勻的分 散體系；
d.將上述乳液在32 4(TC下於旋轉蒸發儀上以45 55r/min的旋轉速度進行 旋蒸，同時向旋轉蒸發儀中通入氮氣流加以保護，當有機溶劑完全揮發後，繼續旋蒸30 50min，即得到產品。
採用薄膜分散法時製備步驟如下 a.將聚乙二醇修飾的0-羧甲基殼聚糖十八烷基季銨鹽、葉酸修飾的O-羧甲基殼 聚糖十八烷基季銨鹽、0-羧甲基殼聚糖十八烷基季銨鹽，膽固醇，溶於二氯甲烷中；
b.將上面所述的混合物置於反應器中，在32 4(TC下於旋轉蒸發儀上以45 55r/min的旋轉速度進行旋蒸，同時向旋轉蒸發儀中通入氮氣流加以保護；當反應器中的 有機溶劑完全揮發後，繼續旋蒸30 50min。 c.將米託蒽醌溶於蒸餾水中，之後將反應器取下，向反應器中加入米託蒽醌水溶 液，將脂質膜水化，然後用超聲波清洗器以70 99w的功率進行超聲分散，直至形成半透明 乳液，即得到高分子脂質體溶液。
本發明的有益效果 整個製備過程簡單快捷，製備周期短，產率高。所製備的米託蒽醌納米靶向緩釋 長循環脂質體的性能包括粒徑大小在90 120nm之間，粒徑均勻，且可以根據製劑的組 成成分，實驗條件等進行調節進行調節；穩定好，可在水溶液中保存至少2個月；包封率高， 載藥能力強，製備的高分子脂質體對藥物的包封率大於90%，載藥率載高達9. 0% ;緩釋性 能明顯，緩釋時間可調，製備的米託蒽醌製劑相對於傳統製劑而言具有明顯的緩釋效果，並 且緩釋時間可以根據製劑的組成成分，實驗條件等進行調節。具有穿過靶組織內皮細胞的 能力，可以被腫瘤細胞攝取進入細胞內，將所包含的米託蒽醌在細胞內釋放，大大提高藥物 的利用效率。在多種腫瘤細胞(如卵巢癌、乳腺癌、肺癌，結直腸癌等)膜表面的葉酸受體 活性和數量明顯高於一般正常細胞，而製備的米託蒽醌納米靶向緩釋長循環脂質體表面富 含有葉酸，利用葉酸與其受體的特異性結合的特點，可增加藥物在病灶局部的濃度，提高療 效，降低毒副作用，達到靶向治療的目的。通過表面PEG的修飾，可使高分子脂質體不易被 人體網狀內皮系統捕捉，延長在體內的循環時間，同時增加高分子脂質體的生物利用度和 生物相容性。 總之，與現有的米託蒽醌製劑相比，本發明涉及的米託蒽醌納米靶向緩釋長循環 脂質體具有粒徑均勻可控，製劑穩定性好，製備工藝簡單，載藥率高，具有緩釋功能等特點， 適合大批量生產。 本發明所提供的脂質體(反向乳液聚合方法)主要質量指標見下表
具體指標高分子脂質體傳統脂質體
粒徑90nm 120nm500nm
包封率> 90%< 90%
載藥率可達9. 0%< 8%
緩釋時間可達15d< 15d


圖1 :米託蒽醌納米靶向緩釋脂質體透射照片；
圖2 :米託蒽醌納米靶向緩釋脂質體粒度分析圖。
具體實施例方式以下通過實施例對本發明作進一步的闡述。 所述的0-羧甲基殼聚糖十八烷基季銨鹽(0QCMC)按照常津等提供的方法(申請 (專利)號200710056993. 4)進行製備。將十八烷基二甲基叔胺12g置四口瓶中，加入60ml 溶劑，劇烈攪拌，升溫至55攝氏度，緩慢滴加環氧氯丙烷5. 5g，保溫回流數小時，減壓蒸餾 除去未反應的環氧氯丙烷及溶劑，得淺黃色膏狀物二甲基環氧丙基十八烷基氯化銨。取水 溶性羧甲基殼聚糖(粘均分子量10萬，脫乙醯度80%)3.08溶於濃度為42% (w/v)的氫 氧化鈉溶液100mL中，攪拌均勻後，加入異丙醇50mL，緩慢分批加入二甲基環氧丙基十八烷 基氯化銨O. lmol，控制溫度在80攝氏度-85攝氏度，攪拌48h。鹽酸調pH = 7，無水丙酮洗 滌，真空烘乾得雙親性羧甲基殼聚糖十八烷基氯化銨。 所述的PEG-OQCMC，其製備過程中，各組分的含量為聚乙二醇PEG (2000Da) 5. Og 10. Og ;馬來酸酐4. 3 8. 6g ;N-羥基琥珀醯亞胺酯(NHS)O. 75 1. Og ;羧基化的PEG 2. 8 5. Og ;二環己基碳二亞胺(DCC)O. 3 0. 5g ;NHS-PEG質量4 8g ;二甲基亞碸 (匿SO) 100 150mL ;OQCMC質量3 5g。 PEG-OQCMC製備過程如下: a. PEG的羧基化將PEG(2000Da)溶於40 80mL無水甲苯；將馬來酸酐在通氮氣 保護的條件下，加入到四口瓶中，加熱到7(TC反應48 53h，過程持續攪拌。反應後減壓蒸 餾除去有機溶劑得到初步產品；加入乙醚萃取，減壓蒸餾，得到產物羧基化的PEG。
b. PEG的活化將羧基化的PEG與N_羥基琥珀醯亞胺酯(NHS) —起溶於40 60mL 氯仿中，在冰浴，磁攪拌及氮氣保護的條件下加入DCC，反應1 1. 5h，再撤去冰浴，常溫下 反應24 30h ;反應結束後，過濾。 c. PEG的提純將上述過濾後的濾液加入到50 70mL丙酮中，4t:條件下放置2h， 析出固體，過濾；重複兩次，除盡殘留的NHS，放入真空烘箱過夜。得到提純後的活化羧基化 PEG (NHS-PEG)。 d. PEG-OQCMC的製備將上述NHS-PEG溶於100 150mLDMS0 ;將實驗室製備 的OQCMC溶於100 150mL水中；兩者混合，室溫下攪拌反應24 30h ;反應結束後，用 12000-14000的透析袋透析一周，最後過濾，凍幹，得到產品。 所述的FA-OQCMC，其製備過程中，各組分的含量為葉酸3 10g ;;三乙胺1. 8 5ml ;NHSl. 56 3g ;NHS-FA 2. 0 5. Og ;0QCMC15 30mg。其製備過程如下將葉酸溶於 60 100ml匿S0溶液中，向其加入三乙胺，將NHS用一定量的匿SO溶解後加入到上述反應 體系中避光反應12 20h以上。將產物過濾，得到黃色固體NHS-FA活性脂。取NHS-FA活 性脂溶於50 80mlDMS0中，加入OQCMC。用Na2HP04與NaOH緩衝溶液調節反應體系的pH =10，反應1 1. 5h。將最後產物透析24h，凍幹即得FA-OQCMC。
實施例1 PEG改性OQCMC的實驗過程
a. PEG的羧基化將PEG (2000Da) 5. Og溶於40mL無水甲苯；再稱馬來酸酐4. 3g，在 通氮氣保護的條件下，加入到四口瓶中，加熱到7(TC反應48，過程持續攪拌。反應後減壓蒸 餾除去有機溶劑得到初步產品；加入乙醚萃取，減壓蒸餾，得到產物羧基化的PEG。
b. PEG的活化稱取NHS 0. 75g， DCC質量0. 3g備用；稱取羧基化的PEG2. 8g與NHS 一起溶於40mL氯仿中，在冰浴，磁攪拌及氮氣保護的條件下加入DCC，反應lh，再撤去冰浴， 常溫下反應24h ;反應結束後，過濾。 c. PEG的提純將上述過濾後的濾液加入到50mL丙酮中，4。C條件下放置2h，析 出固體，過濾；重複兩次，除盡殘留的NHS，放入真空烘箱過夜。得到提純後的活化羧基化 PEG (NHS-PEG)。 d. PEG-OQCMC的製備稱取上述NHS-PEG質量4g溶於lOOmLDMSO ;稱取實驗室 製備的0QCMC質量3g溶於100mL水中；兩者混合，室溫下攪拌反應24h ;反應結束後，用 12000-14000的透析袋透析一周，最後過濾，凍幹，得到產品。
FA-OQCMC製備過程如下將3g葉酸溶於60mlDMS0溶液中，向其加入1.8ml三乙胺，將1.56g NHS用一定量 的匿SO溶解後加入到上述反應體系中避光反應12h。將產物過濾，得到黃色固體NHS-FA活 性脂。取2. Og的NHS-FA活性脂溶於50mlDMS0中，加入15mg的OQCMC。用Na2HP04與NaOH 緩衝溶液調節反應體系的PH = 10，反應lh。將最後產物透析24h，凍幹即得FA-OQCMC。
實施例2 PEG改性OQCMC的實驗過程 a. PEG的羧基化將PEG (2000Da) 7. Og溶於60mL無水甲苯；再稱馬來酸酐7. 2g，在 通氮氣保護的條件下，加入到四口瓶中，加熱到7(TC反應50h，過程持續攪拌。反應後減壓 蒸餾除去有機溶劑得到初步產品；加入乙醚萃取，減壓蒸餾，得到產物羧基化的PEG。
b. PEG的活化稱取NHS 0. 8g， DCC質量0. 4g備用；稱取羧基化的PEG3. 5g與NHS 一起溶於50mL氯仿中，在冰浴，磁攪拌及氮氣保護的條件下加入DCC，反應1. 2h，再撤去冰 浴，常溫下反應28h ;反應結束後，過濾。 c. PEG的提純將上述過濾後的濾液加入到60mL丙酮中，4。C條件下放置2h，析 出固體，過濾；重複兩次，除盡殘留的NHS，放入真空烘箱過夜。得到提純後的活化羧基化 PEG (NHS-PEG)。 d. PEG-OQCMC的製備稱取上述NHS-PEG質量6g溶於120mLDMS0 ;稱取實驗室 製備的OQCMC質量4g溶於120mL水中；兩者混合，室溫下攪拌反應26h ;反應結束後，用 12000-14000的透析袋透析一周，最後過濾，凍幹，得到產品。
FA-OQCMC製備過程如下將7g葉酸溶於80mlDMS0溶液中，向其加入3ml三乙胺，將2g NHS用一定量的DMSO 溶解後加入到上述反應體系中避光反應18h。將產物過濾，得到黃色固體NHS-FA活性脂。 取3g的NHS-FA活性脂溶於65mlDMS0中，加入20mg的OQCMC。用Na2HP04與NaOH緩衝溶 液調節反應體系的pH = 10，反應1 1. 5h。將最後產物透析24h，凍幹即得FA-OQCMC。
實施例3 PEG改性OQCMC的實驗過程a. PEG的羧基化將PEG(2000Da) 10. Og溶於80mL無水甲苯；再稱馬來酸酐8. 6g，在通氮氣保護的條件下，加入到四口瓶中，加熱到7(TC反應53h，過程持續攪拌。反應後減 壓蒸餾除去有機溶劑得到初步產品；加入乙醚萃取，減壓蒸餾，得到產物羧基化的PEG。
b. PEG的活化稱取NHS 1. 0g， DCC質量0. 5g備用；稱取羧基化的PEG5. Og與NHS 一起溶於60mL氯仿中，在冰浴，磁攪拌及氮氣保護的條件下加入DCC，反應1. 5h，再撤去冰 浴，常溫下反應30h ;反應結束後，過濾。 c. PEG的提純將上述過濾後的濾液加入到70mL丙酮中，4。C條件下放置2h，析 出固體，過濾；重複兩次，除盡殘留的NHS，放入真空烘箱過夜。得到提純後的活化羧基化 PEG (NHS-PEG)。 d. PEG-OQCMC的製備稱取上述NHS-PEG質量8g溶於150mLDMS0 ;稱取實驗室 製備的0QCMC質量5g溶於150mL水中；兩者混合，室溫下攪拌反應30h ;反應結束後，用 12000-14000的透析袋透析一周，最後過濾，凍幹，得到產品。
FA-OQCMC製備過程如下將10g葉酸溶於100mlDMS0溶液中，向其加入5ml三乙胺，將3g NHS用一定量的 匿SO溶解後加入到上述反應體系中避光反應20h。將產物過濾，得到黃色固體NHS-FA活性 脂。取5. Og的NHS-FA活性月旨溶於80mlDMS0中，加入30mg的OQCMC。用Na2HP04與NaOH 緩衝溶液調節反應體系的PH = 10，反應1. 5h。將最後產物透析24h，凍幹即得FA-OQCMC。
實施例4 稱取lmgPEG-OQCMC， lmgFA-OQCMC， lmg米託蒽醌，溶於4. 5ml的蒸餾水中，形成水 相；取4mgOQCMC，lmg膽固醇，溶於2ml 二氯甲烷中形成油相，將油相在130W功率下進行 超聲，加入水相，超聲形成水油均勻的分散體系。將上述乳液在32t:下於旋轉蒸發儀上以 45r/min的旋轉速度進行旋蒸，同時向旋轉蒸發儀中通入適當流速的氮氣流加以保護。當茄 形瓶中的有機溶劑完全揮發後，繼續旋蒸30min，即得到產品。重複組裝2次。製備的米託 蒽醌靶向緩釋長循環脂質體粒徑為106. 6nm，分散性好，載藥率為8. 5%，包封率為90. 7%， 體外緩釋時間達到11天。 採用傅立葉變換紅外光譜儀(FTIR)對樣品進行對比分析，與未葉酸化的脂質體 譜圖相比，包覆米託蒽醌的脂質體譜圖中出現了一個在1580cm—1附近的新的吸收鋒，說明 OQCMC的游離氨基和葉酸的COOH形成了醯胺。
實施例5 稱取10mgPEG-0QCMC， 10mgFA-0QCMC， 10mg米託蒽醌，溶於40ml的蒸餾水中，形成 水相；取40mgOQCMC，10mg膽固醇，溶於20ml二氯甲烷中形成油相，將油相在150W功率下進 行超聲，加入水相，超聲形成水油均勻的分散體系。將上述乳液在35t:下於旋轉蒸發儀上以 50r/min的旋轉速度進行旋蒸，同時向旋轉蒸發儀中通入適當流速的氮氣流加以保護。當茄 形瓶中的有機溶劑完全揮發後，繼續旋蒸40min，即得到產品。製備的米託蒽醌靶向緩釋長 循環脂質體粒徑為90nm，分散性好，載藥率為9. 0%，包封率為95. 0%，體外緩釋時間達到 14天。採用傅立葉變換紅外光譜儀(FTIR)對樣品進行對比分析，與未葉酸化的脂質體譜圖 相比，包覆米託蒽醌的脂質體譜圖中出現了一個在1580cm—1附近的新的吸收鋒，說明OQCMC 的游離氨基和葉酸的COOH形成了醯胺。
實施例6稱取15/3mgPEG-0QCMC， 20/3mgFA-0QCMC， 10/3mg米託蒽醌，溶於50ml的蒸餾水(或已經做好的高分子脂質體)中，形成水相；取40/3mg0QCMC， 10/3mg膽固醇，溶於25ml
二氯甲烷中形成油相，將油相在iiow功率下進行超聲，加入水相，超聲形成水油均勻的分
散體系。將上述乳液在35t:下於旋轉蒸發儀上以50r/min的旋轉速度進行旋蒸，同時向 旋轉蒸發儀中通入適當流速的氮氣流加以保護。當茄形瓶中的有機溶劑完全揮發後，繼續 旋蒸40min，即得到產品。重複組裝3次。製備的米託蒽醌靶向緩釋長循環脂質體粒徑為 115. 6nm，分散性好，載藥率為9. 0%，包封率為93. 4%，體外緩釋時間達到12天。採用傅裡 葉變換紅外光譜儀(FTIR)對樣品進行對比分析，與未葉酸化的脂質體譜圖相比，包覆米託 蒽醌的脂質體譜圖中出現了一個在1580cm—1附近的新的吸收鋒，說明OQCMC的游離氨基和 葉酸的COOH形成了醯胺。
實施例7 稱取10/4mgPEG-0QCMC， 20/4mgFA-0QCMC， 10/4mg米託蒽醌，溶於40ml的蒸餾水 (或已經做好的高分子脂質體)中，形成水相；取30/4mgOQCMC， 10/4mg膽固醇，溶於20ml 二 氯甲烷中形成油相，將油相在200W功率下進行超聲，加入水相，超聲形成水油均勻的分散 體系。將上述乳液在4(TC下於旋轉蒸發儀上以50r/min的旋轉速度進行旋蒸，同時向旋轉 蒸發儀中通入適當流速的氮氣流加以保護。當茄形瓶中的有機溶劑完全揮發後，繼續旋蒸 30min，即得到產品。重複組裝4次製備的米託蒽醌靶向緩釋長循環脂質體粒徑為107. 3nm， 分散性好，載藥率為8. 5%，包封率為94. 5%，體外緩釋時間達到13天。採用傅立葉變換 紅外光譜儀(FTIR)對樣品進行對比分析，與未葉酸化的脂質體譜圖相比，包覆米託蒽醌的 脂質體譜圖中出現了一個在1580cm—1附近的新的吸收鋒，說明OQCMC的游離氨基和葉酸的 COOH形成了醯胺。
實施例8 稱取16/2mgPEG-0QCMC， 20/2mgFA-0QCMC， 10/2mg米託蒽醌，溶於45ml的蒸餾水 (或已經做好的高分子脂質體)中，形成水相；取35/2mgOQCMC， 10/2mg膽固醇，溶於20ml 二氯甲烷中形成油相，將油相在130W功率下進行超聲，加入水相，超聲形成水油均勻的分 散體系。將上述乳液在35t:下於旋轉蒸發儀上以50r/min的旋轉速度進行旋蒸，同時向 旋轉蒸發儀中通入適當流速的氮氣流加以保護。當茄形瓶中的有機溶劑完全揮發後，繼續 旋蒸40min，即得到產品。重複組裝2次。製備的米託蒽醌靶向緩釋長循環脂質體粒徑為 106. 6nm，分散性好，載藥率為8. 8%，包封率為90. 0%，體外緩釋時間達到11天。採用傅裡 葉變換紅外光譜儀(FTIR)對樣品進行對比分析，與未葉酸化的脂質體譜圖相比，包覆米託 蒽醌的脂質體譜圖中出現了一個在1580cm—1附近的新的吸收鋒，說明OQCMC的游離氨基和 葉酸的COOH形成了醯胺。
實施例9 稱取30/3mgPEG-0QCMC， 30/3mgFA-0QCMC， 30/3mg米託蒽醌，溶於40ml的蒸餾水 (或已經做好的高分子脂質體)中，形成水相；取120/3mgOQCMC，30/3mg膽固醇，溶於20ml 二氯甲烷中形成油相，將油相在180W功率下進行超聲，加入水相，超聲形成水油均勻的分 散體系。將上述乳液在35t:下於旋轉蒸發儀上以55r/min的旋轉速度進行旋蒸，同時向 旋轉蒸發儀中通入適當流速的氮氣流加以保護。當茄形瓶中的有機溶劑完全揮發後，繼續 旋蒸50min，即得到產品。重複組裝3次。製備的米託蒽醌靶向緩釋長循環脂質體粒徑為 109. 5nm，分散性好，載藥率為9. 0%，包封率為93. 4%，體外緩釋時間達到15天。採用傅立葉變換紅外光譜儀(FTIR)對樣品進行對比分析，與未葉酸化的脂質體譜圖相比，包覆米託 蒽醌的脂質體譜圖中出現了一個在1580cm—1附近的新的吸收鋒，說明OQCMC的游離氨基和 葉酸的COOH形成了醯胺。
實施例10 稱取40/4mgPEG-0QCMC， 40/4mgFA-0QCMC， 40/4mg米託蒽醌，溶於40ml的蒸餾水 (或已經做好的高分子脂質體)中，形成水相；取160/4mgOQCMC，40/4mg膽固醇，溶於20ml 二氯甲烷中形成油相，將油相在200W功率下進行超聲，加入水相，超聲形成水油均勻的分 散體系。將上述乳液在35t:下於旋轉蒸發儀上以50r/min的旋轉速度進行旋蒸，同時向旋 轉蒸發儀中通入適當流速的氮氣流加以保護。當茄形瓶中的有機溶劑完全揮發後，繼續旋 蒸30 50min，即得到產品。重複組裝4次。製備的米託蒽醌靶向緩釋長循環脂質體粒徑 為110. 4nm，分散性好，載藥率為8. 9%，包封率為94. 2%，體外緩釋時間達到15天。採用傅 裡葉變換紅外光譜儀(FTIR)對樣品進行對比分析，與未葉酸化的脂質體譜圖相比，包覆米 託蒽醌的脂質體譜圖中出現了一個在1580cm—1附近的新的吸收鋒，說明OQCMC的游離氨基 和葉酸的COOH形成了醯胺。
實施例11 稱lmgPEG-OQCMC， lmg FA-OQCMC， 4mgOQCMC， lmg膽固醇，溶於2ml 二氯甲烷中。稱 取lmg米託蒽醌溶於4. 5ml水中，待用。將該混合物置於茄形瓶中，在32。C下於旋轉蒸發 儀上以45r/min的旋轉速度進行旋蒸，同時向旋轉蒸發儀中通入適當流速的氮氣流加以保 護。當茄形瓶中的有機溶劑完全揮發後，繼續旋蒸30min。之後將茄形瓶取下，向茄形瓶中 加入米託蒽醌水溶液，將脂質膜水化，然後用超聲波清洗器以70w的功率進行超聲分散，直 至形成半透明乳液，即得到高分子脂質體溶液。製備的米託蒽醌靶向緩釋長循環脂質體粒 徑為96. 6nm，分散性好，載藥率為8. 5%，包封率為90. 3%，體外緩釋時間達到10天。採用 傅立葉變換紅外光譜儀(FTIR)對樣品進行對比分析，與未葉酸化的脂質體譜圖相比，包覆 米託蒽醌的脂質體譜圖中出現了一個在1580cm—1附近的新的吸收鋒，說明OQCMC的游離氨 基和葉酸的C00H形成了醯胺。
實施例12 稱10mgPEG-0QCMC， 20mg FA-0QCMC， 20mgOQCMC， 10mg膽固醇，溶於20ml 二氯甲烷 中。稱取5mg米託蒽醌溶於40ml水中，待用。將該混合物置於茄形瓶中，在35°C下於旋轉蒸 發儀上以50r/min的旋轉速度進行旋蒸，同時向旋轉蒸發儀中通入適當流速的氮氣流加以 保護。當茄形瓶中的有機溶劑完全揮發後，繼續旋蒸40min。之後將茄形瓶取下，向茄形瓶 中加入米託蒽醌水溶液，將脂質膜水化，然後用超聲波清洗器以80w的功率進行超聲分散， 直至形成半透明乳液，即得到高分子脂質體溶液。製備的米託蒽醌靶向緩釋長循環脂質體 粒徑為98. 6nm，分散性好，載藥率為8. 5%，包封率為90. 1%，體外緩釋時間達到10天。採 用傅立葉變換紅外光譜儀(FTIR)對樣品進行對比分析，與未葉酸化的脂質體譜圖相比，包 覆米託蒽醌的脂質體譜圖中出現了一個在1580cm—1附近的新的吸收鋒，說明OQCMC的游離 氨基和葉酸的C00H形成了醯胺。
實施例13 稱40mgPEG-0QCMC， 60mg FA-OQCMC， 120mgOQCMC， 40mg膽固醇，溶於25ml 二氯甲烷 中。稱取30mg米託蒽醌溶於50ml水中，待用。將該混合物置於茄形瓶中，在4(TC下於旋轉蒸發儀上以55r/min的旋轉速度進行旋蒸，同時向旋轉蒸發儀中通入適當流速的氮氣流 加以保護。當茄形瓶中的有機溶劑完全揮發後，繼續旋蒸50min。之後將茄形瓶取下，向茄 形瓶中加入米託蒽醌水溶液，將脂質膜水化，然後用超聲波清洗器以99w的功率進行超聲 分散，直至形成半透明乳液，即得到高分子脂質體溶液。製備的米託蒽醌靶向緩釋長循環脂 質體粒徑為120nm，分散性好，載藥率為8. 3%，包封率為91. 0%，體外緩釋時間達到10天。 採用傅立葉變換紅外光譜儀(FTIR)對樣品進行對比分析，與未葉酸化的脂質體譜圖相比， 包覆米託蒽醌的脂質體譜圖中出現了一個在1580cm—1附近的新的吸收鋒，說明OQCMC的遊 離氨基和葉酸的COOH形成了醯胺。
權利要求
一種米託蒽醌納米靶向緩釋長循環脂質體，其特徵其粒徑在90～120nm之間，其粒徑均勻，表面富含有葉酸。
2. —種米託蒽醌納米靶向緩釋長循環脂質體的製備方法，其特徵是原料質量份數比 配比為聚乙二醇修飾的O-羧甲基殼聚糖十八烷基季銨鹽葉酸修飾的O-羧甲基殼聚糖十八烷基季銨鹽o-羧甲基殼聚糖十八烷基季銨鹽米託蒽醌=i : 1 2 : 2 4 : 0.5 l;o-羧甲基殼聚糖十八烷基季銨鹽膽固醇的質量比為4 2 : i; 採用反相乳液法聚合時製備步驟如下a. 將聚乙二醇修飾的0-羧甲基殼聚糖十八烷基季銨鹽、葉酸倏飾的0-羧甲基殼聚糖 十八烷基季銨鹽、米託蒽醌溶於蒸餾水中，形成水相，待用；b. 將O-羧甲基殼聚糖十八烷基季銨鹽，膽固醇，溶於二氯甲烷中，形成油相；c. 將油相在110 200w功率範圍下進行超聲，加入水相，超聲形成水油均勻的分散體系；d. 將上述乳液在32 4(TC下於旋轉蒸發儀上以45 55r/min的旋轉速度進行旋蒸， 同時向旋轉蒸發儀中通入氮氣流加以保護，當有機溶劑完全揮發後，繼續旋蒸30 50min， 即得到產品。
3. 如權利要求2所述的一種米託蒽醌納米靶向緩釋長循環脂質體的製備方法，其特徵 是採用薄膜分散法時製備步驟如下a. 將聚乙二醇修飾的0-羧甲基殼聚糖十八烷基季銨鹽、葉酸修飾的O-羧甲基殼聚糖 十八烷基季銨鹽、0-羧甲基殼聚糖十八烷基季銨鹽，膽固醇，溶於二氯甲烷中；b. 將上面所述的混合物置於反應器中，在32 4(TC下於旋轉蒸發儀上以45 55r/ min的旋轉速度進行旋蒸，同時向旋轉蒸發儀中通入氮氣流加以保護；當反應器中的有機 溶劑完全揮發後，繼續旋蒸30 50min。c. 將米託蒽醌溶於蒸餾水中，之後將反應器取下，向反應器中加入米託蒽醌水溶液，將 脂質膜水化，然後用超聲波清洗器以70 99w的功率進行超聲分散，直至形成半透明乳液， 即得到高分子脂質體溶液。
全文摘要
本發明涉及一種米託蒽醌納米靶向緩釋長循環脂質體及製備方法。脂質體粒徑在90～120nm之間，其粒徑均勻，表面富含有葉酸。原料質量份數比配比為聚乙二醇修飾的O-羧甲基殼聚糖十八烷基季銨鹽∶葉酸修飾的O-羧甲基殼聚糖十八烷基季銨鹽∶O-羧甲基殼聚糖十八烷基季銨鹽∶米託蒽醌＝1∶1～2∶2～4∶0.5～1；O-羧甲基殼聚糖十八烷基季銨鹽∶膽固醇的質量比為4～2∶1；採用反相乳液法聚合或採用薄膜分散法製備；整個製備過程簡單快捷，製備周期短，製備的高分子脂質體對藥物的包封率大於90％，載藥率載高達9.0％；通過表面PEG的修飾，可使高分子脂質體不易被人體網狀內皮系統捕捉，延長在體內的循環時間，同時增加高分子脂質體的生物利用度和生物相容性。
文檔編號A61K9/127GK101773471SQ20101013198
公開日2010年7月14日 申請日期2010年3月25日 優先權日2010年3月25日
發明者常津, 康世胤, 王漢傑, 胡秀鳳, 蘇文雅 申請人:天津大學